CN114929689A - Bcl-2抑制剂 - Google Patents

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Abstract

本文公开了用于抑制Bcl‑2和治疗与不期望的bcl‑2活性相关的疾病(Bcl‑2相关疾病)的式(I)化合物，使用本文公开的化合物治疗包括癌症在内的失调的凋亡性疾病和治疗自身免疫性疾病的方法，以及包含所述化合物的药物组合物。

Description

Bcl-2抑制剂
发明领域
本文公开了用于抑制Bcl-2和治疗与不期望的bcl-2活性相关的疾病(Bcl-2相关疾病)的式(I)化合物，使用本文公开的化合物治疗失调的凋亡性疾病的方法，所述失调的凋亡性疾病包括神经退行性疾患，例如阿尔茨海默病(Alzheimer's disease)；和增殖性疾病，例如癌症、自身免疫性疾病和血栓形成前疾患，以及包含所述化合物的药物组合物。
发明背景
程序性细胞死亡或凋亡发生在多细胞生物体中，以处理受损或不需要的细胞，这对于正常组织稳态至关重要。(Br.J.Cancer 1972,26,239)。然而，有缺陷的凋亡过程与多种疾病有关。过度的细胞凋亡引起萎缩，而不足的量导致不受控制的细胞增殖，例如癌症(Cell 2011,144,646)。对凋亡性细胞死亡的抗性是癌症的标志，并导致化学抗性(NatMed.2004,10,789-799)。控制细胞凋亡的几个关键途径通常在癌症中发生改变。Fas受体和半胱天冬酶等一些因子促进细胞凋亡，而B细胞淋巴瘤2(Bcl-2)蛋白家族的一些成员抑制细胞凋亡。细胞凋亡的负调节抑制细胞死亡信号传导途径，帮助肿瘤逃避细胞死亡并产生耐药性。
有两种不同的细胞凋亡途径，包括外在途径和内在途径。外在途径响应于死亡诱导配体与细胞表面死亡受体的结合而被激活(Nat Rev Drug Discov.2017 16,273-284)。B细胞淋巴瘤2(BCL-2)基因家族是一组与Bcl-2蛋白同源的蛋白质，编码超过20种调节内在细胞凋亡途径的蛋白质。Bcl-2家族蛋白的特征在于含有四个保守Bcl-2同源(BH)结构域(BH1、BH2、BH3和BH4)中的至少一个(Nat.Rev.Cancer 2008,8,121；Mol.Cell 2010,37,299；Nat.Rev.Mol.Cell Biol.2014,15,49)。Bcl-2家族蛋白由促凋亡分子和抗凋亡分子组成，根据四个BH结构域内的序列同源性可分为以下三个亚家族：(1)一个亚家族在所有四个BH结构域内共享序列同源性，例如Bcl-2、Bcl-XL和Bcl-w是抗凋亡的；(2)一个亚家族在BH1、BH2和BH4内共享序列同源性，例如Bax和Bak是促凋亡的；(3)一个亚家族仅在BH3内共享序列同源性，例如Bik、Bid和HRK是促凋亡的。Bcl-2家族蛋白的独特特征之一是抗凋亡蛋白和促凋亡蛋白之间的异二聚化，这被认为会抑制其配偶体的生物活性。这种异二聚化是通过将促凋亡蛋白的BH3区插入到抗凋亡蛋白的由BH1、BH2和BH3组成的疏水裂隙中来介导的。除了BH1和BH2之外，BH4结构域也是抗凋亡活性所必需的。相比之下，BH3结构域是促凋亡活性必不可少的，并且其本身足以产生促凋亡活性。
与其中肿瘤细胞依赖单个显性基因生存的癌基因成瘾相似，肿瘤细胞也可能依赖Bcl-2生存。Bcl-2过度表达常见于急性髓性白血病(AML)、急性淋巴细胞性白血病(ALL)、复发/难治性慢性淋巴细胞性白血病(CLL)、滤泡性淋巴瘤(FL)、非霍奇金淋巴瘤(NHL)和实体瘤，例如胰腺癌、前列腺癌、乳腺癌以及小细胞和非小细胞肺癌(Cancer 2001,92,1122-1129；Cancer Biol.2003；13:115-23；Curr.Cancer Drug Targets 2008,8,207-222；Cancers 2011,3,1527-1549)。凋亡途径失调也与其他重要疾病的病理学有关，例如神经退行性疾患(上调的细胞凋亡)，例如阿尔茨海默病；和增殖性疾病(下调的细胞凋亡)，例如癌症、自身免疫性疾病和血栓形成前疾患。针对Bcl-2或Bcl-xL，许多小分子BH3模拟物已报道于(Recent Patents on Anti-Cancer Drug Discovery,2008,3,20-30；Bioorg.Med.Chem.Lett.2016,26,2105-2114；Nature Reviews Drug Discovery 2017,16,273-284；WO2002024636；WO2005049593；WO2006127364；WO2006023778；WO2007040650；WO2008030836；WO2009152082；WO2009036051；WO2010065824；WO2010065865；WO2010083441；WO2010083442；WO2010067067；WO2011029842；WO2011068561；WO2011119345；WO2011149492；WO2011150016；WO2012058392；WO2012017251；WO2012162365；WO2012103059；WO2013053045；WO2013185202；WO2013096060；WO2013096059；WO2013096055；WO2013096051；WO2013096049；US2011312969；WO2014158528；WO2014113413；WO2018027097；WO2018041248；WO2018009444；WO2018127130；WO2018192462；WO2019001383；WO2019040550；WO2019040573；WO2019081559；CN106749233；CN106565706；CN110143974)。一些Bcl-2小分子抑制剂已在药物开发的不同阶段进行了研究：Bcl-2/Bcl-xL抑制剂ABT-263(纳维托克(navitoclax),WO2009155386)在淋巴恶性肿瘤例如慢性淋巴细胞性白血病中显示出有前景的临床活性。然而，其在这些环境中的功效受到由Bcl-xL抑制引起的血小板死亡和伴随的血小板减少症的限制(Lancet Oncol.2010,11,1149；J.Clin.Oncol.2011,29,909；J.Clin.Oncol.2012,30,488)。进行了新一代BCL-2选择性抑制剂维奈托克(venetoclax，ABT-199/GDC-0199)，其在这些癌症中表现出强大的活性，但在血小板方面也没有作用(Journal of Hematology&Oncology 2015,8,129；Clinical Advances in Hematology&Oncology 2017,15,210)。S55746(也称为BCL201)、APG-101、APG-1252正在进行临床试验阶段研究。目前，维奈托克(原ABT-199)是唯一被FDA批准用于治疗17p缺失的复发或难治性慢性淋巴细胞性白血病(CLL)患者的Bcl-2选择性抑制剂。然而，最近，在患者接受Bcl-2抑制剂维奈托克(ABT-199)治疗19至42个月后，在BCL2中发现了一种新的Gly101Val突变(Cancer Discov.2019,9,342-353)。在基于细胞的测定中，该突变使Bcl-2对维奈托克(ABT-199)的结合亲和力显著降低约180倍。
因此，需要选择性抑制Bcl-2蛋白的新型小分子，用于治疗失调的凋亡性疾病，例如癌症、自身免疫性疾病和血栓形成前疾患。出乎意料的是，本申请的发明人发现本文公开的一些化合物显示出高得多的效力。此外，本申请的发明人发现本文公开的化合物对Bcl-2野生型和Bcl-2 G101V突变型均表现出抑制活性，这表明一类新的潜在Bcl-2抑制剂没有耐药性问题。
发明概述
本文公开了式(I)化合物
Figure BDA0003594909090000041
或其药学上可接受的盐，或其立体异构体，
其中
L1是直接键和-O-；
环A为环烷基、环烯基、环炔基、芳基、杂环基或杂芳基，其各自任选被1至4个取代基R2取代；
R2在每次出现时独立地选自由氢、氘、卤素或任选被卤素取代的-C1-8烷基组成的组；
环B为含有一个选自氮(N)、硫(S)和氧(O)的杂原子的杂环基或杂芳基，其各自任选被1至4个取代基R1取代；
R1在每次出现时独立地选自由氘、环烷基、杂环基、芳基或杂芳基组成的组；其中所述环烷基、杂环基、芳基或杂芳基各自独立地任选被1至4个取代基R1d取代，
R1d在每次出现时独立地为卤素、-C1-8烷基、-C2-8烯基、-C2-8炔基、环烷基、杂环基、芳基、杂芳基、氧代、-CN、-NO2或-ORBa；其中所述-C1-8烷基、-C2-8烯基、-C2-8炔基、环烷基、杂环基、芳基或杂芳基各自独立地任选被1至4个取代基RBd取代；
RBa和RBb各自独立地为氢、-C1-8烷基、-C2-8烯基、-C2-8炔基、环烷基、杂环基、芳基或杂芳基，所述-C1-8烷基、-C2-8烯基、-C2-8炔基、环烷基、杂环基、芳基或杂芳基中的每一者任选被卤素、羟基、-NH2或-N(C1-6烷基)2、-C1-8烷氧基、环烷基、杂环基、芳基或杂芳基取代；
R3为杂芳基、
Figure BDA0003594909090000051
Figure BDA0003594909090000052
其各自任选被1至4个取代基R3a取代，其中Q1为杂环烷基或杂环烯基，并且X9、X10、X21、X22、X23和X24各自独立地为O、NH或CH2，并且X11、X12、X13、X25和X26各自独立地为N或CH；
R3a在每次出现时独立地选自卤素、氰基、-NO2、-OR3b、-SR3b、-NR3bR3c、-氧代-、-COR3b、-SO2R3b、-C(＝O)OR3b、-C(＝O)NR3bR3c、-C(＝NR3b)NR3cR3d、-N(R3b)C(＝O)R3c、-N(R3b)C(＝O)OR3c、-NR3bSO2R3c、-C1-8烷基、-C2-8烯基、-C2-8炔基、-环烷基、杂环基、芳基或杂芳基；
R3b和R3c独立地为氢、-C1-8烷基、-C2-8烯基、-C2-8炔基、环烷基、杂环基、芳基或杂芳基，所述-C1-8烷基、-C2-8烯基、-C2-8炔基、环烷基、杂环基、芳基或杂芳基中的每一者任选被卤素、羟基或-C1-8烷氧基取代；
环D为芳基或
Figure BDA0003594909090000061
其各自任选被1至4个取代基R4取代；
Q2为杂环烷基；
R4在每次出现时独立地选自由以下组成的组：-氢、烷基、烯基、炔基、环烷基、环烷基-烷基、杂环基、杂环基-烷基、芳基、芳基-烷基、杂芳基、杂芳基-烷基、卤素、-CN、-NO2、-(CR4cR4d)zNR4aR4b、-(CR4cR4d)zOR4b、-(CR4cR4d)zC(O)R4a、-(CR4cR4d)zC(＝NR4e)R4a、-(CR4cR4d)zC(＝N-OR4b)R4a、-(CR4cR4d)zC(O)OR4b、-(CR4cR4d)zOC(O)R4b、-(CR4cR4d)zC(O)NR4aR4b、-(CR4cR4d)zNR4aC(O)R4b、-(CR4cR4d)zC(＝NR4e)NR4aR4b、-(CR4cR4d)zNR4aC(＝NR4e)R4b、-(CR4cR4d)zOC(O)NR4aR4b、-(CR4cR4d)zNR4aC(O)OR4b、-(CR4cR4d)zNR4aC(O)NR4aR4b、-(CR4cR4d)zNR4aC(S)NR4aR4b、-(CR4cR4d)zNR4aC(＝NR4e)NR4aR4b、-(CR4cR4d)zS(O)rR4b、-(CR4cR4d)zS(O)(＝NR4e)R4b、-(CR4cR4d)zN＝S(O)R4aR4b、-(CR4cR4d)zS(O)2OR4b、-(CR4cR4d)zOS(O)2R4b、-(CR4cR4d)zNR4aS(O)rR4b、-(CR4cR4d)zNR4aS(O)(＝NR4e)R4b、-(CR4cR4d)zS(O)rNR4aR4b、-(CR4cR4d)zS(O)(＝NR4e)NR4aR4b、-(CR4cR4d)zNR4aS(O)2NR4aR4b、-(CR4cR4d)zNR4aS(O)(＝NR4e)NR4aR4b、-(CR4cR4d)zP(O)R4aR4b和-(CR4cR4d)zP(O)(OR4a)(OR4b)，
其中每个R4a和每个R4b独立地选自氢、烷基、烯基、炔基、环烷基、环烷基-烷基、杂环基、杂环基-烷基、芳基、芳基-烷基、杂芳基和杂芳基-烷基；每个R4c和每个R4d独立地选自氢、卤素、烷基、烯基、炔基、环烷基、环烷基-烷基、杂环基、杂环基-烷基、芳基、芳基-烷基、杂芳基和杂芳基-烷基；z在每次出现时独立地为1至8的数；并且r在每次出现时独立地为1或2的数；
m为1-4的整数，优选m为1；
R5为-L2-CyC，
其中L2为直接键、-(CRaRb)t-、-O-(CRaRb)t-、-S-、-S(O)-、-SO2-、-C(O)-、C(O)O-、-OC(O)-、-NRa-、-N(Ra)(CRaRb)t-、-(CRaRb)tC(O)NRa-、-C(O)NRa-、-(CRaRb)t-(NRa)t-C(O)-、-NRaC(O)-、-NRaC(O)O-、-NRaC(O)NRb-、-SO2NRa-、-NRaSO2-、-NRaS(O)2NRb-、-NRaS(O)NRb-、-C(O)NRaSO2-、-C(O)NRaSO-或-C(＝NRa)NRb-，其中t在每次出现时独立地为0至7的数，并且-(CRaRb)t-中的一个或两个CRaRb部分未被替代或被一个或多个选自O、S、SO、SO2、C(O)和NRa的部分替代；Ra和Rb独立地为氢或-C1-3烷基；
Cyc为-SO2R5a-、环烷基、杂环基、芳基或杂芳基，所述环烷基、杂环基、芳基或杂芳基中的每一者任选被一个或两个取代基R5a取代；
R5a在每次出现时独立地选自氢、卤素、氰基、氧代、-NO2、-OR5b、-SR5b、-NR5bR5c、-COR5b、-C1-8烷基、-C2-8烯基和-C2-8炔基、-环烷基或杂环基，所述-C1-8烷基和杂环基中的每一者任选被一个或两个选自氢、卤素、氰基、-OR5f、-C1-8烷基、-环烷基或杂环基的取代基R5e取代；
其中R5b和R5c各自独立地为氢、-C1-8烷基、-C2-8烯基、-C2-8炔基、环烷基、杂环基、芳基或杂芳基，所述-C1-8烷基任选被一个或两个为氢、-NR5fR5g或-环烷基的取代基R5e取代；并且
R5f和R5g各自独立地为氢或-C1-8烷基。
在一个实施方案中，L1为直接键或-O-。
在一个实施方案中，R3为
Figure BDA0003594909090000071
Figure BDA0003594909090000081
其各自任选被一个或两个如式(I)所定义的取代基R3a取代，并且Q1为6至8元杂环烷基或6至8元杂环烯基，X9、X10、X11、X12和X13中的每一者如上所定义。
在一个实施方案中，R3为
Figure BDA0003594909090000082
其各自任选被一个或两个如式(I)所定义的取代基R3a取代，并且X21、X22、X23、X24、X25和X26中的每一者如上所定义。
在一个实施方案中，R3为任选被一个或两个如式(I)所定义的取代基R3a取代的杂芳基。
在一个实施方案中，R3为包含1或2或3个氮原子的8至12元双环杂芳基。在一个实施方案中，R3为吲哚基、吡咯并吡啶基或吡唑并吡啶基，其各自任选被一个或两个选自卤素、-C1-8烷基或-NR3bR3c的取代基R3a取代，其中R3b和R3c独立地为氢或-C1-8烷基。在优选实施方案中，R3为吲哚-4-基、吡咯并[2,3-b]吡啶-5-基和吡唑并[4,3-b]吡啶-1-基。
在一个实施方案中，R3为11至14元三环杂芳基，其包含1或2或3或4或5个氮原子，任选被一个或两个选自卤素、-C1-8烷基或-NR3bR3c的取代基R3a取代，其中R3b和R3c独立地为氢或-C1-8烷基。
在优选实施方案中，R3a选自卤素、-NR3bR3c、-氧代-、-C1-8烷基，其中R3b和R3c独立地为氢或-C1-8烷基。
在优选实施方案中，R3选自
Figure BDA0003594909090000083
Figure BDA0003594909090000091
在一个实施方案中，D为任选被一个或两个如式(I)所定义的取代基R4取代的
Figure BDA0003594909090000092
并且Q2为含有至少一个独立地选自N、O和S的杂原子的5元至8元杂环烷基。
在一个实施方案中，R3为任选被一个或两个如式(I)所定义的取代基R3a取代的杂芳基。优选地，R3为任选被一个或两个选自卤素、-C1-8烷基或-NR3bR3c的取代基R3a取代的杂芳基，其中R3b和R3c独立地为氢或-C1-8烷基。
在一个实施方案中，D为任选被一个或两个如式(I)所定义的取代基R4取代的苯基。
在一个实施方案中，环D选自
Figure BDA0003594909090000093
Figure BDA0003594909090000094
其任选被一个或两个如式(I)所定义的取代基R4取代。优选地，环D选自
Figure BDA0003594909090000095
Figure BDA0003594909090000096
其在苯环上被-NO2取代，并且/或者在Q2环上进一步任选被一个取代基R4取代，并且所述R4如式(I)所定义。
在一个实施方案中，环A为包含一个或两个选自氮(N)、硫(S)和氧(O)的杂原子作为环成员的5元至12元螺杂环基；优选地，环A为包含一个或两个氮或氧作为环成员的4元/4元、3元/5元、4元/5元、4元/6元、5元/5元或5元/6元单螺杂环基。更具体地，环A为
Figure BDA0003594909090000097
(7-氮杂螺[3.5]壬-2,7-二基)、
Figure BDA0003594909090000101
(2-氮杂螺[3.5]壬-2,7-二基)、
Figure BDA0003594909090000102
(3-氮杂螺[5.5]十一烷-3,9-二基)、
Figure BDA0003594909090000103
(2-氮杂螺[3.3]庚-2,6-二基)、
Figure BDA0003594909090000104
(8-氮杂螺[4.5]癸-2,8-二基)、
Figure BDA0003594909090000105
(2-氮杂螺[4.5]癸-2,8-二基)。
具体地，环A为杂环，其为哌啶、吡咯烷和氮杂环丁烷；7-氮杂螺[3.5]壬烷、2-氮杂螺[3.5]壬烷、8-氮杂双环[3.2.1]辛烷；四氢噻吩并吡啶(例如4,5,6,7-四氢噻吩并[2,3-c]吡啶)、四氢吡咯并吡嗪(例如1,2,3,4-四氢吡咯并[1,2-a]吡嗪)、四氢吡咯并吡嗪(例如1,2,3,4-四氢吡咯并[1,2-a]吡嗪)、六氢中氮茚(例如1,2,3,5,8,8a-六氢中氮茚)、二氢吡咯并噻唑(例如5,6-二氢-4H-吡咯并[3,4-d]噻唑)或异吲哚啉。
在更优选实施方案中，环A选自由以下组成的组：
Figure BDA0003594909090000106
(7-氮杂螺[3.5]壬-2,7-二基)、
Figure BDA0003594909090000107
(2-氮杂螺[3.5]壬-2,7-二基)、
Figure BDA0003594909090000108
(3-氮杂螺[5.5]十一烷-3,9-二基)、
Figure BDA0003594909090000109
(2-氮杂螺[3.3]庚-2,6-二基，其中*1指连接到环B的位置，并且**2指连接到苯环的位置。
在一个实施方案中，R2为氢、氘、卤素(例如F、Cl或Br)或任选被卤素(例如F、Cl或Br)取代的C1-6烷基(例如甲基)，优选地，R2为氢或氘。
在一个实施方案中，环B为氮丙啶-1-基、氮杂环丁烷-1-基、吡咯烷-1-基、吡咯烷-2-基、氮杂环庚烷-1-基或氮杂环辛烷-1-基，优选为吡咯烷-1-基，其在位置2被苯基取代，并且所述位置2(即邻位)处的苯基任选被如式(I)所定义的R1d取代。
在该实施方案的一方面，R1d当在环B(包括氮丙啶-1-基、氮杂环丁烷-1-基、吡咯烷-1-基、吡咯烷-2-基、氮杂环庚烷-1-基或氮杂环辛烷-1-基，优选吡咯烷-1-基)的位置2处的苯基上取代时独立地为卤素、-C1-8烷基、-C2-8烯基、-C2-8炔基、环烷基、杂环基、芳基、杂芳基、-CN、-ORBa、-SO2RBa、-CONRBaRBb、-NO2、-NRBaRBb、-NRBaCORBb或-NRBaSO2RBb；其中所述-C1-8烷基、-C2-8烯基、-C2-8炔基、环烷基、杂环基、芳基或杂芳基各自独立地任选被1至4个如式(I)所定义的取代基RBd，优选1或2个如式(I)所定义的取代基RBd取代。在另一方面，一个R1d位于环B的位置2处的苯环的位置2。
在一方面，R1d为甲基、乙基、异丙基、丙基或甲氧基甲基，或在苯环位置处的两个甲基；或丙烯基；或环丙基、环丁基、环戊基或环己基；或乙氧基或异丙氧基；或氨基或二甲氨基。
在优选实施方案中，作为环B的2-(2-取代的苯基)吡咯烷-1-基部分选自由以下组成的组：
Figure BDA0003594909090000111
Figure BDA0003594909090000112
Figure BDA0003594909090000121
Figure BDA0003594909090000131
在一个实施方案中，L2是直接键、-(CRaRb)1-4-、-O-(CRaRb)1-3-、-NH-(CRaRb)0-2-(CRaRb)0-2-、-(CRaRb)0-2-(CRaRb)0-2-NH-、-(CRaRb)0-2-(NH)0-2-C(O)-，其中Ra和Rb为氢。
在一个实施方案中，CyC是环烷基或杂环基，其各自任选被一个或两个取代基R5a取代；其中R5a独立地选自氢、卤素、氰基、氧代、-OR5b、-NR5bR5c、-COR5b、-SO2R5b、-C1-8烷基、-C2-8炔基、-环烷基或杂环基，所述-C1-8烷基和杂环基中的每一者任选被一个或两个选自氢、卤素、氰基、-OR5f、-C1-8烷基、-环烷基或杂环基的取代基R5e取代；其中R5b和R5c各自独立地为氢、-C1-8烷基或杂环基，所述-C1-8烷基任选被一个或两个为氢、-NR5fR5g或-环烷基的取代基R5e取代；R5f和R5g各自独立地为氢或-C1-8烷基。
在一个实施方案中，CyC为环戊基或环己基，其各自任选被一个或两个取代基R5a取代。
在一个实施方案中，CyC为6元芳基或6元杂芳基，其各自任选被一个或两个取代基R5a取代。
在优选实施方案中，CyC是含有一个或两个选自氮(N)或氧(O)或硫(S)杂原子的杂原子作为环成员的单环4至6元杂环基，其各自任选被一个或两个取代基R5a取代。
在优选实施方案中，Cyc选自氧杂环丁烷基、四氢呋喃基、四氢吡喃基、氮杂环丁烷基、吡咯烷基、哌啶基、二噁烷基、N-吗啉基、吗啉基或哌嗪基，其各自任选被一个或两个取代基R5a取代。在一个实施方案中，CyC选自氧杂环丁烷-2-基、氧杂环丁烷-3-基、四氢呋喃-4-基、四氢呋喃-2-基、四氢呋喃-3-基、四氢吡喃-2-基、四氢吡喃-3-基、四氢吡喃-4-基、氮杂环丁烷-3-基、氮杂环丁烷-2-基、吡咯烷-2-基、吡咯烷-3-基、哌啶-4-基、哌啶-2-基、哌啶-3-基、1,3-二噁烷-2-基、1,3-二噁烷-4-基、1,4-二噁烷-2-基、吗啉-1-基、吗啉-2-基或吗啉-3-基，其各自任选被一个或两个取代基R5a取代。
在优选实施方案中，R5a独立地选自氢、卤素、氰基、氧代、-OR5b、-NR5bR5c、-COR5b、-SO2R5b、-C1-8烷基、-C2-8炔基、单环C3-8环烷基或含有一个或两个选自氮或氧或硫杂原子的杂原子作为环成员的单环4至9元杂环基，所述-C1-8烷基和单环4至9元杂环基中的每一者任选被一个或两个取代基R5e取代。
在优选实施方案中，m为1并且-L2-CyC选自由以下组成的组：
Figure BDA0003594909090000141
Figure BDA0003594909090000151
在优选实施方案中，m为1，并且-L2-CyC选自由实施例A1、A2、A3、A4、A5、A6、A7、A8、B1、B2、B3、B4、B5、B6、B7、B8、B9、B10、B11、B12、B13、B14和B15的化合物组成的组。
本文公开了一种治疗失调的凋亡性疾病的方法，所述方法包括向有需要的受试者施用治疗有效量的本文公开的化合物或其药学上可接受的盐或其立体异构体。在一个实施方案中，失调的凋亡性疾病为癌症，例如发表于WO2005049593A和WO2005049594A中的膀胱癌、脑癌、乳腺癌、骨髓癌、宫颈癌、慢性淋巴细胞性白血病、结肠直肠癌、食道癌、肝细胞癌、成淋巴细胞性白血病、滤泡性淋巴瘤、T细胞或B细胞来源的淋巴恶性肿瘤、黑色素瘤、骨髓性白血病、骨髓瘤、口腔癌、卵巢癌、非小细胞肺癌、前列腺癌、小细胞肺癌、脾脏癌。
在一个实施方案中，失调的凋亡性疾病为自身免疫性疾病，例如全身性红斑狼疮(SLE)。
本文公开了一种药物组合物，所述药物组合物包含本文公开的化合物或其药学上可接受的盐或其立体异构体，以及药学上可接受的载体。
发明详述
定义
以下术语在整个说明书中具有指定的含义：
如本文所用，包括随附权利要求书，除非上下文另外清楚地指示，否则词语的单数形式如“一种(a/an)”和“所述”包括它们相应的复数个提及物。
除非上下文另外清楚地指示，否则术语“或”用于意指术语“和/或”，并且与术语“和/或”可互换使用。
术语“烷基”是指选自包含1至18个，例如1至12个，进一步例如1至10个，更进一步例如1至8个、或1至6个、或1至4个碳原子的直链和支链饱和烃基的烃基。包含1至6个碳原子的烷基(即C1-6烷基)的实例包括但不限于甲基、乙基、1-丙基或正丙基(“n-Pr”)、2-丙基或异丙基(“i-Pr”)、1-丁基或正丁基(“n-Bu”)、2-甲基-1-丙基或异丁基(“i-Bu”)、1-甲基丙基或仲丁基(“s-Bu”)、1,1-二甲基乙基或叔丁基(“t-Bu”)、1-戊基、2-戊基、3-戊基、2-甲基-2-丁基、3-甲基-2-丁基、3-甲基-1-丁基、2-甲基-1-丁基、1-己基、2-己基、3-己基、2-甲基-2-戊基、3-甲基-2-戊基、4-甲基-2-戊基、3-甲基-3-戊基、2-甲基-3-戊基、2,3-二甲基-2-丁基和3,3-二甲基-2-丁基。烷基可以任选地富含氘，例如-CD3、-CD2CD3等。
术语“卤素”是指氟(F)、氯(Cl)、溴(Br)和碘(I)。
术语“烯基”是指选自包含至少一个C＝C双键和2至18个，例如2至8个，进一步例如2至6个碳原子的直链和支链烃基的烃基。烯基例如C2-6烯基的实例包括但不限于乙烯基(ethenyl/vinyl)、丙-1-烯基、丙-2-烯基、2-甲基丙-1-烯基、丁-1-烯基、丁-2-烯基、丁-3-烯基、丁-1,3-二烯基、2-甲基丁-1,3-二烯基、己-1-烯基、己-2-烯基、己-3-烯基、己-4-烯基和己-1,3-二烯基。
术语“炔基”是指选自包含至少一个C≡C三键和2至18个，例如2至8个，进一步例如2至6个碳原子的直链和支链烃基的烃基。炔基例如C2-6炔基的实例包括但不限于乙炔基、1-丙炔基、2-丙炔基(炔丙基)、1-丁炔基、2-丁炔基和3-丁炔基。
术语“环烷基”是指选自包含单环和多环(例如双环和三环)基团的饱和环烃基的烃基，包括稠合、桥连或螺环烷基。
举例来说，环烷基可以包含3至12个，例如3至10个，进一步例如3至8个，进一步例如3至6个、3至5个或3至4个碳原子。进一步地，举例来说，环烷基可以选自包含3至12个，例如3至10个，进一步例如3至8个、3至6个碳原子的单环基团。单环环烷基的实例包括环丙基、环丁基、环戊基、1-环戊-1-烯基、环己基、环庚基、环辛基、环壬基、环癸基、环十一烷基和环十二烷基。具体地说，饱和单环环烷基例如C3-8环烷基的实例包括但不限于环丙基、环丁基、环戊基、环己基、环庚基和环辛基。在优选实施方案中，环烷基是包含3至6个碳原子的单环(缩写为C3-6环烷基)，包括但不限于环丙基、环丁基、环戊基和环己基。双环环烷基的实例包括排列成选自[4,4]、[4,5]、[5,5]、[5,6]和[6,6]环系统的稠合双环，或排列成选自双环[2.2.1]庚烷、双环[2.2.2]辛烷和双环[3.2.2]壬烷的桥连双环的具有7至12个环原子的双环环烷基。双环环烷基的其它实例包括排列成选自[5,6]和[6,6]环系统的双环的双环环烷基，例如
Figure BDA0003594909090000181
其中波浪线表示连接点。该环可以是饱和的或具有至少一个双键(即部分不饱和的)，但不是完全共轭的，并且不是芳族的，芳族如本文所定义。
术语“螺环烷基”是指含有碳原子并且由共用一个原子的至少两个环形成的环状结构。术语“7至10元螺环烷基”是指含有7至10个碳原子并且由共用一个原子的至少两个环形成的环状结构。
术语“稠合环烷基”是指含有碳原子并且由共用两个相邻原子的两个或更多个环形成的稠合环。术语“4至10元稠合环烷基”是指含有4至10个环碳原子并且由共用两个相邻原子的两个或更多个环形成的稠合环。
实例包括但不限于二环[1.1.0]丁基、二环[2.1.0]戊基、二环[3.1.0]己基、二环[4.1.0]庚基、二环[3.3.0]辛基、二环[4.2.0]辛基、萘烷以及苯并3至8元环烷基、苯并C4-6环烯基、2,3-二氢-1H-茚基、1H-茚基、1,2,3,4-四氢萘基(1,2,3,4-tetralyl)、1,4-二氢萘基等。优选实施方案是8至9元稠合环基，其是指上述实施例中含有8至9个环原子的环状结构。
术语“桥连环烷基”是指含有碳原子并且由共用两个彼此不相邻的原子的两个环形成的环状结构。术语“7至10元桥连环烷基”是指含有7至12个碳原子并且由共用两个彼此不相邻的原子的两个环形成的环状结构。
术语“环烯基”是指具有单环或多环并具有至少一个双键，优选1至2个双键的3至10个碳原子的非芳族环状烷基。在一个实施方案中，环烯基是环戊烯基或环己烯基，优选环己烯基。
术语“环炔基”是指具有单环或多环并具有至少一个三键的5至10个碳原子的非芳族环烷基。
单独使用或与其他术语组合使用的术语“芳基”是指选自以下的基团：
a)5元和6元碳环芳环，例如苯基；
b)双环系统，例如7至12元双环系统，其中至少一个环是碳环和芳族的，例如萘基和茚满基；以及
c)三环系统，例如10至15元三环系统，其中至少一个环是碳环和芳族的，例如芴基。
术语“芳烃环”和“芳基”在本文的整个公开中可互换使用。在一些实施方案中，单环或双环芳烃环具有5至10个成环碳原子(即C5-10芳基)。单环或双环芳烃环的实例包括但不限于苯基、萘-1-基、萘-2-基、蒽基、菲基等。在一些实施方案中，芳烃环是萘环(萘-1-基或萘-2-基)或苯环。在一些实施方案中，芳烃环是苯环。
术语“杂芳基”是指选自以下的基团：
a)5元、6元或7元芳族单环，其包含至少一个选自氮(N)、硫(S)和氧(O)的杂原子，例如1至4个，或在一些实施方案中1至3个，在一些实施方案中1至2个杂原子，其余环原子为碳；
b)8至12元双环，其包含至少一个选自N、O和S的杂原子，例如1至4个，或在一些实施方案中1至3个，或在其它实施方案中1或2个杂原子，其余环原子为碳，并且其中至少一个环是芳族的并且至少一个杂原子存在于芳环中；以及
c)11至14元三环，其包含至少一个选自N、O和S的杂原子，例如1至4个，或在一些实施方案中1至3个，或在其它实施方案中1或2个杂原子，其余环原子为碳，并且其中至少一个环是芳族的并且至少一个杂原子存在于芳环中。
当杂芳基中S和O原子的总数超过1时，这些杂原子彼此不相邻。在一些实施方案中，杂芳基中S和O原子的总数不超过2。在一些实施方案中，芳族杂环中S和O原子的总数不超过1。当杂芳基含有超过一个杂原子环成员时，杂原子可以相同或不同。杂芳基环中的氮原子可以被氧化形成N-氧化物。如本文所用，术语“C连接的杂芳基”是指杂芳基通过来自杂芳基环的C原子的键与核心分子连接
术语“芳族杂环”和“杂芳基”在本文的整个公开中可互换使用。在一些实施方案中，单环或双环芳族杂环具有5个、6个、7个、8个、9个或10个成环成员，其具有1个、2个、3个或4个独立地选自氮(N)、硫(S)和氧(O)的杂原子环成员并且其余环成员是碳。在一些实施方案中，单环或双环芳族杂环是包含1个或2个独立地选自氮(N)、硫(S)和氧(O)的杂原子环成员的单环或双环。在一些实施方案中，单环或双环芳族杂环是5至6元杂芳环，其是单环并且具有1个或2个独立地选自氮(N)、硫(S)和氧(O)的杂原子环成员。在一些实施方案中，单环或双环芳族杂环是8至10元杂芳环，其是双环并且具有1个或2个独立地选自氮、硫和氧的杂原子环成员。
杂芳基或单环或双环芳族杂环的实例包括但不限于(从被指定优先级1的连接位置起编号)吡啶基(例如2-吡啶基、3-吡啶基或4-吡啶基)、噌啉基、吡嗪基、2,4-嘧啶基、3,5-嘧啶基、2,4-咪唑基、咪唑并吡啶基、异噁唑基、噁唑基、噻唑基、异噻唑基、噻二唑基(例如1,2,3-噻二唑基、1,2,4-噻二唑基或1,3,4-噻二唑基)、四唑基、噻吩基(例如噻吩-2-基、噻吩-3-基)、三嗪基、苯并噻吩基、呋喃基(furyl)或呋喃基(furanyl)、苯并呋喃基、苯并咪唑基、吲哚基、异吲哚基、吲哚啉基、噁二唑基(例如1,2,3-噁二唑基、1,2,4-噁二唑基或1,3,4-噁二唑基)、酞嗪基、吡嗪基、哒嗪基、吡咯基、三唑基(例如1,2,3-三唑基、1,2,4-三唑基或1,3,4-三唑基)、喹啉基、异喹啉基、吡唑基、吡咯并吡啶基(例如1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-5-基)、吡唑并吡啶基(例如1H-吡唑并[3,4-b]吡啶-5-基)、苯并呋喃基、苯并噁唑基(例如苯并[d]噁唑-6-基)、蝶啶基、嘌呤基、1-氧杂-2,3-二唑基、1-氧杂-2,4-二唑基、1-氧杂-2,5-二唑基、1-氧杂-3,4-二唑基、1-硫杂-2,3-二唑基、1-硫杂-2,4-二唑基、1-硫杂-2,5-二唑基、1-硫杂-3,4-二唑基、呋咱基(例如呋咱-2-基、呋咱-3-基)、苯并呋咱基、苯并噻吩基、苯并噻唑基、苯并噁唑基、喹唑啉基、喹噁啉基、萘啶基、呋喃并吡啶基、苯并噻唑基(例如苯并[d]噻唑-6-基)、吲唑基(例如1H-吲唑-5-基)和5,6,7,8-四氢异喹啉。
“杂环基”、“杂环”或“杂环的”可互换并且是指包含一个或多个选自由NH、O、S、SO或SO2杂原子组成的组的杂原子作为环成员，其余环成员为碳的非芳族杂环基，包括单环、稠合、桥连和螺环，即含有单环杂环基、桥连杂环基、螺杂环基和稠合杂环基。
术语“单环杂环基”是指其中至少一个环成员是选自由NH、O、S、SO或SO2组成的组的杂原子的单环基。杂环可以是饱和的或部分饱和的。
示例性单环4至9元杂环基包括但不限于(从被指定优先级1的连接位置起编号)吡咯烷-1-基、吡咯烷-2-基、吡咯烷-3-基、咪唑烷-2-基、咪唑烷-4-基、吡唑烷-2-基、吡唑烷-3-基、哌啶-1-基、哌啶-2-基、哌啶-3-基、哌啶-4-基、2,5-哌嗪基、吡喃基、吗啉基、N-吗啉基、吗啉-2-基、吗啉-3-基、氧杂环丙烷基、氮丙啶-1-基、氮丙啶-2-基、氮杂环辛烷-1-基、氮杂环辛烷-2-基、氮杂环辛烷-3-基、氮杂环辛烷-4-基、氮杂环辛烷-5-基、硫杂环丙烷基、氮杂环丁烷-1-基、氮杂环丁烷-2-基、氮杂环丁烷-3-基、氧杂环丁烷基、硫杂环丁烷基、1,2-二硫杂环丁烷基、1,3-二硫杂环丁烷基、二氢吡啶基、四氢吡啶基、硫吗啉基、氧硫杂环已烷基、哌嗪基、高哌嗪基、高哌啶基、氮杂环庚烷-1-基、氮杂环庚烷-2-基、氮杂环庚烷-3-基、氮杂环庚烷-4-基、氧杂环庚烷基、硫杂环庚烷基、1,4-氧硫杂环己烷基、1,4-二氧杂环庚烷基、1,4-氧硫杂环庚烷基、1,4-氧氮杂环庚烷基、1,4-二硫杂环庚烷基、1,4-硫氮杂环庚烷基和1,4-二氮杂环庚烷基、1,4-二噻烷基、1,4-氮杂噻烷基、氧氮杂环庚烯基、二氮杂环庚烯基、硫氮杂环庚烯基、二氢噻吩基、二氢吡喃基、二氢呋喃基、四氢呋喃基、四氢噻吩基、四氢吡喃基、四氢硫吡喃基、1-吡咯啉基、2-吡咯啉基、3-吡咯啉基、吲哚啉基、2H-吡喃基、4H-吡喃基、1,4-二噁烷基、1,3-二氧杂环戊烷基、吡唑啉基、吡唑烷基、二噻烷基、二硫杂环戊烷基、吡唑烷基、咪唑啉基、嘧啶酮基或1,1-二氧代-硫吗啉基。
术语“螺杂环基”或“杂螺环基”是指环通过一个共同的碳原子(称为螺原子)连接的5至20元多环杂环基，其包含一个或多个选自由NH、O、S、SO或SO2杂原子组成的组的杂原子作为环成员，其余环成员为碳。螺杂环基的一个或多个环可以含有一个或多个双键，但没有一个环具有完全共轭的π电子系统。优选螺杂环基是6至14元，更优选7至10元。根据共同的螺原子的数目，螺杂环基分为单螺杂环基、二螺杂环基或多螺杂环基，并且优选地指单螺杂环基或二螺杂环基，并且更优选地指4元/4元、3元/5元、4元/5元、4元/6元、5元/5元或5元/6元单螺杂环基。螺杂环基的代表性实例包括但不限于以下基团：2,3-二氢螺[茚-1,2'-吡咯烷](例如2,3-二氢螺[茚-1,2'-吡咯烷]-1'-基)、1,3-二氢螺[茚-2,2'-吡咯烷](例如1,3-二氢螺[茚-2,2'-吡咯烷]-1'-基)、氮杂螺[2.4]庚烷(例如5-氮杂螺[2.4]庚烷-5-基)、氮杂螺[3.4]辛烷(例如6-氮杂螺[3.4]辛烷-6-基)、2-氧杂-6-氮杂螺[3.4]辛烷(例如2-氧杂-6-氮杂螺[3.4]辛烷-6-基)、氮杂螺[3.4]辛烷(例如6-氮杂螺[3.4]辛-6-基)、氮杂螺[3.4]辛烷(例如6-氮杂螺[3.4]辛-6-基)、7-氮杂螺[3.5]壬烷(例如7-氮杂螺[3.5]壬-7-基)、2-氮杂螺[3.5]壬烷(例如2-氮杂螺[3.5]壬-2-基)、1,7-二氧杂螺[4.5]癸烷、2-氧杂-7-氮杂-螺[4.4]壬烷(例如2-氧杂-7-氮杂-螺[4.4]壬-7-基)、7-氧杂-螺[3.5]壬基和5-氧杂-螺[2.4]庚基。
术语“稠合杂环基”是指5至20元多环杂环基，其中所述系统中的每个环与另一个环共用一对相邻的原子(碳和碳原子或碳和氮原子)，该多环杂环基包含一个或多个选自由NH、O、S、SO或SO2杂原子组成的组的杂原子作为环成员，其余环成员为碳。稠合杂环基的一个或多个环可以含有一个或多个双键，但没有一个环具有完全共轭的π电子系统。优选稠合杂环基是6至14元，更优选7至10元。根据成员环的数目，稠合杂环基分为双环、三环、四环或多环稠合杂环基，优选是指双环或三环稠合杂环基，更优选5元/5元或5元/6元双环稠合杂环基。稠合杂环的代表性实例包括但不限于以下基团：八氢环戊并[c]吡咯(例如八氢环戊并[c]吡咯-2-基)、八氢吡咯并[3,4-c]吡咯基、八氢异吲哚基、异吲哚啉基(例如异吲哚啉-2-基)、八氢-苯并[b][1,4]二氧杂环己烯、二氢苯并呋喃基、苯并[d][1,3]二氧杂环戊烯基。
术语“桥连杂环基”是指5至14元多环杂环烷基，其中所述系统中的每两个环共用两个不连接的原子，该多环杂环烷基包含一个或多个选自由NH、O、S、SO或SO2杂原子组成的组的杂原子作为环成员，其余环成员为碳。桥连杂环基的一个或多个环可以含有一个或多个双键，但没有一个环具有完全共轭的π电子系统。优选桥连杂环基是6至14元，更优选7至10元。根据成员环的数目，桥连杂环基分为双环、三环、四环或多环桥连杂环基，并且优选地是指双环、三环或四环桥连杂环基，并且更优选地是指双环或三环桥连杂环基。桥连杂环基的代表性实例包括但不限于以下基团：2-氮杂双环[2.2.1]庚基、氮杂双环[3.1.0]己基、2-氮杂双环[2.2.2]辛基和2-氮杂双环[3.3.2]癸基。
杂环基环可以与芳基、杂芳基或环烷基环稠合，其中环结构一起连接至母体杂环基团。
如所使用的“C连接的杂环基”是指通过来自杂环基环的碳原子的直接键与分子的其它部分连接的杂环基。
如所使用的“N连接的杂环基”是指通过来自杂环基环的氮原子的直接键与分子的其它部分连接的杂环基。
本文公开的化合物可含有不对称中心，因此可作为对映异构体存在。“对映异构体”是指化合物的彼此为不可重叠的镜像的两种立体异构体。在本文公开的化合物具有两个或更多个不对称中心的情况下，它们可以另外作为非对映异构体存在。对映异构体和非对映异构体属于更广泛的立体异构体类别。所有此类可能的立体异构体，如基本上纯的拆分的对映异构体、其外消旋混合物以及非对映异构体的混合物都旨在包括在内。本文公开的化合物和/或其药学上可接受的盐的所有立体异构体都旨在包括在内。除非另有具体说明，否则提及一种异构体适用于任何可能的异构体。当异构体组成未指定时，包括所有可能的异构体。
如本文所用，术语“基本上纯的”是指目标立体异构体含有不超过35重量％，例如不超过30重量％，进一步例如不超过25重量％，甚至进一步例如不超过20重量％的任何其它立体异构体。在一些实施方案中，术语“基本上纯的”是指目标立体异构体含有不超过10重量％，例如不超过5重量％，例如不超过1重量％的任何其它立体异构体。
当本文公开的化合物含有烯属双键时，除非另有说明，否则此类双键意味着包括E和Z几何异构体。
当本文公开的化合物含有二取代的环己基或环丁基时，在环己基或环丁基环上发现的取代基可以采取顺式和反式形式。顺式形式意味着两个取代基都位于碳上2个取代基位置的上侧，而反式形式意味着它们位于相对侧。
将反应产物彼此分离和/或与起始材料分离可能是有利的。通过本领域常用的技术将每个步骤或一系列步骤的所需产物分离和/或纯化(在下文中分离)至所需的均匀度。通常，此类分离涉及多相萃取、从溶剂或溶剂混合物中结晶、蒸馏、升华或色谱法。色谱法可以涉及任何数量的方法，包括例如：反相和正相；尺寸排除；离子交换；高压、中压和低压液相色谱方法和装置；小规模分析型；模拟移动床(“SMB”)和制备型薄层或厚层色谱，以及小规模薄层和快速色谱技术。本领域技术人员将应用最有可能实现所需分离的技术。
“非对映异构体”是指具有两个或更多个手性中心但彼此不是镜像的化合物的立体异构体。非对映异构体混合物可以基于它们的物理化学差异通过本领域技术人员熟知的方法，例如通过色谱法和/或分步结晶来分离成它们的单独的非对映异构体。对映异构体可通过以下来分离：通过与合适的旋光性化合物(例如手性助剂例如手性醇或Mosher酰氯)反应将对映异构体混合物转化为非对映异构体混合物，分离非对映异构体，并将单个非对映异构体转化(例如水解)为相应的纯对映异构体。对映异构体也可以通过使用手性HPLC柱进行分离。
单一立体异构体，例如基本上纯的对映异构体，可以通过使用例如使用光学活性拆分剂形成非对映异构体的方法拆分外消旋混合物来获得(Eliel,E.和Wilen,S.Stereochemistry of Organic Compounds.New York:John Wiley&Sons,Inc.,1994；Lochmuller,C.H.等人"Chromatographic resolution of enantiomers:Selectivereview."J.Chromatogr.,113(3)(1975):第283-302页)。本发明的手性化合物的外消旋混合物可以通过任何合适的方法分离和离析，包括：(1)用手性化合物形成离子非对映异构体盐，并通过分步结晶或其它方法分离，(2)用手性衍生试剂形成非对映异构体化合物，分离非对映异构体，并转化为纯的立体异构体，以及(3)直接在手性条件下分离基本上纯的或富集的立体异构体。参见:Wainer,Irving W.编辑，Drug Stereochemistry:AnalyticalMethods and Pharmacology.New York:Marcel Dekker,Inc.,1993。
“药学上可接受的盐”是指在合理的医学判断范围内，适用于与人和低等动物的组织接触而没有不适当的毒性、刺激、过敏反应等，并且与合理的效益/风险比相称的那些盐。药学上可接受的盐可以在本文公开的化合物的最终分离和纯化过程中原位制备，或通过使游离碱官能团与合适的有机酸反应或通过使酸性基团与合适的碱反应而单独制备。
此外，如果本文公开的化合物作为酸加成盐获得，则游离碱可通过碱化酸式盐溶液而获得。相反，如果产物是游离碱，则加成盐，例如药学上可接受的加成盐，可以按照从碱化合物制备酸加成盐的常规方法，通过将游离碱溶解在合适的有机溶剂中并用酸处理该溶液来制备。本领域技术人员将认识到无需过多实验即可用于制备无毒的药学上可接受的加成盐的各种合成方法。
如本文所定义，“其药学上可接受的盐”包括至少一种式(I)化合物的盐，和式(I)化合物的立体异构体的盐，例如对映异构体的盐和/或非对映异构体的盐。
当应用于动物、人、实验受试者、细胞、组织、器官或生物流体时，本文的术语“施用(administration)”、“施用(administering)”、“治疗(treating)”和“治疗(treatment)”是指外源药物、治疗剂、诊断剂或组合物与动物、人、受试者、细胞、组织、器官或生物流体的接触。细胞的处理包括试剂与细胞的接触，以及试剂与流体的接触，其中流体与细胞接触。术语“施用”和“治疗”还意指体外和离体处理，例如，通过试剂、诊断剂、结合化合物或通过另一种细胞对细胞进行处理。本文的术语“受试者”包括任何生物体，优选动物，更优选哺乳动物(例如大鼠、小鼠、狗、猫、兔)，最优选人。
术语“有效量”或“治疗有效量”是指当施用于受试者用于治疗疾病或者疾病或病症的至少一种临床症状时足以影响对疾病、病症或症状的此类治疗的活性成分如化合物的量。“治疗有效量”可随化合物、疾病、病症和/或疾病或病症的症状、疾病、病症和/或疾病或病症的症状的严重程度、待治疗的受试者的年龄和/或待治疗的受试者的体重而变化。在任何给定情况下的适当量对于本领域技术人员来说是显而易见的或者可以通过常规实验来确定。在一些实施方案中，“治疗有效量”是本文公开的至少一种化合物和/或其至少一种立体异构体和/或其至少一种药学上可接受的盐有效地如上所定义“治疗”受试者的疾病或病症的量。在联合治疗的情况下，“治疗有效量”是指用于有效治疗疾病、病症或疾患的联合对象的总量。
包含本文公开的化合物的药物组合物可以通过口服、吸入、直肠、肠胃外或局部施用来施用于有需要的受试者。对于口服施用，药物组合物可以是常规固体制剂，例如片剂、粉末、颗粒、胶囊等；液体制剂，例如水或油悬浮液或其它液体制剂，例如糖浆、溶液、悬浮液等；对于肠胃外施用，药物组合物可以是溶液、水溶液、油悬浮液浓缩物、冻干粉末等。优选地，药物组合物的制剂选自片剂、包衣片剂、胶囊、栓剂、鼻喷雾剂或注射剂，更优选片剂或胶囊。药物组合物可以以精确的剂量单次单位施用。此外，药物组合物可以进一步包含另外的活性成分。
本文公开的药物组合物的所有制剂可以通过制药领域中的常规方法制备。例如，活性成分可以与一种或多种赋形剂混合，然后制备所需制剂。“药学上可接受的赋形剂”是指适合于所需药物制剂的常规药物载体，例如：稀释剂；媒介物，例如水、多种有机溶剂等；填充剂，例如淀粉、蔗糖等；粘合剂，例如纤维素衍生物、海藻酸盐、明胶和聚乙烯吡咯烷酮(PVP)；润湿剂，例如甘油；崩解剂，例如琼脂、碳酸钙和碳酸氢钠；吸附增强剂，例如季铵化合物；表面活性剂，例如十六醇；吸收载体，例如高岭土和膨润土；润滑剂，例如滑石、硬脂酸钙、硬脂酸镁、聚乙二醇等。此外，药物组合物还包含其它的药学上可接受的赋形剂，例如分散剂、稳定剂、增稠剂、络合剂、缓冲剂、渗透增强剂、聚合物、芳香剂、甜味剂和染料。
术语“疾病”是指任何疾病、不适、病症、症状或适应症，并且可以与术语“病症”或“疾患”互换。
在整个说明书和随后的权利要求书中，除非上下文另有要求，否则术语“包含(comprise)”以及例如“包含(comprises)”和“包含(comprising)”的变体意在指定其后特征的存在，但不排除一个或多个其他特征的存在或添加。当在本文中使用时，术语“包含”可以用术语“含有”、“包括”或有时“具有”来代替。
在整个说明书和随后的权利要求书中，术语“Cn-m”表示包括端点的范围，其中n和m是整数并且表示碳的数目。实例包括C1-8、C1-6等。
除非在本文其他地方特别定义，否则本文使用的所有其他技术和科学术语具有本发明所属领域的普通技术人员通常理解的含义。
实施例
以下实施例旨在仅是示例性的，不应被认为是以任何方式进行限制。已努力确保所用数字的准确性(例如，数量、温度等)，但应考虑一些实验误差和偏差。除非另有说明，否则温度以摄氏度为单位。试剂购自商业供应商，例如Sigma-Aldrich、Alfa Aesar或TCI，除非另有说明，否则不经进一步纯化即使用。
实施例A1：2-((1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-5-基)氧基)-4-(2-((S)-2-(2-异丙基苯基)吡咯烷-1-基)-7-氮杂螺[3.5]壬-7-基)-N-((5-硝基-3-(四氢-2H-吡喃-4-基)-3,4-二氢-2H-苯并[b][1,4]噁嗪-7-基)磺酰基)苯甲酰胺
Figure BDA0003594909090000281
A1-1：2-((1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-5-基)氧基)-4-(2,2-二甲氧基-7-氮杂螺 [3.5]壬-7-基)苯甲酸甲酯
Figure BDA0003594909090000291
2,2-二甲氧基-7-氮杂螺[3.5]壬烷盐酸盐的合成：
室温下，向2-氧代-7-氮杂螺[3.5]壬烷-7-甲酸叔丁酯(500g，2.09mol)在MeOH(750mL)和EA(750mL)中的溶液中加入浓HCl酸(350mL，4.18mol)并搅拌4小时。真空浓缩后，将MeOH(750mL)加入残余物中，然后将所得混合物真空浓缩(重复该后处理两次)。将棕色残余物悬浮在EA(1250mL)中并搅拌1小时。过滤固体沉淀物并真空干燥，得到标题产物，为灰白色粉末(350g，收率：76.0％)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δppm:3.03(s,6H),2.96-2.89(m,4H),1.93(s,4H),1.74-1.67(m,4H)。MS(ESI,m/e)[M+1]+186.0。
2-((1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-5-基)氧基)-4-(2,2-二甲氧基-7-氮杂螺[3.5]壬- 7-基)苯甲酸甲酯的合成
将2-((1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-5-基)氧基)-4-氟苯甲酸甲酯(100g)、2,2-二甲氧基-7-氮杂螺[3.5]壬烷盐酸盐(116g)和DBU(160g)在NMP(500mL)中的混合物在85℃下搅拌16小时。反应完成后，将混合物冷却至50±5℃，并在搅拌下将柠檬酸水溶液(2％，5L)滴加到系统中。过滤后，收集滤饼并用DCM(1.5L)溶解。将粗产物溶液用柠檬酸水溶液(2％，1.5L)、饱和NaHCO3水溶液(1.5L)和15％NaCl水溶液(1.5L)洗涤，然后经无水Na2SO4干燥。在搅拌下将硅胶(100g)加入粗产物溶液中，然后过滤。将滤液浓缩至300mL。将MTBE(500mL)倒入系统中。搅拌2小时后，过滤后收集滤饼，真空干燥，得到灰白色固体(192g，收率：72.1％)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δppm:11.63(s,1H),8.00(d,J＝2.4Hz,1H),7.76(d,J＝9.2Hz,1H),7.47(t,J＝3.2Hz,1H),7.42(d,J＝2.4Hz,1H),6.79(dd,J＝2.4Hz,J＝9.2Hz,1H),6.39-6.36(m,2H),3.64(s,3H),3.17-3.12(m,4H),3.01(s,6H),1.86(s,4H),1.54-1.50(m,4H)。MS(ESI,m/e)[M+1]+451.9。
A1-2：2-((1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-5-基)氧基)-4-(2-氧代-7-氮杂螺[3.5]壬-7- 基)苯甲酸甲酯
Figure BDA0003594909090000301
向2-((1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-5-基)氧基)-4-(2,2-二甲氧基-7-氮杂螺[3.5]壬-7-基)苯甲酸甲酯(176g，0.39mol)在DCM(2L)中的溶液中加入稀HCl酸(1M，1.5L)，并搅拌过夜。反应完成后，将混合物冷却至10℃，并在搅拌下用NaOH水溶液(4M)调节至pH＝8-9。分离有机相并用15％NaCl水溶液(1L)洗涤，然后用H2O(1L)洗涤。将有机相浓缩至500mL后，将MTBE(1L)倒入溶液中，然后将系统浓缩至500mL(重复该后处理3次)。将所得系统搅拌0.5小时。过滤后，收集滤饼，然后真空干燥，得到标题产物，为白色固体(152g，收率：96.2％)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δppm:11.64(s,1H),8.02(d,J＝2.4Hz,1H),7.78(d,J＝9.2Hz,1H),7.47(t,J＝3.2Hz,1H),7.44(d,J＝2.4Hz,1H),6.83(dd,J＝2.4Hz,J＝9.2Hz,1H),6.43(d,J＝2.4Hz,1H),6.38-6.36(m,1H),3.65(s,3H),3.24-3.21(m,4H),2.80(s,4H),1.70-1.67(m,4H)。MS(ESI,m/e)[M+1]+405.9。
A1-3：(S)-2-(2-异丙基苯基)吡咯烷盐酸盐
Figure BDA0003594909090000302
(S)-2-(2-(丙-1-烯-2-基)苯基)吡咯烷-1-甲酸叔丁酯的合成：
向(S)-2-(2-溴苯基)吡咯烷-1-甲酸叔丁酯(50g，153.3mmol)和4,4,5,5-四甲基-2-(丙-1-烯-2-基)-1,3,2-二氧杂硼杂环戊烷(38.6g，229.9mmol)在二噁烷(500mL)和H2O(50mL)中的混合物中加入Cs2CO3(100g，305mmol)和Pd(dppf)Cl2(6.6g，7.5mmol)。将混合物在100℃下搅拌8小时。TLC显示反应完成。将混合物真空浓缩。残余物通过硅胶柱色谱(洗脱液：PE:EA＝100:1至10:1)纯化，得到(S)-2-(2-(丙-1-烯-2-基)苯基)吡咯烷-1-甲酸叔丁酯(65g，粗品)。粗产物直接用于下一步骤。
(S)-2-(2-异丙基苯基)吡咯烷-1-甲酸叔丁酯的合成：
向(S)-2-(2-(丙-1-烯-2-基)苯基)吡咯烷-1-甲酸叔丁酯(30g，104.39mmol)在MeOH(500mL)中的溶液中加入Pd/C(10g，10％)，并将混合物在20℃、H2(15Psi)下搅拌12小时。TLC显示反应完成。将混合物过滤并将滤液真空浓缩，得到(S)-2-(2-异丙基苯基)吡咯烷-1-甲酸叔丁酯(60g，粗品)，其未经进一步纯化即用于下一步骤。1H NMR(400MHz,CDCl3)δppm:7.39-6.90(m,4H),5.36-5.04(m,1H),3.77-3.52(m,2H),3.20-3.17(m,1H),2.47-2.24(m,1H),1.96-1.65(m,3H),1.54-1.38(m,2H),1.31-1.22(m,8H),1.17(s,7H)。
(S)-2-(2-异丙基苯基)吡咯烷盐酸盐的合成
室温下，向2-(2-异丙基苯基)吡咯烷-1-甲酸叔丁酯(55g，190mmol)在DCM(50mL)中的溶液中滴加HCl在1,4-二噁烷中的溶液(4M,142mL,570mmol)。将混合物在室温下搅拌过夜。将混合物真空浓缩。将所得残余物用EA(100mL)浆化，然后过滤，真空干燥，得到26g(S)-2-(2-异丙基苯基)吡咯烷盐酸盐(收率：60.4％)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δppm:9.93(s,1H),8.81(s,1H),7.63-7.57(m,1H),7.41-7.34(m,2H),7.32-7.24(m,1H),4.91-4.75(m,1H),3.47-3.35(m,1H),3.31-3.25(m,1H),2.40-2.21(m,1H),2.19-1.86(m,3H),1.25(d,J＝6.7Hz,3H),1.17(d,J＝6.7Hz,3H)。MS(ESI,m/e)[M+1]+190.0。
A1-4：(S)-2-((1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-5-基)氧基)-4-(2-(2-(2-异丙基苯基)吡 咯烷-1-基)-7-氮杂螺[3.5]壬-7-基)苯甲酸甲酯
Figure BDA0003594909090000321
将(S)-2-(2-异丙基苯基)吡咯烷盐酸盐(120g，0.535mol)和2-((1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-5-基)氧基)-4-(2-氧代-7-氮杂螺[3.5]壬-7-基)苯甲酸甲酯(218g，0.509mol)在DCM(2.2L)中的混合物装入反应器中。将温度控制在30℃以下，并将NaBH(OAc)3(216g，1.018mol)分5-6批加入反应器中。然后将反应混合物在室温下搅拌并通过TLC监测。在起始材料酮完全消耗后，将混合物用稀HCl酸(0.5M)调节至pH＝4～5。将分离的有机相用H2O(600mL×2)洗涤，然后用NaHCO3水溶液(600mL×2)、饱和NaCl水溶液(600mL)洗涤。收集有机相，然后经无水Na2SO4干燥并浓缩。得到为粗产物的256g灰白色固体，其直接用于下一步骤。MS(ESI,m/e)[M+1]+579.0。
A1-5：(S)-2-((1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-5-基)氧基)-4-(2-(2-(2-异丙基苯基)吡 咯烷-1-基)-7-氮杂螺[3.5]壬-7-基)苯甲酸
Figure BDA0003594909090000322
向(S)-2-((1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-5-基)氧基)-4-(2-(2-(2-异丙基苯基)吡咯烷-1-基)-7-氮杂螺[3.5]壬-7-基)苯甲酸甲酯(105g，181.7mmol)在THF(525mL)和MeOH(525mL)中的溶液中加入NaOH水溶液(3.5M)。将其在室温下搅拌过夜。真空移除THF和MeOH后，将3.5L水加入到残余物中。在室温和搅拌下用3N HCl酸将所得混合物调节至pH＝5～6。将沉淀物过滤并真空干燥，得到产物，为白色固体(102.4g，收率：99％)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δppm:12.13(s,1H),11.58(s,1H),7.95(s,1H),7.67(d,J＝8.0Hz,1H),7.56-7.40(m,2H),7.35(s,1H),7.27-7.04(m,3H),6.68(d,J＝8.0Hz,1H),6.32(s,2H),3.62(s,1H),3.32-3.26(m,1H),3.10-3.04(m,4H),2.35-2.30(m,1H),2.9-2.15(m,1H),1.74-1.64(m,4H),1.52-1.37(m,6H),1.28-1.06(m,6H)。MS(ESI,m/e)[M+1]+564.9。
A1-6：5-硝基-3-(四氢-2H-吡喃-4-基)-3,4-二氢-2H-苯并[b][1,4]噁嗪-7-磺酰 胺
Figure BDA0003594909090000331
2-(((苄氧基)羰基)氨基)-2-(二氢-2H-吡喃-4(3H)-亚基)乙酸甲酯的合成：
向二氢-2H-吡喃-4(3H)-酮(6.8g，0.07mol)在CH3CN(100mL)中的溶液中加入2-(((苄氧基)羰基)氨基)-2-(二甲氧基磷酰基)乙酸甲酯(22.5g，0.07mol)和DBU(10.7g，0.07mol)。将混合物在20℃下搅拌12小时。将反应混合物倒入水(100mL)中，然后用EtOAc(2×50mL)萃取。将有机层干燥、过滤并减压浓缩，得到2-(((苄氧基)羰基)氨基)-2-(二氢-2H-吡喃-4(3H)-亚基)乙酸甲酯(20.0g，93.5％收率)，为固体。1H NMR(400MHz,CDCl3)δppm:7.37(br,5H),6.08(br,1H),5.14(s,2H),3.67-3.83(m,7H),2.93(br,2H),2.42(t,J＝5.4Hz,2H)。
2-氨基-2-(四氢-2H-吡喃-4-基)乙酸甲酯的合成：
向2-(((苄氧基)羰基)氨基)-2-(二氢-2H-吡喃-4(3H)-亚基)乙酸甲酯(20g，66.03mmol)在THF(100mL)中的溶液中加入Pd/C(5g)。将混合物在45℃、H2(50psi)气氛下搅拌12小时。过滤后，将滤液减压浓缩，得到2-氨基-2-(四氢-2H-吡喃-4-基)乙酸甲酯(4.3g)，为棕色油状物，其未经进一步纯化即用于下一步骤。
2-氨基-2-(四氢-2H-吡喃-4-基)乙醇的合成：
在0℃下，向2-氨基-2-(四氢-2H-吡喃-4-基)乙酸甲酯(4.3g，25mmol)在THF(50mL)中的溶液中分几批加入LiAlH4(1.4g，37mmol)。将混合物在25℃下搅拌3小时。将反应混合物通过加入NaOH水溶液(2mL，2M)淬灭并经Na2SO4干燥，过滤并将滤液减压浓缩，得到2-氨基-2-(四氢-2H-吡喃-4-基)乙醇(2.0g)，为棕色油状物，其未经进一步纯化即用于下一步骤。
3-溴-4-((2-羟基-1-(四氢-2H-吡喃-4-基)乙基)氨基)-5-硝基苯磺酰胺的合成：
向3-溴-4-氯-5-硝基苯磺酰胺(1.3g，4.12mmol)和2-氨基-2-(四氢-2H-吡喃-4-基)乙醇(1.2g，8.24mmol)在DMF(20mL)中的溶液中加入DIEA(1.06g，8.24mmol)。将混合物在60℃下搅拌12小时。将反应混合物用H2O(50mL)稀释，然后用EtOAc(2×50mL)萃取。将有机层用盐水洗涤，经无水Na2SO4干燥，过滤并浓缩。残余物通过硅胶柱色谱(洗脱液：PE:EA＝5:1)纯化，得到3-溴-4-((2-羟基-1-(四氢-2H-吡喃-4-基)乙基)氨基)-5-硝基苯磺酰胺(1.0g，57％收率)，为固体。1H NMR(400MHz,CDCl3)δppm:8.26(d,J＝1.88Hz,1H),8.14(d,J＝1.8Hz,1H),7.50(s,2H),6.73(br d,J＝8.6Hz,1H),4.93(t,J＝4.8Hz,1H),3.79-3.91(m,2H),3.67(br s,1H),3.42-3.58(m,2H),3.18-3.30(m,2H),1.79-1.95(m,1H),1.48-1.66(m,2H),1.19-1.41(m,2H)。
5-硝基-3-(四氢-2H-吡喃-4-基)-3,4-二氢-2H-苯并[b][1,4]噁嗪-7-磺酰胺的 合成：
向3-溴-4-((2-羟基-1-(四氢-2H-吡喃-4-基)乙基)氨基)-5-硝基苯磺酰胺(1g，2.36mmol)在1,2-二噁烷(20mL)中的溶液中加入Pd2(dba)3(0.32g，0.354mmol)、Xantphos(0.34g，0.59mmol)和Cs2CO3(1.54g，4.72mmol，2eq)。将混合物在100℃、氩气气氛下搅拌10小时。LC-MS显示反应物被完全消耗，一个主峰具有所需的质量信号。冷却至室温后，将混合物过滤。浓缩滤液。残余物通过硅胶柱色谱(洗脱液：PE:EA＝5:1)纯化，得到5-硝基-3-(四氢-2H-吡喃-4-基)-3,4-二氢-2H-苯并[b][1,4]噁嗪-7-磺酰胺(410mg，50％收率)，为固体。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δppm:8.82(d,J＝4.0Hz,1H),8.09(d,J＝2.0Hz,1H),7.32(s,3H),4.40(dd,J＝1.8,11.26Hz,1H),4.03-4.12(m,1H),3.87(dd,J＝3.1,11.1Hz,2H),3.49-3.59(m,1H),3.17-3.29(m,2H),1.72-1.87(m,1H),1.52-1.71(m,2H),1.22-1.50(m,2H)。MS(ESI,m/e)[M+1]+344.3。
2-((1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-5-基)氧基)-4-(2-((S)-2-(2-异丙基苯基)吡咯烷- 1-基)-7-氮杂螺[3.5]壬-7-基)-N-((5-硝基-3-(四氢-2H-吡喃-4-基)-3,4-二氢-2H-苯并 [b][1,4]噁嗪-7-基)磺酰基)苯甲酰胺
将(S)-2-((1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-5-基)氧基)-4-(2-(2-(2-异丙基苯基)吡咯烷-1-基)-7-氮杂螺[3.5]壬-7-基)苯甲酸(282mg，0.5mmol)、5-硝基-3-(四氢-2H-吡喃-4-基)-3,4-二氢-2H-苯并[b][1,4]噁嗪-7-磺酰胺(172mg，0.5mmol)、EDCI(124mg，0.65mmol)、TEA(0.1mL)和DMAP(122mg，1mmol)在DCM(25mL)中的混合物在室温下搅拌过夜。将反应混合物用10％HOAc(20mL)淬灭，并用饱和NaHCO3水溶液(10mL×2)、盐水(10mL)洗涤，然后经无水Na2SO4干燥，真空浓缩。残余物通过制备型HPLC纯化，得到101mg所需化合物(收率：23％)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6):11.61(s,1H),11.25(s,1H),8.76(s,1H),8.14(s,1H),7.99(s,1H),7.59-7.38(m,4H),7.34-7.01(m,4H),6.65(d,J＝7.4Hz,1H),6.35(s,1H),6.17(s,1H),4.31(d,J＝9.2Hz,1H),4.01(d,J＝8.6Hz,1H),3.86(d,J＝7.7Hz,2H),3.50(s,1H),3.29-3.11(m,4H),3.01-2.92(m,5H),2.25-2.21(m,1H),1.80-1.71(m,5H),1.65-1.25(m,12H),1.25-1.03(m,7H)。MS(ESI,m/e)[M+1]+889.9。
实施例A2：2-((1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-5-基)氧基)-N-(((R)-3-((1S,4S)-4-羟基-4-甲基环己基)-5-硝基-3,4-二氢-2H-苯并[b][1,4]噁嗪-7-基)磺酰基)-4-(2-((S)-2-(2-异丙基苯基)吡咯烷-1-基)-7-氮杂螺[3.5]壬-7-基)苯甲酰胺
Figure BDA0003594909090000361
A2-1a：(R)-3-((1S,4S)-4-羟基-4-甲基环己基)-5-硝基-3,4-二氢-2H-苯并[b] [1,4]噁嗪-7-磺酰胺
Figure BDA0003594909090000362
(R)-2-((叔丁氧基羰基)氨基)-2-(4-羟基苯基)乙酸甲酯的合成：
向(R)-2-氨基-2-(4-羟基苯基)乙酸甲酯盐酸盐(25g，114.86mmol)在二噁烷(250mL)中的溶液中加入Boc2O(27.58g，126.35mmol)和K2CO3(39.69g，287.15mmol)。将混合物在20℃下搅拌18小时。TLC显示反应完全。将反应混合物倒入水(300mL)中，并用乙酸乙酯(300mL×3)萃取。将合并的有机相用盐水(100mL×2)洗涤，用无水Na2SO4干燥，过滤并真空浓缩。残余物通过硅胶柱色谱(洗脱液：PE:EA ＝100:1至5:1)纯化。得到(R)-2-((叔丁氧基羰基)氨基)-2-(4-羟基苯基)乙酸甲酯(14.7g，45.5％收率)，为固体。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δppm:9.47(s,1H),7.58(d,J＝7.5Hz,1H),7.16(d,J＝8.5Hz,2H),6.71(d,J＝8.5Hz,2H),5.05(d,J＝7.8Hz,1H),3.59(s,3H),1.38(s,9H)。
(R)-(2-羟基-1-(4-羟基苯基)乙基)氨基甲酸叔丁酯的合成：
在0℃下，向(R)-2-((叔丁氧基羰基)氨基)-2-(4-羟基苯基)乙酸甲酯(14.7g，52.26mmol)在THF(50mL)中的溶液中加入LiBH4(2.28g，104.51mmol)。加入后，将混合物在50℃下搅拌12小时。TLC表明反应物已完全消耗。将反应混合物用饱和NH4Cl水溶液(100mL)淬灭，然后用EA(100mL×3)萃取并用盐水洗涤。将合并的有机层经Na2SO4干燥，过滤并减压浓缩。残余物通过硅胶柱色谱(洗脱液：PE:EA＝100:1至20:1)纯化。得到(R)-(2-羟基-1-(4-羟基苯基)乙基)氨基甲酸叔丁酯(12.9g，97.4％收率)，为固体。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δppm:9.22(s,1H),7.06(d,J＝8.5Hz,3H),6.67(d,J＝8.5Hz,2H),4.69(t,J＝5.7Hz,1H),4.32-4.47(m,1H),3.36-3.47(m,2H),1.36(s,9H)。
(R)-4-(4-羟基苯基)-2,2-二甲基噁唑烷-3-甲酸叔丁酯的合成：
向(R)-(2-羟基-1-(4-羟基苯基)乙基)氨基甲酸叔丁酯(13g，51.32mmol)在DCM(500mL)中的溶液中加入2,2-二甲氧基丙烷(107g，102.6mmol)和TsOH(1.95g，10.26mmol)。将混合物在25℃下搅拌3小时。TLC表明反应物已完全消耗。将反应混合物减压浓缩以移除溶剂。残余物通过硅胶柱色谱(洗脱液：PE:EA＝100:1至2:1)纯化。得到(R)-4-(4-羟基苯基)-2,2-二甲基噁唑烷-3-甲酸叔丁酯(10g，66.7％收率)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δppm:9.28(s,1H),7.07(d,J＝8.0Hz,2H),6.71(d,J＝8.0Hz,2H),4.53-4.84(m,1H),4.20(dd,J＝6.8,8.6Hz,1H),3.65-3.73(m,1H),1.62(br,3H),1.48(br,3H),1.39(br,3H),1.10-1.20(m,6H)。
(R)-4-(4-羟基环己基)-2,2-二甲基噁唑烷-3-甲酸叔丁酯的合成：
向(R)-4-(4-羟基苯基)-2,2-二甲基噁唑烷-3-甲酸叔丁酯(10g，0.034mol)在i-PrOH(300mL)中的溶液中加入PtO2(2g)和HOAc(61g，1.023mol)。将混合物在50℃、H2(50psi)气氛下搅拌12小时。TLC表明反应物已完全消耗。过滤反应混合物后，将滤液减压浓缩，得到2-氨基-2-(四氢-2H-吡喃-4-基)乙酸甲酯(10g)，其未经进一步纯化即用于下一步骤。MS(ESI,m/e)[M+1]+300.3。
(R)-2,2-二甲基-4-(4-氧代环己基)噁唑烷-3-甲酸叔丁酯的合成：
向(R)-4-(4-羟基环己基)-2,2-二甲基噁唑烷-3-甲酸叔丁酯(10g，0.033mol)在DCM(300mL)中的溶液中加入DMP(44.5g，0.1mol)。将混合物在25℃下搅拌12小时。TLC表明反应物已完全消耗。将混合物用饱和NaHCO3水溶液洗涤，然后经无水Na2SO4干燥，过滤并减压浓缩。残余物通过硅胶柱色谱(洗脱液：PE:EA ＝5:1)纯化，得到((R)-2,2-二甲基-4-(4-氧代环己基)噁唑烷-3-甲酸叔丁酯(2.6g，26.5％收率)，为固体。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δppm:3.68-3.89(m,3H),2.30-2.45(m,2H),2.19(d,J＝14.0Hz,2H),2.01-2.26(m,1H),1.85-1.96(m,1H),1.75-1.85(m,1H),1.49(s,3H),1.42(s,14H)。
(R)-4-(4-羟基-4-甲基环己基)-2,2-二甲基噁唑烷-3-甲酸叔丁酯的合成：
在-78℃、N2气氛下，向(R)-2,2-二甲基-4-(4-氧代环己基)噁唑烷-3-甲酸叔丁酯(2.6g，8.74mmol)在THF(100mL)中的溶液中滴加MeLi(1M,26mL,26.23mmol)。将混合物在-60℃下搅拌4小时。TLC表明反应物已完全消耗。将混合物用NH4Cl水溶液淬灭，然后用EA(50mL×2)萃取。将有机层干燥，过滤并减压浓缩。残余物通过硅胶柱色谱(洗脱液：PE:EA＝10:1)纯化，得到(R)-4-(4-羟基-4-甲基环己基)-2,2-二甲基噁唑烷-3-甲酸叔丁酯(1.6g，58.5％收率)。MS(ESI,m/e)[M+1]+314.2。
(R)-4-(1-氨基-2-羟乙基)-1-甲基环己-1-醇的合成：
向(R)-4-(4-羟基-4-甲基环己基)-2,2-二甲基噁唑烷-3-甲酸叔丁酯(1.6g，5.1mmol，1eq)在EA(50mL)中的溶液中加入HCl的EA溶液(4M，10mL)。将混合物在25℃下搅拌1小时。TLC表明反应物已完全消耗。将混合物浓缩，得到(R)-4-(1-氨基-2-羟乙基)-1-甲基环己醇(1.0g，粗品)，其未经进一步纯化即用于下一步骤。MS(ESI,m/e)[M+1]+174.1。
(R)-3-溴-4-((2-羟基-1-(4-羟基-4-甲基环己基)乙基)氨基)-5-硝基苯磺酰胺 的合成：
向3-溴-4-氯-5-硝基苯磺酰胺(1g，3.18mmol)和(R)-4-(1-氨基-2-羟乙基)-1-甲基环己醇(1g，4.77mmol)在DMF(20mL)中的溶液中加入DIEA(1.64g，12.72mmol)。将混合物在60℃下搅拌4小时。TLC表明反应物已完全消耗。将反应混合物倒入水(50mL)中，然后用EA(50mL×2)萃取。将有机层用盐水洗涤，然后经无水Na2SO4干燥，过滤并减压浓缩，得到粗品(R)-3-溴-4-((2-羟基-1-(4-羟基-4-甲基环己基)乙基)氨基)-5-硝基苯磺酰胺。将粗产物经硅胶柱色谱(洗脱液：石油醚:乙酸乙酯＝5:1)纯化分离得到2种异构体：210mg较快的异构体(15％收率)，1H NMR(400MHz,CDCl3)δppm:8.45(d,J＝2.0Hz,1H),8.17(d,J＝2.0Hz,1H),8.02(br,3H),6.98(br,1H),5.03(s,2H),3.97(d,J＝5.0Hz,1H),3.81(s,2H),1.65-1.72(m,4H),1.38-1.49(m,4H),1.23(s,3H)，MS(ESI,m/e)[M+1]+453.1；240mg较慢的异构体(17％收率)，MS(ESI,m/e)[M+1]+453.1。
(R)-3-((1S,4S)-4-羟基-4-甲基环己基)-5-硝基-3,4-二氢-2H-苯并[b][1,4]噁 嗪-7-磺酰胺(A2-1a)的合成
向(R)-3-溴-4-((2-羟基-1-(4-羟基-4-甲基环己基)乙基)氨基)-5-硝基苯磺酰胺的较快异构体(210mg，0.46mmol)在1,2-二噁烷(20mL)中的溶液中加入Pd2(dba)3(64mg，0.07mmol)、Xantphos(68mg，0.12mmol)和Cs2CO3(304mg，0.93mmol)。将混合物脱气，然后在100℃、Ar气氛下搅拌10小时。LC-MS显示反应物已完全消耗。冷却至室温后，将混合物通过硅藻土垫过滤。将滤液减压浓缩。残余物通过硅胶(洗脱液：PE:EA＝5:1)纯化，得到(R)-3-((1S,4S)-4-羟基-4-甲基环己基)-5-硝基-3,4-二氢-2H-苯并[b][1,4]噁嗪-7-磺酰胺(75mg，43.6％收率)，为固体。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δppm:8.75(br,1H),8.08(s,1H),7.31(br,3H),4.34(dd,J＝3.0,10.8Hz,1H),4.12(d,J＝8.8Hz,1H),3.97(s,1H),3.52(br,1H),1.43-1.61(m,7H),1.24(br,2H),1.08(s,3H)。MS(ESI,m/e)[M+1]+370.0。
以(R)-3-溴-4-((2-羟基-1-(4-羟基-4-甲基环己基)乙基)氨基)-5-硝基苯磺酰胺的较慢异构体(240mg，0.53mmol)为原料，按照与A2-1a类似的程序得到100mg(51％收率)(R)-3-((1R,4R)-4-羟基-4-甲基环己基)-5-硝基-3,4-二氢-2H-苯并[b][1,4]噁嗪-7-磺酰胺(A2-1b)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δppm:8.74(br s,1H),8.08(s,1H),7.31(br,3H),4.19-4.40(m,2H),4.03-4.18(m,1H),3.57(br,1H),1.43-1.77(m,5H),1.27-1.41(m,3H),1.14-1.22(m,1H),1.09(s,3H)。MS(ESI,m/e)[M+1]+370.0。
按照与实施例A1的制备中类似的程序，用A1-5和(R)-3-((1S,4S)-4-羟基-4-甲基环己基)-5-硝基-3,4-二氢-2H-苯并[b][1,4]噁嗪-7-磺酰胺(A2-1A)合成所需化合物。1HNMR(400MHz,DMSO-d6)δppm:11.62(s,1H),11.36(s,0.5H),8.72(s,1H),8.13(s,1H),7.99(s,1H),7.63–7.38(m,4H),7.30–7.21(m,4H),6.66–6.64(m,1H),6.35(s,1H),6.16(s,1H),4.25–4.42(m,1H),4.07–4.05(m,1H),3.96(s,1H),3.47(s,1H),2.98–2.94(m,5H),1.82(s,5H),1.63–1.28(m,16H),1.19–1.14(m,11H),1.06(s,3H)。MS(ESI)m/e[M+1]+917.9。
实施例A3：2-((1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-5-基)氧基)-N-(((R)-3-((1r,4R)-4-羟基-4-甲基环己基)-5-硝基-3,4-二氢-2H-苯并[b][1,4]噁嗪-7-基)磺酰基)-4-(2-((S)-2-(2-异丙基苯基)吡咯烷-1-基)-7-氮杂螺[3.5]壬-7-基)苯甲酰胺
Figure BDA0003594909090000411
按照与实施例A1的制备中类似的程序，用A1-5和(R)-3-((1R,4R)-4-羟基-4-甲基环己基)-5-硝基-3,4-二氢-2H-苯并[b][1,4]噁嗪-7-磺酰胺(A2-1b)合成所需化合物。1HNMR(400MHz,DMSO-d6)δppm:11.67(s,1H),11.42(s,1H),10.61-10.31(m,0.5H),8.79(s,1H),8.18(s,1H),8.03(s,1H),7.86(s,1H),7.50-7.49(m,3H),7.39-7.18(m,4H),6.68(d,J＝9.2Hz,1H),6.37(s,1H),6.17(s,1H),4.73(s,1H),4.27-4.26(m,2H),4.06(d,J＝8.4Hz,1H),3.85(s,1H),3.67(s,1H),3.55-3.54(m,1H),3.28(s,1H),3.00-2.98(m,5H),2.39(s,1H),2.20-1.93(m,4H),1.68-1.67(m,2H),1.56-1.54(m,3H),1.34-1.33(m,7H),1.27-1.25(m,7H),1.10-1.07(m,6H)。MS(ESI)m/e[M+1]+917.9。
实施例A4：2-((1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-5-基)氧基)-N-(((R)-3-(((1R,4R)-4-羟基环己基)甲基)-5-硝基-3,4-二氢-2H-苯并[b][1,4]噁嗪-7-基)磺酰基)-4-(2-((S)-2-(2-异丙基苯基)吡咯烷-1-基)-7-氮杂螺[3.5]壬-7-基)苯甲酰胺
Figure BDA0003594909090000412
A4-1a：(R)-3-(((1R,4R)-4-羟基环己基)甲基)-5-硝基-3,4-二氢-2H-苯并[b] [1,4]噁嗪-7-磺酰胺
Figure BDA0003594909090000421
3-溴-4-氯-5-硝基苯磺酰胺的合成：
将4-氯-3-硝基苯磺酰胺(4.0g，16.9mmol)在H2SO4(12mL,98％)中的混合物升温至60℃，保持15分钟。然后在5分钟内分批加入NBS(6.02g，33.81mmol)。加入NBS后，将混合物在密封管中在60℃下搅拌4小时。将四个平行反应合并，倒入冰水(500mL)中，在0℃下搅拌5分钟。过滤后，将滤饼在EtOAc(20mL)中研磨直至固体完全溶解。然后缓慢加入石油醚(50mL)。过滤白色沉淀物，滤饼用石油醚(50mL)洗涤，真空干燥，得到3-溴-4-氯-5-硝基苯磺酰胺(3.9g)。将滤液真空浓缩。残余物通过硅胶柱色谱纯化，得到3-溴-4-氯-5-硝基苯磺酰胺(2.2g)，总收率：28.3％。MS(ESI,m/e)[M+1]+312.8。
(R)-2-((叔丁氧基羰基)氨基)-3-(4-羟基环己基)丙酸甲酯的合成：
在Ar下，向(R)-2-((叔丁氧基羰基)氨基)-3-(4-羟基苯基)丙酸甲酯(20.0g，67.72mmol)在i-PrOH(400mL)和AcOH(60mL)中的混合物中加入PtO2(384.5mg，1.69mmol)。将悬浮液真空脱气并用H2吹扫。将混合物在50℃、H2(50psi)下搅拌48h。将反应混合物过滤，将滤液浓缩以移除大部分i-PrOH，倒入水中，用EtOAc萃取，真空浓缩，得到(R)-2-((叔丁氧基羰基)氨基)-3-(4-羟基环己基)丙酸甲酯(22.0g)。1H NMR(400MHz,CDCl3)δppm:4.82-4.93(m,1H),4.21-4.31(m,1H),3.66(d,J＝2.0Hz,3H),3.42-3.55(m,1H),2.02(s,2H),1.40-1.95(m,7H),1.38(s,8H),0.71-1.32(m,4H)。
(R)-(1-羟基-3-(4-羟基环己基)丙-2-基)氨基甲酸叔丁酯的合成：
在0℃下，向(R)-2-((叔丁氧基羰基)氨基)-3-(4-羟基环己基)丙酸甲酯(20.0g，66.36mmol)在EtOH(200mL)中的溶液中分批加入NaBH4(3.77g，99.54mmol)。然后在0℃下加入MeOH(0.4mL)。将混合物在50℃下搅拌48小时。将反应混合物倒入水(400mL)中，用EtOAc(400mL×2)萃取并真空浓缩，得到(R)-(1-羟基-3-(4-羟基环己基)丙-2-基)氨基甲酸叔丁酯(17.0g)，为油状物。1H NMR(400MHz,CDCl3)δppm:4.56(s,1H),3.50-3.85(m,3H),1.54-2.02(m,8H),1.45(s,9H),0.76-1.39(m,9H)。
(R)-4-(2-氨基-3-羟丙基)环己醇盐酸盐的合成：
将(R)-(1-羟基-3-(4-羟基环己基)丙-2-基)氨基甲酸叔丁酯(7.0g，25.61mmol)在HCl的EtOAc溶液(2M,100mL)中的溶液在20℃下搅拌3小时。TLC监测表明反应完成。将反应混合物真空浓缩，得到(R)-4-(2-氨基-3-羟丙基)环己醇盐酸盐(4.8g，粗品)，为油状物。
(R)-3-溴-4-((1-羟基-3-(4-羟基环己基)丙-2-基)氨基)-5-硝基苯磺酰胺的合 成：
在20℃下，向3-溴-4-氯-5-硝基苯磺酰胺(5.4g，17.11mmol)和(R)-4-(2-氨基-3-羟丙基)环己醇盐酸盐(4.7g，22.25mmol)在DMF(60mL)中的混合物中加入DIPEA(22.12g，171.14mmol)。将混合物在50℃下搅拌12h。冷却至室温后，将反应混合物倒入水(100mL)中，用EtOAc(100mL)萃取，并真空浓缩。残余物通过硅胶柱色谱(洗脱液：PE:EA＝10:1至0:1)纯化。得到(R)-3-溴-4-((1-羟基-3-(4-羟基环己基)丙-2-基)氨基)-5-硝基苯磺酰胺(2.15g，27.7％收率)，为固体。1H NMR(400MHz,甲醇-d4)δppm:8.36(t,J＝1.7Hz,1H),8.20(d,J＝2.1Hz,1H),3.94-4.05(m,1H),3.86(s,1H),3.52-3.64(m,2H),3.33-3.51(m,1H),1.85-1.97(m,1H),1.38-1.80(m,10H),1.23-1.38(m,2H),0.84-1.22(m,3H)。MS(ESI,m/e)[M+1]+453.2。
(R)-3-(((1R,4R)-4-羟基环己基)甲基)-5-硝基-3,4-二氢-2H-苯并[b][1,4]噁 嗪-7-磺酰胺的合成：
在20℃、Ar气氛下，向(R)-3-溴-4-((1-羟基-3-(4-羟基环己基)丙-2-基)氨基)-5-硝基苯磺酰胺(2.15g，4.75mmol)在二噁烷(40mL)中的混合物中加入Cs2CO3(3.10g，9.51mmol)、Pd2(dba)3(652.9mg，712.99umol)和Xantphos(687.6mg，1.19mmol)。将混合物在90℃下搅拌3小时。LC/MS表明反应完成。将反应混合物冷却至室温并通过硅藻土垫过滤。将滤液真空浓缩，残余物通过制备型HPLC纯化。得到704mg(R)-3-(((1R,4R)-4-羟基环己基)甲基)-5-硝基-3,4-二氢-2H-苯并[b][1,4]噁嗪-7-磺酰胺，为较快异构体A4-1a(保留时间：2.16分钟)，收率：39.8％；1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δppm:8.71(d,J＝3.2Hz,1H),8.08(d,J＝2.1Hz,1H),7.26-7.37(m,3H),4.22-4.64(m,1H),4.09-4.17(m,2H),3.81(dd,J＝6.8,3.4Hz,1H),3.33(s,1H),1.75-1.86(m,3H),1.68-1.75(m,1H),1.52(s,2H),1.30-1.37(m,1H),1.08-1.20(m,2H),0.87-0.99(m,2H)。MS(ESI,m/e)[M+1]+372.2。
A4-1b：(R)-3-(((1S,4S)-4-羟基环己基)甲基)-5-硝基-3,4-二氢-2H-苯并[b] [1,4]噁嗪-7-磺酰胺
Figure BDA0003594909090000441
得到460mg较慢异构体R-3-(((1S,4S)-4-羟基环己基)甲基)-5-硝基-3,4-二氢-2H-苯并[b][1,4]噁嗪-7-磺酰胺(A4-1b，保留时间：2.22分钟)，收率为26.0％。MS(ESI,m/e)[M+1]+372.2。
A4：2-((1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-5-基)氧基)-N-(((R)-3-(((1R,4R)-4-羟基环己 基)甲基)-5-硝基-3,4-二氢-2H-苯并[b][1,4]噁嗪-7-基)磺酰基)-4-(2-((S)-2-(2-异丙 基苯基)吡咯烷-1-基)-7-氮杂螺[3.5]壬-7-基)苯甲酰胺
将(S)-2-((1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-5-基)氧基)-4-(2-(2-(2-异丙基苯基)吡咯烷-1-基)-7-氮杂螺[3.5]壬-7-基)苯甲酸(169mg，0.3mmol)、(R)-3-(((1R,4R)-4-羟基环己基)甲基)-5-硝基-3,4-二氢-2H-苯并[b][1,4]噁嗪-7-磺酰胺(111mg，0.3mmol，A4-1a)、EDCI(75mg，0.39mmol)、TEA(0.1mL)和DMAP(73mg，0.6mmol)在DCM(25mL)中的混合物在室温下搅拌过夜。将反应混合物用10％HOAc(20mL)淬灭，并用饱和NaHCO3水溶液(10mL×2)、盐水(10mL)洗涤，然后经无水Na2SO4干燥，真空浓缩。残余物通过制备型HPLC纯化，得到109mg所需化合物(收率：39.5％)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6):11.63(s,1H),11.40(s,1H),8.79-8.71(m,1H),8.17-8.13(m,1H),8.00(s,1H),7.71-7.40(m,4H),7.34-6.97(m,4H),6.66(d,J＝8.2Hz,1H),6.35(s,1H),6.16(s,1H),4.47(d,J＝4.3Hz,1H),4.12-4.06(m,2H),3.77(s,1H),3.64-3.59(m,1H),3.29-3.28(m,1H),3.05-2.91(m,8H),1.94-1.59(m,7H),1.52-1.26(m,10H),1.21-1.14(m,9H),1.03-0.77(m,3H)。MS(ESI,m/e)[M+1]+917.9。
实施例A5：2-((1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-5-基)氧基)-N-(((R)-3-(((1s,4S)-4-羟基环己基)甲基)-5-硝基-3,4-二氢-2H-苯并[b][1,4]噁嗪-7-基)磺酰基)-4-(2-((S)-2-(2-异丙基苯基)吡咯烷-1-基)-7-氮杂螺[3.5]壬-7-基)苯甲酰胺
Figure BDA0003594909090000451
按照与实施例A1的制备中类似的程序，用A1-5和(R)-3-(((1S,4S)-4-羟基环己基)甲基)-5-硝基-3,4-二氢-2H-苯并[b][1,4]噁嗪-7-磺酰胺(A4-1b)合成所需化合物。1HNMR(400MHz,DMSO-d6)δppm:11.63(s,1H),8.69(s,1H),8.13(s,1H),8.00(d,J＝2.2Hz,1H),7.65(s,1H),7.49-7.47(m,3H),7.28-7.26(m,4H),6.65(d,J＝7.4Hz,1H),6.35(s,1H),6.17(s,1H),4.29(d,J＝3.0Hz,1H),4.12-4.11(m,1H),4.03-4.01(m,1H),3.78-3.75(m,2H),3.31-3.23(m,3H),2.98-2.96(m,5H),2.26(s,1H),1.89(s,5H),1.55-1.52(m,3H),1.40-1.38(m,15H),1.23(s,1H),1.19(d,J＝6.6Hz,3H),1.13(d,J＝6.6Hz,3H)。MS(ESI)m/e[M+1]+917.9。
实施例A6：2-((1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-5-基)氧基)-N-(((R)-3-(((1r,4R)-4-羟基环己基)甲基)-5-硝基-3,4-二氢-2H-苯并[b][1,4]噁嗪-7-基)磺酰基)-4-(2-((S)-2-(2-异丙基苯基)吡咯烷-1-基)-7-氮杂螺[3.5]壬-7-基-6,6,8,8-d4)苯甲酰胺
Figure BDA0003594909090000461
A6-1：2,2-二甲氧基-7-氮杂螺[3.5]壬烷-6,6,8,8-d4
Figure BDA0003594909090000462
7-亚硝基-7-氮杂螺[3.5]壬-2-酮的合成：
在室温下，向2,2-二甲氧基-7-氮杂螺[3.5]壬烷盐酸盐(22.1g，100.0mmol)和NaNO2(13.8g，200.0mmol)在H2O(200mL)中的溶液中滴加HOAc(12.6g，200.0mmol)，将溶液在室温下搅拌2小时。用DCM(100mL×2)萃取反应混合物。合并的有机层经无水Na2SO4干燥并浓缩，得到产物(16.0g，粗品)。MS(ESI,m/e)[M+1]+169.0。
2,2-二甲氧基-7-亚硝基-7-氮杂螺[3.5]壬烷的合成：
将7-亚硝基-7-氮杂螺[3.5]壬-2-酮(16.0g，95.24mmol)在CH3OH(200mL)和1NHCl酸(20mL,醚溶液)中的溶液在室温下搅拌16小时。将反应混合物真空浓缩，残余物通过硅胶柱色谱(洗脱液：EA:PE＝1:5)纯化，得到产物(20.1g，收率：98.5％)。MS(ESI,m/e)[M+1]+215.0。
2,2-二甲氧基-7-亚硝基-7-氮杂螺[3.5]壬烷-6,6,8,8-d4的合成：
将2,2-二甲氧基-7-亚硝基-7-氮杂螺[3.5]壬烷(1.7g，7.944mmol)和t-BuONa(3.8g，39.720mmol)在D2O(10mL)和CD3OD(5mL)中的混合物在厚壁压力容器中在120℃和N2下搅拌20小时。将反应混合物冷却至室温并用DCM(50mL)萃取，用饱和NaCl溶液(10mL)洗涤。将有机层分离，浓缩并通过硅胶柱色谱(洗脱液：EA:PE＝1:5)纯化，得到粗产物。重复上述程序3次，得到2,2-二甲氧基-7-亚硝基-7-氮杂螺[3.5]壬烷-6,6,8,8-d4(400mg，收率：23.5％)。MS(ESI,m/e)[M+1]+219.0。
2,2-二甲氧基-7-氮杂螺[3.5]壬烷-6,6,8,8-d4的合成：
向2,2-二甲氧基-7-亚硝基-7-氮杂螺[3.5]壬烷-6,6,8,8-d4(400mg，1.835mmol)和t-BuONa(980mg，9.174mmol)在CD3OD(5mL)和D2O(5mL)中的混合物中分批加入镍-铝合金(900mg，9.174mmol)，将混合物在室温下搅拌0.5小时。过滤，将母液用DCM(20mL)稀释并用饱和NaCl(5mL)洗涤。将合并的有机层经Na2SO4干燥并真空浓缩，得到产物(350mg，粗品)。1HNMR(400MHz,DMSO-d6)δppm:3.01(s,6H),1.81(s,4H),1.38(s,4H)。MS(ESI,m/e)190.0。
A6-2：2-((1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-5-基)氧基)-4-(2,2-二甲氧基-7-氮杂螺 [3.5]壬-7-基-6,6,8,8-d4)苯甲酸甲酯
Figure BDA0003594909090000471
按照与A1-1类似的程序，通过用2,2-二甲氧基-7-氮杂螺[3.5]壬烷-6,6,8,8-d4代替2,2-二甲氧基-7-氮杂螺[3.5]壬烷来合成A6-2。MS(ESI,m/e)[M+1]+456.3。
按照与A4类似的程序，用(S)-2-((1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-5-基)氧基)-4-(2-(2-(2-异丙基苯基)吡咯烷-1-基)-7-氮杂螺[3.5]壬-7-基-6,6,8,8-d4)苯甲酸和(R)-3-(((1R,4R)-4-羟基环己基)甲基)-5-硝基-3,4-二氢-2H-苯并[b][1,4]噁嗪-7-磺酰胺合成所需化合物实施例8。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δppm:11.66(s,1H),8.76(s,1H),8.17(s,1H),8.02(s,1H),7.77(s,1H),7.49(d,J＝7.2Hz,3H),7.38-7.13(m,4H),6.66(d,J＝8.4Hz,1H),6.36(s,1H),6.16(s,1H),4.48(s,1H),4.16-3.99(m,2H),3.78(s,1H),2.40-2.28(m,1H),2.17-1.63(m,10H),1.54-1.05(m,21H),0.99-0.87(m,2H)。MS(ESI,m/e)[M+1]+923.1。
实施例A7：2-((1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-5-基)氧基)-N-(((R)-3-(((1r,4R)-4-羟基环己基)甲基)-5-硝基-3,4-二氢-2H-苯并[b][1,4]噁嗪-7-基)磺酰基)-4-(2-(2-(2-异丙基苯基)吡咯烷-1-基-2,5,5-d3)-7-氮杂螺[3.5]壬-7-基)苯甲酰胺
Figure BDA0003594909090000481
A7-1：2-(2-异丙基苯基)吡咯烷-2,5,5-d3
Figure BDA0003594909090000482
2-(2-异丙基苯基)-1-亚硝基吡咯烷的合成：
在约5℃下，向(S)-2-(2-异丙基苯基)吡咯烷盐酸盐(9.0g，40.0mmol)在H2O(100mL)和HCl酸(2N,12mL)中的溶液中滴加NaNO2(6.9g，100.0mmol)在H2O(30mL)中的溶液。加入后，将混合物在5℃下搅拌2小时，然后升温至室温并搅拌16小时。过滤所得沉淀物，将滤饼用H2O(50mL)洗涤，然后在50℃下真空干燥1小时，得到固体产物。(5.3g，收率：95.2％)。MS(ESI,m/e)[M+1]+219.0。
2-(2-异丙基苯基)-1-亚硝基吡咯烷-2,5,5-d3的合成：
将2-(2-异丙基苯基)-1-亚硝基吡咯烷(1.4g，6.42mmol)和t-BuONa(3.1g，32.11mmol)在D2O(9mL)和CD3OD(4.5mL)中的混合物在厚壁压力容器中在95℃、N2下搅拌22小时。冷却至室温后，将反应混合物用DCM(30mL)稀释，然后用饱和NaCl溶液(10mL)洗涤。分离有机层，用无水Na2SO4干燥，真空浓缩。残余物通过硅胶柱色谱(洗脱液：EA:PE＝1:5)纯化，得到粗产物。重复上述程序2次，得到2-(2-异丙基苯基)-1-亚硝基吡咯烷-2,5,5-d3(1.1g，收率：64.1％)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δppm:7.52(dd,J＝1.6Hz,7.6Hz,1H),7.26-7.21(m,1H),7.18–7.08(m,2H),3.45-3.00(m,2H),2.15-2.05(m,1H),1.81-1.67(m,2H),1.44-1.32(m,1H),1.18(d,J＝7.2Hz,6H)。MS(ESI,m/e)[M+1]+443.0。
A7-2：2-((1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-5-基)氧基)-4-(2-(2-(2-异丙基苯基)吡咯 烷-1-基-2,5,5-d3)-7-氮杂螺[3.5]壬-7-基)苯甲酸甲酯
Figure BDA0003594909090000491
按照与A1-4类似的程序，通过用2-(2-异丙基苯基)-1-亚硝基吡咯烷-2,5,5-d3代替(S)-2-(2-异丙基苯基)吡咯烷盐酸盐来合成该化合物。MS(ESI,m/e)[M+1]+582.4。
按照与A4类似的程序，用2-((1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-5-基)氧基)-4-(2-(2-(2-异丙基苯基)吡咯烷-1-基-2,5,5-d3)-7-氮杂螺[3.5]壬-7-基)苯甲酸和(R)-3-(((1R,4R)-4-羟基环己基)甲基)-5-硝基-3,4-二氢-2H-苯并[b][1,4]噁嗪-7-磺酰胺合成所需化合物(实施例A7)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δppm:11.72(s,1H),8.82(s,1H),8.23(s,1H),8.08(s,1H),7.91(s,1H),7.55(d,J＝8.0Hz,3H),7.44-7.22(m,4H),6.73(d,J＝8.8Hz,1H),6.43(s,1H),6.23(s,1H),4.55(s,1H),4.13(m,2H),3.85(s,1H),3.18-2.90(m,4H),2.48-2.34(m,1H),2.19-1.97(m,4H),1.93-1.75(m,4H),1.58-1.13(m,20H),1.07-0.94(m,2H)。MS(ESI,m/e)[M+1]+922.1。
实施例A8：2-((1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-5-基)氧基)-4-(2-((S)-2-(2-异丙基苯基)吡咯烷-1-基)-7-氮杂螺[3.5]壬-7-基)-N-((2-(N-吗啉基甲基)-7-硝基吲哚啉-5-基)磺酰基)苯甲酰胺
Figure BDA0003594909090000501
A8-1：2-(N-吗啉基甲基)-7-硝基吲哚啉-5-磺酰胺
Figure BDA0003594909090000502
9,9a-二氢噁唑并[3,4-a]吲哚-3(1H)-酮的合成：
在25℃下，向吲哚啉-2-基甲醇(1.0g，6.70mmol)在THF(15mL)中的溶液中加入CDI(1.2g，7.37mmol)。将混合物在60℃下搅拌3小时。TLC表明反应物已完全消耗。将反应混合物浓缩并用EtOAc萃取。将有机层用盐水洗涤，经Na2SO4干燥，过滤并真空浓缩。残余物通过硅胶柱色谱(洗脱液：PE:EA＝20:1至1:1)纯化，得到9,9a-二氢噁唑并[3,4-a]吲哚-3(1H)-酮(600.0mg，收率：51％)，为棕色固体。1H NMR(400MHz,CDCl3)δppm:7.47(d,J＝8.0Hz,1H),7.31-7.25(m,1H),7.22(d,J＝7.2Hz,1H),7.13-7.08(m,1H),4.89(t,1H),4.82-4.74(m,1H),4.32-4.22(m,1H),3.33-3.24(m,1H),3.29(dd,1H),3.10(dd,1H)。
3-氧代-9,9a-二氢-1H,3H-噁唑并[3,4-a]吲哚-7-磺酰氯的合成：
将9,9a-二氢噁唑并[3,4-a]吲哚-3(1H)-酮(600mg，3.42mmol)在氯磺酸(6mL)中的溶液在60℃下搅拌1小时。TLC表明反应物已完全消耗。将反应混合物在搅拌下倒入冰/H2O(20mL)中，然后过滤。将滤饼干燥，得到3-氧代-1,3,9,9a-四氢噁唑并[3,4-a]吲哚-7-磺酰氯(500mg，粗品)，为黄色固体。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δppm:7.56-7.41(d,J＝7.2Hz,2H),7.18(d,J＝8.4Hz,1H),4.87(m,1H),4.75(m,1H),4.35(m,1H),3.28-3.07(m,2H)。
5-硝基-3-氧代-9,9a-二氢-1H,3H-噁唑并[3,4-a]吲哚-7-磺酰氯的合成：
在0℃下，向3-氧代-1,3,9,9a-四氢噁唑并[3,4-a]吲哚-7-磺酰氯(4.3g，15.71mmol)在H2SO4(50mL)中的溶液中加入KNO3(3.2g，31.42mmol)。将混合物在0℃下搅拌1小时。将混合物在搅拌下倒入冰/水(300mL)中，然后过滤。将滤饼干燥，得到5-硝基-3-氧代-1,3,9,9a-四氢噁唑并[3,4-a]吲哚-7-磺酰氯(4.0g，粗品)，为黄色固体。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δppm:7.91(s,1H),7.81(s,1H),5.05-4.95(m,1H),4.82-4.79(m,1H),4.46(m,1H),3.38-3.23(m,2H)。
氨基甲酸(7-硝基-5-氨磺酰基吲哚啉-2-基)甲酯的合成：
在25℃下，向5-硝基-3-氧代-1,3,9,9a-四氢噁唑并[3,4-a]吲哚-7-磺酰氯(500mg，1.57mmol)在THF(10mL)中的溶液中加入NH3.H2O(2mL)。将混合物在25℃下搅拌1小时。TLC表明反应物已完全消耗。将混合物减压浓缩，得到氨基甲酸(7-硝基-5-氨磺酰基吲哚啉-2-基)甲酯(500mg，粗品)，为黄色固体，其未经进一步纯化即用于下一步骤。
2-(羟甲基)-7-硝基吲哚啉-5-磺酰胺的合成：
在25℃下，向氨基甲酸(7-硝基-5-氨磺酰基吲哚啉-2-基)甲酯(500mg，1.58mmol)在MeOH(10mL)中的溶液中加入NaOH(2.37mL，4.74mmol，2M)。将混合物在50℃下搅拌12小时。TLC表明反应物已完全消耗。向反应混合物中加入水(20mL)并用DCM(10mL)萃取。用HCl酸(1N)将水相调节至pH＝4-5。将混合物用EtOAc(20mL×4)萃取，将有机层真空浓缩，得到2-(羟甲基)-7-硝基吲哚啉-5-磺酰胺(400mg，粗品)，为黄色固体，1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δppm:8.48(s,1H),8.10(s,1H),7.53(s,1H),7.24(s,2H),4.20(m,1H),4.03(m,1H),3.51(m,2H),3.25-3.19(m,1H),2.99(m,1H)。
甲磺酸(7-硝基-5-氨磺酰基吲哚啉-2-基)甲酯的合成：
在0℃下，向2-(羟甲基)-7-硝基吲哚啉-5-磺酰胺(2.0g，7.32mmol)在THF(50mL)中的溶液中加入TEA(1.5g，14.64mmol)和MsCl(1.3g，10.98mmol)。将混合物在25℃下搅拌3小时。TLC表明反应物已完全消耗。将反应混合物倒入饱和NH4Cl(100mL)中并用EtOAc(100mL×2)萃取。将有机层真空浓缩，得到甲磺酸(7-硝基-5-氨磺酰基吲哚啉-2-基)甲酯(2.5g，粗品)，为黄色固体，其未经进一步纯化即用于下一步骤。
2-(N-吗啉基甲基)-7-硝基吲哚啉-5-磺酰胺的合成：
在25℃下，向甲磺酸(7-硝基-5-氨磺酰基吲哚啉-2-基)甲酯(2.5g，7.12mmol)在MeCN(25mL)中的溶液中加入吗啉(6mL)和K2CO3(3.0g，21.35mmol)。将混合物在80℃下搅拌12小时。TLC表明反应物已完全消耗。将反应混合物过滤并减压浓缩。残余物通过硅胶柱色谱(洗脱液：PE:EA＝20:1至0:1)纯化，得到2-(N-吗啉基甲基)-7-硝基吲哚啉-5-磺酰胺(683mg，收率：28％)，为黄色固体。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δppm:8.30(s,1H),8.12(s,1H),7.61-7.52(m,1H),7.25(s,2H),4.36(m,1H),3.57(m,4H),3.28-3.18(m,1H),2.98(m,1H),2.61-2.56(m,1H),2.44(br s,4H),2.40-2.36(m,1H)。MS(ESI,m/e)[M+1]+343.0。
A8：2-((1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-5-基)氧基)-4-(2-((S)-2-(2-异丙基苯基)吡咯 烷-1-基)-7-氮杂螺[3.5]壬-7-基)-N-((2-(N-吗啉基甲基)-7-硝基吲哚啉-5-基)磺酰基) 苯甲酰胺
将(S)-2-((1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-5-基)氧基)-4-(2-(2-(2-异丙基苯基)吡咯烷-1-基)-7-氮杂螺[3.5]壬-7-基)苯甲酸(188mg，0.33mmol)和2-(N-吗啉基甲基)-7-硝基吲哚啉-5-磺酰胺(114mg，0.33mmol)、EDCI(76mg，0.40mmol)、DMAP(122mg，1.0mmol)、TEA(101mg，1.0mmol)在DCM(20mL)中的混合物加热回流过夜。将反应物用AcOH的水溶液(1/10，50mL)淬灭，用DCM(50mL)萃取，用NaHCO3(水溶液，100mL)、盐水(50mL)洗涤，经Na2SO4干燥，真空浓缩。残余物通过硅胶柱色谱(洗脱液：DCM:MeOH＝50:1至20:1)纯化，得到粗品，其通过Pre-TLC(洗脱液：DCM:MeOH＝20:1)纯化，得到所需化合物(42mg，14.31％)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δppm:11.70(s,1H),11.38(s,1H),8.47(s,1H),8.23(s,1H),8.04(s,1H),7.95-7.76(m,1H),7.54-7.47(m,4H),7.39-7.22(m,3H),6.69(d,J＝8.8Hz,1H),6.37(s,1H),6.17(s,1H),4.83-4.72(m,1H),4.42-4.28(m,1H),3.87-3.44(m,6H),3.32-3.23(m,1H),3.19-2.80(m,8H),2.49-2.32(m,4H),2.22-1.92(m,5H),1.47-1.32(m,6H),1.28-1.20(m,5H),1.12(d,J＝5.6Hz,1H)。MS(ESI,m/e)[M+1]+890.0。
实施例B1：2-(3,4-二氢-2H-吡咯并[3',2':5,6]吡啶并[2,3-b][1,4]氧氮杂环庚烯-1(7H)-基)-N-((4-((((1r,4r)-4-羟基-4-甲基环己基)甲基)氨基)-3-硝基苯基)磺酰基)-4-(2-((S)-2-(2-异丙基苯基)吡咯烷-1-基)-7-氮杂螺[3.5]壬-7-基)苯甲酰胺
Figure BDA0003594909090000541
B1-1：(S)-2-(2-(2-异丙基苯基)吡咯烷-1-基)-7-氮杂螺[3.5]壬烷-7-甲酸叔丁 酯
Figure BDA0003594909090000542
向(S)-2-(2-异丙基苯基)吡咯烷盐酸盐(5.0，22.7mmol)、2-氧代-7-氮杂螺[3.5]壬烷-7-甲酸叔丁酯(5.4g，22.7mmol)在DCM(50mL)中的溶液中加入NaBH(OAc)3(14.4g，68mmol)。将混合物在室温下搅拌18小时。将反应混合物倒入水(30mL)中。分离有机相并用盐水(10mL)洗涤，经无水Na2SO4干燥，真空浓缩，得到粗产物(8.5g)，其未经进一步纯化即用于下一步骤。MS(ESI)m/e[M+1]+412.9。
B1-2：(S)-2-(2-(2-异丙基苯基)吡咯烷-1-基)-7-氮杂螺[3.5]壬烷盐酸盐
Figure BDA0003594909090000543
向(S)-2-(2-(2-异丙基苯基)吡咯烷-1-基)-7-氮杂螺[3.5]壬烷-7-甲酸叔丁酯(8.5g)在DCM(30mL)中的溶液中加入HCl的二噁烷溶液(4M，20mL)。将混合物在室温下搅拌8小时。移除溶剂后，将残余物倒入EA(20mL)中并在室温下搅拌20分钟。过滤并在空气中干燥后收集产物(8.0g)，为固体。MS(ESI)m/e[M+1]+312.9。
B1-3：(S)-2-溴-4-(2-(2-(2-异丙基苯基)吡咯烷-1-基)-7-氮杂螺[3.5]壬-7- 基)苯甲酸甲酯
Figure BDA0003594909090000551
向(S)-2-(2-(2-异丙基苯基)吡咯烷-1-基)-7-氮杂螺[3.5]壬烷(1.0g，3.0mmol)和2-溴-4-氟苯甲酸甲酯(660mg，3.0mmol)在DMF(30ml)中的溶液中加入Na2CO3(3.0g，30mmol)。在N2保护下将混合物在100℃下搅拌18小时。将反应物冷却至室温，然后倒入水(30mL)中，用EA(50mL)萃取。分离有机相并用盐水(10mL)洗涤，经无水Na2SO4干燥，真空浓缩。残余物通过硅胶柱色谱(洗脱液：PE:EA ＝10:1)纯化，得到800mg产物。MS(ESI,m/e)[M+1]+524.9。
B1-4：7-((2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基)甲基)-1,3,4,7-四氢-2H-吡咯并[3',2': 5,6]吡啶并[2,3-b][1,4]氧氮杂环庚烯
Figure BDA0003594909090000552
N-(3-((5-溴-1-((2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基)甲基)-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶- 6-基)氧基)丙基)-4-甲基苯磺酰胺的合成：
在0℃下，向N-(3-羟丙基)-4-甲基苯磺酰胺(5.3g，23.17mmol)在THF(200mL)中的溶液中分批加入NaH(3.7g，92.64mmol)。将混合物在室温下搅拌1小时。然后向混合物中加入5-溴-6-氟-1-((2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基)甲基)-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶(4g，11.58mmol)。在室温下搅拌过夜后，将反应混合物倒入饱和NH4Cl水溶液(1000mL)中，然后用乙酸乙酯(500mL×2)萃取。将合并的有机相用盐水洗涤，经无水Na2SO4干燥，真空浓缩。残余物通过硅胶柱色谱(洗脱液：PE:EA＝10:1至4:1)纯化，得到2.6g产物。MS(ESI,m/e)[M+1]+553.8。
1-甲苯磺酰基-7-((2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基)甲基)-1,3,4,7-四氢-2H-吡咯 并[3',2':5,6]吡啶并[2,3-b][1,4]氧氮杂环庚烷的合成：
向N-(3-((5-溴-1-((2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基)甲基)-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-6-基)氧基)丙基)-4-甲基苯磺酰胺(2.52g，4.55mmol)在DMSO(50mL)中的溶液中加入吡啶甲酸(449mg，3.65mmol)、CuI(1.04g，5.46mmol)、K2CO3(1.88g，13.65mmol)。将混合物在140℃下搅拌5小时。将反应混合物冷却至室温，然后用EA(200mL)稀释，用盐水洗涤，经无水Na2SO4干燥，真空浓缩。残余物通过硅胶柱色谱(洗脱液：PE:EA＝10:1至4:1)纯化，得到950mg产物。MS(ESI,m/e)[M+1]+473.9。
7-((2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基)甲基)-1,3,4,7-四氢-2H-吡咯并[3',2':5,6] 吡啶并[2,3-b][1,4]氧氮杂环庚烷(B1-4)的合成：
向1-甲苯磺酰基-7-((2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基)甲基)-1,3,4,7-四氢-2H-吡咯并[3',2':5,6]吡啶并[2,3-b][1,4]氧氮杂环庚烯(950mg，2mmol)在MeOH(20mL)中的溶液中加入Mg粉(10g，411mmol)。将混合物在回流下搅拌1小时。将混合物倒入饱和NH4Cl水溶液(100mL)中，用EA(100ml)萃取。将有机相用盐水洗涤，经无水Na2SO4干燥，真空浓缩。残余物通过硅胶柱色谱(洗脱液：PE:EA＝2:1)纯化，得到550mg产物。MS(ESI,m/e)[M+1]+320.0。
B1-5：(S)-4-(2-(2-(2-异丙基苯基)吡咯烷-1-基)-7-氮杂螺[3.5]壬-7-基)-2- (7-((2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基)甲基)-3,4-二氢-2H-吡咯并[3',2':5,6]吡啶并[2,3- b][1,4]氧氮杂环庚烯-1(7H)-基)苯甲酸甲酯
Figure BDA0003594909090000561
向7-((2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基)甲基)-1,3,4,7-四氢-2H-吡咯并[3',2':5,6]吡啶并[2,3-b][1,4]氧氮杂环庚烷(250mg，0.783mmol)在甲苯(30ml)中的溶液中加入(S)-2-溴-4-(2-(2-(2-异丙基苯基)吡咯烷-1-基)-7-氮杂螺[3.5]壬-7-基)苯甲酸甲酯(616.8mg，1.17mmol)、Cs2CO3(763mg，2.349mmol)、Xant Phos G2(347mg，0.392mmol)。在N2保护下将混合物在120℃下搅拌2天。将反应混合物冷却至室温并用盐水洗涤，经无水Na2SO4干燥，真空浓缩。残余物通过硅胶柱色谱(洗脱液：PE:EA＝2:1)纯化，得到390mg产物(收率：65％)。MS(ESI,m/e)[M+1]+764.3。
B1-6：(S)-2-(3,4-二氢-2H-吡咯并[3',2':5,6]吡啶并[2,3-b][1,4]氧氮杂环庚 烯-1(7H)-基)-4-(2-(2-(2-异丙基苯基)吡咯烷-1-基)-7-氮杂螺[3.5]壬-7-基)苯甲酸甲 酯
Figure BDA0003594909090000571
向(S)-4-(2-(2-(2-异丙基苯基)吡咯烷-1-基)-7-氮杂螺[3.5]壬-7-基)-2-(7-((2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基)甲基)-3,4-二氢-2H-吡咯并[3',2':5,6]吡啶并[2,3-b][1,4]氧氮杂环庚烯-1(7H)-基)苯甲酸甲酯(390mg，0.615mmol)在THF(10mL)中的溶液中加入TBAF(15mL)(1M的THF溶液)和乙烷-1,2-二胺(10mL)。将混合物在70℃下搅拌过夜。将混合物冷却至室温，然后用EA(100mL)稀释，用盐水洗涤，经无水Na2SO4干燥，真空浓缩。残余物通过硅胶柱色谱(洗脱液：PE:EA＝1:2至1:4)纯化，得到250mg产物(收率：64％)。MS(ESI,m/e)[M+1]+634.5。
B1-7：(S)-2-(3,4-二氢-2H-吡咯并[3',2':5,6]吡啶并[2,3-b][1,4]氧氮杂环庚 烯-1(7H)-基)-4-(2-(2-(2-异丙基苯基)吡咯烷-1-基)-7-氮杂螺[3.5]壬-7-基)苯甲酸
Figure BDA0003594909090000581
向(S)-2-(3,4-二氢-2H-吡咯并[3',2':5,6]吡啶并[2,3-b][1,4]氧氮杂环庚烯-1(7H)-基)-4-(2-(2-(2-异丙基苯基)吡咯烷-1-基)-7-氮杂螺[3.5]壬-7-基)苯甲酸甲酯(250mg，0.394mmol)在THF(6mL)和MeOH(6mL)中的溶液中加入6N NaOH水溶液(6mL)。将混合物在60℃下搅拌过夜。将反应混合物冷却至室温，用1N HCl酸调节至PH＝5，用DCM(100mL)萃取。将有机相用盐水洗涤，经无水Na2SO4干燥，真空浓缩，得到220mg产物(粗品)。MS(ESI,m/e)[M+1]+620.4。
2-(3,4-二氢-2H-吡咯并[3',2':5,6]吡啶并[2,3-b][1,4]氧氮杂环庚烯-1(7H)-基)-N-((4-((((1r,4r)-4-羟基-4-甲基环己基)甲基)氨基)-3-硝基苯基)磺酰基)-4-(2-((S)-2-(2-异丙基苯基)吡咯烷-1-基)-7-氮杂螺[3.5]壬-7-基)苯甲酰胺(实施例B1)
向(S)-2-(3,4-二氢-2H-吡咯并[3',2':5,6]吡啶并[2,3-b][1,4]氧氮杂环庚烯-1(7H)-基)-4-(2-(2-(2-异丙基苯基)吡咯烷-1-基)-7-氮杂螺[3.5]壬-7-基)苯甲酸(80mg，0.129mmol)在DCM(20ml)中的溶液中加入4-((((1R,4R)-4-羟基-4-甲基环己基)甲基)氨基)-3-硝基苯磺酰胺(66mg，0.1935mmol)、EDCI(49mg，0.258mmol)、DMAP(63mg，0.516mmol)和TEA(26mg，0.258mmol)。将混合物在室温下搅拌过夜。将混合物真空蒸发。残余物通过制备型HPLC纯化，得到12mg产物(收率：9.8％)。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δppm:11.91(s,1H),11.30(s,1H),10.43(s,1H),8.56-8.48(m,1H),8.46(d,J＝2.2Hz,1H),7.97-7.78(m,1H),7.63-7.55(m,1H),7.48(d,J＝8.9Hz,1H),7.44-7.15(m,4H),6.90(s,1H),6.88-6.80(m,2H),6.78-6.66(m,2H),6.12(s,1H),4.87-4.68(m,1H),4.26(s,1H),4.24-4.15(m,2H),4.01-3.85(m,1H),3.78-3.61(m,1H),3.57-3.49(m,2H),3.26-3.20(m,3H),3.15-3.03(m,3H),2.22-2.06(m,4H),2.04-1.93(m,3H),1.74-1.25(m,19H),1.16-1.11(m,4H),1.11-1.08(s,3H)。MS(ESI,m/e)[M+1]+944.9。
实施例B2：(S)-2-(3,4-二氢-2H-吡咯并[3',2':5,6]吡啶并[2,3-b][1,4]氧氮杂环庚烯-1(7H)-基)-N-((4-(((4-氟四氢-2H-吡喃-4-基)甲基)氨基)-3-硝基苯基)磺酰基)-4-(2-(2-(2-异丙基苯基)吡咯烷-1-基)-7-氮杂螺[3.5]壬-7-基)苯甲酰胺
Figure BDA0003594909090000591
按照与B1类似的程序，用(2-异丙基苯基)吡咯烷-1-基)-7-氮杂螺[3.5]壬-7-基)苯甲酸和4-(((4-氟四氢-2H-吡喃-4-基)甲基)氨基)-3-硝基苯磺酰胺合成所需化合物。1HNMR(400MHz,DMSO-d6)δppm:11.93(s,1H),11.26(s,1H),10.38(s,1H),8.64-8.53(m,1H),8.52-8.38(m,1H),7.95-7.75(m,1H),7.67-7.60(m,1H),7.52-7.44(m,1H),7.44-7.10(m,5H),7.10-7.00(m,1H),6.90(s,1H),6.80-6.65(m,2H),6.20-6.05(m,1H),4.95-4.70(m,1H),4.30-4.10(m,2H),3.99-3.85(m,1H),3.85-3.59(m,5H),3.59-3.44(m,4H),3.25-2.92(m,6H),2.48-2.36(m,1H),2.24-1.90(m,7H),1.90-1.67(m,5H),1.60-1.35(m,7H),1.17-1.07(m,3H)。MS(ESI,m/e)[M+1]+934.9。
实施例B3：2-(2,3-二氢吡咯并[3',2':5,6]吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-1(6H)-基)-N-((4-((((1r,4r)-4-羟基-4-甲基环己基)甲基)氨基)-3-硝基苯基)磺酰基)-4-(2-((S)-2-(2-异丙基苯基)吡咯烷-1-基)-7-氮杂螺[3.5]壬-7-基)苯甲酰胺
Figure BDA0003594909090000601
B3-1：6-((2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基)甲基)-1,2,3,6-四氢吡咯并[3',2':5,6] 吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪
Figure BDA0003594909090000602
5-溴-6-氟-1-((2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基)甲基)-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶的合成：
在0℃下，向5-溴-6-氟-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶(5.0g，23.2mmol)在DMF(50ml)中的溶液中分批加入NaOH(1400mg，34.8mmol)。将混合物在0℃下搅拌1小时。然后将(2-(氯甲氧基)乙基)三甲基硅烷(4.6g，28mmol)滴加到混合物中。将反应混合物在20℃下搅拌4小时。将反应混合物真空浓缩，通过硅胶柱色谱(洗脱液：PE:EA＝20:1)纯化，得到5.0g目标产物。MS(ESI,m/e)[M+1]+499.9。
N-(6-(叔丁氧基)-1-((2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基)甲基)-1H-吡咯并[2,3-b]吡 啶-5-基)-1,1-二苯甲酮亚胺的合成：
向5-溴-6-氟-1-((2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基)甲基)-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶(3.0g，8.7mmol)、二苯甲酮亚胺(diphenylmethanimine)(1.88g，10.4mmol)、Pd2(dba)3(800mg，0.87mmol)、t-BuOK(3.18g，26.1mmol)在二噁烷(40mL)中的混合物中加入xantphos(924mg，1.6mmol)。将混合物在100℃、N2气氛下搅拌18小时。将反应混合物冷却至室温并过滤。将滤液浓缩，通过硅胶柱色谱(洗脱液：PE:EA＝60:1至20:1)纯化，得到3.0g目标产物。MS(ESI,m/e)[M+1]+499.9。
5-氨基-1-((2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基)甲基)-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-6-醇的 合成：
向N-(6-(叔丁氧基)-1-((2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基)甲基)-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-5-基)-1,1-二苯甲酮亚胺(6.0g，12mmol)在二噁烷(40ml)中的溶液中加入HCl的二噁烷溶液(9mL，4M)。将混合物在0℃下搅拌4小时。将反应混合物用饱和Na2CO3水溶液(30mL)淬灭，然后用H2O(30mL)和EA(50mL)稀释。分离有机相，用盐水(10mL)洗涤，经Na2SO4干燥，浓缩，通过硅胶柱色谱(洗脱液：DCM:MeOH＝50:1)纯化，得到1.3g目标产物。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δppm:6.97(s,1H),6.94(s,1H),6.12(s,1H),5.38(s,2H),4.42(br,1H),3.48-3.36(m,2H),0.84-0.71(m,2H),0.65-0.13(m,9H)。MS(ESI,m/e)[M+1]+279.9。
2-((5-氨基-1-((2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基)甲基)-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-6- 基)氧基)乙酸乙酯的合成：
向5-氨基-1-((2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基)甲基)-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-6-醇(1400mg，5.0mmol)和2-溴乙酸乙酯(835mg，5.0mmol)在CH3CN(50mL)中的溶液中加入CS2CO3(2.4g，7.5mmol)。在N2保护下将混合物在70℃下搅拌4小时。将反应混合物浓缩，并在搅拌下将H2O(30mL)和EA(50mL)加入到所得残余物中。将有机相分离并用盐水(10mL)洗涤，经Na2SO4干燥，浓缩并通过硅胶柱色谱(洗脱液：PE:EA ＝3:1)纯化，得到750mg目标产物。MS(ESI,m/e)[M+1]+365.9。
6-((2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基)甲基)-1,6-二氢吡咯并[3',2':5,6]吡啶并[2, 3-b][1,4]噁嗪-2(3H)-酮的合成：
向2-((5-氨基-1-((2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基)甲基)-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-6-基)氧基)乙酸乙酯(750mg，2.0mmol)在EtOH(20mL)中的溶液中加入CS2CO3(1.3g，4mmol)。在N2保护下将混合物在90℃下搅拌18小时。将反应物冷却并用H2O(30mL)淬灭，然后用EA(50ml×2)萃取。将有机相用盐水(10mL)洗涤，经Na2SO4干燥，浓缩，通过硅胶柱色谱(洗脱液：PE:EA＝3:1)纯化，得到300mg目标产物。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δppm:10.73(s,1H),7.47-7.38(m,2H),6.43(d,J＝3.3Hz,1H),5.46(s,2H),4.72(s,2H),3.48(t,J＝7.9Hz,2H),0.81(t,J＝7.9Hz,3H),0.69(s,9H)。MS(ESI,m/e)[M+1]+319.9。
6-((2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基)甲基)-1,2,3,6-四氢吡咯并[3',2':5,6]吡啶 并[2,3-b][1,4]噁嗪的合成：
向6-((2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基)甲基)-1,6-二氢吡咯并[3',2':5,6]吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-2(3H)-酮(300mg，0.65mmol)在THF(5mL)中的溶液中加入BH3(3mL，2M的THF溶液)。在N2保护下将混合物在室温下搅拌4小时。将反应物用H2O(30mL)淬灭，并用EA(50mL×2)萃取。将有机相用盐水(10mL)洗涤，经Na2SO4干燥，浓缩，通过硅胶柱色谱(洗脱液：PE:EA＝3:1)纯化，得到150mg目标产物。MS(ESI,m/e)[M+1]+306.0。
B3-2：(S)-4-(2-(2-(2-异丙基苯基)吡咯烷-1-基)-7-氮杂螺[3.5]壬-7-基)-2- (6-((2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基)甲基)-2,3-二氢吡咯并[3',2':5,6]吡啶并[2,3-b][1, 4]噁嗪-1(6H)-基)苯甲酸甲酯
Figure BDA0003594909090000621
按照与B1-5类似的程序，通过用6-((2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基)甲基)-1,2,3,6-四氢吡咯并[3',2':5,6]吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪代替7-((2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基)甲基)-1,3,4,7-四氢-2H-吡咯并[3',2':5,6]吡啶并[2,3-b][1,4]氧氮杂环庚烷来合成B3-2。MS(ESI,m/e)[M+1]+750.2。
B3-3：(S)-2-(2,3-二氢吡咯并[3',2':5,6]吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-1(6H)- 基)-4-(2-(2-(2-异丙基苯基)吡咯烷-1-基)-7-氮杂螺[3.5]壬-7-基)苯甲酸甲酯
Figure BDA0003594909090000631
按照与B1-6类似的程序合成B3-3。MS(ESI,m/e)[M+1]+620.3。
B3-4：(S)-2-(2,3-二氢吡咯并[3',2':5,6]吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-1(6H)- 基)-4-(2-(2-(2-异丙基苯基)吡咯烷-1-基)-7-氮杂螺[3.5]壬-7-基)苯甲酸
Figure BDA0003594909090000632
按照与B1-7类似的程序合成B3-4。MS(ESI,m/e)[M+1]+606.2。
B3：2-(2,3-二氢吡咯并[3',2':5,6]吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-1(6H)-基)-N- ((4-((((1r,4r)-4-羟基-4-甲基环己基)甲基)氨基)-3-硝基苯基)磺酰基)-4-(2-((S)-2- (2-异丙基苯基)吡咯烷-1-基)-7-氮杂螺[3.5]壬-7-基)苯甲酰胺
按照与B1类似的程序，用(2-异丙基苯基)吡咯烷-1-基)-7-氮杂螺[3.5]壬-7-基)苯甲酸和4-((((1R,4R)-4-羟基-4-甲基环己基)甲基)氨基)-3-硝基苯磺酰胺合成所需化合物。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δppm:12.18(s,1H),11.02(s,1H),8.48(s,1H),8.35(s,1H),7.57–7.54(m,2H),7.32(s,2H),7.20(s,1H),7.12(s,1H),7.01(s,1H),6.81(s,1H),6.74–6.71(m,2H),6.58(s,1H),5.98–5.92(m,1H),4.44(s,2H),4.25(s,1H),3.59–3.56(m,3H),3.31(s,2H),3.22(s,3H),3.16(s,2H),3.09–3.07(m,3H),2.17(s,1H),1.77(s,2H),1.69–1.67(m,2H),1.57–1.54(m,3H),1.45(s,2H),1.39–1.37(m,3H),1.35–1.33(m,1H),1.23(s,3H),1.18–1.12(m,7H),1.10(s,3H)。MS(ESI)m/e[M+1]+930.9。
实施例B4：(S)-2-(2,3-二氢吡咯并[3',2':5,6]吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-1(6H)-基)-N-((4-(((4-氟四氢-2H-吡喃-4-基)甲基)氨基)-3-硝基苯基)磺酰基)-4-(2-(2-(2-异丙基苯基)吡咯烷-1-基)-7-氮杂螺[3.5]壬-7-基)苯甲酰胺
Figure BDA0003594909090000641
按照与实施例B1类似的程序，用(S)-2-(2,3-二氢吡咯并[3',2':5,6]吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-1(6H)-基)-4-(2-(2-(2-异丙基苯基)吡咯烷-1-基)-7-氮杂螺[3.5]壬-7-基)苯甲酸和4-(((4-氟四氢-2H-吡喃-4-基)甲基)氨基)-3-硝基苯磺酰胺合成所需化合物。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δppm:12.18(s,1H),11.02(s,1H),10.36(s,1H),8.57(s,1H),8.37(s,1H),7.84(s,1H),7.56(d,J＝8.8Hz,1H),7.38-7.36(m,4H),7.03(s,1H),6.86-6.84(m,2H),6.73(s,1H),6.58(s,1H),5.94(s,1H),4.77(s,1H),4.45(s,2H),3.89(s,1H),3.81-3.47(m,11H),3.15-3.12(m,6H),2.19-1.99(m,5H),1.82-1.80(m,5H),1.49-1.32(m,7H),1.13-1.12(m,4H)。MS(ESI)m/e[M+1]+922.3。
实施例B5：N-((4-((((1r,4r)-4-羟基-4-甲基环己基)甲基)氨基)-3-硝基苯基)磺酰基)-4-(2-((S)-2-(2-异丙基苯基)吡咯烷-1-基)-7-氮杂螺[3.5]壬-7-基)-2-((R)-3-甲基-2,3-二氢吡咯并[3',2':5,6]吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-1(6H)-基)苯甲酰胺
Figure BDA0003594909090000651
B5-1：(R)-3-甲基-6-((2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基)甲基)-1,2,3,6-四氢吡咯并 [3',2':5,6]吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪
Figure BDA0003594909090000652
(R)-(2-羟丙基)氨基甲酸叔丁酯的合成：
在25℃下，向(R)-1-氨基丙-2-醇(25g，332.85mmol)在DCM(250mL)中的溶液中加入Boc2O(87.17g，399.42mmol)和TEA(50.52g，499.27mmol)。将混合物在25℃下搅拌16小时。TLC表明反应物已完全消耗。将混合物用水淬灭，然后用DCM(200mL×2)萃取。将有机层干燥，过滤并真空浓缩。残余物通过硅胶柱色谱(洗脱液：PE:EA＝5:1至1:1)纯化，得到(R)-(2-羟丙基)氨基甲酸叔丁酯(50g，粗品)，其直接用于下一步骤。
(R)-(2-((5-溴-1-((2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基)甲基)-1H-吡咯并[2,3-b]吡 啶-6-基)氧基)丙基)氨基甲酸叔丁酯的合成：
向5-溴-6-氟-1-((2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基)甲基)-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶(20g，57.82mmol)在THF(200mL)中的溶液中加入(R)-(2-羟丙基)氨基甲酸叔丁酯(15g，86.89mmol)和NaH(9.27g，231.69mmol)。将混合物在25℃下搅拌12小时。TLC表明反应物已完全消耗。将混合物倒入NH4Cl水溶液(1M，100mL)中，并用EA(200mL×3)萃取。将合并的有机层经无水Na2SO4干燥，过滤并真空浓缩。残余物通过硅胶柱色谱(洗脱液：PE:EA＝20:1至5:1)纯化，得到(R)-(2-((5-溴-1-((2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基)甲基)-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-6-基)氧基)丙基)氨基甲酸叔丁酯(2.2g，收率：7.8％)。MS(ESI,m/e)[M+1]+500.2。
(R)-3-甲基-6-((2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基)甲基)-2,3-二氢吡咯并[3',2':5, 6]吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-1(6H)-甲酸叔丁酯的合成：
在氩气下(手套箱)，向(R)-(2-((5-溴-1-((2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基)甲基)-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-6-基)氧基)丙基)氨基甲酸叔丁酯(2.2g，4.40mmol)在甲苯(40mL)中的溶液中加入Xphos(419mg，879.12umol)、t-BuONa(844.86mg，8.79mmol)和Pd2(dba)3(402.51mg，439.56umol)。将混合物在90℃下搅拌12小时。TLC表明反应物已完全消耗。将反应混合物冷却至室温，然后用H2O(50mL)稀释，用EA(50mL×2)萃取。将合并的有机层经无水Na2SO4干燥，过滤并真空浓缩。残余物通过硅胶柱色谱(洗脱液：PE:EA＝20:1至5:1)纯化，得到(R)-3-甲基-6-((2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基)甲基)-2,3-二氢吡咯并[3',2':5,6]吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-1(6H)-甲酸叔丁酯(940mg，收率：52％)。MS(ESI,m/e)[M+1]+420.2。
(R)-3-甲基-6-((2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基)甲基)-1,2,3,6-四氢吡咯并[3', 2':5,6]吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪：
在25℃下，向(R)-3-甲基-6-((2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基)甲基)-2,3-二氢吡咯并[3',2':5,6]吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-1(6H)-甲酸叔丁酯(940mg，2.24mmol)在DCM(20mL)中的溶液中加入ZnBr2(1.51g，6.72mmol)。将混合物在25℃下搅拌12小时。TLC表明反应物已完全消耗。将反应混合物用EA(50mL)稀释，然后倒入Na2CO3水溶液(20mL)中。分离有机层，将水层用EA(50mL×2)萃取。将合并的有机层经无水Na2SO4干燥，过滤并真空浓缩。残余物通过硅胶柱色谱(洗脱液：PE:EA＝20:1至5:1)纯化，得到(R)-3-甲基-6-((2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基)甲基)-1,2,3,6-四氢吡咯并[3',2':5,6]吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪(530mg，收率：74％)，为固体。1H NMR(400MHz,CDCl3)δppm:7.16(s,1H),7.11(d,J＝3.2Hz,1H,),6.29(d,J＝3.6Hz,1H),5.55(s,2H),4.47(s,1H),3.72(br,1H),3.57-3.48(m,2H),3.36(dd,J＝11.6,2.4Hz,1H),3.12(dd,J＝11.6,8.0Hz,1H),1.47(d,J＝6.0Hz,3H),0.92-0.85(m,2H),0.25-0.06(s,9H)。MS(ESI,m/e)[M+1]+320.3。
B5-2：4-(2-((S)-2-(2-异丙基苯基)吡咯烷-1-基)-7-氮杂螺[3.5]壬-7-基)-2- ((R)-3-甲基-6-((2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基)甲基)-2,3-二氢吡咯并[3',2':5,6]吡啶 并[2,3-b][1,4]噁嗪-1(6H)-基)苯甲酸甲酯
Figure BDA0003594909090000671
向(S)-2-溴-4-(2-(2-(2-异丙基苯基)吡咯烷-1-基)-7-氮杂螺[3.5]壬-7-基)苯甲酸甲酯(800mg，1.8mmol)和(R)-3-甲基-6-((2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基)甲基)-1,2,3,6-四氢吡咯并[3',2':5,6]吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪(400mg，1.25mmol)、CS2CO3(1.5g，5mmol)在二噁烷(30mL)中的溶液中加入xantphos Pd G2(60mg)。在N2保护下将混合物在110℃下搅拌过夜。将反应物冷却至室温并用H2O(30mL)淬灭。用EA(50mL×2)萃取混合物，将有机相用盐水(10mL)洗涤，经Na2SO4干燥，真空浓缩。残余物通过硅胶柱色谱(洗脱液：PE:EA＝5:1)纯化，得到B5-2(1.0g)。MS(ESI,m/e)[M+1]+763.9。
B5-3：2-((R)-6-(羟甲基)-3-甲基-2,3-二氢吡咯并[3',2':5,6]吡啶并[2,3-b] [1,4]噁嗪-1(6H)-基)-4-(2-((S)-2-(2-异丙基苯基)吡咯烷-1-基)-7-氮杂螺[3.5]壬-7- 基)苯甲酸甲酯
Figure BDA0003594909090000681
向4-(2-((S)-2-(2-异丙基苯基)吡咯烷-1-基)-7-氮杂螺[3.5]壬-7-基)-2-((R)-3-甲基-6-((2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基)甲基)-2,3-二氢吡咯并[3',2':5,6]吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-1(6H)-基)苯甲酸甲酯(1.0g，1.3mmol)在DCM(50ml)中的溶液中加入TFA(5mL)。将混合物在室温下搅拌2小时，然后倒入饱和NaHCO3水溶液(30mL)中。分离有机相并用盐水(10mL)洗涤，经Na2SO4干燥，真空浓缩。残余物通过硅胶柱色谱(洗脱液：PE:EA＝3:1)纯化，得到B5-3(900mg)。MS(ESI,m/e)[M+1]+663.9。
B5-4：4-(2-((S)-2-(2-异丙基苯基)吡咯烷-1-基)-7-氮杂螺[3.5]壬-7-基)-2- ((R)-3-甲基-2,3-二氢吡咯并[3',2':5,6]吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-1(6H)-基)苯甲酸甲 酯
Figure BDA0003594909090000682
向2-((R)-6-(羟甲基)-3-甲基-2,3-二氢吡咯并[3',2':5,6]吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-1(6H)-基)-4-(2-((S)-2-(2-异丙基苯基)吡咯烷-1-基)-7-氮杂螺[3.5]壬-7-基)苯甲酸甲酯(900mg，1.35mmol)在MeOH(20mL)中的溶液中加入K2CO3(375mg，2.7mmol)。将混合物在室温下搅拌2小时。将反应物倒入水(30mL)中并用DCM(60mL×2)萃取。将合并的有机相用盐水(10mL)洗涤，经Na2SO4干燥，真空浓缩。残余物通过硅胶柱色谱(洗脱液：DCM:MeOH＝50:1)纯化，得到B5-4(500mg)，为白色固体。MS(ESI,m/e)[M+1]+634.0。
B5-5：4-(2-((S)-2-(2-异丙基苯基)吡咯烷-1-基)-7-氮杂螺[3.5]壬-7-基)-2- ((R)-3-甲基-2,3-二氢吡咯并[3',2':5,6]吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-1(6H)-基)苯甲酸
Figure BDA0003594909090000691
向4-(2-((S)-2-(2-异丙基苯基)吡咯烷-1-基)-7-氮杂螺[3.5]壬-7-基)-2-((R)-3-甲基-2,3-二氢吡咯并[3',2':5,6]吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-1(6H)-基)苯甲酸甲酯(500mg，0.78mmol)在THF(2mL)和MeOH(2mL)中的溶液中加入NaOH水溶液(6N,2mL)。将混合物在50℃下搅拌18小时。将反应混合物冷却至室温，然后用浓HCl酸调节PH至～4。用DCM(50mL×2)萃取混合物。将合并的有机相用盐水洗涤，经Na2SO4干燥，真空浓缩。残余物通过硅胶柱色谱(洗脱液：DCM:MeOH＝20:1)纯化，得到B5-5(250mg)。MS(ESI,m/e)[M+1]+620.0。
然后按照与实施例B1类似的程序，用4-(2-((S)-2-(2-异丙基苯基)吡咯烷-1-基)-7-氮杂螺[3.5]壬-7-基)-2-((R)-3-甲基-2,3-二氢吡咯并[3',2':5,6]吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-1(6H)-基)苯甲酸和4-((((1R,4R)-4-羟基-4-甲基环己基)甲基)氨基)-3-硝基苯磺酰胺合成所需化合物。1H NMR(DMSO-d6)δppm:12.14(s,1H),11.02(s,1H),10.06(s,1H),8.50(s,1H),8.33(s,1H),7.76(s,1H),7.56(s,2H),7.40-7.09(m,4H),7.01(s,1H),6.88-6.43(m,4H),5.93(s,1H),4.77(s,1H),4.57(s,1H),4.25(s,1H),3.90(s,1H),3.68(s,1H),3.51-3.49(m,1H),3.25-3.21(m,3H),2.12(s,3H),2.04-1.96(m,1H),1.71-1.68(m,3H),1.57-1.54(m,3H),1.39-1.33(m,10H),1.25-1.23(m,6H),1.13-1.12(m,8H)。MS(ESI)m/e[M+1]+946.2。
实施例B6：N-((4-((((1r,4r)-4-羟基-4-甲基环己基)甲基)氨基)-3-硝基苯基)磺酰基)-4-(2-((S)-2-(2-异丙基苯基)吡咯烷-1-基)-7-氮杂螺[3.5]壬-7-基)-2-((S)-3-甲基-2,3-二氢吡咯并[3',2':5,6]吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-1(6H)-基)苯甲酰胺
Figure BDA0003594909090000701
B6-1：(S)-3-甲基-6-((2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基)甲基)-1,2,3,6-四氢吡咯并 [3',2':5,6]吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪
Figure BDA0003594909090000702
按照与B5-1类似的程序，通过用(S)-1-氨基丙-2-醇代替B5-1的起始材料(R)-1-氨基丙-2-醇来合成B6-1。1H NMR(400MHz,CDCl3)δppm:7.15(s,1H),7.11(d,J＝3.6Hz,1H),6.29(d,J＝3.6Hz,1H),5.55(s,2H),4.52-4.43(m,1H),3.68(br,s 1H),3.57-3.49(m,2H),3.36(dd,J＝11.6,2.4Hz,1H),3.12(dd,J＝11.6,8.4Hz,1H),1.47(d,J＝6.4Hz,3H),0.92-0.85(m,2H),-0.06(s,9H)。MS(ESI,m/e)[M+1]+320.3。
按照与实施例B5类似的程序，用4-(2-((S)-2-(2-异丙基苯基)吡咯烷-1-基)-7-氮杂螺[3.5]壬-7-基)-2-((S)-3-甲基-2,3-二氢吡咯并[3',2':5,6]吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-1(6H)-基)苯甲酸和4-((((1r,4r)-4-羟基-4-甲基环己基)甲基)氨基)-3-硝基苯磺酰胺合成所需化合物。1H NMR(DMSO-d6)12.01(s,1H),11.02(s,1H),10.32(s,1H),8.44(s,1H),8.34(s,1H),7.84(s,1H),7.56(s,1H),7.35-7.33(m,2H),7.26-7.24(m,2H),7.01(s,1H),6.84(s,1H),6.73(s,1H),6.55-6.53(m,1H),5.92(s,1H),4.78(s,1H),4.57(s,1H),4.26(s,1H),3.89(s,1H),3.68(s,1H),3.51(s,1H),3.18-3.13(m,7H),2.43(s,1H),2.13(s,4H),2.04-1.95(m,1H),1.70-1.68(m,2H),1.56-154(m,2H),1.38-1.36(m,9H),1.24-1.23(m,7H),1.13-1.10(m,8H)。MS(ESI)m/e[M+1]+946.2。
实施例B7：N-(((R)-3-(((1r,4R)-4-羟基环己基)甲基)-5-硝基-3,4-二氢-2H-苯并[b][1,4]噁嗪-7-基)磺酰基)-4-(2-((S)-2-(2-异丙基苯基)吡咯烷-1-基)-7-氮杂螺[3.5]壬-7-基)-2-((R)-3-甲基-2,3-二氢吡咯并[3',2':5,6]吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-1(6H)-基)苯甲酰胺
Figure BDA0003594909090000711
按照与实施例B5类似的程序，用4-(2-((S)-2-(2-异丙基苯基)吡咯烷-1-基)-7-氮杂螺[3.5]壬-7-基)-2-((R)-3-甲基-2,3-二氢吡咯并[3',2':5,6]吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-1(6H)-基)苯甲酸和(R)-3-(((1R,4R)-4-羟基环己基)甲基)-5-硝基-3,4-二氢-2H-苯并[b][1,4]噁嗪-7-磺酰胺合成所需化合物。1H NMR(DMSO-d6)δppm:12.20(s,1H),10.90(s,1H),10.09(s,1H),8.65(s,1H),7.91(s,1H),7.79-7.78(m,1H),7.55(s,1H),7.36(s,4H),7.30(s,1H),7.04(s,1H),6.97(s,1H),6.83(s,1H),6.69-6.68(m,1H),6.51(s,1H),5.94(s,1H),4.78-4.77(m,1H),4.44-4.43(m,2H),4.01(s,3H),3.87-3.85(m,2H),3.69(s,3H),3.16(s,2H),3.08-2.99(m,2H),2.44-2.37(m,1H),2.12(s,5H),2.00-1.98(m,3H),1.81(s,6H),1.71(s,1H),1.46-1.43(m,2H),1.34(s,3H),1.17-1.14(m,4H),1.12(s,5H),0.88-0.84(m,3H)。MS(ESI)m/e[M+1]+974.1。
实施例B8：N-(((R)-3-(((1r,4R)-4-羟基环己基)甲基)-5-硝基-3,4-二氢-2H-苯并[b][1,4]噁嗪-7-基)磺酰基)-4-(2-((S)-2-(2-异丙基苯基)吡咯烷-1-基)-7-氮杂螺[3.5]壬-7-基)-2-((S)-3-甲基-2,3-二氢吡咯并[3',2':5,6]吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-1(6H)-基)苯甲酰胺
Figure BDA0003594909090000721
按照与实施例B5类似的程序，用4-(2-((S)-2-(2-异丙基苯基)吡咯烷-1-基)-7-氮杂螺[3.5]壬-7-基)-2-((S)-3-甲基-2,3-二氢吡咯并[3',2':5,6]吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-1(6H)-基)苯甲酸和(R)-3-(((1R,4R)-4-羟基环己基)甲基)-5-硝基-3,4-二氢-2H-苯并[b][1,4]噁嗪-7-磺酰胺合成所需化合物。MS(ESI)m/e[M+1]+974.18。
实施例B9：2-(3,4-二氢-2H-吡咯并[3',2':5,6]吡啶并[2,3-b][1,4]氧氮杂环庚烯-1(7H)-基)-N-(((R)-3-(((1R,4R)-4-羟基环己基)甲基)-5-硝基-3,4-二氢-2H-苯并[b][1,4]噁嗪-7-基)磺酰基)-4-(2-((S)-2-(2-异丙基苯基)吡咯烷-1-基)-7-氮杂螺[3.5]壬-7-基)苯甲酰胺
Figure BDA0003594909090000722
按照与实施例B5类似的程序，用(S)-2-(3,4-二氢-2H-吡咯并[3',2':5,6]吡啶并[2,3-b][1,4]氧氮杂环庚烯-1(7H)-基)-4-(2-(2-(2-异丙基苯基)吡咯烷-1-基)-7-氮杂螺[3.5]壬-7-基)苯甲酸和(R)-3-(((1R,4R)-4-羟基环己基)甲基)-5-硝基-3,4-二氢-2H-苯并[b][1,4]噁嗪-7-磺酰胺合成所需化合物。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δppm:11.99(s,1H),11.15(s,1H),10.11-9.90(m,1H),8.74(s,1H),8.06(s,1H),7.82-7.68(m,1H),7.53-7.45(m,1H),7.45-7.27(m,3H),7.25-7.07(m,2H),6.89(s,1H),6.79-6.60(m,2H),6.10(s,1H),4.85-4.70(m,1H),4.60-4.30(m,1H),4.21(s,2H),4.09-3.98(m,2H),3.98-3.85(m,1H),3.80-3.62(m,2H),3.57-3.48(m,2H),3.24-3.02(m,6H),2.20-2.08(m,4H),2.05-1.93(m,4H),1.89-1.74(m,3H),1.74-1.64(m,1H),1.57-1.40(m,6H),1.37-1.26(m,7H),1.16-1.08(m,4H),1.00-0.89(m,2H)。MS(ESI,m/e)[M+1]+972.9。
实施例B10：N-((4-((((1R,4R)-4-羟基-4-甲基环己基)甲基)氨基)-3-硝基苯基)磺酰基)-4-(2-((S)-2-(2-异丙基苯基)吡咯烷-1-基)-7-氮杂螺[3.5]壬-7-基)-2-(2-甲基-2,3-二氢吡咯并[3',2':5,6]吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-1(6H)-基)苯甲酰胺
Figure BDA0003594909090000731
按照与实施例B5类似的程序，用4-(2-((S)-2-(2-异丙基苯基)吡咯烷-1-基)-7-氮杂螺[3.5]壬-7-基)-2-(2-甲基-2,3-二氢吡咯并[3',2':5,6]吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-1(6H)-基)苯甲酸和4-((((1R,4R)-4-羟基-4-甲基环己基)甲基)氨基)-3-硝基苯磺酰胺合成所需化合物。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δppm:12.95(s,1H),11.24(s,1H),9.82(s,1H),8.53-8.02(m,2H),7.82-7.65(m,1H),7.50-7.26(m,3H),7.24-7.06(m,2H),7.04-6.37(m,5H),6.04(s,1H),4.88-4.52(m,1H),4.25(s,1H),4.18-3.82(m,3H),3.72-3.55(m,1H),3.27-2.90(m,10H),2.23-1.94(m,5H),1.83-1.32(m,16H),1.18-1.05(m,10H)。MS(ESI,m/e)[M+1]+944.9。
实施例B11：2-(2,3-二氢吡咯并[3',2':5,6]吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-1(6H)-基)-N-((4-((((1R,4R)-4-羟基-4-甲基环己基)甲基)氨基)-3-硝基苯基)磺酰基)-4-(6-((S)-2-(2-异丙基苯基)吡咯烷-1-基)-2-氮杂螺[3.3]庚-2-基)苯甲酰胺
Figure BDA0003594909090000741
按照与实施例B5类似的程序，用(S)-2-(2,3-二氢吡咯并[3',2':5,6]吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-1(6H)-基)-4-(6-(2-(2-异丙基苯基)吡咯烷-1-基)-2-氮杂螺[3.3]庚-2-基)苯甲酸和4-((((1R,4R)-4-羟基-4-甲基环己基)甲基)氨基)-3-硝基苯磺酰胺合成所需化合物。1H NMR(DMSO-d6)δppm:12.12(s,1H),11.04(s,1H),8.49(s,1H),8.36(s,1H),7.55-7.53(m,2H),7.32(s,1H),7.20(s,1H),7.12(s,1H),7.02(s,1H),6.67(s,1H),6.61(s,1H),6.25(d,J＝7.9Hz,1H),6.14(s,1H),5.96(s,1H),4.44(s,2H),4.26(s,1H),3.76-3.73(m,4H),3.59-3.56(m,6H),3.22(s,2H),3.09-3.07(m,2H),2.10(s,2H),2.02-1.94(m,1H),1.76-1.73(m,5H),1.56-1.54(m,3H),1.45(s,1H),1.38-1.30(m,2H),1.24(s,5H),1.16-1.15(m,6H),1.12-1.10(m,4H)。MS(ESI)m/e[M+1]+904。
实施例B12：(S)-2-(2,3-二氢吡咯并[3',2':5,6]吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-1(6H)-基)-N-((4-(((4-氟四氢-2H-吡喃-4-基)甲基)氨基)-3-硝基苯基)磺酰基)-4-(6-(2-(2-异丙基苯基)吡咯烷-1-基)-2-氮杂螺[3.3]庚-2-基)苯甲酰胺
Figure BDA0003594909090000742
按照与实施例B5类似的程序，用(S)-2-(2,3-二氢吡咯并[3',2':5,6]吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-1(6H)-基)-4-(6-(2-(2-异丙基苯基)吡咯烷-1-基)-2-氮杂螺[3.3]庚-2-基)苯甲酸和4-(((4-氟四氢-2H-吡喃-4-基)甲基)氨基)-3-硝基苯磺酰胺合成所需化合物。1H NMR(DMSO-d6)δppm:12.11(s,1H),11.03(s,1H),10.21(s,1H),8.56(s,1H),8.37(s,1H),7.54-7.53(m,2H),7.43-7.12(m,4H),7.04(s,1H),6.86(d,J＝9.0Hz,1H),6.62(s,1H),6.26(d,J＝8.4Hz,1H),6.15(s,1H),5.95(s,1H),4.43(s,2H),3.88-3.61(m,11H),3.53(s,5H),3.13-2.87(m,3H),2.09-2.07(m,3H),1.83-1.81(m,8H),1.13(s,4H)。MS(ESI)m/e[M+1]+894.0。
实施例B13：2-(3,4-二氢-2H-吡咯并[3',2':5,6]吡啶并[2,3-b][1,4]氧氮杂环庚烯-1(7H)-基)-N-((4-((((1r,4r)-4-羟基-4-甲基环己基)甲基)氨基)-3-硝基苯基)磺酰基)-4-(6-((S)-2-(2-异丙基苯基)吡咯烷-1-基)-2-氮杂螺[3.3]庚-2-基)苯甲酰胺
Figure BDA0003594909090000751
按照与实施例B5类似的程序，用(S)-2-(3,4-二氢-2H-吡咯并[3',2':5,6]吡啶并[2,3-b][1,4]氧氮杂环庚烯-1(7H)-基)-4-(6-(2-(2-异丙基苯基)吡咯烷-1-基)-2-氮杂螺[3.3]庚-2-基)苯甲酸和4-((((1R,4R)-4-羟基-4-甲基环己基)甲基)氨基)-3-硝基苯磺酰胺合成所需化合物。1H NMR(DMSO-d6)δppm:11.91(s,1H),11.34(s,1H),8.64-8.53(m,1H),8.53-8.44(m,1H),7.70-7.44(m,3H),7.35-7.11(m,4H),7.00(s,1H),6.91(d,J＝9.3Hz,1H),6.28-6.08(m,2H),4.31(s,1H),4.28-4.20(m,2H),3.93-3.63(m,5H),3.59-3.48(m,2H),3.33-3.25(m,2H),3.23-2.91(m,2H),2.29-2.13(m,2H),2.12-1.99(m,3H),1.97-1.45(m,11H),1.43-1.35(m,3H),1.26-1.19(m,5H),1.19-1.10(m,5H)。MS(ESI,m/e)[M+1]+916.9。
实施例B14：(S)-2-(3,4-二氢-2H-吡咯并[3',2':5,6]吡啶并[2,3-b][1,4]氧氮杂环庚烯-1(7H)-基)-N-((4-(((4-氟四氢-2H-吡喃-4-基)甲基)氨基)-3-硝基苯基)磺酰基)-4-(6-(2-(2-异丙基苯基)吡咯烷-1-基)-2-氮杂螺[3.3]庚-2-基)苯甲酰胺
Figure BDA0003594909090000761
按照与实施例B5类似的程序，用(S)-2-(3,4-二氢-2H-吡咯并[3',2':5,6]吡啶并[2,3-b][1,4]氧氮杂环庚烯-1(7H)-基)-4-(6-(2-(2-异丙基苯基)吡咯烷-1-基)-2-氮杂螺[3.3]庚-2-基)苯甲酸和4-(((4-氟四氢-2H-吡喃-4-基)甲基)氨基)-3-硝基苯磺酰胺合成所需化合物。1H NMR(DMSO-d6)δppm:11.87(s,1H),11.25(s,1H),8.63-8.52(s,1H),8.49-8.42(m,1H),7.66-7.60(m,1H),7.57-7.46(m,1H),7.46-7.38(m,1H),7.38-7.00(m,6H),6.94(s,1H),6.19-6.02(m,3H),4.18(s,2H),3.87-3.57(m,9H),3.56-3.42(m,4H),3.17-2.81(m,3H),2.20-2.09(m,2H),2.05-1.90(m,3H),1.90-1.69(m,8H),1.55-1.40(m,2H),1.19-1.11(m,5H)。MS(ESI,m/e)[M+1]+906.9。
实施例B15：N-((4-((((S)-1,4-二噁烷-2-基)甲基)氨基)-3-硝基苯基)磺酰基)-2-(3,4-二氢-2H-吡咯并[3',2':5,6]吡啶并[2,3-b][1,4]氧氮杂环庚烯-1(7H)-基)-4-(6-((S)-2-(2-异丙基苯基)吡咯烷-1-基)-2-氮杂螺[3.3]庚-2-基)苯甲酰胺
Figure BDA0003594909090000762
按照与实施例B5类似的程序，用(S)-2-(3,4-二氢-2H-吡咯并[3',2':5,6]吡啶并[2,3-b][1,4]氧氮杂环庚烯-1(7H)-基)-4-(6-(2-(2-异丙基苯基)吡咯烷-1-基)-2-氮杂螺[3.3]庚-2-基)苯甲酸和(S)-4-(((1,4-二噁烷-2-基)甲基)氨基)-3-硝基苯磺酰胺合成所需化合物。1H NMR(DMSO-d6)δppm:11.85(s,1H),11.24(s,1H),8.58-8.47(m,1H),8.47-8.40(m,1H),7.65-7.57(m,1H),7.57-7.48(m,1H),7.48-7.27(m,2H),7.25-7.18(m,2H),7.18-7.05(m,2H),6.97-6.81(m,2H),6.23-6.00(m,3H),4.34-4.01(m,2H),3.87-3.72(m,5H),3.70-3.56(m,3H),3.54-3.40(m,4H),3.16-2.80(m,3H),2.28-2.09(m,3H),2.06-1.91(m,4H),1.91-1.66(m,5H),1.60-1.40(m,3H),1.20-1.11(m,5H)。MS(ESI,m/e)[M+1]+890.8。
生化测定
Bcl-2 TR-FRET测定：
在基于时间分辨荧光共振能量转移(TR-FRET)方法的测定中，测试本文公开的化合物对Bcl-2蛋白与其配体的阻断。将0.05nM重组人Bcl-2蛋白与本文公开的化合物的连续稀释液(最高终浓度为1μM或0.1μM或0.02μM或0.01μM，10个点)在室温下在含有20mM磷酸钾缓冲液pH 7.5、50mM NaCl、1mM EDTA、0.05％Tween-20、0.01％BSA的测定缓冲液中预孵育0.5小时。然后将FITC标记的Bak肽Ac-GQVGRQLAIIGDK(FITC)INR-酰胺(0.5nM)和MAb抗6HisTb穴状化合物金(MAb Anti 6His Tb cryptate Gold)加入到板中，并在室温下进一步孵育1小时。在BMG PHERAstar FSX仪器上读取TR-FRET信号(337nm-520nm-490nm)。基于TR-FRET信号计算在化合物浓度增加的情况下Bcl-2与其配体相互作用的抑制百分比。每种化合物的IC50通过Graphpad Prism软件或Dotmatics将数据拟合到四参数逻辑方程来推导。
Bcl-2-G101V TR-FRET测定：
在基于时间分辨荧光共振能量转移方法的测定中，测试本文公开的化合物对Bcl-2-G101V蛋白与其配体的阻断。将0.1nM重组人Bcl-2-G101V蛋白与本文公开的化合物的连续稀释液(最高终浓度为10μM或1μM或0.1μM，4倍或3倍连续稀释，10个点)在室温下在含有20mM磷酸钾缓冲液pH 7.5、50mM NaCl、1mM EDTA、0.05％Tween-20、0.01％BSA的测定缓冲液中预孵育0.5小时。然后将5nM FITC标记的Bak肽Ac-GQVGRQLAIIGDK(FITC)INR-酰胺和Mab抗-6His Tb穴状化合物金加入到板中，并在室温下进一步孵育1小时。在BMG PHERAstarFSX仪器上读取TR-FRET信号(ex337 nm，em490nm/520nm)。基于490nm处荧光与520nm处荧光的比值计算在化合物浓度增加的情况下Bcl-2-G101V与其配体相互作用的抑制百分比。每种化合物的IC50通过Graphpad Prism软件或Dotmatics将数据拟合到四参数逻辑方程来推导。
细胞增殖测定
BA/F3细胞增殖测定：
将鼠BA/F3细胞工程化成依赖于BCL-2野生型(BA/F3-BCL-2)或Bcl-2 G101V(BA/F3-BCL-2G101V)存活。在化合物处理之前，洗涤细胞并重悬于缺乏热失活FBS和IL-3的培养基中，保持24小时。然后将细胞重悬于测定培养基中：含有3％热失活FBS的RPMI-1640，在96孔板中每孔接种10000个细胞。用10点连续稀释的化合物处理细胞24小时。化合物处理后，在每个孔中加入30μl CellTiter-Glo试剂。使用Cell TiterGlo试剂(Promega)，根据制造商的说明书，测定对增殖的影响。使用PHERAstar FS平板读数器(BMG Labtech)测量发光信号。细胞活力的IC50值用GraphPad Prism软件测定，是3个独立实验的几何平均值。
RS4；11细胞增殖测定：
在细胞增殖测定中，BCL-2依赖性急性成淋巴细胞性白血病(ALL)细胞系，即RS4；11，用于研究BCL-2抑制剂的细胞效力。将细胞(ATCC，CRL-1873)在RPMI-1640完全培养基(RPMI-1640培养基，HEPES(Gibco，22400-105)补充有10％胎牛血清(FBS)(Gibco，10099-1441)、100单位/ml青霉素和100μg/ml链霉素(Gibco，15140122))中培养，并保持在含有5％CO2的37℃湿化室中。每种化合物以1μM作为最大浓度进行连续稀释。为了测试化合物的凋亡作用，将细胞以50,000/180μl/孔接种在96孔板中，并用10点连续稀释的每种化合物在37℃下处理48小时。在处理后，使用CellTiter-GLO发光测定(Promega)，根据制造商的建议，评估细胞活力。简而言之，将30μl CellTiter-GLO试剂加入到200μl细胞培养物中。在定轨摇床上搅拌混合物5分钟以确保细胞裂解，随后在室温下孵育7分钟以允许发光信号的产生和稳定，所述发光信号对应于ATP的量并且因此对应于代谢活性细胞的量。使用PHERAstarFS读数器(BMG)测量发光信号。用GraphPad Prism软件测定细胞活力的平均IC50值。
Molt-4细胞增殖测定：
Bcl-xL依赖性ALL细胞系Molt-4(ATCC，CRL-1582)也用于细胞增殖测定以进一步评估这些抑制剂的特异性。类似地，将细胞在RPMI-1640完全培养基(RPMI-1640培养基，HEPES(Gibco，22400-105)补充有10％胎牛血清(FBS)(Gibco，10099-1441)、100单位/ml青霉素和100μg/ml链霉素(Gibco，15140122)和1×GlutaMAX(Gibco,35050-061))中培养，并保持在含有5％CO2的37℃湿化室中。每种化合物以10μM作为最大浓度进行连续稀释。使用CellTiter-GLO发光测定，这些化合物的抗增殖IC50类似地确定为与未处理的对照相比，处理后活细胞的百分比。
根据本文所述的生物学程序测定如上所述制备的选择化合物。结果在表1中给出。
表1：生物活性结果
Figure BDA0003594909090000801
注：WT表示野生型；G101V表示BCL2中的Gly101Val突变。

Claims (35)

1.一种式(I)化合物
Figure FDA0003594909080000011
或其药学上可接受的盐，或其立体异构体，
其中
L1是直接键和-O-；
环A为环烷基、环烯基、环炔基、芳基、杂环基或杂芳基，其各自任选被1至4个取代基R2取代；
R2在每次出现时独立地选自由氢、氘、卤素或任选被卤素取代的-C1-8烷基组成的组；
环B为含有一个选自氮(N)、硫(S)和氧(O)的杂原子的杂环基或杂芳基，其各自任选被1至4个取代基R1取代；
R1在每次出现时独立地选自由氘、环烷基、杂环基、芳基或杂芳基组成的组；其中所述环烷基、杂环基、芳基或杂芳基各自独立地任选被1至4个取代基R1d取代，
R1d在每次出现时独立地为卤素、-C1-8烷基、-C2-8烯基、-C2-8炔基、环烷基、杂环基、芳基、杂芳基、氧代、-CN、-NO2或-ORBa；其中所述-C1-8烷基、-C2-8烯基、-C2-8炔基、环烷基、杂环基、芳基或杂芳基各自独立地任选被1至4个取代基RBd取代；
RBa和RBb各自独立地为氢、-C1-8烷基、-C2-8烯基、-C2-8炔基、环烷基、杂环基、芳基或杂芳基，所述-C1-8烷基、-C2-8烯基、-C2-8炔基、环烷基、杂环基、芳基或杂芳基中的每一者任选被卤素、羟基、-NH2或-N(C1-6烷基)2、-C1-8烷氧基、环烷基、杂环基、芳基或杂芳基取代；
R3为杂芳基、
Figure FDA0003594909080000021
Figure FDA0003594909080000022
其各自任选被1至4个取代基R3a取代，其中Q1为杂环烷基或杂环烯基，并且X9、X10、X21、X22、X23和X24各自独立地为O、NH或CH2，并且X11、X12、X13、X25和X26各自独立地为N或CH；
R3a在每次出现时独立地选自卤素、氰基、-NO2、-OR3b、-SR3b、-NR3bR3c、-氧代-、-COR3b、-SO2R3b、-C(＝O)OR3b、-C(＝O)NR3bR3c、-C(＝NR3b)NR3cR3d、-N(R3b)C(＝O)R3c、-N(R3b)C(＝O)OR3c、-NR3bSO2R3c、-C1-8烷基、-C2-8烯基、-C2-8炔基、-环烷基、杂环基、芳基或杂芳基；
R3b和R3c独立地为氢、-C1-8烷基、-C2-8烯基、-C2-8炔基、环烷基、杂环基、芳基或杂芳基，所述-C1-8烷基、-C2-8烯基、-C2-8炔基、环烷基、杂环基、芳基或杂芳基中的每一者任选被卤素、羟基或-C1-8烷氧基取代；
环D为芳基或
Figure FDA0003594909080000031
其各自任选被1至4个取代基R4取代；
Q2为杂环烷基；
R4在每次出现时独立地选自由以下组成的组：-氢、烷基、烯基、炔基、环烷基、环烷基-烷基、杂环基、杂环基-烷基、芳基、芳基-烷基、杂芳基、杂芳基-烷基、卤素、-CN、-NO2、-(CR4cR4d)zNR4aR4b、-(CR4cR4d)zOR4b、-(CR4cR4d)zC(O)R4a、-(CR4cR4d)zC(＝NR4e)R4a、-(CR4cR4d)zC(＝N-OR4b)R4a、-(CR4cR4d)zC(O)OR4b、-(CR4cR4d)zOC(O)R4b、-(CR4cR4d)zC(O)NR4aR4b、-(CR4cR4d)zNR4aC(O)R4b、-(CR4cR4d)zC(＝NR4e)NR4aR4b、-(CR4cR4d)zNR4aC(＝NR4e)R4b、-(CR4cR4d)zOC(O)NR4aR4b、-(CR4cR4d)zNR4aC(O)OR4b、-(CR4cR4d)zNR4aC(O)NR4aR4b、-(CR4cR4d)zNR4aC(S)NR4aR4b、-(CR4cR4d)zNR4aC(＝NR4e)NR4aR4b、-(CR4cR4d)zS(O)rR4b、-(CR4cR4d)zS(O)(＝NR4e)R4b、-(CR4cR4d)zN＝S(O)R4aR4b、-(CR4cR4d)zS(O)2OR4b、-(CR4cR4d)zOS(O)2R4b、-(CR4cR4d)zNR4aS(O)rR4b、-(CR4cR4d)zNR4aS(O)(＝NR4e)R4b、-(CR4cR4d)zS(O)rNR4aR4b、-(CR4cR4d)zS(O)(＝NR4e)NR4aR4b、-(CR4cR4d)zNR4aS(O)2NR4aR4b、-(CR4cR4d)zNR4aS(O)(＝NR4e)NR4aR4b、-(CR4cR4d)zP(O)R4aR4b和-(CR4cR4d)zP(O)(OR4a)(OR4b)，
其中每个R4a和每个R4b独立地选自氢、烷基、烯基、炔基、环烷基、环烷基-烷基、杂环基、杂环基-烷基、芳基、芳基-烷基、杂芳基和杂芳基-烷基；每个R4c和每个R4d独立地选自氢、卤素、烷基、烯基、炔基、环烷基、环烷基-烷基、杂环基、杂环基-烷基、芳基、芳基-烷基、杂芳基和杂芳基-烷基；z在每次出现时独立地为1至8的数；并且r在每次出现时独立地为1或2的数；
m为1-4的整数，优选m为1；
R5为-L2-CyC，
其中L2为直接键、-(CRaRb)t-、-O-(CRaRb)t-、-S-、-S(O)-、-SO2-、-C(O)-、C(O)O-、-OC(O)-、-NRa-、-N(Ra)(CRaRb)t-、-(CRaRb)tC(O)NRa-、-C(O)NRa-、-(CRaRb)t-(NRa)t-C(O)-、-NRaC(O)-、-NRaC(O)O-、-NRaC(O)NRb-、-SO2NRa-、-NRaSO2-、-NRaS(O)2NRb-、-NRaS(O)NRb-、-C(O)NRaSO2-、-C(O)NRaSO-或-C(＝NRa)NRb-，其中t在每次出现时独立地为0至7的数，并且-(CRaRb)t-中的一个或两个CRaRb部分未被替代或被一个或多个选自O、S、SO、SO2、C(O)和NRa的部分替代；Ra和Rb独立地为氢或-C1-3烷基；
Cyc为-SO2R5a-、环烷基、杂环基、芳基或杂芳基，所述环烷基、杂环基、芳基或杂芳基中的每一者任选被一个或两个取代基R5a取代；
R5a在每次出现时独立地选自氢、卤素、氰基、氧代、-NO2、-OR5b、-SR5b、-NR5bR5c、-COR5b、-C1-8烷基、-C2-8烯基和-C2-8炔基、-环烷基或杂环基，所述-C1-8烷基和杂环基中的每一者任选被一个或两个选自氢、卤素、氰基、-OR5f、-C1-8烷基、-环烷基或杂环基的取代基R5e取代；
其中R5b和R5c各自独立地为氢、-C1-8烷基、-C2-8烯基、-C2-8炔基、环烷基、杂环基、芳基或杂芳基，所述-C1-8烷基任选被一个或两个为氢、-NR5fR5g或-环烷基的取代基R5e取代；并且
R5f和R5g各自独立地为氢或-C1-8烷基。
2.如权利要求1所述的化合物，其中L1为直接键或-O-。
3.如权利要求1所述的化合物，其中R3为
Figure FDA0003594909080000041
Figure FDA0003594909080000042
其各自任选被一个或两个如式(I)所定义的取代基R3a取代，并且Q1为6至8元杂环烷基或6至8元杂环烯基，X9、X10、X11、X12和X13中的每一者如权利要求1中所定义。
4.如权利要求1所述的化合物，其中R3为
Figure FDA0003594909080000051
Figure FDA0003594909080000052
其各自任选被一个或两个如式(I)所定义的取代基R3a取代，并且X21、X22、X23、X24、X25和X26中的每一者如权利要求1中所定义。
5.如权利要求1所述的化合物，其中R3为任选被一个或两个如式(I)所定义的取代基R3a取代的杂芳基。
6.如权利要求3-5中任一项所述的化合物，其中R3a选自卤素、-NR3bR3c、-氧代-或-C1-8烷基，其中R3b和R3c独立地为氢或-C1-8烷基。
7.如权利要求5所述的化合物，其中R3为包含1或2或3个氮原子的8至12元双环杂芳基。
8.如权利要求7所述的化合物，其中R3是吲哚基、吡咯并吡啶基或吡唑并吡啶基，其各自任选被一个或两个选自卤素、-C1-8烷基或-NR3bR3c的取代基R3a取代，其中R3b和R3c独立地为氢或-C1-8烷基。
9.如权利要求7所述的化合物，其中R3为吲哚-4-基、吡咯并[2,3-b]吡啶-5-基和吡唑并[4,3-b]吡啶-1-基。
10.如权利要求5所述的化合物，其中R3为11至14元三环杂芳基，其包含1或2或3或4或5个氮原子，任选被一个或两个选自卤素、-C1-8烷基或-NR3bR3c的取代基R3a取代，其中R3b和R3c独立地为氢或-C1-8烷基。
11.如权利要求1所述的化合物，其中R3选自
Figure FDA0003594909080000061
Figure FDA0003594909080000062
12.如权利要求1所述的化合物，其中环D为任选被一个或两个如式(I)所定义的取代基R4取代的
Figure FDA0003594909080000063
并且Q2为含有至少一个独立地选自N、O和S的杂原子的5元至8元杂环烷基。
13.如权利要求1所述的化合物，其中环D为任选被一个或两个如式(I)所定义的取代基R4取代的苯基。
14.如权利要求1所述的化合物，其中环D选自
Figure FDA0003594909080000064
Figure FDA0003594909080000065
其任选被一个或两个如式(I)所定义的取代基R4取代。
15.如权利要求14所述的化合物，其中环D选自
Figure FDA0003594909080000066
Figure FDA0003594909080000067
其在苯环上被-NO2取代，并且/或者在Q2环上进一步任选被一个取代基R4取代，并且所述R4如式(I)所定义。
16.如权利要求1所述的化合物，其中环A为包含一个或两个选自氮(N)、硫(S)和氧(O)的杂原子作为环成员的5元至12元螺杂环基；优选地，环A为包含一个或两个氮或氧作为环成员的4元/4元、3元/5元、4元/5元、4元/6元、5元/5元或5元/6元单螺杂环基。
17.如权利要求16所述的化合物，其中环A为
Figure FDA0003594909080000071
(7-氮杂螺[3.5]壬-2,7-二基)、
Figure FDA0003594909080000072
(2-氮杂螺[3.5]壬-2,7-二基)、
Figure FDA0003594909080000073
(3-氮杂螺[5.5]十一烷-3,9-二基)、
Figure FDA0003594909080000074
(2-氮杂螺[3.3]庚-2,6-二基，其中*1指连接到所述环B的位置，并且**2指连接到所述苯环的位置。
18.如权利要求1所述的化合物，其中R2为氢、氘、卤素(例如F、Cl或Br)或任选被卤素(例如F、Cl或Br)取代的C1-6烷基(例如甲基)，优选地，R2为氢或氘。
19.如权利要求1所述的化合物，其中环B为氮丙啶-1-基、氮杂环丁烷-1-基、吡咯烷-1-基、吡咯烷-2-基、氮杂环庚烷-1-基或氮杂环辛烷-1-基，优选为吡咯烷-1-基，其在位置2被苯基取代，并且所述位置2(即邻位)处的苯基任选被如式(I)所定义的R1d取代。
20.如权利要求19中任一项所述的化合物，其中R1d当在环B(包括所述氮丙啶-1-基、氮杂环丁烷-1-基、吡咯烷-1-基、吡咯烷-2-基、氮杂环庚烷-1-基或氮杂环辛烷-1-基，优选所述吡咯烷-1-基)的位置2处的所述苯基上取代时独立地为卤素、-C1-8烷基、-C2-8烯基、-C2-8炔基、环烷基、杂环基、芳基、杂芳基、-CN、-ORBa、-SO2RBa、-CONRBaRBb、-NO2、-NRBaRBb、-NRBaCORBb或-NRBaSO2RBb；其中所述-C1-8烷基、-C2-8烯基、-C2-8炔基、环烷基、杂环基、芳基或杂芳基各自独立地任选被1至4个如式(I)所定义的取代基RBd，优选1或2个如式(I)所定义的取代基RBd取代。在另一方面，一个R1d位于环B的位置2处的所述苯环的位置2。
21.如权利要求19所述的化合物，其中R1d为甲基、乙基、异丙基、丙基或甲氧基甲基，或在所述苯环位置处的两个甲基；或丙烯基；或环丙基、环丁基、环戊基或环己基；或乙氧基或异丙氧基；或氨基或二甲氨基。
22.如权利要求19中任一项所述的化合物，其中所述作为环B的2-(2-取代的苯基)吡咯烷-1-基部分选自由以下组成的组：
Figure FDA0003594909080000081
Figure FDA0003594909080000091
23.如权利要求1所述的化合物，其中L2是直接键、-(CRaRb)1-4-、-O-(CRaRb)1-3-、-NH-(CRaRb)0-2-(CRaRb)0-2-、-(CRaRb)0-2-(CRaRb)0-2-NH-、-(CRaRb)0-2-(NH)0-2-C(O)-，其中Ra和Rb为氢。
24.如权利要求1所述的化合物，其中CyC为环烷基或杂环基，其各自任选被一个或两个取代基R5a取代；
R5a独立地选自氢、卤素、氰基、氧代、-OR5b、-NR5bR5c、-COR5b、-SO2R5b、-C1-8烷基、-C2-8炔基、-环烷基或杂环基，所述-C1-8烷基和杂环基中的每一者任选被一个或两个选自氢、卤素、氰基、-OR5f、-C1-8烷基、-环烷基或杂环基的取代基R5e取代；
其中R5b和R5c各自独立地为氢、-C1-8烷基或杂环基，所述-C1-8烷基任选被一个或两个为氢、-NR5fR5g或-环烷基的取代基R5e取代；R5f和R5g各自独立地为氢或-C1-8烷基。
25.如权利要求24所述的化合物，其中CyC为环戊基或环己基，其各自任选被一个或两个取代基R5a取代。
26.如权利要求1所述的化合物，其中CyC为6元芳基或6元杂芳基，其各自任选被一个或两个取代基R5a取代。
27.如权利要求24所述的化合物，其中CyC是含有一个或两个选自氮(N)或氧(O)或硫(S)杂原子的杂原子作为环成员的单环4至6元杂环基，其各自任选被一个或两个取代基R5a取代。
28.如权利要求24所述的化合物，其中Cyc选自氧杂环丁烷基、四氢呋喃基、四氢吡喃基、氮杂环丁烷基、吡咯烷基、哌啶基、二噁烷基、N-吗啉基、吗啉基或哌嗪基，其各自任选被一个或两个取代基R5a取代。
29.如权利要求24所述的化合物，其中CyC选自氧杂环丁烷-2-基、氧杂环丁烷-3-基、四氢呋喃-4-基、四氢呋喃-2-基、四氢呋喃-3-基、四氢吡喃-2-基、四氢吡喃-3-基、四氢吡喃-4-基、氮杂环丁烷-3-基、氮杂环丁烷-2-基、吡咯烷-2-基、吡咯烷-3-基、哌啶-4-基、哌啶-2-基、哌啶-3-基、1,3-二噁烷-2-基、1,3-二噁烷-4-基、1,4-二噁烷-2-基、吗啉-1-基、吗啉-2-基或吗啉-3-基，其各自任选被一个或两个取代基R5a取代。
30.如权利要求24所述的化合物，其中R5a独立地选自氢、卤素、氰基、氧代、-OR5b、-NR5bR5c、-COR5b、-SO2R5b、-C1-8烷基、-C2-8炔基、单环C3-8环烷基或含有一个或两个选自氮或氧或硫杂原子的杂原子作为环成员的单环4至9元杂环基，所述-C1-8烷基和单环4至9元杂环基中的每一者任选被一个或两个取代基R5e取代。
31.如权利要求1所述的化合物，其中m为1，并且-L2-CyC选自由以下组成的组：
Figure FDA0003594909080000111
Figure FDA0003594909080000121
32.如权利要求1所述的化合物，其选自实施例A1、A2、A3、A4、A5、A6、A7、A8、B1、B2、B3、B4、B5、B6、B7、B8、B9、B10、B11、B12、B13、B14和B15的化合物。
33.一种治疗失调的凋亡性疾病的方法，所述方法包括向有需要的受试者施用治疗有效量的权利要求1-32中任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐或其立体异构体。
34.如权利要求33所述的方法，其中所述失调的凋亡性疾病为神经退行性疾患、增殖性疾病和血栓形成前疾患。
35.一种药物组合物，所述药物组合物包含权利要求1-32中任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐或其立体异构体和药学上可接受的载体。
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