CN115015559A - 一种c反应蛋白检测试剂盒 - Google Patents

Abstract

本发明属于临床体外检测试剂技术领域，公开了一种C反应蛋白检测试剂盒，其R1试剂中的稳定剂和R2试剂中的稳定剂均为盐，所述盐选自氯化钠、乙二胺四乙酸二钠、硫酸葡聚糖钠、六偏磷酸钠、谷氨酸钠、酒石酸氢钠、氯化镁或氯化钾中的一种或多种；R2试剂中还包括CRP抗体和封闭剂，所述封闭剂为含有山羊血清的牛血清白蛋白。在封闭剂中加入山羊血清这一保护剂能够使BSA的稳定性更好，从而使试剂的稳定性有所提升。另外，试剂中加入氯化钠等离子类的稳定剂，可以提高溶液的密度和粘度，使溶液起到很好的稳定作用，与待测样本中的C反应蛋白具有较强的结合力，使反应更加灵敏。

Description

一种C反应蛋白检测试剂盒

技术领域

本发明属于临床体外检测试剂技术领域，特别涉及一种C反应蛋白检测试剂盒(免疫比浊法)。

背景技术

这里的陈述仅提供与本发明相关的背景技术，而不必然地构成现有技术。

C-反应蛋白(C-reactive protein,CRP)是在机体受到感染或组织损伤时血浆中一些急剧上升的蛋白质(急性蛋白)，激活补体和加强吞噬细胞的吞噬而起调理作用，清除入侵机体的病原微生物和损伤、坏死、凋亡的组织细胞。

临床中对于C反应蛋白检测的方法主要是免疫比浊法，部分实验室采用化学发光法、胶体金法进行检测。C反应蛋白检测试剂盒(免疫比浊法)是无需样本预处理，可以实现自动化检测，且可同时测定大量标本，但是发明人在实际工作中发现，由于C反应蛋白检测试剂的稳定性欠佳，导致血清样本在检测时容易出现0值的情况，影响检测的准确性。

发明内容

针对现有技术存在的不足，本发明的目的是提供一种C反应蛋白检测试剂盒(免疫比浊法)。该试剂盒在检测C反应蛋白时，具有较好的稳定性，可以有效解决血清样本容易出现0值的情况。

为了实现上述目的，本发明是通过如下的技术方案来实现：

一种C反应蛋白检测试剂盒，其R1试剂中的稳定剂和R2试剂中的稳定剂均为盐，所述盐选自氯化钠、乙二胺四乙酸二钠、硫酸葡聚糖钠、六偏磷酸钠、谷氨酸钠、酒石酸氢钠、氯化镁或氯化钾中的一种或多种；

R2试剂中还包括CRP抗体和封闭剂，所述封闭剂为含有山羊血清的牛血清白蛋白。

上述本发明的有益效果如下：

本发明提供的C反应蛋白检测试剂盒，试剂R2中的封闭剂牛血清白蛋白BSA能够对抗体起到很好的胶体保护稳定作用，但其与C反应蛋白抗体以及样本中的C反应蛋白之间的结合效果较差，容易出现样本测试结果为0的情况，且其稳定性较差，通常在受热的环境中会发生变性或者失效，因此会失去封闭剂本身的作用和稳定的功效。

而在封闭剂中加入山羊血清这一保护剂能够使BSA的稳定性更好，从而使试剂的稳定性有所提升。另外，试剂中加入氯化钠等离子类的稳定剂，可以提高溶液的密度和粘度，使溶液起到很好的稳定作用，与待测样本中的C反应蛋白具有较强的结合力，使反应更加灵敏，却不会对试剂的准确度、线性和分析灵敏度等产生影响，有利于该试剂在市场中进一步的推广。

具体实施方式

应该指出，以下详细说明都是例示性的，旨在对本发明提供进一步的说明。除非另有指明，本发明使用的所有技术和科学术语具有与本发明所属技术领域的普通技术人员通常理解的相同含义。

一种C反应蛋白检测试剂盒，其R1试剂中的稳定剂和R2试剂中的稳定剂均为盐，所述盐选自氯化钠、乙二胺四乙酸二钠、硫酸葡聚糖钠、六偏磷酸钠、谷氨酸钠、酒石酸氢钠、氯化镁或氯化钾中的一种或多种；

R2试剂中还包括CRP抗体和封闭剂，所述封闭剂为含有山羊血清的牛血清白蛋白。

在一些实施例中，R1试剂和R2试剂中，盐的质量分数为0.1-15％。如，盐溶液的浓度可以为0.1％、0.2％、0.3％、0.4％、0.5％、0.6％、0.7％、0.8％、0.9％、1％、2％、3％、4％、5％、6％、7％、8％、9％、10％、11％、12％、13％、14％、15％。

优选的，所述盐中至少含有氯化钠。

进一步优选的，所述盐中含有氯化钠和至少一种选自乙二胺四乙酸二钠、硫酸葡聚糖钠、六偏磷酸钠、谷氨酸钠、酒石酸氢钠、氯化镁或氯化钾。

进一步优选的，所述R1试剂和R2试剂中，氯化钠的浓度均为5-15g/L，优选为7-13g/L。如可以为：5g/L、6g/L、7g/L、8g/L、9g/L、10g/L、11g/L、12g/L、13g/L、14g/L、15g/L。

在一些实施例中，所述封闭剂中，山羊血清的质量百分数为0.1-5％。

优选的，所述试剂R2中，封闭剂的质量分数为0.1-15％。

进一步优选的，山羊血清占试剂R2的质量百分数为0.3％-0.75％。

在一些实施例中，所述CRP抗体为羊抗人CRP抗体。

在一些实施例中，试剂R1中还包括缓冲液、防腐剂或表面活性剂中的一种、两种或三种；

所述缓冲液选自MOPS缓冲液、磷酸二氢钾-磷酸氢二钾缓冲液或三羟甲基氨基甲烷-盐酸缓冲液中的一种或多种；

所述防腐剂选自PC-300、叠氮钠或庆大霉素中的一种或多种；

所述表面活性剂为PEG10000或/和吐温-20。

在一些实施例中，试剂R1中还包括缓冲液和/或防腐剂；

所述缓冲液选自MOPS缓冲液、磷酸二氢钾-磷酸氢二钾缓冲液或三羟甲基氨基甲烷-盐酸缓冲液中的一种或多种；

所述防腐剂选自PC-300、叠氮钠或庆大霉素中的一种或多种。

下面结合实施例对本发明作进一步说明。

实施例1

一种C反应蛋白检测试剂盒，包括试剂R1、试剂R2和校准品。试剂R1组成为：

MOPS缓冲液(pH7.2)50mmol/L；

PEG10000 4％；

NaCl 12.5g/L；

硫酸葡聚糖钠1.2mg/mL；

葡聚糖10mg/mL；

六偏磷酸钠0.5g/L；

EDTA二钠3g/L；

叠氮钠0.03％；

试剂R2组成为：

具体测定方法为：

在使用时，其测定方法是采用自动生化分析仪，如日立7180自动分析仪，操作如下：加入生理盐水、样本或校准品13μl，之后再加入试剂1为180μl孵育5min，记录吸光度值A1，加入试剂2为60μl，5分钟后记录吸光度值A2，计算ΔA。

本实施例所使用的校准品为北京九强公司生产的校准品。

实施例2

一种C反应蛋白检测试剂盒，包括试剂R1、试剂R2和校准品。试剂R1组成为：

试剂R2组成为：

具体测定方法同实施例1。

实施例3

一种C反应蛋白检测试剂盒，包括试剂R1、试剂R2和校准品。试剂R1组成为：

试剂R2组成为：

具体测定方法同实施例1。

对比例1

市场上获得认可的一种C反应蛋白(CRP)测定试剂盒(免疫比浊法)。

试剂R1组成为：

具体测定方法如实施例1。

对上述对比例和实施例中制得的试剂盒分析性能进行实验验证。

准确度验证实验：

将实施例的试剂盒作为实验组，对比例1中市场上获得认可的C反应蛋白检测试剂盒作为对照组进行对比实验，对高低两个不同浓度的CRP质控物质进行检测，分别测三遍，检测的结果如表1所示：

表1准确度验证实验检测结果

通过表1的检测数据可知，四组实施例检测试剂盒以及对照试剂盒的测试结果与质控物质靶值的相对偏差均在15％以内，符合企业技术要求，表明本发明的试剂盒与市场上获得认可的C反应蛋白检测试剂盒有高度一致性，证明本发明试剂盒添加的其他各种成分对其准确性不会造成影响，试剂盒依然保持较好的准确度。

分析灵敏度验证实验：

用C反应蛋白检测试剂盒测试已知浓度在0.4mg/dL的样本，记录吸光度变化率(ΔA/min)。分别利用对比例1、三组实施例的试剂进行检测。检测结果如表2所示：

表2分析灵敏度验证实验检测结果

通过检测数据可知，本发明试剂盒添加的其他各种成分对其分析灵敏度不会造成影响，试剂盒依然保持较好的分析灵敏度。

比对试验验证

将实施例的试剂盒作为实验组，对比例1中市场上获得认可的C反应蛋白检测试剂盒作为对照组进行对比实验，对40个样本进行检测，检测的结果如表3。

表3样本验证实验检测结果

通过检测数据可知，本发明实施例1、实施例2、实施例3的试剂盒基本没有出现0值的情况，说明在试剂中加入氯化钠、NaCl、硫酸葡聚糖钠、葡聚糖、六偏磷酸钠、EDTA二钠、PEG10000等稳定剂，能够避免出现0值，其中氯化钠的含量占主要部分，说明氯化钠其主要作用，而试剂盒的其他性能都可以维持较高水平。

稳定性验证实验：

将三组实施例的试剂盒均置于37℃环境下7天，分别在0天、1天、3天、5天、7天测定三次，取平均值，与新鲜的对比例1试剂检测结果进行比对。检测数据如表4。

表4稳定性验证实验检测结果

实验结果显示，对比例1试剂在37℃、无腐蚀性气体的避光环境中贮存7天，测试结果降低了3.01％，而实施例1、2、3试剂在37℃、无腐蚀性气体的避光环境中贮存7天测试结果分别降低了1.08％、1.51％、1.08％，降低幅度均小于对比例1，其中实施例1和实施例3降低幅度较实施例2的降低幅度小，说明在试剂中加入山羊血清，有效的增加了试剂的稳定性。

综合以上分析，本发明提供的C反应蛋白检测试剂盒，在试剂中通过加入氯化钠、NaCl、硫酸葡聚糖钠、葡聚糖、六偏磷酸钠、EDTA二钠、PEG10000等稳定剂能够有效的避免0值的出现，在试剂中加入山羊血清，能够有效的增加试剂的稳定性，并且不会影响其它性能的改变。因此，本发明提供的C反应蛋白检测试剂盒有利于在市场中进一步的推广使用。

以上所述仅为本发明的优选实施例而已，并不用于限制本发明，对于本领域的技术人员来说，本发明可以有各种更改和变化。凡在本发明的精神和原则之内，所作的任何修改、等同替换、改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。

Claims (10)

1.一种C反应蛋白检测试剂盒，其特征在于：其R1试剂中的稳定剂和R2试剂中的稳定剂均为盐，所述盐选自氯化钠、乙二胺四乙酸二钠、硫酸葡聚糖钠、六偏磷酸钠、谷氨酸钠、酒石酸氢钠、氯化镁或氯化钾中的一种或多种；

R2试剂中还包括CRP抗体和封闭剂，所述封闭剂为含有山羊血清的牛血清白蛋白。

2.根据权利要求1所述的C反应蛋白检测试剂盒，其特征在于：R1试剂和R2试剂中，盐的质量分数为0.1-15％。

3.根据权利要求2所述的C反应蛋白检测试剂盒，其特征在于：所述盐中至少含有氯化钠。

4.根据权利要求3所述的C反应蛋白检测试剂盒，其特征在于：所述盐中含有氯化钠和至少一种选自乙二胺四乙酸二钠、硫酸葡聚糖钠、六偏磷酸钠、谷氨酸钠、酒石酸氢钠、氯化镁或氯化钾；

或，所述R1试剂和R2试剂中，氯化钠的浓度均为5-15g/L。

5.根据权利要求1所述的C反应蛋白检测试剂盒，其特征在于：所述封闭剂中，山羊血清的质量百分数为0.1-5％。

6.根据权利要求5所述的C反应蛋白检测试剂盒，其特征在于：所述试剂R2中，封闭剂的质量分数为0.1-15％。

7.根据权利要求6所述的C反应蛋白检测试剂盒，其特征在于：山羊血清占试剂R2的质量百分数为0.3％-0.75％。

8.根据权利要求1所述的C反应蛋白检测试剂盒，其特征在于：所述CRP抗体为羊抗人CRP抗体。

9.根据权利要求1所述的C反应蛋白检测试剂盒，其特征在于：试剂R1中还包括缓冲液、防腐剂或表面活性剂中的一种、两种或三种；

所述缓冲液选自MOPS缓冲液、磷酸二氢钾-磷酸氢二钾缓冲液或三羟甲基氨基甲烷-盐酸缓冲液中的一种或多种；

所述防腐剂选自PC-300、叠氮钠或庆大霉素中的一种或多种；

所述表面活性剂为PEG10000或/和吐温-20。

10.根据权利要求1所述的C反应蛋白检测试剂盒，其特征在于：试剂R1中还包括缓冲液和/或防腐剂；

所述缓冲液选自MOPS缓冲液、磷酸二氢钾-磷酸氢二钾缓冲液或三羟甲基氨基甲烷-盐酸缓冲液中的一种或多种；

所述防腐剂选自PC-300、叠氮钠或庆大霉素中的一种或多种。