CN115087657A

CN115087657A - Lin28抑制剂和其使用方法

Info

Publication number: CN115087657A
Application number: CN202080096261.1A
Authority: CN
Inventors: M·鲁斯; M·E·荣格; H·J·吉姆
Original assignee: University of California
Current assignee: University of California
Priority date: 2019-12-18
Filing date: 2020-12-14
Publication date: 2022-09-20
Also published as: EP4077332A1; US20230059009A1; EP4077332A4; WO2021126779A1; JP2023506951A

Abstract

本公开涉及式(I)化合物和包含所述化合物的组合物。本公开还涉及治疗癌症的方法。

Description

LIN28抑制剂和其使用方法

相关申请

本申请要求2019年12月18日提交的美国临时专利申请第62/949,873号的优先权和权益，所述临时专利申请特此以引用的方式整体并入。

政府支持

本发明是根据美国国立卫生研究院授予的授权号TR001881在政府资助下完成的。政府对本发明享有一定的权利。

背景技术

急性髓细胞性白血病(AML)是一种血液系统恶性肿瘤，其特征是骨髓母细胞的克隆性增殖，对大多数受累成人导致致命的后果(1)。即使在非常积极的多药化疗方案、更新的靶向治疗和清髓性异基因造血细胞移植下，大多数患者在5年内死于AML。治疗抗性白血病干细胞(LSC)被认为是高复发率和治疗失败的根本原因(2-4)。因此，开发能够根除LSC的新型治疗策略代表了未满足的医疗需求的主要领域。

小分子已被证明是靶向与发病机制有关的蛋白质的临床应用中的成功治疗剂。然而，针对G蛋白偶联受体、激酶、肽酶、核受体、蛋白酶、离子通道、酶等的目前FDA批准的药物调节少于700种人基因组衍生蛋白(63)。这意味着小于≤0.5％的蛋白质组和≤0.05％的基因组已被探索为治疗方法的目标。另外，临床使用的大多数小分子药物都利用蛋白质表面上的结构化结合口袋。远程催化或药物结合区的变构和/或构象变化导致耐药性并最终导致药物无效(64)。因此，开发能够靶向尚未探索的信号传导途径和克服耐药性突变的新药代表了未满足的医疗需求的主要领域。

发明内容

本公开提供式(I)化合物：

或其药学上可接受的盐，其中：

选自

环B选自苯基和具有1-3个独立地选自氮、氧和硫的杂原子的5至6元杂芳基环；

X选自N和C；

X¹、X³和X⁴各自独立地选自N和C-R^x；

R¹为氢或选自以下的任选取代的基团：C_1-6脂族基、苯基和具有1-3个独立地选自氮、氧和硫的杂原子的5至6元杂芳基环；

每个R²独立地选自氢、卤素、NO₂、N(R)₂、OR、N(R)C(O)R、CO₂R、C(O)N(R)₂和任选取代的C_1-6脂族基；

R³选自氢和选自以下的任选取代的基团：C_1-6脂族基；3至7元单环碳环；具有1-3个独立地选自氮、氧和硫的杂原子的3至7元单环杂环；苯基；和具有1-3个独立地选自氮、氧和硫的杂原子的5至6元杂芳基环；

每个R^x独立地选自氢、卤素和任选取代的C_1-6脂族基；

每个R独立地选自氢和选自以下的任选取代的基团：C_1-6脂族基；3至7元单环碳环；具有1-3个独立地选自氮、氧和硫的杂原子的3至7元单环杂环；苯基；和具有1-3个独立地选自氮、氧和硫的杂原子的5至6元杂芳基环；且

n为0-3。

在某些方面，本公开提供式(II)化合物和其药学上可接受的盐：

其中：

R¹为C_1-6烷基或C_3-6环烷基；

R²为H、氨基、硝基或酰氨基；且

X¹、X³和X⁴各自独立地为N或CH。

在某些方面，本公开涉及包含本文公开的化合物和药学上可接受的赋形剂的药物组合物。

在某些方面，本公开涉及抑制细胞中的Lin28的方法，所述方法包括使包含Lin28的细胞与本文公开的化合物或组合物接触。

在某些方面，本公开涉及治疗癌症的方法，所述方法包括向有需要的受试者施用本文公开的化合物或组合物。

附图说明

图1显示了Lin28/let-7途径对驱动LSC增殖的多种途径的影响。通过抑制LIN28上调let-7miRNA如下地发挥肿瘤抑制功能：经由下调促进LSC增殖(MYC、RAS、IL-6、CCND)和存活(BCL-2)的基因以及间接抑制NF-KB途径。

图2A-2D显示Lin28b表达在LSC中增加。

图2A显示与来自各种AML核型，包括inv(16)、t(8；21)、t(11q23)/MLL、复杂核型和正常核型的细胞相比，健康HSC中Lin28b的Log2表达。

图2B显示与DOX诱导的MLL-AF9 WBM-和LT-HSC AML细胞(→WBM-AML，LSC)和Ara-C治疗后复发(→rLSC)相比，非DOX诱导的LT-HSC中的Lin28b表达。基因表达被标准化为非DOX诱导的LT-HSC的Lin28b。n＝5。

图2C显示标准化为非诱导LT-HSC的在复发前和复发后LSC中的相对let-7a和–bmiRNA表达。n＝3。

图2D显示在接种后7天，用对照100nM Ara-C或30μM 1632(n＝6)或用shLin28b或shScramble转导(n＝3)治疗的1000WBM-或100LT-HSC衍生的AML细胞的CFC数，***P<0.001，**P<0.01，*P<0.05。

图3A-3B显示LN1632抑制LIN28B蛋白表达。

图3A显示用1632(120-160μM)治疗的Kasumi-1和THP-1细胞的蛋白质印迹。

图3B显示用10nM硼替佐米(BZ)、120μM 1632或其组合治疗的TF1-α细胞。

图4A-4C显示靶向Lin28/let-7抑制消除AML生长。

图4A显示用100mg/kg 1632治疗显著减缓了肿瘤生长(图片)。n＝5。SubQ植入的THP-1细胞(高LIN28B)。

图4B显示用100mg/kg 1632治疗对肿瘤生长的影响最小，n＝7。SubQ植入的MOLM-13AML细胞(无LIN28B)。

图4C显示每隔一天用100mg/kg的1632治疗使全身性Kasumi-1 AML细胞模型的存活期延长(左)并减少肿瘤负荷(BLI，右侧图片，在d+26拍摄，如由黑色箭头所示)。n＝5。误差条代表SD。

图5A-5C显示靶向Lin28抑制会下调LSC驱动基因。

图5A热图显示在用100μM 1632或对照治疗后，Kasumi-1细胞中下调的直接(绿色)和间接(黑色)let-7靶基因和通路(MYC、NF-KB、JAK/STAT)的表达。

图5B：在用80-120μM的1632或对照治疗后，在三个原发性AML患者样品中评估的miRNA和let-7靶基因倍数变化，n＝3。误差条为SEM。***P<0.001，**P<0.01，*P<0.05。

图5C显示基因集富集分析(GSEA)，评估用100μM 1632或对照治疗后Kasumi-1细胞中LSC基因特征(GAL，顶部)和儿童AML的复发预后(Yagi，底部)的变化的图。NES，标准化富集分数；FDR q值，错误发现率。

图6A-6C显示药理学LIN28抑制选择性地消除体内LSC再增殖能力。

图6A显示AML pt#13和健康供体CD34+细胞在使用和不使用80-120μM 1632治疗后的CFC数量，误差线代表SD，*P<0.05。

图6B显示用120μM的对照或1632离体治疗后12周在NSGS中的pt#13的原代人AML细胞的移植。***P<0.001。

图6C显示移植到NSGS后12周用120μM 1632或对照治疗72小时的人AML细胞的植入的代表性流式细胞术门控方案。

图7显示本公开的示例性化合物抑制LIN28B与pre-let-7a的结合。以20、5、1.25μM的剂量对化合物进行一式三份的生物筛选。针对化合物自发荧光校正信号响应。虚线表示命中化合物LN1632达到的最高FRET信号。所有高于虚线的化合物对LIN28B/pre-let-7a-2结合的抑制活性增加。

图8A-8C显示LN1632与LIN28的ZKD基序的结合和let-7的上调。

图8A为预测的LN1632与LIN28B的ZKD的结合模式。红线表示密切联系的相互作用，LN1632为紫色。

图8B是通过增加的FRET信号强度测量的LIN28B与pre-let-7a结合活性的抑制百分比(％)。将值标准化为阴性对照治疗，n＝3。

图8C显示用LN1632和浓度为3-10μM的类似物治疗后HepG2细胞中功能性let-7miRNA的相对水平。将值标准化为总质粒表达和对照治疗，n＝6。**P<0.01，误差条为SEM，***P<0.01。

图9A-9C描绘LN1632对癌症驱动基因特征的下调。

图9A是显示用40μM LN1632或对照治疗后Kasumi-1细胞中标志_MYC_目标_V1基因的热图。

图9B显示基因集富集分析(GSEA)，评估用40μM LN1632或对照治疗后Kasumi-1细胞中LSC基因特征(GAL，顶部)和儿童AML的复发预后(Yagi，底部)的变化的图。NES，标准化富集分数；FDR q值，错误发现率。

图9C显示用40μM LN1632或对照治疗后Kasumi-1细胞的RNAseq数据的生物学功能分析。独创性途径分析(IPA)预测在用40μM LN1632或对照治疗后，Kasumi-1细胞中差异表达基因对MYC和IL-6途径的上游抑制(p值：<0.05)。所述图表示与特定生物学功能相关的基因，所述基因在上传的数据集中发生了变化。上调的基因显示在红色节点内，且下调的基因显示在绿色节点内。节点中颜色的强度表示向上(红色)或向下(绿色)调节的程度。节点的形状反映了每个基因产物的功能类别：转录调节因子(水平椭圆)、跨膜受体(垂直椭圆)、酶(垂直菱形)、细胞因子/生长因子(方形)、激酶(倒三角形)和复合物/组/其他(圆形)。橙色线表示预测的上调，而蓝线表示预测的下调。黄线表示表达与预测相矛盾。灰线表示没有预测到变化的方向。实线或虚线分别表示直接或间接关系

图10A-10B显示LN1632在健康的C57BL/6雌性小鼠中具有良好的耐受性。图10A是显示雌性C57Bl/6小鼠中的CBC(白细胞计数(WBC)、中性粒细胞(NEU)、淋巴细胞(LYMPH)、血小板(PLT)和血红蛋白(Hb))水平的一系列图，所述小鼠持续+12天每天用100mg/kg的LN1632进行IP治疗，然后持续+9天进行每隔一天注射，n＝5。

图10B显示在+21天用LN1632或媒介物治疗后体重增加没有显著变化。n＝5。统计：双尾学生t检验，误差条为SEM。*P<0.05。

图11A-11C描绘LN1632对体内癌症增殖的抑制。

图11A显示每天用100mg/kg LN1632治疗显著减缓肿瘤生长，n＝5。皮下植入的THP-1细胞。

图11B显示全身性Kasumi-1 AML异种移植物。每隔一天用100mg/kg LN1632治疗可延长全身性Kasumi-1 AML异种移植物的存活期并减少肿瘤负荷(图片，拍摄于+26天)。n＝5。

图11C皮下植入的THP-1细胞在用LN1632治疗时表现出抑制的增殖，但在用Ara-C治疗时程度较低。n＝3。统计：双尾学生t检验，***P<0.001，误差条为SEM。

图12A-12C显示LN1632的目标接合。

图12A显示质谱细胞热位移测定(MS-CETSA)：与LN1632一起孵育诱导Kasumi-1细胞裂解物中内源性PRPF31的Tm位移。

图12B显示生物素化LN1632的免疫沉淀后质谱分析(IP-MS)和用非标记LN1632竞争性洗脱捕获了PRPF31，n＝3。

图12C显示由MS-CETSA和IP-MS鉴定的LN1632的候选目标，按丰度和重叠派系分类。

图13显示了PRPF31过表达与不良预后的相关性。不同癌症患者群组分析的卡普兰-迈耶总存活曲线。使用对数秩检验计算p值。垂直散列标记表示删失数据。比较具有高(红色)和低(黑色)PRPF31表达的患者的存活曲线。

图14A-14D显示了TNBC增殖对PRPF31的依赖性。

图14A显示用pCMV-PRPF31表达质粒(红色)、对照载体(pCMV-空，黑色)、shPRPF31(绿色)或pCMV-PRPF31+100μM LN1632、pCMV-GFP+100μM LN1632或shPRPF31+100μM LN1632的组合治疗的TNBC细胞的细胞数。n＝3。

图14B显示在用LN1632、JGJ023、JGJ034或帕博西尼以增加剂量治疗4天后，通过细胞效价发光评估的MDA-MB-231细胞的细胞活力％，n＝2。

图14C显示在治疗后+6、+9和+12天，与对照(DMSO)、16μM JGJ023或16μM帕博西尼一起孵育的MDA-MB-231细胞的细胞数，n＝2。

图14D显示在用16μM JGJ023或16μM帕博西尼治疗后d+6，MDA-MB-231细胞的细胞数量的直接比较，n＝2。统计：IC50计算的剂量反应曲线绘制为四参数线性回归，个体比较的双尾学生t检验，误差条为SD，*P<0.05，**P<0.01。

图15A-15C描绘了LN1632和其新类似物在去势抵抗性前列腺癌中的细胞凋亡诱导。

图15A显示在用LN1632、JGJ007、JGJ023或标准护理恩杂鲁胺治疗4天后表达野生型雄激素受体的CRPC LNCaP细胞的细胞活力％。

图15B显示在用LN1632、JGJ007、JGJ023或标准护理恩杂鲁胺治疗4天后表达突变雄激素受体(ARV7)的转移性CRPC 22Rv1细胞的细胞活力％。

图15C显示在治疗后+5、+7和+9天与对照(DMSO)、2μM JGJ023或42μM恩杂鲁胺一起孵育的22Rv1细胞的细胞数量。小图：与恩杂鲁胺相比，JGJ023诱导细胞凋亡并减少mCRPC的细胞数量。所有实验n＝3。统计：IC₅₀计算的剂量反应曲线绘制为四参数线性回归，个体剂量比较的双尾学生t检验，误差条为SD，*P<0.05，**P<0.01。

图16A-16C显示LN1632和其新类似物对结直肠癌的凋亡的诱导和对增殖的抑制。

图16A显示在用增加剂量的JGJ034或标准护理西妥昔单抗(EGFR单克隆抗体)治疗4天后，表达低MYC的上皮CRC细胞SW948的细胞活力％(87)。

图16B显示在用递增剂量的JGJ034或标准护理西妥昔单抗治疗4天后，具有低MYC扩增的腺癌CRC细胞SW480的细胞活力％(88)。

图16C显示在用JGJ034或标准护理西妥昔单抗治疗5天后，具有高MYC扩增的西妥昔单抗耐药性、转移性腺癌CRC细胞SW620的细胞活力％³⁹。所有实验n＝3。统计：IC50计算的剂量反应曲线绘制为四参数线性回归，误差条为SD。

具体实施方式

化合物

本公开提供一种式(I)化合物：

或其药学上可接受的盐，其中：

选自

X选自N和C；

X¹、X³和X⁴各自独立地选自N和C-R^x；

每个R²独立地选自卤素、NO₂、N(R)₂、OR、N(R)C(O)R、CO₂R、C(O)N(R)₂和任选取代的C_1-6脂族基；

每个R^x独立地选自氢、卤素和任选取代的C_1-6脂族基；

n为0-3。

在式(I)的一些实施方案中，

为

因此，在一些实施方案中，本公开提供一种式(I-a)化合物：

或其药学上可接受的盐，其中环B、X¹、X³、X⁴、R¹、R²和n各自如上文所定义和本文所述。

在式(I)的一些实施方案中，

为

因此，在一些实施方案中，本公开提供一种式(I-b)化合物：

或其药学上可接受的盐，其中环B、X¹、X⁴、R¹、R²、R和n各自如上文所定义和本文所述。

如上文所一般定义，X¹选自N和C-R^x。在式(I)、(I-a)和(I-b)中任一个的一些实施方案中，X¹为N。因此，在一些实施方案中，本公开提供一种式(I-a-i)或(I-b-i)化合物:

或其药学上可接受的盐，其中环B、X³、X⁴、R¹、R²、R和n各自如上文所定义和本文所述。

在式(I)、(I-a)和(I-b)中任一个的一些实施方案中，X¹为C-R^x。因此，在一些实施方案中，本公开提供一种式(I-a-ii)或(I-b-ii)化合物：

或其药学上可接受的盐，其中环B、X³、X⁴、R¹、R²、R、R^x和n各自如上文所定义和本文所述。

如上文对于式(I)所一般定义，环B选自苯基和具有1-3个独立地选自氮、氧和硫的杂原子的5至6元杂芳基环。在式(I)、(I-a)、(I-a-i)、(I-a-ii)、(I-b)、(I-b-i)和(I-b-ii)的一些实施方案中，环B为苯基。因此，在一些实施方案中，本公开提供一种式(I-a-iii)、(I-a-iv)、(I-a-v)、(I-b-iii)、(I-b-iv)和(I-b-v)化合物：

或其药学上可接受的盐，其中X¹、X³、X⁴、R¹、R²、R、R^x和n各自如上文所定义和本文所述。

在式(I)、(I-a)、(I-a-i)、(I-a-ii)、(I-b)、(I-b-i)和(I-b-ii)的一些实施方案中，环B为

在式(I)、(I-a)、(I-a-i)、(I-a-ii)、(I-b)、(I-b-i)和(I-b-ii)的一些实施方案中，环B为具有1-3个独立地选自氮、氧和硫的杂原子的5至6元杂芳基环。在式(I)、(I-a)、(I-a-i)、(I-a-ii)、(I-b)、(I-b-i)和(I-b-ii)的其他实施方案中，环B为具有1-3个独立地选自氮、氧和硫的杂原子的5元杂芳基环。在式(I)、(I-a)、(I-a-i)、(I-a-ii)、(I-b)、(I-b-i)和(I-b-ii)的其他实施方案中，环B为具有1-2个氮原子的6元杂芳基环，例如吡啶基。

如上文对于式(I)所一般定义，X³选自N和C-R^x。在式(I)、(I-a)、(I-a-i)、(I-a-ii)、(I-a-iii)、(I-a-iv)和(I-a-v)中任一个的一些实施方案中，X³为N。在式(I)、(I-a)、(I-a-i)、(I-a-ii)、(I-a-iii)、(I-a-iv)和(I-a-v)中任一个的其他实施方案中，X³为C-R^x。

如上文对于式(I)所一般定义，X⁴选自N和C-R^x。在式(I)、(I-a)、(I-a-i)、(I-a-ii)、(I-a-iii)、(I-a-iv)、(I-a-v)、(I-b)、(I-b-i)、(I-b-ii)、(I-b-iii)、(I-b-iv)和(I-b-v)中任一个的一些实施方案中，X⁴为N。在式(I)、(I-a)、(I-a-i)、(I-a-ii)、(I-a-iii)、(I-a-iv)、(I-a-v)、(I-b)、(I-b-i)、(I-b-ii)、(I-b-iii)、(I-b-iv)和(I-b-v)中任一个的其他实施方案中，X⁴为C-R^x。

如上文对于式(I)所一般定义，R¹为氢或选自以下的任选取代的基团：C_1-6脂族基、苯基和具有1-3个独立地选自氮、氧和硫的杂原子的5至6元杂芳基环。在式(I)、(I-a)、(I-a-i)、(I-a-ii)、(I-a-iii)、(I-a-iv)、(I-a-v)、(I-b)、(I-b-i)、(I-b-ii)、(I-b-iii)、(I-b-iv)和(I-b-v)中任一个的一些实施方案中，R¹为氢。在式(I)、(I-a)、(I-a-i)、(I-a-ii)、(I-a-iii)、(I-a-iv)、(I-a-v)、(I-b)、(I-b-i)、(I-b-ii)、(I-b-iii)、(I-b-iv)和(I-b-v)中任一个的其他实施方案中，R¹为选自以下的任选取代的基团：C_1-6脂族基、苯基和具有1-3个独立地选自氮、氧和硫的杂原子的5至6元杂芳基环。在式(I)、(I-a)、(I-a-i)、(I-a-ii)、(I-a-iii)、(I-a-iv)、(I-a-v)、(I-b)、(I-b-i)、(I-b-ii)、(I-b-iii)、(I-b-iv)和(I-b-v)中任一个的其他实施方案中，R¹为任选取代的C_1-6脂族基。在式(I)、(I-a)、(I-a-i)、(I-a-ii)、(I-a-iii)、(I-a-iv)、(I-a-v)、(I-b)、(I-b-i)、(I-b-ii)、(I-b-iii)、(I-b-iv)和(I-b-v)中任一个的其他实施方案中，R¹为任选取代的C_1-3脂族基，例如CH₃、CH₂CH₃、CH₂CH₂CH₃或CH(CH₃)₂。在式(I)、(I-a)、(I-a-i)、(I-a-ii)、(I-a-iii)、(I-a-iv)、(I-a-v)、(I-b)、(I-b-i)、(I-b-ii)、(I-b-iii)、(I-b-iv)和(I-b-v)中任一个的其他实施方案中，R¹为任选取代的苯基。在式(I)、(I-a)、(I-a-i)、(I-a-ii)、(I-a-iii)、(I-a-iv)、(I-a-v)、(I-b)、(I-b-i)、(I-b-ii)、(I-b-iii)、(I-b-iv)和(I-b-v)中任一个的其他实施方案中，R¹为具有1-3个独立地选自氮、氧和硫的杂原子的任选取代的5至6元杂芳基环。在式(I)、(I-a)、(I-a-i)、(I-a-ii)、(I-a-iii)、(I-a-iv)、(I-a-v)、(I-b)、(I-b-i)、(I-b-ii)、(I-b-iii)、(I-b-iv)和(I-b-v)中任一个的其他实施方案中，R¹为具有1-3个独立地选自氮、氧和硫的杂原子的任选取代的5元杂芳基环。在式(I)、(I-a)、(I-a-i)、(I-a-ii)、(I-a-iii)、(I-a-iv)、(I-a-v)、(I-b)、(I-b-i)、(I-b-ii)、(I-b-iii)、(I-b-iv)和(I-b-v)中任一个的其他实施方案中，R¹为具有1-2个氮原子的任选取代的6元杂芳基环，例如吡啶基或嘧啶基。

如上文对于式(I)所一般定义，R²选自卤素、NO₂、N(R)₂、OR、N(R)C(O)R、CO₂R、C(O)N(R)₂和任选取代的C_1-6脂族基。在式(I)、(I-a)、(I-a-i)、(I-a-ii)、(I-a-iii)、(I-a-iv)、(I-a-v)、(I-b)、(I-b-i)、(I-b-ii)、(I-b-iii)、(I-b-iv)和(I-b-v)中任一个的一些实施方案中，至少一个R²为卤素。在式(I)、(I-a)、(I-a-i)、(I-a-ii)、(I-a-iii)、(I-a-iv)、(I-a-v)、(I-b)、(I-b-i)、(I-b-ii)、(I-b-iii)、(I-b-iv)和(I-b-v)中任一个的其他实施方案中，至少一个R²为NO₂。在式(I)、(I-a)、(I-a-i)、(I-a-ii)、(I-a-iii)、(I-a-iv)、(I-a-v)、(I-b)、(I-b-i)、(I-b-ii)、(I-b-iii)、(I-b-iv)和(I-b-v)中任一个的其他实施方案中，至少一个R²为OR，例如OMe。

在式(I)、(I-a)、(I-a-i)、(I-a-ii)、(I-a-iii)、(I-a-iv)、(I-a-v)、(I-b)、(I-b-i)、(I-b-ii)、(I-b-iii)、(I-b-iv)和(I-b-v)中任一个的其他实施方案中，至少一个R²为N(R)₂。在式(I)、(I-a)、(I-a-i)、(I-a-ii)、(I-a-iii)、(I-a-iv)、(I-a-v)、(I-b)、(I-b-i)、(I-b-ii)、(I-b-iii)、(I-b-iv)和(I-b-v)中任一个的其他实施方案中，至少一个R²为NHR，例如NH₂。

在式(I)、(I-a)、(I-a-i)、(I-a-ii)、(I-a-iii)、(I-a-iv)、(I-a-v)、(I-b)、(I-b-i)、(I-b-ii)、(I-b-iii)、(I-b-iv)和(I-b-v)中任一个的其他实施方案中，至少一个R²为N(R)C(O)R，例如N(CH₃)C(O)CH₃。在式(I)、(I-a)、(I-a-i)、(I-a-ii)、(I-a-iii)、(I-a-iv)、(I-a-v)、(I-b)、(I-b-i)、(I-b-ii)、(I-b-iii)、(I-b-iv)和(I-b-v)中任一个的其他实施方案中，至少一个R²为NHC(O)R，例如NHC(O)CH₃。

在式(I)、(I-a)、(I-a-i)、(I-a-ii)、(I-a-iii)、(I-a-iv)、(I-a-v)、(I-b)、(I-b-i)、(I-b-ii)、(I-b-iii)、(I-b-iv)和(I-b-v)中任一个的其他实施方案中，至少一个R²为CO₂R，例如CO₂H。

在式(I)、(I-a)、(I-a-i)、(I-a-ii)、(I-a-iii)、(I-a-iv)、(I-a-v)、(I-b)、(I-b-i)、(I-b-ii)、(I-b-iii)、(I-b-iv)和(I-b-v)中任一个的其他实施方案中，至少一个R²为C(O)N(R)₂。在式(I)、(I-a)、(I-a-i)、(I-a-ii)、(I-a-iii)、(I-a-iv)、(I-a-v)、(I-b)、(I-b-i)、(I-b-ii)、(I-b-iii)、(I-b-iv)和(I-b-v)中任一个的其他实施方案中，至少一个R²为C(O)N(H)R，例如C(O)NHCH₃。

在式(I)、(I-a)、(I-a-i)、(I-a-ii)、(I-a-iii)、(I-a-iv)、(I-a-v)、(I-b)、(I-b-i)、(I-b-ii)、(I-b-iii)、(I-b-iv)和(I-b-v)中任一个的其他实施方案中，至少一个R²为任选取代的C_1-6脂族基。在式(I)、(I-a)、(I-a-i)、(I-a-ii)、(I-a-iii)、(I-a-iv)、(I-a-v)、(I-b)、(I-b-i)、(I-b-ii)、(I-b-iii)、(I-b-iv)和(I-b-v)中任一个的其他实施方案中，至少一个R²为任选取代的C_1-3脂族基。

如上文对于式(I)所一般定义，每个R^x独立地选自氢、卤素和任选取代的C_1-6脂族基。在式(I)、(I-a)、(I-a-i)、(I-a-ii)、(I-a-iii)、(I-a-iv)、(I-a-v)、(I-b)、(I-b-i)、(I-b-ii)、(I-b-iii)、(I-b-iv)和(I-b-v)中任一个的一些实施方案中，R^x为氢。在式(I)、(I-a)、(I-a-i)、(I-a-ii)、(I-a-iii)、(I-a-iv)、(I-a-v)、(I-b)、(I-b-i)、(I-b-ii)、(I-b-iii)、(I-b-iv)和(I-b-v)中任一个的其他实施方案中，R^x独立的选自卤素和任选取代的C_1-6脂族基。在式(I)、(I-a)、(I-a-i)、(I-a-ii)、(I-a-iii)、(I-a-iv)、(I-a-v)、(I-b)、(I-b-i)、(I-b-ii)、(I-b-iii)、(I-b-iv)和(I-b-v)中任一个的其他实施方案中，R^x为卤素，例如氟或氯。

在式(I)、(I-a)、(I-a-i)、(I-a-ii)、(I-a-iii)、(I-a-iv)、(I-a-v)、(I-b)、(I-b-i)、(I-b-ii)、(I-b-iii)、(I-b-iv)和(I-b-v)中任一个的其他实施方案中，R^x为任选取代的C_1-6脂族基。在其他实施方案中，R^x为任选取代的C_1-3脂族基，例如CH₃、CH₂CH₃、CH₂CH₂CH₃或CH(CH₃)₂。

如上文对于式(I)所一般定义，每个R独立地选自氢或选自以下的任选取代的基团：C_1-6脂族基；3至7元单环碳环；具有1-3个独立地选自氮、氧和硫的杂原子的3至7元单环杂环；苯基；具有1-3个独立地选自氮、氧和硫的杂原子的5至6元杂芳基环。在式(I)、(I-a)、(I-a-i)、(I-a-ii)、(I-a-iii)、(I-a-iv)、(I-a-v)、(I-b)、(I-b-i)、(I-b-ii)、(I-b-iii)、(I-b-iv)和(I-b-v)中任一个的一些实施方案中，R为氢。在式(I)、(I-a)、(I-a-i)、(I-a-ii)、(I-a-iii)、(I-a-iv)、(I-a-v)、(I-b)、(I-b-i)、(I-b-ii)、(I-b-iii)、(I-b-iv)和(I-b-v)中任一个的一些实施方案中，R独立地选自任选取代的基团，所述基团选自C_1-6脂族基；3至7元单环碳环；具有1-3个独立地选自氮、氧和硫的杂原子的3至7元单环杂环；苯基；具有1-3个独立地选自氮、氧和硫的杂原子的5至6元杂芳基环。在式(I)、(I-a)、(I-a-i)、(I-a-ii)、(I-a-iii)、(I-a-iv)、(I-a-v)、(I-b)、(I-b-i)、(I-b-ii)、(I-b-iii)、(I-b-iv)和(I-b-v)中任一个的一些实施方案中，R为任选取代的C_1-6脂族基。在式(I)、(I-a)、(I-a-i)、(I-a-ii)、(I-a-iii)、(I-a-iv)、(I-a-v)、(I-b)、(I-b-i)、(I-b-ii)、(I-b-iii)、(I-b-iv)和(I-b-v)中任一个的一些实施方案中，R为任选取代的C_1-3脂族基。在一些这样的实施方案中，R为CH₃或CH₂CH₃。

如上文对于式(I)所一般定义，n为0-3。在式(I)、(I-a)、(I-a-i)、(I-a-ii)、(I-a-iii)、(I-a-iv)、(I-a-v)、(I-b)、(I-b-i)、(I-b-ii)、(I-b-iii)、(I-b-iv)和(I-b-v)中任一个的一些实施方案中，n为1-2。在式(I)、(I-a)、(I-a-i)、(I-a-ii)、(I-a-iii)、(I-a-iv)、(I-a-v)、(I-b)、(I-b-i)、(I-b-ii)、(I-b-iii)、(I-b-iv)和(I-b-v)中任一个的其他实施方案中，n为0。在式(I)、(I-a)、(I-a-i)、(I-a-ii)、(I-a-iii)、(I-a-iv)、(I-a-v)、(I-b)、(I-b-i)、(I-b-ii)、(I-b-iii)、(I-b-iv)和(I-b-v)中任一个的其他实施方案中，n为1。在式(I)、(I-a)、(I-a-i)、(I-a-ii)、(I-a-iii)、(I-a-iv)、(I-a-v)、(I-b)、(I-b-i)、(I-b-ii)、(I-b-iii)、(I-b-iv)和(I-b-v)中任一个的其他实施方案中，n为2。在式(I)、(I-a)、(I-a-i)、(I-a-ii)、(I-a-iii)、(I-a-iv)、(I-a-v)、(I-b)、(I-b-i)、(I-b-ii)、(I-b-iii)、(I-b-iv)和(I-b-v)中任一个的其他实施方案中，n为3。

在任何公开的化合物的一些实施方案中，R¹为C_1-6脂族基，例如甲基或丙基。在其他实施方案中，R¹为苯基。在其他实施方案中，R¹为具有1-3个独立地选自氧、氮和硫的杂原子的5至6元杂芳基环。在其他实施方案中，其中R¹为具有1-3个独立地选自氮、氧和硫的杂原子的5元杂芳基环。在其他实施方案中，其中R¹为具有1-3个氮原子的6元杂芳基环。在其他实施方案中，R¹为具有1-2个氮原子的6元杂芳基环，例如

在任何公开的化合物的一些实施方案中，R^x为氢。在其他实施方案中，R^x为卤素或任选取代的C_1-6脂族基。在其他实施方案中，R^x为任选取代的C_1-6脂族基。在其他实施方案中，R^x为未取代的C_1-6脂族基，例如甲基。

在任何公开的化合物的一些实施方案中，R²选自卤素、NO₂、N(R)₂、OR、N(R)C(O)R、CO₂R、C(O)N(R)₂和任选取代的C_1-6脂族基。在其他实施方案中，R²为卤素，例如氟。在其他实施方案中，R²为NO₂。在其他实施方案中，R²为OR，例如OCH₃。在其他实施方案中，其中R²为N(R)₂，例如NH₂。在其他实施方案中，R²为N(R)C(O)R，例如NHC(O)CH₃或N(CH₃)C(O)CH₃。在其他实施方案中，R²为CO₂R，例如CO₂H。在其他实施方案中，R²为C(O)N(R)₂，例如C(O)NHCH₃。在其他实施方案中，R²为任选取代的C_1-6脂族基，例如CF₃。

在任何公开的化合物的一些实施方案中，R为氢。在其他实施方案中，R为选自以下的任选取代的基团：C_1-6脂族基；3至7元单环碳环；具有1-3个独立地选自氮、氧和硫的杂原子的3至7元单环杂环；苯基；具有1-3个独立地选自氮、氧和硫的杂原子的5至6元杂芳基环。在其他实施方案中，R为任选取代的C_1-6脂族基。在其他实施方案中，R为未取代的C_1-6脂族基，例如甲基。

在任何公开的化合物的一些实施方案中，R³为氢。在其他实施方案中，R³为选自以下的任选取代的基团：C_1-6脂族基；3至7元单环碳环；具有1-3个独立地选自氮、氧和硫的杂原子的3至7元单环杂环；苯基；具有1-3个独立地选自氮、氧和硫的杂原子的5至6元杂芳基环。在其他实施方案中，R³为任选取代的C_1-6脂族基。在其他实施方案中，R³为未取代的C_1-6脂族基，例如甲基。

在任何公开的化合物的一些实施方案中，R³为氢。在其他实施方案中，R³为选自以下的任选取代的基团：C_1-6脂族基；3至7元单环碳环；具有1-3个独立地选自氮、氧和硫的杂原子的3至7元单环杂环；苯基；具有1-3个独立地选自氮、氧和硫的杂原子的5至6元杂芳基环。在其他实施方案中，R³为任选取代的C_1-6脂族基。在一些实施方案中，R³为未取代的C_1-6脂族基，例如甲基。

在任何公开的化合物的一些实施方案中，n为0。在其他实施方案中，n为1。在其他实施方案中，n为2。在一些实施方案中，本公开提供选自以下的化合物：

或其药学上可接受的盐。

在一些实施方案中，本公开提供选自以下的化合物：

或其药学上可接受的盐。

在一些实施方案中，本公开提供一种式(II)化合物：

或其药学上可接受的盐，其中：

R¹为C_1-6烷基或C_3-6环烷基；

R²为H、氨基、硝基或酰氨基；且

X¹、X³和X⁴各自独立地为N或CH。

在一些实施方案中，X¹、X³和X⁴中的至少一个为N。在其他实施方案中，X¹、X³和X⁴中的至少两个为N。在其他实施方案中，X¹、X³和X⁴中的每一个为N。在其他实施方案中，X¹和X³各自为N，且X⁴为CH。

在一些实施方案中，R¹为未取代的C_1-6烷基，例如甲基。在其他实施方案中，R¹为任选被卤素取代的甲基。在其他实施方案中，R¹为C_2-6烷基或C_3-6环烷基。

在一些实施方案中，R²为H、氨基、硝基或–N(R⁵)C(O)R⁶；R⁵为H或C_1-5烷基；且

R⁶为C_1-6烷基。在其他实施方案中，R²为–N(R⁵)C(O)R⁶，R⁵为H，且R⁶为C_1-6烷基。在其他实施方案中，R²为–N(R⁵)C(O)R⁶，R⁵为H，且R⁶为CH₃。在其他实施方案中，R²为H、氨基或硝基。在其他实施方案中，R²为NO₂或–N(R⁵)C(O)R⁶。

在一些实施方案中，其中所述化合物为：

或其药学上可接受的盐。

在一些实施方案中，其中化合物为JGJ002、JGJ003、JGJ004、JGJ005、JGJ007或JGJ008，或其药学上可接受的盐。

在一些实施方案中，其中化合物为JGJ007或JGJ088，或其药学上可接受的盐。

在式(II)的一些实施方案中，X¹为N。因此，在一些实施方案中，本公开提供一种式(II-a)化合物：

或其药学上可接受的盐，其中R¹、R²、X³和X⁴各自如上文所定义和本文所述。

在式(II)的一些实施方案中，X³为N。因此，在一些实施方案中，本公开提供一种式(I-b)化合物：

或其药学上可接受的盐，其中R¹、R²、X¹和X⁴各自如上文所定义和本文所述。

在式(II-a)的一些实施方案中，X³为N。因此，在一些实施方案中，本公开提供一种式(I-a-i)化合物：

或其药学上可接受的盐，其中R¹、R²和X⁴各自如上文所定义和本文所述。

如上文对于式(II)所一般定义，R¹为C_1-6烷基或C_3-6环烷基。在式(II)、(II-a)、(II-b)和(II-a-i)的其他实施方案中，R¹为C_1-6烷基。在式(II)、(II-a)、(II-b)和(II-a-i)中任一个的其他实施方案中，R¹为C_1-3烷基，例如R¹为CH₃、CH₂CH₃、CH₂CH₂CH₃或CH(CH₃)₂。

在式(II)、(II-a)、(II-b)和(II-a-i)中任一个的其他实施方案中，R¹为C_3-6环烷基，例如环丙基、环丁基、环戊基或环己基。在式(II)、(II-a)、(II-b)和(II-a-i)中任一个的其他实施方案中，R¹为环丙基或环丁基。在式(II)、(II-a)、(II-b)和(II-a-i)中任一个的其他实施方案中，R¹为环戊基或环己基。

如上文对于式(II)所一般定义，R²为H、氨基、硝基或酰氨基。在式(II)、(II-a)、(II-b)和(II-a-i)中任一个的一些实施方案中，R²为H。在式(II)、(II-a)、(II-b)和(II-a-i)中任一个的其他实施方案中，R²为氨基、硝基或酰氨基。在式(II)、(II-a)、(II-b)和(II-a-i)中任一个的其他实施方案中，R²为氨基。在式(II)、(II-a)、(II-b)和(II-a-i)中任一个的其他实施方案中，R²为硝基。在式(II)、(II-a)、(II-b)和(II-a-i)中任一个的其他实施方案中，R²为酰氨基(例如

)。

在一些实施方案中，氨基为N(R)₂。

在一些实施方案中，氨基为N(R)C(O)R。

在任何公开的化合物的一些实施方案中，化合物不为

药物组合物和其用途

在一些实施方案中，本公开提供了以下认识：靶向核糖核酸(RNA)-RNA结合蛋白(RBP)相互作用的方法构成了一种新兴的替代方法，以显著扩展可药用蛋白质组和基因组并克服内在和获得性耐药性。

在某些方面，本公开进一步提供了对RBP通过调节RNA加工、翻译和周转而在细胞生理学中发挥关键作用的认识。在赘瘤中，RBP的失调表达支持与癌症自我更新、增殖以及其对应激的适应相关的可变剪接、修饰和稳定的RNA转录物的表达。在一些实施方案中，本公开提供了调节不同RBP-蛋白质相互作用，且因此代表一种治疗癌症和其他具有功能失调的RNA调节的疾病的新治疗方法的化合物。

微RNA(miRNA)是19-22个核苷酸(nt)的短非编码RNA，其与互补mRNA靶标杂交并导致其衰变、裂解或转录抑制(5-7)。已显示异常miRNA表达在包括白血病在内的恶性转化中发挥积极作用(8-10)。具体而言，在具有inv(16)、t(8；21)和MLL/t(11q23)的核心结合因子(CBF)白血病中，发现AML let-7b和let-7c miRNA显著下调(11)(12)。对许多人癌症，包括几种AML亚型的miRNA表达预后价值的系统评估发现，let-7miRNA的表达降低通常与预后不良有关(10、13、14)。let-7肿瘤抑制miRNA家族包含12个成员，它们从八个染色体位点差异转录，并抑制包括KRAS、MYC、IL6和HMGA1/2在内的几种癌症干细胞致癌基因以及细胞周期调节因子，如CCND1/2和E2F(图1)(15、16)。2008年，大量论文将LIN28A和其同源物LIN28B(以下简称LIN28)描述为通过直接结合至pre-let-7和/或pri-let-7，从而损害它们加工为成熟的功能性miRNA的let-7生物发生的关键调节因子(17-21)。事实上，LIN28在超过15％的人癌症(22)和癌症干细胞(CSC)(23-27)中上调。

结构研究表明，Lin28的C末端锌指节域(ZKD)与pri-/pre-let-7的3’末端环内的高度保守的GGAG基序结合(28-30)。这种结合使得TUT酶募集到聚尿苷酸pre/pri-let-7，从而阻止let-7miRNA的成熟(19、31)。因此，减少的let-7miRNA导致其直接调节的致癌靶基因的过表达。

RNA结合蛋白LIN28A和LIN28B在许多癌症中过表达，高LIN28蛋白与患者存活率降低相关(54)。LIN28A/B(以下简称Lin28)通过将其C末端锌指节域(ZKD)结合至pri-/pre-let-7的3’末端环内高度保守的GGAG基序而损害功能性成熟let-7微RNA(miRNA)的加工(17-21、28-30)。结果，在一些实施方案中，减少的let-7miRNA导致其直接致癌靶基因，如MYC、KRAS和CCND1的过表达。除了抑制let-7miRNA生物发生的能力外，Lin28已被证明结合胰岛素样生长因子2蛋白(Igf2)的mRNA转录物，从而影响它们的丰度和/或翻译(69、70)。

在多种癌症中，越来越多的证据表明LIN28过表达(32-34)和let-7缺失(35-37)与CSC对放射治疗和化疗的耐药性相关，最终导致总生存期降低。具体而言，在AML中，已表明失调的LIN28/let-7通过LSC样转录程序促进白血病发生，并与不良临床结果相关(38)。在难治性AML患者的骨髓抽吸物中，已发现let-7a通过BCL-2家族成员BCL-XL赋予Ara-C化疗抵抗(39)。重要的是，一些研究强调BCL-2和BCL-XL在AML和LSC中的特异性过表达与化疗抵抗和较差的总/无病生存期有关(40-43)。另外，let-7miRNA靶向IL6和RAS，其为NF-KB途径的两个众所周知的遗传驱动因子，所述途径是LSC稳态的另一个重要调节因子(44)(图1)。

新出现的证据表明NF-KB和BCL-2在LSC中被激活，但在造血干细胞(HSC)中没有被激活，作为促炎细胞应激反应的核心成分(45、46)。因此，治疗性抑制LIN28并因此上调let-7可能会选择性地杀死LSC。鉴于Lin28/let-7在白血病和其他CSC中的基本作用以及其与治疗抵抗的相关性，可以想象LIN28的靶向抑制可能是精准AML治疗的一种新方法。值得注意的是，对条件性Lin28a和Lin28b敲除小鼠的研究揭示，胚胎而不是新生或成年Lin28缺乏会导致生长缺陷(47)，表明Lin28具有异时效应。此外，在小鼠中，Lin28b的表达被发现在造血干细胞中减少(48、49)，并且与造血成熟过程中普通骨髓祖细胞中成熟let-7的积累一致(50)。因此，LIN28的治疗性抑制和由此产生的let-7miRNA的上调可以选择性地杀死LSC，但将可能对健康组织具有高耐受性。

迄今为止，已经报道了五种高通量筛选(HTS)，目的是鉴定破坏LIN28与pre-let-7miRNA结合的药理活性化合物。我们使用FRET-HTS筛选了16,000种药物样有机化合物，并鉴定了第一命中化合物501632(51)(以下简称LN1632)与LIN28B结合并选择性上调let-7miRNA水平并诱导小鼠胚胎干细胞分化(51)。Lim等人(52)筛选了一个内部文库并且发现了一种基于苯并吡喃基吡唑的化合物作为主要命中分子，而Lightfoot等人使用生物物理测定鉴定6-羟基-DL-DOPA和苯并[a]吩噁嗪，它们在体外抑制Lin28/let-7相互作用。Sliz小组开发了一种荧光偏振HTS，并鉴定了LI71和TPEN，后者是一种有效的ZKD域抑制剂(53)。尽管报道的Lin28/let-7相互作用的小分子抑制剂越来越多，但尚未确定LIN28在体内对靶向AML和LSC疗法的药理学抑制作用。此外，仍未开发对LIN28具有高特异性、抑制其活性的小分子抑制剂。

本公开报道了式(I)或(II)的化合物对Lin28和Lin28/let-7的体外和体内抑制：

如本文所述，式(I)和(II)的化合物在体外FRET测定以及在LSC和LSC样Kasumi-1细胞中显示出Lin28/let-7抑制活性。如前所述地进行FRET测定(51)。

类似地，式(I)和(II)的化合物表现出在体外和体内抑制蛋白质-RNA相互作用，特别是Lin28/let-7和PRPF31/U4。

本公开提供一种治疗癌症的方法，所述方法包括向罹患癌症或表现出癌症症状的受试者施用本文所述的化合物或组合物。在一些实施方案中，所述方法包括治疗或改善癌症的一种或多种症状。在一些实施方案中，癌症是血液癌症，例如急性髓性白血病。在一些实施方案中，所述方法包括以已确定实现癌细胞抑制和/或减少的癌细胞增殖的量或根据已确定实现癌细胞抑制和/或减少的癌细胞增殖的给药方案施用化合物或组合物。在一些实施方案中，癌细胞包括癌症干细胞。在一些实施方案中，癌症干细胞包括白血病干细胞(LSC)。在一些实施方案中，所述方法包括以已确定实现癌细胞抑制和/或减少的癌细胞增殖的量或根据已确定实现癌细胞抑制和/或减少的癌细胞增殖的给药方案施用化合物或组合物，其中使用实施例3或5中所示的测定或类似测定来评估癌细胞抑制和/或减少的癌细胞增殖。

在一些实施方案中，本公开提供一种调节剪接的方法，所述方法包括使具有剪接能力的系统与本文所述的化合物接触。

在一些实施方案中，本公开提供一种包括以下的方法：

使具有剪接能力的系统与如本文所述的化合物接触；并在所述系统中评估：

(i)剪接产物(例如剪接的转录物)的存在或水平；

(ii)RNA的表达或定位；和/或

(iii)多肽的表达或折叠

在一些实施方案中，本公开提供一种调节具有剪接能力的系统中的剪接的方法，所述方法通过使所述系统与本文所述的化合物接触，从而观察到以下一者或多者：

(i)减少的RNA剪接；

(ii)改变的RNA表达或定位；和/或

(iii)改变的多肽表达或折叠。

在一些实施方案中，本公开提供一种方法，所述方法包括使具有剪接能力的系统与本文所述的化合物接触，其中所述化合物的特征在于当与癌细胞接触时，所述化合物相对于其不存在时观察到的所述癌细胞的增殖减少所述增殖。在一些实施方案中，与化合物不存在时相比，当存在化合物时剪接减少。在一些实施例中，所述方法还包括与参考条件相比评估系统中的剪接。在一些实施方案中，参考条件是不存在化合物。在一些实施方案中，参考条件是存在对照化合物。在一些实施方案中，参考条件是历史条件。在一些实施方案中，所述化合物抑制剪接机构组分的一种或多种属性和/或其中所述化合物抑制剪接机构组分之间或之中的相互作用。在一些实施方案中，所述化合物直接结合至一种或多种剪接机构组分或其复合物。在一些实施方案中，剪接机构组分是RNA组分。在一些实施方案中，剪接机构组分是多肽组分。在一些实施方案中，剪接机构组分选自RNA组分、多肽组分、以及它们或它们之间的复合物。在一些实施方案中，RNA组分为或包括小核RNA(snRNA)。在一些实施方案中，snRNA选自U1、U2、U4、U5和U6。在一些实施方案中，多肽组分为或包括Sm多肽或Lsm多肽。在一些实施方案中，多肽组分选自Prp3、Prp31、Prp4、CypH、15.5K、Prp8、Brr2、Snu114、Prp6、Prp28、40K、Dib1、Snu66、Sad1和27K。在一些实施方案中，剪接机构组分包括Prp31多肽。在一些实施方案中，剪接机构组分包括U4 snRNA、U6 snRNA和Prp31多肽组分。在一些实施方案中，所述化合物抑制以下各者之间的相互作用：U6 snRNA与Prp31多肽；或U4 snRNA与Prp31多肽。在一些实施方案中，所述化合物抑制Prp31多肽的活性。

在一些实施方案中，接触发生在体外、离体或体内。在一些实施方案中，具有剪接能力的系统为癌细胞。在一些实施方案中，具有剪接能力的癌细胞包括癌症干细胞。在一些实施方案中，具有剪接能力的癌症干细胞包括白血病干细胞(LSC)。

本发明的组合物和方法可用于治疗有需要的个体。在某些实施方案中，所述个体是哺乳动物，诸如人或非人哺乳动物。当施用于动物诸如人时，组合物或化合物优选以药物组合物形式施用，所述药物组合物包含例如本发明的化合物和药学上可接受的载体。药学上可接受的载体是本领域熟知的，并且包括例如水溶液，诸如水或生理缓冲盐水或其他溶剂或媒介物，诸如二醇类、甘油、油类诸如橄榄油或可注射的有机酯类。在优选的实施方案中，当此类药物组合物施用于人时，特别是用于侵入性施用途径(即，诸如规避通过上皮屏障的运输或扩散的注射或植入的途径)时，水溶液是无热原或基本上无热原的。可以选择赋形剂，例如以实现剂的延迟释放或选择性地靶向一种或多种细胞、组织或器官。药物组合物可以呈剂量单位形式，诸如片剂、胶囊(包括分散型胶囊和明胶胶囊)、颗粒剂、用于重构的冻干剂、散剂、溶液、糖浆剂、栓剂、注射剂等。所述组合物也可以存在于透皮递送系统中，例如皮肤贴剂。所述组合物也可以存在于适合局部施用的溶液，诸如洗剂、乳膏或软膏中。

药学上可接受的载体可以含有生理上可接受的剂，所述剂例如起到稳定化合物(诸如本发明的化合物)、增加其溶解性或增加其吸收的作用。此类生理学上可接受的剂包括例如碳水化合物，如葡萄糖、蔗糖或葡聚糖；抗氧化剂，如抗坏血酸或谷胱甘肽；螯合剂；低分子量蛋白质或其他稳定剂或赋形剂。药学上可接受的载体，包括生理学上可接受的剂的选择取决于例如组合物的施用途径。制剂或药物组合物可以是自乳化药物递送系统或自微乳化药物递送系统。药物组合物(制剂)也可以是脂质体或其他聚合物基质，其中可以掺入例如本发明化合物。例如，包含磷脂或其他脂质的脂质体是无毒、生理上可接受和可代谢的载体，其制备和施用相对简单。

本文采用短语“药学上可接受的”指在合理医学判断范围内、适用于与人和动物组织接触而没有过量毒性、刺激、过敏反应或其他问题或并发症、与合理的利益/风险比相称的那些化合物、材料、组合物和/或剂型。

本文采用的短语“药学上可接受的载体”意指药学上可接受的材料、组合物或媒介物，诸如液体或固体填充剂、稀释剂、赋形剂、溶剂或包封材料。每种载体在可与制剂的其他成分相容并且不损伤患者的意义上必须是“可接受的”。可以用作药学上可接受的载体的材料的一些实例包括：(1)糖，诸如乳糖、葡萄糖以及蔗糖；(2)淀粉，诸如玉米淀粉和马铃薯淀粉；(3)纤维素和它的衍生物，诸如羧甲基纤维素钠、乙基纤维素以及乙酸纤维素；(4)黄芪胶粉；(5)麦芽；(6)明胶；(7)滑石；(8)赋形剂，诸如可可脂和栓剂蜡；(9)油，诸如花生油、棉籽油、红花油、芝麻油、橄榄油、玉米油以及大豆油；(10)二醇，诸如丙二醇；(11)多元醇，诸如甘油、山梨醇、甘露醇以及聚乙二醇；(12)酯，诸如油酸乙酯和月桂酸乙酯；(13)琼脂；(14)缓冲剂，诸如氢氧化镁和氢氧化铝；(15)褐藻酸；(16)无热原质水；(17)等渗盐水；(18)林格式溶液；(19)乙醇；(20)磷酸盐缓冲溶液；以及(21)药物制剂中采用的其他无毒相容性物质。

药物组合物(制剂)可以通过多种施用途径中的任一种施用给受试者，所述施用途径包括例如口服(例如，用于施加到舌的在水或非水溶液或混悬剂中的浸液、片剂、胶囊(包括分散型胶囊和明胶胶囊)、大丸剂、散剂、颗粒剂、糊剂)；通过口腔粘膜吸收(例如，舌下)；皮下；透皮(例如，作为施加到皮肤的贴剂)；和局部施用(例如，作为施加到皮肤的乳膏、软膏或喷雾剂)。所述化合物还可以被配制成用于吸入。在某些实施方案中，化合物可以简单地溶解或混悬于无菌水中。适当的施用途径和适用于其的组合物的细节可以在例如美国专利号6,110,973、5,763,493、5,731,000、5,541,231、5,427,798、5,358,970和4,172,896以及其中引用的专利中找到。

制剂可以方便地以单位剂型存在并且可以通过药学领域中熟知的任何方法来制备。可与载体材料组合以产生单一剂型的活性成分的量将根据被治疗的宿主、特定的施用方式而变化。可与载体材料组合以产生单一剂型的活性成分的量将通常是产生治疗效果的化合物的量。一般来说，在一百份中，此量将在约1％至约99％活性成分的范围内，优选约5％至约70％，最优选约10％至约30％。

制备这些调配物或组合物的方法包括使活性化合物(例如本发明化合物)与载体和任选的一种或多种辅助成分缔合的步骤。一般来说，通过将本发明的化合物与液体载体、或精细分开的固体载体、或两者均匀且密切地缔合，然后必要时使产物成形来制备制剂。

适用于口服施用的本发明的制剂可呈以下形式：胶囊(包括分散型胶囊和明胶胶囊)、扁囊剂、丸剂、片剂、锭剂(使用经调味的基质，通常为蔗糖和阿拉伯胶或西黄蓍胶)、冻干剂、散剂、颗粒剂或作为水性液体或非水性液体中的溶液或混悬剂、或作为水包油或油包水乳剂、或作为酏剂或糖浆剂、或作为软锭剂(pastille)(使用惰性基质，诸如明胶和甘油，或蔗糖和阿拉伯胶)和/或为漱口剂等，每种均含有预定量的作为活性成分的本发明化合物。组合物或化合物还可以作为大丸剂、糖饵剂(electuary)或糊剂施用。

为制备用于口服施用的固体剂型(胶囊(包括分散型胶囊和明胶胶囊)、片剂、丸剂、糖衣丸、散剂、颗粒剂等)，将活性成分与一种或多种药学上可接受的载体，例如柠檬酸钠或磷酸二钙和/或以下中的任一种混合：(1)填充剂或增量剂，例如淀粉、乳糖、蔗糖、葡萄糖、甘露醇和/或硅酸；(2)粘合剂，例如羧甲基纤维素、藻酸盐、明胶、聚乙烯吡咯烷酮、蔗糖和/或阿拉伯胶；(3)保湿剂，例如甘油；(4)崩解剂，例如琼脂、碳酸钙、马铃薯或木薯淀粉、海藻酸、某些硅酸盐和碳酸钠；(5)溶液阻滞剂，例如石蜡；(6)吸收促进剂，例如季铵化合物；(7)润湿剂，例如鲸蜡醇和单硬脂酸甘油酯；(8)吸收剂，例如高岭土和膨润土；(9)润滑剂，例如滑石、硬脂酸钙、硬脂酸镁、固体聚乙二醇、十二烷基硫酸钠和其混合物；(10)络合剂，例如改性和未改性的环糊精；以及(11)着色剂。在胶囊(包括分散型胶囊和明胶胶囊)、片剂和丸剂的情况下，药物组合物还可以包含缓冲剂。类似类型的固体组合物也可以用作软和硬填充明胶胶囊中的填充剂，所述胶囊使用诸如乳糖(lactose/milk sugar)以及高分子量聚乙二醇等赋形剂。

片剂可以通过压制或模制来制备，任选地含有一种或多种辅助成分。可以使用粘合剂(例如，明胶或羟丙基纤维素)、润滑剂、惰性稀释剂、防腐剂、崩解剂(例如，羧甲基淀粉钠或交联羧甲基纤维素钠)、表面活性剂或分散剂来制备压制片剂。模制片剂可以通过在合适的机器中模制用惰性液体稀释剂湿润的粉末状化合物的混合物来制备。

片剂和其他药物组合物的固体剂型，诸如糖衣丸、胶囊(包括分散型胶囊和明胶胶囊)、丸剂和颗粒可任选地刻痕或用包衣和外壳，诸如肠溶包衣或药物配制领域熟知的其他包衣来制备。还可使用例如用于提供所需释放特征的不同比例的羟丙基甲基纤维素、其他聚合物基质、脂质体和/或微球将它们配制成用于提供其中所含活性成分的缓慢释放或受控释放。可通过例如经由截留细菌的过滤器过滤或通过在即将使用前掺入呈可溶于无菌水或一些其他无菌可注射介质中的无菌固体组合物形式的灭菌剂来对它们进行灭菌。这些组合物还可任选地含有遮光剂并且可具有它们仅在或优先在胃肠道的某一部分中任选地以延迟方式释放活性成分的组成。可以使用的包埋组合物的实例包括聚合物质和蜡。所述活性成分还可以呈微囊化形式，在适当情况下，具有一种或多种上述赋形剂。

可用于口服施用的液体剂型包括药学上可接受的乳剂、用于重构的冻干剂、微乳剂、溶液、混悬剂、糖浆剂和酏剂。除活性成分以外，液体剂型可含有通常在本领域中使用的惰性稀释剂，例如像水或其他溶剂、环糊精及其衍生物、溶解剂和乳化剂诸如乙醇、异丙醇、碳酸乙酯、乙酸乙酯、苯甲醇、苯甲酸苄酯、丙二醇、1,3-丁二醇、油(具体地是棉籽油、花生油、玉米油、胚芽油、橄榄油、蓖麻油以及芝麻油)、甘油、四氢糠醇、聚乙二醇和山梨醇酐的脂肪酸酯及其混合物。

除了惰性稀释剂，所述口服组合物还可包含助剂，诸如润湿剂、乳化剂和助悬剂、甜味剂、矫味剂、着色剂、芳香剂和防腐剂。

除活性化合物以外，混悬剂还可含有助悬剂，例如像乙氧基化异硬脂醇、聚氧乙烯山梨醇和脱水山梨糖醇酯、微晶纤维素、偏氢氧化铝、膨润土、琼脂和黄蓍胶及其混合物。

用于局部或透皮施用的剂型包括散剂、喷雾剂、软膏、糊剂、乳膏、洗剂、凝胶剂、溶液、贴剂以及吸入剂。可以在无菌条件下将活性化合物与药学上可接受的载体以及可能需要的任何防腐剂、缓冲剂或推进剂混合。

除活性化合物外，软膏、糊剂、乳膏和凝胶还可含有赋形剂，例如动植物脂肪、油、蜡、石蜡、淀粉、黄蓍胶、纤维素衍生物、聚乙二醇、硅氧烷、膨润土、硅酸、滑石和氧化锌，或其混合物。

除活性化合物外，散剂和喷雾剂还可含有赋形剂，例如乳糖、滑石、硅酸、氢氧化铝、硅酸钙和聚酰胺粉末，或这些物质的混合物。喷雾剂可另外含有常用的推进剂，例如氯氟烃和挥发性未取代的烃，例如丁烷和丙烷。

透皮贴剂具有向身体提供本发明化合物的受控递送的附加优点。此类剂型还可通过将活性化合物溶解或分散于适当的介质中来制备。吸收增强剂也可以用于增加化合物穿过皮肤的通量。这种通量的速率可以通过提供速率控制膜或将化合物分散于聚合物基质或凝胶中来控制。

如本文所用的短语“肠胃外施用”和“肠胃外地施用”意指除了肠内施用和局部施用以外的、通常通过注射进行的施用方式，并且包括但不限于静脉内、眼内(例如玻璃体内)、肌肉内、动脉内、鞘内、囊内、眼眶内、心内、真皮内、腹膜内、经气管、皮下、表皮下、关节内、囊下、蛛网膜下、脊柱内以及胸骨内注射和输注。适合于肠胃外施用的药物组合物包含一种或多种活性化合物与一种或多种药学上可接受的无菌等渗水性溶液或非水性溶液、分散液、混悬剂或乳剂，或可在临使用前复原成无菌可注射溶液或分散液的无菌散剂的组合，所述组合可以含有抗氧化剂、缓冲剂、抑菌剂、使调配物与预期受体的血液等渗的溶质、或助悬剂或增稠剂。

可用于本发明的药物组合物中的合适的水性和非水性载体的实例包括水、乙醇、多元醇(诸如甘油、丙二醇、聚乙二醇等)和其合适的混合物、植物油(诸如橄榄油)和可注射有机酯(诸如油酸乙酯)。适当流动性可以例如通过使用包衣材料(诸如卵磷脂)、在分散液的情况下通过维持所需粒度以及通过使用表面活性剂加以维持。

这些组合物还可含有佐剂，诸如防腐剂、润湿剂、乳化剂和分散剂。可以通过加入各种抗细菌剂和抗真菌剂，例如对羟基苯甲酸酯、氯丁醇、苯酚山梨酸等来确保防止微生物的作用。也可能需要在组合物中包括等渗剂，例如糖、氯化钠等。另外，可通过包含延迟吸收的剂如单硬脂酸铝和明胶来实现可注射药物形式的延长吸收。

在一些情况下，为了延长药物的作用，需要减缓皮下或肌肉注射药物的吸收。这可以通过使用水溶性差的结晶或无定形材料的液体混悬液来实现。药物的吸收速率则取决于其溶解速率，溶解速率进而可取决于晶体大小和晶形。或者，通过将药物溶解或混悬在油媒介物中来实现肠胃外施用药物形式的延迟吸收。

通过在可生物降解的聚合物，例如聚丙交酯-聚乙交酯中形成主题化合物的微囊化基质来制备可注射积存形式。根据药物与聚合物的比率，以及所用的特定聚合物的性质，可以控制药物的释放速率。其他可生物降解聚合物的实例包括聚(原酸酯)和聚(酸酐)。还可以通过将药物包埋在与身体组织相容的脂质体或微乳液中来制备积存可注射调配物。

为了用于本发明的方法，可本身或作为含有例如0.1％至99.5％(更优选0.5％至90％)的活性成分与药学上可接受的载体组合的药物组合物来提供活性化合物。

引入的方法也可由可再充电或可生物降解装置提供。关于药物(包括蛋白质生物制药)的受控递送，近年来已经开发了各种缓释聚合物装置并在体内进行了测试。包括可生物降解和不可降解的聚合物二者在内的多种生物相容性聚合物(包括水凝胶)可用于形成植入物，以在特定靶标部位持续释放化合物。

药物组合物中的活性成分的实际剂量水平可以改变，以便获得对于特定患者、组合物以及施用模式有效实现所需治疗反应，而对患者无毒的活性成分的量。

选择的剂量水平取决于多种因素，包括使用的特定化合物或化合物的组合或其酯、盐或酰胺的活性、施用途径、施用时间、使用的特定化合物的排泄速率、治疗的持续时间、与使用的特定化合物组合使用的其他药物、化合物和/或材料、所治疗患者的年龄、性别、体重、状况、一般健康状态和先前的病史和在医学领域熟知的类似因素。

具有本领域中的普通技艺的医师或兽医可以容易地判定和开具治疗有效量的所需药物组合物。例如，医师或兽医可以低于为达到所需治疗作用所需水平的水平开始药物组合物或化合物剂量且逐渐增加剂量，直至达到所需作用。“治疗有效量”意指足以引起所需治疗效应的化合物的浓度。通常应理解，化合物的有效量将根据受试者的体重、性别、年龄和病史而变化。影响有效量的其他因素可包括但不限于患者病况的严重程度、所治疗的病症、化合物的稳定性以及(如果需要)与本发明化合物一起施用的另一种类型的治疗剂的稳定性。通过多次施用所述剂可以递送更大的总剂量。确定功效和剂量的方法是本领域技术人员已知的(Isselbacher等人(1996)Harrison’s Principles of Internal Medicine第13版,1814-1882,以引用的方式并入本文)。

一般而言，本发明的组合物和方法中使用的活性化合物的合适日剂量将是作为有效产生治疗效果的最低剂量的化合物的量。这种有效剂量将通常取决于上述因素。

如果需要，活性化合物的有效日剂量可作为一、二、三、四、五、六或更多个亚剂量在全天以适当的间隔分开施用，任选地以单位剂型施用。在本发明的某些实施方案中，活性化合物可以每天施用两次或三次。在优选的实施方案中，活性化合物将每天施用一次。

接受这种治疗的患者为任何有需要的动物，包括灵长类动物，特别是人；以及其他哺乳动物，例如马、牛、猪、绵羊、猫和狗；家禽；以及一般的宠物。

在某些实施方案中，本发明的化合物可以单独使用或与另一种类型的治疗剂联合施用。

本公开包括本发明的化合物的药学上可接受的盐在本发明的组合物和方法中的用途。在某些实施方案中，本发明所考虑的盐包括但不限于烷基、二烷基、三烷基或四烷基铵盐。在某些实施方案中，本发明所考虑的盐包括但不限于L-精氨酸、苯乙苄胺(benenthamine)、苄星(benzathine)、甜菜碱、氢氧化钙、胆碱、地阿诺(deanol)、二乙醇胺、二乙胺、2-(二乙氨基)乙醇、乙醇胺、乙二胺、N-甲基葡糖胺、海巴明(hydrabamine)、1H-咪唑、锂、L-赖氨酸、镁、4-(2-羟乙基)吗啉、哌嗪、钾、1-(2-羟乙基)吡咯烷、钠、三乙醇胺、氨丁三醇和锌盐。在某些实施方案中，本发明所考虑的盐包括但不限于Na、Ca、K、Mg、Zn或其他金属盐。在某些实施方案中，本发明所考虑的盐包括但不限于1-羟基-2-萘甲酸、2,2-二氯乙酸、2-羟基-乙磺酸、2-氧代戊二酸、4-乙酰氨基苯甲酸、4-氨基水杨酸、乙酸、己二酸、l-抗坏血酸、l-天冬氨酸、苯磺酸、苯甲酸、(+)-樟脑酸、(+)-樟脑-10-磺酸、癸酸(capricacid/decanoic acid)、己酸(caproic acid/hexanoic acid)、辛酸(caprylic acid/octanoic acid)、碳酸、肉桂酸、柠檬酸、环己氨磺酸(cyclamic acid)、十二烷基硫酸、乙烷-1,2-二磺酸、乙磺酸、甲酸、富马酸、半乳糖二酸、龙胆酸、d-葡庚糖酸、d-葡萄糖酸、d-葡糖醛酸、谷氨酸、戊二酸、甘油磷酸、乙醇酸、马尿酸、氢溴酸、盐酸、异丁酸、乳酸、乳糖酸、月桂酸、马来酸、l-苹果酸、丙二酸、苯基乙醇酸、甲磺酸、萘-1,5-二磺酸、萘-2-磺酸、尼克酸、硝酸、油酸、草酸、棕榈酸、双羟萘酸、磷酸、丙酸、l-焦谷氨酸、水杨酸、癸二酸、硬脂酸、琥珀酸、硫酸、l-酒石酸、硫氰酸(thiocyanic acid)、对甲苯磺酸、三氟乙酸以及十一碳烯酸盐。

药学上可接受的酸加成盐也可以各种溶剂化物的形式存在，诸如与水、甲醇、乙醇、二甲基甲酰胺等的溶剂化物。也可以制备此类溶剂化物的混合物。此类溶剂化物的来源可以是来自结晶的溶剂，是制备或结晶的溶剂中固有的或者不溶于此类溶剂。

润湿剂、乳化剂和润滑剂诸如月桂基硫酸钠和硬脂酸镁以及着色剂、释放剂、包衣剂、甜味剂、矫味剂和芳香剂、防腐剂和抗氧化剂也可以存在于所述组合物中。

药学上可接受的抗氧化剂的实例包括：(1)水溶性抗氧化剂，诸如抗坏血酸、盐酸半胱氨酸、硫酸氢钠、焦亚硫酸钠、亚硫酸钠等；(2)油溶性抗氧化剂，诸如抗坏血酸棕榈酸酯、丁基化羟基茴香醚(BHA)、丁基化羟基甲苯(BHT)、卵磷脂、没食子酸丙酯、α-生育酚等；和(3)金属螯合剂，诸如柠檬酸、乙二胺四乙酸(EDTA)、山梨糖醇、酒石酸、磷酸等。

定义

除非本文另外定义，否则本申请中使用的科学和技术术语应具有本领域普通技术人员通常理解的含义。通常，本文所述的与化学、细胞和组织培养、分子生物学、细胞和癌症生物学、神经生物学、神经化学、病毒学、免疫学、微生物学、药理学、遗传学以及蛋白质和核酸化学结合使用的术语和技术是本领域熟知和常用的那些。

除非另外指示，否则本公开的方法和技术一般是根据本领域中熟知并且如本说明书通篇引用和论述的各种一般性和更特定参考文献中所述的常规方法来执行。参见例如，“Principles of Neural Science”,McGraw-Hill Medical,New York,N.Y.(2000)；Motulsky,“Intuitive Biostatistics”,Oxford University Press,Inc.(1995)；Lodish等人,“Molecular Cell Biology,第4版”,W.H.Freeman&Co.,New York(2000)；Griffiths等人,“Introduction to Genetic Analysis,第7版”,W.H.Freeman&Co.,N.Y.(1999)；和Gilbert等人,“Developmental Biology,第6版”,Sinauer Associates,Inc.,Sunderland,MA(2000)。

除非本文另外定义，否则本文使用的化学术语根据本领域中的常规用法来使用，如由“The McGraw-Hill Dictionary of Chemical Terms”,Parker S.编,McGraw-Hill,San Francisco,C.A.(1985)所示例的。

以上所有内容以及本申请中提及的任何其他公布、专利和公布的专利申请均以引用的方式明确并入本文。当发生冲突时，以本说明书(包括其特定定义)为准。

本文使用的术语“剂”表示化合物(诸如有机或无机化合物、化合物的混合物)、生物大分子(诸如核酸、抗体，包括其部分以及人源化、嵌合和人抗体以及单克隆抗体、蛋白质或其部分，例如肽、脂质、碳水化合物)或由生物材料诸如细菌、植物、真菌或动物(特别是哺乳动物)细胞或组织制成的提取物。剂包括例如结构已知的剂和结构未知的剂。

“患者”、“受试者”或“个体”可互换使用并且是指人或非人动物。这些术语包括哺乳动物，例如人、灵长类动物、家畜动物(包括牛、猪等)、伴侣动物(例如犬科动物、猫科动物等)以及啮齿动物(例如小鼠和大鼠)。

“治疗”病症或患者是指采取措施以获得有益的或所需的结果，包括临床结果。如本文所用以及本领域中很好地理解的，“治疗”是用于获得有益的或所需的结果(包括临床结果)的方式。有益的或所需的临床结果可包括但不限于一种或多种症状或病症的减缓或改善、疾病程度的减小、疾病状态的稳定(即不恶化)、疾病扩散的预防、疾病进程的延缓或减慢、疾病状态的改善或缓和以及缓解(无论是部分缓解或是全部缓解)，无论是可检测的或是不可检测的。“治疗”还可以意指与未接受治疗时期望的存活相比延长存活。

术语“预防”是本领域公认的，并且当相对于病状诸如局部复发(例如，疼痛)、疾病诸如癌症、征候诸如心力衰竭或任何其他医学病状使用时，是在本领域中所熟知的，并且包括施用组合物，相对于不接受所述组合物的受试者，所述组合物减少医学病状的症状的频率，或延缓其发病。因此，癌症的预防例如包括，例如以统计上和/或临床上显著的量，减少接受预防性治疗的患者群体相对于未治疗对照群体的可检测癌性生长的数量，和/或延缓治疗群体相对于未治疗对照群体的可检测癌性生长的出现。

向受试者“施用”物质、化合物或剂或者对物质、化合物或剂的“施用”可使用本领域的技术人员已知的各种方法中的一种来实施。例如，化合物或剂可通过以下方式施用：静脉内、动脉内、真皮内、肌内、腹膜内、皮下、经眼部、舌下、口服(通过摄取)、鼻内(通过吸入)、脊柱内、脑内以及透皮(通过吸收，例如，通过皮肤管)。化合物或剂还可适当地通过可再充电或可生物降解聚合物装置或其他提供对化合物或剂的延长的、缓慢的或受控的释放的装置(例如贴剂和泵剂)或制剂来引入。施用还可以例如进行一次、多次和/或在一个或多个延长时间段内进行。

向受试者施用物质、化合物或剂的适当方法还将取决于例如受试者的年龄和/或身体状况以及化合物或剂的化学和生物特性(例如，溶解性、可消化性、生物可用性、稳定性以及毒性)。在一些实施方案中，化合物或剂例如通过摄取向受试者口服施用。在一些实施方案中，口服施用化合物或剂在延长释放或缓慢释放的制剂中，或使用用于此缓慢或延长释放的装置来施用。

如本文所用，短语“联合施用”是指两种或更多种不同治疗剂的任何形式的施用，使得当先前施用的治疗剂在体内仍然有效时施用第二剂(例如，两种剂在患者中同时有效，其可以包括两种剂的协同作用)。例如，不同的治疗化合物可以在相同的制剂中或在单独的制剂中同时地或依序地施用。因此，接受这种治疗的个体可以受益于不同治疗剂的组合作用。

药物或剂的“治疗有效量”或“治疗有效剂量”是药物或剂当向受试者施用时将具有预期的治疗性作用的量。完全的治疗性作用并不一定通过施用一次剂量而出现，而可能仅在施用一系列剂量之后才出现。因此，可以一次或多次施用来施用治疗有效量。受试者所需的精确有效量将取决于例如受试者的身材、健康和年龄，以及受治疗的病状(诸如癌症或MDS)的性质和程度。技术人员可以易于通过常规实验确定给定情况的有效量。

关联：如果一个事件或实体的存在、级别、程度、类型和/或形式与另一个的存在、级别、程度、类型和/或形式有关，则两个事件或实体彼此“关联”，如所述术语在本文中所用。例如，如果特定实体(例如多肽、遗传特征、代谢物、微生物等)的存在、水平和/或形式与疾病、病症或病况的发生率和/或易感性有关(例如，在相关人群中)，则认为其与特定疾病、病症或病况关联。在一些实施方案中，如果两个或更多个实体直接或间接地相互作用以使得它们彼此物理接近和/或保持物理接近，则它们彼此物理“关联”。在一些实施方案中，彼此物理关联的两个或更多个实体彼此共价连接；在一些实施方案中，彼此物理关联的两个或更多个实体彼此不共价连接而是非共价关联，例如通过氢键、范德华相互作用、疏水相互作用、磁性和其组合。

相当：如本文所用，术语“相当”是指两个或多个剂、实体、情况、条件集可能彼此不同，但足够相似以允许在它们之间进行比较，以便本领域技术人员将理解，可以基于观察到的差异或相似性合理地得出结论。在一些实施方案中，相当的条件、环境、个体或群体集的特征在于多个基本相同的特征和一个或少量不同的特征。在上下文中，本领域普通技术人员将理解，在任何给定情况下，两个或更多个这样的剂、实体、情况、条件集需要什么程度的同一性才能被视为相当的。例如，本领域普通技术人员将理解，当以足够数量和类型的基本上相同的特征为特征时，环境、个体或群体集是彼此相当的，以保证根据或使用不同的环境、个体或群体集获得的结果或观察到的现象的差异是由那些不同特征的变化引起或指示所述变化的合理结论。

表达：如本文所用，术语核酸序列的“表达”是指从核酸序列产生任何基因产物。在一些实施方案中，基因产物可以是转录物。在一些实施方案中，基因产物可以是多肽。在一些实施方案中，核酸序列的表达涉及以下一者或多者：(1)从DNA序列产生RNA模板(例如通过转录)；(2)RNA转录物的加工(例如通过剪接、编辑、5’帽形成和/或3’端形成)；(3)将RNA翻译成多肽或蛋白质；和/或(4)多肽或蛋白质的翻译后修饰。

抑制剂：如本文所用，术语“抑制剂”(inhibitor/inhibitory agent)是指其存在、水平或程度与靶标的降低的水平或活性有关的实体、状况或事件)。在一些实施方案中，抑制剂可以直接起作用(在这种情况下，它直接对其靶标施加影响，例如通过与靶标结合)；在一些实施方案中，抑制剂可以间接起作用(在这种情况下，它通过与靶标的调节剂相互作用和/或以其他方式改变靶标的调节剂，从而降低靶标的水平和/或活性来施加其影响)。在一些实施方案中，抑制剂是其存在或水平与相对于特定参考水平或活性(例如，在适当参考条件，例如存在已知抑制剂、或不存在所讨论的抑制剂等条件下观察到的水平或活性)降低的目标水平或活性有关的抑制剂。

参考：如本文所用，描述了与其进行比较的标准或对照。例如，在一些实施方案中，将感兴趣的剂、动物、个体、群体、样品、序列或值与参考或对照剂、动物、个体、群体、样品、序列或值进行比较。在一些实施方案中，与感兴趣的测试或测定基本上同时进行参考或对照的测试和/或测定。在一些实施方案中，参考或对照是历史参考或对照，任选地体现在有形介质中。典型地，如本领域技术人员将理解的，参考或对照是在与评估的条件或环境相当的条件或环境下测定或表征的。本领域技术人员将理解何时存在足够的相似性以证明依赖于和/或相比于特定可能的参考或对照的合理性。

小分子：如本文所用，术语“小分子”意指低分子量有机和/或无机化合物。通常，“小分子”是大小为小于约5千道尔顿(kD)的分子。在一些实施方案中，小分子小于约4kD、3kD、约2kD或约1kD。在一些实施方案中，小分子小于约800道尔顿(D)、约600D、约500D、约400D、约300D、约200D或约100D。在一些实施方案中，小分子小于约2000g/mol、小于约1500g/mol、小于约1000g/mol、小于约800g/mol或小于约500g/mol。在一些实施方案中，小分子不是聚合物。在一些实施方案中，小分子不包括聚合部分。在一些实施方案中，小分子不是和/或不包含蛋白质或多肽(例如，不是寡肽或肽)。在一些实施方案中，小分子不是和/或不包含多核苷酸(例如，不是寡核苷酸)。在一些实施方案中，小分子不是和/或不包含多糖；例如，在一些实施方案中，小分子不是糖蛋白、蛋白聚糖、糖脂等)。在一些实施方案中，小分子不是脂质。在一些实施方案中，小分子是调节剂(例如，是抑制剂/抑制性剂或活化剂)。在一些实施方案中，小分子具有生物活性。在一些实施方案中，小分子是可检测的(例如，包含至少一个可检测部分)。在一些实施方案中，小分子是治疗剂。阅读本公开内容的本领域普通技术人员将理解，本文所述的某些小分子化合物可以多种形式中的任一种形式提供和/或使用，例如晶体形式、盐形式、受保护形式、前药形式、酯形式、异构形式(例如，光学和/或结构异构体)、同位素形式等。本领域技术人员将理解，某些小分子化合物具有可以一种或多种立体异构形式存在的结构。在一些实施方案中，这样的小分子可根据本公开以单独对映异构体、非对映异构体或几何异构体的形式使用，或可呈立体异构体的混合物的形式；在一些实施方案中，这样的小分子可根据本公开以外消旋混合物形式使用。本领域技术人员将理解，某些小分子化合物具有可以一种或多种互变异构形式存在的结构。在一些实施方案中，这样的小分子可根据本公开以单独互变异构体的形式或以在互变异构形式之间相互转化的形式使用。本领域技术人员将理解，某些小分子化合物具有允许同位素取代(例如，²H或³H取代H；¹¹C、¹³C或¹⁴C取代12C；¹³N或¹⁵N取代14N；¹⁷O或¹⁸O取代16O；³⁶Cl取代XXC；¹⁸F取代XXF；131I取代XXXI；等等)的结构。在一些实施方案中，这样的小分子可根据本公开以一种或多种同位素修饰形式或其混合物使用。在一些实施方案中，提及特定小分子化合物可能涉及所述化合物的特定形式。在一些实施方案中，特定小分子化合物可以盐形式提供和/或使用(例如，以酸加成盐或碱加成盐形式，取决于化合物)；在一些这样的实施方案中，盐形式可以是药学上可接受的盐形式。在一些实施方案中，其中小分子化合物是在自然界中存在或发现的化合物，所述化合物可根据本公开以不同于其在自然界中存在或发现的形式提供和/或使用。本领域普通技术人员将理解，在一些实施方案中，特定小分子化合物的制剂与存在于参考制剂或来源中的化合物不同，所述特定小分子化合物含有绝对量或相对量的化合物或其特定形式，所述量与存在于感兴趣的参考制剂中(例如，存在于来自感兴趣的来源，如生物或环境来源的初级样品中)的化合物或形式的绝对或相对(关于制剂的另一种组分，包括例如化合物的另一种形式)量不同。因此，在一些实施方案中，例如，小分子化合物的单一立体异构体的制备物可以被视为与化合物的外消旋混合物不同的化合物形式；小分子化合物的特定盐可以被视为与化合物的另一种盐形式不同的形式；仅含有包含双键的一种构象异构体((Z)或(E))的化合物形式的制备物可以被视为与含有双键的另一种构象异构体((E)或(Z))的化合物不同的化合物形式；一个或多个原子不同于参考制备物中存在的同位素的制备物可以被视为不同的形式；等等。

剪接组分：本领域技术人员在阅读本公开内容时将理解，“剪接组分”是参与剪接反应的剂或实体。在一些实施方案中，剪接组分是或包含剪接体的组分。在一些实施方案中，剪接组分是或包含剪接调节剂。在一些实施方案中，剪接组分是或包含RNA、多肽和/或它们或它们之间的复合物。在一些实施方案中，U1 snRNA、U2 snRNA、U4snRNA、U5 snRNA、U6snRNA、Sm多肽、Lsm多肽、Prp3多肽、Prp31多肽、Prp4多肽、CypH多肽、15.5K多肽、Prp8多肽、Brr2多肽、Snu114多肽、Prp6多肽、Prp28多肽、40K多肽、Dib1多肽、Snu66多肽、Sad1多肽或27K多肽中的一个或多个可以是剪接组分，或者可以是剪接组分的一部分。

具有剪接能力的系统：阅读本公开内容的本领域技术人员将理解，“具有剪接能力的系统”是包括完成(例如，一个或多个特定RNA的)一个或多个剪接事件所必需的所有组分的系统。在一些实施方案中，具有剪接能力的系统可以是体外或离体系统。在一些实施方案中，具有剪接能力的系统可以是或包含一种或多种细胞(例如，在培养物中、在组织中或在生物体中)。

术语“酰基”是本领域公认的，并且是指由通式烃基C(O)-，优选烷基C(O)-表示的基团。

术语“酰氨基”是本领域公认的，并且是指被酰基取代的氨基，并且可以例如由式烃基C(O)NH-表示。

术语“酰氧基”是本领域公认的，并且是指由通式烃基C(O)O-，优选烷基C(O)O-表示的基团。

术语“烷氧基”是指连接有氧的烷基。代表性烷氧基包括甲氧基、乙氧基、丙氧基、叔丁氧基等。

术语“烷氧基烷基”是指被烷氧基取代的烷基，并且可以由通式烷基-O-烷基表示。

术语“烷基”是指饱和脂族基团，包括直链烷基、支链烷基、环烷基(脂环族)基团、烷基取代的环烷基和环烷基取代的烷基。在优选的实施方案中，直链或支链烷基在其主链中具有30个或更少的碳原子(例如，对于直链为C_1-30，对于支链为C_3-30)，并且更优选为20个或更少。

此外，在整个说明书、实施例和权利要求书中使用的术语“烷基”旨在包括未取代的和取代的烷基，后者是指在烃主链的一个或多个碳原子上具有替换氢的取代基的烷基部分，包括卤代烷基，例如三氟甲基和2,2,2-三氟乙基等。

如本文用于式(I)化合物的术语“脂族”是指完全饱和或含有一个或多个不饱和单元的直链(即，未分支)或支链、取代或未取代的烃链，或完全饱和或包含一个或多个不饱和单元但不是芳族的单环烃或双环烃(在本文中也称为“碳环”或“脂环族”)

除非另有说明，否则脂族基含有1-6个脂族碳原子。在一些实施方案中，脂族基含有1-5个脂族碳原子。在其他实施方案中，脂族基含有1-4个脂族碳原子。在其他实施方案中，脂族基含有1-3个脂肪族碳原子，并且在其他实施方案中，脂族基含有1-2个脂族碳原子。在一些实施方案中，“脂环族”(或“碳环”)是指完全饱和或含有一个或多个不饱和单元但不是芳族的单环C3-C8烃或双环C₇-C₁₀烃。合适的脂族基包括但不限于直链或支链、取代或未取代的烷基、烯基、炔基、亚烷基、亚烯基、亚炔基以及其杂化物。

如本文所述，式(I)化合物可含有“任选取代的”部分。一般而言，术语“取代的”，无论前面是否有术语“任选地”，都意指指定部分的一个或多个氢被合适的取代基取代。“取代的”适用于结构中明确或隐含的一个或多个氢(例如，

是指至少

且

是指至少

)。除非另有说明，否则“任选取代的”基团可以在所述基团的每个可取代位置具有合适的取代基，并且当任何给定结构中的多于一个位置可以被多于一个选自指定组的取代基取代时，所述取代基可以在每个位置处相同或不同。本发明所设想的取代基的组合优选是使得形成稳定的或化学上可行的化合物的那些。如本文所用，术语“稳定的”是指当经受允许其生产、检测以及在某些实施方案中它们的回收、纯化和用于本文公开的一种或多种目的的条件时基本上没有改变的化合物。

“任选取代的”基团的可取代碳原子上的合适单价取代基独立地为卤素；–(CH₂)_0– ₄R^o；–(CH₂)_0–4OR^o；-O(CH₂)_0-4R^o、-O–(CH₂)_0–4C(O)OR^o；–(CH₂)_0–4CH(OR^o)₂；–(CH₂)_0–4SR^o；可以用R^o取代的–(CH₂)_0–4Ph；可以用R^o取代的–(CH₂)_0–4O(CH₂)_0–1Ph；可以用R^o取代的–CH＝CHPh；可以用R^o取代的–(CH₂)_0–4O(CH₂)_0–1-吡啶基；–NO₂；–CN；–N₃；-(CH₂)_0–4N(R^o)₂；–(CH₂)_0–4N(R^o)C(O)R^o；–N(R^o)C(S)R^o；–(CH₂)_0–4N(R^o)C(O)NR^o ₂；-N(R^o)C(S)NR^o ₂；–(CH₂)_0–4N(R^o)C(O)OR^o；–N(R^o)N(R^o)C(O)R^o；-N(R^o)N(R^o)C(O)NR^o ₂；-N(R^o)N(R^o)C(O)OR^o；–(CH₂)_0–4C(O)R^o；–C(S)R^o；–(CH₂)_0–4C(O)OR^o；–(CH₂)_0–4C(O)SR^o；-(CH₂)_0–4C(O)OSiR^o ₃；–(CH₂)_0–4OC(O)R^o；–OC(O)(CH₂)_0– ₄SR^o；–(CH₂)_0–4SC(O)R^o；–(CH₂)_0–4C(O)NR^o ₂；–C(S)NR^o ₂；–C(S)SR^o；–SC(S)SR^o、-(CH₂)_0–4OC(O)NR^o ₂；-C(O)N(OR^o)R^o；–C(O)C(O)R^o；–C(O)CH₂C(O)R^o；–C(NOR^o)R^o；-(CH₂)_0–4SSR^o；–(CH₂)_0–4S(O)₂R^o；–(CH₂)_0–4S(O)(NH)R^o；–(CH₂)_0–4S(O)₂OR^o；–(CH₂)_0–4OS(O)₂R^o；–S(O)₂NR^o ₂；-(CH₂)_0–4S(O)R^o；-N(R^o)S(O)₂NR^o ₂；–N(R^o)S(O)₂R^o；–N(OR^o)R^o；–C(NH)NR^o ₂；–P(O)₂R^o；-P(O)R^o ₂；-OP(O)R^o ₂；–OP(O)(OR^o)₂；SiR^o ₃；–(C_1–4直链或支链亚烷基)O–N(R^o)₂；或–(C_1–4直链或支链亚烷基)C(O)O–N(R^o)₂，其中每个R^o可以如下定义地被取代并且独立地为氢、C_1–6脂族基、–CH₂Ph、–O(CH₂)_0–1Ph、-CH₂-(5至6元杂芳基环)、具有0-4个独立地选自氮、氧或硫的杂原子的5至6元饱和、部分不饱和或芳基环，或具有0-4个独立地选自氮、氧或硫的杂原子的8至10元双环芳基环，或尽管有上述定义，但两个独立出现的R^o与它们的中间原子一起形成具有0-4个独立地选自氮、氧或硫的杂原子的3至12元饱和、部分不饱和或芳基单环或双环，所述杂原子可如下定义地被取代。

R^o(或由两个独立出现的R^o连同其中间原子形成的环)上的合适的单价取代基独立地为卤素、–(CH₂)_0–2R^·、–(卤基R^·)、–(CH₂)_0–2OH、–(CH₂)_0–2OR^·、–(CH₂)_0–2CH(OR^·)₂；-O(卤基R^·)、–CN、–N₃、–(CH₂)_0–2C(O)R^·、–(CH₂)_0–2C(O)OH、–(CH₂)_0–2C(O)OR^·、–(CH₂)_0–2SR^·、–(CH₂)_0– ₂SH、–(CH₂)_0–2NH₂、–(CH₂)_0–2NHR^·、–(CH₂)_0–2NR^· ₂、–NO₂、–SiR^· ₃、–OSiR^· ₃、-C(O)SR^·、–(C_1–4直链或支链亚烷基)C(O)OR^·或–SSR^·，其中每个R^·未被取代或当前面有“卤素”时仅被一个或多个卤素取代，并且独立地选自C_1–4脂族基、–CH₂Ph、–O(CH₂)_0–1Ph，或具有0-4个独立地选自氮、氧或硫的杂原子的3至6元饱和、部分不饱和或芳基环。R^o的饱和碳原子上的合适二价取代基包括＝O和＝S。

“任选取代的”基团的饱和碳原子上的合适的二价取代基包括以下：＝O(“氧代基”)、＝S、＝NNR^* ₂、＝NNHC(O)R^*、＝NNHC(O)OR^*、＝NNHS(O)₂R^*、＝NR^*、＝NOR^*、–O(C(R^* ₂))_2– ₃O–或–S(C(R^* ₂))_2–3S–，其中每个独立出现的R^*选自氢、可如下定义地被取代的C_1-6脂族基，或具有0–4个独立地选自氮、氧或硫的杂原子的未取代的5至6元饱和、部分不饱和或芳基环。与“任选取代的”基团的邻位可取代碳键合的合适的二价取代基包括：–O(CR^* ₂)_2–3O–，其中每个独立出现的R^*选自氢、可如下定义地被取代的C_1–6脂族基，或具有0-4个独立地选自氮、氧或硫的杂原子的未取代的5–6元饱和、部分不饱和或芳基环。

R^*的脂族基上的合适的取代基包括卤素、–R^·、-(卤基R^·)、-OH、–OR^·、–O(卤基R^·)、–CN、–C(O)OH、–C(O)OR^·、–NH₂、–NHR^·、–NR^· ₂或–NO₂，其中每个R^·未被取代或当前面有“卤基”时仅被一个或多个卤素取代，并且独立地为C_1–4脂族基、–CH₂Ph、–O(CH₂)_0–1Ph，或具有0-4个独立地选自氮、氧或硫的杂原子的5至6元饱和、部分不饱和或芳基环。

“任选取代的”基团的可取代氮上的合适的取代基包括

其中每个

独立地为氢、可如下定义地被取代的C_1–6脂族基、未取代的–OPh、或具有0-4个独立地选自氮、氧或硫的杂原子的未取代的5至6元饱和、部分不饱和或芳基环，或者，尽管有上述定义，但两个独立出现的

连同其中间原子一起形成未取代的3至12元饱和、部分不饱和或芳基单环或双环，所述环具有0-4个独立地选自氮、氧或硫的杂原子。

的脂族基上的合适的取代基独立的为卤素、–R^·、-(卤基R^·)、–OH、–OR^·、–O(卤基R^·)、–CN、–C(O)OH、–C(O)OR^·、–NH₂、–NHR^·、–NR^· ₂或-NO₂，其中每个R^·未被取代或当前面有“卤基”时仅被一个或多个卤素取代，并且独立地为C_1–4脂族基、–CH₂Ph、–O(CH₂)_0–1Ph，或具有0-4个独立地选自氮、氧或硫的杂原子的5至6元饱和、部分不饱和或芳基环。

当与例如酰基、酰氧基、烷基、烯基、炔基或烷氧基的化学部分结合使用时，术语“C_x-y”或“C_x-C_y”意指包括在链中含有x至y个碳的基团。C₀烷基表示氢，其中基团在末端位置，如果在内部则为键。例如，C_1-6烷基在链中含有1至6个碳原子。

如本文所用，术语“烷基氨基”是指被至少一个烷基取代的氨基。

如本文所用，术语“烷硫基”是指被烷基取代的硫醇基，并且可以由通式烷基S-表示。

如本文所用，术语“酰胺”是指基团

其中R⁹和R¹⁰各自独立地表示氢或烃基，或者R⁹和R¹⁰与它们所连接的N原子一起形成在环结构中具有4至8个原子的杂环。

术语“胺”和“氨基”是本领域公认的，并且是指未取代的和取代的胺及其盐，例如可以由下式表示的部分

其中R⁹、R¹⁰和R¹⁰’各自独立地表示氢或烃基，或者R⁹和R¹⁰与它们所连接的N原子一起形成在环结构中具有4至8个原子的杂环。

如本文所用，术语“氨基烷基”是指被氨基取代的烷基。

如本文所用，术语“芳烷基”是指被芳基取代的烷基。

如本文所用，术语“芳基”包括取代或未取代的单环芳族基团，其中环的每个原子为碳。优选环是5至7元环，更优选6元环。术语“芳基”还包括具有两个或更多个环的多环系统，其中两个或更多个碳是两个相邻环共有的，其中至少一个环是芳族的，例如，其他环可以是环烷基、环烯基、环炔基、芳基、杂芳基和/或杂环基。芳基包括苯、萘、菲、苯酚、苯胺等。

术语“氨基甲酸酯”是本领域公认的，并且是指以下基团

其中R⁹和R¹⁰独立地表示氢或烃基。

如本文所用，术语“碳环基烷基”是指被碳环基团取代的烷基。

如本文所用，术语“碳环”、“碳环基”和“碳环的”是指其中环的每个原子为碳的非芳族饱和或不饱和环。优选地，碳环含有3至10个原子，更优选5至7个原子。

术语“碳酸酯”是本领域公认的，并且是指基团-OCO₂-。

如本文所用，术语“羧基”是指由式-CO₂H表示的基团。

如本文所用，术语“酯”是指基团-C(O)OR⁹，其中R⁹表示烃基。

如本文所用，术语“醚”是指通过氧连接至另一个烃基的烃基。因此，烃基基团的醚取代基可以是烃基-O-。醚可以是对称的或不对称的。醚的实例包括但不限于杂环-O-杂环和芳基-O-杂环。醚包括“烷氧基烷基”基团，其可以由通式烷基-O-烷基表示。

如本文所用，术语“卤基”和“卤素”意指卤素并且包括氯、氟、溴和碘。

如本文所用，术语“杂芳烷基(hetaralkyl)”和“杂芳烷基(heteroaralkyl)”是指被杂芳基取代的烷基。

术语“杂芳基(heteroaryl)”和“杂芳基(hetaryl)”包括取代或未取代的芳族单环结构，优选5至7元环，更优选5至6元环，其环结构包含至少一个杂原子，优选一至四个杂原子，更优选一个或两个杂原子。术语“杂芳基(heteroaryl)”和“杂芳基(hetaryl)”还包括具有两个或更多个环的多环系统，其中两个或更多个碳是两个相邻环共有的，其中至少一个环是杂芳族的，例如，其他环可以是环烷基、环烯基、环炔基、芳基、杂芳基和/或杂环基。杂芳基包括例如吡咯、呋喃、噻吩、咪唑、噁唑、噻唑、吡唑、吡啶、吡嗪、哒嗪和嘧啶等。

如本文所用，术语“杂原子”意指除碳或氢以外的任何元素的原子。优选的杂原子是氮、氧和硫。

如本文所述的术语“杂环基烷基”是指被杂环基团取代的烷基。

术语“杂环基”、“杂环”和“杂环的”是指取代或未取代的非芳族环结构，优选3至10元环，更优选3至7元环，其环结构包含至少一个杂原子，优选一至四个杂原子，更优选一个或两个杂原子。术语“杂环基”和“杂环的”还包括具有两个或更多个环的多环系统，其中两个或更多个碳是两个相邻环共有的，其中至少一个环是杂环的，例如，其他环可以是环烷基、环烯基、环炔基、芳基、杂芳基和/或杂环基。杂环基包括例如哌啶、哌嗪、吡咯烷、吗啉、内酯、内酰胺等。

如本文所用，术语“烃基”是指通过不具有＝O或＝S取代基的碳原子键合的基团，并且通常具有至少一个碳-氢键和主要为碳的主链，但是可以任选地包含杂原子。因此，出于本申请的目的，诸如甲基、乙氧基乙基、2-吡啶基和甚至三氟甲基的基团被认为是烃基，但是诸如乙酰基(其在连接碳上具有＝O取代基)和乙氧基(其通过氧而不是碳连接)的取代基不是。烃基包括但不限于芳基、杂芳基、碳环、杂环、烷基、烯基、炔基及其组合。

如本文所用，术语“羟烷基”是指被羟基取代的烷基。

当与化学部分诸如酰基、酰氧基、烷基、烯基、炔基或烷氧基结合使用时，术语“低级”意指包括其中取代基中有十个或更少原子，优选六个或更少原子的基团。例如，“低级烷基”是指含有十个或更少，优选六个或更少的碳原子的烷基。在某些实施方案中，本文所定义的酰基、酰氧基、烷基、烯基、炔基或烷氧基取代基分别是低级酰基、低级酰氧基、低级烷基、低级烯基、低级炔基或低级烷氧基，无论它们是单独出现还是与其他取代基组合出现，诸如在叙述羟烷基和芳烷基中(在这种情况下，例如，当计算烷基取代基中的碳原子时，不计算芳基内的原子)。

术语“多环基”、“多环”和“多环的”是指两个或更多个环(例如，环烷基、环烯基、环炔基、芳基、杂芳基和/或杂环基)，其中两个或更多个原子是两个相邻环共用的，例如，环是“稠合环”。多环的每个环可以是取代或未取代的。在某些实施方案中，多环的每个环在环中含有3至10个原子，优选5至7个原子。

术语“硫酸酯”是本领域公认的，并且是指基团–OSO₃H或其药学上可接受的盐。

术语“磺酰胺”是本领域公认的，并且是指由以下通式表示的基团

其中R⁹和R¹⁰独立地表示氢或烃基。

术语“亚砜”是本领域公认的，并且是指基团-S(O)-。

术语“磺酸酯”是本领域公认的，并指基团SO₃H或其药学上可接受的盐。

术语“砜”是本领域公认的，并且是指基团–S(O)₂-。

术语“取代的”是指在主链的一个或多个碳上具有替换氢的取代基的部分。应理解，“取代”或“被……取代”包括隐含的条件，即这种取代是根据取代原子和取代基的允许化合价，并且所述取代产生稳定的化合物，例如，其不会自发地进行诸如通过重排、环化、消除等的转化。如本文所用，术语“取代的”考虑包括有机化合物的所有允许的取代基。在广义方面，可允许的取代基包括有机化合物的非环状的和环状的、支链的和非支链的、碳环的和杂环的、芳族的和非芳族的取代基。可允许的取代基可以是一个或多个取代基并且对于适当的有机化合物而言是相同或不同的。出于本发明的目的，杂原子诸如氮可以具有氢取代基和/或本文所述的有机化合物的满足杂原子的化合价的任何可允许的取代基。取代基可以包括本文所述的任何取代基，例如卤素、羟基、羰基(诸如羧基、烷氧基羰基、甲酰基或酰基)、硫代羰基(诸如硫代酸酯、硫代乙酸酯或硫代甲酸酯)、烷氧基、磷酰基、磷酸根、膦酸根、次膦酸根、氨基、酰胺基、脒、亚胺、氰基、硝基、叠氮基、巯基、烷硫基、硫酸根、磺酸根、磺酰胺基、亚磺酰胺基、磺酰基、杂环基、芳烷基或芳族或杂芳族部分。本领域技术人员将理解，如果合适，在烃链上取代的部分本身可以被取代。

如本文所用，术语“硫代烷基”是指被硫醇基团取代的烷基。

如本文所用，术语“硫酯”是指基团-C(O)SR⁹或–SC(O)R⁹

其中R⁹表示烃基。

如本文所用，术语“硫醚”等同于醚，其中氧被硫替换。

术语“脲”是本领域公认的并且可以由以下通式表示

其中R⁹和R¹⁰独立地表示氢或烃基。

如本文所用，术语“调节”包括抑制或压制功能或活性(诸如细胞增殖)以及增强功能或活性。

短语“药学上可接受的”是本领域公认的。在某些实施方案中，所述术语包括在合理医学判断范围内，适用于与人类和动物的组织相接触而没有过量毒性、刺激、过敏反应或其他问题或并发症、与合理的利益/风险比相称的组合物、赋形剂、助剂、聚合物以及其他材料和/或剂型。

“药学上可接受的盐”或“盐”在本文中用于指适用于治疗患者或与患者的治疗相容的酸加成盐或碱加成盐。

如本文所用，术语“药学上可接受的酸加成盐”意指由式I表示的任何基础化合物的任何无毒的有机或无机盐。形成合适的盐的例示性无机酸包括盐酸、氢溴酸、硫酸和磷酸以及金属盐诸如正磷酸一氢钠和硫酸氢钾。形成合适的盐的例示性有机酸包括一元羧酸、二元羧酸和三元羧酸，诸如乙醇酸、乳酸、丙酮酸、丙二酸、琥珀酸、戊二酸、富马酸、苹果酸、酒石酸、柠檬酸、抗坏血酸、马来酸、苯甲酸、苯乙酸、肉桂酸和水杨酸以及磺酸，例如对甲苯磺酸和甲磺酸。可以形成一元酸盐或二元酸盐，并且此类盐可以水合形式、溶剂化形式或基本上无水形式存在。通常，式I的化合物的酸加成盐更易溶于水和各种亲水性有机溶剂，并且与它们的游离碱形式相比，通常表现出更高的熔点。合适的盐的选择是本领域技术人员已知的。可以使用其他非药学上可接受的盐，例如草酸盐，例如，用于分离供实验室使用的式I化合物，或用于随后转化为药学上可接受的酸加成盐。

如本文所用的术语“药学上可接受的碱加成盐”意指由式I表示的任何酸化合物或其任何中间体的任何无毒的有机或无机碱加成盐。形成合适的盐的例示性无机碱包括氢氧化锂、氢氧化钠、氢氧化钾、氢氧化钙、氢氧化镁或氢氧化钡。形成合适的盐的例示性有机碱包括脂族、脂环族或芳族有机胺，诸如甲胺、三甲胺和甲基吡啶或氨。适当盐的选择将对本领域的技术人员是已知的。

可用于本公开的方法和组合物的许多化合物在其结构中具有至少一个立构中心。这个立构中心可以R或S构型存在，所述R和S符号根据Pure Appl.Chem.(1976),45,11-30中所描述的规则来使用。本公开考虑所有立体异构形式，例如化合物、盐、前药或其混合物的对映异构体和非对映异构体形式(包括立体异构体的所有可能的混合物)。

此外，某些含有烯基的化合物可以作为Z(同侧)或E(异侧)异构体存在。在每种情况下，本公开包括混合物和单独的个别异构体两者。

一些化合物也可以作为互变异构形式存在。尽管未在本文所述的式中明确指出，但此类形式意图包含在本公开的范围内。

“前药”或“药学上可接受的前药”是指在施用之后在宿主中被代谢例如水解或氧化以形成本公开的化合物(例如，式的I化合物)的化合物。前药的典型实例包括在活性化合物的官能部分上具有生物不稳定或可裂解(保护)基团的化合物。前药包括可以被氧化、还原、胺化、脱胺化、羟基化、脱羟基化、水解、脱水解、烷基化、脱烷基化、酰化、脱酰化、磷酸化或脱磷酸化以产生活性化合物的化合物。在美国专利6,875,751、7,585,851和7,964,580中公开了使用酯或氨基磷酸酯(phosphoramidate)作为生物不稳定或可裂解(保护)基团的前药的实例，其公开内容以引用的方式并入本文。本公开的前药被代谢以产生式I的化合物。本公开在其范围内包括本文所述化合物的前药。例如，在“Design of Prodrugs”编者H.Bundgaard,Elsevier,1985中描述了合适前药的选择和制备的常规程序。

如本文所用的术语“药学上可接受的载体”意指可用于配制用于医学或治疗性用途的药物的药学上可接受的材料、组合物或媒介物，诸如液体或固体助滤剂、稀释剂、赋形剂、溶剂或包封材料。

如本文所用，术语“溶解度的对数”、“LogS”或“logS”在本领域中用于定量化合物的水溶性。化合物的水溶性显著地影响其吸收和分布特性。低溶解度通常伴随着不良吸收。LogS值是以摩尔/升为单位测量的溶解度的单位剥离对数(以10为底数)。

实施例

现已大体上描述本发明，参考以下实施例将更容易理解本发明，这些实施例被包括仅出于说明本发明的某些方面和实施方案的目的并且不意图限制本发明。

实施例1：合成

一般实验方法。除非另有说明，否则所有反应均在氩气气氛下进行。在氩气气氛下从苯醌羰自由基中蒸馏出四氢呋喃(THF)。在氩气气氛下从氢化钙中蒸馏出二氯甲烷和三乙胺。所有其他溶剂和试剂均根据文献程序纯化或购自Sigma-Aldrich、Acros、Oakwood和Fisher Scientific Co.。¹H NMR光谱在400或500MHz下记录，并相对于氘化溶剂信号进行报告。¹H NMR光谱的数据报告如下：化学位移(δppm)、多重性、耦合常数(Hz)和积分。拆分模式指定如下：s，单峰；d，二重峰；t，三重峰；q，四重峰；m，多重峰；和br，宽峰。在100或125MHz处记录¹³C NMR光谱。¹³C NMR光谱的数据以化学位移报告。化学位移以百万分率(ppm，δ)报告。使用预涂硅胶片进行薄层色谱(TLC)。使用高锰酸钾或硝酸铈铵染色进行视觉检测。使用SilicaFlash P60(60A，40-63μm)硅胶与压缩空气进行快速色谱。

3-氯-6-肼基哒嗪。

向3,6-二氯哒嗪(400mg，2.686mmol)于EtOH(8mL)中的溶液中添加一水合肼(148mg，2.954mmol)并将混合物在100℃下搅拌3小时。将混合物冷却至23℃后，收集所得固体并用Et₂O洗涤。浓缩母液，并用Et₂O洗涤沉淀。合并的固体用二氯甲烷洗涤，得到所需产物(浅黄色，320.2mg，2.216mmol，82％)，且无需进一步纯化即用于下一步。¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆)δ8.24(br s,1H),7.41(d,J＝9.6Hz,1H),7.09(d,J＝9.2Hz,1H),4.37(br s,2H)；¹³C NMR(100MHz,DMSO-d₆)δ161.8,145.4,128.7,116.1。光谱数据与文献数据相符。[参考文献：Heterocycles,2009,78(4)961-975]

6-氯-3-甲基-[1,2,4]三唑并[4,3-b]哒嗪。

将3-氯-6-肼基哒嗪(300mg，2.075mmol)于AcOH(1.5mL)中的混合物在100℃下加热2小时。将反应混合物冷却至23℃后，用水稀释并用EtOAc萃取。合并的有机层用饱和NaHCO₃溶液和盐水洗涤，用无水MgSO₄干燥，过滤并减压浓缩。所得灰白色粗固体(238.5mg，68％)无需进一步纯化即用于下一步。¹H NMR(400MHz,CDCl₃)δ8.04(d,J＝9.6Hz,1H),7.09(d,J＝9.6Hz,1H),2.81(s,3H)。

3-甲基-6-苯基-[1,2,4]三唑并[4,3-b]哒嗪，JGJ002。将6-氯-3-甲基-[1,2,4]三唑并[4,3-b]哒嗪(20mg，0.119mmol)、苯基硼酸(14.5mg，0.119mmol)、K₂CO₃(24.6mg，0.178mmol)和Pd(PPh₃)₄(13.6mg，0.012mmol)于1,4-二噁烷(0.3mL)和水(30uL)中的混合物在120℃下加热18小时。将反应混合物冷却至23℃后，用水和EtOAc稀释。分离有机层并用EtOAc萃取水层。合并的有机层用盐水洗涤，经无水MgSO₄干燥，过滤并减压浓缩。将所得粗残余物通过快速柱色谱(二氯甲烷:MeOH＝10:1)纯化以获得呈象牙色固体状的所需产物JGJ002(20.4mg，0.098mmol，82％)。¹H NMR(400MHz,CDCl₃)δ.8.13(d,J＝9.2Hz,1H),7.98-8.01(m,2H),7.54-7.56(4H,m),2.88(s,3H)¹³C NMR(100MHz,CDCl₃)δ153.4,147.5,143.4,134.4,130.9,129.2,127.2,124.9,118.8,9.8。

3-(3-甲基-[1,2,4]三唑并[4,3-b]哒嗪-6-基)苯胺，JGJ003。使用与上述相同的程序，6-氯-3-甲基-[1,2,4]三唑并[4,3-b]哒嗪(30mg，0.178mmol)、3-硝基苯基硼酸(35.6mg，0.214mmol)、K₂CO₃(36.9mg，0.267mmol)和Pd(PPh₃)₄(20.6mg,0.018mmol)于1,4-二噁烷(0.3mL)和水(30uL)中的反应得到3-甲基-6-(3-硝基苯基)-[1,2,4]三唑并[4,3-b]哒嗪(19.7mg，0.077mmol，43％)。¹H NMR(400MHz,CDCl₃)δ.8.86(t,J＝2.0Hz,1H),8.39(m,2H),8.24(d,J＝9.6Hz,1H),7.71(t,J＝8.0Hz,1H),7.62(d,J＝9.6Hz,1H),2.91(s,3H)¹³CNMR(100MHz,CDCl₃)δ151.1,148.8,147.7,143.2,136.1,132.8,130.4,125.8,125.4,122.2,118.0,9.9。然后将硝基化合物(19.4mg，0.076mmol)和SnCl₂(72.1mg，0.380mmol)于EtOH(0.2mL)中的混合物在回流下加热1小时。将混合物冷却至23℃后，通过硅藻土垫过滤并用EtOAc洗涤。向混合物中添加饱和NaHCO₃溶液并用EtOAc萃取。合并的有机层用盐水洗涤，经无水MgSO₄干燥，过滤并减压浓缩。将所得粗残余物通过快速柱色谱(二氯甲烷:MeOH＝10:1)纯化以获得呈浅黄色固体状的所需产物JGJ003(10mg，0.044mmol，63％)。¹H NMR(400MHz,CDCl₃)δ8.10(d,J＝10.0Hz,1H),7.51(d,J＝10.0Hz,1H),7.26-7.32(m,3H),6.83-6.86(m,1H),2.86(s,3H)；¹³C NMR(100MHz,CDCl₃)δ153.5,147.3(两个峰重叠),143.4,135.2,130.0,124.4,119.1,117.4,117.2,113.1,9.7。

N-(3-(3-甲基-[1,2,4]三唑并[4,3-b]哒嗪-6-基)苯基)乙酰胺，JGJ004。向3-(3-甲基-[1,2,4]三唑并[4,3-b]哒嗪-6-基)苯胺(JGJ003，20mg，0.088mmol)于二氯甲烷(0.5mL)中的溶液中添加三甲胺(10.8mg，0.106mmol)和乙酰氯(7.6mg，0.099mmol)。将混合物在23℃下搅拌6小时。向此混合物中添加水并用二氯甲烷萃取。合并的有机层用盐水洗涤，经无水MgSO₄干燥，过滤并减压浓缩。粗残余物通过快速柱色谱(二氯甲烷:MeOH＝6:1)纯化，得到呈象牙色固体状的所需产物JGJ004(21.1mg，0.079mmol，89％)。¹HNMR(400MHz,CDCl₃)δ8.32(s,1H),8.09(d,J＝9.6Hz,1H),7.88(br s,1H),7.70(d,J＝7.6Hz,1H),7.65(d,J＝8.0Hz,1H),7.54(d,J＝10.0Hz,1H),7.48(t,J＝8.0Hz,1H),2.86(s,3H),2.25(s,3H).¹³C NMR(125MHz,CD₃OD)δ172.8,156.1,149.9,145.8,141.8,137.0,131.5,126.3,124.8,124.2,122.6,120.5,24.8,10.4。

N-甲基-N-(3-(3-甲基-[1,2,4]三唑并[4,3-b]哒嗪-6-基)苯基)乙酰胺，JGJ001。在0℃下向N-(3-(3-甲基-[1,2,4]三唑并[4,3-b]哒嗪-6-基)苯基)乙酰胺(JGJ004，16.5mg，0.062mmol)的溶液中添加NaH于矿物油(5mg，0.124mmol)中的60％分散液，并搅拌30分钟。然后添加碘甲烷(17.5mg，0.124mmol)并将反应混合物在23℃下搅拌2小时。反应完成后，添加水并用EtOAc萃取。合并的有机层用盐水洗涤，经无水MgSO₄干燥，过滤并减压浓缩。粗残余物通过快速柱色谱(二氯甲烷:MeOH＝10:1)纯化，得到呈象牙色固体状的所需产物JGJ001(9.8mg，0.035mmol，56％)。¹H NMR(500MHz,CDCl₃)δ8.17(d,J＝9.5Hz,1H),7.95(d,J＝7.5Hz,1H),7.88(s,1H),7.62(dd,J＝8.0,7.5Hz,1H),7.54(d,J＝10.0Hz,1H),J＝8.0Hz,1H),3.35(s,3H),2.89(s,3H),1.94(s,3H)；¹³C NMR(125MHz,CDCl₃)δ170.3,152.1,147.6,145.6,143.3,136.2,130.7,129.5,126.4,125.9,125.4,118.4,37.3,22.6,9.9。

6-氯哒嗪-3-胺。将密封管中的3,6-二氯哒嗪(200mg，2.342mmol)和氢氧化铵(1.5mL)的混合物在100℃下加热16小时。将混合物冷却至23℃后，添加二氯甲烷且将沉淀分离，用二氯甲烷洗涤，得到呈淡黄色固体状的所需产物(定量)。¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆)δ7.32(d,J＝8.0Hz,1H),6.81(d,J＝8.0Hz,1H),6.59(s,2H)。

2-溴丙醛。在0℃下在1.5小时内向丙醛(2.91mL，40mol)于二氯甲烷(40mL)中的溶液中滴加溴(2.05mL，40mol)于二氯甲烷(10mL)中的溶液。将混合物升温至23℃并搅拌30分钟。在向反应物中添加水后，将所得有机层分离并用饱和碳酸氢钠溶液洗涤。水层用二氯甲烷(30mL)萃取且接着将合并的有机层用盐水洗涤，经无水MgSO₄干燥，过滤并减压浓缩。粗产物(深黄色油，定量)不经任何纯化即用于下一步。¹H NMR(400MHz,CDCl₃)δ9.35(br s,1H),4.34(qd,J＝6.8,2.0Hz,1H),1.75(d,J＝6.8Hz,3H)。光谱数据与文献数据相符。[参考文献：Bull.Korean Chem.Soc.2013,34(1),271-274。

6-氯-3-甲基咪唑并[1,2-b]哒嗪。将6-氯哒嗪-3-胺(238.3mg，1.839mmol)和2-溴丙醛(粗物质，503.9mg，3.679mmol)于EtOH中的混合物在回流下加热4小时。将混合物冷却至23℃后，将其浓缩并用EtOAc萃取。合并的有机层用盐水洗涤，经无水MgSO₄干燥，过滤并减压浓缩。粗残余物通过快速柱色谱(n-Hex:EtOAc:MeOH＝1:1:0.1)纯化，得到呈浅棕色固体状的所需产物(55.2mg，0.329mmol，18％)。¹H NMR(400MHz,CDCl₃)δ7.87(d,J＝9.6Hz,1H),7.56(s,1H),6.99(1H,J＝9.6Hz,1H),2.55(s,3H)。

3-甲基-6-(3-硝基苯基)咪唑并[1,2-b]哒嗪，JGJ005。使用与针对JGJ002所述相同的程序，6-氯-3-甲基咪唑并[1,2-b]哒嗪(55.2mg，0.329mmol)、3-硝基苯基硼酸(60.5mg，0.362mmol)、K₂CO₃(68.3mg，0.494mmol)和Pd(PPh₃)₄(38.1mg，0.033mmol)于1,4-二噁烷(0.5mL)和水(150μL)中的反应得到呈黄色固体状的所需产物JGJ005(61.9mg，0.244mmol，74％)。¹H NMR(500MHz,CDCl₃)δ8.88(dd,J＝2.0,1.5Hz,1H),8.38(ddd,J＝7.5,1.5,1.0Hz,1H),8.35(ddd,J＝8.0,2.0,1.0Hz,1H),8.07(d,J＝9.5Hz,1H),7.73(t,J＝8.0Hz,1H),7.67(s,1H),7.50(d,J＝9.5Hz,1H),2.67(s,3H)；¹³C NMR(125MHz,CDCl₃)δ148.8(两个峰重叠),138.1,137.7,133.3,132.7,130.0,126.0,125.8,124.4,122.0,113.7,8.8。

3-(3-甲基咪唑并[1,2-b]哒嗪-6-基)苯胺，JGJ006。使用与针对JGJ003所述相同的程序，3-甲基-6-(3-硝基-苯基)咪唑并[1,2-b]哒嗪(54.4mg，0.214mmol)和SnCl₂(202.8mg，1.070mmol)于EtOH(0.5mL)中的反应得到呈淡黄色固体状的所需产物JGJ006(27.2mg，0.107mmol，50％)。¹H NMR(400MHz,CDCl₃)δ7.92(d,J＝9.2Hz,1H),7.56(d,J＝0.8Hz,1H),7.38(d,J＝9.6Hz,1H),7.28-7.34(m,3H),6.79(ddd,J＝7.7,2.0,1.2Hz,1H),3.87(br s,2H),2.61(d,J＝0.8Hz,3H)；¹³C NMR(100MHz,CDCl₃)δ151.3,147.0,138.1,137.0,132.0,129.8,125.3,125.1,117.3,116.5,114.8,113.3,8.7。

N-(3-(3-甲基咪唑并[1,2-b]哒嗪-6-基)苯基)乙酰胺，JGJ007。使用与针对JGJ004所述相同的程序，3-(3-甲基咪唑并[1,2-b]哒嗪-6-基)苯胺(JGJ006，23.3mg，0.104mmol)、三乙胺(12.6mg，0.125mmol)和乙酰氯(9mg，0.114mmol)于二氯甲烷(0.5mL)中的反应得到呈象牙色固体状的所需产物JGJ007(16.5mg，0.067mmol，60％)。¹H NMR(400MHz,CDCl₃)δ8.44(s,1H),8.21(s,1H),7.89(br s,1H),7.61-7.69(m,3H),7.41(t,J＝8.0Hz,1H),7.37(br d,J＝8.4Hz,1H),2.57(s,3H),2.22(s,3H)；¹³C NMR(100MHz,CDCl₃)δ168.8,150.8,138.9,136.6,132.2,129.5,125.2,122.6,121.2,118.3,114.6,24.5,8.7(未观察到两个低场碳)。

N-甲基-N-(3-(3-甲基咪唑并[1,2-b]哒嗪-6-基)苯基)乙酰胺，JGJ008。使用与针对JGJ001所述相同的程序，N-(3-(3-甲基咪唑并[1,2-b]哒嗪-6-基)苯基)乙酰胺(JGJ007，26.4mg，0.099mmol)、NaH于矿物油(8mg，0.199mmol)中的60％分散液和碘甲烷(28.2mg，0.199mmol)于二甲基甲酰胺(DMF，0.3mL)中的反应得到呈象牙色固体状的所需产物JGJ008(17.5mg，0.062mmol，63％)。¹H NMR(400MHz,CDCl₃)δ8.00(d,J＝9.6Hz,1H),7.96(d,J＝8.0Hz,1H),7.89(dd,J＝2.0,1.6Hz,1H),7.62(s,1H),7.58(dd,J＝8.0,7.6Hz,1H),7.43(d,J＝9.2Hz,1H),7.32(dd,J＝7.6,1.2Hz,1H),3.34(s,3H),2.64(s,3H),1.95(s,3H)；¹³CNMR(125MHz,CDCl₃)δ170.5,149.9,145.4,138.1,137.8,132.8,130.4,128.3,126.2,125.7,125.6,114.0,37.2,22.6,8.8(未观察到一个低场碳)。

3-甲基-6-(2-硝基苯基)咪唑并[1,2-b]哒嗪，JGJ009。使用与针对JGJ002所述相同的程序，在80℃下，6-氯-3-甲基咪唑并[1,2-b]哒嗪(67.1mg，0.400mmol)、2-硝基苯基硼酸(73.5mg，0.440mmol)、NaOH(48mg，1.201mmol)和Pd(PPh₃)₄(46.3mg，0.040mmol)于THF(0.4mL)和水(0.2mL)中的反应得到呈黄色固体状的所需产物JGJ009(16.3mg，0.064mmol，16％)。¹H NMR(400MHz,CDCl₃)8.02(dd,J＝8.0,0.8Hz,1H),7.99(d,J＝9.6Hz,1H),7.75(m,1H),7.64-7.70(m,2H),7.63(d,J＝1.2Hz,1H),7.10(d,J＝9.2Hz,1H),2.54(s,3H)；¹³C NMR(100MHz,CDCl₃)δ149.6,149.0,137.7,132.9,132.8,131.7,131.4,130.2,125.6,125.5,124.7,115.8,8.6。

2-(3-甲基咪唑并[1,2-b]哒嗪-6-基)苯胺，JGJ010。使用与针对JGJ002所述相同的程序，在110℃下，6-氯-3-甲基咪唑并[1,2-b]哒嗪(25.4mg，0.152mmol)、2-氨基苯基硼酸(22.8mg，0.167mmol)、K₂CO₃(31.4mg，0.227mmol)和Pd(PPh₃)₄(17.5mg，0.015mmol)于1,4-二噁烷(0.4mL)和水(80μL)中的反应得到呈浅黄色固体状的所需产物JGJ010(26.2mg，0.117mmol，70％)。¹H NMR(400MHz,CDCl₃)7.97(d,J＝9.6Hz,1H),7.57(s,1H),7.67(m,1H),7.42(d,J＝9.6Hz,1H),7.24(m,1H),6.82-6.87(m,2H),2.59(s,3H)；¹³C NMR(100MHz,CDCl₃)δ152.8,145.9,137.3,131.8,130.7,129.7,125.6,124.9,118.6,118.0,117.4,116.5,8.8。

N-(2-(3-甲基咪唑并[1,2-b]哒嗪-6-基)苯基)乙酰胺，JGJ011。使用与针对JGJ004所述相同的程序，2-(3-甲基咪唑并[1,2-b]哒嗪-6-基)苯胺(JGJ010，39.4mg，0.176mmol)、三乙胺(21.3mg，0.211mmol)和乙酰氯(16.5mg，0.211mmol)于二氯甲烷(0.8mL)中的反应得到呈象牙色固体状的所需产物JGJ011(35mg，0.131mmol，75％)。¹H NMR(400MHz,CDCl₃)δ10.57(br s,NH),8.47(d,J＝8.4Hz,1H),7.99(d,J＝9.6Hz,1H),7.61(s,1H),7.60(dd,J＝8.0,0.8Hz,1H),7.44(ddd,J＝8.8,7.2,0.8Hz,1H),7.34(d,J＝9.2Hz,1H),7.20(ddd,J＝8.0,7.2,0.8Hz,1H),2.60(s,3H),2.17(s,3H)；¹³C NMR(100MHz,CDCl₃)δ168.1,152.0,137.3,136.4,132.8,130.6,129.5,126.3,124.6,124.0,123.5,122.4,116.7,25.1,8.9。

N-甲基-N-(2-(3-甲基咪唑并[1,2-b]哒嗪-6-基)苯基)乙酰胺，JGJ012。使用与针对JGJ001所述相同的程序，N-(2-(3-甲基咪唑并[1,2-b]哒嗪-6-基)苯基)乙酰胺(JGJ011，19.1mg，0.072mmol)、氢化钠(NaH，于矿物油中的60％分散液，5.7mg，0.143mmol)和碘甲烷(20.4mg，0.143mmol)于二甲基甲酰胺(DMF，0.3mL)中的反应得到呈象牙色固体状的所需产物JGJ012(12.8mg，0.046mmol，64％)。¹H NMR(400MHz,CDCl₃)δ7.98(d,J＝9.2Hz,1H),7.66(m,1H),7.60(s,1H)7.52(m,2H),7.34(m,1H),7.10(d,J＝9.6Hz,1H),3.01(s,3H),2.54(s,3H),1.90(s,3H)；¹³C NMR(100MHz,CDCl₃)δ170.9,150.1,142.5,137.4,134.5,132.8,131.0,130.9,130.7,129.5,128.7,125.7,116.0,36.7,22.7,8.7。

3-(3-甲基咪唑并[1,2-b]哒嗪-6-基)苯甲酸，JGJ013。使用与针对JGJ002所述相同的程序，6-氯-3-甲基咪唑并[1,2-b]哒嗪(50mg，0.299mmol)、3-羧基苯基硼酸(54.5mg，0.328mmol)、K₂CO₃(82.5mg，0.597mmol)和Pd(PPh₃)₄(34.5mg，0.030mmol)于1,4-二噁烷(0.5mL)和水(100μL)中的反应得到呈白色固体状的所需产物JGJ013(32.4mg，0.128mmol，43％)。¹H NMR(400MHz,CD₃OD)8.73(dd,J＝1.6,1.2Hz,1H),8.25(d,J＝8.0Hz,1H),8.16(ddd,J＝7.6,1.6,1.2Hz,1H),8.03(d,J＝9.6Hz,1H),7.75(d,J＝9.6Hz,1H),7.62(dd,J＝8.0,7.6Hz,1H),7.58(d,J＝0.4Hz,1H),2.63(d,J＝0.4Hz,3H)。

6-(2,3-二甲氧基苯基)-3-甲基咪唑并[1,2-b]哒嗪，JGJ014。使用与针对JGJ002所述相同的程序，6-氯-3-甲基咪唑并[1,2-b]哒嗪(42mg，0.251mmol)、2,3-二甲氧基苯基硼酸(50.2mg，0.276mmol)、K₂CO₃(52mg，0.376mmol)和Pd(PPh₃)₄(29mg，0.025mmol)于1,4-二噁烷(0.5mL)和水(100μL)中的反应得到呈象牙色固体状的所需产物JGJ014(39.6mg，0.147mmol，59％)。¹H NMR(400MHz,CDCl₃)7.92(d,J＝9.6Hz,1H),7.58(s,1H),7.46(d,J＝9.2Hz,1H),7.29(dd,J＝7.6,0.8Hz,1H),7.19(t,J＝8.0Hz,1H),7.05(ddd,J＝8.0,7.6,0.8Hz,1H),3.93(s,3H),3.76(s,3H),2.60(s,3H)；¹³C NMR(100MHz,CDCl₃)δ153.2,150.7,147.5,138.0,131.7,131.1,125.2,124.4,124.2,122.2,118.4,113.6,61.4,56.0,8.8。

6-(3-氟苯基)-3-甲基咪唑并[1,2-b]哒嗪，JGJ015。使用与针对JGJ002所述相同的程序，6-氯-3-甲基咪唑并[1,2-b]哒嗪(51.5mg，0.307mmol)、3-氟苯基硼酸(47.3mg，0.338mmol)、K₂CO₃(63.7mg，0.461mmol)和Pd(PPh₃)₄(35.5mg，0.031mmol)于1,4-二噁烷(0.5mL)和水(100μL)中的反应得到呈象牙色固体状的所需产物JGJ015(38.2mg，0.168mmol，55％)。¹H NMR(400MHz,CDCl₃)7.98(d,J＝9.2Hz,1H),7.75(m,2H),7.61(s,1H),7.48(m,1H),7.41(d,J＝9.2Hz,1H),7.18(m,1H),2.63(s,3H)；¹³C NMR(100MHz,CDCl₃)δ163.2(d,J＝244.9Hz),149.8(d,J＝2.6Hz),138.2,138.1,132.6,130.5(d,J＝8.1Hz),125.5,122.6(d,J＝2.9Hz),116.7(d,J＝21.2Hz),114.2,113.9(d,J＝23.1Hz),8.7.(未观察到一个低场碳)。

N-甲基-3-(3-甲基咪唑并[1,2-b]哒嗪-6-基)苯甲酰胺，JGJ016。向JGJ013(20.1mg，0.079mmol)和甲胺盐酸盐(10.7mg,0.159mmol)于二氯甲烷(0.3mL)和DMF(0.5mL)中的溶液中添加羟基苯并三唑(HOBT，16.1mg，0.159mmol)、(3-二甲基氨基丙基)-N'-乙基碳二亚胺盐酸盐(EDC.HCl，30.4mg，0.159mmol)和N,N-二异丙基乙胺(DIPEA，102.6mg，0.794mmol)。将混合物在23℃下搅拌12小时。将水添加至反应物中后，用乙酸乙酯(10mL X3)萃取。合并的有机层用盐水洗涤，经无水MgSO₄干燥，过滤并减压浓缩。粗残余物通过快速柱色谱(二氯甲烷:MeOH＝6:1)纯化，得到呈浅黄色固体状的所需产物JGJ016(8.6mg，0.032mmol，41％)。¹H NMR(400MHz,CDCl₃)δ8.39(t,J＝1.6Hz,1H),8.10(dddd,J＝8.0,1.6,1.2,0.8Hz,1H),7.91(d,J＝9.6Hz,1H),7.86(ddd,J＝7.6,1.6,1.2Hz,1H),7.58(s,1H),7.55(dd,J＝8.0,7.6Hz,1H),7.41(d,J＝9.6Hz,1H),6.75(m,NH),3.06(d,J＝4.8Hz,3H),2.59(d,J＝0.4Hz,3H)；¹³C NMR(100MHz,CDCl₃)δ167.7,153.3,138.0,136.3,135.5,132.3,129.7,129.2,128.0,125.7,125.5,125.4,114.4,26.9,8.7。

3-甲基-6-(吡啶-3-基)咪唑并[1,2-b]哒嗪，JGJ017。使用与针对JGJ002所述相同的程序，6-氯-3-甲基咪唑并[1,2-b]哒嗪(58.8mg，0.351mmol)、3-吡啶硼酸(47.4mg，0.386mmol)、K₂CO₃(72.7mg，0.526mmol)和Pd(PPh₃)₄(40.6mg，0.035mmol)于1,4-二噁烷/水(5:1v/v，0.6mL)中的反应得到呈浅黄色固体状的所需产物JGJ017(37.2mg，0.177mmol，50％)。¹H NMR(400MHz,CDCl₃)9.20(d,J＝1.6Hz,1H),8.69(dd,J＝4.8,1.6Hz,1H),8.29(ddd,J＝8.0,2.0,1.6Hz,1H),7.98(d,J＝9.2Hz,1H),7.60(d,J＝0.4Hz,1H),7.42(ddd,J＝8.0,4.8,0.8Hz,1H),7.41(d,J＝9.6Hz,1H),2.60(d,J＝0.8Hz,3H)；¹³C NMR(100MHz,CDCl₃)δ150.6,148.6,148.2,137.9,134.2,132.7,131.6,125.7,125.5,123.6,113.7,8.6。

6-(2-氟苯基)-3-甲基咪唑并[1,2-b]哒嗪，JGJ018。使用与针对JGJ002所述相同的程序，6-氯-3-甲基咪唑并[1,2-b]哒嗪(27.5mg，0.164mmol)、2-氟苯基硼酸(25.3mg，0.181mmol)、K₂CO₃(34.0mg，0.246mmol)和Pd(PPh₃)₄(19.0mg，0.016mmol)于1,4-二噁烷/水(5:1v/v，0.5mL)中的反应得到呈象牙色固体状的所需产物JGJ018(18.1mg，0.080mmol，49％)。¹H NMR(400MHz,CDCl₃)7.96(d,J＝9.6Hz,1H),7.91(ddd,J＝8.0,7.6,2.0Hz,1H),7.60(s,1H),7.43-7.49(m,2H),7.30(ddd,J＝8.0,7.6,1.2Hz,1H),7.21(ddd,J＝11.2,8.4,0.8Hz,1H),2.61(d,J＝0.8Hz,3H)；¹³C NMR(100MHz,CDCl₃)δ160.4(d,J＝249.3Hz),148.2,137.9,132.2,131.4(d,J＝8.5Hz),130.7(d,J＝2.6Hz),125.3,124.7,124.6(d,J＝3.6Hz),124.3(d,J＝11.7Hz),117.5(d,J＝7.9Hz),116.4(d,J＝22.2Hz),8.7。

6-氯咪唑并[1,2-b]哒嗪。向6-氯哒嗪-3-胺(400mg，3.088mmol)于EtOH(6mL)和水(4mL)中的溶液中添加溴乙醛二乙缩醛(930μL，6.175mmol)和HBr(280μL)。将所得混合物在103℃下加热过夜。将混合物冷却至23℃后，用水稀释并用EtOAc萃取。合并的有机层用饱和NaHCO₃溶液洗涤，经无水MgSO₄干燥，过滤并减压浓缩。所得粗残余物不经进一步纯化即用于下一步骤。(棕色固体；394.5mg，2.569mmol，83％)¹H NMR(400MHz,CDCl₃)δ7.92(s,1H),7.90(d,J＝9.6Hz,1H),7.76(s,1H),7.04(d,J＝9.6Hz,1H)；¹³C NMR(100MHz,CDCl₃)δ146.9,137.5,134.4,127.0,118.9,117.2。

N-(3-(咪唑并[1,2-b]哒嗪-6-基)苯基)乙酰胺，JGJ019。使用与针对JGJ002所述相同的程序，6-氯-咪唑并[1,2-b]哒嗪(71.6mg，0.427mmol)、3-氨基苯基硼酸(69.5mg，0.449mmol)、K₂CO₃(88.6mg，0.641mmol)和Pd(PPh₃)₄(49.3mg，0.043mmol)于1,4-二噁烷/水(5:1v/v，1.0mL)中的反应得到呈淡黄色固体状的3-(咪唑并[1,2-b]哒嗪-6-基)苯胺(87.9mg，0.392mmol，92％)。接着使用与针对JGJ004所述相同的程序进行乙酰化，得到呈象牙色固体状的所需产物JGJ019(49.6mg，0.221mmol，69％)。¹H NMR(400MHz,CDCl₃)δ8.19(s,1H),8.13(br s,1H),7.96(m,2H),7.76(s,1H),7.61-7.65(m,2H),7.43(d,J＝9.6Hz,1H),7.39-7.43(m,1H),2.22(s,3H)；¹³C NMR(100MHz,CDCl₃)δ168.9,151.8,138.9,138.2,136.1,133.6,129.7,125.4,122.7,121.4,118.4,117.1,116.7,24.6。

6-(3-氟苯基)咪唑并[1,2-b]哒嗪，JGJ020。使用与针对JGJ002所述相同的程序，6-氯咪唑并[1,2-b]哒嗪(50mg，0.326mmol)、3-氟苯基硼酸(50.1mg，0.358mmol)、K₂CO₃(67.5mg，0.488mmol)和Pd(PPh₃)₄(18.8mg，0.016mmol)于1,4-二噁烷/水(5:1v/v，0.5mL)中的反应得到呈象牙色固体状的所需产物JGJ020(36.9mg，0.173mmol，53％)。¹H NMR(400MHz,CDCl₃)δ7.96-7.99(m,2H),7.77(s,1H),7.62-7.68(m,2H),7.42-7.46(m,1H),7.39(d,J＝9.6Hz,1H),7.14(m,1H)；¹³C NMR(100MHz,CDCl₃)δ163.1(d,J＝245.1Hz),150.4(d,J＝2.6Hz),137.5(d,J＝7.8Hz),134.2,131.9(d,J＝9.8Hz),130.5(d,J＝8.1Hz),128.4(d,J＝12.1Hz),125.7,122.5(d,J＝2.9Hz),116.8(d,J＝21.1Hz),115.7,113.8(d,J＝23.2Hz)

6-氯-2-甲基咪唑并[1,2-b]哒嗪。向6-氯哒嗪-3-胺(100mg，0.772mmol)于EtOH(2mL)中的溶液中添加三甲胺(78mg，0.772mmol)和氯丙酮(142.8mg，1.544mmol)，并将混合物在120℃下搅拌过夜。将混合物冷却至23℃后，用水稀释并用EtOAc萃取。合并的有机层用盐水洗涤，经无水MgSO₄干燥，过滤并减压浓缩。粗残余物通过快速柱色谱(正己烷:EtOAc＝1:1)纯化，得到呈灰白色固体状的所需产物(87.2mg，0.520mmol，67％)。¹H NMR(400MHz,CDCl₃)δ7.72(dd,J＝9.2,0.4Hz,1H),7.65(s,1H),6.93(d,J＝9.2Hz,1H),2.44(d,J＝0.8Hz,3H)；¹³C NMR(100MHz,CDCl₃)δ145.8,144.8,137.0,125.6,117.9,114.5,14.7。

N-(3-(2-甲基咪唑并[1,2-b]哒嗪-6-基)苯基)乙酰胺，JGJ021。使用与针对JGJ002所述相同的程序，6-氯-2-甲基咪唑并[1,2-b]哒嗪(35.3mg，0.211mmol)、3-氨基苯基硼酸(35.9mg，0.232mmol)、K₂CO₃(43.7mg，0.316mmol)和Pd(PPh₃)₄(24.4mg，0.021mmol)于1,4-二噁烷/水(5:1v/v，0.5mL)中的反应得到呈浅黄色固体状的3-(2-甲基咪唑并[1,2-b]哒嗪-6-基)苯胺(49.6mg，定量)。接着使用与针对JGJ004所述相同的程序进行乙酰化，得到呈象牙色固体状的所需产物JGJ021(27.2mg，0.102mmol，46％)。¹H NMR(400MHz,CDCl₃)δ8.92(s,1H),8.16(s,1H),7.73(d,J＝9.6Hz,1H),7.63(m,2H),7.54(d,J＝7.6Hz,1H),7.33(t,J＝8.0Hz,1H),7.27(d,J＝10.0Hz,1H),2.44(s,3H),2.19(s,3H)；¹³CNMR(100MHz,CDCl₃)δ169.2,150.7,143.8,139.0,137.7,136.1,129.4,123.9,122.3,121.1,118.2,115.7,114.3,24.4,14.5。

6-(3-氟苯基)-2-甲基咪唑并[1,2-b]哒嗪，JGJ022。使用与针对JGJ002所述相同的程序，6-氯-2-甲基咪唑并[1,2-b]哒嗪(21.4mg，0.128mmol)、3-氟苯基硼酸(17.9mg，0.128mmol)、K₂CO₃(26.5mg，0.192mmol)和Pd(PPh₃)₄(7.4mg，0.006mmol)于1,4-二噁烷/水(5:1v/v，0.3mL)中的反应得到呈象牙色固体状的所需产物JGJ022(13.7mg，0.060mmol，47％)。¹H NMR(400MHz,CDCl₃)δ7.89(d,J＝9.2Hz,1H),7.78(s,1H),7.65-7.70(m,2H),7.43-7.49(m,1H),7.38(d,J＝9.2Hz,1H),7.16(m,1H),2.52(d,J＝0.4Hz,3H)；¹³CNMR(100MHz,CDCl₃)δ163.2(d,J＝245.0Hz),149.8(d,J＝2.7Hz),144.5,137.9(d,J＝8.0Hz),130.5(d,J＝8.2Hz),124.5,122.5(d,J＝3.0Hz),116.7(d,J＝21.1Hz),115.3,114.4,113.9(d,J＝23.2Hz),14.8.(未观察到一个低场碳)

6-氯-3-苯基咪唑并[1,2-b]哒嗪。向6-氯咪唑并[1,2-b]哒嗪(394.5mg，2.569mmol)于DMF(6mL)中的溶液中添加N-碘代琥珀酰亚胺(635.8mg，2.826mmol)并将混合物在23℃下搅拌48小时。反应完成后，将其抽真空以去除溶剂。将残余物用二氯甲烷稀释并用饱和Na₂S₂CO₃溶液洗涤。将有机层分离并用盐水洗涤，经无水MgSO₄干燥，过滤并减压浓缩，得到定量产率的6-氯-3-碘咪唑并[1,2-b]哒嗪。接着将6-氯-3-碘咪唑并[1,2-b]哒嗪(107.2mg，0.326mmol)、苯基硼酸(43.7mg，0.358mmol)、K₂CO₃(54.0mg，0.391mmol)和Pd(PPh₃)₄(18.8mg，0.016mmol)于1,4-二噁烷/水(5:1v/v，2mL)中的混合物在90℃下加热过夜。将反应物冷却至23℃后，将其在水中稀释并用EtOAc萃取。合并的有机层用盐水洗涤，经无水MgSO₄干燥，过滤并减压浓缩。粗残余物通过快速柱色谱(正己烷:EtOAc＝2:1)纯化，得到呈浅黄色固体状的所需产物(28.4mg，0.124mmol，38％)。¹HNMR(400MHz,CDCl₃)δ8.06(s,1H),8.03(m,2H),7.98(d,J＝9.6Hz,1H),7.52(m,2H),7.39(m,1H),7.08(d,J＝9.2Hz,1H)；¹³C NMR(100MHz,CDCl₃)δ146.8,138.5,133.1,129.1,128.7,128.4,127.6,127.1,126.8,118.3。

N-(3-(3-苯基咪唑并[1,2-b]哒嗪-6-基)苯基)乙酰胺，JGJ023。使用与针对JGJ002所述相同的程序，6-氯-3-苯基咪唑并[1,2-b]哒嗪(15.5mg，0.068mmol)、3-氨基苯基硼酸(11.5mg，0.074mmol)、K₂CO₃(14.0mg，0.101mmol)和Pd(PPh₃)₄(3.9mg，0.003mmol)于1,4-二噁烷/水(5:1v/v，0.2mL)中的反应得到呈浅黄色固体状的3-(3-苯基咪唑并[1,2-b]哒嗪-6-基)苯胺(17.5mg，0.061mmol，91％)。接着使用与针对JGJ004所述相同的程序进行乙酰化，得到呈象牙色固体状的所需产物JGJ023(10.9mg，0.033mmol，54％)。¹HNMR(400MHz,CDCl₃)δ8.18(s,1H),8.12(m,2H),8.04(s,1H),7.99(d,J＝9.6Hz,1H),7.93(brs,1H),7.64-7.70(m,2H),7.50(m,2H),7.46(d,J＝9.6Hz,1H),7.35-7.44(m,2H),2.22(s,3H)；¹³C NMR(100MHz,CDCl₃)δ168.7,151.1,138.8,136.4,133.0,129.6,128.8,128.7,128.6,127.9,126.8,125.8,122.7,121.3,118.3,115.6,24.6.(未观测到一个低场碳)

6-(3-氟苯基)-3-苯基咪唑并[1,2-b]哒嗪，JGJ024。使用与针对JGJ002所述相同的程序，6-氯-3-苯基咪唑并[1,2-b]哒嗪(12.9mg，0.056mmol)、3-氟苯基硼酸(8.6mg，0.062mmol)、K₂CO₃(11.7mg，0.084mmol)和Pd(PPh₃)₄(3.2mg，0.003mmol)于1,4-二噁烷/水(5:1v/v，0.2mL)中的反应得到呈象牙色固体状的所需产物JGJ024(9.5mg，0.033mmol，58％)。¹H NMR(400MHz,CDCl₃)δ8.10-8.14(m,4H),7.72-7.79(m,2H),7.48-7.56(m,4H),7.42(m,1H),7.20(m,1H)；¹³C NMR(100MHz,CDCl₃)δ163.2(d,J＝245.0Hz),150.5(d,J＝2.7Hz),137.8(d,J＝7.8Hz),133.0,130.6(d,J＝8.2Hz),129.1,128.8,128.4,128.1,127.1,126.9,126.1,122.7(d,J＝2.9Hz),117.0(d,J＝21.2Hz),115.3,114.0(d,J＝23.2Hz)。

3-甲基-6-(3-(三氟甲基)苯基)咪唑并[1,2-b]哒嗪，JGJ025。使用与针对JGJ002所述相同的程序，6-氯-3-甲基咪唑并[1,2-b]哒嗪(35.9mg，0.214mmol)、3-三氟甲基苯基硼酸(42.7mg，0.225mmol)、K₂CO₃(44.4mg，0.321mmol)和Pd(PPh₃)₄(12.4mg，0.011mmol)于1,4-二噁烷/水(5:1v/v，0.4mL)中的反应得到呈白色固体状的所需产物JGJ018(29.2mg，0.105mmol，49％)。¹H NMR(400MHz,CDCl₃)δ8.27(s,1H),8.20(d,J＝8.0Hz,1H),8.09(d,J＝9.2Hz,1H),7.76(d,J＝8.0Hz,1H),7.65-7.69(m,2H),7.51(d,J＝9.2Hz,1H),2.66(s,3H)；¹³C NMR(100MHz,CDCl₃)δ149.8,136.7,132.6,132.1(d,J＝9.8Hz),131.5(q,J＝32.4Hz),130.2,129.5,128.4(d,J＝12.0Hz),126.4(q,J＝3.5Hz),125.7,123.9(q,J＝270.8Hz),123.8(q,J＝3.8Hz),114.1,8.7。(由于存在一些杂质，将再次进行¹³C NMR)

N-(3-氟-5-(3-甲基咪唑并[1,2-b]哒嗪-6-基)苯基)乙酰胺，JGJ026。使用与针对JGJ002所述相同的程序，6-氯-3-甲基咪唑并[1,2-b]哒嗪(35.3mg，0.211mmol)、3-氟-5-氨基苯基硼酸(34.3mg，0.221mmol)、K₂CO₃(43.7mg，0.316mmol)和Pd(PPh₃)₄(12.2mg，0.011mmol)于1,4-二噁烷/水(5:1v/v，0.4mL)中的反应得到呈浅黄色固体状的3-氟-5-(3-甲基咪唑并[1,2-b]哒嗪-6-基)苯胺(25mg，0.103mmol，49％)。接着使用与针对JGJ004所述相同的程序进行乙酰化，得到呈浅黄色固体状的所需产物JGJ026(8mg，0.028mmol，28％)。¹H NMR(400MHz,CDCl₃)δ8.38(br s,1H),8.00(d,J＝9.2Hz,1H),7.89(s,1H),7.65(d,J＝9.2Hz,1H),7.60(s,1H),7.43(s,1H),7.41(s,1H),2.60(s,3H),2.24(s,3H)；

N-(4-(3-甲基咪唑并[1,2-b]哒嗪-6-基)苯基)乙酰胺，JGJ027。使用与针对JGJ002所述相同的程序，6-氯-3-甲基咪唑并[1,2-b]哒嗪(35.3mg，0.211mmol)、4-氨基苯基硼酸(38.4mg，0.221mmol)、K₂CO₃(43.7mg，0.316mmol)和Pd(PPh₃)₄(12.2mg，0.011mmol)于1,4-二噁烷/水(5:1v/v，0.4mL)中的反应得到呈淡黄色固体状的4-(3-甲基咪唑并[1,2-b]哒嗪-6-基)苯胺(31.4mg，0.140mmol，66％)。接着使用与针对JGJ004所述相同的程序进行乙酰化，得到呈象牙色固体状的所需产物JGJ026(7.2mg，0.027mmol，19％)。¹HNMR(400MHz,CDCl₃)δ7.99(d,J＝8.8Hz,2H),7.95(d,J＝9.2Hz,1H),7.68(d,J＝8.4Hz,2H),7.58(s,1H),7.47(br s,1H),7.43(d,J＝9.6Hz,1H),2.62(s,3H),2.23(s,3H)；

6-氯-3-(吡啶-3-基)咪唑并[1,2-b]哒嗪。使用与针对6-氯-3-苯基咪唑并[1,2-b]哒嗪所述相同的程序，在100℃下，6-氯-3-碘咪唑并[1,2-b]哒嗪(82.6mg，0.297mmol)、吡啶-3-硼酸(40mg，0.325mmol)、K₂CO₃(61.3mg，0.443mmol)和Pd(PPh₃)₄(17.1mg，0.015mmol)于1,4-二噁烷/水(5:1v/v，1mL)中的反应得到呈浅黄色固体状的所需产物(41.5mg，0.180，61％)。¹H NMR(400MHz,CDCl₃)δ9.21(s,1H),8.62(s,1H),8.40(m,1H),8.11(s,1H),7.98(d,J＝9.6Hz,1H),7.43(dd,J＝7.6,0.8Hz,1H),7.12(d,J＝9.2Hz,1H)；¹³CNMR(100MHz,CDCl₃)δ149.0,147.6,147.2,139.1,133.6,133.5,127.4,126.0,124.3,123.6,118.9。

N-(3-(3-(吡啶-3-基)咪唑并[1,2-b]哒嗪-6-基)苯基)乙酰胺，JGJ028。使用与针对JGJ002所述相同的程序，6-氯-3-(吡啶-3-基)咪唑并[1,2-b]哒嗪(41.5mg，0.180mmol)、3-氨基苯基硼酸(30.7mg，0.198mmol)、K₂CO₃(37.3mg，0.270mmol)和Pd(PPh₃)₄(10.4mg，0.009mmol)于1,4-二噁烷/水(5:1v/v，0.4mL)中的反应得到呈象牙色固体状的3-(3-(吡啶-3-基)咪唑并[1,2-b]哒嗪-6-基)苯胺(50.0mg，0.174mmol，96％)。接着使用与针对JGJ004所述相同的程序进行乙酰化，得到呈浅黄色固体状的所需产物JGJ028(18.2mg，0.055mmol，32％)。¹H NMR(400MHz,CD₃OD)δ9.29(d,J＝1.2Hz,1H),8.60(ddd,J＝8.0,2.0,1.6Hz,1H),8.49(d,J＝4.0Hz,1H),8.25(dd,J＝2.0,1.6Hz,1H),8.18(s,1H),8.02(d,J＝9.6Hz,1H),7.68(d,J＝9.6Hz,1H),7.60-7.65(m,2H),7.55(dd,J＝8.0,4.8Hz,1H),7.37(t,J＝8.0Hz,1H),2.16(s,3H)；¹³C NMR(100MHz,CD₃OD)δ172.1,153.6,149.2,148.0,141.5,141.2,137.1,135.9,134.1,130.8,127.1,127.0,126.9,125.7,123.8,123.0,119.5,118.6,24.3。

6-氯-3-(嘧啶-5-基)咪唑并[1,2-b]哒嗪。使用与针对6-氯-3-苯基咪唑并[1,2-b]哒嗪所述相同的程序，在100℃下，6-氯-3-碘咪唑并[1,2-b]哒嗪(83.6mg，0.299mmol)、嘧啶-5-硼酸(40.8mg，0.329mmol)、K₂CO₃(62mg，0.449mmol)和Pd(PPh₃)₄(17.3mg，0.015mmol)于1,4-二噁烷/水(5:1v/v，1mL)中的反应得到呈浅黄色固体状的所需产物(9.8mg，0.042mmol，14％)。¹H NMR(400MHz,CDCl₃)δ9.42(s,2H),9.23(s,1H),8.18(s,1H),8.04(d,J＝9.6Hz,1H),7.20(d,J＝9.6Hz,1H)；¹³C NMR(100MHz,CDCl₃)δ157.7,154.0,147.7,133.7,132.1,128.5,127.7,123.0,119.8。

N-(3-(3-(嘧啶-5-基)咪唑并[1,2-b]哒嗪-6-基)苯基)乙酰胺，JGJ029。使用与针对JGJ002所述相同的程序，6-氯-3-(嘧啶-5-基)咪唑并[1,2-b]哒嗪(9.8mg，0.042mmol)、3-氨基苯基硼酸(7.2mg，0.047mmol)、K₂CO₃(8.8mg，0.064mmol)和Pd(PPh₃)₄(4.9mg，0.004mmol)于1,4-二噁烷/水(5:1v/v，0.2mL)中的反应得到呈淡黄色固体状的3-(3-(吡啶-3-基)咪唑并[1,2-b]哒嗪-6-基)苯胺(6.7mg，0.023mmol，55％)。接着使用与针对JGJ004所述相同的程序进行乙酰化，得到呈象牙色固体状的所需产物JGJ029(5.1mg，0.015mmol，67％)。¹H NMR(400MHz,CDCl₃+5％v/v CD₃OD)δ9.58(s,2H),9.18(s,1H),8.23(s,1H),8.19(d,J＝9.6Hz,1H),8.10(s,1H),7.99(d,J＝8.0Hz,1H)7.65(d,J＝9.2Hz,1H),7.63(d,J＝8.0Hz,1H),7.46(dd,J＝8.4,7.6Hz,1H),2.19(s,3H)；¹³C NMR(125MHz,CDCl₃+5％v/v CD₃OD)δ169.7,156.8,153.9,152.5,139.6,134.7,131.9,129.9,125.9,123.7,122.4,122.2,122.1,118.0,117.7,117.6,24.0。

6-溴咪唑并[1,2-a]吡啶。在23℃下向2-氨基-5-溴吡啶(500mg，2.89mmol)于EtOH(6mL)和水(4mL)中的溶液中添加溴乙醛二乙缩醛(870μL，5.78mmol)和HBr(260μL)。将所得混合物在103℃下加热过夜。将混合物冷却至23℃后，在水中稀释并用EtOAc萃取。合并的有机层用饱和NaHCO₃溶液洗涤，经无水MgSO₄干燥，过滤并减压浓缩。所得粗残余物不经进一步纯化即用于下一步骤。(棕色固体；331.7mg，1.68mmol，58％)¹H NMR(400MHz,CDCl₃)δ8.09(dd,J＝2.0,0.8Hz,1H),7.46(d,J＝0.8Hz,1H),7.39(s,1H),7.32(d,J＝9.6Hz,1H),7.00(dd,J＝9.6,2.0Hz,1H)；¹³C NMR(100MHz,CDCl₃)δ143.2,133.8,127.3,125.4,117.8,112.3,106.5。

N-(3-(咪唑并[1,2-a]吡啶-6-基)苯基)乙酰胺，JGJ030。使用与针对JGJ002所述相同的程序，6-溴咪唑并[1,2-a]吡啶(50mg，0.254mmol)、3-氨基苯基硼酸(43.3mg，0.279mmol)、K₂CO₃(52.6mg，0.381mmol)和Pd(PPh₃)₄(29.3mg，0.025mmol)于1,4-二噁烷/水(5:1v/v，1mL)中的反应得到呈象牙色固体状的3-(咪唑并[1,2-a]吡啶-6-基)苯胺(22.3mg，0.107mmol，42％)。接着使用与针对JGJ004所述相同的程序进行乙酰化，得到呈白色固体状的所需产物JGJ030(13.6mg，0.054mmol，51％)。¹H NMR(400MHz,CD₃OD)δ8.68(s,1H),7.89-7.94(m,2H),7.56-7.62(m,3H),7.51(ddd,J＝7.6,2.0,1.2Hz,1H),7.35-7.43(m,2H),2.16(s,3H)；¹³C NMR(100MHz,CD₃OD)δ170.3,139.2,137.4,132.1,129.1,126.7,125.7,123.8,122.1,119.1,118.0,115.8,113.5,22.4.(未观察到一个低场碳)

6-溴-3-甲基咪唑并[1,2-a]吡啶。将2-氨基-5-溴吡啶(200mg，1.156mmol)和2-溴丙醛(纯度>95％，318mg，2.312mmol)于EtOH(5mL)中的混合物在回流下加热过夜。将混合物冷却至23℃后，将其浓缩并用EtOAc萃取。合并的有机层用盐水洗涤，经无水MgSO₄干燥，过滤并减压浓缩。粗残余物通过快速柱色谱(正己烷:EtOAc＝3:2)纯化，得到呈白色固体状的所需产物(86.9mg，0.412mmol，36％)。¹H NMR(400MHz,CDCl₃)δ8.00(d,J＝1.2Hz,1H),7.49(d,J＝9.2Hz,1H),7.40(s,1H),7.20(dd,J＝9.6,2.0Hz,1H),2.46(s,3H)；¹³C NMR(100MHz,CDCl₃)δ143.5,132.1,126.5,123.0,120.3,118.3,106.9.9.0。

N-(3-(3-甲基咪唑并[1,2-a]吡啶-6-基)苯基)乙酰胺，JGJ031。使用与针对JGJ002所述相同的程序，6-溴-3-甲基咪唑并[1,2-a]吡啶(35mg，0.166mmol)、3-氨基苯基硼酸(28.3mg，0.182mmol)、K₂CO₃(34.4mg，0.249mmol)和Pd(PPh₃)₄(9.6mg，0.008mmol)于1,4-二噁烷/水(5:1v/v，0.3mL)中的反应得到呈象牙色固体状的3-(3-甲基咪唑并[1,2-a]吡啶-6-基)苯胺(28.1mg，0.106mmol，64％)。接着使用与针对JGJ004所述相同的程序进行乙酰化，得到呈象牙色固体状的所需产物JGJ031(15.8mg，0.060mmol，56％)。¹HNMR(400MHz,CDCl₃)δ8.30(br s,1H),8.12(s,1H),7.87(s,1H),7.65(d,J＝8.0Hz,1H),7.54(d,J＝8.0Hz,1H),7.36-7.43(m,3H),7.27(m,1H),2.49(s,3H),2.23(s,3H)；

3-(3-苯基咪唑并[1,2-a]吡啶-6-基)苯胺，JGJ032。向微波管中的2-氨基-5-溴-吡啶(100mg，0.508mmol)、3-氨基苯基硼酸(76.5mg，0.558mmol)、三苯基膦(26.6mg，0.102mmol)和K₂CO₃(140.3mg，1.015mmol)于甲苯:EtOH混合物(2:1v/v，1.7mL)中的混合物中添加Pd(OAc)₂(11.4mg，0.059mmol)并充入氩气。将混合物用硅隔膜密封并在搅拌下在140℃的微波中照射30分钟。在使混合物冷却至23℃后，用注射器将溴苯(119.5mg，0.761mmol)注入管中，并将混合物再次在搅拌下经受140℃的微波照射2.5小时。将反应容器冷却至23℃并将混合物用水稀释并用二氯甲烷萃取。合并的有机层经无水MgSO₄干燥，过滤并减压浓缩。粗残余物通过快速柱色谱(正己烷:EtOAc:MeOH＝1:1:0.1)纯化，得到呈浅黄色固体状的所需产物(28.8mg，0.101mmol，20％)。¹H NMR(400MHz,CDCl₃)δ8.46(s,1H),7.83(d,J＝9.2Hz,1H),7.73(s,1H),7.45-7.61(m,6H),7.23(d,J＝8.0Hz,1H),6.90(d,J＝8.0Hz,1H),6.81(t,J＝2.0Hz,1H),6.71(m,1H)；

N-(3-(3-苯基咪唑并[1,2-a]吡啶-6-基)苯基)乙酰胺，JGJ033。使用与针对JGJ004所述相同的程序，3-(3-苯基咪唑并[1,2-a]吡啶-6-基)苯胺(JGJ032，22.8mg，0.080mmol)、三乙胺(12.1mg，0.120mmol)和乙酰氯(9.4mg，0.120mmol)于二氯甲烷(2mL)中的反应得到呈象牙色固体状的所需产物JGJ033(12.2mg，0.037mmol，47％)。¹H NMR(400MHz,CD₃OD)δ8.48(s,1H),7.80(dd,J＝2.0,1.6Hz,1H),7.73(s,1H),7.51-7.65(m,7H),7.43(m,1H),7.35(dd,J＝8.0Hz,1H),7.27(m,1H),2.12(s,3H)；¹³C NMR(100MHz,CD₃OD)δ170.3,139.2,137.4,131.2,129.2,129.0,128.4,128.2,127.7,127.1,126.5,125.6,122.0,120.5,119.0,117.8,116.5,22.4.(未观察到一个低场碳)

5-氯-3-苯基-1H-吡咯并[3,2-b]吡啶。向微波管中的2-氯-5-肼基吡啶(71.3mg，0.5mmol)于4％w/w H₂SO₄水溶液(5mL)中的溶液中添加(2,2-二甲氧基乙基)苯(87.3mg，0.525mmol)。将反应容器用硅隔膜密封并在23℃下搅拌1分钟，接着在微波中在160℃下照射5分钟。将混合物冷却至23℃后，将其缓慢倒入40％w/w KOH溶液(5mL)中。混合物用EtOAc萃取且合并的有机层经无水MgSO₄干燥，过滤并减压浓缩。将所得粗残余物通过快速柱色谱(正己烷:EtOAc＝3:2)纯化，得到呈淡黄色固体状的所需产物(71.3mg，0.312mmol，62％)。¹H NMR(400MHz,CDCl₃)δ8.96(br s,1H),7.99(d,J＝7.2Hz,2H),7.59(s,1H),7.57(d,J＝8.8Hz,1H),7.39(t,J＝7.6Hz,2H),7.23(dd,J＝7.6,7.2Hz,1H),7.12(d,J＝8.9Hz,1H)。光谱数据与文献数据相符。[参考文献：Eur.J.Org.Chem.2013,3328-3336。

N-(3-(3-苯基-1H-吡咯并[3,2-b]吡啶-5-基)苯基)乙酰胺，JGJ034。使用与针对JGJ002所述相同的程序，5-氯-3-苯基-1H-吡咯并[3,2-b]吡啶(40mg，0.175mmol)、3-氨基苯基硼酸(29.8mg，0.192mmol)、K₂CO₃(36.3mg，0.262mmol)和Pd(PPh₃)₄(20.2mg，0.018mmol)于1,4-二噁烷/水(5:1v/v，0.5mL)中的反应得到呈白色固体状的3-(3-苯基-1H-吡咯并[3,2-b]吡啶-5-基)苯胺(18.8mg，0.066mmol，38％)。接着使用与针对JGJ004所述相同的程序进行乙酰化，得到呈象牙色固体状的所需产物JGJ034(13.5mg，0.041mmol，63％)。¹H NMR(400MHz,CD₃OD)δ8.29(s,1H),8.24(d,J＝7.2Hz,2H),7.88(s,1H),7.83(d,J＝7.6Hz,1H),7.82(d,J＝8.8Hz,1H),7.64(d,J＝8.4Hz,1H),7.62(d,J＝7.6Hz,1H),7.39-7.44(m,3H),7.21(dd,J＝7.6,7.2Hz,1H),2.17(s,3H)；¹³C NMR(100MHz,CD₃OD)δ170.3,150.1,143.3,141.1,138.7,134.5,129.3,128.5,127.9,126.3,126.2,125.1,122.4,119.3(两个峰),118.3,115.7,114.0,22.4。

5-氯-3-丙基-1H-吡咯并[3,2-b]吡啶。使用与针对5-氯-3-苯基-1H-吡咯并[3,2-b]吡啶所述相同的程序，2-氯-5-肼基吡啶(71.8mg，0.5mmol)和戊醛(45.1mg，0.524mmol)于4％w/w H₂SO₄(5mL)水溶液中的反应提供呈浅黄色固体状的所需产物。¹H NMR(400MHz,CDCl₃)δ8.01(br s,1H),7.61(d,J＝8.0Hz,1H),7.26(s,1H),7.08(d,J＝8.0Hz,1H),2.77(t,J＝7.6Hz,2H),1.73(m,2H),0.94(t,J＝7.2Hz,3H)；¹³C NMR(100MHz,CDCl₃)δ145.0,143.4,127.8,126.3,120.9,117.2,116.6,26.8,23.0,14.0。

3-(3-丙基-1H-吡咯并[3,2-b]吡啶-5-基)苯胺，JGJ035。使用与针对JGJ002所述相同的程序，5-氯-3-丙基-1H-吡咯并[3,2-b]吡啶(40mg，0.206mmol)、3-氨基苯基硼酸(31mg，0.226mmol)、K₂CO₃(42.6mg，0.308mmol)和Pd(PPh₃)₄(23.8mg，0.021mmol)于1,4-二噁烷/水(5:1v/v，0.5mL)中的反应得到呈白色固体状的所需产物JGJ035(42.5mg，0.169mmol，82％)。¹H NMR(400MHz,CD₃OD)δ7.72(d,J＝8.4Hz,1H),7.44(d,J＝8.8Hz,1H),7.34(dd,J＝2.0,1.6Hz,1H),7.30(s,1H),7.24(ddd,J＝7.6,1.6,1.2Hz,1H),7.19(t,J＝7.6Hz,1H),6.76(ddd,J＝7.6,2.0,1.2Hz,1H),2.85(t,J＝7.6Hz,2H),1.79(m,2H),1.02(t,J＝7.2Hz,3H)；¹³C NMR(100MHz,CD₃OD)δ152.4,128.8,146.2,143.4,130.2,130.1,127.6,120.3,118.8,117.4,116.3,115.8,27.1,24.6,14.5.(未观察到一个低场碳)

N-(3-(3-丙基-1H-吡咯并[3,2-b]吡啶-5-基)苯基)乙酰胺，JGJ036。使用与针对JGJ004所述相同的程序，3-(3-丙基-1H-吡咯并[3,2-b]吡啶-5-基)苯胺(JGJ035，34.5mg，0.137mmol)、三乙胺(20.8mg，0.206mmol)和乙酰氯(16.2mg，0.206mmol)于二氯甲烷(3mL)中的反应得到呈象牙色固体状的所需产物JGJ036(28.8mg，0.098mmol，72％)。¹HNMR(400MHz,CD₃OD)δ8.11(dd,J＝2.0,1.6Hz,1H),7.75(d,J＝8.4Hz,1H),7.64-7.67(m,2H),7.49(d,J＝8.8Hz,1H),7.39(t,J＝8.0Hz,1H),7.32(s,1H),2.85(t,J＝7.2Hz,2H),2.15(s,3H),1.80(m,2H),1.01(t,J＝7.2Hz,3H)；¹³C NMR(100MHz,CD₃OD)δ171.8,151.4,146.4,143.1,140.1,130.3,129.9,127.9,124.2,120.6,120.4,120.2,117.4,115.7,27.1,24.5,23.9,14.5。

N-(3-氟-5-(3-苯基-1H-吡咯并[3,2-b]吡啶-5-基)苯基)乙酰胺，JGJ037。使用与针对JGJ002所述相同的程序，5-氯-3-苯基-1H-吡咯并[3,2-b]吡啶(19.4mg，0.085mmol)、3-氟-5-氨基苯基硼酸(14.5mg，0.093mmol)、K₂CO₃(17.6mg，0.127mmol)和Pd(PPh₃)₄(9.8mg，0.009mmol)于1,4-二噁烷/水(5:1v/v，0.3mL)中的反应得到呈象牙色固体状的3-氟-5-(3-苯基-1H-吡咯并[3,2-b]吡啶-5-基)苯胺(18.1mg，0.060mmol，70％)。接着使用与针对JGJ004所述相同的程序进行乙酰化，得到呈象牙色固体状的所需产物JGJ037(13.8mg，0.040mmol，67％)。¹H NMR(400MHz,CD₃OD)δ8.25(m,2H),7.98(t,J＝1.6Hz,1H),7.88(s,1H),7.79(d,J＝8.4Hz,1H),7.61(d,J＝8.8Hz,1H),7.58(m,2H),7.43(t,J＝7.6Hz,2H),7.21(td,J＝7.6,1.2Hz,1H),2.15(s,3H)；¹³C NMR(100MHz,CD₃OD)δ171.9,164.6(d,J＝239.6Hz),150.2(d,J＝2.9Hz),145.1,144.7(d,J＝8.9Hz),141.7(d,J＝11.5Hz),136.0,130.9,129.4,127.8,127.6,126.6,120.5,117.3,115.3,114.7(d,J＝3.2Hz),109.8(d,J＝23.1Hz),107.3(d,J＝27.0Hz),24.0。

N-(3-氟-5-(3-甲基咪唑并[1,2-a]吡啶-6-基)苯基)乙酰胺，JGJ038。使用与针对JGJ002所述相同的程序，6-溴-3-甲基咪唑并[1,2-a]吡啶(23.4mg，0.111mmol)、3-氟-5-氨基苯基硼酸(18.9mg，0.122mmol)、K₂CO₃(23.0mg，0.166mmol)和Pd(PPh₃)₄(12.8mg，0.011mmol)于1,4-二噁烷/水(5:1v/v，0.3mL)中的反应得到呈浅黄色固体状的3-氟-5-(3-甲基咪唑并[1,2-a]吡啶-6-基)苯胺(13.2mg，0.055mmol，49％)。接着使用与针对JGJ004所述相同的程序进行乙酰化，得到呈象牙色固体状的所需产物JGJ038(8.3mg，0.029mmol，64％)。¹H NMR(400MHz,CD₃OD)δ8.41(s,1H),7.56-7.63(m,3H),7.52(dt,J＝10.8,2.0Hz,1H),7.40(s,1H),7.23(dt,J＝9.6,2.0Hz,1H),2.57(s,3H),2.17(s,3H)；

6-氯-3-(吡啶-4-基)咪唑并[1,2-b]哒嗪。使用与针对6-氯-3-苯基咪唑并[1,2-b]哒嗪所述相同的程序，在100℃下，6-氯-3-碘咪唑并[1,2-b]哒嗪(90.5mg，0.324mmol)、4-吡啶硼酸(43.8mg，0.356mmol)、K₂CO₃(67.1mg，0.486mmol)和Pd(PPh₃)₄(37.4mg，0.032mmol)于1,4-二噁烷/水(5:1v/v，0.7mL)中的反应得到呈浅黄色固体状的所需产物(15.3mg，0.066mmol，20％)。¹H NMR(400MHz,CDCl₃)δ8.72(d,J＝5.2Hz,2H),8.23(s,1H),7.98-8.02(m,3H),7.18(d,J＝9.2Hz,1H)；¹³C NMR(100MHz,CDCl₃)δ150.2,147.3,139.8,135.2,134.9,127.5,126.1,119.9,119.4。

N-(3-氟-5-(3-(吡啶-4-基)咪唑并[1,2-b]哒嗪-6-基)苯基)乙酰胺，JGJ039。使用与针对JGJ002所述相同的程序，6-氯-3-(吡啶-4-基)咪唑并[1,2-b]哒嗪(15.3mg，0.066mmol)、3-氟-5-氨基苯基硼酸(11.3mg,0.073mmol)、K₂CO₃(13.7mg,0.100mmol)和Pd(PPh₃)₄(7.7mg，0.007mmol)于1,4-二噁烷/水(5:1v/v，0.3mL)中的反应得到呈淡黄色固体状的3-氟-5-(3-(吡啶-4-基)咪唑并[1,2-b]哒嗪-6-基)苯胺(10.7mg，0.035mmol，53％)。接着使用与针对JGJ004所述相同的程序进行乙酰化，得到呈浅黄色固体状的所需产物JGJ039(3.8mg,0.011mmol,31％)。¹H NMR(400MHz,CD₃OD)δ8.69(s,2H),8.46(s,1H),8.36(d,J＝5.2Hz,2H),8.20-8.23(m,2H),7.88(d,J＝9.2Hz,1H),7.64(dt,J＝10.8,1.6Hz,1H),7.55(dt,9.6,1.6Hz,1H),2.20(s,3H)。

实施例2：LIN28在人和鼠AML中显著过表达并驱动MLL白血病发生。

对AML和健康造血细胞(HSC，Blood Spot(55))数据库的分析表明，与健康HSC相比时，Lin28b表达在多种AML核型中显著富集(图2A)。另外，还发现Lin28是MLL相关白血病的关键驱动因素(56)。为了进一步表征Lin28/let-7在体内调节AML、LSC增殖和治疗抵抗中的作用，我们将多西环素(DOX)诱导型转基因小鼠模型用于MLL-AF9驱动的AML(iMLL-AF9(57))。在这个模型中，长期HSC(LT-HSC，Lin^-CD34^-Sca-1^-c-Kit⁺CD150⁺CD48^-)衍生的AML母细胞与LSC样表型密切相关，导致特别具有攻击性的阿糖胞苷(Ara-C)耐药性AML(57)。我们将来自非诱导iMLL-AF9小鼠的全骨髓(WBM)细胞或荧光激活细胞分选(FACS)LT-HSC移植到同类小鼠(B6.SJL，CD 45.1)中，并将受体维持在DOX上。在+35天(d)收获的AML细胞的mRNA分析表明，与健康的非DOX诱导的LT-HSC相比，WBM-和LT-HSC衍生的AML细胞(LSC)中Lin28b的表达显著增加(图2B)。此外，在d+60用Ara-C(100mg/kg)治疗后由rLSC产生的复发性AML细胞在Lin28b表达中进一步富集(图2B)。另外，let-7a和let-7b miRNA的水平均与rLSC中增加的Lin28b呈负相关(图2C)(10、39)。我们的研究结果与报道Lin28增加与结肠癌和肝癌干细胞化疗后疾病复发相关的论文一致(22、58)。

实施例3：Lin28抑制克服了复发性AML的治疗抵抗。

由于Lin28是过表达的人AML、LSC和rLSC，我们试图确定通过LN1632进行的遗传Lin28b或药理学Lin28/let-7抑制是否可以消除LSC的增殖，从而克服它们的治疗抵抗。我们用FACS分离LT-HSC，并与DOX一起孵育500个细胞，并同时用shLin28b或其相应的对照shScramble转导它们，或用200nM Ara-C、30μM 1632或对照治疗细胞48小时。虽然Ara-C没有改变集落形成能力细胞数(CFC)，但(shLin28b)的基因沉默或LN1632治疗对Lin28的药理学抑制显著消除了LSC的CFC(图2D)。

实施例4：靶向LIN28/let-7抑制可降低体内AML中的肿瘤负荷。

鉴于基因Lin28b抑制和LN1632治疗消除了LSC的CFC，我们试图探索LN1632在人AML中的作用。通过蛋白质印迹，我们证实在t(8；21)(Kasumi-1)和MLL重排(THP-1)的情况下，Lin28抑制剂LN1632剂量依赖性地降低AML中的LIN28B蛋白水平(图3A)。值得注意的是，蛋白酶体抑制剂硼替佐米能够抑制1632治疗后TF1-α细胞中LIN28B蛋白水平的降低(图3B)，表明1632可能直接靶向LIN28B，导致其蛋白酶体降解。因此，我们研究了靶向Lin28/let-7在体内AML中的抑制作用。我们在健康的C57BL/6小鼠中建立了每隔一天100mg/kg的间歇给药，持续21天，因为它们显示出正常的体重增加、全血细胞计数(CBC)和行为，因此对它们无毒、耐受性良好。因此，我们将THP-1(高LIN28B)细胞或MOLM-13(无LIN28B)皮下(subQ)植入至NSG小鼠中，且在12天后(肿瘤大小＝40mm²)开始每隔一天以100mg/kg IP施用1632。我们的结果显示THP-1中的肿瘤生长显著减少，但MOLM-13异种移植物并非如此(图4A-B)。我们进一步评估了1632在全身性Kasumi-1细胞系异种移植物(LSC样CD34⁺CD38^-、高LIN28B、AML t(8；21))中的作用。持续21天每隔一天IP注射100mg/kg的1632显著延长动物存活期(图4B)。生物发光成像(BLI)证实与媒介物相比，1632治疗的小鼠的肿瘤负荷降低(图4C，图片)。

实施例5：LIN28的靶向抑制可下调原发性AML中的NF-KB和BCL-2。

为了测量LN1632调节基因表达的完整程度，我们在LSC样Kasumi-1细胞中进行了RNA测序(RNAseq)。如图5A中的热图所示，我们发现一整套直接let-7靶基因(包括CCND1/2、E2F2、HMGA1、LIN28B、MYC、NFKB1、MRAS、IL6和STAT5)显著下调(44)(绿色，图5A)。重要的是，我们在三名复发患者的原代AML细胞中证实了这种基因表达模式(与健康WBM相比，LIN28B过表达得到验证)。治疗后72小时，我们发现成熟let-7a/b的剂量依赖性显著上调和包括NFκB1在内的多个let-7靶基因的下调(图5B)。这一点很重要，因为NFkB1通过IL6受let-7调节(23)，与其他BCL-2家族成员(BAX、BCL2L15和BMF，图5A)一起是与LSC存活和AML复发的独特特性相关的特征明确的基因(45、59、60)。与此一致，基因集富集分析揭示了基因表达特征的全局变化，先前显示所述基因表达特征可区分LSC与非自我更新白血病细胞群(61)和不良的儿科AML复发预后(62)(图5C)。我们接下来探讨了LN1632对原代AML细胞的影响。图6A中的CFC测定显示用LN1632治疗会影响CD34⁺AML pt的集落形成。#13细胞明显多于健康的CD34⁺BM细胞。此外，用1632或对照离体治疗AML pt#13细胞会抑制体内AML再增殖能力(图6B-C)。因此，我们的结果表明LN1632对LSC的影响比对HSC的影响更大。

实施例6：示例性化合物的Lin28/let-7抑制活性。

为了提高化合物与LIN28b的结合和抑制能力，我们预测了LN1632与LIN28B的结合模式。LIN28蛋白晶体结构的特写揭示了LN1632与LIN28的CCHC域的GGAG-RNA序列结合口袋的可能结合模式(未显示)。有了这个模型，我们合成了与Lin28b结合能力提高的新型化合物(JGJ002–JGJ008，图8)。使用先前描述的FRET测定，以EGFP标记的LIN28B作为供体，且以BHQ-1猝灭剂标记的pre-let-7a-2(pre-let-7a-2-BHQ1)作为受体来筛选化合物(51)。简而言之，从稳定转导的HEK细胞中收获重组LIN28B-EGFP，并用结合缓冲液(300mM NaCl、25mMHEPES pH 7.2、10μM ZnCl2、1％Odyssey封闭缓冲液、0.05％Tween 20、0.5mM TCEP)稀释以调节理想的FRET猝灭信号强度。蛋白质裂解物和化合物(JGJ001–JGJ008)在100uL稀释的蛋白质裂解物中以1.25uM–20uM范围内的剂量预孵育20分钟。随后将pre-let-7a-2-BHQ1添加到混合物中(以6.25nM)，并使用Tecan Spark Plate Reader(20nM波段，488nM激发，545nM发射读出，30次闪烁/秒)来测量EGFP-LIN28B供体发射。结果表明，特别是化合物JGJ005、JGJ007和JGJ008对FRET信号强度的抑制程度大于原始命中化合物LN1632。根据这些结果，我们得出结论，JGJ005、JGJ007和JGJ008对LIN28B/pre-let-7a2结合的抑制作用比原始化合物LN1632更大(图7)，且因此预期会抑制LIN28与pre-let-7微RNA的结合，从而防止它们的降解。增加的内源性let-7miRNA水平可以靶向一整套LCS和癌症干细胞标志基因，从而抑制肿瘤生长。

实施例7：LN1632的体外和体内活性的评估

使用靶向高通量荧光共振电子转移(FRET)筛选，三唑并哒嗪被鉴定为一类阻断RBP LIN28与pre-let-7miRNA的相互作用的小分子(51)。为了研究LN1632如何与LIN28蛋白相互作用，使用LIN28B pre-let-7a复合物(PDB ID：5UDZ)的晶体结构进行了计算机模拟分子对接研究(28)。基于LN1632在FRET测定中竞争LIN28B-pre-let-7复合物的能力，假设结合位点可能与LIN28的ZKD RNA结合基序共享。对接结果表明，LN1632与最初被pre-let-7a的GGAG基序占据的口袋结合。结果还表明，LN1632的苯环的酰胺基团通过与LIN28B的氢键相互作用位于锌离子结合位点附近的口袋中。(图8A)。

为了测试构效关系，合成了39个LN1632相关类似物(JGJ001-39)，并测量了它们抑制LIN28B-RNA结合活性和上调成熟let-7miRNA水平的效力和特异性。通过进行先前公布的FRET测定，观察到JGJ023、JGJ026、JGJ032和JGJ034对LIN28的RNA结合能力的抑制显著大于化合物LN1632(图8B)。另外，在HepG2细胞中，JGJ023、JGJ026和JGJ034以显著低于LN1632的剂量上调成熟的let-7miRNA，如通过双荧光素酶报告基因测定所测量(图8C)。如前所述地进行双荧光素酶报告基因测定(89)。

为了确定LN1632调节基因表达的程度，在人Kasumi-1 AML细胞中进行了RNA测序。图9A-9B中的数据显示用LN1632治疗细胞显著下调标志_MYC-目标_V1基因特征(70)、白血病干细胞和复发预后特征(61、62)的基因。此外，独创性途径分析预测上游信号传导分子IL6和MYC的抑制(图9C)。

接下来，研究了LN1632在体内的肿瘤抑制作用。在健康雌性C57Bl/6小鼠中评估了最大耐受剂量(MTD)。每天100mg/kg给药持续+12天，接着进行每隔一天给药方案持续+9天的耐受性良好，且小鼠的全血细胞计数(CBC)曲线正常，没有任何白细胞减少症或血小板减少症，只有轻度贫血和正常体重增加(图10A-B)。

随后，评估了LN1632在体内癌症中的肿瘤抑制作用。将表达高LIN28B的THP-1AML细胞(2x10⁶个细胞)植入NSGS小鼠(基质胶中的细胞混悬液，3:1)并在d+12或d+8(肿瘤大小＝50mm²)开始每天IP注射100mg/kg LN1632。结果显示注射后19天肿瘤生长显著降低(图11A)。这些结果与最近的一份报告一致，所述报告显示LN1632选择性抑制表达LIN28B的尤文氏肉瘤(EwS)但不抑制LIN28B耗尽的EwS(72)和表达LIN28B的TNBC细胞(73)。还评估了LN1632在全身性Kasumi-1异种移植物中的作用。持续21天每隔一天IP注射100mg/kg的LN1632显著延长动物存活期(图11B)。生物发光成像(BLI)证实与媒介物相比，LN1632治疗的小鼠的肿瘤负荷降低(图11B，图片)。如前所述，还比较了LN1632对阿糖胞苷化疗(Ara-C)的影响(74)。将THP-1AML细胞皮下植入(1.5x10⁶个细胞，高LIN28B)于NSGS小鼠中。在AML细胞植入后+d3开始每天IP注射100mg/kg LN1632、60mg/kg阿糖胞苷化疗(Ara-C)或媒介物，并持续到媒介物组达到最大允许肿瘤大小(250mm²)。与Ara-C或媒介物治疗的小鼠相比，LN1632治疗的小鼠表现出增加的AML肿瘤增殖抑制(图11C)。

由于LN1632在体内癌症模型中显示出显著抗增殖作用，因此评估了LN1632的其他功能相互作用配偶体。进行如(75)中所述的质谱细胞热位移测定(MS-CETSA，图12A)，以及使用生物素化LN1632的免疫沉淀(图12B)。这些实验证明LN1632与其他RNA结合蛋白特别是前mRNA加工因子31相互作用(图12C，PRPF31)。PRPF31是剪接体复合物的一种组分，且在胚胎干细胞中显著过表达(76)，且在分化过程中下调(77)。PRPF31被募集到其高度保守的Nop域协调U4 snRNA–15.5K蛋白质相互作用的内含子。随后，PRPF31通过同时与PRPF6相互作用来稳定U4/U6.U5 tri-snRNP，并诱导剪接体复合物转变为激活状态(78)。

如图13中所示，PRPF31过表达与各种肿瘤(包括肺腺癌和胃腺癌以及三阴性乳腺癌(TNBC))的不良预后相关(图13)。U4/U6.U5 tri-snRNP复合物的组分的失调已被证明可驱动结直肠癌(79)、TNBC(80-82)、肝细胞癌(83)和肺癌的肿瘤发生。功能失调的RNA剪接和剪接因子的过表达是肿瘤细胞存活的重要机制，并且与癌症的许多标志交叉(84-86)。新兴研究表明，在一些实施方案中，剪接体的组分对于癌蛋白MYC驱动癌症进展至关重要。不希望受任何特定理论束缚，因为MYC是人癌症中最常扩增的癌基因并且在恶性转化中起关键作用，在一些实施方案中，利用剪接体并尤其靶向PRPF31和U4/U6剪接体复合物的疗法将非常有吸引力。

MDA-MB-231TNBC细胞用于评估LN1632是否靶向PRPF31。PRPF31的过表达增加了细胞增殖，而PRPF31的遗传沉默显著减少了7天内评估的细胞数量(图14A)。重要的是，PRPF31过表达(pLenti-C-mGFP-P2A-Puro-PRPF31,Origene)挽救了LN1632的抗增殖作用，表明LN1632靶向PRPF31。此外，通过短发夹介导的RNA(shRNA，ThermoFisher Scientific，TRCN0000001180)对PRPF31的基因沉默消除了LN1632的促凋亡作用。总之，这些结果表明LN1632靶向PRPF31(图14A)。

为了测试LN1632和其新型类似物是否影响癌细胞生长，在TNBC(图14B-D)、去势抵抗性前列腺癌细胞(CRPC，图15A-C)和结直肠癌细胞(CRC，图15A-C)中进行细胞活力和细胞计数测定。数据显示LN1632以及新型类似物JGJ034和JGJ037在MYC驱动的癌症(包括TNBC、CRPC、肺和结直肠腺癌细胞)中优先减少增殖并诱导细胞凋亡(表1)。

为了测量细胞活力，进行了细胞滴度发光(CTG，Promega CellTiter-Glo 2.0测定)和MTT测定(SigmaAldrich，细胞增殖试剂盒I)。简而言之，在接种于96孔板中之前，细胞被血清饥饿过夜。孵育24小时后，细胞用浓度增加的JGJ化合物处理96小时。在测定读出时，添加CellTiter-Glo试剂并在室温下孵育10分钟后测量发光。对于MTT测定，添加MTT标记试剂并孵育4小时。随后，去除培养基且添加50μL DMSO以溶解晶体，且在570nm处测量吸光度。细胞活力计算为(样品-背景)/(对照-背景)。目前的标准护理药物恩杂鲁胺、帕博西尼和西妥昔单抗用作比较对照。

表1

所选类似物的体外ADME特征总结在表2和表3中。

表2.

表3.

实施例8：LN1632类似物(JGJ化合物)的合成

一般实验方法

除非另有说明，否则所有反应均在氩气气氛下进行。在氩气气氛下从苯醌羰自由基中蒸馏出四氢呋喃(THF)。在氩气气氛下从氢化钙中蒸馏出二氯甲烷和三乙胺。所有其他溶剂和试剂均根据文献程序纯化或购自Sigma-Aldrich、Acros、Oakwood和FisherScientific Co.。¹H NMR光谱在400或500MHz下记录，并相对于氘化溶剂信号进行报告。¹HNMR光谱的数据报告如下：化学位移(δppm)、多重性、耦合常数(Hz)和积分。拆分模式指定如下：s，单峰；d，二重峰；t，三重峰；q，四重峰；m，多重峰；和br，宽峰。在100或125MHz处记录¹³CNMR光谱。¹³C NMR光谱的数据以化学位移报告。化学位移以百万分率(ppm，δ)报告。使用预涂硅胶片进行薄层色谱(TLC)。使用高锰酸钾或硝酸铈铵染色进行视觉检测。使用SilicaFlash P60(60A，40-63μm)硅胶与压缩空气进行快速色谱。

3-氯-6-肼基哒嗪。

6-氯-3-甲基-[1,2,4]三唑并[4,3-b]哒嗪。

3-甲基-6-苯基-[1,2,4]三唑并[4,3-b]哒嗪，JGJ002。将6-氯-3-甲基-[1,2,4]三唑并[4,3-b]哒嗪(20mg，0.119mmol)、苯基硼酸(14.5mg，0.119mmol)、K₂CO₃(24.6mg，0.178mmol)和Pd(PPh₃)₄(13.6mg，0.012mmol)于1,4-二噁烷(0.3mL)和水(30μL)中的混合物在110℃下加热18小时。将反应混合物冷却至23℃后，用水和EtOAc稀释。分离有机层并用EtOAc萃取水层。合并的有机层用盐水洗涤，经无水MgSO₄干燥，过滤并减压浓缩。将所得粗残余物通过快速柱色谱(二氯甲烷:MeOH＝10:1)纯化以获得呈象牙色固体状的所需产物JGJ002(20.4mg，0.098mmol，82％)。¹H NMR(400MHz,CDCl₃)δ.8.13(d,J＝9.2Hz,1H),7.98-8.01(m,2H),7.54-7.56(4H,m),2.88(s,3H)¹³C NMR(100MHz,CDCl₃)δ153.4,147.5,143.4,134.4,130.9,129.2,127.2,124.9,118.8,9.8。

3-(3-甲基-[1,2,4]三唑并[4,3-b]哒嗪-6-基)苯胺，JGJ003。使用与上述相同的程序，6-氯-3-甲基-[1,2,4]三唑并[4,3-b]哒嗪(30mg，0.178mmol)、3-硝基苯基硼酸(35.6mg，0.214mmol)、K₂CO₃(36.9mg，0.267mmol)和Pd(PPh₃)₄(20.6mg,0.018mmol)于1,4-二噁烷(0.3mL)和水(30μL)中的反应得到3-甲基-6-(3-硝基苯基)-[1,2,4]三唑并[4,3-b]哒嗪(19.7mg，0.077mmol，43％)。¹H NMR(400MHz,CDCl₃)δ.8.86(t,J＝2.0Hz,1H),8.39(m,2H),8.24(d,J＝9.6Hz,1H),7.71(t,J＝8.0Hz,1H),7.62(d,J＝9.6Hz,1H),2.91(s,3H)¹³CNMR(100MHz,CDCl₃)δ151.1,148.8,147.7,143.2,136.1,132.8,130.4,125.8,125.4,122.2,118.0,9.9。然后将硝基化合物(19.4mg，0.076mmol)和SnCl₂(72.1mg，0.380mmol)于EtOH(0.2mL)中的混合物在回流下加热1小时。将混合物冷却至23℃后，通过硅藻土垫过滤并用EtOAc洗涤。向混合物中添加饱和NaHCO₃溶液并用EtOAc萃取。合并的有机层用盐水洗涤，经无水MgSO₄干燥，过滤并减压浓缩。将所得粗残余物通过快速柱色谱(二氯甲烷:MeOH＝10:1)纯化以获得呈浅黄色固体状的所需产物JGJ003(10mg，0.044mmol，63％)。¹H NMR(400MHz,CDCl₃)δ8.10(d,J＝10.0Hz,1H),7.51(d,J＝10.0Hz,1H),7.26-7.32(m,3H),6.83-6.86(m,1H),2.86(s,3H)；¹³C NMR(100MHz,CDCl₃)δ153.5,147.3(两个峰重叠),143.4,135.2,130.0,124.4,119.1,117.4,117.2,113.1,9.7。

6-氯-3-甲基咪唑并[1,2-b]哒嗪。将6-氯哒嗪-3-胺(500mg，3.860mmol)和2-溴丙醛(粗物质，793mg,5.789mmol)于EtOH(10mL)中的混合物在回流下加热4小时。将混合物冷却至23℃后，将其浓缩并用EtOAc萃取。合并的有机层用盐水洗涤，经无水MgSO₄干燥，过滤并减压浓缩。粗残余物通过快速柱色谱(二氯甲烷:MeOH＝15:1)纯化，得到呈浅棕色固体状的所需产物(172mg，1.026mmol，27％)。¹H NMR(400MHz,CDCl₃)δ7.87(d,J＝9.6Hz,1H),7.56(s,1H),6.99(1H,J＝9.6Hz,1H),2.55(s,3H)。光谱数据与文献数据相符。[参考文献：Chem.Pharm.Bull.1996,44(1),122-131。

3-(3-甲基咪唑并[1,2-b]哒嗪-6-基)苯胺，JGJ006。使用与针对JGJ003所述相同的程序，3-甲基-6-(3-硝基-苯基)咪唑并[1,2-b]哒嗪(54.4mg，0.214mmol)和SnCl₂(202.8mg，1.070mmol)于EtOH(0.5mL)中的反应得到呈淡黄色固体状的所需产物JGJ006(27.2mg，0.107mmol，50％)。¹H NMR(400MHz,CDCl₃)δ7.92(d,J＝9.2Hz,1H),7.56(d,J＝0.8Hz,1H),7.38(d,J＝9.6Hz,1H),7.28-7.34(m,3H),6.79(ddd,J＝7.6,2.0,1.2Hz,1H),3.86(br s,2H),2.61(d,J＝0.8Hz,3H)；¹³C NMR(100MHz,CDCl₃)δ151.3,147.0,138.1,137.0,132.0,129.8,125.3,125.1,117.3,116.5,114.8,113.3,8.7。

N-(3-(3-甲基咪唑并[1,2-b]哒嗪-6-基)苯基)乙酰胺，JGJ007。使用与针对JGJ004所述相同的程序，3-(3-甲基咪唑并[1,2-b]哒嗪-6-基)苯胺(JGJ006，23.3mg，0.104mmol)、三乙胺(12.6mg，0.125mmol)和乙酰氯(9mg，0.114mmol)于二氯甲烷(0.5mL)中的反应得到呈象牙色固体状的所需产物JGJ007(16.5mg，0.067mmol，60％)。¹H NMR(400MHz,CDCl₃)δ9.12(br s,NH),8.23(s,1H),7.82(d,J＝9.6Hz,1H),7.61-7.69(m,2H),7.53(s,1H),7.36(t,J＝8.0Hz,1H),7.30(d,J＝9.6Hz,1H),2.51(s,3H),2.21(s,3H)；¹³CNMR(100MHz,CDCl₃)δ169.2,150.8,139.1,137.8,136.3,131.7,129.4,125.4,124.8,122.4,121.2,118.3,114.7,24.4,8.5。

5-氯-3-丙基-1H-吡咯并[3,2-b]吡啶。使用与针对5-氯-3-苯基-1H-吡咯并[3,2-b]吡啶所述相同的程序，2-氯-5-肼基吡啶(71.8mg，0.5mmol)和戊醛(45.1mg，0.524mmol)于4％w/wH₂SO₄(5mL)水溶液中的反应提供呈浅黄色固体状的所需产物(56.7mg,0.291mmol,58％)。¹H NMR(400MHz,CDCl₃)δ8.01(br s,1H),7.61(d,J＝8.0Hz,1H),7.26(s,1H),7.08(d,J＝8.0Hz,1H),2.77(t,J＝7.6Hz,2H),1.73(m,2H),0.94(t,J＝7.2Hz,3H)；¹³CNMR(100MHz,CDCl₃)δ145.0,143.4,127.8,126.3,120.9,117.2,116.6,26.8,23.0,14.0。

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以引用的方式并入

本文提及的所有出版物和专利都以引用的方式整体并入本文中，就如同每个单独的出版物或专利被具体地和单独地指示以引用的方式并入一般。在有冲突的情况下，将以本申请(包括本文中的任何定义)为准。

等效方案

虽然已经讨论了本发明的具体实施方案，但是以上说明书是说明性的，并非限制性的。在阅读本说明书和以下权利要求书后，本领域技术人员将清楚本发明的许多变化。本发明的完整范围应该通过参考权利要求书连同其等效物的完整范围，以及本说明书连同此类变化来确定。

Claims

1.一种式(I)化合物：

或其药学上可接受的盐，其中：

选自

X选自N和C；

X¹、X³和X⁴各自独立地选自N和C-R^x；

R²选自氢、卤素、NO₂、N(R)₂、OR、N(R)C(O)R、CO₂R、C(O)N(R)₂和任选取代的C_1-6脂族基；

每个R^x独立地选自氢、卤素或任选取代的C_1-6脂族基；

n为0-3。

2.根据权利要求1所述的化合物，其中所述化合物具有式(I-a)：

或其药学上可接受的盐。

3.根据权利要求1所述的化合物，其中所述化合物具有式(I-b)：

或其药学上可接受的盐。

4.根据权利要求2所述的化合物，其中所述化合物具有式(I-a-i)或式(I-a-ii)：

或其药学上可接受的盐。

5.根据权利要求3所述的化合物，其中所述化合物具有式(I-b-i)或式(I-b-ii)：

或其药学上可接受的盐。

6.根据权利要求1至5中任一项所述的化合物，其中所述化合物不为

7.根据权利要求1至6中任一项所述的化合物，其中环B是具有1-3个独立地选自氮、氧和硫的杂原子的5至6元杂芳基环。

8.根据权利要求1至6中任一项所述的化合物，其中环B为吡啶基。

9.根据权利要求1至6中任一项所述的化合物，其中所述化合物选自式(I-a-iii)、(I-a-iv)、(I-a-v)、(I-b-iii)、(I-b-iv)和(I-b-v)的化合物:

10.根据权利要求1、2、4和7至9中任一项所述的化合物，其中X³为N。

11.根据权利要求1至10中任一项所述的化合物，其中R¹为氢。

12.根据权利要求1至10中任一项所述的化合物，其中R¹为选自以下的任选取代的基团：C_1-6脂族基、苯基和具有1-3个独立地选自氮、氧和硫的杂原子的5至6元杂芳基环。

13.根据权利要求12所述的化合物，其中R¹为C_1-6脂族基。

14.根据权利要求13所述的化合物，其中R¹为甲基。

15.根据权利要求14所述的化合物，其中R¹为丙基。

16.根据权利要求12所述的化合物，其中R¹为苯基。

17.根据权利要求12所述的化合物，其中R¹为具有1-3个独立地选自氧、氮和硫的杂原子的5至6元杂芳基环。

18.根据权利要求17所述的化合物，其中R¹为具有1-3个独立地选自氮、氧和硫的杂原子的5元杂芳基环。

19.根据权利要求17所述的化合物，其中R¹为具有1-3个氮原子的6元杂芳基环。

20.根据权利要求19所述的化合物，其中R¹为具有1-2个氮原子的6元杂芳基环。

21.根据权利要求20所述的化合物，其中R¹选自

22.根据权利要求1至21中任一项所述的化合物，其中R^x为氢。

23.根据权利要求1至21中任一项所述的化合物，其中R^x为卤素或任选取代的C_1-6脂族基。

24.根据权利要求22所述的化合物，其中R^x为任选取代的C_1-6脂族基。

25.根据权利要求23所述的化合物，其中R^x为C_1-6脂族基。

26.根据权利要求25所述的化合物，其中R^x为甲基。

27.根据权利要求1至26中任一项所述的化合物，其中R²选自卤素、NO₂、N(R)₂、OR、N(R)C(O)R、CO₂R、C(O)N(R)₂和任选取代的C_1-6脂族基。

28.根据权利要求27所述的化合物，其中R²为卤素。

29.根据权利要求28所述的化合物，其中R²为氟。

30.根据权利要求27所述的化合物，其中R²为NO₂。

31.根据权利要求27所述的化合物，其中R²为OR。

32.根据权利要求31所述的化合物，其中R²为OCH₃。

33.根据权利要求27所述的化合物，其中R²为N(R)₂。

34.根据权利要求33所述的化合物，其中R²为NH₂。

35.根据权利要求27所述的化合物，其中R²为N(R)C(O)R。

36.根据权利要求35所述的化合物，其中R²选自NHC(O)CH₃和N(CH₃)C(O)CH₃。

37.根据权利要求27所述的化合物，其中R²为CO₂R。

38.根据权利要求37所述的化合物，其中R²为CO₂H。

39.根据权利要求27所述的化合物，其中R²为C(O)N(R)₂。

40.根据权利要求39所述的化合物，其中R²为C(O)NHCH₃。

41.根据权利要求27所述的化合物，其中R²为任选取代的C_1-6脂族基。

42.根据权利要求41所述的化合物，其中R²为CF₃。

43.根据权利要求1至42中任一项所述的化合物，其中R为氢。

44.根据权利要求1至42中任一项所述的化合物，其中R为选自以下的任选取代的基团：C_1-6脂族基；3至7元单环碳环；具有1-3个独立地选自氮、氧和硫的杂原子的3至7元单环杂环；苯基；具有1-3个独立地选自氮、氧和硫的杂原子的5至6元杂芳基环。

45.根据权利要求42所述的化合物，其中R为任选取代的C_1-6脂族基。

46.根据权利要求45所述的化合物，其中R为C_1-6脂族基。

47.根据权利要求46所述的化合物，其中R为甲基。

48.根据权利要求1至47中任一项所述的化合物，其中R³为氢。

49.根据权利要求1至47中任一项所述的化合物，其中R³为选自以下的任选取代的基团：C_1-6脂族基；3至7元单环碳环；具有1-3个独立地选自氮、氧和硫的杂原子的3至7元单环杂环；苯基；具有1-3个独立地选自氮、氧和硫的杂原子的5至6元杂芳基环。

50.根据权利要求49所述的化合物，其中R³为任选取代的C_1-6脂族基。

51.根据权利要求49所述的化合物，其中R³为C_1-6脂族基。

52.根据权利要求51所述的化合物，其中R³为甲基。

53.根据权利要求1至52中任一项所述的化合物，其中n为0。

54.根据权利要求1至52中任一项所述的化合物，其中n为1。

55.根据权利要求1至52中任一项所述的化合物，其中n为2。

56.根据权利要求1至55中任一项所述的化合物，其中所述化合物为：

或其药学上可接受的盐。

57.根据权利要求1所述的化合物或其药学上可接受的盐，其中所述化合物具有式(II)：

其中：

R¹为C_1-6烷基或C_3-6环烷基；

R²为H、氨基、硝基或酰氨基；且

X¹、X³和X⁴各自独立地为N或CH。

58.根据权利要求57所述的化合物，其中X¹、X³和X⁴中的至少一个为N。

59.根据权利要求57或58所述的化合物，其中X¹、X³和X⁴中的至少两个为N。

60.根据权利要求57至59中任一项所述的化合物，其中X¹、X³和X⁴中的每一个为N。

61.如权利要求57至60中任一项所述的化合物，其中所述化合物不为

62.根据权利要求57至61中任一项所述的化合物，其中R¹为未取代的C_1-6烷基。

63.根据权利要求57至61中任一项所述的化合物，其中R¹为任选被卤素取代的甲基。

64.根据权利要求57至61中任一项所述的化合物，其中R¹为未取代的甲基。

65.根据权利要求57至61中任一项所述的化合物，其中R¹为C_2-6烷基或C_3-6环烷基。

66.根据权利要求57至65中任一项所述的化合物，其中所述化合物为：

或其药学上可接受的盐。

67.根据权利要求66所述的化合物，其中所述化合物为JGJ002、JGJ003、JGJ004、JGJ005、JGJ007或JGJ008，或其药学上可接受的盐。

68.根据权利要求57至67中任一项所述的化合物，其中：

R²为H、氨基、硝基或–N(R⁵)C(O)R⁶，

R⁵为H或C_1-5烷基，且

R⁶为C_1-6烷基。

69.根据权利要求68所述的化合物，其中R⁵在每次出现时为H或CH₃。

70.根据权利要求68所述的化合物，其中R²为–N(R⁴)C(O)R⁵；R⁵为H；且R⁶为C_1-6烷基。

71.根据权利要求68至70中任一项所述的化合物，其中X¹和X³各自为N；且X⁴为CH。

72.根据权利要求68所述的化合物，其中R²为H、氨基或硝基。

73.根据权利要求57至68中任一项所述的化合物，其中R²为NO₂或–N(R⁵)C(O)R⁶。

74.根据权利要求57至73中任一项所述的化合物，其中所述化合物为

或其药学上可接受的盐。

75.根据权利要求57至74中任一项所述的化合物，其中X¹和X³各自为N，且X⁴为CH。

76.根据权利要求75所述的化合物，其中R²为–N(R⁵)C(O)R⁶。

77.根据权利要求75所述的化合物，其中所述化合物为：

或其药学上可接受的盐。

78.根据权利要求77所述的化合物，其中所述化合物为JGJ007或JGJ088，或其药学上可接受的盐。

79.一种药物组合物，所述药物组合物包括权利要求1至56中任一项所述的化合物和药学上可接受的赋形剂。

80.一种药物组合物，所述药物组合物包括权利要求57至78中任一项所述的化合物和药学上可接受的赋形剂。

81.一种抑制细胞中的Lin28的方法，所述方法包括使细胞与权利要求57至78中任一项所述的化合物或组合物接触，所述细胞包括Lin28。

82.如权利要求81所述的方法，其中所述细胞为癌细胞，例如急性髓性白血病(AML)细胞。

83.一种治疗癌症的方法，所述方法包括向有需要的受试者施用权利要求57至78中任一项所述的化合物或组合物。

84.如权利要求83所述的方法，其中所述受试者患有癌症，例如急性髓性白血病。

85.一种治疗癌症的方法，所述方法包括向罹患癌症或表现出癌症症状的受试者施用根据权利要求1至78中任一项所述的化合物，或根据权利要求79或80所述的药物组合物。

86.根据权利要求85所述的方法，其中所述治疗为或包括改善所述癌症的一种或更多种症状。

87.根据权利要求85或86所述的方法，其中所述癌症为血液癌症。

88.根据权利要求87所述的方法，其中所述血液癌症为急性髓性白血病。

89.根据权利要求85至88中任一项所述的方法，其中所述化合物或药物组合物以已确定实现癌细胞抑制和/或减少的癌细胞增殖的量或根据已确定实现癌细胞抑制和/或减少的癌细胞增殖的给药方案施用。

90.根据权利要求89所述的方法，其中所述癌细胞包括癌症干细胞。

91.根据权利要求90所述的方法，其中所述癌症干细胞包括白血病干细胞(LSC)。

92.一种调节剪接的方法，所述方法包括使具有剪接能力的系统与根据权利要求1至78中任一项所述的化合物接触。

93.一种方法，所述方法包括：

使具有剪接能力的系统与权利要求1至78中任一项所述的化合物接触；以及

在所述系统中评估：

(i)剪接产物(例如剪接的转录物)的存在或水平；

(ii)RNA的表达或定位；和/或

(iii)多肽的表达或折叠。

94.一种调节具有剪接能力的系统中的剪接的方法，所述方法通过使所述系统与权利要求1至78中任一项所述的化合物接触，从而观察到以下一者或更多者：

(i)减少的RNA剪接；

(ii)改变的RNA表达或定位；和/或

(iii)改变的多肽表达或折叠。

95.一种方法，所述方法包括使具有剪接能力的系统与权利要求1至78中任一项所述的化合物接触，其中所述化合物的特征在于当与癌细胞接触时，所述化合物相对于其不存在时观察到的所述癌细胞的增殖减少所述增殖。

96.根据权利要求92至95中任一项所述的方法，其中与不存在所述化合物时相比，当存在所述化合物时剪接减少。

97.根据权利要求92至96中任一项所述的方法，所述方法还包括与参考条件相比评估所述系统中的剪接。

98.根据权利要求97所述的方法，其中所述参考条件为不存在所述化合物。

99.根据权利要求97所述的方法，其中所述参考条件为存在对照化合物。

100.根据权利要求97所述的方法，其中所述参考条件为历史条件。

101.根据权利要求92至100中任一项所述的方法，其中所述化合物抑制剪接机构组分的一种或多种属性和/或其中所述化合物抑制剪接机构组分之间或之中的相互作用。

102.根据权利要求92至101中任一项所述的方法，其中所述化合物直接结合至一种或多种剪接机构组分或其复合物。

103.根据权利要求101或102所述的方法，其中所述剪接机构组分为RNA组分。

104.根据权利要求101或102所述的方法，其中所述剪接机构组分为多肽组分。

105.根据权利要求101或102所述的方法，其中所述剪接机构组分选自由以下组成的组：RNA组分、多肽组分、以及其复合物或其之间的复合物。

106.根据权利要求103或105所述的方法，其中所述RNA组分为或包括小核RNA(snRNA)。

107.根据权利要求106所述的方法，其中所述snRNA选自由以下组成的组：U1、U2、U4、U5和U6。

108.根据权利要求104或105所述的方法，其中所述多肽组分为或包括Sm多肽或Lsm多肽。

109.根据权利要求104、105或108中任一项所述的方法，其中所述多肽组分选自由以下组成的组：Prp3、Prp31、Prp4、CypH、15.5K、Prp8、Brr2、Snu114、Prp6、Prp28、40K、Dib1、Snu66、Sad1和27K。

110.根据权利要求109所述的方法，其中所述剪接机构组分包括Prp31多肽。

111.根据权利要求105所述的方法，其中所述剪接机构组分包括U4 snRNA、U6snRNA和Prp31多肽。

112.根据权利要求92至111中任一项所述的方法，其中所述化合物抑制以下各者之间的相互作用：U6 snRNA与Prp31多肽；或U4 snRNA与Prp31多肽。

113.根据权利要求92至112中任一项所述的方法，其中所述化合物抑制Prp31多肽的活性。

114.根据权利要求92至113中任一项所述的方法，其中所述接触发生在体外、离体或体内。

115.根据权利要求92至114中任一项所述的方法，其中所述具有剪接能力的系统为癌细胞。

116.根据权利要求115所述的方法，其中所述癌细胞包括癌症干细胞。

117.根据权利要求116所述的方法，其中所述癌症干细胞包括白血病干细胞(LSC)。