CN115005200B - 一种用于畜禽的精液稀释液及其制备方法 - Google Patents

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Abstract

本发明提供一种用于畜禽的精液稀释液及其制备方法，属于精液稀释液技术领域。该精液稀释液包括：精液稀释液原液和纤维蛋白原，所述的纤维蛋白原在精液稀释液液中的浓度为1～5μg/mL。本发明的精液稀释液可以显著提高精子活力。本添加物不会对精子精液产生不良影响，不会影响后，对与家畜的鲜精、冻精均有效果。

Description

一种用于畜禽的精液稀释液及其制备方法
技术领域
本发明属于精液稀释液技术领域，具体涉及一种用于畜禽的精液稀释液及其制备方法。
背景技术
精子活力(sperm motility)是指精液中呈前进运动精子所占的百分率。由于只有具有前进运动的精子才可能具有正常的生存能力和受精能力，所以活力与雌性受胎率密切相关，从而它是评定精液品质优劣的常规检查的主要指标之一。
纤维蛋白原(Fibrinogen，FIB)即凝血因子Ⅰ，是主要由肝细胞合成、具有凝血功能的蛋白质，是血浆中含量最高的凝血因子。纤维蛋白原分子量约为340kDa，呈三联球形，由α、β、γ三对不同的多肽链组成，是一种六聚体糖蛋白。其中β链由FGB基因编码，β链的合成是纤维蛋白原合成的限速步骤。纤维蛋白原是纤维蛋白的前体物质，是血栓形成的重要反应底物。纤维蛋白原是凝血系统的重要组成部分，同时在血管组织修复、炎症反应、血管生成等其他生物学功能中发挥着重要作用。
有研究表明，在人的精液中，精子密度、精子活力等精液质量指标与精浆中纤维蛋白原的含量正相关。精浆中纤维蛋白原的含量越高，精子正常形态的比例就越大。纤维蛋白原作为一种凝血因子，在临床医学方面应用广泛。但是纤维蛋白原影响精子的具体机制目前未有任何研究。FGL1和FGL2两种蛋白作为纤维蛋白原超家族中的成员，已被证实参与了精子的发生与成熟，对精液质量有重要作用。FGB基因在热应激的西门塔尔牛精子中低表达，纤维蛋白原前体物质纤维蛋白原β链的合成减少可能是西门塔尔牛精子活力不足、畸形率过高的原因之一。
人工授精技术的兴起与应用，使精液的冷冻保存技术也在不断的发展。精液稀释液可以延长精液的冷冻保存时间，提高冷冻后的精子活力，为精子提供一个相对适宜的生存环境。精液稀释液的主要成分为稀释剂(氯化钠等)、营养剂(葡萄糖、蛋白质等)和保护剂(缓冲物质、抗菌物质等)。随着技术的进步，精液稀释液的成分与添加物也在不断的改良中。
目前已有许多研究，将不同的物质加入精液稀释液中，以保护精子，改进稀释液的配方与成分组成。如将一定浓度的白藜芦醇这一物质加入精液稀释液中，可以提高冻精精子的精子活率等，起到保护精子的作用。低密度脂蛋白、大豆卵磷脂、牛血清白蛋白等均有望代替卵黄，改进现有的精液稀释液成分，作为精液稀释液冷冻保护剂用于畜禽精液保存。
发明内容
本发明的目的是为了提供一种用于畜禽的精液稀释液及其制备方法，该精液稀释液提高了家畜的精子活力。
本发明首先提供一种用于畜禽的精液稀释液，包括：
精液稀释液原液和纤维蛋白原，所述的纤维蛋白原在精液稀释液原液中的浓度为1～5μg/mL。
优选的是，所述的精液稀释液原液为牛精液稀释液。
优选的是，所述的精液稀释液原液为法国Optidyl公司生产的型号为020996。
优选的是，所述的纤维蛋白原为源叶公司生产的型号为S12024牛血纤维蛋白原。
本发明还提供一种用于畜禽的精液稀释液的制备方法，包括：
使用生理盐水将纤维蛋白原溶解配置成溶液，然后将配置好的溶液加入到精液稀释液原液中，梯度稀释成纤维蛋白原浓度分别为1～5μg/mL的溶液。
优选的是，所述的纤维蛋白原溶解配置成溶液的浓度为10mg/mL。
优选的是，所述的配置好的溶液在4℃保存，保存期限为一周。
本发明的有益效果
本发明提供一种用于畜禽的精液稀释液及其制备方法，该精液稀释液是将一定浓度的纤维蛋白原加入精液稀释液原液中，可以显著提高精子活力。和现有技术相对比，本添加物不会对精子精液产生不良影响，不会影响后，对与家畜的鲜精、冻精均有效果。
附图说明
图1为本发明实施例1的精子活力检测结果图。
具体实施方式
本发明首先提供一种用于畜禽的精液稀释液，包括：
精液稀释液原液和纤维蛋白原，所述的纤维蛋白原在精液稀释液原液中的浓度为1～5μg/mL。
按照本发明，所述的精液稀释液原液优选为牛精液稀释液，更优选为法国Optidyl公司生产的型号为020996。
按照本发明，所述的纤维蛋白原优选为源叶公司生产的型号为S12024牛血纤维蛋白原。
本发明还提供一种用于畜禽的精液稀释液的制备方法，包括：
使用生理盐水将纤维蛋白原溶解配置成溶液，所述的溶液浓度优选为10mg/mL，然后配置好的溶液在4℃保存，保存期限为一周；将配置好的溶液加入到精液稀释液原液中，梯度稀释成纤维蛋白原浓度分别为1～5μg/mL的溶液。
将上述制备得到的用于畜禽的精液稀释液用于精子的孵育，具体方法为：将梯度稀释好的含有纤维蛋白原的精液稀释液置于37℃的水浴锅内预热，待家畜原精采集完毕后，使用预热好的稀释液稀释。
按照本发明，本发明对所述的畜禽没有特殊限制，优选为牛、羊或猪等。
下面结合具体实施例对本发明做进一步详细的描述，实施例中涉及到的原料均为商购获得。
实施例1
1纤维蛋白原溶液的配制
使用生理盐水将牛血纤维蛋白原溶解(源叶公司生产的型号为S12024)配置成浓度10mg/mL的溶液，4℃保存，保存期限为一周。使用前将配置好的溶液加入到牛精液稀释液(法国Optidyl公司生产的型号为020996)中，梯度稀释成纤维蛋白原浓度分别为20μg/mL、10μg/mL、5μg/mL、1μg/mL的溶液。
2精子孵育
将梯度稀释好的含有纤维蛋白原的精液稀释液和未添加纤维蛋白原的精液稀释液置于37℃的水浴锅内预热。西门塔尔牛的原精采集完毕后，先于自动精子分析仪上观察其活力等是否正常。如正常，使用预热好的稀释液按5-10倍稀释。设置对照组与实验组，纤维蛋白原的浓度分别为0μg/mL、1μg/mL、5μg/mL、10μg/mL、20μg/mL。置于水浴锅内37℃孵育30min。
3精子活力检测
采集精液后，用移液器取原精10μl滴在载玻片上，置于自动精子分析仪镜头下，由自动精子分析仪进行抓图、分析。
4统计分析
根据实验需要每次实验至少有3次重复，并且满足3次独立的生物学重复。所有数据使用SPSS 21.0软件进行统计与分析，采用独立样本T检验，所有数据均用“均值±标准误”(Mean±SEM)来表示。数据差异显著性标注：*，P<0.05；**，P<0.01；***，P<0.001；ns，P>0.05。
5试验结果
孵育完成后，结果显示，如图1所示，从图1可以看出，浓度为1μg/mL、5μg/mL的纤维蛋白原可以提高西门塔尔牛的精子活力(由69％提高至72％)，10μg/mL、20μg/mL的纤维蛋白原对精子活力的提高没有效果。

Claims (6)

1.一种用于畜禽的精液稀释液，其特征在于，包括：
精液稀释液原液和纤维蛋白原，所述的纤维蛋白原在精液稀释液原液中的浓度为1～5μg/mL；
所述的精液稀释液原液为法国Optidyl公司生产的型号为020996。
2.根据权利要求1所述的一种用于畜禽的精液稀释液，其特征在于，所述的精液稀释液原液为牛精液稀释液。
3.根据权利要求1所述的一种用于畜禽的精液稀释液，其特征在于，所述的纤维蛋白原为源叶公司生产的型号为S12024牛血纤维蛋白原。
4.根据权利要求1所述的一种用于畜禽的精液稀释液的制备方法，其特征在于，包括：
使用生理盐水将纤维蛋白原溶解配置成溶液，然后将配置好的溶液加入到精液稀释液原液中，梯度稀释成纤维蛋白原浓度分别为1～5μg/mL的溶液。
5.根据权利要求4所述的一种用于畜禽的精液稀释液的制备方法，其特征在于，所述的纤维蛋白原溶解配置成溶液的浓度为10mg/mL。
6.根据权利要求4所述的一种用于畜禽的精液稀释液的制备方法，其特征在于，所述的配置好的溶液在4℃保存，保存期限为一周。
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