CN115006469B - 一种辣椒抗肺癌药物及其制备方法 - Google Patents
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Abstract
本发明涉及一种辣椒抗肺癌药物及其制备方法，由包括下列重量份的原料组成：辣椒素0.03～0.13；辣椒粕0.5～1.5；大豆油0.7～1.7；蜂蜡0.01～0.03；对肿瘤细胞有抑制作用且无明显毒副作用。
Description
技术领域
本发明涉及医药技术领域，特别是一种辣椒抗肺癌药物及其制备方法。
背景技术
已有研究表辣椒素能够抑制多种恶性肿瘤组织的生长但对正常细胞有具有很强的杀伤作用。与辣椒素提取过程中的废料辣椒粕，已有研究表明，富含各类营养成分，具有潜在的综合利用价值。但目前尚没有一款此类药物对肿瘤细胞有抑制作用且无明显毒副作用。
发明内容
本发明提供了一种对肿瘤细胞有抑制作用且无明显毒副作用的辣椒抗肺癌药物。
为解决上述技术问题，本发明采用的技术方案为：
一种辣椒抗肺癌药物，由包括下列重量份的原料组成：
作为优选的技术方案，所述的辣椒抗肺癌药物，由包括下列重量份的原料组成：
作为对上述技术方案的改进，所述的辣椒抗肺癌药物还包括占上述原料重量0.2％的防腐剂和0.5％的矫味剂。
作为优选的技术方案，所述防腐剂为苯甲酸钠；所述矫味剂为薄荷醇。
本发明还提供一种制备辣椒抗肺癌药物的方法，包括步骤：
1)取0.03～0.13重量份的辣椒素、0.5～1.5重量份的辣椒粕、0.7～1.7重量份的大豆油和0.01～0.03重量份的蜂蜡混合均匀；
2)向上述混合均匀的原料中加入占上述原料重量0.2％的防腐剂和0.5％的矫味剂即得所述辣椒抗肺癌药物。
作为优选的技术方案，所述辣椒素取0.08重量份、所述辣椒粕取1重量份、所述大豆油取1.2重量份、所述蜂蜡取0.02重量份。
作为优选的技术方案，所述防腐剂为苯甲酸钠；所述矫味剂为薄荷醇。
作为对上述技术方案的改进，所述辣椒抗肺癌药物作为填充物，另取0.5～1.5重量份的明胶为基质、0.2～0.4重量份的甘油为增塑剂和0.5～1.5重量份的水作为胶囊成分制成辣椒抗肺癌软胶囊。
作为优选的技术方案，取1重量份的明胶为基质、0.3重量份的甘油为增塑剂和1重量份的水作为胶囊成分
作为对上述技术方案的改进，所述胶囊成分还包括占所述胶囊成分重量0.05％的富马酸作为崩解剂。
由于采用了上述技术方案，一种辣椒抗肺癌药物及其制备方法，由包括下列重量份的原料组成：辣椒素0.03～0.13；辣椒粕0.5～1.5；大豆油0.7～1.7；蜂蜡0.01～0.03；对肿瘤细胞有抑制作用且无明显毒副作用。
下面结合具体试验例进一步说明本发明：
一、实验器材
CO2培养箱(3517-2，SHELLAB)，超级恒温水浴锅(HW-1000，成都泰盟科技有限公司)，倒置像差显微镜(XD-202)，高速离心机(5417R，Eppendrof)，E-plate L8细胞培养板(ACEA)，xCELLigence RTCA S16细胞分析仪(ACEA)，石蜡切片机(RM2235，Leica)，电子天平(AR224CN，奥豪斯仪器(上海)有限公司)，电子天平(YP5001，上海良平仪器仪表有限公司)，0.22μm滤头，1ml一次性注射器，小鼠灌胃针。
二、实验试剂
高糖培养基，RPMI 1640培养基，低糖培养基，胰酶(Excell)，Fetal BovineSerum(Defir，FSP500)，青/链霉素(P/S，Solarbio)，MTT试剂，乙醇溶液(分析纯)。
三、实验细胞
肿瘤细胞：人肺癌H292细胞株、肺癌A549细胞株；正常细胞：仓鼠肺成纤维细胞CHL细胞株，大鼠胰岛细胞，大鼠内皮细胞(RAECs)。
四、实验动物
昆明种小鼠(购自云南省昆明医科大学，饲养在无菌动物房内，室温保持在25℃，待适应动物房环境后用于实验)。
五、实验内容
5.1辣椒素对肿瘤细胞与正常细胞的作用效果
我们分别使用H292细胞，A549细胞，CHL细胞对辣椒素的活性进行了检测。
由于辣椒素溶于乙醇，我们用乙醇配置母液浓度为1mol/L，然后按梯度稀释法进行稀释，直至浓度为1×10-8mol/L。我们首先以最大的辣椒素浓度给药，但发现其在1～1×10-2mol/L的浓度下，辣椒素都会析出，无法很全面的与细胞接触，所得实验结果缺乏精确度与可信度，当我们将浓度降至1×10-3mol/L时，无辣椒素结晶析出的现象，故确定我们所给药物的最大浓度为1×10-3mol/L。然后在此浓度的基础上，不断的进行梯度稀释，分别将每一个浓度的辣椒素对不同的肿瘤细胞与正常细胞进行活性筛选，每次结果重复三次，最终得到稳定的趋势，即比较可靠的结果。最终，确定了辣椒素对不同细胞的半数致死量，发现辣椒素虽然对我们的H292，A549癌细胞有明显的抑制作用，但对正常的CHL细胞也同样有很强的抑制作用。结果如图1所示。
5.2辣椒粕对肿瘤细胞及正常细胞的作用效果
为了与辣椒素的实验结果对照，使实验结果更可靠，我们仍然使用H292细胞，A549细胞，CHL细胞对辣椒粕的活性进行检测。此外，还增加了正常细胞：
胰岛细胞与大鼠内皮细胞进行了实验。
对于辣椒粕浓度配置，我们采用水提法：将辣椒粕用超纯水进行浸泡过夜，第二天用高速离心机进行离心，取上清液，然后将母液进行梯度稀释，得到我们所需要的浓度。使用MTT法，将每一个浓度的辣椒素对不同的肿瘤细胞与正常细胞进行活性筛选，每次实验重复三次，得到一个稳定的趋势，即比较可靠的结果。最终，我们初步筛选得到辣椒粕对肿瘤细胞与正常细胞的作用浓度，即辣椒粕在5mg/ml、25mg/ml，125mg/ml的浓度下，对A549细胞，随着浓度的增加，其抑制效果增强，对H292细胞无明显作用，而对于正常细胞CHL，则是随着浓度的增加，其对CHL细胞的增值作用在增强，结果如图2和图3所示。
为了再一次验证辣椒粕对正常细胞的作用，我们还将辣椒粕作用于大鼠胰岛细胞与RAECs细胞，对其活性进行更加精确的检测。结果如图4和图5所示。
5.3辣椒素与辣椒粕联合使用对肿瘤细胞及正常细胞的作用效果
(1)细胞实验
在前面对辣椒素与辣椒粕的活性进行了筛选之后，我们发现辣椒素对肿瘤细胞有很好的抑制率，但同时对正常的细胞也有较强的抑制作用，而辣椒粕对正常细胞几乎没有抑制作用，可对肿瘤细胞的抑制作用也并不太明显，那我们则进一步考虑是否能将辣椒素与辣椒粕进行联合使用，找到一个最适配比，从而在抑制肿瘤细胞生长的同时又不对正常细胞造成伤害。
首先，我们在前面的实验中，我们以辣椒素与辣椒粕分别作用于肿瘤细胞与正常细胞时的浓度为依据，找出辣椒素的作用浓度1×10-4～1×10-6mol/l，辣椒粕作用浓度5-25mg/ml，我们根据这个浓度范围，将辣椒素与辣椒粕进行浓度的一个配比，从中找到最佳的作用浓度配比，为后期软胶囊的研发提供依据。
我们经过前期大量查阅文献，了解到由于提取的原因，可能在辣椒粕中仍含有0.06％的辣椒素，故我们以此作为一个实验相关依据，进行了前期的预实验，以缩小辣椒素与辣椒粕的作用浓度范围，最后将辣椒素与辣椒粕的配比控制在了0.06％:1～0.1％:1之间，然后我们对这个比例范围再次进行更加详细的筛选：将辣椒素比例设定为0.06％，然后辣椒粕浓度分别为5mg/ml，10mg/ml，20mg/ml，并设置溶剂对照组与阳性对照组；其余以此类推；然后我们再将辣椒粕浓度进行设定，然后改变辣椒素的浓度，进行二次筛选，再次确定辣椒素与辣椒粕的浓度配比。我们同时使用A549细胞与正常细胞进行筛选，然后找到对肿瘤细胞有较好抑制效果的同时对正常细胞的损伤也较小的浓度配比。部分数据如图6和图7所示(以下数据为辣椒素比例每增加0.005％的数据)。
最终我们得到的最适配比为0.08％:1(即辣椒素：辣椒粕＝0.008mg/ml：10mg/ml)，我们发现，在这个配比之下，我们用细胞实时动态分析仪对这一浓度配比进行了再次确认，我们得到在这个最佳浓度配比之下，可对肿瘤细胞有60％～70％的抑制效果，且对正常细胞没有明显的抑制作用。
(2)动物急性毒性实验
在细胞前期实验基础之上，我们进行了辣椒粕与辣椒素在最佳浓度配比的急性毒性实验。我们使用KM小白鼠作为实验动物，连续灌胃给药7天，灌胃体积为0.2ml/10g，并对小鼠的胃进行了病理切片，所得结果如下：
| 给药剂量(mg/ml) | 动物总数(只) | 动物死亡数(只) |
| 0 | 6 | 0 |
| 0.06％∶1 | 6 | 0 |
| 0.07％∶1 | 6 | 0 |
| 0.08％∶1 | 6 | 0 |
| 0.09％∶1 | 6 | 0 |
| 0.1％∶1 | 6 | 0 |
软胶囊抑制肺癌细胞作用研究(实验方法同前)
动物急性毒性实验
我们在软胶囊的细胞实验基础之上，进行了辣椒粕与辣椒素在最佳浓度配比的急性毒性实验。我们使用昆明种小白鼠作为实验动物，连续灌胃给药7天，并对小鼠的胃进行了病理切片，所得结果如下：
我们得到辣椒素与辣椒粕在抗肿瘤作用在中的最佳配比为0.08：1，在这个浓度比之下，对肿瘤细胞的抑制作用可达60％～70％，且不对正常细胞造成损伤。我们将其应用于软胶囊的配方中，并对软胶囊进行了细胞水平的增殖实验及前期的动物急性毒性实验，从其实验结果看来，我们所找到的辣椒素与辣椒粕联合使用的浓度配比是正确的，在此基础上研发出的辣椒抗肺癌软胶囊具有良好的体外抗肺癌细胞生长作用，其抑制效果达到近70％。
附图说明
图1为辣椒素对肿瘤细胞与正常细胞的细胞实时动态分析结果；
图2为辣椒粕对肿瘤细胞与正常细胞的作用结果；
图3为A549细胞在不同浓度辣椒粕作用下细胞状态；
图4为辣椒粕对正常胰岛细胞与RAECs细胞作用结果；
图5为胰岛细胞在不同浓度辣椒粕作用下细胞状态；
图6为辣椒素与辣椒粕最佳浓度筛选结果；
图7为辣椒粕与辣椒素最适浓度配比对肿瘤细胞与正常细胞抑制率；
图8为小鼠胃病理学切片图；
图9为辣椒抗肺癌软胶囊对A549细胞的作用效果图；
图10为胃病理学切片。
具体实施方式
一种辣椒抗肺癌药物，由包括下列重量份的原料组成：
所述的辣椒抗肺癌药物，由包括下列重量份的原料组成：
所述的辣椒抗肺癌药物还包括占上述原料重量0.2％的防腐剂和0.5％的矫味剂。
所述防腐剂为苯甲酸钠；所述矫味剂为薄荷醇。
一种制备辣椒抗肺癌药物的方法，包括步骤：
1)取0.03～0.13重量份的辣椒素、0.5～1.5重量份的辣椒粕、0.7～1.7重量份的大豆油和0.01～0.03重量份的蜂蜡混合均匀；
2)向上述混合均匀的原料中加入占上述原料重量0.2％的防腐剂和0.5％的矫味剂即得所述辣椒抗肺癌药物。
所述辣椒素取0.08重量份、所述辣椒粕取1重量份、所述大豆油取1.2重量份、所述蜂蜡取0.02重量份。
所述防腐剂为苯甲酸钠；所述矫味剂为薄荷醇。
所述辣椒抗肺癌药物作为填充物，另取0.5～1.5重量份的明胶为基质、0.2～0.4重量份的甘油为增塑剂和0.5～1.5重量份的水作为胶囊成分制成辣椒抗肺癌软胶囊。
取1重量份的明胶为基质、0.3重量份的甘油为增塑剂和1重量份的水作为胶囊成分
所述胶囊成分还包括占所述胶囊成分重量0.05％的富马酸作为崩解剂。
下面将结合本发明具体实施例，对本发明的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有作出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。
实例一、
一种制备辣椒抗肺癌药物的方法，包括步骤：
1)取0.03重量份的辣椒素、0.5重量份的辣椒粕、0.7重量份的大豆油和0.01重量份的蜂蜡混合均匀；
2)向上述混合均匀的原料中加入占上述原料重量0.2％的防腐剂和0.5％的矫味剂即得所述辣椒抗肺癌药物。
所述防腐剂为苯甲酸钠；所述矫味剂为薄荷醇。
所述辣椒抗肺癌药物作为填充物，另取0.5重量份的明胶为基质、0.2重量份的甘油为增塑剂和0.5重量份的水作为胶囊成分制成辣椒抗肺癌软胶囊。
所述胶囊成分还包括占所述胶囊成分重量0.05％的富马酸作为崩解剂。
实例二、
一种制备辣椒抗肺癌药物的方法，包括步骤：
1)取0.08重量份的辣椒素、1重量份的辣椒粕、1.2重量份的大豆油和0.02重量份的蜂蜡混合均匀；
2)向上述混合均匀的原料中加入占上述原料重量0.2％的防腐剂和0.5％的矫味剂即得所述辣椒抗肺癌药物。
所述防腐剂为苯甲酸钠；所述矫味剂为薄荷醇。
所述辣椒抗肺癌药物作为填充物，另取1重量份的明胶为基质、0.3重量份的甘油为增塑剂和1重量份的水作为胶囊成分制成辣椒抗肺癌软胶囊。
所述胶囊成分还包括占所述胶囊成分重量0.05％的富马酸作为崩解剂。
实例三、
一种制备辣椒抗肺癌药物的方法，包括步骤：
1)取0.13重量份的辣椒素、1.5重量份的辣椒粕、1.7重量份的大豆油和0.03重量份的蜂蜡混合均匀；
2)向上述混合均匀的原料中加入占上述原料重量0.2％的防腐剂和0.5％的矫味剂即得所述辣椒抗肺癌药物。
所述防腐剂为苯甲酸钠；所述矫味剂为薄荷醇。
所述辣椒抗肺癌药物作为填充物，另取1.5重量份的明胶为基质、0.4重量份的甘油为增塑剂和1.5重量份的水作为胶囊成分制成辣椒抗肺癌软胶囊。
所述胶囊成分还包括占所述胶囊成分重量0.05％的富马酸作为崩解剂。
以上所述仅为本发明的较佳实施例而已，并不用以限制本发明，凡在本发明的精神和原则之内，所作的任何修改、等同替换、改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。
Claims (5)
1.一种辣椒抗肺癌药物，其特征在于，由下列重量份的原料制成：
辣椒素 0.03～0.13；
辣椒粕 0. 5～1.5；
大豆油 0.7～1.7；
蜂蜡 0.01～0.03；
防腐剂 占上述辣椒素、辣椒粕、大豆油与蜂蜡四种原料总重量的0.2%；
矫味剂 占上述辣椒素、辣椒粕、大豆油与蜂蜡四种原料总重量的0.5%；
制备椒抗肺癌药物的方法，包括步骤：
1）取 0.03～0.13重量份的辣椒素、0. 5～1.5重量份的辣椒粕、0.7～1.7重量份的大豆油和0.01～0.03重量份的蜂蜡混合均匀；
2）向上述混合均匀的原料中加入占上述原料重量0.2%的防腐剂和0.5%的矫味剂即得所述辣椒抗肺癌药物。
2.如权利要求1所述的辣椒抗肺癌药物，其特征在于：所述防腐剂为苯甲酸钠；所述矫味剂为薄荷醇。
3.一种制备如权利要求1至2任一权利要求所述的辣椒抗肺癌药物的方法，包括步骤：
1）取 0.03～0.13重量份的辣椒素、0. 5～1.5重量份的辣椒粕、0.7～1.7重量份的大豆油和0.01～0.03重量份的蜂蜡混合均匀；
2）向上述混合均匀的原料中加入占上述原料重量0.2%的防腐剂和0.5%的矫味剂即得所述辣椒抗肺癌药物。
4.如权利要求3所述的制备辣椒抗肺癌药物的方法，其特征在于：所述辣椒素取0.08重量份、所述辣椒粕取1重量份、所述大豆油取1.2重量份、所述蜂蜡取0.02重量份。
5.如权利要求3所述的制备辣椒抗肺癌药物的方法，其特征在于：所述防腐剂为苯甲酸钠；所述矫味剂为薄荷醇。
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Non-Patent Citations (3)
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