CN114946484B - 甲基营养型芽孢杆菌cb-12在防治水稻稻曲病中的应用 - Google Patents

甲基营养型芽孢杆菌cb-12在防治水稻稻曲病中的应用 Download PDF

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Abstract

本发明涉及微生物菌剂技术领域，特别是涉及甲基营养型芽孢杆菌CB‑12在防治水稻稻曲病中的应用。本发明所述甲基营养型芽孢杆菌CB‑12的保藏编号为CGMCC No.22734。本发明提供的甲基营养型芽孢杆菌CB‑12对水稻稻曲病菌孢子萌发及菌丝生长均具有强烈的抑制效果，可以有效防治水稻稻曲病，田间防效可达75.30％。另外，CB‑12与1％申嗪霉素悬浮剂复配使用，相比两个单剂，具有明显增效效果，可显著提升防治效果；再者CB‑12为天然微生物，对植物、环境及人畜均有较高的安全性，且在发酵及菌液制备过程中也不会产生有毒、有害物质。

Description

甲基营养型芽孢杆菌CB-12在防治水稻稻曲病中的应用
技术领域
本发明涉及微生物菌剂技术领域，特别是涉及甲基营养型芽孢杆菌CB-12在防治水稻稻曲病中的应用。
背景技术
全球每年因病虫草害造成的粮食产量损失可占作物总产量的三分之一左右，其中因为病害造成的损失约为14％。稻曲病是由病原菌Ustilaginoidea virens侵染所引起的一种真菌病害，在全世界水稻种植区均有发生，同时也是水稻三大病害之一。近年来，随着我国气候变化、栽培方式的改变、肥料用量的增加，稻曲病的发生呈逐年加剧趋势，2008年～2016年我国平均每年稻曲病发病面积达306万公顷。稻曲病不仅会造成水稻产量的损失，由于病原菌产生的毒素还可导致严重的食品安全问题。
与防治其它水稻病害一样，稻曲病的防治主要依靠栽培抗病品种以及使用化学药剂。目前，国内外对稻曲病遗传与抗性机理的报道较少，还未发现已知的主效抗病基因，这为稻曲病的抗病育种工作带来了较大难度。因此，化学药剂已然成为防治水稻稻曲病最直接、有效的方法，但由于水稻病虫草害大面积流行、农药利用率低等原因，直接导致了化学农药使用量大幅增加。目前，水稻已成为我国病害防治用药量最多的作物，单位面积农药使用量为世界平均水平的2.5倍。化学农药的过度使用，造成了环境污染、粮食安全性降低等严重问题，因此必须寻求更为环保、绿色的防治方法改变这一现状。
生物防治是以利用自然界各种有益生物或其代谢产物对农作物病虫害进行防治的方法，具有污染小、安全性高、不易产生抗药性等优势。使用生防菌防治水稻病害是现阶段水稻病害生物防治的主要手段之一，目前，主要集中在水稻稻瘟病、纹枯病、细菌性条斑病等病害中，且有多个生物制剂通过农药登记审定，而防治稻曲病的生物制剂的研究却鲜有报道，通过农药登记的产品更是少之又少。因此，水稻生产中亟待一种可有效防治水稻稻曲病微生物资源的出现。
发明内容
为了解决上述问题，本发明提供了甲基营养型芽孢杆菌(Bacillusmethylotrophicus)CB-12在防治水稻稻曲病中的应用。本发明提供的甲基营养型芽孢杆菌CB-12对水稻稻曲病菌孢子及菌丝均具有强烈的抑制效果，可以有效防治水稻稻曲病。
为了实现上述目的，本发明提供如下技术方案：
本发明提供了甲基营养型芽孢杆菌(Bacillus methylotrophicus)CB-12在防治水稻稻曲病中的应用，所述甲基营养型芽孢杆菌CB-12的保藏编号为CGMCC No.22734。
优选的，所述应用包括以下步骤：
采用含有所述甲基营养型芽孢杆菌CB-12的菌剂对水稻进行喷雾处理；所述菌剂中甲基营养型芽孢杆菌CB-12的活菌数≥1×108CFU/mL。
优选的，所述菌剂的用量为30L/亩。
优选的，所述喷雾处理还包括喷施申嗪霉素药剂。
优选的，所述申嗪霉素试剂药剂的有效成分含量为1％；
所述1％申嗪霉素试剂的用量为60～90mL/亩。
优选的，所述喷雾处理的时期包括水稻破口前期和/或齐穗期。
优选的，所述喷雾处理的部位包括：水稻茎、叶和穗部中的一种或多种。
有益效果：
本发明提供了甲基营养型芽孢杆菌(Bacillus methylotrophicus)CB-12在防治水稻稻曲病中的应用，所述甲基营养型芽孢杆菌CB-12的保藏编号为CGMCC No.22734。本发明提供的甲基营养型芽孢杆菌CB-12对水稻稻曲病菌孢子萌发及菌丝生长均具有强烈的抑制效果，可以有效防治水稻稻曲病，田间防效可达75.30％。
另外，CB-12与1％申嗪霉素悬浮剂复配使用，相比两个单剂，具有明显增效效果，可显著提升防治效果；再者CB-12为天然微生物，对植物、环境及人畜均有较高的安全性，且在发酵及菌液制备过程中也不会产生有毒、有害物质。
生物保藏说明
甲基营养型芽孢杆菌(Bacillus methylotrophicus)CB-12，于2021年06月18日保藏在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，地址为北京市朝阳区北辰西路1号院3号，中国科学院微生物研究所，保藏编号为：CGMCC No.22734。
附图说明
为了更清楚地说明本发明实施例或现有技术中的技术方案，下面将对实施例中所需要使用的附图作简单地介绍。
图1为沼液内生细菌的菌落形态图(a)和纯化得到的部分细菌菌落形态图(b、c和d)；
图2为CB-12gyrB序列系统发育树；
图3为CB-12对稻曲病菌菌丝生长抑制能力，其中CK为空白对照组；
图4为CB-12对水稻稻曲病盆栽防效；其中左图为处理5，右图为处理1。
具体实施方式
本发明提供了甲基营养型芽孢杆菌(Bacillus methylotrophicus)CB-12在防治水稻稻曲病中的应用，所述甲基营养型芽孢杆菌CB-12的保藏编号为CGMCC No.22734。
在本发明中，所述甲基营养型芽孢杆菌CB-12是辽宁省农业科学院植物保护研究所由灯塔金康种植有限公司生产沼液中取样，经稀释后使用平板培养法筛选得到的对水稻稻曲病具有拮抗作用的生防细菌。
在本发明中，所述甲基营养型芽孢杆菌CB-12在LB培养基上的性状优选为：菌落颜色呈乳白色，不规则圆形或近圆形，菌落表面存在不规则褶皱。革兰氏染色、淀粉水解、明胶液化、氧化酶反应、V-P反应、接触酶反应、硝酸还原反应和脲酶等试验结果呈阳性；甲基红试验及吲哚试验结果为阴性；具有一定耐盐性，在<9％NaCL培养基中可以生长。
在本发明中，所述应用优选包括以下步骤：
采用含有所述甲基营养型芽孢杆菌CB-12的菌剂对水稻进行喷雾处理。
在本发明中，所述菌剂中甲基营养型芽孢杆菌CB-12的活菌数优选≥1×108CFU/mL。
在本发明中，制备所述菌剂的培养基以1L计，优选包括以下组分：酵母提取物6g，胰蛋白胨10g，氯化钠10g，磷酸二氢钾5g和余量的去离子水；所述培养基的pH优选为7.5。本发明通过适宜的培养基可以提高菌剂中CB-12的活菌浓度。
在本发明中，所述菌剂的用量优选为30L/亩。
在本发明中，所述喷雾处理优选还包括喷施申嗪霉素药剂；所述申嗪霉素药剂的有效成分含量优选为1％；
所述1％申嗪霉素试剂的用量优选为60～90mL/亩，更优选为80mL/亩。
本发明通过将含有CB-12的菌剂与1％申嗪霉素悬浮剂复配使用，相比两个单剂，可显著提升防治效果。
在本发明中，所述喷雾处理的时期优选包括水稻破口前期和/或齐穗期，更优选为水稻破口前期和齐穗期；所述水稻破口前期优选为水稻破口期前5～7d，更优选为6d；不同时期的喷雾处理的次数优选为1～2次，更优选为2次，在不同时期喷施多次，每次喷施的用量如前文所述，在此不再赘述。
在本发明中，所述喷雾处理的部位优选包括水稻茎、叶和穗部中的一种或多种，更优选为水稻茎和穗部。
为了进一步说明本发明，下面结合实施例对本发明提供的甲基营养型芽孢杆菌CB-12在防治水稻稻曲病中的应用进行详细地描述，但不能将它们理解为对本发明保护范围的限定。
实施例1
本发明所使用甲基营养型芽孢杆菌CB-12筛选自灯塔金康种植有限公司生产的猪粪沼液中。具体方法如下：
使用梯度稀释法对沼液内生细菌进行分离，将沼液制备成10-1～10-4的稀释液后，均匀涂布于LB固体培养基(酵母提取物6g，胰蛋白胨10g，氯化钠10g，琼脂17g，去离子水定容至1L，调解pH至7)平板进行培养，设置3次重复，24h后，对菌落(图1中的a)进行观察，挑取形态、颜色、大小不同菌落进行平板划线纯化培养。
经以上步骤筛选出39株颜色、形态、大小不一的细菌(部分细菌见图1中的b～d)，以备使用。
使用菌丝生长速率抑制法从上述筛选出的39株细菌中，筛选对水稻稻曲病菌拮抗作用最好的细菌。
经以上步骤筛选出本申请的甲基营养型芽孢杆菌CB-12。
实施例2
生防细菌CB-12的鉴定
形态学、生理生化鉴定
CB-12菌体呈乳白色，近圆形，表面不光滑，略有隆起，生理生化鉴定参照《常见细菌系统鉴定手册》(东秀珠和蔡妙英，2001)进行检索，具体结果见表1。
表1CB-12生理生化试验结果
Figure BDA0003606852870000041
Figure BDA0003606852870000051
经过形态学及生理生化试验初步确定CB-12属于芽孢杆菌。
分子鉴定
使用细菌基因组DNA快速抽提试剂盒提取CB-12基因组DNA，gyr B测序所需引物序列为：UP-1S:5`-GAAGTCATCATGACCGTTCTGCA-3`，SEQ ID NO.1所示；UP-2Sr:5`-AGCAGGGTACGGATGTGCGAGCC-3`，SEQ ID NO.2所示；PCR反应条件为：：94℃预变性5min；94℃变性1min，60℃退火2min，72℃延伸2min，30个循环；72℃反应10min。
扩增完成后，PCR产物送至生工生物工程(上海)股份有限公司进行测序。经测序得到1147bp长度的序列，具体如SEQ ID NO.3所示：TATCCGGCGGTCTTCACGGTGTAGGGGCGTCTGTCGTAAACGCCTTGTCGACCACTCTTGACGTTACGGTTCATCGTGACGGAAAAATCCACTATCAGGCGTACGAGCGCGGTGTACCTGTGGCCGATCTTGAAGTGATCGGTGATACTGATAAGACCGGAACGATTACGCACTTCGTTCCGGATCCGGAAATTTTCAAAGAAACAACCGAATACGACTATGACCTGCTTTCAAACCGTGTCCGGGAATTGGCCTTCCTGACAAAAGGTGTAAACATCACGATTGAAGACAAACGTGAAGGACAAGAACGGAAAAACGAGTACCACTACGAAGGCGGAATCAAAAGCTATGTTGAGTACTTAAACCGTTCCAAAGAAGTCGTTCATGAAGAGCCGATTTATATCGAAGGCGAGAAAGACGGCATAACGGTTGAAGTTGCATTGCAATACAACGACAGCTATACAAGCAATATTTATTCTTTCACAAATAATATCAACACATACGAAGGCGGCACGCACGAAGCCGGATTTAAAACCGGTCTGACCCGTGTTATAAACGACTATGCAAGAAGAAAAGGGATTTTCAAAGAAAATGATCCGAATTTAAGCGGGGATGATGTGAGGGAAGGGCTGACTGCCATTATTTCAATTAAGCACCCTGATCCGCAATTCGAAGGGCAGACGAAAACGAAGCTCGGCAACTCCGAAGCGAGAACGATCACTGATACGCTGTTTTCTTCTGCGCTGGAAACATTCCTTCTTGAAAATCCGGACTCAGCCCGCAAAATCGTTGAAAAAGGTTTAATGGCCGCAAGAGCGCGGATGGCAGCGAAAAAAGCGCGGGAATTGACCCGCCGCAAAAGTGCGCTTGAGATTTCCAATCTGCCGGGCAAACTGGCGGACTGTTCTTCTAAAGATCCGAGCATTTCCGAGCTGTATATCGTAGAGGGTGACTCTGCGGGCGGATCAGCGAAACAGGGACGGGACCGTCATTTCCAAGCCATTCTGCCGCTGCGCGGTAAGATTCTGAACGTTGAGAAAGCCAGACTTGATAAGATTCTCTCAAACAATGAGGTCAGATCAATGATCACGGCCCTCGGAACAGGAATCGGAGAAGATTTTAATCTGAAAAAGCGCGTTATCATAAA；
对测序得到的gyrB基因序列与Genbank中核酸数据进行Blast比对，进行同源性分析。利用gyr B基因序列构建系统发育树时以大肠杆菌E.coli(EU014649.1)作为外群。使用Neighbour-joining法构建系统发育树。
使用gyr B序列对CB-12进行同源性比对发现，CB-12与甲基营养型芽孢杆菌KT378130.1同源性高达99.95％，系统发育树显示结果一致(图2)。综合形态学、生理生化及分子生物学，确定CB-12为甲基营养型芽孢杆菌Bacillus methylotrophicus。
实施例3
采用孢子萌发法测定CB-12对稻曲病孢子萌发抑制率。
将实施例1筛选的甲基营养型芽孢杆菌CB-12进行发酵培养，具体如下：
(1)菌种活化：使用LB固体培养基对CB-12进行活化，活化方法为平板划线法，使用无菌细菌接种环蘸取少量CB-12菌种，Z字型均匀划线于LB平板上，35℃黑暗培养24h；所述LB固体培养基配方为：酵母提取物6g，胰蛋白胨10g，氯化钠10g，琼脂17g，去离子水定容至1L，调解pH至7；
(2)生防菌种子液制备：挑取活化CB-12单菌落，转接至LB液体培养基中30℃，150rpm培养24h；所述LB固体培养基配方为：酵母提取物6g，胰蛋白胨10g，氯化钠10g，去离子水定容至1L，调解pH至7；
(3)发酵液制备：将CB-12种子液加入改良的LB培养基中，种子液与发酵培养液体积比1：200，35℃，180rpm培养120h；
所述改良LB培养基配方为：酵母提取物6g，胰蛋白胨10g，氯化钠10g，磷酸二氢钾5g，去离子水定容至1L，调解pH至7.5。
将预先培养好的稻曲病菌制备成10mm直径菌饼，接种至含有150mL PS培养基三角瓶中摇培，27℃、130rpm震荡培养6d，制得每mL含1×105个孢子的悬浮液。吸取5mL细菌发酵液(浓度为1×108CFU/mL)与5mL稻曲病菌孢子悬浮液混合，得到混合液；以相同体积的无菌水及稻曲病菌孢子悬浮液混合液作为空白对照。
吸取50μL孢子混合液至载玻片上，于保湿培养皿中、27℃恒温培养，并设置3次重复。36h后随机镜检孢子的萌发情况，计算对稻曲病菌孢子萌发的抑制率。结果见表2。
使用抑菌圈法测定CB-12对稻曲病菌菌丝抑制能力，取1mL孢子悬浮液滴于PSA平板中央，使用无菌涂布器将孢子悬浮液均匀涂布于平板中，然后使用一次性无菌细菌接种环蘸取CB-12点于平板中央，以不接菌处理为空白对照，设置3次重复，2d后观察并测量抑菌圈直径。结果见表2。
采用菌丝生长抑制法测定CB-12对稻曲病菌菌丝的抑制能力，使用无菌打孔器从预培养好的病原菌菌落边缘处打取0.5cm的菌饼，并水平倒置于PDA培养基正中央培养，在距菌饼3cm使用一次性无菌接种环分别接种4点CB-12，设置3次重复及空白对照。28℃黑暗培养，待空白对照菌落直径超过6cm后采用十字交叉法测量菌落直径，并计算抑菌率，结果见表2。
抑菌率(％)＝(对照直径-处理直径)/对照直径×100％
表2CB-12对水稻稻曲病孢子萌发及菌丝生长抑制能力
Figure BDA0003606852870000071
由上述结果可知，CB-12对稻曲病菌孢子及菌丝均具有较强抑制作用。其中，CB-12对稻曲病孢子萌发抑制率可达94.59％，对稻曲病菌丝也表现出良好抑制作用，抑菌圈直径为3.42cm(图3)，对稻曲病菌丝的生长抑制率为92.66％。
实施例4
CB-12对稻曲病盆栽防效
试验处理
设计5个不同处理，具体如下：
处理1：于水稻破口期使用CB-12发酵液进行喷雾处理，喷雾后72h，进行水稻稻曲病注射接种；
处理2：于水稻破口期进行水稻稻曲病注射接种，接种后72h，使用CB-12发酵液进行喷雾处理；
处理3：于水稻破口期使用戊唑醇悬浮剂(戊唑醇的浓度为430g/L)进行喷雾处理，喷施的药剂浓度为1mg/mL，喷雾后48h，进行水稻稻曲病注射接种；
处理4：于水稻破口期使用1000亿孢子/克的枯草芽孢杆菌可湿性粉剂进行喷雾处理，喷雾后72h，进行水稻稻曲病注射接种；
处理5：只于水稻破口期接种稻曲病菌。
处理1～5的药剂喷雾量均为5mL/株，水稻稻曲病注射接种量均为3mL/株。
每个处理30株水稻，每个处理3次重复，CB-12发酵原液浓度均为1×108CFU/mL，接种水稻稻曲病菌孢子浓度均为105个/mL。
稻曲病的接种及调查、分级标准，参考徐晗等的文章《稻曲病菌致病力分化与接种处理条件优化》江苏农业科学2020,48(18),128-131。
试验结果见表3和图4。
表3CB-12对水稻稻曲病盆栽接种防治效果
Figure BDA0003606852870000081
由表3可知，CB-12在盆栽试验中对稻曲病表现出良好的防治效果，其中CB-12原液对稻曲病预防防效为81.07％，治疗防效为42.09％，预防效果优于治疗效果。在预防处理中，防治效果显著高于照药剂枯草芽孢杆菌防效(75.40％)。
实施例5
CB-12对水稻稻曲病的田间防治效果
1.试验设计
试验地点选择在辽宁省东港市农技推广中心水稻试验田。供试品种为“辽粳401”。
供试菌株：CB-12。
试验处理：试验包括5个处理，每个处理30m2，设置3次重复。以正常浸种、插秧时间为标准，正常施肥及田间管理，整个生育期不施用任何杀菌剂。
处理1：于水稻破口前6d及齐穗期使用CB-12发酵原液(浓度1×108CFU/mL)进行喷雾处理；两次喷雾处理的用量均为30L/亩；
处理2：于水稻破口前6d及齐穗期使用CB-12发酵原液稀释10倍(浓度1×107CFU/mL)进行喷雾处理；两次喷雾处理的用量均30L/亩；
处理3：于水稻破口前6d及齐穗期使用CB-12发酵原液稀释100倍(浓度1×106CFU/mL)进行喷雾处理；两次喷雾处理的用量均30L/亩；
处理4：于水稻破口前6d及齐穗期使用430g/L戊唑醇悬浮剂，两次悬浮剂用量均为15mL/亩，两次均加水稀释至30L/亩进行喷雾处理；
处理5：于水稻破口前6d及齐穗期使用1％申嗪霉素悬浮剂，两次悬浮剂用量均为80mL/亩，两次均加水稀释至30L/亩进行喷雾处理；
处理6：于水稻破口前6d及齐穗期使用1000亿孢子/克枯草芽孢杆菌可湿性粉剂(两次使用量均为100g/亩)进行喷雾处理，两次均加水稀释至30L/亩进行喷雾处理；
处理7：清水对照，喷施清水用量为30L/亩，整个生育期不适用任何杀菌剂。
喷施方法、施药器材的选择、病害分级标准、病情指数参照《农业部药检所田间药效试验准则(一)》进行。
2.试验结果
表4CB-12发酵液对水稻稻曲病田间试验防治效果
Figure BDA0003606852870000091
由表4可知，CB-12不同处理浓度中，CB-12发酵原液喷雾处理对水稻稻曲病防治效果最好，防效可达75.30％，显著高于对照生防药剂1000亿孢子/克枯草芽孢杆菌可湿性粉剂处理(72.29％)，且与对照药剂1％申嗪霉素悬浮剂(77.41％)、430g/L戊唑醇悬浮剂处理(84.13％)差异不显著。
实施例6
CB-12与申嗪霉素混配对稻曲病的增效作用
1.试验设计
参考文献【姜玉玲,梁巧兰,魏列新,等.几种生物农药及其混配剂对兰州百合贮存期鳞茎腐烂病防治作用[J].中国生物防治学报,2021,37(5):9.】记载的方法，采用菌丝生长速率法分别测定稻曲病菌对CB-12发酵液(浓度1×108CFU/mL)、1％申嗪霉素悬浮剂、CB-12/申嗪霉素混剂的敏感性。测定EC50值时，将CB-12发酵液制备成系列浓度为1.6×105、8×105、4×106、2×107和1×108CFU/mL的含药PSA平板，将1％申嗪霉素悬浮剂制备成系列浓度为2、3、4.5、6.75和10.125μL/mL(均为悬浮剂的浓度)的含药PSA平板，混配时将CB-12的5个系列浓度与申嗪霉素的5系列浓度依次按照体积比为1：1配置而成。
将稻曲病菌置于PDA培养基中央，28℃培养35d后，使用打孔器从菌落边缘取直径5mm的菌饼，水平倒置于含药平板中央和添加等质量无菌水的PSA培养基上(CK)，将其置于28℃培养箱中恒温培养，待CK菌落直径超过60mm后采用十字交叉法测量菌落直径，计算菌丝生长抑制率，每个处理重复3次。
菌丝生长抑制率＝(1-(药剂处理菌株菌落直径-5mm)(对照处/理菌株菌落直径-5mm))×100％。
以不同药剂浓度的对数值为x、以菌丝生长抑制率为y进行回归分析，计算不同药剂的EC50值。根据Wadley公式计算CB-12与申嗪霉素混配组合的增效系数(synergisticratio，SR)。SR＝EC50理论/EC50实际；EC50理论＝(a+b)/[(a/EC50A)+(b/EC50B)]，其中a、b分别是CB-12、申嗪霉素在组合中含量的比值，EC50A、EC50B分别为CB-12、申嗪霉素的实际EC50。SR≤0.5为拮抗作用；0.5<SR≤1.5为相加作用；SR>1.5为增效作用。
2.试验结果
表5CB-12与申嗪霉素混配增效作用
供试药剂 配比 EC50 毒力回归方程 R2 增效系数
CB-12发酵液 104.01 y＝0.8393x+3.3071 0.94
1％申嗪霉素悬浮剂 274.70 y＝0.6738x+3.3567 0.97
CB-12+申嗪霉素 1:1 63.04 y＝0.7819x+3.5929 0.92 2.39
由表5可知，CB-12的EC50为104.01，申嗪霉素EC50为274.70，经复配后，EC50降低至63.04，经过分析，CB-12与申嗪霉素复配增效系数可达2.39，对稻曲病具有明显增效效果。
实施例7
CB-12与申嗪霉素混剂处理
1.试验设计
试验地点选择在辽宁省东港市农技推广中心水稻试验田。供试品种为“辽粳401”。
供试菌株：CB-12。
试验处理：试验包括5个处理，每个处理30m2，设置3次重复。以正常浸种、插秧时间为标准，正常施肥及田间管理，整个生育期不施用任何杀菌剂。
处理1：于水稻破口前6d及齐穗期使用CB-12发酵原液(浓度1×108CFU/mL)进行喷雾处理；两次喷雾处理的用量均为30L/亩；
处理2：于水稻破口前6d及齐穗期使用1％申嗪霉素悬浮剂，两次悬浮剂用量均为80mL/亩，两次均加水稀释至30L/亩进行喷雾处理(悬浮剂浓度为2.66μl/ml)；
处理3：于水稻破口前6d及齐穗期使用430g/L戊唑醇悬浮剂，两次悬浮剂用量均为15mL/亩，两次均加水稀释至30L/亩进行喷雾处理；
处理4：于水稻破口前6d及齐穗期使用1％申嗪霉素悬浮剂和CB-12发酵原液(浓度1×108CFU/mL)混合后进行喷雾处理；每次每亩喷施用量为：1％申嗪霉素悬浮剂80mL(未稀释)和CB-12发酵原液30L；
处理5：清水对照，喷施清水用量为30L/亩，整个生育期不适用任何杀菌剂。
2.试验结果
表6CB-12与申嗪霉素混剂对水稻稻曲病田间防治效果
Figure BDA0003606852870000111
由表6可知，甲基营养型芽孢杆菌CB-12发酵原液+1％申嗪霉素悬浮剂复配对水稻稻曲病具有较好的防治作用，防效为85.94％，相比CB-12(70.08％)与申嗪霉素单剂(73.62％)，混剂具有明显增效作用，防效显著高于化学药剂戊唑醇(81.41％)。
综上所述，本发明提供的甲基营养型芽孢杆菌CB-12对水稻稻曲病孢子及菌丝均具有良好的抑制效果，可以有效防治水稻稻曲病，田间防效可达75.30％。
另外，CB-12与1％申嗪霉素悬浮剂复配使用，相比两个单剂，可显著提升防治效果；再者CB-12为天然产物，对植物、环境及人畜均有较高的安全性，且在发酵及菌液制备过程中也不会产生有毒、有害物质。
虽然本发明已以较佳的实施例公开如上，但其并非用以限定本发明，任何熟悉此技术的人，在不脱离本发明的精神和范围内，都可以做各种改动和修饰，因此本发明的保护范围应该以权利要求书所界定的为准。
序列表
<110> 辽宁省农业科学院
<120> 甲基营养型芽孢杆菌CB-12在防治水稻稻曲病中的应用
<160> 3
<170> SIPOSequenceListing 1.0
<210> 1
<211> 23
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 1
gaagtcatca tgaccgttct gca 23
<210> 2
<211> 23
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 2
agcagggtac ggatgtgcga gcc 23
<210> 3
<211> 1147
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 3
tatccggcgg tcttcacggt gtaggggcgt ctgtcgtaaa cgccttgtcg accactcttg 60
acgttacggt tcatcgtgac ggaaaaatcc actatcaggc gtacgagcgc ggtgtacctg 120
tggccgatct tgaagtgatc ggtgatactg ataagaccgg aacgattacg cacttcgttc 180
cggatccgga aattttcaaa gaaacaaccg aatacgacta tgacctgctt tcaaaccgtg 240
tccgggaatt ggccttcctg acaaaaggtg taaacatcac gattgaagac aaacgtgaag 300
gacaagaacg gaaaaacgag taccactacg aaggcggaat caaaagctat gttgagtact 360
taaaccgttc caaagaagtc gttcatgaag agccgattta tatcgaaggc gagaaagacg 420
gcataacggt tgaagttgca ttgcaataca acgacagcta tacaagcaat atttattctt 480
tcacaaataa tatcaacaca tacgaaggcg gcacgcacga agccggattt aaaaccggtc 540
tgacccgtgt tataaacgac tatgcaagaa gaaaagggat tttcaaagaa aatgatccga 600
atttaagcgg ggatgatgtg agggaagggc tgactgccat tatttcaatt aagcaccctg 660
atccgcaatt cgaagggcag acgaaaacga agctcggcaa ctccgaagcg agaacgatca 720
ctgatacgct gttttcttct gcgctggaaa cattccttct tgaaaatccg gactcagccc 780
gcaaaatcgt tgaaaaaggt ttaatggccg caagagcgcg gatggcagcg aaaaaagcgc 840
gggaattgac ccgccgcaaa agtgcgcttg agatttccaa tctgccgggc aaactggcgg 900
actgttcttc taaagatccg agcatttccg agctgtatat cgtagagggt gactctgcgg 960
gcggatcagc gaaacaggga cgggaccgtc atttccaagc cattctgccg ctgcgcggta 1020
agattctgaa cgttgagaaa gccagacttg ataagattct ctcaaacaat gaggtcagat 1080
caatgatcac ggccctcgga acaggaatcg gagaagattt taatctgaaa aagcgcgtta 1140
tcataaa 1147

Claims (7)

1.甲基营养型芽孢杆菌(Bacillus methylotrophicus)CB-12在防治水稻稻曲病中的应用，所述甲基营养型芽孢杆菌CB-12的保藏编号为CGMCC No.22734。
2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述应用包括以下步骤：
采用含有所述甲基营养型芽孢杆菌CB-12的菌剂对水稻进行喷雾处理；所述菌剂中甲基营养型芽孢杆菌CB-12的活菌数≥1×108CFU/mL。
3.根据权利要求2所述的应用，其特征在于，所述菌剂的用量为30L/亩。
4.根据权利要求2或3所述的应用，其特征在于，所述喷雾处理还包括喷施申嗪霉素药剂。
5.根据权利要求4所述的应用，其特征在于，所述申嗪霉素药剂的有效成分含量为1％；
所述1％申嗪霉素试剂的用量为60～90mL/亩。
6.根据权利要求2或3所述的应用，其特征在于，所述喷雾处理的时期包括水稻破口前期和/或齐穗期。
7.根据权利要求2或3所述的应用，其特征在于，所述喷雾处理的部位包括：水稻茎、叶和穗部中的一种或多种。
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Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
KR20130095864A (ko) * 2012-02-21 2013-08-29 전남대학교산학협력단 식물병원성 세균 및 진균을 방제하는 기능과 약제 다제내성 세균에 대한 억제활성이 있는 바실러스 메틸로트로피쿠스 ｅｍｌ-ｃａｐ7

Family Cites Families (6)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN105670958B (zh) * 2015-11-10 2018-12-25 黑龙江省科学院微生物研究所 一株低温生防菌株及其应用
CN107306999A (zh) * 2016-04-26 2017-11-03 上海农乐生物制品股份有限公司 一种基于申嗪霉素的杀菌组合物及含有该组合物的杀菌剂
CN107641607B (zh) * 2016-07-22 2020-09-11 上海农乐生物制品股份有限公司 一种增效型抗病菌及其培养方法和应用
CN108077313A (zh) * 2016-11-22 2018-05-29 上海农乐生物制品股份有限公司 一种申嗪霉素·蜡质芽孢杆菌复配悬浮剂及其制备和应用
CN107509744B (zh) * 2017-08-18 2020-11-24 河南省农业科学院植物保护研究所 防治小麦茎基腐病的复配生物农药及其制备方法与应用
CN113416679A (zh) * 2021-07-21 2021-09-21 辽宁省农业科学院 一株甲基营养型芽孢杆菌、包括甲基营养型芽孢杆菌的菌剂及其应用

Patent Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
KR20130095864A (ko) * 2012-02-21 2013-08-29 전남대학교산학협력단 식물병원성 세균 및 진균을 방제하는 기능과 약제 다제내성 세균에 대한 억제활성이 있는 바실러스 메틸로트로피쿠스 ｅｍｌ-ｃａｐ7

Non-Patent Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
王舒基 ; 徐晗 ; 董海 ; 缪建锟 ; 杨皓 ; .8种杀菌剂对水稻稻曲病的防治效果研究.辽宁农业科学.(第06期),全文. *

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