CN114908100A - 人HHIPL1 mRNA在食管鳞状细胞癌靶向治疗和预后评估中的应用及试剂盒 - Google Patents

Abstract

本发明涉及人HHIPL1mRNA在食管鳞状细胞癌靶向治疗和预后评估中的应用及试剂盒。本发明首次发现HHIPL1mRNA在食管鳞状细胞癌细胞增殖、迁移与侵袭中的作用以及对食管鳞状细胞癌患者预后的影响，并设计出能够特异性干扰HHIPL1mRNA表达的siRNA以及特异性检测HHIPL1mRNA表达水平的引物对，进而提出了该siRNA与引物对在食管鳞状细胞癌靶向药物研发与预后评估中的应用。

Description

人HHIPL1 mRNA在食管鳞状细胞癌靶向治疗和预后评估中的 应用及试剂盒

技术领域

本发明涉及人HHIPL1 mRNA在食管鳞状细胞癌靶向治疗和预后评估中的应用及试剂盒，属于生物医学技术领域。

背景技术

食管癌是人类常见的恶性肿瘤之一，其发病率在人类癌症中排名第8位，在癌症相关死亡病因中排名第6位。食管癌主要有两种病理类型，即食管鳞状细胞癌(esophagealsquamous cell carcinoma，ESCC)与食管腺癌，在西方国家食管腺癌最为常见，但是在亚洲与非洲地区最多见的食管癌病理类型为ESCC。食管癌的预后较差，其5年生存率仅有15～25％，缺乏有效治疗靶点是制约ESCC预后改善的主要因素之一。因此，发现与ESCC进展以及预后密切相关的新基因，并探究其分子机制，对于ESCC靶向治疗策略的发展尤为重要。

小干扰RNA(Small interfering RNA，siRNA)通常由内切核糖核酸酶Dicer切割双链RNA而成，一般含有21个核苷酸，在转染试剂作用下进入细胞，siRNA其中一条链形成RNA诱导沉默复合体，能够识别含有与其互补序列的mRNA，RNA诱导沉默复合体与靶向mRNA结合后会切割该mRNA并使其降解，这导致该基因的转录产物无法翻译成蛋白，因此，siRNA常应用于研究某个基因在生理或病理进程中的作用以及相应的靶向药物研发，设计出针对靶点mRNA特异且高效的siRNA能够有效避免siRNA脱靶效应对研究结果的不良影响。

发明内容

针对现有技术的不足，本发明提供了人HHIPL1 mRNA在食管鳞状细胞癌靶向治疗和预后评估中的应用及试剂盒。

本发明的技术方案如下：

人HHIPL1 mRNA在制备食管鳞状细胞癌靶向治疗和预后评估产品中的应用。

根据本发明优选的，所述应用中HHIPL1 mRNA为食管鳞状细胞癌预后评估的生物标志物。

根据本发明优选的，所述预后评估产品用于评估食管鳞状细胞癌患者总生存期。

根据本发明优选的，所述应用中HHIPL1 mRNA为食管鳞状细胞癌靶向治疗的作用靶点。

根据本发明优选的，所述HHIPL1 mRNA的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示。

根据本发明优选的，所述食管鳞状细胞癌靶向治疗产品包括特异性敲低HHIPL1mRNA表达的物质。

进一步优选的，所述特异性敲低HHIPL1 mRNA表达的物质选自特异性干扰HHIPL1mRNA表达的siRNA。

进一步优选的，所述特异性干扰HHIPL1 mRNA表达的siRNA靶向识别序列如SEQ IDNO.2所示。

根据本发明优选的，所述食管鳞状细胞癌预后评估产品包括特异性识别HHIPL1mRNA逆转录产物cDNA的物质。

进一步优选的，所述特异性识别HHIPL1 mRNA逆转录产物cDNA的物质选自特异性扩增HHIPL1 mRNA的引物对。

进一步优选的，所述特异性扩增HHIPL1 mRNA的引物对为SEQ ID NO.3所示的上游引物和SEQ ID NO.4所示的下游引物。

根据本发明优选的，所述食管鳞状细胞癌预后评估产品的检测样本选自细胞、组织、血浆以及血清。

一种食管鳞状细胞癌靶向治疗药物，所述药物包括特异性敲低HHIPL1 mRNA表达的物质。

根据本发明优选的，所述特异性敲低HHIPL1 mRNA表达的物质选自特异性干扰HHIPL1 mRNA表达的siRNA。

进一步优选的，所述特异性敲低HHIPL1 mRNA表达的物质选自特异性干扰HHIPL1mRNA表达的siRNA。

进一步优选的，特异性干扰HHIPL1 mRNA表达的siRNA靶向识别序列如SEQ IDNO.2所示。

一种食管鳞状细胞癌预后评估试剂盒，所述试剂盒包括特异性识别HHIPL1 mRNA逆转录产物cDNA的物质。

根据本发明优选的，所述特异性识别HHIPL1 mRNA逆转录产物cDNA的物质选自特异性扩增HHIPL1 mRNA逆转录产物cDNA的引物对。

进一步优选的，所述特异性扩增HHIPL1 mRNA逆转录产物cDNA的引物对为SEQ IDNO.3所示的上游引物和SEQ ID NO.4所示的下游引物。

根据本发明优选的，所述试剂盒还包括实时荧光定量PCR的检测试剂。

有益效果：

本发明研究发现应用siRNA特异性敲低HHIPL1 mRNA表达水平能够显著抑制食管鳞状细胞癌细胞的增殖、迁移与侵袭，并发现HHIPL1 mRNA高表达预示着食管鳞状细胞癌患者总生存期的缩短。据此，本发明设计出能够特异性干扰HHIPL1 mRNA表达的siRNA，以及特异性识别HHIPL1 mRNA的引物对，并提出其在食管鳞状细胞癌靶向药物研发与预后评估中的应用。

附图说明

图1为本发明siRNA特异性敲低Eca109细胞中HHIPL1 mRNA表达水平示意图，用Student’s t检验验证组间差异的统计学意义。

图2为本发明特异性敲低HHIPL1 mRNA表达的siRNA转染至Eca109细胞，应用CCK-8实验检测HHIPL1 mRNA敲低对Eca109细胞增殖能力的影响示意图。

图3为本发明siRNA特异性敲低Eca109细胞中HHIPL1 mRNA表达水平后，应用Transwell实验检测HHIPL1 mRNA表达下调对Eca109细胞迁移与侵袭能力的影响示意图。

图4为本发明应用Kaplan-Meier Plotter数据库分析HHIPL1 mRNA高表达与低表达的ESCC患者之间总生存期之间的差异示意图，用Log-rank检验两组患者之间预后差异是否具有统计学意义。

具体实施方式

下面结合实验例对本发明的技术方案作进一步描述，但是本发明的保护范围并不仅限于此。实施例中涉及的试剂与材料，若无特殊说明，均为普通市售产品。

人源ESCC细胞系Eca-109细胞购自中国科学院典型培养物保藏委员会细胞库。

实施例1

设计siRNA-HHIPL1，然后应用siRNA-HHIPL1特异性干扰Eca-109细胞中HHIPL1mRNA表达水平，应用逆转录-实时荧光定量PCR检测HHIPL1 mRNA敲低效率，所述siRNA-HHIPL1的靶向序列为SEQ ID NO.2所示，所用特异性识别HHIPL1 mRNA的物质为本发明提供的引物对，其上游引物序列为SEQ ID NO.3所示下游引物序列为SEQ ID NO.4所示，具体结果如图1所示。

由图1可知，siRNA-HHIPL1能够有效地特异性敲低Eca-109细胞中HHIPL1 mRNA表达水平。

具体实施过程如下：

(1)针对HHIPL1 mRNA的编码区域，设计能够特异结合并诱导其剪切降解的siRNA-HHIPL1，其靶向序列为5’-gcatcgacgtggaccgtaa-3’(SEQ ID NO.2)，并由北京擎科生物公司合成该siRNA；

(2)选取Eca-109细胞，待其生长密度达到70％时，将siRNA-HHIPL1和阴性对照siRNA-NC分别转染至Eca-109细胞中，所用转染试剂为Lipofectamine RNAiMAX Reagent(Life technologies，13778-150)，转染48小时后，收集细胞并提取RNA，所用试剂盒为RNA-Quick Purification Kit(上海奕杉，RN001)，应用NanoDrop2000检测所提RNA的浓度，应用琼脂糖凝胶电泳检测所提RNA的完整性；

(3)以步骤(2)所提RNA为模板先去除基因组DNA，再进行逆转录合成cDNA产物，所用试剂盒为lnRcute lncRNA cDNA第一链合成试剂盒(TIANGEN，KR202)；以cDNA产物为模板，应用本发明试剂盒所包含的引物对进行荧光定量PCR,所用试剂盒为Power SYBR^TMGreen PCR预混液(Thermo Fisher Scientific，4367659)，PCR仪器为QuantStudio^TM5System(Thermo Fisher Scientific)，选取ACTB mRNA表达水平为内参，HHIPL1 mRNA相对表达水平的计算公式为2^-ΔΔCT；

其中，引物对的核苷酸序列如下：

上游引物：5’-tggcgctttgggtgctc-3’(SEQ ID NO.3)；

下游引物：5’-gtcatagaggtgggctgcat-3’(SEQ ID NO.4)；

去除基因组DNA的体系：6μL RNase-Free ddH₂O，2μL RNA(250ng/μL)，2μL 5×gDNA Buffer；反应条件：42℃孵育3分钟，结束后置于4℃备用。

逆转录PCR体系：10μL上述基因组DNA去除体系产物，5μL RNase-Free ddH₂O，2μLlnR-RT Primer Mix，1μL lnR RT Enzyme Mix，2μL 10×lnR RT Buffer；反应条件：42℃孵育15分钟，95℃孵育3分钟，4℃保存备用。

实时荧光定量PCR体系：3μL RNase-Free ddH₂O，5μL Power SYBR^TM Green PCR预混液，1μL上述逆转录体系产物，1μL引物稀释液(1μM)。反应条件：95℃预变性3分钟；95℃变性15秒，62℃退火10秒，72℃延伸20秒，共40循环；95℃变性15秒，60℃孵育60秒，95℃孵育1秒。

上述试剂均来自lnRcute lncRNA cDNA第一链合成试剂盒(TIANGEN，KR202)与Power SYBR^TM Green PCR预混液试剂盒(Thermo Fisher Scientific，4367659)。

实施例2

将特异性敲低HHIPL1 mRNA表达水平的siRNA-HHIPL1(SEQ ID NO.2)转染至ESCC细胞系Eca-109细胞中，应用CCK-8实验检测敲低HHIPL1 mRNA表达对Eca-109细胞增殖能力的影响，具体结果如图2所示。

由图2可知，应用siRNA-HHIPL1特异性敲低HHIPL1 mRNA表达水平能够显著抑制食管鳞状细胞癌细胞Eca-109的增殖能力。

具体实施过程如下：

(1)将siRNA-HHIPL1和siRNA-NC分别转染至Eca-109细胞中，具体方法见实施例1，转染后24小时，收集细胞，将细胞种于96孔板中，每孔含2500个细胞，每个细胞设置5个复孔，重复4组；

(2)在细胞铺板后2～4小时，加入CCK-8试剂(TargetMol,C0005)10μL，避光条件下37℃孵箱中孵育1小时，震荡后使用酶标仪测量450nm的吸光度值，此为起始读数；

(3)在首次测量细胞吸光度值后的24、48和72小时分别向六孔板中加入CCK-8试剂(TargetMol，C0005)，每孔10μL，简单震荡，使用酶标仪测量测量并记录上述孔板中450nm的吸光度值，以及计算细胞生长1天，2天，3天后的数量。

实施例3

应用特异性干扰HHIPL1 mRNA表达的siRNA-HHIPL1(SEQ ID NO.2)，敲低Eca-109细胞中HHIPL1 mRNA表达水平，应用Transwell实验检测HHIPL1 mRNA表达下调对Eca-109细胞迁移与侵袭能力的影响，具体结果如图3所示。

由图3可知，应用siRNA-HHIPL1特异性敲低HHIPL1 mRNA表达水平能够显著抑制食管鳞状细胞癌细胞Eca-109的迁移与侵袭。

具体实施过程如下：

(1)选取Eca-109细胞，分别转染siRNA-HHIPL1和siRNA-NC，具体方法见实施例1，转染后24小时，收集细胞，离心保留细胞沉淀；

(2)准备24孔板，向每孔中加入600μL完全培养基，预先将基质胶加入Transwell小室(Corning，3422)内面(用于检测细胞侵袭)，将未加基质胶的Transwell小室(用于检测细胞迁移)与预先加入基质胶的小室放入24孔板内；

(3)使用无血清培养基重悬细胞沉淀，细胞计数后调整细胞浓度至每毫升含10万个细胞，在每个小室内加入200μL细胞悬液，将24孔板置于细胞孵箱，37℃、5％CO₂条件下培养48小时；

(4)弃掉培养基，取出小室并用PBS清洗2遍，室温条件下4％多聚甲醛固定细胞15分钟，0.1％结晶紫染色过夜，使用棉签去除小室内侧面细胞，倒置显微镜观察并计数小室外侧面细胞。

实施例4

应用Kaplan-Meier Plotter数据库分析ESCC患者肿瘤组织中HHIPL1 mRNA表达水平对其预后的影响，结果显示，与HHIPL1 mRNA低表达的ESCC患者相比，HHIPL1 mRNA高表达的ESCC患者的总生存期明显缩短，说明HHIPL1 mRNA能够用于评估食管鳞状细胞癌患者总生存期，具体分析结果如图4所示。

具体实施过程如下：

在Kaplan-Meier Plotter网站中下载81例ESCC患者的预后信息，按照HHIPL1mRNA相对表达水平将ESCC患者分为高、低表达两组，应用Kaplan-Meier法分析两组患者总生存期(Overall Survival)的差异,HHIPL1 mRNA低表达组共30例ESCC患者，其中位生存期45.37个月；HHIPL1 mRNA高表达组包含51例ESCC患者，其中位生存期21.67个月，Log-rank检验显示组间生存差异具有统计学意义。

以上所述实施例仅为本发明优选的具体实施方案，并不用来限制本发明，凡是在本发明精神和原则之内，所作的任何修改、等同替换以及改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。

SEQUENCE LISTING

<110> 山东大学第二医院

<120> 人HHIPL1 mRNA在食管鳞状细胞癌靶向治疗和预后评估中的应用及试剂盒

<160> 4

<170> PatentIn version 3.5

<210> 1

<211> 7371

<212> DNA

<213> Homo sapiens

<400> 1

cccttccctg ccgccgcgag cgccccggga ggggaccggg gctgccgtcc ctccgcctct 60

tcccccgcgg ggcgtagcga tggcccgggc cagggccggg gcgctgctgg cgctttgggt 120

gctcggggcc gccgcgcatc cgcagtgcct ggacttcagg ccgcccttcc ggccgacgca 180

gccgctgcgc ctctgcgcgc agtactcgga cttcggctgc tgcgatgagg ggcgcgacgc 240

cgagctgacc cgccgcttct gggccctggc gagccgcgtg gacgccgccg agtgggccgc 300

gtgcgccggc tacgcgaggg acctgctgtg ccaggaatgc tcgccgtatg cagcccacct 360

ctatgacgcc gaggacccat tcacgcccct gcgcacggtg cccgggctct gccaggatta 420

ctgcctggac atgtggcata agtgccgggg gctgttccgt cacctgtcaa ctgaccagga 480

gctctgggcg ctggagggca accttgccag gttctgccgc tacctgtccc tggatgacac 540

ggactactgc ttcccttacc tgctggtcaa caagaacctc aactcaaacc tgggccacgt 600

ggtagccgat gccaagggct gcctgcagct gtgcctggag gaggtggcca acgggctgcg 660

caaccccgtg gccatggtcc atgccaggga tggcacccac cgcttcttcg tggccgagca 720

ggtggggctg gtgtgggcct acctgcccga ccgctcgagg ctggggaagc ctttcctgaa 780

catcagccgg gtggtgctca cctcgccctg ggagggtgac gagcgtggct tcctgggcat 840

tgccttccac cccagcttcc agcacaaccg caggctctac gtctactact cagtgggtat 900

ccgcagcagt gagtggatcc gcatcagcga gttcagagtc tccgaggatg acgagaacgc 960

cgtggaccac agctctgaga ggataatcct ggaggtcaaa gaaccagcct caaaccacaa 1020

cgggggccag ctgcttttcg gggatgacgg gtacctctac atcttcactg gagatggcgg 1080

gatggccgga gacccctttg ggacatttgg aaatgcccaa aacaagtcgg cgctgctggg 1140

caaggtgctg cgcatcgacg tggaccgtaa ggagcgcggc ctgccctacg gcatcccgcc 1200

cgacaacccg ttcgtgggcg accccgcggc gcagcccgag gtctacgccc tgggcgtgcg 1260

caacatgtgg cgctgctcct tcgaccgtgg cgacccctcc tcgggcactg gccgcgggcg 1320

cctcttctgc ggcgacgtgg gccagaacaa gttcgaggag gtggacgtgg tggagcgcgg 1380

cggcaactat ggctggcgcg cgcgcgaagg gttcgagtgc tacgaccgca gcctgtgcgc 1440

caacacctct ctcaatgact tgctgccgat tttcgcctac ccgcacacgg ttggcaagtc 1500

ggtcacaggg ggctacgtgt accggggctg cgagtacccc aacctgaacg gcctctacat 1560

ttttggggat ttcatgagcg ggcgtctgat gtccctccaa gagaacccag ggacaggcca 1620

gtggcagtac agtgagatct gcatgggcca cggccagacc tgtgagttcc caggcctcat 1680

caacaactac tacccgtaca tcatctcctt cggggaggac gaggccgggg agctgtactt 1740

catgtcgaca ggggagccga gtgccacagc tccacgcgga gttgtctaca aaataattga 1800

cgcatccagg cgggcaccac ctggcaaatg tcagatccag cctgctcagg tgaagatcag 1860

aagccgtctc atcccctttg tgcccaaaga aaagttcatc ccgaagacac ggagcacccc 1920

gcggcctaca gcgcgggcgc ccacgcgggc gccccgccga gggcgcccca cggccgctcc 1980

ccccgcgcca accccgcggc cagcgcggcc cacccagcag ccagggagcc ggaggggcgg 2040

cgggcggcgg cgggggcggc tgaactcggc gagccgggcg ttccgggatg gcgaggtgcg 2100

cctggtgcgg cccgcgggcc tgagctctgg cagcgggcgc gtggaggtgt tcgtgggcgg 2160

acgctggggc accgtgtgcg acgactcctg gaacatcagc ggcgccgccg tcgtgtgtcg 2220

ccagctgggg tttgcctacg ccgtgcgcgc cgtcaagaga gccgagttcg gccagggcgg 2280

ctcgctgccc attctgctgg acgatgtgcg ctgcgcgggc tgggagcgga acctgctgga 2340

gtgccagcac aacggcgtgg gcacccacaa ctgcgagcac gacgaggatg cgggcgtcgt 2400

gtgcagccac cagaaccccg acctgtaggc aacacgccgc tgccccaggc catcccgccg 2460

gcgggggagc ctggcagggg ccgctccgcc ctgtgtgcgc ccagcgggtg cacacgtgtt 2520

ctagagtgaa gggggtgcgg gtgtgtgctg tcctggggac atgtgtgagg cgctgcagtg 2580

catgtgtgtc ctctgcagac ccaaggcagg agtgtgtgtt gggggcggtg tgggctctgg 2640

aagtgcatgg tccatcatgg gcgggaggag ttcctttctt acctccaagc gtttcagaca 2700

ccagcaggaa cagcagccgg gctgtgggac cctgaggagg gagggcagcc aggcttcgag 2760

gacggacatg gcccctggct gtgctaacag aggcacagct tgcagactga gggcggtggg 2820

gagaaccagg cttgtcctgc ccacagctgg aatggaaggt gcaagaacag ccggagggtg 2880

gcctgaggaa tgtggcccgg acagcatggc ctggtgcccg catccccccc accccctggc 2940

agtcagaggc gctggagaga accggaaggc atccagtggg gaagggaaag ccttctggaa 3000

ggtgggagca gggtgagctg caggcctggg gccccactgg aggggcaggc tgcgtggagg 3060

agccagcacc tgctcaggga ggatggctgt gaggactgga tgacctccaa ggccgtatgc 3120

tggagaagcc actcagcagc atactcagtc cttgtgggtg ctcctgggat gggaccagcc 3180

tcctccaacc ctgaggcctg attctctctt gctcttgggg cagaagccac ccacactagc 3240

tgggcagagc tttcaccctg gccctccagt gagtcggtgg gcctccacta ctttcaaagc 3300

tgtgtttggg ccctggggcc acctctgtcc tttccatccc catccctgct cagtgtaaac 3360

ccaggagacc tgattcctcc agccctacct cggggctgac caggctgggg gtccagtgaa 3420

actactgaca ctttttcacc cagggctatg ccaataatgt ggctgtttac acaccacttt 3480

cctgcctcct ctctgacctg cacctgtgtg ggagccgggg tgggaaccag gagaaagggg 3540

tgaggcctcc cgcttcccac ctgcatcaca ggtggaagct ccttcactcc agggatgctc 3600

ggccctggct ctgtgccagg ccgcagaggg gcacttagta tgactgcgct cagcctcgga 3660

tgggagcacg ggtggggggt gggtaagcag atgagtcacc aggcagtgaa gacaggatgt 3720

ggcccatgtc gggggttgga agaggtctgg gtggggcacc caaacccaac ctatgggggg 3780

gctttgggag ggggtgatgc tgtgccaagt tctgggagct ggcaccaggg gtggctgggc 3840

aggccttggg gcaggcatga gtctggcagg gtctcctagc tgctagtata gggtctccta 3900

gccactagta taggatcctg ggctgcagca gaaagcttta ggtcactgtc ttggactcct 3960

catactctgt gctttacaga atgggaaact gaggcacaca gaggttagat atcttagggc 4020

accaagccag ggaagggaga agtcaagttt gaatacagca gcttagttta gagtccccgc 4080

accctaacca ctgccctccc cagctacact atgcctgcag agagcggtgt gctggggctc 4140

ctgcctggtg tgggagtgcc agcctggctg ggaagcagct gatggagatc cctgggggct 4200

cctcttgcct ggcaggtgcc cccgctgctg gcctcatgct cctctcgggc ctccagtggc 4260

ccaggggagg ttgagtgggc atcttcctgg gatgcagggg agttctgagc tctgacgccg 4320

ggcgtgttag gagatagcag gccgttaatg accatcccag ccgaattcct cactgtgcag 4380

atgaggaagt gagctcaggg aggctgagtg tcccaggcct gttgccagat gaggccacgc 4440

tgagactgga gccagggaag gtgcagcaag ccttgaggcc ctcaagaatg cagccgagcc 4500

agggccctgc ttgcctggcc ccagaagctg ttttgctcag agctggatta ggagggttgg 4560

caaagggagc tctgggtgcg gcctcaggcc ctccagtact tctctgggca gttcgggctt 4620

tggccttcag tcttccaggc caggcgctct tcctccccag cctccaactc atcacctctc 4680

aggccccaaa ccaggcctgg gctaggctgc agcctgcctc ctggggactc actccacagt 4740

ccccaggtca gtggtcccca acctttttgg catcatggac tggtttcatg taagacaatt 4800

tttccatgga tgggggttgg ggggatggtt ttgggatgaa atgtcccacc tcagatcatc 4860

aggcattaga ttctcataag gagttcacag cctagatccc tcgcatgcac agttcatagt 4920

aggtttcatg ttcctatgcg gatctaatgc cactgctgat ctggcaggag gcagagctca 4980

ggtgggaatg cttgctcccc acactaccct gccccactgc cactcacctc ctgctgtgtg 5040

gcccggttcc taacaggcca cccatcagta ctggtccgtg gcccagggtt tggagacctc 5100

tgccctaggt agtaataaga gtggacagct gttatatgta aatacttgtt ccccgatgct 5160

ggaaagaaat agcactaaaa cataaattta attctttcag caaggcaatt ttactttctg 5220

cagaaagggt gctcatcgca gatggaacaa tagtgagagg acacctgaac aaaggaggga 5280

agcaattgtt agcccttatg cagtttgtcc ctgctactgt gtcctatgtc cattggcaga 5340

agccagaccg cacaatctaa actaaaaccc gattggctgt ttaaaatttt tctaaatagg 5400

taaaagtaat ggaaggataa aggaaaagag gaagttgctt acgaaaggac ttagaaaagt 5460

aataatattc ccaaataagg aaggggtata ggctgtgagc tgggacatgc ctgtgagcac 5520

gtccagcaca gatatcttgg ttaaagtata aggacataga acgtactatg tgcctgtgag 5580

cacgtctaac agttacatag aatagggctt gacaaagagt tattagcata aagcaaggag 5640

gtttgaagga agttcgtctt taaaagaaac cattatttct aacacttacg atttattctt 5700

taacaagaag ggaaactttc aagaggaact tttactttct acaacagctg acctctgctg 5760

agcgcttact acatgccaag cactgctctg aaagtttaac ataccattca ctcatgtaat 5820

cctcatatta atgcacattt actcacgtgg aagccgagtt ccagggcatt tgtcacttac 5880

caaatgtcac atagccaaaa tttgaatttg agcccaggta gtccagctct gggaccctgc 5940

tgtgggcctt cctgctgggc cacctcaagg gcattgaaag ccagccccac cccactggga 6000

cacaagttca gagaagggca gagctggctg cctgtccagt gcttctttca ctccaccacc 6060

tacagctggc cgctgaggga gcattcacat gtgactctgt ccccagggac tccgatcttg 6120

ccttaaagtc ctccagggcc tctgaggatg ggggcacagc cttcaccctc accccctcta 6180

atccaacctc tagtcaatag ccaggatcag attctcagag aggggctgcc ctgcccagtg 6240

ccacacagct tagtgctgga gcctcagggt caatgctgca ggggtggccc agtgtccagg 6300

actgtgttca agacatcagt cagaggtcac aacatcccag gccctagact gagcctaggg 6360

gtcaccatgt tgatacctta gaaatgtttg ggaggttcaa ggaagctgga aactgggttc 6420

cagtcctggc tctgtgcctc tctgagtctc attgcaaaat agaggtcacc agaaggatta 6480

ctggatgaaa aatgaggtag cattgcagac gtgcatggca cgtacactct aggttgcttc 6540

ctagacagaa agctcagttc gaggctggtg gcatccatgc tggcagcagc caactgtctg 6600

cgacagagtg aggaggggca tgccacgtga aggaccagca tcagaatgac atgggaagaa 6660

actctcacaa tagcagaaga aagagctcct tcagcctaac atgtagaact caagtcttct 6720

tgtcgcgctt ctgtcccctc gcccctcctc ccccactgag aactagcttt tactgagcag 6780

ttattacatg ccagctacct cgggtgtgtc agctcattta atcttgacaa cagctccacg 6840

agacaccctc aatatcactg tccctgtttt ccagatgagg ggacagattc ctagggtgtt 6900

atgtaagtgg tccccggggc tttagaggca ggtttgcacc aaggcccatt ctcccagagc 6960

cggatccttc tccttccctg ggatacagca cctccaccct gccaggccac ccatgtaaag 7020

gcagccaatt cagagccacc tcttatgcct gcatctcccc aacaattcct gctgggaaac 7080

cactcctcgt atggtgtcat ctacaccagt gggtttcaag cttgagaaga atcaagttct 7140

acagggctgc ttaaaacaca ggttgctggg tcctgtctct cagagttttt gactcagtct 7200

tggttgagaa ttttcagttc tagaagctcc tgggtaatgc taatcctcct gttctagggg 7260

ccatagtcat tgtccatact ggtgctatcc aatagaaaca taatgtgagc caaataggta 7320

atttaaaatc tgcttgtagc catgttaaaa aagtaaaaca ggtaaaatta a 7371

<210> 2

<211> 19

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 2

gcatcgacgt ggaccgtaa 19

<210> 3

<211> 17

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 3

tggcgctttg ggtgctc 17

<210> 4

<211> 20

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 4

gtcatagagg tgggctgcat 20

Claims (10)

1.人HHIPL1 mRNA在制备食管鳞状细胞癌靶向治疗和预后评估产品中的应用。

2.如权利要求1所述的应用，其特征在于，所述应用中HHIPL1 mRNA为食管鳞状细胞癌预后评估的生物标志物；所述应用中HHIPL1 mRNA为食管鳞状细胞癌靶向治疗的作用靶点。

3.如权利要求1所述的应用，其特征在于，所述HHIPL1 mRNA的核苷酸序列如SEQ IDNO.1所示。

4.如权利要求1所述的应用，其特征在于，所述食管鳞状细胞癌靶向治疗产品包括特异性敲低HHIPL1 mRNA表达的物质；

所述特异性敲低HHIPL1 mRNA表达的物质选自特异性干扰HHIPL1 mRNA表达的siRNA；

所述特异性干扰HHIPL1 mRNA表达的siRNA靶向识别序列如SEQ ID NO.2所示。

5.如权利要求1所述的应用，其特征在于，所述食管鳞状细胞癌预后评估产品包括特异性识别HHIPL1 mRNA逆转录产物cDNA的物质；

所述特异性识别HHIPL1 mRNA逆转录产物cDNA的物质选自特异性扩增HHIPL1 mRNA的引物对；

所述特异性扩增HHIPL1 mRNA的引物对为SEQ ID NO.3所示的上游引物和SEQ ID NO.4所示的下游引物。

6.如权利要求1所述的应用，其特征在于，所述食管鳞状细胞癌预后评估产品的检测样本选自细胞、组织、血浆以及血清。

7.一种食管鳞状细胞癌靶向治疗药物，所述药物包括特异性敲低HHIPL1 mRNA表达的物质。

8.如权利要求7所述的药物，其特征在于，所述特异性敲低HHIPL1 mRNA表达的物质选自特异性干扰HHIPL1 mRNA表达的siRNA；

所述特异性敲低HHIPL1 mRNA表达的物质选自特异性干扰HHIPL1 mRNA表达的siRNA；

所述特异性干扰HHIPL1 mRNA表达的siRNA靶向识别序列如SEQ ID NO.2所示。

9.一种食管鳞状细胞癌预后评估试剂盒，所述试剂盒包括特异性识别HHIPL1 mRNA逆转录产物cDNA的物质。

10.如权利要求9所述的试剂盒，其特征在于，所述特异性识别HHIPL1 mRNA逆转录产物cDNA的物质选自特异性扩增HHIPL1 mRNA逆转录产物cDNA的引物对；

所述特异性扩增HHIPL1 mRNA逆转录产物cDNA的引物对为SEQ ID NO.3所示的上游引物和SEQ ID NO.4所示的下游引物；

所述试剂盒还包括实时荧光定量PCR的检测试剂。

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