CN114874096A - 一种制备型色谱分离高纯度甘油三酯型α-亚麻酸的方法 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种制备型色谱分离高纯度甘油三酯型α‑亚麻酸的方法，该方法包括以下步骤：（1）有机溶剂浸提法获取蚕蛹油；（2）硅胶柱层析制备蚕蛹油甘油三酯；（3）制备色谱分离获得α‑亚麻酸甘油三酯单体。本发明首次利用制备色谱技术从蚕蛹油中分离纯化高纯度α‑亚麻酸甘油三酯单体，其工艺简单、高效快速、制备量大及纯度高，可产业化生产高纯度甘油三酯α‑亚麻酸。
Description
技术领域
本发明属于生物技术领域，具体涉及一种制备型色谱分离高纯度甘油三酯型α-亚麻酸的方法。
背景技术
随着健康中国战略的提出，全面营养和膳食均衡的理念得到了更多人的关注。在膳食脂质中，n-6和n-3 多不饱和脂肪酸（PUFAs）与人类健康密切相关，具有重要的生物学意义。n-6和n-3的失衡可能会增加许多慢性疾病的风险，如炎症和过敏（Nutrients, 2016,8(3):128.）。然而，人们不合理的饮食习惯会导致n-6 PUFAs摄入量过度，使n-3和n-6PUFAs摄入比例失衡。为了缓解n-3和n-6 PUFAs的失衡，降低发病风险，有必要适当增加n-3PUFAs的摄入。α-亚麻酸是n-3 PUFAs中唯一的必需脂肪酸，也是对人体健康至关重要的二十碳五烯酸（Eicosapntemacnioc acid，EPA）和二十二碳六烯酸（Docose hexaenoie acid，DHA）的前体（Nutrients, 2016, 8(3):128.）。α-亚麻酸是组成细胞膜和生物酶的基本物质，随着α-亚麻酸含量的增加，膜的形成和流动性得到改善，这可能对预防动脉粥样硬化和回复血管弹性起到作用。α-亚麻酸除了具有结构功能外，还可以竞争性抑制n-6 PUFAs途径中的几种酶，特别是与脂肪酸和胆固醇生物合成相关的△6-去饱和酶，从而促进代谢过程中的脂质平衡（Journal of Nutrition, 2016, 147(1):37-44.）。因此补充α-亚麻酸能够最有效地解决n-3 PUFAs的缺失问题。
亚麻科、杜仲科和唇形科植物是α-亚麻酸的主要来源。但考虑到耕地红线限制，且植物种子获取困难、成本高，导致植物来源的α-亚麻酸无法满足需求，人们开始将目光转向昆虫（Journal of Soil Water Conservation, 2004, 4:190-192.）。我国是养蚕大国，蚕蛹的年产量可达390,480吨，占世界总产量的80%。蚕蛹油中不饱和脂肪酸占75%以上，其中α-亚麻酸的含量占到35%（Food Chemistry, 2017, 231:348-355.）。因此，将蚕蛹油作为α-亚麻酸新的来源具有重要的现实意义和应用价值。在自然界，脂肪酸通常以甘油三酯的形式存在，α-亚麻酸的分离通常需要皂化预处理，既增加了制备成本又造成了中间环节α-亚麻酸的损失。乙酯化是α-亚麻酸分离的另一种常用手段，通过乙醇置换油脂中的甘油，制备α-亚麻酸乙酯（CN107556187A.）。然而，乙酯型n-3 PUFAs在人体中消化和吸收比较困难，而且可能存在安全隐患。综合以上考虑，从蚕蛹油分离获得甘油三酯型α-亚麻酸是一种经济、高效的手段
甘油三酯的结构组成复杂，而且物理化学性质类似，导致甘油三酯的分离是一件十分艰巨的任务。已报道的脂质分离手段包括柱层析法、超临界CO2萃取法和分子蒸馏技术，但这些方法只能对脂质中甘油三酯、甘油二酯、甘油单酯和游离脂肪酸等混合物进行分离，并不能满足分离出甘油三酯中单体的要求（中国食品学报, 2018, 18(1):292-300.）。制备型色谱是指采用色谱技术制备纯物质，即分离、收集一种或多种色谱纯物质。近年来，已报道研究人员将制备型色谱技术应用于甘油三酯的分离中来，利用中压制备液相色谱-紫外检测器联用技术制备了中链甘油三酯中极性相近的4个组分，并对收集的产物进行鉴定，结果显示每个组分的纯度均大于99%（烟草科技, 2018,51(7):61-66.）。因此，制备色谱技术能够高效、快速地分离纯化油脂中不同甘油三酯，有望应用于对蚕蛹油中不同功能性甘油三酯单体的分离纯化。然而，截止目前尚未见到关于蚕蛹油甘油三酯单体分离纯化的研究报道。因此，利用制备色谱技术有望应用于对蚕蛹油中不同功能性α-亚麻酸甘油三酯单体的分离纯化。
发明内容
针对从蚕蛹油中提取的α-亚麻酸纯度低，工艺复杂，成本高等问题，本发明提供了一种制备型色谱分离高纯度甘油三酯型α-亚麻酸的方法。结合有机溶剂浸提法、柱层析法和制备色谱技术，制备高纯度、多种类的高纯度甘油三酯型α-亚麻酸，拓宽蚕蛹油高附加值新产品的开发。
为解决现有技术问题，本发明采取的技术方案为：
一种制备型色谱分离高纯度甘油三酯型α-亚麻酸的方法，其特征在于，包括如下步骤：
步骤1，将蚕蛹粉碎至200目后，烘干，再加入有机溶剂，超声条件下萃取，重复萃取后，进行固液分离，收集滤液，旋转蒸发去除有机溶剂得到粗制蚕蛹油；所述的有机溶剂与蚕蛹粉的固液比为1-30：1，单位为mL/g；
步骤2，以硅胶作为填料填装层析柱，装至2/3柱高，将粗制蚕蛹油与硅胶混合，使其均匀吸附于硅胶上，并将样品加入层析柱，保持柱面平整均匀；使用正己烷-乙醚混合液进行梯度洗脱，收集蚕蛹油甘油三酯组分；
步骤3，将蚕蛹油甘油三酯组分进行制备色谱分离，再用异丙醇-乙腈混合液进行梯度洗脱，利用紫外检测器监测甘油三酯型α-亚麻酸的分离，收集产物，旋转蒸发去除有机溶剂，获得高纯度甘油三酯单体α-亚麻酸。
作为改进的是，步骤1中所述的有机溶剂为乙醇、正己烷、异丙醇、丙酮或石油醚。
作为改进的是，步骤1中所述的超声功率为100-1000W，超声时间为1-10 h，温度为15-60℃。
作为改进的是，步骤2中所述的蚕蛹油与硅胶的质量比为0.1-30：1，粗制蚕蛹油的上样量为0.1-50 g。
作为改进的是，步骤2中梯度洗脱为正己烷：乙醚混合液，体积比为1-50：1。
作为改进的是，步骤3中所述的甘油三酯组分进样浓度为1-100 mg/mL，样品进样量为1 mL，溶剂为异丙醇。
作为改进的是，步骤3中，所述的流动相为异丙醇-乙腈混合液，异丙醇与乙腈配比为（0.01-10）：1。
作为改进的是，步骤3中所述的流动相为异丙醇-乙腈混合液，流速为1-20 mL/min，紫外检测器检测波长为210 nm，柱温35 ℃。
上述方法制备的高纯度的高纯度甘油三酯型α-亚麻酸。
有益效果：
与现有技术相比，本发明一种制备型色谱分离高纯度甘油三酯型α-亚麻酸的方法，从蚕蛹油中分离纯化得到高纯度的甘油三酯型α-亚麻酸,其工艺更加简单、操作方便、样品无损失、高效快速、制备量大及纯度高,是一种适合大量制备生产高纯度α-亚麻酸甘油三酯单体的良好方法。
附图说明
图1 为蚕蛹油中甘油三酯的成分；
图2 为蚕蛹油、甘油三酯单体的实物图；
图3 为蚕蛹油甘油三酯单体HPLC-ELSD图谱；
图4 为蚕蛹油甘油三酯单体LnLnLn的核磁共振氢谱和质谱图，A为核磁共振氢谱，B质谱图。
具体实施方式
下面结合具体实施例，进一步阐述本发明。应理解，这些实施例仅用于说明本发明而不用于限制本发明的范围。此外应理解，在阅读了本发明讲授的内容之后，本领域技术人员可以对本发明作各种改动或修改，这些等价形式同样落于本申请所附权利要求书所限定的范围。
实施例1超声辅助浸提法提取蚕蛹油
将蚕蛹于60℃下干燥后粉碎成大小为200目的颗粒，放入棕色试剂瓶中，按石油醚：蚕蛹粉=1:1（v/v）加入石油醚，40℃下超声波处理5 h，每隔20 min摇匀混合物。将处理后的蚕蛹粉-石油醚混合物过滤，分离得到的包含蚕蛹油的石油醚溶液，于55℃的温度下减压浓缩除去其中的石油醚，即得粗制蚕蛹油。
利用气相色谱对粗制蚕蛹油的脂肪酸组成进行分析（如表1），结果表明蚕蛹油中α-亚麻酸含量高达32.60±0.67%，是一种提取α-亚麻酸的油脂原料。
表1. 蚕蛹油的脂肪酸组成及分布
实施例2柱层析法分离蚕蛹油甘油三酯
取一定量硅胶湿法填装层析柱，装至2/3柱高，将30 g粗制蚕蛹油均匀吸附于硅胶上，粗制蚕蛹油与硅胶的质量比为1：1。将粗制蚕蛹油和硅胶的混合物加入层析柱，保持柱面平整均匀，分别使用200 mL正己烷、100 mL正己烷/乙醚（95：5，v/v）、正己烷/乙醚（70：30，v/v）进行梯度洗脱，收集只含甘油三酯的洗脱液，于55℃的温度下减压浓缩除去其中的有机溶剂，即得蚕蛹油甘油三酯混合物。
利用HPLC-ELSD对蚕蛹油的甘油三酯组成进行分析（结果如图1），HPLC色谱条件：Agilent 1260 Infinity II色谱仪，Kromasil C18（250 × 4.6 mm，5 μm）色谱柱，35 ℃柱温，1 mL/min的进样流速，10 μL的进样量；检测器条件：Agilent 1260 Infinity II ELSD,1.6 mL/min的气体流量，50℃蒸发器温度和45℃雾化器温度；流动相条件：A，乙腈；B，二氯甲烷；洗脱条件：梯度洗脱，0~5 min，0 B~15% B，5~30 min, 15 % B~70 % B，30~32 min 70% B，32~35 min 70%~0 B。结果表明蚕蛹油中含有α-亚麻酸的甘油三酯多达9种，其中，甘油三酯LnLnLn的α-亚麻酸含量为100%，有望分离获得高纯度、高含量的甘油三酯型α-亚麻酸。
实施例3 制备色谱分离α-亚麻酸甘油三酯单体
选择乙腈/异丙醇作为流动相对蚕蛹油甘油三酯的进行分离，在乙腈：异丙醇=1：1(v/v)、蚕蛹油甘油三酯浓度为15 mg/mL、进样量1 mL和流速12 mL/min的条件下，根据紫外检测器的出峰时间在线收集蚕蛹油α-亚麻酸甘油三酯单体，将收集到的洗脱液在40℃旋转蒸发获得蚕蛹油甘油三酯型单体。
蚕蛹油呈亮黄色透明状，有蚕蛹腥味，甘油三酯单体LnLnLn和LnLnO均无色透明且无明显气味（如图2）。两种甘油三酯单体的α-亚麻酸含量分别为100.00%和66.66%，远高于蚕蛹油的32.60±0.67%。同时LnLnLn和LnLnO两种甘油三酯颜色透亮、没有异味，开发成高效补充α-亚麻酸产品，更易被人们所接受。
实施例4蚕蛹油甘油三酯单体的纯度分析
根据紫外检测器的出峰时间在线收集蚕蛹油甘油三酯单体，收集的样品使用HPLC-ELSD检测，确保收集的甘油三酯单体组分正确。
利用HPLC-ELSD（参数同实施例1）对步骤3中收集的7个组分进行分析，可以看出接收的组分能与蚕蛹油中甘油三酯组分一一对应（结果如图3），利用面积归一法（公式1）计算各甘油三酯单体纯度大于98%，说明建立的半制备色谱技术可以满足蚕蛹油甘油三酯单体的分离。
式中
为各组分的量之和；
为各组分峰面积之和。
实施例5 甘油三酯型α-亚麻酸的结构鉴定
利用质谱和1H NMR对富含α-亚麻酸的甘油三酯单体进行结构鉴定，结果如图4所示。从图4中可以看出，LnLnLn的m/z为895.50，碎裂之后的碎片峰为595.30，可以推测碎裂出来碎片为[RCOOH+Na]+，裂解的脂肪酸为α-亚麻酸，由于单体1包含三个脂肪酸，因此其结构为LnLnLn。
从上述结果可以看出，本发明首次利用制备色谱技术从蚕蛹油中分离纯化高纯度α-亚麻酸甘油三酯单体，其工艺简单、高效快速、制备量大及纯度高，可产业化生产高纯度甘油三酯α-亚麻酸。
Claims (9)
1.一种制备型色谱分离高纯度甘油三酯型α-亚麻酸的方法，其特征在于，包括如下步骤：
步骤1，将蚕蛹粉碎至200目后，烘干，再加入有机溶剂，超声条件下萃取，重复萃取后，进行固液分离，收集滤液，旋转蒸发去除有机溶剂得到粗制蚕蛹油；所述的有机溶剂与蚕蛹粉的固液比为1-30：1，单位为mL/g；
步骤2，以硅胶作为填料填装层析柱，装至2/3柱高，将粗制蚕蛹油与硅胶混合，使其均匀吸附于硅胶上，并将样品加入层析柱，保持柱面平整均匀；使用正己烷-乙醚混合液进行梯度洗脱，收集蚕蛹油甘油三酯组分；
步骤3，将蚕蛹油甘油三酯组分进行制备色谱分离，再用异丙醇-乙腈混合液进行梯度洗脱，利用紫外检测器监测甘油三酯型α-亚麻酸的分离，收集产物，旋转蒸发去除有机溶剂，获得高纯度甘油三酯单体α-亚麻酸。
2.根据权利要求1所述的制备型色谱分离高纯度甘油三酯型α-亚麻酸的方法，其特征在于，步骤1中所述的有机溶剂为乙醇、正己烷、异丙醇、丙酮或石油醚。
3.根据权利要求1所述的制备型色谱分离高纯度甘油三酯型α-亚麻酸的方法，其特征在于，步骤1中所述的超声功率为100-1000W，超声时间为1-10 h，温度为15-60℃。
4.根据权利要求1所述的制备型色谱分离高纯度甘油三酯型α-亚麻酸的方法，其特征在于，步骤2中所述的蚕蛹油与硅胶的质量比为0.1-30：1，粗制蚕蛹油的上样量为0.1-50g。
5.根据权利要求1所述的制备型色谱分离高纯度甘油三酯型α-亚麻酸的方法，其特征在于，步骤2中梯度洗脱为正己烷：乙醚混合液，体积比为1-50：1。
6.根据权利要求1所述的制备型色谱分离高纯度甘油三酯型α-亚麻酸的方法，其特征在于，步骤3中所述的甘油三酯组分进样浓度为1-100 mg/mL，样品进样量为1 mL，溶剂为异丙醇。
7.根据权利要求1所述的制备型色谱分离高纯度甘油三酯型α-亚麻酸的方法，其特征在于，步骤3中，所述的流动相为异丙醇-乙腈混合液，异丙醇与乙腈配比为（0.01-10）：1。
8.根据权利要求1所述的制备型色谱分离高纯度甘油三酯型α-亚麻酸的方法，其特征在于，步骤3中所述的流动相为异丙醇-乙腈混合液，流速为1-20 mL/min，紫外检测器检测波长为210 nm，柱温35 ℃。
9.基于权利要求1所述方法制备的高纯度的高纯度甘油三酯型α-亚麻酸。
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Citations (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN101892119A (zh) * | 2010-06-29 | 2010-11-24 | 陕西师范大学 | 蚕蛹油多不饱和脂肪酸的梯度冷冻结晶分离方法 |
| CN102408333A (zh) * | 2011-09-16 | 2012-04-11 | 陕西科技大学 | 一种从花椒籽油中提取α-亚麻酸甲酯的方法 |
| CN107556187A (zh) * | 2017-08-31 | 2018-01-09 | 江苏科技大学 | β‑环糊精包埋联合模拟移动床色谱分离法制备高纯度α‑亚麻酸的方法 |
| CN108634017A (zh) * | 2018-04-25 | 2018-10-12 | 广东省农业科学院蚕业与农产品加工研究所 | 一种富含α-亚麻酸的甘油二酯的制备方法 |
-
2022
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Patent Citations (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN101892119A (zh) * | 2010-06-29 | 2010-11-24 | 陕西师范大学 | 蚕蛹油多不饱和脂肪酸的梯度冷冻结晶分离方法 |
| CN102408333A (zh) * | 2011-09-16 | 2012-04-11 | 陕西科技大学 | 一种从花椒籽油中提取α-亚麻酸甲酯的方法 |
| CN107556187A (zh) * | 2017-08-31 | 2018-01-09 | 江苏科技大学 | β‑环糊精包埋联合模拟移动床色谱分离法制备高纯度α‑亚麻酸的方法 |
| CN108634017A (zh) * | 2018-04-25 | 2018-10-12 | 广东省农业科学院蚕业与农产品加工研究所 | 一种富含α-亚麻酸的甘油二酯的制备方法 |
Non-Patent Citations (3)
| Title |
|---|
| "STN-Registry，CAS：14465-68-0", 《STN-REGISTRY，CAS：14465-68-0》, 16 November 1984 (1984-11-16), pages 1 - 2 * |
| 席辉: "卷烟爆珠溶剂中链甘油三酯的分离与鉴定", 《烟草科技》, vol. 51, no. 7, 31 July 2018 (2018-07-31) * |
| 谢亚: "直接进样串联质谱法分析冷榨菜籽油中甘油三酯", 《中国食品学报》, vol. 18, no. 1, 31 January 2018 (2018-01-31) * |
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