CN115088657B - 一种提高大龄凡纳滨对虾受精率及孵化率的方法 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种提高大龄凡纳滨对虾受精率及孵化率的方法。首先将甲基法尼酯溶解于乙醇溶剂，养殖桶加入过滤后的海水，然后加入甲基法尼酯溶液，甲基法尼酯的浓度为1～100μg/L；然后将大龄健康的雌虾和雄虾置于养殖桶，进行培养直至其性腺发育成熟，将发育成熟的雄虾精荚挤出，将精荚上的精子刮下，黏附在对应处理组的雌虾纳精囊上，将雌虾放入正常孵化水体中待产。本发明方法操作简单，成本低，不影响凡纳滨对虾幼体发育和生长。本发明方法经济实用，方便便捷，在提高凡纳滨对虾存活率的同时，增加了凡纳滨对虾的受精率和孵化率。
Description
技术领域
本发明属于海产生物技术领域，具体涉及一种提高大龄凡纳滨对虾人工受精率及孵化率的方法。
背景技术
凡纳滨对虾(Litopenaeus vannamei)俗称南美白对虾，因其具有头胸甲小、含肉率高、抗逆性强、生长快、繁殖期长、耐高密度和低盐度养殖、便于活体运输等优点，是目前世界对虾养殖的三大品种之一。自上世纪80年代末成功引入我国后，凡纳滨对虾养殖产业得到迅猛发展，逐步成为我国水产养殖的支柱产业之一。在凡纳滨对虾繁殖期，大多数技术人员会周期性催化对虾的性腺发育，以达到持续育苗的目的。随着时间的推移，凡纳滨对虾也由11月龄变为14-16月龄凡纳滨对虾(大龄)，其受精率和之后的孵化率显著降低。然而，技术人员为减少购买亲虾成本，仍会用大龄凡纳滨对虾亲本进行人工受精，这不仅会降低凡纳滨对虾虾苗的质量，还增加了大龄(14-16)凡纳滨对虾的死亡。因此，寻找一种经济、便捷的方法，在不影响大龄凡纳滨对虾成活率的基础上，提高大龄凡纳滨对虾亲本的受精率和孵化率是凡纳滨对虾人工育苗迫切需要解决的问题之一。
发明内容
本发明的目的是现有大龄凡纳滨对虾受精率及孵化率降低的缺点，提供一种高效、方便、廉价的提高大龄凡纳滨对虾人工受精率和孵化率的方法。
本发明方法具体是：
(1)将甲基法尼酯(Methyl Farnesoate)溶解于乙醇溶剂，配制浓度为5～50g/L的甲基法尼酯溶液；
(2)养殖桶加入过滤后的海水，然后加入甲基法尼酯溶液作为养殖液，养殖液中甲基法尼酯的浓度为1～100μg/L；
(3)将15～16月龄健康的雌虾和雄虾置于养殖桶，进行培养直至其性腺发育成熟；
(4)将发育成熟的雄虾精荚挤出，将精荚上的精子刮下，黏附在对应处理组的雌虾纳精囊上，将雌虾放入正常孵化水体中待产。
大龄凡纳滨对虾产出的精子和卵细胞无论是从数量还是质量上都显著下降，精子和卵细胞的数量是凡纳滨对虾子代受精率和孵化率的基础，而其质量在顶体反应、精卵融合及之后的胚胎发育过程中发挥重要作用。因此，精子和卵细胞的数量和质量的降低可能是大龄凡纳滨对虾受精率和孵化率下降的原因之一。甲基法尼酯(Methyl Farnesoate,MF)是由甲壳动物的大颚器分泌，是一种类倍半萜烯激素，广泛存在于十足目甲壳动物，在甲壳动物的性腺发育、幼体生长和蜕皮等生理活动中发挥着重要作用。大量研究表明，甲基法尼酯与虾卵黄的发生密切相关，提高虾血淋巴中的甲基法尼酯含量能够提高对虾卵黄发生前卵黄蛋白原基因的表达，并促进卵巢总蛋白的合成。此外，甲基法尼酯对雄虾精巢的发育和繁殖行为同样具有促进作用。15～16月龄凡纳滨对虾体内合成甲基法尼酯的速率和血液中甲基法尼酯的含量都显著低于11月龄凡纳滨对虾个体。将甲基法尼酯添加到养殖亲虾的水体中，不仅可以促进亲虾的性腺发育，还可以提高精子和卵细胞的质量，进而缓解由配子衰老而引发的受精能力及之后胚胎发育能力下降。综上所述，用含有甲基法尼酯的海水培养亲虾，一方面可以增加对虾性腺发育指数(GSI)，使得其精子和卵细胞个数升高。另一方面，甲基法尼酯也可以提高亲虾所产配子的质量，从而提高大龄凡纳滨对虾的受精率和之后的孵化率。因此，该方法中应用价格低廉且安全性高的甲基法尼酯作为改善大龄凡纳滨对虾受精率和孵化率的补充剂。
实验证明，采用本发明方法对大龄(15～16月龄)凡纳滨对虾进行人工受精，其性腺发育指数升高55～59％，受精率可以提高15～29％，孵化率升高36～42％。与现有方法比较，本发明方法操作简单，成本低，不影响凡纳滨对虾幼体发育和生长。本发明方法经济实用，方便便捷，在提高凡纳滨对虾存活率的同时，增加了凡纳滨对虾的受精率和孵化率。
具体实施方式
下面结合技术方案，对本发明做进一步的说明，但下述实例并非对本发明有任何限制。
实施例1.
分别选取300只12月龄和16月龄雄性凡纳滨对虾(体长：20.7±2.4cm)和300只产后健康的12月龄和16月龄雌性凡纳滨对虾(体长：22.9±1.7cm)，将六只雌虾放入含有不同浓度甲基法尼酯的养殖桶(含有1000L过滤的海水)中，六只雄虾放入含有不同浓度甲基法尼酯的养殖桶(含有1000L过滤的海水)中，雌雄虾各20组。每日投喂鱿鱼和沙蚕三次，换500L养殖海水，并添加相应的甲基法尼酯。不同月龄均设置十组实验，分别为对照组(正常海水)，乙醇组，1μg/L，10μg/L和100μg/L甲基法尼酯组，雌雄虾分开。
待凡纳滨对虾的性腺发育成熟后，每组选取三只雌虾或三只雄虾解剖出性腺，将对虾和性腺置于75℃烘干箱72小时后，称量虾和其性腺的重量，计算GSI％＝性腺重量(g)/虾重量(g)×100％。此外，另选取性腺发育成熟的相同处理组的三只雌虾和三只雄虾进行人工受精。具体操作如下：选取三对相同处理组的雌、雄对虾，将雄虾精荚挤出，用干净(酒精消毒)的镊子将精子刮下搅成团状，黏在挑选好的雌虾的纳精囊上，将雌虾放入盛有100L孵化水体(盐度为32‰)的大桶中，待产。当雌虾排卵3小时后，每桶收集20L含受精卵的孵化水以统计凡纳滨对虾的受精率(受精率＝受精卵(个)/总卵细胞(个)×100％)，剩余受精卵继续孵化，3天后，统计凡纳滨对虾无节幼体的产量(孵化率＝无节幼体(个)/受精卵(个)×100％)，以确定孵化率。
表1.12月龄凡纳滨对虾存活率、GSI、受精率及孵化率(％，平均值±方差)
| 指标 | 对照组 | 乙醇组 | MF(1μg/L) | MF(10μg/L) | MF(100μ/L) |
| 亲虾存活率％ | 100 | 100 | 100 | 100 | 100 |
| GSI％ | 17.67±6.8 | 16.53±4.16 | 18.89±4.07 | 20.65±5.28 | 19.32±7.52 |
| 受精率％ | 55.62±7.54 | 56.76±7.74 | 58.75±7.61 | 57.97±7.88 | 56.59±4.58 |
| 孵化率％ | 52.91±4.37 | 54.04±8.75 | 58±6.22 | 65.46±6.14 | 60.03±3.89 |
表2.16月龄凡纳滨对虾存活率、GSI、受精率及孵化率(％，平均值±方差)
| 指标 | 对照组 | 乙醇组 | MF(1μg/L) | MF(10μg/L) | MF(100μ/L) |
| 亲虾存活率％ | 83.33 | 80 | 93.33 | 100 | 100 |
| GSI％ | 12.67±6.8 | 13.53±4.16 | 16.89±4.07 | 19.69±5.72 | 17.32±7.52 |
| 受精率％ | 36.89±6.57 | 37.54±2.46 | 41.04±7.84 | 47.91±5.83 | 42.49±8.03 |
| 孵化率％ | 34.76±7.82 | 36.41±8.25 | 40.94±1.95 | 49.42±6.99 | 41.49±3.07 |
由本实施例可见，甲基法尼酯在不影响亲虾存活率的基础上，可以有效提高12月龄和16月龄凡纳滨对虾人工受精的受精率和孵化率。而当甲基法尼酯浓度为100μg/L时，无论时12月龄还是16月龄的凡纳滨对虾的受精率和孵化率呈稍微下降的趋势。此外，甲基法尼酯对提高16月龄凡纳滨对虾的受精率和孵化率有更为明显的效果。
实施例2.
各选取300只11月龄和15月龄雄凡纳滨对虾(体长：20.7±1.9cm)和300只产后健康的11月龄和16月龄雌凡纳滨对虾(体长：22.5±1.6cm)，将三只雌虾放入含有不同浓度甲基法尼酯的养殖桶(含有1000L过滤的海水)中，三只雄虾放入含有不同浓度甲基法尼酯的养殖桶(含有1000L过滤的海水)中，雌雄虾各20组。每日投喂鱿鱼和沙蚕三次，换500L养殖海水，并添加相应的甲基法尼酯。实验分别设置为对照组(正常海水)，乙醇组，1μg/L，10μg/L和100μg/L甲基法尼酯组，雌雄虾分开，不同月龄均设置十组实验以比较添加不同浓度甲基法尼酯对大龄凡纳滨对虾配子受精率及孵化率的影响。
养殖7天左右，待凡纳滨对虾的性腺发育成熟后，每组选取三只雌虾或三只雄虾解剖出性腺，将对虾和性腺置于75℃烘干箱72小时后，称量虾和其性腺的重量，计算GSI％＝性腺重量(g)/虾重量(g)×100％。此外，另选取性腺发育成熟的相同处理组的三只雌虾和三只雄虾进行人工受精。具体操作如下：将雄虾精荚挤出，用干净(酒精消毒)的镊子将精子刮下搅成团状，黏在挑选好的雌虾的纳精囊上，将雌虾放入盛有100L孵化水体(盐度为32‰)的大桶中，待产。当雌虾排卵3小时后，每桶收集20L含受精卵的孵化水以统计凡纳滨对虾的受精率(受精率＝受精卵(个)/总卵细胞(个)×100％)，剩余受精卵继续孵化，3天后，统计凡纳滨对虾无节幼体的产量(孵化率＝无节幼体(个)/受精卵(个)×100％)，以确定孵化率。
表3.11月龄凡纳滨对虾存活率、GSI、受精率及孵化率(％，平均值±方差)
| 指标 | 对照组 | 乙醇组 | MF(1μg/L) | MF(10μg/L) | MF(100μ/L) |
| 亲虾存活率％ | 100 | 100 | 100 | 100 | 100 |
| GSI％ | 15.59±1.87 | 16.74±5.09 | 18.79±3.77 | 19.84±5.83 | 17.06±7.03 |
| 受精率％ | 53.17±3.89 | 55.64±4.75 | 56.76±5.09 | 58.48±4.67 | 56.32±6.47 |
| 孵化率％ | 55.68±4.15 | 56.39±3.42 | 58.72±7.82 | 61.78±7.91 | 60.68±6.69 |
表4.15月龄凡纳滨对虾存活率、GSI、受精率及孵化率(％，平均值±方差)
| 指标 | 对照组 | 乙醇组 | MF(1μg/L) | MF(10μg/L) | MF(100μ/L) |
| 亲虾存活率％ | 80 | 86.66 | 93.33 | 96.67 | 100 |
| GSI％ | 12.19±2.63 | 11.97±4.78 | 17.83±5.17 | 19.47±3.76 | 16.87±2.89 |
| 受精率％ | 48.83±5.86 | 49.68±4.69 | 51.07±4.73 | 56.43±5.02 | 54.02±4.38 |
| 孵化率％ | 34.31±4.61 | 37.63±4.31 | 41.58±5.93 | 46.86±5.04 | 38.49±6.45 |
本实例中添加不同浓度的甲基法尼酯能够使11月龄和15月龄凡纳滨对虾的性腺发育指数、受精率和孵化率得到不同程度的升高。当甲基法尼酯浓度为10μg/L时，11月龄凡纳滨对虾的性腺发育指数、受精率和孵化率分别上升27.26％，9.99％和10.96％，15月龄凡纳滨对虾的性腺发育指数、受精率和孵化率分别显著上升59.72％，15.56％和36.58％。与此同时，甲基法尼酯也可以提高大龄凡纳滨对虾的存活率，当其浓度为100μg/L时，大龄凡纳滨对虾存活率达到100％。结果证明该方法对提高大龄凡纳滨对虾的人工育苗的受精率及孵化率以及亲虾存活率有极佳的效果。
以上所述是本发明的较佳实施例，对于本技术领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明原理的前提下，还可以做出若干改进和润饰，这些改进和润饰皆应属本发明的保护范围。
Claims (1)
1.一种提高大龄凡纳滨对虾受精率及孵化率的方法，其特征在于：
(1)将甲基法尼酯溶解于乙醇溶剂，配制浓度为5～50g/L的甲基法尼酯溶液；
(2)养殖桶加入过滤后的海水，然后加入甲基法尼酯溶液作为养殖液，养殖液中甲基法尼酯的浓度为1～100μg/L；
(3)将15～16月龄健康的雌虾和雄虾置于养殖桶，进行培养直至其性腺发育成熟；
(4)将发育成熟的雄虾精荚挤出，将精荚上的精子刮下，黏附在对应处理组的雌虾纳精囊上，将雌虾放入正常孵化水体中待产。
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