CN114874905A - 干细胞增殖培养方法及其应用 - Google Patents

干细胞增殖培养方法及其应用 Download PDF

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Abstract

本发明涉及干细胞培养领域，特别是干细胞增殖培养方法及其应用，该方法包括以下步骤：S1、无菌环境下，将待培养的干细胞加入到放有培养基的培养皿中；S2、将托放机构由培养箱体内取出，对托放机构和培养箱体内外消毒后，将培养皿放置在托放机构上，然后将托放机构安装回培养箱体内，调节培养箱体内环境，与待培养的干细胞生长环境匹配；S3、转动培养箱体上的外环管通过外环管上的贯穿孔插入吸管或滴管，在不取出培养皿的情况下更换培养基，保证培养箱体内无菌环境；S4、直至完成干细胞增殖培养后，通过将托放机构由培养箱体内取出，取出培养皿；本发明无需将培养皿由培养箱中取出，即可对培养基进行更换。

Description

干细胞增殖培养方法及其应用
技术领域
本发明涉及干细胞培养领域，特别是干细胞增殖培养方法及其应用。
背景技术
干细胞是一类具有自我复制能力的多潜能细胞。在一定条件下，它可以分化成多种功能细胞。根据干细胞的发育潜能分为三类:全能干细胞、多能干细胞和单能干细胞。干细胞是一种未充分分化，尚不成熟的细胞，具有再生各种组织器官和人体的潜在功能，医学界称为“万用细胞”。
干细胞在增殖培养时，同样需要在无菌环境下进行，现有的干细胞增殖培养方法，一般将培养皿置于无菌培养箱中进行培养，但是在更换培养基时，需要将培养皿由无菌培养箱中取出，此过程中，极易使培养的细胞受细菌污染，从而导致培养失败。
发明内容
本发明的目的是提供干细胞增殖培养方法及其应用，无需将培养皿由培养箱中取出，即可对培养基进行更换。
本发明的目的通过以下技术方案来实现：
干细胞增殖培养方法，该方法包括以下步骤：
S1、无菌环境下，将待培养的干细胞加入到放有培养基的培养皿中；
S2、将托放机构由培养箱体内取出，对托放机构和培养箱体内外消毒后，将培养皿放置在托放机构上，然后将托放机构安装回培养箱体内，调节培养箱体内环境，与待培养的干细胞生长环境匹配；
S3、转动培养箱体上的外环管通过外环管上的贯穿孔插入吸管或滴管，在不取出培养皿的情况下更换培养基，保证培养箱体内无菌环境；
S4、直至完成干细胞增殖培养后，通过将托放机构由培养箱体内取出，取出培养皿。
所述培养箱体包括对称设置的两个弧形座，以及对称固定在两个弧形座两侧的侧架，两个弧形座的中部转动有外环管，外环管的两端与两个侧架密封转动连接，外环管上对向设有两个透视板，其中一个透视板上设有贯穿孔，两个侧架的内侧均设有环境调节装置，所述托放机构滑动在两个弧形座之间。
所述的干细胞增殖培养方法在干细跑无菌环境中培养的应用。
附图说明
图1是干细胞增殖培养方法的流程示意图；
图2是托放机构和培养箱体安装的结构示意图一；
图3是托放机构和培养箱体安装的结构示意图二；
图4是托放机构的结构示意图；
图5是培养箱体的局部结构示意图一；
图6是培养箱体的局部结构示意图二；
图7是培养箱体的局部结构示意图三；
图8是培养箱体的局部结构示意图四；
图9是托放机构的局部结构示意图一；
图10是托放机构的局部结构示意图二；
图11是托放机构的局部结构示意图三；
图12是托放机构的局部结构示意图四。
图中：
弧形座101；侧架102；环境调节装置103；喷头管104；L形锁板105；安装孔106；
外环管201；透视板202；贯穿孔203；
擦拭棉301；棉槽架302；控制架303；限位柱304；弹簧Ⅰ305；
主托板401；侧板402；L形拉板403；竖轴404；托板405；电机406；
升降块501；连动杆502；连动架503；夹紧柱504；螺杆505；弹簧Ⅱ506；
斜坡滑块601；方杆602；压板603；弹簧Ⅲ604。
具体实施方式
如图1所示：
干细胞增殖培养方法，该方法包括以下步骤：
S1、无菌环境下，将待培养的干细胞加入到放有培养基的培养皿中；
S2、将托放机构由培养箱体内取出，对托放机构和培养箱体内外消毒后，将培养皿放置在托放机构上，然后将托放机构安装回培养箱体内，调节培养箱体内环境，与待培养的干细胞生长环境匹配；
S3、转动培养箱体上的外环管201，通过外环管上的贯穿孔203插入吸管或滴管，在不取出培养皿的情况下更换培养基，保证培养箱体内无菌环境；
S4、直至完成干细胞增殖培养后，通过将托放机构由培养箱体内取出，取出培养皿。
如图2-12所示，对不取出培养皿的情况下更换培养基的实施例进行详细说明：
所述培养箱体包括弧形座101、侧架102、环境调节装置103、外环管201、透视板202和贯穿孔203，两个弧形座101对称设置，两个侧架102对称固定在两个弧形座101的两端，外环管201转动在两个弧形座101的中部，外环管201的两端与两个侧架102密封转动连接，两个透视板202对向设置在外环管201上，贯穿孔203设置在其中一个透视板202上，两个环境调节装置103分别安装在两个侧架102的内侧，两个弧形座101之间滑动连接有所述托放机构。
通过两个弧形座101与两个侧架102组成培养箱体的主架体，再通过外环管201与托放机构的配合，在主架体内部组成一个封闭腔体，该腔体以两个弧形座101和托放机构为底；
在使用时，将托放机构由两个弧形座101之间滑出，使用75％的酒精对培养箱体内外和托放机构内外进行消毒，消毒完成后，将盛有干细胞的培养皿放置在托放机构上，然后将托放机构滑入两个弧形座101之间，使培养皿处于封闭腔体内，以保证培养皿处于无菌环境；
此时可以通过透视板202对培养皿进行观察；当需要更换培养基时，转动外环管201使带有贯穿孔203的透视板202移动至与封闭腔体连通，且使贯穿孔203位于培养皿的正上方，此时可以将吸管通过贯穿孔203伸入培养皿内，将无营养的培养基吸出，再使用滴管将新的培养基加入培养皿内，再转动外环管201，使贯穿孔203移动至下方，保证封闭腔体的密封环境，从而完成在无需将培养皿取出培养箱体内的情况下，对培养基的更换，有效的避免转移培养皿更换培养基时，细胞受到细菌的感染；
其中环境调节装置103可用于对封闭腔体内温度调节、湿度调节、氧气等气体含量调节，光照调节等环境条件的调节；
外环管201的外侧均匀设有凸棱，便于推动外环管201转动；
两个侧架102的下端均设有支板，形成对培养箱体的支撑；
在更换培养基时，可以在贯穿孔203放置酒精棉，对贯穿孔203与吸管或滴管之间的缝隙进行防菌。
如图2-3、5-6所示，对喷头管104对外环管201的内壁进行消毒的实施例进行详细说明：
两个喷头管104均固定安装在两个所述侧架102之间的下端，两个喷头管104位于托放机构的下方，且位于外环管201内。
在使用时，将两个喷头管104与酒精泵连通，在需要转动外环管201时，启动酒精泵，使两个喷头管104同时对位于下端的外环管201进行喷洒酒精消毒，避免细菌由位于下端的外环管201内壁进入封闭腔体内，对细胞造成污染。
进一步的，如图2-3、5-6、8所示：
两个安装孔106分别贯穿设置在两个所述弧形座101上，两个棉槽架302分别滑动安装在两个安装孔106内，两个擦拭棉301分别安装在棉槽架302的外侧槽内，用于对外环管201的内壁进行擦拭。
通过擦拭棉301的设置，能够对喷洒酒精消毒后，即将进入封闭腔体内的外环管201内壁进行擦拭，避免过多的酒精随着外环管201内壁进入封闭腔体内，影响细胞。
进一步的：
控制架303固定在所述棉槽架302的内侧，两个限位柱304滑动连接在两个控制架303上，两个弹簧Ⅰ305分别套设在两个限位柱304上，两个弹簧Ⅰ305的两端分别顶紧两个控制架303。
在擦拭棉301使用一段时间后，在培养箱体的两侧可以挤压两个控制架303靠近，继而使两个控制架303挤压弹簧Ⅰ305的同时带动两个棉槽架302由安装孔106内滑出，从而在培养箱体的侧面将两个棉槽架302同时取出，完成对两个擦拭棉301的更换后，同样挤压两个控制架303靠近，使两个棉槽架302分别对准两个安装孔106，松开控制架303，两个弹簧Ⅰ305的弹力将推动两个棉槽架302滑入安装孔106内，并使擦拭棉301与外环管201内壁接触；
其中控制架303能够限定棉槽架302滑入安装孔106内的深度，从而确保两个擦拭棉301均与外环管201内壁接触；通过两个限位柱304形成对两个控制架303的限位，使两个控制架303成为能够活动的一个整体，便于对两个棉槽架302的同时操作。
如图9所示：
所述托放机构包括主托板401、侧板402和L形拉板403，主托板401滑动在两个弧形座101之间，两个侧板402分别固定在主托板401的两侧，在托放机构滑入培养箱体内时，两个侧板402对两个侧架102进行封堵，L形拉板403固定在其中一个侧板402上。
主托板401的与两个弧形座101配合完成对密封腔体下端封堵，两个侧板402完成对两个侧架102的封堵，保证密封腔体的密封；同时，通过两个侧板402的设置，在主托板401上形成一个随主托板401移动的空间，且不受侧架102影响，此空间用于放置培养皿；L形拉板403用于控制托放机构在两个弧形座101之间滑动。
如图10所示：
所述托放机构还包括竖轴404、托板405和电机406，竖轴404的下端通过轴承转动在主托板401的中心，三个托板405均匀固定在竖轴404的上端，电机406固定安装在其中一个侧板402上，其输出轴贯穿该侧板402与竖轴404传动连接。
竖轴404上端的均布的三个托板405用于放置培养皿，由于更换培养基时，吸管或滴管不能与细胞接触，从而需要调整吸管或滴管伸入培养皿的位置，从而可以启动电机406对竖轴404进行传动，带动培养皿以竖轴404为轴缓慢转动，配合外环管201在两个弧形座101上的转动，使吸管或滴管能够伸入培养皿的任意位置，进一步便于更换培养基。
如图11所示：
所述托放机构还包括升降块501、连动杆502、连动架503、夹紧柱504和螺杆505；升降块501滑动连接在竖轴404内，连动架503滑动在托板405上的长孔内，连动杆502的两端分别与升降块501与连动架503转动连接，夹紧柱504固定在连动架503的上端，螺杆505转动在竖轴404的下端，螺杆505与升降块501螺纹连接。
为了保证培养皿放置在三个托板405上稳定性，转动螺杆505螺纹传动升降块501下降，继而通过连动杆502带动连动架503在托板405上的长孔内滑动，从而使三个夹紧柱504同时靠近竖轴404，形成对培养皿的夹紧固定，避免竖轴404转动时，培养皿在三个托板405上滑落；
其中夹紧柱504上包覆有橡胶，进一步保证夹紧的稳定性
主托板401的四角处均设有支腿板，在将托放机构取出后，能够通过支腿板对主托板401进行水平支撑，便于放置培养皿。
进一步的：
弹簧Ⅱ506设置在所述升降块501与竖轴404的下端之间。
通过弹簧Ⅱ506的设置，使升降块501在螺杆505上具有向上移动的趋势，从而有效的避免了升降块501和螺杆505之间出现螺纹松动，影响夹紧柱504对培养皿的夹紧。
如图12所示：
所述托放机构还包括L形锁板105、斜坡滑块601、方杆602、压板603和弹簧Ⅲ604，L形锁板105焊接固定在其中一个侧板402上，且位于L形拉板403的上方，方杆602贯穿间隙滑动在L形拉板403上，斜坡滑块601焊接固定在方杆602的上端，压板603固定在方杆602的下端且贯穿L形拉板403，锁定时，斜坡滑块601滑入L形锁板105与侧板402之间。
通过L形锁板105和斜坡滑块601的设置，在将托放机构滑入培养箱体内时，手持L形拉板403，将主托板401插入两个弧形座101之间，当托放机构将要完全滑入培养箱体内时，斜坡滑块601与L形锁板105接触，并受斜坡滑块601上的斜坡影响，随着继续推动托放机构，L形锁板105挤压斜坡滑块601下移，继而挤压弹簧Ⅲ604，当斜坡滑块601的内端与侧架102接触时，形成对托放机构的限位，此时托放机构完全滑入培养箱体内，且保证了密封；同时L形锁板105失去对斜坡滑块601的挤压，受弹簧Ⅲ604的弹力影响，斜坡滑块601上移至L形锁板105与侧架102之间，完成对此状态的锁定；
当需要取出托放机构时，手持L形拉板403的同时下压压板603，带动斜坡滑块601滑出L形锁板105与侧架102之间，即可将托放机构拉出。
所述的干细胞增殖培养方法在干细跑无菌环境中培养的应用。

Claims (10)

1.干细胞增殖培养方法，其特征在于：该方法包括以下步骤：
S1、无菌环境下，将待培养的干细胞加入到放有培养基的培养皿中；
S2、将托放机构由培养箱体内取出，对托放机构和培养箱体内外消毒后，将培养皿放置在托放机构上，然后将托放机构安装回培养箱体内，调节培养箱体内环境，与待培养的干细胞生长环境匹配；
S3、转动培养箱体上的外环管(201)，通过外环管上的贯穿孔(203)插入吸管或滴管，在不取出培养皿的情况下更换培养基，保证培养箱体内无菌环境；
S4、直至完成干细胞增殖培养后，通过将托放机构由培养箱体内取出，取出培养皿。
2.根据权利要求1所述的干细胞增殖培养方法，其特征在于：所述培养箱体包括对称设置的两个弧形座(101)，以及对称固定在两个弧形座(101)两端的侧架(102)，两个弧形座(101)的中部转动有外环管(201)，外环管(201)的两端分别与两个侧架(102)密封转动连接，外环管(201)上对向设有两个透视板(202)，其中一个透视板(202)上设有贯穿孔(203)，两个侧架(102)的内侧均设有环境调节装置(103)，所述托放机构滑动在两个弧形座(101)之间。
3.根据权利要求2所述的干细胞增殖培养方法，其特征在于：两个所述侧架(102)之间的下端固定有两个喷头管(104)，两个喷头管(104)位于托放机构的下方，且位于外环管(201)内。
4.根据权利要求3所述的干细胞增殖培养方法，其特征在于：两个所述弧形座(101)上均贯穿设有安装孔(106)，两个安装孔(106)内均滑动安装有棉槽架(302)，棉槽架(302)内安装有用于对外环管(201)的内壁进行擦拭的擦拭棉(301)。
5.根据权利要求4所述的干细胞增殖培养方法，其特征在于：所述棉槽架(302)的内侧固定有控制架(303)，两个控制架(303)均滑动在两个限位柱(304)上，两个限位柱(304)上均套设有弹簧Ⅰ(305)，两个弹簧Ⅰ(305)的两端分别顶紧两个控制架(303)。
6.根据权利要求2所述的干细胞增殖培养方法，其特征在于：所述托放机构包括滑动在两个弧形座(101)之间的主托板(401)，以及固定在主托板(401)两侧对两个侧架(102)进行封堵的侧板(402)，其中一个侧板(402)上固定有L形拉板(403)。
7.根据权利要求6所述的干细胞增殖培养方法，其特征在于：所述托放机构还包括转动在主托板(401)中心的竖轴(404)，以及均匀固定在竖轴(404)上端的三个托板(405)，以及固定在其中一个侧板(402)上且与竖轴(404)传动连接的电机(406)。
8.根据权利要求7所述的干细胞增殖培养方法，其特征在于：所述托放机构还包括滑动连接在竖轴(404)内的升降块(501)，以及滑动在托板(405)上的连动架(503)，升降块(501)与连动架(503)之间转动有连动杆(502)，连动架(503)的上端固定有夹紧柱(504)，竖轴(404)的下端转动有螺杆(505)，螺杆(505)与升降块(501)螺纹连接。
9.根据权利要求8所述的干细胞增殖培养方法，其特征在于：所述升降块(501)与竖轴(404)的下端之间设有弹簧Ⅱ(506)。
10.根据权利要求1-9任一所述的干细胞增殖培养方法在干细跑无菌环境中培养的应用。
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CN115717098A (zh) * 2022-11-16 2023-02-28 哈尔滨师范大学 一种冻土微生物培养设备

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