CN115039760A - 缓冲基质液及其应用 - Google Patents
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Abstract
本发明涉及医学检测领域，特别涉及缓冲基质液及其应用。本发明提供了缓冲基质液，包括缓冲液如三羟甲基氨基甲烷缓冲液、螯合剂如四乙酸乙二胺二钠和酶抑制剂如L‑苯甲磺酰赖氨酰氯甲酮。本发明可以有效延长血浆中血管紧张素II室温、冷藏和冷冻的储存时间。
Description
技术领域
本发明涉及医学检测领域，特别涉及缓冲基质液及其应用。
背景技术
血管紧张素原(Angiotensinogen)在肾素(Renin)的催化下分解为血管紧张素I(Angiotensin I，AI)，血管紧张素I在体内部分降解形成血管紧张素II(Angiotensin II，AII)，血管紧张素II能够引起血管收缩，是高血压病因之一。人体血液中血管紧张素I的含量远高于血管紧张素II，因此当血液离体后血管紧张素I会迅速降解使得血管紧张素II的含量急剧增加，肾素含量高的病人的血液中血管紧张素II含量升高的更为明显，总得来说，离体后血浆中AII含量会急剧升高不能稳定存放或运输。
临床上检测AII的方法有质谱和磁微粒免疫化学光，监测要求血液离体四小时内进行检测。从血液离体到上机检测中间需要经过，采血、运输、离心、取血浆、前处理、加样等多个过程，要求为四小时内进行上机检测，显然条件过于苛刻；且对于特殊样本需要复测时已经超出四小时，带来不便；若当天有大量样本需要检测时，可能某些样本没有及时检测，导致检测结果不准确；当医院或科研不具备检测血管紧张素II的仪器时，此时路上运输时间已经远远大于四小时，导致样本检测结果不可靠。
发明内容
有鉴于此，本发明提供了缓冲基质液及其应用，在人血浆中加入合适的缓冲基质液，使得人血浆中的血管紧张素II在室温、4℃和-80℃储存条件下稳定时间更长，便于检测和运输。
为了实现上述发明目的，本发明提供以下技术方案：
本发明提供了缓冲基质液，以浓度计，包括：
缓冲液 0.25～2M；
螯合剂 0.1～0.3M；
酶抑制剂 0.1％～0.5％(w/v)。
在本发明的一些具体实施方案中，上述缓冲基质液，以浓度计，包括：
缓冲液 0.5M；
螯合剂 0.2M；
酶抑制剂 0.5％(w/v)。
在本发明的一些具体实施方案中，上述缓冲基质液的pH值包括4.0～6.5；和/或
所述缓冲液包括三羟甲基氨基甲烷缓冲液、磷酸缓冲液或柠檬酸缓冲液中的一种或多种；和/或
所述螯合剂包括醋酸钙、葡萄糖酸、次氨基三乙酸二钠、四乙酸乙二胺、四乙酸乙二胺二钾或四乙酸乙二胺二钠中的一种或多种；和/或
所述酶抑制剂包括依那普利、α2-巨球蛋白或L-苯甲磺酰赖氨酰氯甲酮中的一种或多种。
在本发明的一些具体实施方案中，上述缓冲基质液的pH值为6.0；和/或
所述缓冲液包括三羟甲基氨基甲烷缓冲液；和/或
所述螯合剂包括四乙酸乙二胺二钠；和/或
所述酶抑制剂包括L-苯甲磺酰赖氨酰氯甲酮。
本发明还提供了上述的缓冲基质液在抑制血浆中血管紧张素II含量升高和/或延长血浆中血管紧张素II保存时间中的应用。
本发明还提供了上述的缓冲基质液在制备抑制血浆中血管紧张素II含量升高和/或延长血浆中血管紧张素II保存时间的试剂和/或试剂盒中的应用。
本发明还提供了试剂和/或试剂盒，包括上述缓冲基质液，以及可接受的辅料或助剂。
在本发明的一些具体实施方案中，上述辅料和/或助剂包括但不限于黏合剂、填充剂、崩解剂、润滑剂、等渗调节剂、增溶剂、助溶剂、防腐剂、着色剂、助悬剂、润湿剂、乳化剂和/或表面活性剂。
本发明还提供了保存血浆的方法，包括取上述缓冲基质液或上述试剂与所述血浆按体积比1:(5～15)混合后保存。
在本发明的一些具体实施方案中，上述方法包括取上述缓冲基质液或上述试剂与所述血浆按体积比1:12混合后保存。
本发明的基质液有如下效果：
添加酸性基质液，可以有效延长血浆中血管紧张素II室温和2～8℃的储存时间。该方法的优点：室温放置稳定性从4小时延长至24小时，2～8℃保存时间从12小时延长至72小时，加酸性基质液血浆冻融3次稳定性较不处理血浆稳定。具体地：
1、室温放置稳定性实验表明：未添加酸性基质液4小时血管紧张素II含量变幅为15％以内，6小时已经升高2～3倍；添加酸性基质液(pH＝6.0)室温放置12小时变幅在10％以内，24小时变幅在25％以内；添加酸性基质液(pH＝8.0)室温放置6小时变幅在20％以内，12小时变幅在35％以内；
2、2～8℃储存实时稳定性实验表明：未添加酸性基质液2～8℃保存1天样本中血管紧张素II变幅在20％～80％；添加酸性基质保存3天变幅在10％以内，保存4天变幅在30％以内，保存5天变幅在80％以内；
3、冻融稳定性实验表明：未添加酸性基质液冻融3次变幅在10％～25％；添加酸性基质液冻融3次变幅在10％；
4、-80℃储存实时稳定性实验表明：未添加酸性基质液-80℃保存60天样本中血管紧张素II变幅在15％以内；添加酸性基质-80℃保存180天变幅在15％以内。
具体实施方式
本发明公开了缓冲基质液及其应用，本领域技术人员可以借鉴本文内容，适当改进工艺参数实现。特别需要指出的是，所有类似的替换和改动对本领域技术人员来说是显而易见的，它们都被视为包括在本发明。本发明的方法及应用已经通过较佳实施例进行了描述，相关人员明显能在不脱离本发明内容、精神和范围内对本文所述的方法和应用进行改动或适当变更与组合，来实现和应用本发明技术。
本发明的主要实施方式为：采集8个样本，分别添加酸性缓冲液和不做处理，室温、2～8℃、-80℃放置不同时间，质谱监测稳定性，冻融不同次数监测稳定性。
以下为本发明技术方案的一些说明：
酸性缓冲基质液的配制：螯合剂或抑制蛋白酶能够有效抑制血管紧张素转化酶活性，阻断蛋白可以代替血管紧张素偏酸性环境也可抑制酶活性，因此选择高浓度螯合剂的酸性缓冲液，包括Tris、磷酸缓冲液(0.25M～2M)；螯合物(0.1M～0.3M)；抑制蛋白酶(依那普利是血管紧张素酶抑制剂、α2-巨球蛋白广谱酶抑制剂)，调pH至(4.0～6.5)，混合均匀备用。
血浆样本处理：使用血浆采血管采集人体血液样本，并立即进行离心收集血浆；将多管上述血浆混合到烧杯中，获得单支血浆大样；按照酸性基质液稀释5～15倍的体积比加入血浆中。混合均匀后按照600μL每份，分装成若干份放在-80℃冰箱深冻。
血浆样本稳定性：质谱对离体四小时内血浆检测作为原始对照；深冻后的样本取出，溶解后进行质谱定值，作为第0天的结果；实时监测-80℃深冻样本稳定性，监测样本室温放置稳定性；检测样本4℃放置稳定性。
如无特殊说明，本发明所用原料、试剂、耗材以及采用的仪器皆为普通市售品，均可由市场购得。
下面结合实施例，进一步阐述本发明：
实施例1：实验组1的配制
(1)配制酸性基质液，组分如下：
缓冲体系： 三羟甲基氨基甲烷缓冲液 0.5M；
螯合剂： 四乙酸乙二胺二钠 0.2M；
抑制蛋白酶： L-苯甲磺酰赖氨酰氯甲酮 0.5％(w/v)；
调溶液pH至6.0；
(2)用血浆采血管采集人体血液样本8个(编号为样本1～8)，并立即进行离心收集血浆；把血浆混合获得单支血浆大样；单支血浆大样等分成3份血浆小样(分别为实验组1、实验组2、对照组所准备)；
(3)按照体积比1:12(1mL酸性基质液:12mL血浆)添加酸性基质液(pH6.0)到上一步所述的血浆小样中，混合均匀。
实施例2：实验组2的配制
(1)配制酸性基质液，组分如下：
缓冲体系： 三羟甲基氨基甲烷缓冲液 0.5M；
螯合剂： 四乙酸乙二胺二钠 0.2M；
抑制蛋白酶： L-苯甲磺酰赖氨酰氯甲酮 0.5％(w/v)；
调溶液pH至8.0；
(2)按照体积比1:12(1mL酸性基质液:12mL血浆)添加酸性基质液(pH8.0)到实施例1中所述的血浆小样中，混合均匀。
实施例3：对照组的配制
对照组为实施例1中所述的血浆小样，即不添加酸性基质液以及其他任何物质。
实施例4：稳定性实验
1、具体步骤
按照600μL每份，将实验组1和实验组2、对照组分装成若干份，取其中一份用质谱检测血管紧张素II含量作为0h结果(单位：pg/mL)，其余放-80℃冰箱深冻。
(1)室温放置稳定性实验：取实验组1、实验组2、对照组各10份同时进行室温放置，质谱检测室温放置4h、6h、12h、24h、36h......的结果，直到检测结果与0h结果偏差较大则停止检测。
(2)2～8℃实时稳定性实验：取实验组1、实验组2、对照组各10份同时在2～8℃环境中保存，质谱检测放置1天、2天、3天、4天、5天......的结果，直到检测结果与0h结果偏差较大则停止检测。
特别说明：由于室温放置稳定性实验中实验组1(添加酸性基质液pH 6.0)的结果明显好于实验组2(添加酸性基质液pH 8.0)，因此后续的2～8℃实时稳定性实验中取消对实验组2的考核。
(3)冻融稳定性实验：取实验组1、实验组2、对照组各10份同时进行冻融实验，质谱检测冻融1次、2次、3次......的结果，直到检测结果与0h结果偏差较大则停止检测。
(4)-80℃实时稳定性实验：质谱检测-80℃深冻保存10天、30天、60天、120天、180天......的结果，直到检测结果与0h结果偏差较大则停止检测。
2、实验结果
(1)室温放置稳定性实验结果：
如表1所示，未添加酸性基质液4小时血管紧张素II含量变幅为15％以内，6小时已经升高2～3倍；添加酸性基质液(pH＝6.0)室温放置12小时变幅在10％以内，24小时变幅在25％以内；添加酸性基质液(pH＝8.0)室温放置6小时变幅在20％以内，12小时变幅在35％以内；即：稳定性排序酸性基质液(pH＝6.0)>酸性基质液(pH＝8.0)>未添加酸性基质液。室温稳定性可提供充足的时间做检测前准备工作，结果表明添加酸性基质液有助于提高稳定性。
表1
(2)2～8℃实时稳定性实验结果：
如表2所示，未添加酸性基质液2～8℃保存1天样本中血管紧张素II变幅在20％～80％；添加酸性基质保存3天变幅在10％以内，保存4天变幅在30％以内，保存5天变幅在80％以内。结果表明添加酸性基质液有助于解决这些技术问题：1、样本可能需要复测；2、样本低温运输3～4天；3、冷冻运输过程可能会溶解但仍然处于低温环境。
表2
(3)冻融稳定性实验结果：
如表3所示，未添加酸性基质液冻融3次变幅在10％～25％；添加酸性基质液冻融3次变幅在10％，即添加酸性基质液不影响样本冻融次数且比未添加组稳定性表现略好。考虑样本冷冻运输及检测前，产生的冻融问题，以上结果表明添加酸性基质液有助于解决该问题。
表3
(4)-80℃实时稳定性实验结果：
如表4所示，未添加酸性基质液-80℃保存60天样本中血管紧张素II变幅在15％以内；添加酸性基质-80℃保存180天变幅在15％以内。结果表明：添加酸性基质后样本深冻保存时间更长；冻融实验中血管紧张素II的变化不是冷冻导致，确实因为反复冻融；酸性基质液为研究血管紧张素II质控品提供了思路。
表4
以上所述仅是本发明的优选实施方式，应当指出，对于本技术领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明原理的前提下，还可以做出若干改进和润饰，这些改进和润饰也应视为本发明的保护范围。
Claims (9)
1.缓冲基质液，其特征在于，以浓度计，包括：
缓冲液 0.25～2M；
螯合剂 0.1～0.3M；
酶抑制剂 0.1％～0.5％(w/v)。
2.如权利要求1所述的缓冲基质液，其特征在于，以浓度计，包括：
缓冲液 0.5M；
螯合剂 0.2M；
酶抑制剂 0.5％(w/v)。
3.如权利要求1或2所述的缓冲基质液，其特征在于，其pH值包括4.0～6.5；和/或
所述缓冲液包括三羟甲基氨基甲烷缓冲液、磷酸缓冲液或柠檬酸缓冲液中的一种或多种；和/或
所述螯合剂包括醋酸钙、葡萄糖酸、次氨基三乙酸二钠、四乙酸乙二胺、四乙酸乙二胺二钾或四乙酸乙二胺二钠中的一种或多种；和/或
所述酶抑制剂包括依那普利、α2-巨球蛋白或L-苯甲磺酰赖氨酰氯甲酮中的一种或多种。
4.如权利要求1至3任一项所述的缓冲基质液，其特征在于，其pH值为6.0；和/或
所述缓冲液包括三羟甲基氨基甲烷缓冲液；和/或
所述螯合剂包括四乙酸乙二胺二钠；和/或
所述酶抑制剂包括L-苯甲磺酰赖氨酰氯甲酮。
5.如权利要求1至4任一项所述的缓冲基质液在抑制血浆中血管紧张素II含量升高和/或延长血浆中血管紧张素II保存时间中的应用。
6.如权利要求1至4任一项所述的缓冲基质液在制备抑制血浆中血管紧张素II含量升高和/或延长血浆中血管紧张素II保存时间的试剂和/或试剂盒中的应用。
7.试剂和/或试剂盒，其特征在于，包括如权利要求1至4任一项所述的缓冲基质液，以及可接受的辅料或助剂。
8.保存血浆的方法，其特征在于，取如权利要求1至4任一项所述的缓冲基质液或如权利要求7所述的试剂与所述血浆按体积比1:(5～15)混合后保存。
9.如权利要求8所述的方法，其特征在于，取如权利要求1至4任一项所述的缓冲基质液或如权利要求7所述的试剂与所述血浆按体积比1:12混合后保存。
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Citations (8)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN107653237A (zh) * | 2017-11-13 | 2018-02-02 | 安徽信灵检验医学科技有限公司 | 一种用于医学临床检验的采血管添加剂 |
| CN108645804A (zh) * | 2018-07-27 | 2018-10-12 | 金华市强盛生物科技有限公司 | 一种血管紧张素转换酶检测试剂盒 |
| CN109090104A (zh) * | 2018-09-27 | 2018-12-28 | 广州新诚生物科技有限公司 | 保存液及其制备方法和应用 |
| CN109997843A (zh) * | 2019-04-15 | 2019-07-12 | 无锡芯超生物科技有限公司 | 一种循环游离dna和血细胞保存介质 |
| WO2019144692A1 (zh) * | 2018-01-24 | 2019-08-01 | 广州市进德生物科技有限公司 | 一种胰高血糖素保护剂及其应用 |
| CN111024960A (zh) * | 2019-12-27 | 2020-04-17 | 广州阳普医疗科技股份有限公司 | 用于高血压血样检测的添加剂、试剂盒和应用 |
| CN111041021A (zh) * | 2019-12-27 | 2020-04-21 | 桂林优利特医疗电子有限公司 | 一种血管紧张素转换酶校准品的制备方法 |
| CN112578119A (zh) * | 2020-12-11 | 2021-03-30 | 郑州安图生物工程股份有限公司 | 一种甲氧基肾上腺素发光免疫检测试剂盒 |
-
2022
- 2022-06-16 CN CN202210678824.9A patent/CN115039760A/zh active Pending
Patent Citations (8)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN107653237A (zh) * | 2017-11-13 | 2018-02-02 | 安徽信灵检验医学科技有限公司 | 一种用于医学临床检验的采血管添加剂 |
| WO2019144692A1 (zh) * | 2018-01-24 | 2019-08-01 | 广州市进德生物科技有限公司 | 一种胰高血糖素保护剂及其应用 |
| CN108645804A (zh) * | 2018-07-27 | 2018-10-12 | 金华市强盛生物科技有限公司 | 一种血管紧张素转换酶检测试剂盒 |
| CN109090104A (zh) * | 2018-09-27 | 2018-12-28 | 广州新诚生物科技有限公司 | 保存液及其制备方法和应用 |
| CN109997843A (zh) * | 2019-04-15 | 2019-07-12 | 无锡芯超生物科技有限公司 | 一种循环游离dna和血细胞保存介质 |
| CN111024960A (zh) * | 2019-12-27 | 2020-04-17 | 广州阳普医疗科技股份有限公司 | 用于高血压血样检测的添加剂、试剂盒和应用 |
| CN111041021A (zh) * | 2019-12-27 | 2020-04-21 | 桂林优利特医疗电子有限公司 | 一种血管紧张素转换酶校准品的制备方法 |
| CN112578119A (zh) * | 2020-12-11 | 2021-03-30 | 郑州安图生物工程股份有限公司 | 一种甲氧基肾上腺素发光免疫检测试剂盒 |
Non-Patent Citations (1)
| Title |
|---|
| 蒋正武, 同济大学出版社, pages: 222 * |
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