CN115073442A - 含双硫键化合物、及其制法和药物组合物与用途 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一类双硫键衍生物、及其制法和药物组合物与用途。具体而言，涉及通式I所示的双硫键衍生物，其可药用盐，其立体异构体及其制备方法，含有一个或多个这化合物的组合物，和该类化合物在治疗与PD‑1/PD‑L1信号通路和或IDO1有关的癌症方面的用途。属于药物化学领域。
Description
技术领域
本发明公开了一类含双硫键化合物、及其制法和药物组合物与用途。具体而言，涉及通式I所示的含双硫键化合物，其可药用盐，其立体异构体及其制备方法，含有一个或多个这化合物的组合物，和该类化合物在治疗与PD-1/PD-L1信号通路和或IDO1有关的癌症方面的用途。属于药物化学领域。
背景技术
随着对肿瘤免疫研究的深入，人们发现肿瘤微环境可以保护肿瘤细胞不被机体免疫系统识别和杀伤，肿瘤细胞的免疫逃逸在肿瘤发生、发展中扮演了非常重要的角色。2013年Science杂志将肿瘤免疫治疗列为十大突破之首，再次让免疫治疗成为肿瘤治疗领域的“焦点”。机体免疫细胞的激活或抑制是通过正性信号和负性信号来调节，其中程序性死亡分子1(programmed death 1，PD-1)/PD-1配体(PD-1ligand，PD-L1)便是负性免疫调节信号，抑制了肿瘤特异性CD8+T细胞的免疫活性，介导了免疫逃逸。
肿瘤细胞所具有的逃避免疫系统的能力，是通过在其表面产生的程序性死亡配体(PD-L1)结合到T细胞的PD-1蛋白上实现的。机体内的肿瘤微环境会诱导浸润的T细胞高表达PD-1分子，肿瘤细胞会高表达PD-1的配体PD-L1和PD-L2，导致肿瘤微环境中PD-1通路持续激活，T细胞功能被抑制而不能发现肿瘤以至于不能向免疫系统发出需要攻击肿瘤和杀伤肿瘤细胞的治疗。PD-1抗体是针对PD-1或者PD-L1的一种抗体蛋白，使得前两种蛋白不能发生结合，阻断这一通路，部分恢复T细胞的功能，使这些细胞能够继续杀伤肿瘤细胞。
基于PD1/PDL1的免疫疗法是当前备受瞩目的新一代免疫疗法，旨在利用人体自身的免疫系统抵御肿瘤，通过阻断PD-1/PD-L1信号通路诱导凋亡，具有治疗多种类型肿瘤潜力。最近，一系列令人惊喜的研究结果证实PDl/PD-Ll抑制性抗体对多种肿瘤具有强大的抗瘤活性，格外引人注目。2014年9月4日美国默克的
(pembrolizumab)成为FDA批准的首例PD-1单抗用于治疗对其它药物治疗无效的晚期或无法切除的黑色素瘤患者。目前，默沙东正在30多种不同类型的癌症中调查Keytruda的潜力，包括各类血液癌症、肺癌、乳腺癌、膀胱癌、胃癌、头颈部癌症。2014年12月22日，制药巨头百时美施贵宝公司不负重望，率先发力，获得美国食品药品监督管理局(FDA)加速批准，其研发的抗癌免疫疗法药物nivolumab以Opdivo的商品名上市，用于治疗对其它药物没有应答的不可切除的或转移性黑色素瘤患者，是继默沙东Keytruda之后第二个在美国上市的PD-1抑制剂。FDA于2015年3月4日批准了nivolumab用于治疗在经铂为基础化疗期间或化疗后发生疾病进展的转移性鳞性非小细胞肺癌。根据默沙东公布的Keytruda(pembrolizumab)治疗实体瘤的一项Ib期KEYNOTE-028研究数据，Keytruda治疗在25例胸膜间皮瘤(pleuralmesothelioma，PM)患者中取得了28％的总缓解率(ORR)，并有48％的患者病情稳定，疾病控制率达到了76％。对当前任何已获批药物均无治疗反应的晚期霍奇金淋巴瘤(HL)患者，接受默沙东Keytruda和百时美Opdvio治疗后，能够达到完全缓解。在2015AACR年会上，约翰霍普金斯基梅尔癌症中心(Kimmel Cancer Center)的肿瘤内科学副教授Leisha A.Emens,MD,PhD做出的报道指出，罗氏的MPDL3280A这一具有抗PD-L1作用的单克隆抗体，在晚期三阴性乳腺癌中表现出了持久的疗效。
吲哚胺2,3-双加氧酶1(IDO1)是一种细胞内含亚铁血红素的酶，广泛分布于人和动物的许多组织和细胞中，催化色氨酸沿犬尿氨酸途径(KP)分解代谢，导致色氨酸水平降低，犬尿氨酸水平升高，犬尿酸直接抑制NK细胞和T细胞的增殖和功能。肿瘤组织IDO1的高表达，预示患者对放化疗的抵抗、肿瘤对免疫的抑制、尤其是针对免疫检查点治疗的抵抗等。Incyte开发的Epacadostat是一种口服、强效、和选择性的小分子IDO1抑制剂，在与PD-1单抗Keytruda联合治疗晚期黑色素瘤的I/II期临床试验数据让人鼓舞。但2018年默沙东宣布三期临床试验提前终止，相比单独使用Keytruda，Epacadostat与Keytruda并不能改善无进展生存时间。
虽然肿瘤免疫治疗被认为是靶向治疗后癌症治疗的革命。但是，单抗治疗药物有其本身的缺陷：易被蛋白酶分解，因而在体内不稳定，不能口服；易产生免疫交叉反应；产品质量不易控制，制作技术要求高；大量制备和纯化比较困难，生产成本高；使用不方便，只能注射或点滴。所以，PDl/PD-Ll相互作用小分子抑制剂是肿瘤免疫治疗的更佳选择。
本发明基于PD-L1和IDO1作为肿瘤免疫治疗中的不同作用机制靶标，理性设计并合成了一系列特异性靶向肿瘤细胞及肿瘤微环境的PD-L1/IDO1双靶点小分子抑制剂前药。其结构包括三部分，一端是PD-L1小分子抑制剂结构基团，另一端是IDO1小分子抑制剂结构基团，中间是一个只有在肿瘤微环境或肿瘤细胞内才能够断裂的连接链(如双硫键或某些肽)。该前药只在肿瘤组织或肿瘤细胞内释放出PD-L1小分子抑制剂和IDO1小分子抑制剂，因此能够有效降低药物的靶点副作用。鉴于PD-L1和IDO1导致肿瘤免疫逃逸的机制不同，且研究已表明肿瘤组织中IDO1的高表达正是导致肿瘤免疫治疗抵抗的原因之一，PD-L1和IDO1的双重抑制不仅解决耐药问题，也能提高患者应答率，扩大获益人群，其协同作用也使治疗效果更佳，是肿瘤免疫治疗的理想搭配。IDO1和PD-L1双重抑制剂代替联合用药或许能够改善无进展生存期和其总生存率，提高免疫治疗效果。
发明内容
本发明解决的技术问题是提供一种具有能够同时抑制PD-Ll和IDO1，并且能够特异性靶向肿瘤组织的结构通式I的含双硫键化合物，以及其立体异构体或其可药用盐，其制备方法、药物组合物和其在制备预防或治疗与PDl/PD-Ll信号通路和或IDO1有关的肿瘤药物中的用途。
为解决本发明的技术问题，本发明提供如下技术方案：
本发明技术方案的第一方面是提供一类如通式I所示的含双硫键化合物及其立体异构体以及其可药用盐
式中
X选自:
其中R1选自
R2选自甲基、氟、氯、溴、氰基,R3选自2-氰基吡啶-4-亚甲基、5-氰基吡啶-3-亚甲基、5-甲磺酰吡啶-3-亚甲基、5-氨甲酰基吡啶-3-亚甲基,R4选自氢、甲基、氟、氯、溴,R5选自氢、甲基、羟甲基、2-羟乙基、乙酰氧甲基、2-乙酰氧乙基、异丙基,R6选自氢、甲基、乙基、异丙基,R7选自氢、甲基；
Y选自碳、氧、NH；
W选自氟、氯、溴、甲基、三氟甲基；
n选自：0、1、2、3、4、5；
Z选自---NH2,---NH-(CH2)m-NH-SO2NH2,---NH-(CH2)m-NH-S(NH)ONH2,---NH-(CH2)m-NH-S(NCN)ONH2,---NH-(CH2)m-NH-SO2CH3,---NH-(CH2)m-SO2NH2,---NH-(CH2)m-S(NH)ONH2,---NH-(CH2)m-S(NCN)ONH2,---NH-(CH2)m-SO2CH3,---NH-(CH2)m-S(NH)OCH3,---NH-(CH2)m-S(NCN)OCH3,---NH-(CH2)m-NH-S(NH)OCH3,---NH-(CH2)m-NH-S(NCN)OCH3,---NH(CO)NH-(CH2)m-NH-SO2NH2,---NH(CO)NH-(CH2)m-NH-S(NH)ONH2,---NH(CO)NH-(CH2)m-NH-S(NCN)ONH2,---NH(CO)NH-(CH2)m-NH-SO2CH3,---NH(CO)NH-(CH2)m-NH-S(NH)OCH3,---NH(CO)NH-(CH2)m-NH-S(NCN)OCH3,---NH(CO)NH-(CH2)m-SO2CH3,---NH(CO)NH-(CH2)m-S(NH)OCH3,---NH(CO)NH-(CH2)m-S(NCN)OCH3,---NH(CO)NH-(CH2)n-SO2NH2,---NH(CO)NH-(CH2)m-S(NH)ONH2,---NH(CO)NH-(CH2)m-S(NCN)ONH2,
其中，m＝2、3、4、5。
优选的含双硫键化合物及其立体异构体以及其可药用盐，其特征在于,所述的化合物如式(IA)所示：
式中
R1选自
R2选自甲基、氟、氯、溴、氰基,R3选自2-氰基吡啶-4-亚甲基、5-氰基吡啶-3-亚甲基、5-甲磺酰吡啶-3-亚甲基、5-氨甲酰基吡啶-3-亚甲基,R4选自氢、甲基、氟、氯、溴,R5选自氢、甲基、羟甲基、2-羟乙基、乙酰氧甲基、2-乙酰氧乙基、异丙基,R6选自氢、甲基、乙基、异丙基；
Y选自碳、氧、NH；
W选自氟、氯、溴、甲基、三氟甲基；
n选自：0、1、2、3、4、5；
Z选自---NH2,---NH-(CH2)m-NH-SO2NH2,---NH-(CH2)m-NH-S(NH)ONH2,---NH-(CH2)m-NH-S(NCN)ONH2,---NH-(CH2)m-NH-SO2CH3,---NH-(CH2)m-SO2NH2,---NH-(CH2)m-S(NH)ONH2,---NH-(CH2)m-S(NCN)ONH2,---NH-(CH2)m-SO2CH3,---NH-(CH2)m-S(NH)OCH3,---NH-(CH2)m-S(NCN)OCH3,---NH-(CH2)m-NH-S(NH)OCH3,---NH-(CH2)m-NH-S(NCN)OCH3,---NH(CO)NH-(CH2)m-NH-SO2NH2,---NH(CO)NH-(CH2)m-NH-S(NH)ONH2,---NH(CO)NH-(CH2)m-NH-S(NCN)ONH2,---NH(CO)NH-(CH2)m-NH-SO2CH3,---NH(CO)NH-(CH2)m-NH-S(NH)OCH3,---NH(CO)NH-(CH2)m-NH-S(NCN)OCH3,---NH(CO)NH-(CH2)m-SO2CH3,---NH(CO)NH-(CH2)m-S(NH)OCH3,---NH(CO)NH-(CH2)m-S(NCN)OCH3,---NH(CO)NH-(CH2)n-SO2NH2,---NH(CO)NH-(CH2)m-S(NH)ONH2,---NH(CO)NH-(CH2)m-S(NCN)ONH2,
其中，m＝2、3、4、5。
优选的含双硫键化合物及其立体异构体以及其可药用盐，其特征在于,所述的化合物如式(IA1)所示：
式中
R1选自
R2选自甲基、氟、氯、溴、氰基,R3选自2-氰基吡啶-4-亚甲基、5-氰基吡啶-3-亚甲基、5-甲磺酰吡啶-3-亚甲基、5-氨甲酰基吡啶-3-亚甲基,R4选自氢、甲基、氟、氯、溴,R5选自氢、甲基、羟甲基、2-羟乙基、乙酰氧甲基、2-乙酰氧乙基、异丙基,R6选自氢、甲基、乙基、异丙基；
Y选自碳、氧、NH。
优选的含双硫键化合物及其立体异构体以及其可药用盐，其特征在于,所述的化合物如式(IB)所示：
式中
R1选自
R2选自甲基、氟、氯、溴、氰基,R3选自2-氰基吡啶-4-亚甲基、5-氰基吡啶-3-亚甲基、5-甲磺酰吡啶-3-亚甲基、5-氨甲酰基吡啶-3-亚甲基,R4选自氢、甲基、氟、氯、溴,R6选自氢、甲基、乙基、异丙基,R7选自氢、甲基；
Y选自碳、氧、NH；
W选自氟、氯、溴、甲基、三氟甲基；
n选自：0、1、2、3、4、5；
Z选自---NH2,---NH-(CH2)m-NH-SO2NH2,---NH-(CH2)m-NH-S(NH)ONH2,---NH-(CH2)m-NH-S(NCN)ONH2,---NH-(CH2)m-NH-SO2CH3,---NH-(CH2)m-SO2NH2,---NH-(CH2)m-S(NH)ONH2,---NH-(CH2)m-S(NCN)ONH2,---NH-(CH2)m-SO2CH3,---NH-(CH2)m-S(NH)OCH3,---NH-(CH2)m-S(NCN)OCH3,---NH-(CH2)m-NH-S(NH)OCH3,---NH-(CH2)m-NH-S(NCN)OCH3,---NH(CO)NH-(CH2)m-NH-SO2NH2,---NH(CO)NH-(CH2)m-NH-S(NH)ONH2,---NH(CO)NH-(CH2)m-NH-S(NCN)ONH2,---NH(CO)NH-(CH2)m-NH-SO2CH3,---NH(CO)NH-(CH2)m-NH-S(NH)OCH3,---NH(CO)NH-(CH2)m-NH-S(NCN)OCH3,---NH(CO)NH-(CH2)m-SO2CH3,---NH(CO)NH-(CH2)m-S(NH)OCH3,---NH(CO)NH-(CH2)m-S(NCN)OCH3,---NH(CO)NH-(CH2)n-SO2NH2,---NH(CO)NH-(CH2)m-S(NH)ONH2,---NH(CO)NH-(CH2)m-S(NCN)ONH2,
其中，m＝2、3、4、5。
优选的含双硫键化合物及其立体异构体以及其可药用盐，其特征在于,所述的化合物如式(IB1)所示：
式中
R1选自
R2选自甲基、氟、氯、溴、氰基,R3选自2-氰基吡啶-4-亚甲基、5-氰基吡啶-3-亚甲基、5-甲磺酰吡啶-3-亚甲基、5-氨甲酰基吡啶-3-亚甲基,R4选自氢、甲基、氟、氯、溴,R6选自氢、甲基、乙基、异丙基,R7选自氢、甲基；
Y选自碳、氧、NH。
优选的含双硫键化合物及其立体异构体以及其可药用盐，其特征在于,所述的化合物如式(IC)所示：
式中
R1选自
R2选自甲基、氟、氯、溴、氰基,R3选自2-氰基吡啶-4-亚甲基、5-氰基吡啶-3-亚甲基、5-甲磺酰吡啶-3-亚甲基、5-氨甲酰基吡啶-3-亚甲基,R4选自氢、甲基、氟、氯、溴,R6选自氢、甲基、乙基、异丙基；
Y选自碳、氧、NH；
W选自氟、氯、溴、甲基、三氟甲基；
n选自：0、1、2、3、4、5；
Z选自---NH2,---NH-(CH2)m-NH-SO2NH2,---NH-(CH2)m-NH-S(NH)ONH2,---NH-(CH2)m-NH-S(NCN)ONH2,---NH-(CH2)m-NH-SO2CH3,---NH-(CH2)m-SO2NH2,---NH-(CH2)m-S(NH)ONH2,---NH-(CH2)m-S(NCN)ONH2,---NH-(CH2)m-SO2CH3,---NH-(CH2)m-S(NH)OCH3,---NH-(CH2)m-S(NCN)OCH3,---NH-(CH2)m-NH-S(NH)OCH3,---NH-(CH2)m-NH-S(NCN)OCH3,---NH(CO)NH-(CH2)m-NH-SO2NH2,---NH(CO)NH-(CH2)m-NH-S(NH)ONH2,---NH(CO)NH-(CH2)m-NH-S(NCN)ONH2,---NH(CO)NH-(CH2)m-NH-SO2CH3,---NH(CO)NH-(CH2)m-NH-S(NH)OCH3,---NH(CO)NH-(CH2)m-NH-S(NCN)OCH3,---NH(CO)NH-(CH2)m-SO2CH3,---NH(CO)NH-(CH2)m-S(NH)OCH3,---NH(CO)NH-(CH2)m-S(NCN)OCH3,---NH(CO)NH-(CH2)n-SO2NH2,---NH(CO)NH-(CH2)m-S(NH)ONH2,---NH(CO)NH-(CH2)m-S(NCN)ONH2,
其中，m＝2、3、4、5。
优选的含双硫键化合物及其立体异构体以及其可药用盐，其特征在于,所述的化合物如式(IC1)所示：
式中
R1选自
R2选自甲基、氟、氯、溴、氰基,R3选自2-氰基吡啶-4-亚甲基、5-氰基吡啶-3-亚甲基、5-甲磺酰吡啶-3-亚甲基、5-氨甲酰基吡啶-3-亚甲基,R4选自氢、甲基、氟、氯、溴,R6选自氢、甲基、乙基、异丙基；
Y选自碳、氧、NH。
最优选的含双硫键化合物及其立体异构体以及其可药用盐，所述的化合物选自但不限于下列化合物：
化合物1：(S,Z)-1-(4-氨基-1，2，5-噁二唑-3-基)-1-(3-溴-4-氟苯胺基)-16-(4-((2-溴-(1，1’-联苯基)-3-基)甲氧基)-5-氯-2-(2-氰基吡啶-4-基甲氧基)苄胺基)-4，13-二氧代-3，14-二氧-8，9-二硫-2，5，12-三氮十七-1-烯-17-酸乙酯
化合物2：(S,Z)-1-(4-氨基-1，2，5-噁二唑-3-基)-1-(3-溴-4-氟苯胺基)-16-(4-((2-氯-(1，1’-联苯基)-3-基)甲氧基)-5-氯-2-(5-氰基吡啶-3-基甲氧基)苄胺基)-4，13-二氧代-3，14-二氧-8，9-二硫-2，5，12-三氮十七-1-烯-17-酸乙酯
化合物3：(S,Z)-1-(4-氨基-1，2，5-噁二唑-3-基)-1-(3-溴-4-氟苯胺基)-16-(4-((2-氯-(1，1’-联苯基)-3-基)甲氧基)-5-氯-2-(5-氰基吡啶-3-基甲氧基)苄胺基)-4，13-二氧代-3，14-二氧-8，9-二硫-2，5，12-三氮十七-1-烯-17-酸
化合物4：(S,R,Z)-1-(4-氨基-1，2，5-噁二唑-3-基)-1-(3-溴-4-氟苯胺基)-15-甲基-16-(4-((2-溴-(1，1’-联苯基)-3-基)甲氧基)-5-氯-2-(2-氰基吡啶-4-基甲氧基)苄胺基)-4，13-二氧代-3，14-二氧-8，9-二硫-2，5，12-三氮十七-1-烯-17-酸乙酯
化合物5：(S,R,Z)-1-(4-氨基-1，2，5-噁二唑-3-基)-1-(3-溴-4-氟苯胺基)-15-甲基-16-(4-((2-溴-(1，1’-联苯基)-3-基)甲氧基)-5-氯-2-(5-氰基吡啶-3-基甲氧基)苄胺基)-4，13-二氧代-3，14-二氧-8，9-二硫-2，5，12-三氮十七-1-烯-17-酸乙酯
化合物6：(S,R,Z)-1-(4-氨基-1，2，5-噁二唑-3-基)-1-(3-溴-4-氟苯胺基)-15-甲基-16-(4-((2-溴-(1，1’-联苯基)-3-基)甲氧基)-5-氯-2-(5-氰基吡啶-3-基甲氧基)苄胺基)-4，13-二氧代-3，14-二氧-8，9-二硫-2，5，12-三氮十七-1-烯-17-酸
化合物7：(S,Z)-1-(4-氨基-1，2，5-噁二唑-3-基)-1-(3-溴-4-氟苯胺基)-16-(4-((2-氯-3-(1，4-苯并二噁烷-6-基)苄氧基)-5-甲基-2-(5-氰基吡啶-3-基甲氧基)苄胺基)-4，13-二氧代-3，14-二氧-8，9-二硫-2，5，12-三氮十七-1-烯-17-酸甲酯
化合物8：(S,Z)-1-(4-氨基-1，2，5-噁二唑-3-基)-1-(3-溴-4-氟苯胺基)-16-(4-((2-氯-3-(1，4-苯并二噁烷-6-基)苄氧基)-5-甲基-2-(5-氰基吡啶-3-基甲氧基)苄胺基)-4，13-二氧代-3，14-二氧-8，9-二硫-2，5，12-三氮十七-1-烯-17-酸
化合物9：(S,Z)-1-(4-氨基-1，2，5-噁二唑-3-基)-1-(3-溴-4-氟苯胺基)-16-(4-((2-甲基-3-(1，4-苯并二噁烷-6-基)苄氧基)-5-氯-2-(5-氰基吡啶-3-基甲氧基)苄胺基)-4，13-二氧代-3，14-二氧-8，9-二硫-2，5，12-三氮十七-1-烯-17-酸
化合物10：(S,Z)-1-(4-氨基-1，2，5-噁二唑-3-基)-1-(3-溴-4-氟苯胺基)-16-(4-((2-溴-(1，1’-联苯基)-3-基)甲氧基)-5-氯-2-(5-氰基吡啶-3-基甲氧基)苄胺基)-4，13-二氧代-3，14-二氧-8，9-二硫-2，5，12-三氮十七-1-烯-17-酸乙酯
化合物11：(S,Z)-1-(4-氨基-1，2，5-噁二唑-3-基)-1-(3-溴-4-氟苯胺基)-16-(4-((2-溴-(1，1’-联苯基)-3-基)甲氧基)-5-氯-2-(5-氰基吡啶-3-基甲氧基)苄胺基)-4，13-二氧代-3，14-二氧-8，9-二硫-2，5，12-三氮十七-1-烯-17-酸
化合物12：(S,Z)-1-(4-氨基-1，2，5-噁二唑-3-基)-1-(3-溴-4-氟苯胺基)-16-(4-((2-溴-(1，1’-联苯基)-3-基)甲氧基)-5-氯-2-(5-甲磺酰基吡啶-3-基甲氧基)苄胺基)-4，13-二氧代-3，14-二氧-8，9-二硫-2，5，12-三氮十七-1-烯-17-酸乙酯
化合物13：(S,Z)-1-(4-氨基-1，2，5-噁二唑-3-基)-1-(3-溴-4-氟苯胺基)-16-(4-((2-溴-3-(1，4苯并二噁烷-6-基)苄氧基)-5-氯-2-(5-氰基吡啶-3-基甲氧基)苄胺基)-4，13-二氧代-3，14-二氧-8，9-二硫-2，5，12-三氮十七-1-烯-17-酸乙酯
化合物14：(S,Z)-1-(4-氨基-1，2，5-噁二唑-3-基)-1-(3-溴-4-氟苯胺基)-16-甲基-16-(4-((2-溴-3-(1，4苯并二噁烷-6-基)苄氧基)-5-氯-2-(2-氰基吡啶-4-基甲氧基)苄胺基)-4，13-二氧代-3，14-二氧-8，9-二硫-2，5，12-三氮十七-1-烯-17-酸乙酯
化合物15：(S,Z)-1-(4-氨基-1，2，5-噁二唑-3-基)-1-(3-溴-4-氟苯胺基)-16-甲基-16-(4-((2-溴-3-(1，4苯并二噁烷-6-基)苄氧基)-5-氯-2-(2-氰基吡啶-4-基甲氧基)苄胺基)-4，13-二氧代-3，14-二氧-8，9-二硫-2，5，12-三氮十七-1-烯-17-酸
化合物16：(S,Z)-1-(4-氨基-1，2，5-噁二唑-3-基)-1-(3-溴-4-氟苯胺基)-14-(4-((2-溴-3-(1，4-苯并二噁烷-6-基)苄氧基)-5-氯-2-(5-氰基吡啶-3-基甲氧基)苄基)-15-甲基-4，13-二氧代-3，12-二氧-8，9-二硫-2，5，14-三氮十六-1-烯-16-酸乙酯
化合物17：(S,Z)-1-(4-氨基-1，2，5-噁二唑-3-基)-1-(3-溴-4-氟苯胺基)-14-(4-((2-溴-3-(1，4-苯并二噁烷-6-基)苄氧基)-5-氯-2-(5-氰基吡啶-3-基甲氧基)苄基)-15-甲基-4，13-二氧代-3，12-二氧-8，9-二硫-2，5，14-三氮十六-1-烯-16-酸
化合物18：(S,Z)-15-(乙酰氧甲基)-14-(4-((2-溴-3-(1，4-苯并二噁烷-6-基)苄氧基)-5-氯-2-(5-氰基吡啶-3-基甲氧基)苄基)-1-(3-溴-4-氟苯胺基)-4，13-二氧代-1-(4-(2-(氨磺酰胺基)乙氨基)-1，2，5-噁二唑-3-基)-3，12-二氧-8，9-二硫-2，5，14-三氮十六-1-烯-16-酸乙酯
化合物19：(S,Z)-1-(4-氨基-1，2，5-噁二唑-3-基)-1-(3-溴-4-氟苯胺基)-14-(4-((2-溴-3-(1，4-苯并二噁烷-6-基)苄氧基)-5-氯-2-(5-氰基吡啶-3-基甲氧基)苄基)-15-(乙酰氧甲基)--4，13-二氧代-3，12-二氧-8，9-二硫-2，5，14-三氮十六-1-烯-16-酸乙酯
化合物20：(S,Z)-1-(4-氨基-1，2，5-噁二唑-3-基)-1-(3-溴-4-氟苯胺基)-14-(4-((2-溴-3-(1，4-苯并二噁烷-6-基)苄氧基)-5-氯-2-(5-氰基吡啶-3-基甲氧基)苄基)-15-羟甲基-4，13-二氧代-3，12-二氧-8，9-二硫-2，5，14-三氮十六-1-烯-16-酸
化合物21：(S,Z)-1-(4-氨基-1，2，5-噁二唑-3-基)-1-(3-溴-4-氟苯胺基)-14-(4-((2-溴-3-苯苄氧基)-5-氯-2-(5-氰基吡啶-3-基甲氧基)苄基)-15-羟甲基-4，13-二氧代-3，12-二氧-8，9-二硫-2，5，14-三氮十六-1-烯-16-酸
化合物22：(2S,4S)-4-((((Z)-1-(4-氨基-1,2,5-噁二唑-3-基)-1-(3-溴-4-氟苯胺基)-4-氧代-3-氧-8,9-二硫-2,5-二氮十一-1-烯-11-基)胺甲酰)氧基)-1-(4-((2-溴-(1,1'-联苯)-3-基)甲氧基)-5-氯-2-((2-氰吡啶-4-基)甲氧)苄基)吡咯烷-2-甲酸乙酯
化合物23：(2S,4S)-4-((((Z)-1-(4-氨基-1,2,5-噁二唑-3-基)-1-(3-溴-4-氟苯胺基)-4-氧代-3-氧-8,9-二硫-2,5-二氮十一-1-烯-11-基)胺甲酰)氧基)-1-(4-((2-溴-(1,1'-联苯)-3-基)甲氧基)-5-氯-2-((5-氰吡啶-3-基)甲氧)苄基)吡咯烷-2-甲酸乙酯
化合物24：(2S,4S)-4-((((Z)-1-(4-氨基-1,2,5-噁二唑-3-基)-1-(3-溴-4-氟苯胺基)-4-氧代-3-氧-8,9-二硫-2,5-二氮十一-1-烯-11-基)胺甲酰)氧基)-1-(4-((2-溴-(1,1'-联苯)-3-基)甲氧基)-5-氯-2-((5-氰吡啶-3-基)甲氧)苄基)吡咯烷-2-甲酸
化合物25：(2S,4S)-4-((((Z)-1-(4-氨基-1,2,5-噁二唑-3-基)-1-(3-溴-4-氟苯胺基)-4-氧代-3-氧-8,9-二硫-2,5-二氮十一-1-烯-11-基)胺甲酰)氧基)-1-(4-((2-氯-3-(1，4苯并二噁烷-6-基)苄氧基)-5-氯-2-((5-氰吡啶-3-基)甲氧)苄基)吡咯烷-2-甲酸乙酯
化合物26：(2S,4S)-4-((((Z)-1-(4-氨基-1,2,5-噁二唑-3-基)-1-(3-溴-4-氟苯胺基)-4-氧代-3-氧-8,9-二硫-2,5-二氮十一-1-烯-11-基)胺甲酰)氧基)-1-(4-((2-氯-3-(1，4苯并二噁烷-6-基)苄氧基)-5-氯-2-((5-氰吡啶-3-基)甲氧)苄基)吡咯烷-2-甲酸
以上所述的含双硫键化合物及其立体异构体以及其可药用盐，其特征在于，所述的药用盐包括与无机酸、有机酸、碱金属离子、碱土金属离子或能提供生理上可接受的阳离子的有机碱结合形成的盐以及铵盐。
进一步所述的无机酸选自盐酸、氢溴酸、磷酸或硫酸；所述的有机酸选自甲磺酸、对甲苯磺酸、三氟乙酸、枸杞酸、马来酸酒石酸、富马酸、柠檬酸或乳酸；所述的碱金属离子选自锂离子，钠离子，钾离子；所述的碱土金属离子选自钙离子，镁离子；所述的能提供生理上可接受的阳离子的有机碱选自甲胺、二甲胺、三甲胺、哌啶、吗啉或三(2－羟乙基)胺。
本发明技术方案的第二方面是提供了第一方面所述化合物的制备方法：
为了制备本发明通式I所述的化合物，依据通式I的结构，本发明制备通式I化合物将分为以下几条路线：
路线1：
(a)以氯代肟化合物1为原料，在碱性环境下与异氰酸酯化合物2反应得到化合物3。
(b)化合物3与苯胺衍生物4在碱性环境下发生亲核取代反应得到化合物5。
(c)化合物5与2-巯基乙胺反应得到胺化合物6。
(d)胺化合物6与酯化合物7发生亲核取代生成酰胺8。
(e)化合物8在酸性条件下脱除保护基团得到胺化合物9。
(f)胺化合物9与醛化合物10缩合及氢化还原得到目标化合物IB。
路线2：
(a)以N-羟基脒化合物11为原料，在碱性环境下与异氰酸酯化合物2反应得到化合物5。(b)化合物5与2-巯基乙胺反应得到胺化合物6。
(c)胺化合物6与酯化合物12发生亲核取代生成酰胺13。
(e)化合物13在酸性条件下脱除保护基团得到目标化合物IB。
路线3：
(a)以N-羟基脒化合物11为原料，在碱性环境下与异氰酸酯化合物2反应得到化合物5。
(b)化合物5与2-巯基乙醇反应得到醇化合物14。
(c)醇化合物14与酯化合物15发生亲核取代得到目标化合物IA。
路线4：
(a)以胺化合物16为原料，在碱性环境下与四氢噻吩-2-酮反应，或与4-巯基丁酸脱水成酰胺，或与4-巯基丁酰氯反应得到含有巯基化合物17。
(b)化合物17与含有双硫键化合物5反应得到目标化合物IA。
路线5：
(a)以N-羟基脒化合物11为原料，在碱性环境下与异氰酸酯化合物2反应得到化合物5。(b)化合物5与巯基化合物18反应得到化合物19。
(c)化合物19，在碱性环境下与化合物20发生亲核取代反应得到目标化合物IC。
所述的R1、R2、R3、R4、R5、R6、R7、W、Y、Z、n的定义同权利要求1-7任一项所述。
另外，上述反应中的起始原料及中间体容易得到，各步反应可依据已报道的文献或对本领域熟练技术人员来说可以用有机合成中的常规方法很容易合成。通式I所述化合物可以溶剂化物或非溶剂化物的形式存在，利用不同的溶剂进行结晶可能得到不同的溶剂化物。通式I所述药学上可接受的盐包括不同酸加成盐，如下列无机酸或有机酸的酸加成盐：盐酸，氢溴酸，磷酸，硫酸，甲磺酸，对甲苯磺酸，三氟乙酸，枸杞酸，马来酸，酒石酸，富马酸，柠檬酸，乳酸。通式I所述药学上可接受的盐还包括不同碱金属盐(锂，钠，钾盐)，碱土金属盐(钙，镁盐)及铵盐，和能提供生理上可接受的阳离子的有机碱的盐，如甲胺，二甲胺，三甲胺，哌啶，吗啉及三(2－羟乙基)胺的盐。在本发明范围内的所有这些盐都可采用常规方法制备。在所述的通式I化合物及其溶剂化物和其盐的制备过程中，不同结晶条件可能出现多晶或共晶。
本发明技术方案的第三方面是提供了一种药物组合物，所述的药物组合物包含作为有效成分的本发明第一方面所述的含双硫键化合物及其立体异构体以及其可药用盐和药学上可接受的载体或赋形剂。
本发明还涉及以本发明化合物作为活性成份的药物组合物。该药物组合物可根据本领域公知的方法制备。可通过将本发明化合物与一种或多种药学上可接受的固体或液体赋形剂和/或辅剂结合，制成适于人或动物使用的任何剂型。本发明化合物在其药物组合物中的含量通常为0.1-95重量％。
本发明化合物或含有它的药物组合物可以单位剂量形式给药，给药途径可为肠道或非肠道，如口服、静脉注射、肌肉注射、皮下注射、鼻腔、口腔粘膜、眼、肺和呼吸道、皮肤、阴道、直肠等。
给药剂型可以是液体剂型、固体剂型或半固体剂型。液体剂型可以是溶液剂(包括真溶液和胶体溶液)、乳剂(包括o/w型、w/o型和复乳)、混悬剂、注射剂(包括水针剂、粉针剂和输液)、滴眼剂、滴鼻剂、洗剂和搽剂等；固体剂型可以是片剂(包括普通片、肠溶片、含片、分散片、咀嚼片、泡腾片、口腔崩解片)、胶囊剂(包括硬胶囊、软胶囊、肠溶胶囊)、颗粒剂、散剂、微丸、滴丸、栓剂、膜剂、贴片、气(粉)雾剂、喷雾剂等；半固体剂型可以是软膏剂、凝胶剂、糊剂等。
本发明化合物可以制成普通制剂、也制成是缓释制剂、控释制剂、靶向制剂及各种微粒给药系统。
为了将本发明化合物制成片剂，可以广泛使用本领域公知的各种赋形剂，包括稀释剂、黏合剂、润湿剂、崩解剂、润滑剂、助流剂。稀释剂可以是淀粉、糊精、蔗糖、葡萄糖、乳糖、甘露醇、山梨醇、木糖醇、微晶纤维素、硫酸钙、磷酸氢钙、碳酸钙等；湿润剂可以是水、乙醇、异丙醇等；粘合剂可以是淀粉浆、糊精、糖浆、蜂蜜、葡萄糖溶液、微晶纤维素、阿拉伯胶浆、明胶浆、羧甲基纤维素钠、甲基纤维素、羟丙基甲基纤维素、乙基纤维素、丙烯酸树脂、卡波姆、聚乙烯吡咯烷酮、聚乙二醇等；崩解剂可以是干淀粉、微晶纤维素、低取代羟丙基纤维素、交联聚乙烯吡咯烷酮、交联羧甲基纤维素钠、羧甲基淀粉钠、碳酸氢钠与枸橼酸、聚氧乙烯山梨糖醇脂肪酸酯、十二烷基磺酸钠等；润滑剂和助流剂可以是滑石粉、二氧化硅、硬脂酸盐、酒石酸、液体石蜡、聚乙二醇等。
还可以将片剂进一步制成包衣片，例如糖包衣片、薄膜包衣片、肠溶包衣片，或双层片和多层片。
为了将给药单元制成胶囊剂，可以将有效成分本发明化合物与稀释剂、助流剂混合，将混合物直接置于硬胶囊或软胶囊中。也可将有效成分本发明化合物先与稀释剂、黏合剂、崩解剂制成颗粒或微丸，再置于硬胶囊或软胶囊中。用于制备本发明化合物片剂的各稀释剂、黏合剂、润湿剂、崩解剂、助流剂品种也可用于制备本发明化合物的胶囊剂。
为将本发明化合物制成注射剂，可以用水、乙醇、异丙醇、丙二醇或它们的混合物作溶剂并加入适量本领域常用的增溶剂、助溶剂、pH调剂剂、渗透压调节剂。增溶剂或助溶剂可以是泊洛沙姆、卵磷脂、羟丙基-β-环糊精等；pH调剂剂可以是磷酸盐、醋酸盐、盐酸、氢氧化钠等；渗透压调节剂可以是氯化钠、甘露醇、葡萄糖、磷酸盐、醋酸盐等。如制备冻干粉针剂，还可加入甘露醇、葡萄糖等作为支撑剂。
此外，如需要，也可以向药物制剂中添加着色剂、防腐剂、香料、矫味剂或其它添加剂。
为达到用药目的，增强治疗效果，本发明的药物或药物组合物可用任何公知的给药方法给药。
本发明化合物药物组合物的给药剂量依照所要预防或治疗疾病的性质和严重程度，患者或动物的个体情况，给药途径和剂型等可以有大范围的变化。一般来讲，本发明化合物的每天的合适剂量范围为0.001-150mg/Kg体重，优选为0.01-100mg/Kg体重。上述剂量可以一个剂量单位或分成几个剂量单位给药，这取决于医生的临床经验以及包括运用其它治疗手段的给药方案。
本发明的化合物或组合物可单独服用，或与其他治疗药物或对症药物合并使用。当本发明的化合物与其它治疗药物存在协同作用时，应根据实际情况调整它的剂量。
本发明技术方案的第四方面是提供了含双硫键化合物及其立体异构体以及其可药用盐在制备预防和/或治疗与PD-1/PD-L1信号通路和或IDO1有关疾病的药物中的应用。
所述的与PD-1/PD-L1信号通路和或IDO1有关的疾病选自癌症、感染性疾病。所述的癌症选自皮肤癌、肺癌、泌尿系肿瘤、血液肿瘤、乳腺癌、胶质瘤、消化系统肿瘤、生殖系统肿瘤、淋巴瘤、神经系统肿瘤、脑瘤、头颈癌。所述的感染性疾病选自细菌感染、病毒感染。
有益技术效果：
本发明基于PD-L1和IDO1作为肿瘤免疫治疗中的不同作用机制靶标，理性设计并合成了一系列特异性靶向肿瘤细胞及肿瘤微环境的PD-L1/IDO1双靶点小分子抑制剂前药。该前药只在肿瘤组织或肿瘤细胞内释放出PD-L1小分子抑制剂和IDO1小分子抑制剂，因此能够有效降低药物的靶点副作用。鉴于PD-L1和IDO1导致肿瘤免疫逃逸的机制不同，且研究已表明肿瘤组织中IDO1的高表达正是导致肿瘤免疫治疗抵抗的原因之一，PD-L1和IDO1的双重抑制不仅解决耐药问题，也能提高患者应答率，扩大获益人群，其协同作用也使治疗效果更佳，是肿瘤免疫治疗的理想搭配。IDO1和PD-L1双重抑制剂代替联合用药或许能够改善无进展生存期和其总生存率，提高免疫治疗效果。
附图说明
图1:肿瘤瘤重(与空白对照组比较,*P<0.05,***P<0.001)
图2:ZC-102在CT26移植瘤小鼠体内模型中的抗肿瘤活性。(A)不同治疗后的CT26细胞移植小鼠肿瘤的图像。(B)治疗后各组肿瘤重量。(C)各组治疗后的体重
图3:A)不同治疗的CT26细胞异种移植小鼠脾脏的图像。(B)脾脏重量和脾脏指数。(C)脾脏中调节性T细胞(CD4+CD25+Foxp3+)的百分比.
具体实施方式
以下将结合实施例对发明作进一步说明，但并不限制本发明的范围。
测定仪器：核磁共振光谱用Vaariaan Mercury 300型核磁共振仪。质谱用ZAD-2F和VG300质谱仪。
实施例1：(S,Z)-1-(4-氨基-1，2，5-噁二唑-3-基)-1-(3-溴-4-氟苯胺基)-16-(4-((2-溴-(1，1’-联苯基)-3-基)甲氧基)-5-氯-2-(2-氰基吡啶-4-基甲氧基)苄胺基)-4，13-二氧代-3，14-二氧-8，9-二硫-2，5，12-三氮十七-1-烯-17-酸乙酯(化合物1)
化合物1
1、(吡啶-2-基)(氨乙基)二硫醚盐酸盐的合成
将2,2'-二硫二吡啶(13.58g，61.64mmol)加入至100ml的甲醇中，Ar保护下加入巯基乙胺盐酸盐(4.67g，41.11mmol)的甲醇溶液(100ml)，加毕，室温下反应12h，向反应液中加入500ml的乙醚，析出固体，抽滤，得黄色固体7.60g。1H NMR(300MHz,CD3OD):δ8.65(s,1H,-ArH),8.24(d,J＝6.5Hz,1H,-ArH),8.12(d,J＝7.2Hz,1H,-ArH),7.67(s,1H,-ArH),3.23(m,4H,-CH2-,-CH2-).
2、(异氰酸乙酯基)(吡啶-2-基)二硫醚的合成
将中间体(吡啶-2-基)(氨乙基)二硫醚盐酸盐(4g，17.96mmol)和1,8-双二甲氨基萘(12.36g,53.88mmol)加入至120ml的超干DCM中，冰浴条件下加入双光气(1.08ml,8.98mmol)，移至室温搅拌2h，蒸干后直接进行下一步反应。
3、(Z)-4-氨基-N-(3-溴-4-氟苯基)-N'-(2-(吡啶-2-二硫基)乙胺甲酰氧基)-1,2,5-噁二唑-3-脒的合成
将中间体(异氰酸乙酯基)(吡啶-2-基)二硫醚的粗品(3g,17.96mmol)溶于160ml的DCM中，再加入中间体4-氨基-1,2,5-恶二唑-3-氯化甲醛肟(1.5g,8.98mmol)和DIPEA(5.93ml,35.90mmol)，Ar保护下搅拌12h。向反应液中加入140ml 1N的盐酸水溶液，二氯甲烷(3×200ml)萃取，1N的盐酸水溶液(2×150ml)和饱和氯化钠水溶液(200ml)洗涤，无水硫酸钠干燥，减压浓缩至约100ml，析出固体，抽滤，干燥，得白色固体1.4g(3.74mmol)。将其溶于13.6ml的无水乙醇中，加入3-溴-4-氟苯胺(0.72g,3.76mmol)，冰水浴条件搅拌下，加入NaHCO3(0.72g,8.5mmol)的水溶液(10.8ml)，升温至60℃反应2h，减压蒸除乙醇，乙酸乙酯(3×150ml)萃取，饱和NaCl水溶液(1×60ml)洗涤，无水Na2SO4干燥，浓缩、柱层析分离得到0.78g(Z)-4-氨基-N-(3-溴-4-氟苯基)-N'-(2-(吡啶-2-二硫基)乙胺甲酰氧基)-1,2,5-噁二唑-3-脒。
或将中间体(异氰酸乙酯基)(吡啶-2-基)二硫醚的粗品(3g,17.96mmol)溶于160ml的DCM中，再加入中间体(Z)-4-氨基-N-(3-溴-4-氟苯基)-N'-羟基-1,2,5-噁二唑-3-脒(2.84g,8.98mmol)和DIPEA(5.93ml,35.90mmol)，Ar保护下搅拌12h。向反应液中加入140ml 1N的盐酸水溶液，二氯甲烷(3×200ml)萃取，1N的盐酸水溶液(2×150ml)和饱和氯化钠水溶液(200ml)洗涤，无水硫酸钠干燥，减压浓缩至约100ml，析出固体，抽滤，得白色固体2.28g。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6):δ9.78(s,1H,-NH-),8.45(d,J＝5.0Hz,1H,-ArH),7.87–7.74(m,2H,-ArH),7.72(t,J＝5.8Hz,1H,-ArH),7.32(dd,J＝6.1,2.6Hz,1H,ArH),7.29–7.21(m,2H,-ArH),6.98–6.89(m,1H,-NH-),6.43(s,2H,-NH2),3.42(dd,J＝12.8,6.4Hz,2H,-CH2-),2.98(t,J＝6.7Hz,2H,-CH2-).HRMS(ESI)m/z:[M+H]+calculated forC17H16O3N7BrFS2,527.99180；found,527.99121,Δ-2.65ppm.
4、2-(2-氰基吡啶-4-亚甲氧基)-4-(2-溴-3-苯基苄氧基)-5-氯苯甲醛的合成
将中间体2-羟基-4-(2-溴-3-苯基苄氧基)-5-氯苯甲醛(1.50g,3.59mmol)加入至25ml的DMF中，加入K2CO3(992mg,7.18mmol)和4-(溴甲基)皮考啉腈(1.06g,5.39mmol)，加毕，室温下搅拌4h。向反应液中加水(80ml)，固体析出，抽滤，滤饼经柱色谱分离纯化得白色固体1.38g。
5、N-(4-(2-溴-3-苯基苄氧基)-5-氯-2-(2-氰吡啶-4-甲氧基)苄基)-N-(叔丁氧甲酰基)-O-(对硝基苯氧甲酰基)-L-丝氨酸乙酯
将N-(4-(2-溴-3-苯基苄氧基)-5-氯-2-(2-氰吡啶-4-甲氧基)苄基)-L-丝氨酸乙酯盐酸盐(11g,15.98mmol)和碳酸氢钠(3.36g,39.95mmol)溶于甲醇(100ml)和水(100ml)的混合溶剂中，加入二碳酸二叔丁酯(3.49g,15.98mmol)，加毕，室温下反应8h。向反应液中加入150ml水，乙酸乙酯萃取(2×150ml)，饱和食盐水(2×150ml)洗涤，无水硫酸钠干燥，蒸干得白色固体14.46g,。将其溶于超干二氯甲烷(100ml)中，加入对硝基苯基氯甲酸酯(4.78g,24mmol)和Et3N(3.33ml,23.89mmol)，加毕，室温下反应6h，蒸干，柱层析分离纯化得黄色固体11g。
6、(Z)-(1-(4-氨基-1,2,5-噁二唑-3-基)-1-((3-溴-4-氟苯基)氨基)-4-氧代-3-氧-8,9-二硫-2,5-二氮十一-1-烯-11-基)氨基甲酸叔丁酯的合成
将中间体(Z)-4-氨基-N-(3-溴-4-氟苯基)-N'-(2-(吡啶-2-二硫基)乙胺甲酰氧基)-1,2,5-噁二唑-3-脒(3g,5.69mmol)溶于二氯甲烷(100mL)和甲醇(100mL)的混合溶剂中，加入2-叔丁氧羰基氨基乙硫醇(1.31g,7.40mmol)，Ar保护下搅拌1h。向反应液中加入200ml 0.5N的盐酸水溶液，二氯甲烷萃取(2×150ml)，饱和NaHCO3水溶液(200ml)洗涤，无水硫酸钠干燥，蒸干，硅胶柱层析分离纯化得黄色油状物1.59g。1H NMR(400MHz,Acetone-d6):δ8.94(s,1H,-NH-),7.45(dd,J＝6.0,2.6Hz,1H,-ArH),7.21(t,J＝8.6Hz,1H,-NH-),7.16–7.05(m,2H,-ArH),6.19(s,1H,-NH-),6.01(s,2H,-NH2),3.57(dd,J＝12.7,6.4Hz,2H,-CH2-),3.39(dd,J＝13.1,6.4Hz,2H,-CH2-),2.94(dd,J＝8.3,5.3Hz,2H,-CH2-),2.91–2.81(2H,-CH2-,covered by the peak of water),1.40(s,9H,-Boc).HRMS(ESI)m/z:[M+H]+calculated for C19H26O5N7BrFS2,594.05988；found,594.05817.
7、(Z)-4-氨基-N'-(2-((2-氨基乙基)二硫基)乙氨基甲酰氧基)-N-(3-溴-4-氟苯基)-1,2,5-噁二唑-3-脒-三氟乙酸盐的合成
将中间体(Z)-(1-(4-氨基-1,2,5-噁二唑-3-基)-1-((3-溴-4-氟苯基)氨基)-4-氧代-3-氧-8,9-二硫-2,5-二氮十一-1-烯-11-基)氨基甲酸叔丁酯(797mg,1.34mmol)溶于35ml的二氯甲烷中，加入三氟乙酸(3.5ml)，加毕，氩气保护下反应1h，蒸干后直接进行下一步反应。
8、(S,Z)-1-(4-氨基-1，2，5-噁二唑-3-基)-1-(3-溴-4-氟苯胺基)-16-(叔丁氧甲酰胺基)-4，13-二氧代-3，14-二氧-8，9-二硫-2，5，12-三氮十七-1-烯-17-酸乙酯的合成
将所得的深黄色油状物(Z)-4-氨基-N'-(2-((2-氨基乙基)二硫基)乙氨基甲酰氧基)-N-(3-溴-4-氟苯基)-1,2,5-噁二唑-3-脒-三氟乙酸盐溶于DMF(35ml)中，依次加入Et3N(559μl,4.02mmol)和(S)-2-叔丁氧甲酰基氨基-3-(4-硝基苯氧甲酰基氧基)丙酸乙酯(534mg,1.34mmol)，Ar保护下搅拌2h。向反应液中加入150ml的水，乙酸乙酯萃取(3×150ml)，饱和食盐水(2×200ml)洗涤，无水硫酸钠干燥，蒸干，硅胶柱层析分离纯化得淡黄色油状物783mg。1H NMR(400MHz,Acetone-d6):δ8.92(s,1H,-NH-),7.46(dd,J＝6.0,2.4Hz,1H,-ArH),7.22(t,J＝8.6Hz,1H,-NH-),7.16–7.05(m,2H,-ArH),6.59(s,1H,-NH-),6.19(d,J＝7.5Hz,1H,-NH-),6.00(s,2H,-NH2-),4.45–4.37(m,1H,-CH-),4.33(d,J＝4.5Hz,2H,-CH2-),4.16(dd,J＝7.0,3.2Hz,2H,-CH2-),3.56(dd,J＝12.4,6.7Hz,2H,-CH2-),3.45(dd,J＝12.5,6.2Hz,2H,-CH2-),2.94(dd,J＝8.1,5.5Hz,2H,-CH2-),2.88(t,J＝6.8Hz,2H,-CH2-),1.41(s,9H,-Boc),1.24(t,J＝7.1Hz,3H,-CH3).HRMS(ESI)m/z:[M+H]+calculated for C25H35O9N8BrFS2,753.11303；found,753.10962,Δ-4.53ppm.
9、(S,Z)-16-氨基-1-(4-氨基-1，2，5-噁二唑-3-基)-1-(3-溴-4-氟苯胺基)-4，13-二氧代-3，14-二氧-8，9-二硫-2，5，12-三氮十七-1-烯-17-酸乙酯三氟乙酸盐的合成
将中间体(S,Z)-1-(4-氨基-1，2，5-噁二唑-3-基)-1-(3-溴-4-氟苯胺基)-16-(叔丁氧甲酰胺基)-4，13-二氧代-3，14-二氧-8，9-二硫-2，5，12-三氮十七-1-烯-17-酸乙酯(407mg,0.54mmol)溶于40ml的超干二氯甲烷中，加入三氟甲酸(4ml)，加毕，氩气保护下反应1h，蒸干后直接进行下一步反应。
10、(S,Z)-1-(4-氨基-1，2，5-噁二唑-3-基)-1-(3-溴-4-氟苯胺基)-16-(4-((2-溴-(1，1’-联苯基)-3-基)甲氧基)-5-氯-2-(2-氰基吡啶-4-基甲氧基)苄胺基)-4，13-二氧代-3，14-二氧-8，9-二硫-2，5，12-三氮十七-1-烯-17-酸乙酯的合成
将所得黄色油状物(S,Z)-16-氨基-1-(4-氨基-1，2，5-噁二唑-3-基)-1-(3-溴-4-氟苯胺基)-4，13-二氧代-3，14-二氧-8，9-二硫-2，5，12-三氮十七-1-烯-17-酸乙酯三氟乙酸盐溶于30ml的DMF中，加入2-(2-氰基吡啶-4-亚甲氧基)-4-(2-溴-3-苯基苄氧基)-5-氯苯甲醛(432mg,0.81mmol)和冰醋酸(195mg,3.24mmol)，室温下搅拌1h，加入氰基硼氢化钠(204mg,3.24mmol)，继续反应3h。向反应液中加入150ml水，乙酸乙酯(3×150ml)萃取，水(200ml)和饱和食盐水(2×200ml)洗涤，无水硫酸钠干燥，蒸干，通过硅胶柱层析分离纯化得化合物1白色固体783mg。1H NMR(400MHz,Acetone-d6):δ8.91(s,1H,-NH-),8.74(d,J＝5.2Hz,1H,-ArH),8.08(s,1H,-NH-),7.84(d,J＝4.9Hz,1H,-ArH),7.67(d,J＝7.0Hz,1H,-ArH),7.54–7.38(m,9H,-ArH),7.34(dd,J＝10.7,4.2Hz,1H,-ArH),7.20(t,J＝8.6Hz,1H,-NH-),7.10(dd,J＝13.9,8.7Hz,2H,-ArH),6.97(s,1H,-ArH),6.50(s,1H,-NH-),6.00(s,2H,-NH2),5.42(s,2H,-CH2-),5.29(s,2H,-CH2-),4.30(dd,J＝10.9,5.0Hz,1H,-CH2-),4.19(dd,J＝10.8,5.5Hz,1H,-CH2-),4.16–4.07(m,2H,-CH2-),3.88(m,2H,-CH2-),3.60–3.50(m,3H,-CH2-,-CH-),3.43(dd,J＝12.6,6.2Hz,2H),2.92(t,J＝6.9Hz,2H,-CH2-),2.89-2.84(2H,partly covered by the peak of water),1.21(dd,J＝9.0,5.1Hz,3H,-CH3).HRMS(ESI)m/z:[M+H]+1169.08813.
或将所得的深黄色油状物(Z)-4-氨基-N'-(2-((2-氨基乙基)二硫基)乙氨基甲酰氧基)-N-(3-溴-4-氟苯基)-1,2,5-噁二唑-3-脒-三氟乙酸盐(1.34mmol)溶于DMF(35ml)中，依次加入Et3N(559μl,4.02mmol)和N-(4-(2-溴-3-苯基苄氧基)-5-氯-2-(2-氰吡啶-4-甲氧基)苄基)-N-(叔丁氧甲酰基)-O-(对硝基苯氧甲酰基)-L-丝氨酸乙酯(1.23g,1.34mmol)，Ar保护下搅拌2h。向反应液中加入150ml的水，乙酸乙酯萃取(3×150ml)，饱和食盐水(2×200ml)洗涤，无水硫酸钠干燥，蒸干，硅胶柱层析分离纯化得白色固体950mg.
实施例2：(S,R,Z)-1-(4-氨基-1，2，5-噁二唑-3-基)-1-(3-溴-4-氟苯胺基)-15-甲基-16-(4-((2-溴-(1，1’-联苯基)-3-基)甲氧基)-5-氯-2-(2-氰基吡啶-4-基甲氧基)苄胺基)-4，13-二氧代-3，14-二氧-8，9-二硫-2，5，12-三氮十七-1-烯-17-酸乙酯(化合物4)
用(S,R)-2-叔丁氧甲酰基氨基-3-(4-硝基苯氧甲酰基氧基)丁酸乙酯代替(S)-2-叔丁氧甲酰基氨基-3-(4-硝基苯氧甲酰基氧基)丙酸乙酯，操作同实施例1，得到白色固体，收率为24.30％。1H NMR(400MHz,Acetone):δ8.91(s,1H,-NH-),8.74(d,J＝4.9Hz,1H,-ArH),8.08(s,1H,-ArH),7.83(d,J＝4.9Hz,1H,-ArH),7.68(dd,J＝7.6,1.1Hz,1H,-ArH),7.53–7.32(m,9H,-ArH,-ArH),7.19(t,J＝8.6Hz,1H,-NH-),7.15–7.02(m,2H,-ArH),6.97(s,1H,-ArH),6.41(t,J＝5.5Hz,1H,-NH-),6.01(s,2H,-NH2),5.41(s,2H,-CH2-),5.29(s,2H,-CH2-),5.09(dd,J＝6.2,4.4Hz,1H,-CH-),4.20–4.02(m,2H,-CH2-),3.92(d,J＝13.5Hz,1H,-CH2-),3.75(d,J＝13.5Hz,1H,-CH2-),3.55(dd,J＝12.5,6.2Hz,2H,-CH2-),3.40(dd,J＝9.7,5.1Hz,3H,-CH2-,-CH-),2.98–2.79(4H,-CH2-,-CH2-,covered by thepeak of water),2.30(s,1H,-NH-),1.27(d,J＝6.4Hz,3H,-CH3),1.20(t,J＝7.1Hz,3H,-CH3).HRMS(ESI)m/z:[M+H]+1183.10291.
实施例3：(S,Z)-1-(4-氨基-1，2，5-噁二唑-3-基)-1-(3-溴-4-氟苯胺基)
-16-(4-((2-溴-(1，1’-联苯基)-3-基)甲氧基)-5-氯-2-(5-氰基吡啶-3-基甲氧基)苄胺基)-4，13-二氧代-3，14-二氧-8，9-二硫-2，5，12-三氮十七-1-烯-17-酸乙酯(化合物10)
用2-(5-氰基吡啶-3-亚甲氧基)-4-(2-溴-3-苯基苄氧基)-5-氯苯甲醛代替2-(2-氰基吡啶-4-亚甲氧基)-4-(2-溴-3-苯基苄氧基)-5-氯苯甲醛，操作同实施例1，得到白色固体，收率为33.4％。HRMS(ESI)m/z:[M+H]+1169.09113.
实施例4：(S,Z)-1-(4-氨基-1，2，5-噁二唑-3-基)-1-(3-溴-4-氟苯胺基)-16-(4-((2-溴-(1，1’-联苯基)-3-基)甲氧基)-5-氯-2-(5-甲磺酰基吡啶-3-基甲氧基)苄胺基)-4，13-二氧代-3，14-二氧-8，9-二硫-2，5，12-三氮十七-1-烯-17-酸乙酯(化合物12)
用2-(5-甲磺酰基吡啶-3-亚甲氧基)-4-(2-溴-3-苯基苄氧基)-5-氯苯甲醛代替2-(2-氰基吡啶-4-亚甲氧基)-4-(2-溴-3-苯基苄氧基)-5-氯苯甲醛，操作同实施例1，得到白色固体，收率为32.1％。HRMS(ESI)m/z:[M+H]+1222.07021.
实施例5：(S,Z)-1-(4-氨基-1，2，5-噁二唑-3-基)-1-(3-溴-4-氟苯胺基)-16-(4-((2-氯-3-(1，4-苯并二噁烷-6-基)苄氧基)-5-甲基-2-(5-氰基吡啶-3-基甲氧基)苄胺基)-4，13-二氧代-3，14-二氧-8，9-二硫-2，5，12-三氮十七-1-烯-17-酸甲酯(化合物7)
用2-(5-氰基吡啶-3-亚甲氧基)-4-(2-氯-3-(1，4苯并二噁烷-6-基)苄氧基)-5-甲基苯甲醛代替2-(2-氰基吡啶-4-亚甲氧基)-4-(2-溴-3-苯基苄氧基)-5-氯苯甲醛，用(S)-2-叔丁氧甲酰基氨基-3-(4-硝基苯氧甲酰基氧基)丙酸甲酯代替(S)-2-叔丁氧甲酰基氨基-3-(4-硝基苯氧甲酰基氧基)丙酸乙酯，操作同实施例1，得到白色固体，收率为34.23％。HRMS(ESI)m/z:[M+H]+1149.18041.
实施例6：(S,Z)-1-(4-氨基-1，2，5-噁二唑-3-基)-1-(3-溴-4-氟苯胺基)-16-(4-((2-氯-3-(1，4-苯并二噁烷-6-基)苄氧基)-5-甲基-2-(5-氰基吡啶-3-基甲氧基)苄胺基)-4，13-二氧代-3，14-二氧-8，9-二硫-2，5，12-三氮十七-1-烯-17-酸(化合物8)
将(S,Z)-1-(4-氨基-1，2，5-噁二唑-3-基)-1-(3-溴-4-氟苯胺基)-16-(4-((2-氯-3-(1，4-苯并二噁烷-6-基)苄氧基)-5-甲基-2-(5-氰基吡啶-3-基甲氧基)苄胺基)-4，13-二氧代-3，14-二氧-8，9-二硫-2，5，12-三氮十七-1-烯-17-酸甲酯溶于含有氢氧化锂的丙酮溶液中，室温搅拌至完全水解，倾入冰水中，沉降过滤得到白色固体(S,Z)-1-(4-氨基-1，2，5-噁二唑-3-基)-1-(3-溴-4-氟苯胺基)-16-(4-((2-氯-3-(1，4-苯并二噁烷-6-基)苄氧基)-5-甲基-2-(5-氰基吡啶-3-基甲氧基)苄胺基)-4，13-二氧代-3，14-二氧-8，9-二硫-2，5，12-三氮十七-1-烯-17-酸。收率为85.5％。HRMS(ESI)m/z:[M+H]+1135.16723.
实施例7：(S,Z)-1-(4-氨基-1，2，5-噁二唑-3-基)-1-(3-溴-4-氟苯胺基)-16-(4-((2-溴-3-(1，4苯并二噁烷-6-基)苄氧基)-5-氯-2-(5-氰基吡啶-3-基甲氧基)苄胺基)-4，13-二氧代-3，14-二氧-8，9-二硫-2，5，12-三氮十七-1-烯-17-酸乙酯(化合物13)
用2-(5-氰基吡啶-3-亚甲氧基)-4-(2-溴-3-(1，4苯并二噁烷-6-基)苄氧基)-5-氯苯甲醛代替2-(2-氰基吡啶-4-亚甲氧基)-4-(2-溴-3-苯基苄氧基)-5-氯苯甲醛，操作同实施例1，得到白色固体，收率为29.5％。HRMS(ESI)m/z:[M+H]+1227.08641.
实施例8：(S,Z)-1-(4-氨基-1，2，5-噁二唑-3-基)-1-(3-溴-4-氟苯胺基)-16-(4-((2-溴-(1，1’-联苯基)-3-基)甲氧基)-5-氯-2-(5-氰基吡啶-3-基甲氧基)苄胺基)-4，13-二氧代-3，14-二氧-8，9-二硫-2，5，12-三氮十七-1-烯-17-酸(化合物11)
将(S,Z)-1-(4-氨基-1，2，5-噁二唑-3-基)-1-(3-溴-4-氟苯胺基)-16-(4-((2-溴-(1，1’-联苯基)-3-基)甲氧基)-5-氯-2-(5-氰基吡啶-3-基甲氧基)苄胺基)-4，13-二氧代-3，14-二氧-8，9-二硫-2，5，12-三氮十七-1-烯-17-酸乙酯溶于含有氢氧化锂的丙酮溶液中，室温搅拌至完全水解，倾入冰水中，沉降过滤得到白色固体(S,Z)-1-(4-氨基-1，2，5-噁二唑-3-基)-1-(3-溴-4-氟苯胺基)-16-(4-((2-溴-(1，1’-联苯基)-3-基)甲氧基)-5-氯-2-(5-氰基吡啶-3-基甲氧基)苄胺基)-4，13-二氧代-3，14-二氧-8，9-二硫-2，5，12-三氮十七-1-烯-17-酸。收率为79.9％。HRMS(ESI)m/z:[M+H]+1141.05563.
实施例9：(S,Z)-1-(4-氨基-1，2，5-噁二唑-3-基)-1-(3-溴-4-氟苯胺基)-16-甲基-16-(4-((2-溴-3-(1，4苯并二噁烷-6-基)苄氧基)-5-氯-2-(2-氰基吡啶-4-基甲氧基)苄胺基)-4，13-二氧代-3，14-二氧-8，9-二硫-2，5，12-三氮十七-1-烯-17-酸乙酯(化合物14)
用2-(2-氰基吡啶-4-亚甲氧基)-4-(2-溴-3-(1，4苯并二噁烷-6-基)苄氧基)-5-氯苯甲醛代替2-(2-氰基吡啶-4-亚甲氧基)-4-(2-溴-3-苯基苄氧基)-5-氯苯甲醛，用(S)-2-甲基-2-叔丁氧甲酰基氨基-3-(4-硝基苯氧甲酰基氧基)丙酸乙酯代替(S)-2-叔丁氧甲酰基氨基-3-(4-硝基苯氧甲酰基氧基)丙酸乙酯，操作同实施例1，得到白色固体，收率为23.6％。HRMS(ESI)m/z:[M+H]+1241.10531.
实施例10：(S,Z)-1-(4-氨基-1，2，5-噁二唑-3-基)-1-(3-溴-4-氟苯胺基)-14-(4-((2-溴-3-(1，4-苯并二噁烷-6-基)苄氧基)-5-氯-2-(5-氰基吡啶-3-基甲氧基)苄基)-15-甲基-4，13-二氧代-3，12-二氧-8，9-二硫-2，5，14-三氮十六-1-烯-16-酸乙酯(化合物16)
1、(吡啶-2-基)(氨乙基)二硫醚盐酸盐的合成
将2,2'-二硫二吡啶(13.58g，61.64mmol)加入至100ml的甲醇中，Ar保护下加入巯基乙胺盐酸盐(4.67g，41.11mmol)的甲醇溶液(100ml)，加毕，室温下反应12h，向反应液中加入500ml的乙醚，析出固体，抽滤，得黄色固体7.60g。1H NMR(300MHz,CD3OD):δ8.65(s,1H,-ArH),8.24(d,J＝6.5Hz,1H,-ArH),8.12(d,J＝7.2Hz,1H,-ArH),7.67(s,1H,-ArH),3.23(m,4H,-CH2-,-CH2-).
2、(异氰酸乙酯基)(吡啶-2-基)二硫醚的合成
将中间体(吡啶-2-基)(氨乙基)二硫醚盐酸盐(4g，17.96mmol)和1,8-双二甲氨基萘(12.36g,53.88mmol)加入至120ml的超干DCM中，冰浴条件下加入双光气(1.08ml,8.98mmol)，移至室温搅拌2h，蒸干后直接进行下一步反应。
3、(Z)-4-氨基-N-(3-溴-4-氟苯基)-N'-(2-(吡啶-2-二硫基)乙胺甲酰氧基)-1,2,5-噁二唑-3-脒的合成
将中间体(异氰酸乙酯基)(吡啶-2-基)二硫醚的粗品(3g,17.96mmol)溶于160ml的DCM中，再加入中间体4-氨基-1,2,5-恶二唑-3-氯化甲醛肟(1.5g,8.98mmol)和DIPEA(5.93ml,35.90mmol)，Ar保护下搅拌12h。向反应液中加入140ml 1N的盐酸水溶液，二氯甲烷(3×200ml)萃取，1N的盐酸水溶液(2×150ml)和饱和氯化钠水溶液(200ml)洗涤，无水硫酸钠干燥，减压浓缩至约100ml，析出固体，抽滤，干燥，得白色固体1.4g(3.74mmol)。将其溶于13.6ml的无水乙醇中，加入3-溴-4-氟苯胺(0.72g,3.76mmol)，冰水浴条件搅拌下，加入NaHCO3(0.72g,8.5mmol)的水溶液(10.8ml)，升温至60℃反应2h，减压蒸除乙醇，乙酸乙酯(3×150ml)萃取，饱和NaCl水溶液(1×60ml)洗涤，无水Na2SO4干燥，浓缩、柱层析分离得到0.78g(Z)-4-氨基-N-(3-溴-4-氟苯基)-N'-(2-(吡啶-2-二硫基)乙胺甲酰氧基)-1,2,5-噁二唑-3-脒。
或将中间体(异氰酸乙酯基)(吡啶-2-基)二硫醚的粗品(3g,17.96mmol)溶于160ml的DCM中，再加入中间体(Z)-4-氨基-N-(3-溴-4-氟苯基)-N'-羟基-1,2,5-噁二唑-3-脒(2.84g,8.98mmol)和DIPEA(5.93ml,35.90mmol)，Ar保护下搅拌12h。向反应液中加入140ml 1N的盐酸水溶液，二氯甲烷(3×200ml)萃取，1N的盐酸水溶液(2×150ml)和饱和氯化钠水溶液(200ml)洗涤，无水硫酸钠干燥，减压浓缩至约100ml，析出固体，抽滤，得白色固体2.28g。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6):δ9.78(s,1H,-NH-),8.45(d,J＝5.0Hz,1H,-ArH),7.87–7.74(m,2H,-ArH),7.72(t,J＝5.8Hz,1H,-ArH),7.32(dd,J＝6.1,2.6Hz,1H,ArH),7.29–7.21(m,2H,-ArH),6.98–6.89(m,1H,-NH-),6.43(s,2H,-NH2),3.42(dd,J＝12.8,6.4Hz,2H,-CH2-),2.98(t,J＝6.7Hz,2H,-CH2-).HRMS(ESI)m/z:[M+H]+527.99121.
4、(Z)-4-氨基-N'-(2-((2-羟乙基)二硫基)乙氨基甲酰氧基)-N-(3-溴-4-氟苯基)-1,2,5-噁二唑-3-脒的合成
将(Z)-4-氨基-N-(3-溴-4-氟苯基)-N'-(2-(吡啶-2-二硫基)乙胺甲酰氧基)-1,2,5-噁二唑-3-脒528mg(1mmol)溶于15毫升无水THF中，加入94mg巯基乙醇(1.2mmol),室温反应24h。减压蒸除溶剂，加入50毫升乙酸乙酯溶解，水洗，饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，浓缩，柱层析分离得到白色固体480mg。液质：m/z 496.8445[M+H]+核磁数据：1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ9.70(s,1H,-NH-),7.54(t,J＝5.6Hz,1H,-NH-),7.31(dd,J＝6.0,2.5Hz,1H,-PhH),7.25(t,J＝8.7Hz,1H,-PhH),6.96–6.87(m,1H,-PhH),6.40(s,2H,-NH2),4.87(t,J＝6.0Hz,1H,-OH),3.65–3.60(m,2H,-CH2-),3.41(q,J＝6.4Hz,2H,-CH2-),2.85(dd,J＝12.5,5.6Hz,2H,-CH2-),2.82–2.73(m,2H,-CH2-).
5、(S)-N-(4-((2-溴-3-(1，4-苯并二噁烷-6-基)苄氧基)-5-氯-2-(5-氰基吡啶-3-亚甲氧基)苄基)-N-(4-硝基苯氧甲酰基)丙氨酸乙酯的合成
将(S)-N-(4-((2-溴-3-(1，4-苯并二噁烷-6-基)苄氧基)-5-氯-2-(5-氰基吡啶-3-亚甲氧基)苄基)丙氨酸乙酯(16.6g，24mmol)溶于超干二氯甲烷(100ml)中，加入氯甲酸对硝基苯酯(4.78g,24mmol)和Et3N(3.33ml,23.89mmol)，加毕，室温下反应10h，蒸干，加入乙酸乙酯150毫升溶解，饱和碳酸氢钠水溶液洗、水洗、饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，浓缩析出黄色固体16g。
6、(S,Z)-1-(4-氨基-1，2，5-噁二唑-3-基)-1-(3-溴-4-氟苯胺基)-14-(4-((2-溴-3-(1，4-苯并二噁烷-6-基)苄氧基)-5-氯-2-(5-氰基吡啶-3-基甲氧基)苄基)-15-甲基-4，13-二氧代-3，12-二氧-8，9-二硫-2，5，14-三氮十六-1-烯-16-酸乙酯
将(S)-N-(4-((2-溴-3-(1，4-苯并二噁烷-6-基)苄氧基)-5-氯-2-(5-氰基吡啶-3-亚甲氧基)苄基)-N-(4-硝基苯氧甲酰基)丙氨酸乙酯(858mg,1mmol)溶于10ml DMF中，加入碳酸铯(652mg,2mmol)、(Z)-4-氨基-N'-(2-((2-羟乙基)二硫基)乙氨基甲酰氧基)-N-(3-溴-4-氟苯基)-1,2,5-噁二唑-3-脒(743mg,1.5mmol)，室温反应至完全，倾入饱和氯化铵冰水中。加入100毫升乙酸乙酯萃取3次、合并有机相，水洗，饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，蒸干，柱层析分离得到得到白色固体，收率为61.7％。HRMS(ESI)m/z:[M+H]+1212.07131.
实施例11：(S,Z)-15-(乙酰氧甲基)-14-(4-((2-溴-3-(1，4-苯并二噁烷-6-基)苄氧基)-5-氯-2-(5-氰基吡啶-3-基甲氧基)苄基)-1-(3-溴-4-氟苯胺基)-4，13-二氧代-1-(4-(2-(氨磺酰胺基)乙氨基)-1，2，5-噁二唑-3-基)-3，12-二氧-8，9-二硫-2，5，14-三氮十六-1-烯-16-酸乙酯(化合物18)
用(S)-N-(4-((2-溴-3-(1，4苯并二噁烷-6-基)苄氧基)-5-氯-2-(5-氰基吡啶-3-亚甲氧基)苄基)-N-(4-硝基苯氧甲酰基)-O-乙酰基丝氨酸乙酯代替(S)-N-(4-((2-溴-3-(1，4-苯并二噁烷-6-基)苄氧基)-5-氯-2-(5-氰基吡啶-3-亚甲氧基)苄基)-N-(4-硝基苯氧甲酰基)丙氨酸乙酯，用(Z)-N'-(2-((2-羟乙基)二硫基)乙氨基甲酰氧基)-N-(3-溴-4-氟苯基)-4-(2-(氨磺酰胺基)乙氨基)-1,2,5-噁二唑-3-脒代替(Z)-4-氨基-N'-(2-((2-羟乙基)二硫基)乙氨基甲酰氧基)-N-(3-溴-4-氟苯基)-1,2,5-噁二唑-3-脒，操作同实施例10，得到白色固体，收率为34.8％。HRMS(ESI)m/z:[M+H]+1392.09033.
实施例12：(S,Z)-1-(4-氨基-1，2，5-噁二唑-3-基)-1-(3-溴-4-氟苯胺基)-14-(4-((2-溴-3-(1，4-苯并二噁烷-6-基)苄氧基)-5-氯-2-(5-氰基吡啶-3-基甲氧基)苄基)-15-(乙酰氧甲基)--4，13-二氧代-3，12-二氧-8，9-二硫-2，5，14-三氮十六-1-烯-16-酸乙酯(化合物19)
用(S)-N-(4-((2-溴-3-(1，4苯并二噁烷-6-基)苄氧基)-5-氯-2-(5-氰基吡啶-3-亚甲氧基)苄基)-N-(4-硝基苯氧甲酰基)-O-乙酰基丝氨酸乙酯代替(S)-N-(4-((2-溴-3-(1，4-苯并二噁烷-6-基)苄氧基)-5-氯-2-(5-氰基吡啶-3-亚甲氧基)苄基)-N-(4-硝基苯氧甲酰基)丙氨酸乙酯，操作同实施例10，得到白色固体，收率为57.2％。HRMS(ESI)m/z:[M+H]+1270.08451.
实施例13：(2S,4S)-4-((((Z)-1-(4-氨基-1,2,5-噁二唑-3-基)-1-(3-溴-4-氟苯胺基)-4-氧代-3-氧-8,9-二硫-2,5-二氮十一-1-烯-11-基)胺甲酰)氧基)-1-(4-((2-溴-(1,1'-联苯)-3-基)甲氧基)-5-氯-2-((2-氰吡啶-4-基)甲氧)苄基)吡咯烷-2-甲酸乙酯(化合物22)
1、(吡啶-2-基)(氨乙基)二硫醚盐酸盐的合成
将2,2'-二硫二吡啶(13.58g，61.64mmol)加入至100ml的甲醇中，Ar保护下加入巯基乙胺盐酸盐(4.67g，41.11mmol)的甲醇溶液(100ml)，加毕，室温下反应12h，向反应液中加入500ml的乙醚，析出固体，抽滤，得黄色固体7.60g。1H NMR(300MHz,CD3OD):δ8.65(s,1H,-ArH),8.24(d,J＝6.5Hz,1H,-ArH),8.12(d,J＝7.2Hz,1H,-ArH),7.67(s,1H,-ArH),3.23(m,4H,-CH2-,-CH2-).
2、(异氰酸乙酯基)(吡啶-2-基)二硫醚的合成
将中间体(吡啶-2-基)(氨乙基)二硫醚盐酸盐(4g，17.96mmol)和1,8-双二甲氨基萘(12.36g,53.88mmol)加入至120ml的超干DCM中，冰浴条件下加入双光气(1.08ml,8.98mmol)，移至室温搅拌2h，蒸干后直接进行下一步反应。
3、(Z)-4-氨基-N-(3-溴-4-氟苯基)-N'-(2-(吡啶-2-二硫基)乙胺甲酰氧基)-1,2,5-噁二唑-3-脒的合成
将中间体(异氰酸乙酯基)(吡啶-2-基)二硫醚的粗品(3g,17.96mmol)溶于160ml的DCM中，再加入中间体4-氨基-1,2,5-恶二唑-3-氯化甲醛肟(1.5g,8.98mmol)和DIPEA(5.93ml,35.90mmol)，Ar保护下搅拌12h。向反应液中加入140ml 1N的盐酸水溶液，二氯甲烷(3×200ml)萃取，1N的盐酸水溶液(2×150ml)和饱和氯化钠水溶液(200ml)洗涤，无水硫酸钠干燥，减压浓缩至约100ml，析出固体，抽滤，干燥，得白色固体1.4g(3.74mmol)。将其溶于13.6ml的无水乙醇中，加入3-溴-4-氟苯胺(0.72g,3.76mmol)，冰水浴条件搅拌下，加入NaHCO3(0.72g,8.5mmol)的水溶液(10.8ml)，升温至60℃反应2h，减压蒸除乙醇，乙酸乙酯(3×150ml)萃取，饱和NaCl水溶液(1×60ml)洗涤，无水Na2SO4干燥，浓缩、柱层析分离得到0.78g(Z)-4-氨基-N-(3-溴-4-氟苯基)-N'-(2-(吡啶-2-二硫基)乙胺甲酰氧基)-1,2,5-噁二唑-3-脒。
或将中间体(异氰酸乙酯基)(吡啶-2-基)二硫醚的粗品(3g,17.96mmol)溶于160ml的DCM中，再加入中间体(Z)-4-氨基-N-(3-溴-4-氟苯基)-N'-羟基-1,2,5-噁二唑-3-脒(2.84g,8.98mmol)和DIPEA(5.93ml,35.90mmol)，Ar保护下搅拌12h。向反应液中加入140ml 1N的盐酸水溶液，二氯甲烷(3×200ml)萃取，1N的盐酸水溶液(2×150ml)和饱和氯化钠水溶液(200ml)洗涤，无水硫酸钠干燥，减压浓缩至约100ml，析出固体，抽滤，得白色固体2.28g。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6):δ9.78(s,1H,-NH-),8.45(d,J＝5.0Hz,1H,-ArH),7.87–7.74(m,2H,-ArH),7.72(t,J＝5.8Hz,1H,-ArH),7.32(dd,J＝6.1,2.6Hz,1H,ArH),7.29–7.21(m,2H,-ArH),6.98–6.89(m,1H,-NH-),6.43(s,2H,-NH2),3.42(dd,J＝12.8,6.4Hz,2H,-CH2-),2.98(t,J＝6.7Hz,2H,-CH2-).HRMS(ESI)m/z:[M+H]+527.99121.
4、2-(2-氰基吡啶-4-亚甲氧基)-4-(2-溴-3-苯基苄氧基)-5-氯苯甲醛的合成
将中间体2-羟基-4-(2-溴-3-苯基苄氧基)-5-氯苯甲醛(1.50g,3.59mmol)加入至25ml的DMF中，加入K2CO3(992mg,7.18mmol)和4-(溴甲基)皮考啉腈(1.06g,5.39mmol)，加毕，室温下搅拌4h。向反应液中加水(80ml)，固体析出，抽滤，滤饼经柱色谱分离纯化得白色固体1.38g。
5、(S,S)-N-(4-(2-溴-3-苯基苄氧基)-5-氯-2-(2-氰吡啶-4-甲氧基)苄基)-O-(对硝基苯氧甲酰基)-4-羟基脯氨酸乙酯
将(S,S)-N-(4-(2-溴-3-苯基苄氧基)-5-氯-2-(2-氰吡啶-4-甲氧基)苄基)-4-羟基脯氨酸乙酯(10.8g,15.98mmol)溶于超干二氯甲烷(100ml)中，加入对硝基苯基氯甲酸酯(4.78g,24mmol)和Et3N(3.33ml,23.89mmol)，加毕，室温下反应6h，蒸干，柱层析分离纯化得黄色固体11g。HRMS(ESI)m/z:[M+H]+841.11897.
6、(Z)-(1-(4-氨基-1,2,5-噁二唑-3-基)-1-((3-溴-4-氟苯基)氨基)-4-氧代-3-氧-8,9-二硫-2,5-二氮十一-1-烯-11-基)氨基甲酸叔丁酯的合成
将中间体(Z)-4-氨基-N-(3-溴-4-氟苯基)-N'-(2-(吡啶-2-二硫基)乙胺甲酰氧基)-1,2,5-噁二唑-3-脒(3g,5.69mmol)溶于二氯甲烷(100mL)和甲醇(100mL)的混合溶剂中，加入2-叔丁氧羰基氨基乙硫醇(1.31g,7.40mmol)，Ar保护下搅拌1h。向反应液中加入200ml 0.5N的盐酸水溶液，二氯甲烷萃取(2×150ml)，饱和NaHCO3水溶液(200ml)洗涤，无水硫酸钠干燥，蒸干，硅胶柱层析分离纯化得黄色油状物1.59g。1H NMR(400MHz,Acetone-d6):δ8.94(s,1H,-NH-),7.45(dd,J＝6.0,2.6Hz,1H,-ArH),7.21(t,J＝8.6Hz,1H,-NH-),7.16–7.05(m,2H,-ArH),6.19(s,1H,-NH-),6.01(s,2H,-NH2),3.57(dd,J＝12.7,6.4Hz,2H,-CH2-),3.39(dd,J＝13.1,6.4Hz,2H,-CH2-),2.94(dd,J＝8.3,5.3Hz,2H,-CH2-),2.91–2.81(2H,-CH2-,covered by the peak of water),1.40(s,9H,-Boc).HRMS(ESI)m/z:[M+H]+594.05817.
7、(Z)-4-氨基-N'-(2-((2-氨基乙基)二硫基)乙氨基甲酰氧基)-N-(3-溴-4-氟苯基)-1,2,5-噁二唑-3-脒-三氟乙酸盐的合成
将中间体(Z)-(1-(4-氨基-1,2,5-噁二唑-3-基)-1-((3-溴-4-氟苯基)氨基)-4-氧代-3-氧-8,9-二硫-2,5-二氮十一-1-烯-11-基)氨基甲酸叔丁酯(797mg,1.34mmol)溶于35ml的二氯甲烷中，加入三氟乙酸(3.5ml)，加毕，氩气保护下反应1h，蒸干后直接进行下一步反应。
8、(2R,4R)-4-(((Z)-1-(4-氨基-1，2，5-噁二唑-3-基)-1-(3-溴-4-氟苯胺基)-4-氧代-3-氧-8,9-二硫-2,5-二氮十一-1-烯-11-基)氨甲酰氧基)吡咯烷-1-甲酸叔丁酯-2-甲酸乙酯的合成
将所得的(Z)-4-氨基-N'-(2-((2-氨基乙基)二硫基)乙氨基甲酰氧基)-N-(3-溴-4-氟苯基)-1,2,5-噁二唑-3-脒-三氟乙酸盐溶于DMF(35ml)中，依次加入Et3N(559μl,4.02mmol)和(S,S)-N-叔丁氧甲酰基-4-(4-硝基苯氧甲酰基氧基)脯氨酸乙酯(568mg,1.34mmol)，Ar保护下搅拌2h。向反应液中加入150ml的水，乙酸乙酯萃取(3×150ml)，饱和食盐水(2×200ml)洗涤，无水硫酸钠干燥，蒸干，硅胶柱层析分离纯化得淡黄色油状物897mg。HRMS(ESI)m/z:[M+H]+779.11982.9、(2R,4R)-4-(((Z)-1-(4-氨基-1，2，5-噁二唑-3-基)-1-(3-溴-4-氟苯胺基)-4-氧代-3-氧-8,9-二硫-2,5-二氮十一-1-烯-11-基)氨甲酰氧基)脯氨酸乙酯三氟乙酸盐的合成
将中间体(2R,4R)-4-(((Z)-1-(4-氨基-1，2，5-噁二唑-3-基)-1-(3-溴-4-氟苯胺基)-4-氧代-3-氧-8,9-二硫-2,5-二氮十一-1-烯-11-基)氨甲酰氧基)吡咯烷-1-甲酸叔丁酯-2-甲酸乙酯(420mg,0.54mmol)溶于40ml的超干二氯甲烷中，加入三氟甲酸(4ml)，加毕，氩气保护下反应1h，蒸干后直接进行下一步反应。
10、(2S,4S)-4-((((Z)-1-(4-氨基-1,2,5-噁二唑-3-基)-1-(3-溴-4-氟苯胺基)-4-氧代-3-氧-8,9-二硫-2,5-二氮十一-1-烯-11-基)胺甲酰)氧基)-1-(4-((2-溴-(1,1'-联苯)-3-基)甲氧基)-5-氯-2-((2-氰吡啶-4-基)甲氧)苄基)吡咯烷-2-甲酸乙酯的合成
将所得黄色油状物(2R,4R)-4-(((Z)-1-(4-氨基-1，2，5-噁二唑-3-基)-1-(3-溴-4-氟苯胺基)-4-氧代-3-氧-8,9-二硫-2,5-二氮十一-1-烯-11-基)氨甲酰氧基)脯氨酸乙酯三氟乙酸盐溶于30ml的DMF中，加入2-(2-氰基吡啶-4-亚甲氧基)-4-(2-溴-3-苯基苄氧基)-5-氯苯甲醛(432mg,0.81mmol)和冰醋酸(195mg,3.24mmol)，室温下搅拌1h，加入氰基硼氢化钠(204mg,3.24mmol)，继续反应3h。向反应液中加入150ml水，乙酸乙酯(3×150ml)萃取，水(200ml)和饱和食盐水(2×200ml)洗涤，无水硫酸钠干燥，蒸干，硅胶柱层析分离纯化得白色固体，收率为15.88％。1H NMR(400MHz,DMSO-d6):δ9.71(s,1H,-NH-),8.76(d,J＝5.0Hz,1H,-ArH),8.16(s,1H,-ArH),7.81(d,J＝5.0Hz,1H,-ArH),7.62(d,J＝7.6Hz,1H,-ArH),7.57–7.29(m,11H,-NH-,-ArH,-ArH),7.24(t,J＝8.7Hz,1H,-NH-),6.98(s,1H,-ArH),6.96–6.90(m,1H,-ArH),6.41(s,2H,-NH2),5.36(q,J＝14.5Hz,2H,-CH2-),5.27(s,2H,-CH2-),5.03(s,1H,-CH-),4.03–3.92(m,2H,-CH2-),3.78(q,J＝13.5Hz,2H,-CH2-),3.50(t,J＝6.8Hz,1H,-CH-),3.45–3.37(m,2H,-CH2-),3.33–3.21(m,3H,-CH2-,-CH2-),2.86(t,J＝6.6Hz,2H,-CH2-),2.78(t,J＝6.3Hz,2H,-CH2-),2.55–2.49(1H,partlycovered by the peak of solvent),2.28–2.15(m,1H,-CH2-),2.12–2.01(m,1H,-CH2-),1.11(t,J＝7.1Hz,3H,-CH3).HRMS(ESI)m/z:[M+H]+1195.10461ppm.
将所得的深黄色油状物(Z)-4-氨基-N'-(2-((2-氨基乙基)二硫基)乙氨基甲酰氧基)-N-(3-溴-4-氟苯基)-1,2,5-噁二唑-3-脒-三氟乙酸盐(1.34mmol)溶于DMF(35ml)中，依次加入Et3N(559μl,4.02mmol)和(S,S)-N-(4-(2-溴-3-苯基苄氧基)-5-氯-2-(2-氰吡啶-4-甲氧基)苄基)-O-(对硝基苯氧甲酰基)-4-羟基脯氨酸乙酯(1.13g,1.34mmol)，Ar保护下搅拌2h。向反应液中加入150ml的水，乙酸乙酯萃取(3×150ml)，饱和食盐水(2×200ml)洗涤，无水硫酸钠干燥，蒸干，硅胶柱层析分离纯化得白色固体910mg.
实施例14：(2S,4S)-4-((((Z)-1-(4-氨基-1,2,5-噁二唑-3-基)-1-(3-溴-4-氟苯胺基)-4-氧代-3-氧-8,9-二硫-2,5-二氮十一-1-烯-11-基)胺甲酰)氧基)-1-(4-((2-溴-(1,1'-联苯)-3-基)甲氧基)-5-氯-2-((5-氰吡啶-3-基)甲氧)苄基)吡咯烷-2-甲酸乙酯(化合物23)
用2-(5-氰基吡啶-3-亚甲氧基)-4-(2-溴-3-苯基苄氧基)-5-氯苯甲醛代替2-(2-氰基吡啶-4-亚甲氧基)-4-(2-溴-3-苯基苄氧基)-5-氯苯甲醛，操作同实施例13，得到白色固体，收率为31.4％。HRMS(ESI)m/z:[M+H]+1195.09231.
实施例15：(2S,4S)-4-((((Z)-1-(4-氨基-1,2,5-噁二唑-3-基)-1-(3-溴-4-氟苯胺基)-4-氧代-3-氧-8,9-二硫-2,5-二氮十一-1-烯-11-基)胺甲酰)氧基)-1-(4-((2-溴-(1,1'-联苯)-3-基)甲氧基)-5-氯-2-((5-氰吡啶-3-基)甲氧)苄基)吡咯烷-2-甲酸(化合物24)
将(2S,4S)-4-((((Z)-1-(4-氨基-1,2,5-噁二唑-3-基)-1-(3-溴-4-氟苯胺基)-4-氧代-3-氧-8,9-二硫-2,5-二氮十一-1-烯-11-基)胺甲酰)氧基)-1-(4-((2-溴-(1,1'-联苯)-3-基)甲氧基)-5-氯-2-((5-氰吡啶-3-基)甲氧)苄基)吡咯烷-2-甲酸乙酯溶于含有氢氧化锂的丙酮溶液中，室温搅拌至完全水解，倾入冰水中，沉降过滤得到白色固体。收率为87.2％。HRMS(ESI)m/z:[M+H]+1167.06621.
实施例16：(2S,4S)-4-((((Z)-1-(4-氨基-1,2,5-噁二唑-3-基)-1-(3-溴-4-氟苯胺基)-4-氧代-3-氧-8,9-二硫-2,5-二氮十一-1-烯-11-基)胺甲酰)氧基)-1-(4-((2-氯-3-(1，4苯并二噁烷-6-基)苄氧基)-5-氯-2-((5-氰吡啶-3-基)甲氧)苄基)吡咯烷-2-甲酸乙酯(化合物25)
用2-(5-氰基吡啶-3-亚甲氧基)-4-(2-氯-3-(1，4苯并二噁烷-6-基)苄氧基)-5-氯苯甲醛代替2-(2-氰基吡啶-4-亚甲氧基)-4-(2-溴-3-苯基苄氧基)-5-氯苯甲醛，操作同实施例12，得到白色固体，收率为29.94％。HRMS(ESI)m/z:[M+H]+1209.15541.
实施例17：(2S,4S)-4-((((Z)-1-(4-氨基-1,2,5-噁二唑-3-基)-1-(3-溴-4-氟苯胺基)-4-氧代-3-氧-8,9-二硫-2,5-二氮十一-1-烯-11-基)胺甲酰)氧基)-1-(4-((2-氯-3-(1，4苯并二噁烷-6-基)苄氧基)-5-氯-2-((5-氰吡啶-3-基)甲氧)苄基)吡咯烷-2-甲酸(化合物26)
将(2S,4S)-4-((((Z)-1-(4-氨基-1,2,5-噁二唑-3-基)-1-(3-溴-4-氟苯胺基)-4-氧代-3-氧-8,9-二硫-2,5-二氮十一-1-烯-11-基)胺甲酰)氧基)-1-(4-((2-氯-3-(1，4苯并二噁烷-6-基)苄氧基)-5-氯-2-((5-氰吡啶-3-基)甲氧)苄基)吡咯烷-2-甲酸乙酯溶于含有氢氧化锂的丙酮溶液中，室温搅拌至完全水解，倾入冰水中，沉降过滤得到白色固体。收率为79.2％。HRMS(ESI)m/z:[M+H]+1181.12325.
药理活性
1、对PD-1与PD-L1相互作用的抑制活性评价：
体外酶学水平的检测方法采用Cisbio公司PD-1/PD-L1 binding assay kit检测试剂盒。
PD-1/PD-L1小分子抑制剂的筛选原理和方法
1)原理：PD-1蛋白带HIS标签，PD-1的配体PD-L1带hFc标签，分别用Eu标记的anti-hFc抗体和XL665标记的anti-HIS抗体与两个标签蛋白结合，激光激发后，能量能够从供体Eu上转移到受体XL665，使得XL665发光，而加入抑制剂(化合物或抗体)后，阻断PD-1与PD-L1的结合，使得Eu和XL665距离较远，能量不能转移，XL665不会发光。
2)实验方法：具体方法可参考Cisbio公司的PD-1/PD-L1试剂盒(货号64ICP01PEG)。简单叙述如下，96孔白色酶标板(Cisbio，货号66PL96100)，每孔加入2μl稀释液或者用稀释液稀释的目标化合物，然后每孔再加入4μl PD-1蛋白和4μl PD-L1蛋白，常温孵育15min，再每孔加入10μl anti-Tag1-Eu3+和anti-Tag2-XL665的混合液，室温孵育2h-6h后用Tecan Spark仪器检测665nm和620nm处的荧光信号。HTRF率＝(665nm/620nm)*104。每个化合物检测6-10个浓度，采用Graphpad软件计算IC50。
3)筛选结果见表1：A代表IC50值小于10-7M，B代表IC50值在10-6至10-7M间，C代表IC50值大于10-6M.
表1.部分化合物对PD-1与PD-L1相互作用的抑制活性评价筛选结果
| 化合物 | IC<sub>50</sub>(M) | 化合物 | IC<sub>50</sub>(M) |
| 1 | B | 16 | C |
| 4 | B | 18 | C |
| 10 | B | 19 | C |
| 12 | B | 22 | B |
| 7 | B | 23 | B |
| 8 | A | 24 | A |
| 13 | B | 25 | B |
| 11 | A | 26 | A |
| 14 | B |
2、MTT法测定肿瘤细胞存活率
实验方法：
取对数生长期的细胞用胰酶消化后配制成细胞悬液，并接种于96孔板。次日加入含不同浓度化合物及相应溶剂对照的新鲜培养基，每化合物设4-6个剂量组，每组至少设三个平行孔，于37℃继续培养96h后，弃上清，每孔加新鲜配制的含0.5mg/mL MTT的无血清培养基，继续培养4h，弃培养上清，每孔加DMSO溶解MTT甲簪沉淀，振荡混匀后，以450nm作为参考波长，于570nm波长处测定OD值，以溶剂对照处理的肿瘤细胞为对照组，计算药物对肿瘤细胞的抑制率，并按中效方程计算IC50。
抑制率＝(对照组平均OD值-给药组平均值OD值)/对照组平均OD值×100％。实验结果：
表2部分化合物的MTT筛选结果
表3部分化合物的MTT筛选结果
肿瘤细胞株：B16F10-黑色素瘤，HepG2-肝癌，MGC803-胃癌，Mia-PaCa2-胰腺癌UO31-肾癌，NCI-H1975-肺癌，MDA-MB-231-乳腺癌，PC3-前列腺癌，MC38-肠癌A2780-卵巢癌，BIU-87-膀胱癌，U87MG-脑癌。
3、实施例化合物体内药效学研究
1)ZC-102(化合物1)口服给药在小鼠黑色素瘤B16F10皮下移植瘤模型中的抑瘤率
实验目的
在小鼠皮下移植瘤模型上评价双靶点抑制剂ZC-102对小鼠黑色素瘤B16F10的体内抗肿瘤药效。
实验材料
ZC-102常温遮光保存。
阳性药：环磷酰胺(CTX)，安道生，规格0.2g，批号：7B153A。
动物：C57小鼠，体重16-18g，SPF级，雌性，由斯贝福提供。
实验方法
步骤:
将传代的B16F10瘤株用匀浆器研匀后，用无菌生理盐水清洗两遍后计数，用生理盐水调整细胞浓度为9×106/ml，将0.2ml细胞混悬液调接种到C57小鼠右侧腋下。接种后次日动物随机分组，每组10只，称重后给药，待测化合物每天给药1次，连续给药19次后称量体重，处死动物，剥取肿瘤组织并称重。最后计算肿瘤抑制率，以肿瘤抑制率评价抗肿瘤作用强度。
分组:
空白对照组，环磷酰胺80mg(注射)，PD-L1单抗10mg(注射)，ZC-102化合物37mg(口服)。
配制:
待测化合物即精确称量ZC-102研磨后溶于0.5％CMCNa，溶解成1.85mg/ml。每只动物按体重口服给予0.4ml/20g，即为37mg/kg组。现用现配。
计算方法:
相对肿瘤增殖率T/C(％)：T/C％＝T/C×100％。(T：治疗组肿瘤重量；C：阴性对照组肿瘤重量)。
肿瘤增殖抑制率TGI(％)：TGI＝(1-T/C)×100。(T：治疗组肿瘤重量；C：阴性对照组肿瘤重量)。
CON和control均代表对照组，antibody代表抗体,CTX代表环磷酰胺，IDO代表(Z)-4-氨基-N-(3-溴-4-氟苯基)-N'-羟基-1,2,5-噁二唑-3-脒，008代表N-[2-(2-氰基吡啶-4-亚甲氧基)-4-(2-溴-3-苯基苄氧基)-5-氯苄基]丝氨酸乙酯。
实验结果
药效
肿瘤重量
给药19天后处理动物称取肿瘤重量，ZC-102对小鼠B16F10作用见图1和表4。
表4.双靶点抑制剂ZC-102化合物对小鼠B16F10的体内抗肿瘤药效
1.TTEST,*P<0.05,***P<0.001
NA:不适用
2)ZC102注射和口服给药对小鼠结肠癌CT26的体内抗肿瘤药效、小鼠体重和脾脏重量、指数和调节性T细胞分析
如图2A和图2B所示，在小鼠CT26异种移植模型中，每日腹腔注射4mg/kg的zc102可产生明显的体内抗肿瘤活性，TGI为54.9％，而每日口服20mg/kg的PD-L1抑制剂008和100mg/kg的IDO单药时，TGI分别为40.6％和32.1％。以上结果表明，双靶点抑制剂zc102较单药008和IDO具有更强的体内抑瘤活性。此外，与空白对照组相比，zc102给药组小鼠的体重没有明显的变化(图2C)。
如图3A和图3B所示，zc102的治疗不影响小鼠的脾脏重量和脾脏指数。如图3C所示，zc102治疗后，小鼠脾脏中的调节性T细胞(CD4+CD25+Foxp3+)数量呈下降趋势，这间接说明双靶点化合物zc102可通过抑制IDO1的活性抑制调节性T细胞的生成。
Claims (15)
1.如通式I所示的含双硫键化合物及其立体异构体或其可药用盐，
式中
X选自:
其中R1选自
R2选自甲基、氟、氯、溴、氰基,R3选自2-氰基吡啶-4-亚甲基、5-氰基吡啶-3-亚甲基、5-甲磺酰吡啶-3-亚甲基、5-氨甲酰基吡啶-3-亚甲基,R4选自氢、甲基、氟、氯、溴,R5选自氢、甲基、羟甲基、2-羟乙基、乙酰氧甲基、2-乙酰氧乙基、异丙基,R6选自氢、甲基、乙基、异丙基,R7选自氢、甲基；
Y选自碳、氧、NH；
W选自氟、氯、溴、甲基、三氟甲基；
n选自：0、1、2、3、4或5；
Z选自---NH2、---NH-(CH2)m-NH-SO2NH2、---NH-(CH2)m-NH-S(NH)ONH2、---NH-(CH2)m-NH-S(NCN)ONH2、---NH-(CH2)m-NH-SO2CH3、---NH-(CH2)m-SO2NH2、---NH-(CH2)m-S(NH)ONH2、---NH-(CH2)m-S(NCN)ONH2、---NH-(CH2)m-SO2CH3、---NH-(CH2)m-S(NH)OCH3、---NH-(CH2)m-S(NCN)OCH3、---NH-(CH2)m-NH-S(NH)OCH3、---NH-(CH2)m-NH-S(NCN)OCH3、---NH(CO)NH-(CH2)m-NH-SO2NH2、---NH(CO)NH-(CH2)m-NH-S(NH)ONH2、---NH(CO)NH-(CH2)m-NH-S(NCN)ONH2、---NH(CO)NH-(CH2)m-NH-SO2CH3、---NH(CO)NH-(CH2)m-NH-S(NH)OCH3、---NH(CO)NH-(CH2)m-NH-S(NCN)OCH3、---NH(CO)NH-(CH2)m-SO2CH3、---NH(CO)NH-(CH2)m-S(NH)OCH3、---NH(CO)NH-(CH2)m-S(NCN)OCH3、---NH(CO)NH-(CH2)n-SO2NH2、---NH(CO)NH-(CH2)m-S(NH)ONH2、---NH(CO)NH-(CH2)m-S(NCN)ONH2、
其中，m＝2、3、4或5。
2.根据权利要求1的含双硫键化合物及其立体异构体或其可药用盐，其特征在于,所述的化合物如式(IA)所示：
式中
R1选自
R2选自甲基、氟、氯、溴、氰基,R3选自2-氰基吡啶-4-亚甲基、5-氰基吡啶-3-亚甲基、5-甲磺酰吡啶-3-亚甲基、5-氨甲酰基吡啶-3-亚甲基,R4选自氢、甲基、氟、氯、溴,R5选自氢、甲基、羟甲基、2-羟乙基、乙酰氧甲基、2-乙酰氧乙基、异丙基,R6选自氢、甲基、乙基、异丙基；
Y选自碳、氧、NH；
W选自氟、氯、溴、甲基、三氟甲基；
n选自：0、1、2、3、4、或5；
Z选自---NH2、---NH-(CH2)m-NH-SO2NH2、---NH-(CH2)m-NH-S(NH)ONH2、---NH-(CH2)m-NH-S(NCN)ONH2、---NH-(CH2)m-NH-SO2CH3、---NH-(CH2)m-SO2NH2、---NH-(CH2)m-S(NH)ONH2、---NH-(CH2)m-S(NCN)ONH2、---NH-(CH2)m-SO2CH3、---NH-(CH2)m-S(NH)OCH3、---NH-(CH2)m-S(NCN)OCH3、---NH-(CH2)m-NH-S(NH)OCH3、---NH-(CH2)m-NH-S(NCN)OCH3、---NH(CO)NH-(CH2)m-NH-SO2NH2、---NH(CO)NH-(CH2)m-NH-S(NH)ONH2、---NH(CO)NH-(CH2)m-NH-S(NCN)ONH2、---NH(CO)NH-(CH2)m-NH-SO2CH3、---NH(CO)NH-(CH2)m-NH-S(NH)OCH3、---NH(CO)NH-(CH2)m-NH-S(NCN)OCH3、---NH(CO)NH-(CH2)m-SO2CH3、---NH(CO)NH-(CH2)m-S(NH)OCH3、---NH(CO)NH-(CH2)m-S(NCN)OCH3、---NH(CO)NH-(CH2)n-SO2NH2、---NH(CO)NH-(CH2)m-S(NH)ONH2、---NH(CO)NH-(CH2)m-S(NCN)ONH2、
其中，m＝2、3、4、或5。
3.根据权利要求2的含双硫键化合物及其立体异构体或其可药用盐，其特征在于,所述的化合物如式(IA1)所示：
式中
R1选自
R2选自甲基、氟、氯、溴、氰基,R3选自2-氰基吡啶-4-亚甲基、5-氰基吡啶-3-亚甲基、5-甲磺酰吡啶-3-亚甲基、5-氨甲酰基吡啶-3-亚甲基,R4选自氢、甲基、氟、氯、溴,R5选自氢、甲基、羟甲基、2-羟乙基、乙酰氧甲基、2-乙酰氧乙基、异丙基,R6选自氢、甲基、乙基、异丙基；
Y选自碳、氧、NH。
4.根据权利要求1的含双硫键化合物及其立体异构体或其可药用盐，其特征在于,所述的化合物如式(IB)所示：
式中
R1选自
R2选自甲基、氟、氯、溴、氰基,R3选自2-氰基吡啶-4-亚甲基、5-氰基吡啶-3-亚甲基、5-甲磺酰吡啶-3-亚甲基、5-氨甲酰基吡啶-3-亚甲基,R4选自氢、甲基、氟、氯、溴,R6选自氢、甲基、乙基、异丙基,R7选自氢、甲基；
Y选自碳、氧、NH；
W选自氟、氯、溴、甲基、三氟甲基；
n选自：0、1、2、3、4、或5；
Z选自---NH2、---NH-(CH2)m-NH-SO2NH2、---NH-(CH2)m-NH-S(NH)ONH2、---NH-(CH2)m-NH-S(NCN)ONH2、---NH-(CH2)m-NH-SO2CH3、---NH-(CH2)m-SO2NH2、---NH-(CH2)m-S(NH)ONH2、---NH-(CH2)m-S(NCN)ONH2、---NH-(CH2)m-SO2CH3、---NH-(CH2)m-S(NH)OCH3、---NH-(CH2)m-S(NCN)OCH3、---NH-(CH2)m-NH-S(NH)OCH3、---NH-(CH2)m-NH-S(NCN)OCH3、---NH(CO)NH-(CH2)m-NH-SO2NH2、---NH(CO)NH-(CH2)m-NH-S(NH)ONH2、---NH(CO)NH-(CH2)m-NH-S(NCN)ONH2、---NH(CO)NH-(CH2)m-NH-SO2CH3、---NH(CO)NH-(CH2)m-NH-S(NH)OCH3、
---NH(CO)NH-(CH2)m-NH-S(NCN)OCH3、---NH(CO)NH-(CH2)m-SO2CH3、
---NH(CO)NH-(CH2)m-S(NH)OCH3、---NH(CO)NH-(CH2)m-S(NCN)OCH3、
---NH(CO)NH-(CH2)n-SO2NH2、---NH(CO)NH-(CH2)m-S(NH)ONH2、
---NH(CO)NH-(CH2)m-S(NCN)ONH2、
其中，m＝2、3、4、或5。
5.根据权利要求4的含双硫键化合物及其立体异构体或其可药用盐，其特征在于,所述的化合物如式(IB1)所示：
式中
R1选自
R2选自甲基、氟、氯、溴、氰基,R3选自2-氰基吡啶-4-亚甲基、5-氰基吡啶-3-亚甲基、5-甲磺酰吡啶-3-亚甲基、5-氨甲酰基吡啶-3-亚甲基,R4选自氢、甲基、氟、氯、溴,R6选自氢、甲基、乙基、异丙基,R7选自氢、甲基；
Y选自碳、氧、NH。
6.根据权利要求1的含双硫键化合物及其立体异构体或其可药用盐，其特征在于,所述的化合物如式(IC)所示：
式中
R1选自
R2选自甲基、氟、氯、溴、氰基,R3选自2-氰基吡啶-4-亚甲基、5-氰基吡啶-3-亚甲基、5-甲磺酰吡啶-3-亚甲基、5-氨甲酰基吡啶-3-亚甲基,R4选自氢、甲基、氟、氯、溴,R6选自氢、甲基、乙基、异丙基；
Y选自碳、氧、NH；
W选自氟、氯、溴、甲基、三氟甲基；
n选自：0、1、2、3、4、或5；
Z选自---NH2、---NH-(CH2)m-NH-SO2NH2、---NH-(CH2)m-NH-S(NH)ONH2、---NH-(CH2)m-NH-S(NCN)ONH2、---NH-(CH2)m-NH-SO2CH3、---NH-(CH2)m-SO2NH2、---NH-(CH2)m-S(NH)ONH2、---NH-(CH2)m-S(NCN)ONH2、---NH-(CH2)m-SO2CH3、---NH-(CH2)m-S(NH)OCH3、---NH-(CH2)m-S(NCN)OCH3、---NH-(CH2)m-NH-S(NH)OCH3、---NH-(CH2)m-NH-S(NCN)OCH3、---NH(CO)NH-(CH2)m-NH-SO2NH2、---NH(CO)NH-(CH2)m-NH-S(NH)ONH2、---NH(CO)NH-(CH2)m-NH-S(NCN)ONH2、---NH(CO)NH-(CH2)m-NH-SO2CH3、---NH(CO)NH-(CH2)m-NH-S(NH)OCH3、---NH(CO)NH-(CH2)m-NH-S(NCN)OCH3、---NH(CO)NH-(CH2)m-SO2CH3、---NH(CO)NH-(CH2)m-S(NH)OCH3、---NH(CO)NH-(CH2)m-S(NCN)OCH3、---NH(CO)NH-(CH2)n-SO2NH2、---NH(CO)NH-(CH2)m-S(NH)ONH2、---NH(CO)NH-(CH2)m-S(NCN)ONH2、
其中，m＝2、3、4、或5。
7.根据权利要求6的含双硫键化合物及其立体异构体或其可药用盐，其特征在于,所述的化合物如式(IC1)所示：
式中
R1选自
R2选自甲基、氟、氯、溴、氰基,R3选自2-氰基吡啶-4-亚甲基、5-氰基吡啶-3-亚甲基、5-甲磺酰吡啶-3-亚甲基、5-氨甲酰基吡啶-3-亚甲基,R4选自氢、甲基、氟、氯、溴,R6选自氢、甲基、乙基、异丙基；
Y选自碳、氧、NH。
8.根据权利要求1-7任一项的含双硫键化合物及其立体异构体或其可药用盐，所述的化合物选自：
化合物1：(S,Z)-1-(4-氨基-1，2，5-噁二唑-3-基)-1-(3-溴-4-氟苯胺基)-16-(4-((2-溴-(1，1’-联苯基)-3-基)甲氧基)-5-氯-2-(2-氰基吡啶-4-基甲氧基)苄胺基)-4，13-二氧代-3，14-二氧-8，9-二硫-2，5，12-三氮十七-1-烯-17-酸乙酯
化合物2：(S,Z)-1-(4-氨基-1，2，5-噁二唑-3-基)-1-(3-溴-4-氟苯胺基)-16-(4-((2-氯-(1，1’-联苯基)-3-基)甲氧基)-5-氯-2-(5-氰基吡啶-3-基甲氧基)苄胺基)-4，13-二氧代-3，14-二氧-8，9-二硫-2，5，12-三氮十七-1-烯-17-酸乙酯
化合物3：(S,Z)-1-(4-氨基-1，2，5-噁二唑-3-基)-1-(3-溴-4-氟苯胺基)-16-(4-((2-氯-(1，1’-联苯基)-3-基)甲氧基)-5-氯-2-(5-氰基吡啶-3-基甲氧基)苄胺基)-4，13-二氧代-3，14-二氧-8，9-二硫-2，5，12-三氮十七-1-烯-17-酸
化合物4：(S,R,Z)-1-(4-氨基-1，2，5-噁二唑-3-基)-1-(3-溴-4-氟苯胺基)-15-甲基-16-(4-((2-溴-(1，1’-联苯基)-3-基)甲氧基)-5-氯-2-(2-氰基吡啶-4-基甲氧基)苄胺基)-4，13-二氧代-3，14-二氧-8，9-二硫-2，5，12-三氮十七-1-烯-17-酸乙酯
化合物5：(S,R,Z)-1-(4-氨基-1，2，5-噁二唑-3-基)-1-(3-溴-4-氟苯胺基)-15-甲基-16-(4-((2-溴-(1，1’-联苯基)-3-基)甲氧基)-5-氯-2-(5-氰基吡啶-3-基甲氧基)苄胺基)-4，13-二氧代-3，14-二氧-8，9-二硫-2，5，12-三氮十七-1-烯-17-酸乙酯
化合物6：(S,R,Z)-1-(4-氨基-1，2，5-噁二唑-3-基)-1-(3-溴-4-氟苯胺基)-15-甲基-16-(4-((2-溴-(1，1’-联苯基)-3-基)甲氧基)-5-氯-2-(5-氰基吡啶-3-基甲氧基)苄胺基)-4，13-二氧代-3，14-二氧-8，9-二硫-2，5，12-三氮十七-1-烯-17-酸
化合物7：(S,Z)-1-(4-氨基-1，2，5-噁二唑-3-基)-1-(3-溴-4-氟苯胺基)-16-(4-((2-氯-3-(1，4-苯并二噁烷-6-基)苄氧基)-5-甲基-2-(5-氰基吡啶-3-基甲氧基)苄胺基)-4，13-二氧代-3，14-二氧-8，9-二硫-2，5，12-三氮十七-1-烯-17-酸甲酯
化合物8：(S,Z)-1-(4-氨基-1，2，5-噁二唑-3-基)-1-(3-溴-4-氟苯胺基)-16-(4-((2-氯-3-(1，4-苯并二噁烷-6-基)苄氧基)-5-甲基-2-(5-氰基吡啶-3-基甲氧基)苄胺基)-4，13-二氧代-3，14-二氧-8，9-二硫-2，5，12-三氮十七-1-烯-17-酸
化合物9：(S,Z)-1-(4-氨基-1，2，5-噁二唑-3-基)-1-(3-溴-4-氟苯胺基)-16-(4-((2-甲基-3-(1，4-苯并二噁烷-6-基)苄氧基)-5-氯-2-(5-氰基吡啶-3-基甲氧基)苄胺基)-4，13-二氧代-3，14-二氧-8，9-二硫-2，5，12-三氮十七-1-烯-17-酸
化合物10：(S,Z)-1-(4-氨基-1，2，5-噁二唑-3-基)-1-(3-溴-4-氟苯胺基)-16-(4-((2-溴-(1，1’-联苯基)-3-基)甲氧基)-5-氯-2-(5-氰基吡啶-3-基甲氧基)苄胺基)-4，13-二氧代-3，14-二氧-8，9-二硫-2，5，12-三氮十七-1-烯-17-酸乙酯
化合物11：(S,Z)-1-(4-氨基-1，2，5-噁二唑-3-基)-1-(3-溴-4-氟苯胺基)-16-(4-((2-溴-(1，1’-联苯基)-3-基)甲氧基)-5-氯-2-(5-氰基吡啶-3-基甲氧基)苄胺基)-4，13-二氧代-3，14-二氧-8，9-二硫-2，5，12-三氮十七-1-烯-17-酸
化合物12：(S,Z)-1-(4-氨基-1，2，5-噁二唑-3-基)-1-(3-溴-4-氟苯胺基)-16-(4-((2-溴-(1，1’-联苯基)-3-基)甲氧基)-5-氯-2-(5-甲磺酰基吡啶-3-基甲氧基)苄胺基)-4，13-二氧代-3，14-二氧-8，9-二硫-2，5，12-三氮十七-1-烯-17-酸乙酯
化合物13：(S,Z)-1-(4-氨基-1，2，5-噁二唑-3-基)-1-(3-溴-4-氟苯胺基)-16-(4-((2-溴-3-(1，4苯并二噁烷-6-基)苄氧基)-5-氯-2-(5-氰基吡啶-3-基甲氧基)苄胺基)-4，13-二氧代-3，14-二氧-8，9-二硫-2，5，12-三氮十七-1-烯-17-酸乙酯
化合物14：(S,Z)-1-(4-氨基-1，2，5-噁二唑-3-基)-1-(3-溴-4-氟苯胺基)-16-甲基-16-(4-((2-溴-3-(1，4苯并二噁烷-6-基)苄氧基)-5-氯-2-(2-氰基吡啶-4-基甲氧基)苄胺基)-4，13-二氧代-3，14-二氧-8，9-二硫-2，5，12-三氮十七-1-烯-17-酸乙酯
化合物15：(S,Z)-1-(4-氨基-1，2，5-噁二唑-3-基)-1-(3-溴-4-氟苯胺基)-16-甲基-16-(4-((2-溴-3-(1，4苯并二噁烷-6-基)苄氧基)-5-氯-2-(2-氰基吡啶-4-基甲氧基)苄胺基)-4，13-二氧代-3，14-二氧-8，9-二硫-2，5，12-三氮十七-1-烯-17-酸
化合物16：(S,Z)-1-(4-氨基-1，2，5-噁二唑-3-基)-1-(3-溴-4-氟苯胺基)-14-(4-((2-溴-3-(1，4-苯并二噁烷-6-基)苄氧基)-5-氯-2-(5-氰基吡啶-3-基甲氧基)苄基)-15-甲基-4，13-二氧代-3，12-二氧-8，9-二硫-2，5，14-三氮十六-1-烯-16-酸乙酯
化合物17：(S,Z)-1-(4-氨基-1，2，5-噁二唑-3-基)-1-(3-溴-4-氟苯胺基)-14-(4-((2-溴-3-(1，4-苯并二噁烷-6-基)苄氧基)-5-氯-2-(5-氰基吡啶-3-基甲氧基)苄基)-15-甲基-4，13-二氧代-3，12-二氧-8，9-二硫-2，5，14-三氮十六-1-烯-16-酸
化合物18：(S,Z)-15-(乙酰氧甲基)-14-(4-((2-溴-3-(1，4-苯并二噁烷-6-基)苄氧基)-5-氯-2-(5-氰基吡啶-3-基甲氧基)苄基)-1-(3-溴-4-氟苯胺基)-4，13-二氧代-1-(4-(2-(氨磺酰胺基)乙氨基)-1，2，5-噁二唑-3-基)-3，12-二氧-8，9-二硫-2，5，14-三氮十六-1-烯-16-酸乙酯
化合物19：(S,Z)-1-(4-氨基-1，2，5-噁二唑-3-基)-1-(3-溴-4-氟苯胺基)-14-(4-((2-溴-3-(1，4-苯并二噁烷-6-基)苄氧基)-5-氯-2-(5-氰基吡啶-3-基甲氧基)苄基)-15-(乙酰氧甲基)--4，13-二氧代-3，12-二氧-8，9-二硫-2，5，14-三氮十六-1-烯-16-酸乙酯
化合物20：(S,Z)-1-(4-氨基-1，2，5-噁二唑-3-基)-1-(3-溴-4-氟苯胺基)-14-(4-((2-溴-3-(1，4-苯并二噁烷-6-基)苄氧基)-5-氯-2-(5-氰基吡啶-3-基甲氧基)苄基)-15-羟甲基-4，13-二氧代-3，12-二氧-8，9-二硫-2，5，14-三氮十六-1-烯-16-酸
化合物21：(S,Z)-1-(4-氨基-1，2，5-噁二唑-3-基)-1-(3-溴-4-氟苯胺基)-14-(4-((2-溴-3-苯苄氧基)-5-氯-2-(5-氰基吡啶-3-基甲氧基)苄基)-15-羟甲基-4，13-二氧代-3，12-二氧-8，9-二硫-2，5，14-三氮十六-1-烯-16-酸
化合物22：(2S,4S)-4-((((Z)-1-(4-氨基-1,2,5-噁二唑-3-基)-1-(3-溴-4-氟苯胺基)-4-氧代-3-氧-8,9-二硫-2,5-二氮十一-1-烯-11-基)胺甲酰)氧基)-1-(4-((2-溴-(1,1'-联苯)-3-基)甲氧基)-5-氯-2-((2-氰吡啶-4-基)甲氧)苄基)吡咯烷-2-甲酸乙酯
化合物23：(2S,4S)-4-((((Z)-1-(4-氨基-1,2,5-噁二唑-3-基)-1-(3-溴-4-氟苯胺基)-4-氧代-3-氧-8,9-二硫-2,5-二氮十一-1-烯-11-基)胺甲酰)氧基)-1-(4-((2-溴-(1,1'-联苯)-3-基)甲氧基)-5-氯-2-((5-氰吡啶-3-基)甲氧)苄基)吡咯烷-2-甲酸乙酯
化合物24：(2S,4S)-4-((((Z)-1-(4-氨基-1,2,5-噁二唑-3-基)-1-(3-溴-4-氟苯胺基)-4-氧代-3-氧-8,9-二硫-2,5-二氮十一-1-烯-11-基)胺甲酰)氧基)-1-(4-((2-溴-(1,1'-联苯)-3-基)甲氧基)-5-氯-2-((5-氰吡啶-3-基)甲氧)苄基)吡咯烷-2-甲酸
化合物25：(2S,4S)-4-((((Z)-1-(4-氨基-1,2,5-噁二唑-3-基)-1-(3-溴-4-氟苯胺基)-4-氧代-3-氧-8,9-二硫-2,5-二氮十一-1-烯-11-基)胺甲酰)氧基)-1-(4-((2-氯-3-(1，4苯并二噁烷-6-基)苄氧基)-5-氯-2-((5-氰吡啶-3-基)甲氧)苄基)吡咯烷-2-甲酸乙酯
化合物26：(2S,4S)-4-((((Z)-1-(4-氨基-1,2,5-噁二唑-3-基)-1-(3-溴-4-氟苯胺基)-4-氧代-3-氧-8,9-二硫-2,5-二氮十一-1-烯-11-基)胺甲酰)氧基)-1-(4-((2-氯-3-(1，4苯并二噁烷-6-基)苄氧基)-5-氯-2-((5-氰吡啶-3-基)甲氧)苄基)吡咯烷-2-甲酸
9.根据权利要求1-8任一项的含双硫键化合物及其立体异构体或其可药用盐，其特征在于，所述的药用盐包括与无机酸、有机酸、碱金属离子、碱土金属离子或能提供生理上可接受的阳离子的有机碱结合形成的盐以及铵盐。
10.根据权利要求9任一项的含双硫键化合物及其立体异构体或其可药用盐，其特征在于，所述的无机酸选自盐酸、氢溴酸、磷酸或硫酸；所述的有机酸选自甲磺酸、对甲苯磺酸、三氟乙酸、枸杞酸、马来酸酒石酸、富马酸、柠檬酸或乳酸；所述的碱金属离子选自锂离子，钠离子，钾离子；所述的碱土金属离子选自钙离子，镁离子；所述的能提供生理上可接受的阳离子的有机碱选自甲胺、二甲胺、三甲胺、哌啶、吗啉或三(2－羟乙基)胺。
11.制备权利要求1-8任一项所述的含双硫键化合物及其立体异构体或其可药用盐的方法：
路线1：
(a)以氯代肟化合物1为原料，在碱性环境下与异氰酸酯化合物2反应得到化合物3；
(b)化合物3与苯胺衍生物4在碱性环境下发生亲核取代反应得到化合物5；
(c)化合物5与2-巯基乙胺反应得到胺化合物6；
(d)胺化合物6与酯化合物7发生亲核取代生成酰胺8；
(e)化合物8在酸性条件下脱除保护基团得到胺化合物9；
(f)胺化合物9与醛化合物10缩合及氢化还原得到目标化合物IB；
路线2：
(a)以N-羟基脒化合物11为原料，在碱性环境下与异氰酸酯化合物2反应得到化合物5；
(b)化合物5与2-巯基乙胺反应得到胺化合物6；
(c)胺化合物6与酯化合物12发生亲核取代生成酰胺13；
(e)化合物13在酸性条件下脱除保护基团得到目标化合物IB；
路线3：
(a)以N-羟基脒化合物11为原料，在碱性环境下与异氰酸酯化合物2反应得到化合物5；
(b)化合物5与2-巯基乙醇反应得到醇化合物14；
(c)醇化合物14与酯化合物15发生亲核取代得到目标化合物IA；
路线4：
(a)以胺化合物16为原料，在碱性环境下与四氢噻吩-2-酮反应，或与4-巯基丁酸脱水成酰胺，或与4-巯基丁酰氯反应得到含有巯基化合物17；
(b)化合物17与含有双硫键化合物5反应得到目标化合物IA；
路线5：
(a)以N-羟基脒化合物11为原料，在碱性环境下与异氰酸酯化合物2反应得到化合物5；
(b)化合物5与巯基化合物18反应得到化合物19；
(c)化合物19，在碱性环境下与化合物20发生亲核取代反应得到目标化合物IC；
所述的R1、R2、R3、R4、R5、R6、R7、W、Y、Z、n的定义同权利要求1-7任一项所述。
12.一种药物组合物，其特征在于，所述的药物组合物包含作为有效成分的权利要求1-8任一项所述的含双硫键化合物及其立体异构体或其可药用盐和药学上可接受的载体或赋形剂。
13.权利要求1-8任一项所述的含双硫键化合物及其立体异构体或其可药用盐在制备预防和/或治疗与PD-1/PD-L1信号通路和或IDO1有关疾病的药物中的应用。
14.根据权利要求13的应用，其特征在于，所述的与PD-1/PD-L1信号通路或IDO1有关的疾病选自癌症。
15.根据权利要求14的应用，其特征在于，所述的癌症选自皮肤癌、肺癌、泌尿系肿瘤、血液肿瘤、乳腺癌、胶质瘤、消化系统肿瘤、生殖系统肿瘤、淋巴瘤、神经系统肿瘤、脑瘤、头颈癌。
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