CN114982707A - 一种薄型子宫内膜动物模型的构建方法 - Google Patents
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Abstract
本发明提供了一种薄型子宫内膜动物模型的构建方法，属于动物模型领域。所述构建方法包括以下步骤：对雌性动物进行超促排卵处理，得到薄型子宫内膜动物模型；所述超促排卵处理共1～20个周期，每个周期的处理方式为：先腹腔注射孕马血清促性腺激素，再腹腔注射人绒毛膜促性腺激素。本发明构建的薄型子宫内膜动物模型不仅可以用于薄型子宫内膜治疗药物的筛选，还能够为研究薄型子宫内膜发生发展机制提供良好的平台。
Description
技术领域
本发明属于动物模型领域，具体涉及一种薄型子宫内膜动物模型的构建方法。
背景技术
薄型子宫内膜是指子宫内膜厚度低于能够获得妊娠的阈厚度。近年来，女性子宫内膜过薄现象逐年严重，已经成为体外受精-胚胎移植(IVF-ET)中周期取消和种植失败的重要原因之。研究发现，引起薄型子宫内膜的原因较多，其中，子宫内膜损伤引起的薄型子宫内膜是生殖医生临床上经常遇到的问题，其治疗目的就是要促进子宫内膜再生、修复，增加子宫内膜厚度，从而提供妊娠成功率。但是，对于因重度或广泛的损伤而引起薄型子宫内膜患者，目前的治疗方法效果较差，子宫内膜厚度难以增加，这是临床治疗上常见的棘手难题。由于伦理问题等，某些实验性治疗方法及病理机制的探讨等难以直接在病人体内进行。因此，建立薄型子宫内膜动物模型显得尤为必要。
高红等(大鼠薄型子宫内膜模型的建立和鉴定，生命科学研究，2011年，第15卷，第5期)报道了一种建立薄型子宫内膜动物模型的方法：夹住大鼠子宫一端，注射95％的乙醇对子宫内膜进行化学损伤。但是，该方法造模后大鼠存活率仅为70％，并且常常造成大鼠腹腔严重粘连，不仅降低了动物存活率，还为后续研究造成了影响。
因此，亟需研发出一种动物存活率更高、副作用更小的薄型子宫内膜动物模型构建方法，为研究薄型子宫内膜发生发展机制以及薄型子宫内膜治疗药物的筛选提供更优的平台。
发明内容
本发明的目的在于提供一种薄型子宫内膜动物模型的构建方法，以及该方法构建的薄型子宫内膜动物模型。
本发明提供了一种薄型子宫内膜动物模型的构建方法，所述构建方法包括以下步骤：对雌性动物进行超促排卵处理，得到薄型子宫内膜动物模型；
所述超促排卵处理共1～20个周期，每个周期的处理方式为：先腹腔注射孕马血清促性腺激素，再腹腔注射人绒毛膜促性腺激素。
进一步地，所述超促排卵处理共5～15个周期，每个周期2～4天。
进一步地，所述超促排卵处理共10个周期，每个周期3天。
进一步地，每个周期之间无时间间隔。
进一步地，所述孕马血清促性腺激素的注射量为(1～10)IU，所述人绒毛膜促性腺激素的注射量为(1～10)IU。
进一步地，所述孕马血清促性腺激素的注射量为5IU，所述人绒毛膜促性腺激素的注射量为5IU。
进一步地，所述人绒毛膜促性腺激素是在孕马血清促性腺激素腹腔注射24～60小时后进行腹腔注射的。
进一步地，所述人绒毛膜促性腺激素是在孕马血清促性腺激素腹腔注射48小时后进行腹腔注射的。
进一步地，所述动物为处于动情周期的动物。
进一步地，所述动物为小鼠。
进一步地，所述小鼠为SPF级昆明小鼠。
进一步地，所述超促排卵处理期间，动物按需自由取食，自由饮水。
本发明还提供了上述方法构建的薄型子宫内膜动物模型。
实验结果表明，本发明通过无间断连续进行10个周期的超促排卵周期处理，成功构建了薄型子宫内膜动物模型。本发明构建的薄型子宫内膜动物模型不仅可以用于薄型子宫内膜治疗药物的筛选，还能够为研究薄型子宫内膜发生发展机制提供良好的平台。
本发明的建模方法简单便捷，容易操作。
显然，根据本发明的上述内容，按照本领域的普通技术知识和惯用手段，在不脱离本发明上述基本技术思想前提下，还可以做出其它多种形式的修改、替换或变更。
以下通过实施例形式的具体实施方式，对本发明的上述内容再作进一步的详细说明。但不应将此理解为本发明上述主题的范围仅限于以下的实例。凡基于本发明上述内容所实现的技术均属于本发明的范围。
附图说明
图1：连续超促排卵组模型子宫组织HE染色(100x)。
图2：乙醇组模型子宫组织HE染色(100x)
图3：自然周期组子宫组织HE染色(100x)
具体实施方式
本发明所用原料与设备均为已知产品，通过购买市售产品所得。
实施例1：本发明构建薄型子宫内膜动物模型的方法
1、实验动物
SPF级昆明小鼠，雌性小鼠6周龄，体重在25±5g。
2、实验药物
孕马血清促性腺激素(PMSG)、注射用人绒毛膜促性腺激素(HCG)。
3、构建薄型子宫内膜动物模型的方法
(1)于小鼠动情周期腹腔注射PMSG 5IU，48h后腹腔注射HCG 5IU，此为1个超促排卵周期，1个周期共3天；
(2)第4天开始第2个超促排卵周期，第2个超促排卵周期的处理方法同第1个超促排卵周期，即：腹腔注射PMSG 5IU，48h后腹腔注射HCG5IU；
每个超促排卵周期中间不间隔，无间断连续经过10个周期超促排卵周期处理后，薄型子宫内膜动物模型构建完成。实验过程中无小鼠死亡。
构建薄型子宫内膜动物模型过程中，小鼠按需自由取食，自由饮水。
以下通过实验例证明本发明的有益效果。
实验例1：本发明构建的薄型子宫内膜动物模型的验证
1、实验准备
(1)实验动物
SPF级昆明雌性小鼠，小鼠6周龄，体重在25±5g。
(2)主要实验药物
孕马血清促性腺激素(PMSG)、注射用人绒毛膜促性腺激素(HCG)、透明质酸酶、M2培养液、新生牛血清、乙醇。
(3)主要实验仪器与设备
恒温干燥箱、恒温水浴锅、石蜡切片机、光学显微镜、显微成像系统。
2、实验方法
(1)分组方式
小鼠适应性饲养后随机分为3组：自然周期组、乙醇组、连续超促排卵组。
(2)处理方法
自然周期组不予干预，通过观察小鼠的阴道涂片判断小鼠周期。
乙醇组参考文献记载的方法，予95％乙醇行小鼠子宫灌注，灌注完成后恢复15天，麻醉并解剖小鼠。
连续超促排卵组按照实施例1的方法，无间断连续经过10个周期超促排卵周期处理后，麻醉并解剖小鼠。
(3)测试方法
小鼠麻醉后摘取子宫组织，经4％多聚甲醛液固定。组织样本切片烘干，使用苏木素染色。利用显微成像系统对组织样本拍照。
3、实验结果
各组子宫组织HE染色结果如图1～图3所示。与自然周期组相比，乙醇组和连续超促排卵组均出现子宫内膜变薄，宫腔隙增大；腺体数量减少，内膜上皮及腺上皮细胞扁平化，局部血管稀疏等典型改变。说明子宫灌注95％乙醇和本发明连续超促排卵的方法都成功构建了薄型子宫内膜动物模型。
综上，本发明提供了一种薄型子宫内膜动物模型的构建方法，属于动物模型领域。本发明构建的薄型子宫内膜动物模型不仅可以用于薄型子宫内膜治疗药物的筛选，还能够为研究薄型子宫内膜发生发展机制提供良好的平台。
Claims (12)
1.一种薄型子宫内膜动物模型的构建方法，其特征在于：所述构建方法包括以下步骤：对雌性动物进行超促排卵处理，得到薄型子宫内膜动物模型；
所述超促排卵处理共1～20个周期，每个周期的处理方式为：先腹腔注射孕马血清促性腺激素，再腹腔注射人绒毛膜促性腺激素。
2.根据权利要求1所述的构建方法，其特征在于：所述超促排卵处理共5～15个周期，每个周期2～4天。
3.根据权利要求2所述的构建方法，其特征在于：所述超促排卵处理共10个周期，每个周期3天。
4.根据权利要求1～3任一项所述的构建方法，其特征在于：每个周期之间无时间间隔。
5.根据权利要求1～3任一项所述的构建方法，其特征在于：所述孕马血清促性腺激素的注射量为(1～10)IU，所述人绒毛膜促性腺激素的注射量为(1～10)IU。
6.根据权利要求5所述的构建方法，其特征在于：所述孕马血清促性腺激素的注射量为5IU，所述人绒毛膜促性腺激素的注射量为5IU。
7.根据权利要求1～3任一项所述的构建方法，其特征在于：所述人绒毛膜促性腺激素是在孕马血清促性腺激素腹腔注射24～60小时后进行腹腔注射的。
8.根据权利要求7所述的构建方法，其特征在于：所述人绒毛膜促性腺激素是在孕马血清促性腺激素腹腔注射48小时后进行腹腔注射的。
9.根据权利要求1～3任一项所述的构建方法，其特征在于：所述动物为处于动情周期的动物。
10.根据权利要求9所述的构建方法，其特征在于：所述动物为小鼠。
11.根据权利要求10所述的构建方法，其特征在于：所述小鼠为SPF级昆明小鼠。
12.权利要求1～11任一项所述方法构建的薄型子宫内膜动物模型。
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Cited By (1)
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2022
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| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
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