CN114874905A - 干细胞增殖培养方法及其应用 - Google Patents

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Abstract

本发明涉及干细胞培养领域,特别是干细胞增殖培养方法及其应用,该方法包括以下步骤:S1、无菌环境下,将待培养的干细胞加入到放有培养基的培养皿中;S2、将托放机构由培养箱体内取出,对托放机构和培养箱体内外消毒后,将培养皿放置在托放机构上,然后将托放机构安装回培养箱体内,调节培养箱体内环境,与待培养的干细胞生长环境匹配;S3、转动培养箱体上的外环管通过外环管上的贯穿孔插入吸管或滴管,在不取出培养皿的情况下更换培养基,保证培养箱体内无菌环境;S4、直至完成干细胞增殖培养后,通过将托放机构由培养箱体内取出,取出培养皿;本发明无需将培养皿由培养箱中取出,即可对培养基进行更换。

Description

干细胞增殖培养方法及其应用
技术领域
本发明涉及干细胞培养领域,特别是干细胞增殖培养方法及其应用。
背景技术
干细胞是一类具有自我复制能力的多潜能细胞。在一定条件下,它可以分化成多种功能细胞。根据干细胞的发育潜能分为三类:全能干细胞、多能干细胞和单能干细胞。干细胞是一种未充分分化,尚不成熟的细胞,具有再生各种组织器官和人体的潜在功能,医学界称为“万用细胞”。
干细胞在增殖培养时,同样需要在无菌环境下进行,现有的干细胞增殖培养方法,一般将培养皿置于无菌培养箱中进行培养,但是在更换培养基时,需要将培养皿由无菌培养箱中取出,此过程中,极易使培养的细胞受细菌污染,从而导致培养失败。
发明内容
本发明的目的是提供干细胞增殖培养方法及其应用,无需将培养皿由培养箱中取出,即可对培养基进行更换。
本发明的目的通过以下技术方案来实现:
干细胞增殖培养方法,该方法包括以下步骤:
S1、无菌环境下,将待培养的干细胞加入到放有培养基的培养皿中;
S2、将托放机构由培养箱体内取出,对托放机构和培养箱体内外消毒后,将培养皿放置在托放机构上,然后将托放机构安装回培养箱体内,调节培养箱体内环境,与待培养的干细胞生长环境匹配;
S3、转动培养箱体上的外环管通过外环管上的贯穿孔插入吸管或滴管,在不取出培养皿的情况下更换培养基,保证培养箱体内无菌环境;
S4、直至完成干细胞增殖培养后,通过将托放机构由培养箱体内取出,取出培养皿。
所述培养箱体包括对称设置的两个弧形座,以及对称固定在两个弧形座两侧的侧架,两个弧形座的中部转动有外环管,外环管的两端与两个侧架密封转动连接,外环管上对向设有两个透视板,其中一个透视板上设有贯穿孔,两个侧架的内侧均设有环境调节装置,所述托放机构滑动在两个弧形座之间。
所述的干细胞增殖培养方法在干细跑无菌环境中培养的应用。
附图说明
图1是干细胞增殖培养方法的流程示意图;
图2是托放机构和培养箱体安装的结构示意图一;
图3是托放机构和培养箱体安装的结构示意图二;
图4是托放机构的结构示意图;
图5是培养箱体的局部结构示意图一;
图6是培养箱体的局部结构示意图二;
图7是培养箱体的局部结构示意图三;
图8是培养箱体的局部结构示意图四;
图9是托放机构的局部结构示意图一;
图10是托放机构的局部结构示意图二;
图11是托放机构的局部结构示意图三;
图12是托放机构的局部结构示意图四。
图中:
弧形座101;侧架102;环境调节装置103;喷头管104;L形锁板105;安装孔106;
外环管201;透视板202;贯穿孔203;
擦拭棉301;棉槽架302;控制架303;限位柱304;弹簧Ⅰ305;
主托板401;侧板402;L形拉板403;竖轴404;托板405;电机406;
升降块501;连动杆502;连动架503;夹紧柱504;螺杆505;弹簧Ⅱ506;
斜坡滑块601;方杆602;压板603;弹簧Ⅲ604。
具体实施方式
如图1所示:
干细胞增殖培养方法,该方法包括以下步骤:
S1、无菌环境下,将待培养的干细胞加入到放有培养基的培养皿中;
S2、将托放机构由培养箱体内取出,对托放机构和培养箱体内外消毒后,将培养皿放置在托放机构上,然后将托放机构安装回培养箱体内,调节培养箱体内环境,与待培养的干细胞生长环境匹配;
S3、转动培养箱体上的外环管201,通过外环管上的贯穿孔203插入吸管或滴管,在不取出培养皿的情况下更换培养基,保证培养箱体内无菌环境;
S4、直至完成干细胞增殖培养后,通过将托放机构由培养箱体内取出,取出培养皿。
如图2-12所示,对不取出培养皿的情况下更换培养基的实施例进行详细说明:
所述培养箱体包括弧形座101、侧架102、环境调节装置103、外环管201、透视板202和贯穿孔203,两个弧形座101对称设置,两个侧架102对称固定在两个弧形座101的两端,外环管201转动在两个弧形座101的中部,外环管201的两端与两个侧架102密封转动连接,两个透视板202对向设置在外环管201上,贯穿孔203设置在其中一个透视板202上,两个环境调节装置103分别安装在两个侧架102的内侧,两个弧形座101之间滑动连接有所述托放机构。
通过两个弧形座101与两个侧架102组成培养箱体的主架体,再通过外环管201与托放机构的配合,在主架体内部组成一个封闭腔体,该腔体以两个弧形座101和托放机构为底;
在使用时,将托放机构由两个弧形座101之间滑出,使用75%的酒精对培养箱体内外和托放机构内外进行消毒,消毒完成后,将盛有干细胞的培养皿放置在托放机构上,然后将托放机构滑入两个弧形座101之间,使培养皿处于封闭腔体内,以保证培养皿处于无菌环境;
此时可以通过透视板202对培养皿进行观察;当需要更换培养基时,转动外环管201使带有贯穿孔203的透视板202移动至与封闭腔体连通,且使贯穿孔203位于培养皿的正上方,此时可以将吸管通过贯穿孔203伸入培养皿内,将无营养的培养基吸出,再使用滴管将新的培养基加入培养皿内,再转动外环管201,使贯穿孔203移动至下方,保证封闭腔体的密封环境,从而完成在无需将培养皿取出培养箱体内的情况下,对培养基的更换,有效的避免转移培养皿更换培养基时,细胞受到细菌的感染;
其中环境调节装置103可用于对封闭腔体内温度调节、湿度调节、氧气等气体含量调节,光照调节等环境条件的调节;
外环管201的外侧均匀设有凸棱,便于推动外环管201转动;
两个侧架102的下端均设有支板,形成对培养箱体的支撑;
在更换培养基时,可以在贯穿孔203放置酒精棉,对贯穿孔203与吸管或滴管之间的缝隙进行防菌。
如图2-3、5-6所示,对喷头管104对外环管201的内壁进行消毒的实施例进行详细说明:
两个喷头管104均固定安装在两个所述侧架102之间的下端,两个喷头管104位于托放机构的下方,且位于外环管201内。
在使用时,将两个喷头管104与酒精泵连通,在需要转动外环管201时,启动酒精泵,使两个喷头管104同时对位于下端的外环管201进行喷洒酒精消毒,避免细菌由位于下端的外环管201内壁进入封闭腔体内,对细胞造成污染。
进一步的,如图2-3、5-6、8所示:
两个安装孔106分别贯穿设置在两个所述弧形座101上,两个棉槽架302分别滑动安装在两个安装孔106内,两个擦拭棉301分别安装在棉槽架302的外侧槽内,用于对外环管201的内壁进行擦拭。
通过擦拭棉301的设置,能够对喷洒酒精消毒后,即将进入封闭腔体内的外环管201内壁进行擦拭,避免过多的酒精随着外环管201内壁进入封闭腔体内,影响细胞。
进一步的:
控制架303固定在所述棉槽架302的内侧,两个限位柱304滑动连接在两个控制架303上,两个弹簧Ⅰ305分别套设在两个限位柱304上,两个弹簧Ⅰ305的两端分别顶紧两个控制架303。
在擦拭棉301使用一段时间后,在培养箱体的两侧可以挤压两个控制架303靠近,继而使两个控制架303挤压弹簧Ⅰ305的同时带动两个棉槽架302由安装孔106内滑出,从而在培养箱体的侧面将两个棉槽架302同时取出,完成对两个擦拭棉301的更换后,同样挤压两个控制架303靠近,使两个棉槽架302分别对准两个安装孔106,松开控制架303,两个弹簧Ⅰ305的弹力将推动两个棉槽架302滑入安装孔106内,并使擦拭棉301与外环管201内壁接触;
其中控制架303能够限定棉槽架302滑入安装孔106内的深度,从而确保两个擦拭棉301均与外环管201内壁接触;通过两个限位柱304形成对两个控制架303的限位,使两个控制架303成为能够活动的一个整体,便于对两个棉槽架302的同时操作。
如图9所示:
所述托放机构包括主托板401、侧板402和L形拉板403,主托板401滑动在两个弧形座101之间,两个侧板402分别固定在主托板401的两侧,在托放机构滑入培养箱体内时,两个侧板402对两个侧架102进行封堵,L形拉板403固定在其中一个侧板402上。
主托板401的与两个弧形座101配合完成对密封腔体下端封堵,两个侧板402完成对两个侧架102的封堵,保证密封腔体的密封;同时,通过两个侧板402的设置,在主托板401上形成一个随主托板401移动的空间,且不受侧架102影响,此空间用于放置培养皿;L形拉板403用于控制托放机构在两个弧形座101之间滑动。
如图10所示:
所述托放机构还包括竖轴404、托板405和电机406,竖轴404的下端通过轴承转动在主托板401的中心,三个托板405均匀固定在竖轴404的上端,电机406固定安装在其中一个侧板402上,其输出轴贯穿该侧板402与竖轴404传动连接。
竖轴404上端的均布的三个托板405用于放置培养皿,由于更换培养基时,吸管或滴管不能与细胞接触,从而需要调整吸管或滴管伸入培养皿的位置,从而可以启动电机406对竖轴404进行传动,带动培养皿以竖轴404为轴缓慢转动,配合外环管201在两个弧形座101上的转动,使吸管或滴管能够伸入培养皿的任意位置,进一步便于更换培养基。
如图11所示:
所述托放机构还包括升降块501、连动杆502、连动架503、夹紧柱504和螺杆505;升降块501滑动连接在竖轴404内,连动架503滑动在托板405上的长孔内,连动杆502的两端分别与升降块501与连动架503转动连接,夹紧柱504固定在连动架503的上端,螺杆505转动在竖轴404的下端,螺杆505与升降块501螺纹连接。
为了保证培养皿放置在三个托板405上稳定性,转动螺杆505螺纹传动升降块501下降,继而通过连动杆502带动连动架503在托板405上的长孔内滑动,从而使三个夹紧柱504同时靠近竖轴404,形成对培养皿的夹紧固定,避免竖轴404转动时,培养皿在三个托板405上滑落;
其中夹紧柱504上包覆有橡胶,进一步保证夹紧的稳定性
主托板401的四角处均设有支腿板,在将托放机构取出后,能够通过支腿板对主托板401进行水平支撑,便于放置培养皿。
进一步的:
弹簧Ⅱ506设置在所述升降块501与竖轴404的下端之间。
通过弹簧Ⅱ506的设置,使升降块501在螺杆505上具有向上移动的趋势,从而有效的避免了升降块501和螺杆505之间出现螺纹松动,影响夹紧柱504对培养皿的夹紧。
如图12所示:
所述托放机构还包括L形锁板105、斜坡滑块601、方杆602、压板603和弹簧Ⅲ604,L形锁板105焊接固定在其中一个侧板402上,且位于L形拉板403的上方,方杆602贯穿间隙滑动在L形拉板403上,斜坡滑块601焊接固定在方杆602的上端,压板603固定在方杆602的下端且贯穿L形拉板403,锁定时,斜坡滑块601滑入L形锁板105与侧板402之间。
通过L形锁板105和斜坡滑块601的设置,在将托放机构滑入培养箱体内时,手持L形拉板403,将主托板401插入两个弧形座101之间,当托放机构将要完全滑入培养箱体内时,斜坡滑块601与L形锁板105接触,并受斜坡滑块601上的斜坡影响,随着继续推动托放机构,L形锁板105挤压斜坡滑块601下移,继而挤压弹簧Ⅲ604,当斜坡滑块601的内端与侧架102接触时,形成对托放机构的限位,此时托放机构完全滑入培养箱体内,且保证了密封;同时L形锁板105失去对斜坡滑块601的挤压,受弹簧Ⅲ604的弹力影响,斜坡滑块601上移至L形锁板105与侧架102之间,完成对此状态的锁定;
当需要取出托放机构时,手持L形拉板403的同时下压压板603,带动斜坡滑块601滑出L形锁板105与侧架102之间,即可将托放机构拉出。
所述的干细胞增殖培养方法在干细跑无菌环境中培养的应用。

Claims (10)

1.干细胞增殖培养方法,其特征在于:该方法包括以下步骤:
S1、无菌环境下,将待培养的干细胞加入到放有培养基的培养皿中;
S2、将托放机构由培养箱体内取出,对托放机构和培养箱体内外消毒后,将培养皿放置在托放机构上,然后将托放机构安装回培养箱体内,调节培养箱体内环境,与待培养的干细胞生长环境匹配;
S3、转动培养箱体上的外环管(201),通过外环管上的贯穿孔(203)插入吸管或滴管,在不取出培养皿的情况下更换培养基,保证培养箱体内无菌环境;
S4、直至完成干细胞增殖培养后,通过将托放机构由培养箱体内取出,取出培养皿。
2.根据权利要求1所述的干细胞增殖培养方法,其特征在于:所述培养箱体包括对称设置的两个弧形座(101),以及对称固定在两个弧形座(101)两端的侧架(102),两个弧形座(101)的中部转动有外环管(201),外环管(201)的两端分别与两个侧架(102)密封转动连接,外环管(201)上对向设有两个透视板(202),其中一个透视板(202)上设有贯穿孔(203),两个侧架(102)的内侧均设有环境调节装置(103),所述托放机构滑动在两个弧形座(101)之间。
3.根据权利要求2所述的干细胞增殖培养方法,其特征在于:两个所述侧架(102)之间的下端固定有两个喷头管(104),两个喷头管(104)位于托放机构的下方,且位于外环管(201)内。
4.根据权利要求3所述的干细胞增殖培养方法,其特征在于:两个所述弧形座(101)上均贯穿设有安装孔(106),两个安装孔(106)内均滑动安装有棉槽架(302),棉槽架(302)内安装有用于对外环管(201)的内壁进行擦拭的擦拭棉(301)。
5.根据权利要求4所述的干细胞增殖培养方法,其特征在于:所述棉槽架(302)的内侧固定有控制架(303),两个控制架(303)均滑动在两个限位柱(304)上,两个限位柱(304)上均套设有弹簧Ⅰ(305),两个弹簧Ⅰ(305)的两端分别顶紧两个控制架(303)。
6.根据权利要求2所述的干细胞增殖培养方法,其特征在于:所述托放机构包括滑动在两个弧形座(101)之间的主托板(401),以及固定在主托板(401)两侧对两个侧架(102)进行封堵的侧板(402),其中一个侧板(402)上固定有L形拉板(403)。
7.根据权利要求6所述的干细胞增殖培养方法,其特征在于:所述托放机构还包括转动在主托板(401)中心的竖轴(404),以及均匀固定在竖轴(404)上端的三个托板(405),以及固定在其中一个侧板(402)上且与竖轴(404)传动连接的电机(406)。
8.根据权利要求7所述的干细胞增殖培养方法,其特征在于:所述托放机构还包括滑动连接在竖轴(404)内的升降块(501),以及滑动在托板(405)上的连动架(503),升降块(501)与连动架(503)之间转动有连动杆(502),连动架(503)的上端固定有夹紧柱(504),竖轴(404)的下端转动有螺杆(505),螺杆(505)与升降块(501)螺纹连接。
9.根据权利要求8所述的干细胞增殖培养方法,其特征在于:所述升降块(501)与竖轴(404)的下端之间设有弹簧Ⅱ(506)。
10.根据权利要求1-9任一所述的干细胞增殖培养方法在干细跑无菌环境中培养的应用。
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CN115717098A (zh) * 2022-11-16 2023-02-28 哈尔滨师范大学 一种冻土微生物培养设备

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