CN114853831B - 抗肿瘤化合物及其制备方法和用途 - Google Patents

抗肿瘤化合物及其制备方法和用途 Download PDF

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Abstract

本发明属于化学医药技术领域，具体涉及抗肿瘤化合物及其制备方法和用途。本发明提供如式Ⅰ所示的糖基化合物或其立体异构体。生物学实验表明，这类化合物从葡萄糖受体转运进入细胞内，在癌细胞内分解释放二氯乙酸单体，提升二氯乙酸在癌细胞内的浓度，提高对癌细胞的治疗作用，同时，减少该化合物相对正常细胞膜的特异性和选择性，减少和降低二氯乙酸对正常细胞的毒副作用，最终成为一种安全、有效、广谱的抗肿瘤药物，对恶性肿瘤能发挥更明显的治疗作用。

Description

抗肿瘤化合物及其制备方法和用途
技术领域
本发明属于化学医药技术领域，具体涉及抗肿瘤化合物及其制备方法和用途。
背景技术
肿瘤是机体细胞在内外致瘤因素长期协同作用下，导致基因水平的突变和功能调控异常，从而导致细胞持续过度增殖增生形成的新生物。根据GLOBOCAN 2020数据,我国每年新生癌症患者总数约457万人左右，全国肿瘤死亡人数每年约有300万人左右，也就是说肿瘤患者人群正以每年约160万人的速度膨胀。
目前用于肿瘤治疗的主要手段有手术、放疗、化疗，免疫疗法和生物治疗，其他有效手段还包括内分泌治疗、中医中药治疗、热疗和射频消融治疗等。化疗药物仍然是现有各种治疗手段中最重要的主要治疗手段，进一步发现或人工合成新的化疗药物，或进一步改进已有化疗药的疗效或降低毒副反应，仍然是化疗药物研究和发展的主要方向。
人体细胞主要通过葡萄糖分解代谢，获得维持生命和生长发育所需要的能量，葡萄糖的分解代谢主要包括：线粒体氧化和糖酵解两种代谢方式。正常细胞的葡萄糖的分解代谢方式，主要是通过线粒体氧化分解葡萄糖。癌细胞则主要依赖于糖酵解方式，通过糖酵解获得能量，代谢产物乳酸可以作为合成原料，乳酸还会抑制免疫细胞活性，抑制癌细胞凋亡。
癌细胞糖代谢依赖糖酵解这种特点叫Warburg效应，因为Warburg效应的存在，癌细胞通常能够在缺氧的环境下生存。相对于葡萄糖氧化代谢，葡萄糖酵解则是一种能量转化效率更低的方式，因此癌细胞必须要消耗更多的葡萄糖，才能获得所需的代谢能量。如果抑制葡萄糖酵解，将迫使癌细胞通过葡萄糖的线粒体氧化途径获得能量，氧化过程中线粒体释放细胞色素C和其它一些诱导凋亡的因子，同时使细胞内活性氧成分(ROS)浓度上升，诱导癌细胞凋亡。
现有化学物质如二氯乙酸，能够特异性的抑制细胞内葡萄糖酵解代谢并减少代谢产物乳酸的生成，导致细胞只能依靠线粒体氧化磷酸化代谢途径分解利用葡萄糖。这个细胞内代谢途径的改变，对正常细胞的能量代谢实际影响较小，对癌细胞的能量代谢实际影响则是颠覆性或根本性的改变，将导致癌细胞能量代谢受阻进而导致癌细胞生长抑制或凋亡。因此，二氯乙酸被认为具有抗癌治疗作用。已有多项临床试验报道：二氯乙酸能够抑制多种癌细胞的生长。而二氯乙酸减少乳酸生成的具体作用机理为：二氯乙酸能够抑制丙酮酸脱氢酶激酶PDK (pyruvate dehydrogenase kinase，PDK)的活性，从而解除PDK对丙酮酸脱氢酶(pyruvate dehydrogenase，PDH)的抑制作用，丙酮酸脱氢酶活化后将丙酮酸彻底氧化代谢成CO2和水而不是转化成乳酸。
目前二氯乙酸用于抗癌治疗时，存在2大明显的缺限或不足：即二氯乙酸实际难于维持在癌细胞内的较高治疗浓度或浓度梯度，从而发挥良好的治疗作用；如进一步提升血液浓度，虽然可维持在癌细胞内的较高治疗浓度，但同时也将对正常细胞产生更大的毒性作用。
因为二氯乙酸实际在水溶液中是以带电离子形式存在，所有二氯乙酸实际不能直接通过脂性的细胞膜。二氯乙酸需要通过单羧酸转运蛋白(monocarboxylatetransporter，MCT)，或者钠离子依赖的单羧酸转运蛋(sodium-coupled monocarboxylatetransporter1，SMCT1)转运后，才能进入细胞内。
其中，单羧酸转运蛋白(MCT)仅仅是一个易化扩散的离子通道，所以二氯乙酸在细胞膜两边的离子浓度是相同的，不能在细胞内富集该离子。同时MCT的容量有限，对二氯乙酸的运输面临肿瘤内环境中大量存在的乳酸等离子的竞争，通过速度很低。
其中，钠离子依赖的单羧酸转运蛋1(SMCT1)虽然能够逆浓度梯度主动转运二氯乙酸至细胞内，是一个耗能的转运，能够在细胞内富集二氯乙酸，但SMCT1是一个抑癌基因，在绝大多数癌症细胞不表达。
结果是血液中的二氯乙酸单体，可以通过SMCT1进入正常细胞，并导致正常细胞内二氯乙酸浓度高于血液浓度，导致二氯乙酸在正常细胞富集；而癌细胞则通过MCT转运，导致二氯乙酸在癌细胞内浓度等于血浓度，不产生癌细胞内富集；
因此，当二氯乙酸血液浓度较低时，对癌细胞不能产生明显的治疗作用，而对正常细胞则已经产生了一定的毒副作用。而更高血液浓度的二氯乙酸，则对癌细胞产生明显治疗作用，同时对正常细胞产生了更严重的毒副作用。因此，现有技术的二氯乙酸单体药物，实际难于成为用于常规癌症治疗的首选药物。
发明内容
为克服现有技术的二氯乙酸单体药物的抗癌缺陷和不足，获得更好的二氯乙酸类化合物，本发明创建了含二氯乙酸分子的新型化合物，使该新型化合物从葡萄糖受体转运进入细胞内。同时，因为与正常细胞比较，癌细胞普遍高表达葡萄糖受体，所以该新型化合物，将主要选择性的进入癌细胞，该新型化合物在癌细胞内能被细胞内广泛存在的酯酶分解并释放出二氯乙酸单体，使二氯乙酸在癌细胞内富集并高于血液浓度。同时，该新型化合物在正常细胞膜的主动转运则因为正常细胞对葡萄糖的摄入不如癌细胞强大，不会主动转运比转运到癌细胞更多的该新型化合物至正常细胞内。最终在细胞外溶液新型化合物很低的情况下在癌细胞内获得具有治疗效果的二氯乙酸浓度，大大减轻甚至消除二氯乙酸的副作用。使该新型化合物成为安全、有效、广谱的抗肿瘤药物，对恶性肿瘤能发挥更明显的治疗作用。
本发明第一方面提供如式Ⅰ所示的糖基化合物或其立体异构体：
R1～R5独立选自
R1～R5中至少一个为
X为O或NH；
其中，R6选自未取代的C1～C6烷基链或未取代的3～6元烷基环。
优选地，R1为R2、R3、R4、R5均为-H。
优选地，R5为R1、R2、R3、R4均为-H。
进一步地，R1、R3、R4、R5均为
优选地，R6选自未取代的C1～C6烷基链。
进一步优选地，R6选自甲基链、乙基链、正丙基链、异丙基链、正丁基链。
更优选地，R6选自乙基链。
优选地，上述糖基分子结构来源于葡萄糖、果糖、半乳糖或氨基葡萄糖及其衍生物。
优选地，上述化合物选自：
其中，式Ⅱ和式Ⅲ为立体异构结构式。
更优选地，上述化合物结构为：
本发明第二方面提供了上述化合物或其立体异构体在制备预防和/或治疗肿瘤药物中的用途。
进一步地，所述药物抑制肿瘤细胞进行糖酵解。
本发明第三方面提供了抗肿瘤的药物组合物，它是以所述化合物或其立体异构体为活性成分，加入药学上可接受的辅料或者辅助性成分制备而成的制剂。
所述的制剂是口服制剂、肌肉注射剂、静脉注射剂、气雾剂或黏膜给药制剂。
本发明第四方面提供了抗肿瘤的联合用药物，它含有用于同时或者分别给药的上述药物组合物，以及其它抗肿瘤药物。
本发明第五方面提供了TM-1和TM-2化合物的制备方法，其包括以下两种合成路线：
合成路线一：S1、化合物1通过与乙二醇脱水反应得到化合物2；S2、化合物2与二氯乙酰氯进行酯化反应得到化合物3；S3、化合物3通过苄基脱保护反应即得目标化合物TM-1；
合成路线二：a、化合物1通过与原料1脱水反应得到化合物2；b、化合物2与二氯乙酰氯进行酯化反应得到化合物3；c、化合物3通过苄基脱保护反应即得目标化合物TM-2；
进一步地，上述制备方法合成路线一中：
步骤S1中，化合物1溶于二氯甲烷(DCM)，再加入三苯基硫化膦(PPh3)及四溴化碳(CBr4)，得反应混合物；将乙二醇、四甲基脲(TMU)、四乙基溴化铵(TEAB)溶于四氢呋喃(THF)中，加入反应混合物中，反应后，用盐酸稀释、DCM萃取浓缩、分离，得化合物2。
其中，化合物1与乙二醇的摩尔比为1～3：1。优选地，化合物1与乙二醇的摩尔比为2.5：1。
步骤S2中，化合物2溶于DCM，加入三乙胺(TEA)、2,2-二氯乙酰氯，反应后，分离得化合物3。
其中，化合物2与2,2-二氯乙酰氯的摩尔比为0.1～1：1。优选地，化合物2与2,2-二氯乙酰氯的摩尔比为0.6～0.7：1。
步骤S3中，化合物3加入溶剂中，再加入钯催化剂，在氢气环境下，进行脱保护基反应。
优选地，步骤S3中，所述反应温度为10-40℃。更优选地，反应温度为25℃。
优选地，所述反应时间为0.5-2h。更优选地，反应时间为70分钟。
优选地，钯催化剂选自Pd(OH)2/C、Pd/C、Pd/SiO2、Pd/Al2O3、Pd(OH)2/Al2O3、Raney-Ni、 Pd/(PSi-Al2O3)、Pd/Dowex、Pd-Fe、Pd-Pt、Pt/C、Pd/BaSO4。
优选地，反应溶剂为甲醇(MeOH)和THF的混合溶剂，MeOH和THF的体积比为4：1。
优选地，化合物3与催化剂质量比为9～11：1。优选地，化合物3与催化剂质量比为10： 1。
进一步地，上述制备方法合成路线二中：
步骤a中，化合物1溶于DCM，加入无水MgSO4后冷却至-42℃，再加入三氟甲烷磺酸银、叔丁基二甲基羟乙氧基硅烷，-42℃～0℃反应完毕后，分离得化合物2。
其中，化合物1与叔丁基二甲基羟乙氧基硅烷(原料1)的质量比为1～3：1。优选地，化合物1与叔丁基二甲基羟乙氧基硅烷(原料1)的质量比为2：1。
优选地，化合物1：无水MgSO4：三氟甲烷磺酸银：叔丁基二甲基羟乙氧基硅烷质量比为1～3：1～2：0.1～0.3：1。
步骤b中，化合物2溶于DCM，加入三乙胺(TEA)、2,2-二氯乙酰氯，反应后，分离得化合物3。
其中，化合物2与2,2-二氯乙酰氯摩尔比为0.1～1：1。优选地，化合物2与2,2-二氯乙酰氯摩尔比为0.6～0.7：1。
步骤c中，化合物3加入溶剂中，再加入钯催化剂，在氢气环境下，进行脱保护基反应。
优选地，步骤c中，所述反应温度为10-40℃。更优选地，反应温度为25℃。
优选地，步骤c中，所述反应时间为0.5-2h。更优选地，反应时间为70分钟。
优选地，钯催化剂选自Pd(OH)2/C、Pd/C、Pd/SiO2、Pd/Al2O3、Pd(OH)2/Al2O3、Raney-Ni、 Pd/(PSi-Al2O3)、Pd/Dowex、Pd-Fe、Pd-Pt、Pt/C、Pd/BaSO4。
优选地，反应溶剂为甲醇(MeOH)和THF的混合溶剂，MeOH和THF的体积比为4：1。
优选地，化合物3与催化剂质量比为9～11：1。优选地，化合物3与催化剂质量比为10： 1。
术语定义：
本发明提供的化合物和衍生物可以根据IUPAC(国际纯粹与应用化学联合会)或CAS(化学文摘服务社，Columbus，OH)命名系统命名。
术语“烷基”是直链或支链的饱和烃基的基团。C1～C6烷基的实例包括但不限于甲基 (C1)、乙基(C2)、正丙基(C3)、异丙基(C3)、正丁基(C4)、叔丁基(C4)、仲丁基(C4)、异丁基 (C4)、正戊基(C5)、3-戊基(C5)、戊基(C5)、新戊基(C5)、3-甲基-2-丁基(C5)、叔戊基(C5)和正己基(C6)。
术语“药学上可接受的”是指某载体、运载物、稀释剂、辅料，和/或所形成的盐通常在化学上或物理上与构成某药物剂型的其它成分相兼容，并在生理上与受体相兼容。
本发明所述的辅料，是指除活性成分以外包含在剂型中的物质。本发明所述的辅助性成分，它具有一定生理活性，但该成分的加入不会改变上述药物组合物在疾病治疗过程中的主导地位，而仅仅发挥辅助功效，这些辅助功效仅仅是对该成分已知活性的利用，是医药领域惯用的辅助治疗方式。若将上述辅助性成分与本发明药物组合物配合使用，仍然应属于本发明保护的范围。
有益效果：本发明通过创建一个含二氯乙酸分子的新型化合物，使该新型化合物从另外的转运途径转运进入细胞内，通过该新型化合物在癌细胞内分解释放二氯乙酸单体，提升二氯乙酸在癌细胞内的浓度，提升对癌细胞的治疗作用。同时，减少该新型化合物相对正常细胞膜的特异性和选择性，减少和降低二氯乙酸对正常细胞的毒副作用。使本发明所述的新型化合物，能替代原二氯乙酸单体，成为一种安全、有效、广谱的抗肿瘤药物，对恶性肿瘤能发挥更明显的治疗作用。
附图说明
图1为实施例1中化合物TM1的HMRI谱图；
图2为实施例2中化合物TM2的HMRI谱图；
图3为试验例1中化合物TM-1对50％的A549细胞的抑制曲线；
图4为试验例1中化合物TM-2对50％的A549细胞的抑制曲线；
图5为试验例1中化合物TM-1对50％的SW620细胞的抑制曲线；
图6为试验例1中化合物TM-2对50％的SW620细胞的抑制曲线。
具体实施方式
本发明的化合物实质上是一种葡萄糖的衍生物，其中二氯乙酸是通过酯键连接的小基团，该种葡萄糖的衍生物整体呈电中性，不是通过细胞膜上的离子通道进出细胞，而是通过细胞膜上的葡萄糖转运通道进出细胞，因此衍生物中的二氯乙酸不再是通过前述二氯乙酸的原转运途径进出细胞，而实际是作为葡萄糖的衍生物借道细胞膜上的葡萄糖转运通道进入细胞内。进入细胞后，被癌细胞内广泛存在的酯酶分解并释放出二氯乙酸单体，使二氯乙酸在癌细胞内富集并高于血液浓度。目前这是一个普遍存在的通过葡萄糖受体富集药物的方法。参考文献见下：Malay Patra,Timothy C.Johnstone,KogularamananSuntharalingam,Stephen J.Lippard. A potent glucose-platinum conjugateexploits glucose transporters and preferentially accumulates in cancer cellsAngew Chem Int Ed Engl.2016February；55(7):2550–2554.
本发明化合物结构中R1～R5中至少一个可为是由于仅仅是糖分子的一个羟基改变大多数情况下不改变化合物与细胞葡萄糖转运蛋白的结合及通过细胞膜的能力。
本发明化合物的合成的难点在最后一步脱保护反应：主要是温度和时间要比较严格的控制，不然所带的二氯乙酸容易掉下来。具体的如本试验操作“按1：10加入Pd(OH)/C催化剂 (0.1克)，在氢气环境下搅拌1.5小时，温度25℃。完成后过滤去除催化剂Pd/C，滤液真空干燥，用制备高压液相层析分离得本发明化合物”。这一实验数据反复试验摸索出来的。实际可有效实现的温度范围是：10-40℃，最优温度25℃；时间范围是：0.5-2小时，最优70分钟。
本发明的新型化合物作为影响癌细胞基础代谢，对全部癌症均有程度不等的效果，原则上对恶化程度高、生长快、代谢水平高的恶性肿瘤，疗效更明显。
下面将结合实施例对本发明的方案进行解释。本领域技术人员将会理解，下面的实施例仅用于说明本发明，而不应视为限定本发明的范围。实施例中未注明具体技术或条件的，按照本领域内的文献所描述的技术或条件或者按照产品说明书进行。所用试剂或仪器未注明生产厂商者，均为可以通过市购获得的常规产品。
实施例1化合物TM1的制备
TM1合成的反应式如下：
TM1合成的具体步骤为：
1、将2,3,4,6-四-o-苄基-D-吡喃葡萄糖(5g,9.26mmol,1.0eq)溶于二氯甲烷(80.0mL)，再加入PPh3(7.86g,5.45mmol,3.0eq)及CBr4(8.96g,4.91mmol,3.0eq)，将混合物置室温搅拌3h。
2、将乙二醇(2.40g,3.72mmol,2.2eq)，TMU(1.20mL,10.0mmol,6.0eq)，TEAB(2.40g, 2.08mmol 1.2eq)溶于80mL THF，逐滴缓慢加入步骤1的反应混合物中，室温搅拌过夜。
3、当薄层色谱显示反应(TLC)完成后，用1M的HCl稀释，然后用DCM萃取浓缩，快速柱(flash column)分离(PE/EA的体积比是3：1)，得到无色产物2，产率74％。
4、将产物2(4g,6.8mmol,1.0eq.)溶于40mL DCM，加入TEA(1.38g,13.68mL,2.0eq),2,2- 二氯乙酰氯(2,2-dichloroactyl chloride 1.51g,10.26mmol,1.5eq)，混合物室温搅拌1h。产物用 DCM萃取浓缩，快速柱(flash column)分离(PE/EA的体积比是5：1)，得到产物3，产率84％。
5、将产物3(1g,1.44mmol,1.0eq.)溶解于MeOH(8mL)和THF(2mL)的混合溶剂中，按1： 10加入Pd(OH)/C催化剂(0.1g)，在氢气环境下搅拌70分钟，温度25℃。完成后过滤去除催化剂Pd/C，滤液真空浓缩干燥，用prep-HPLC分离得无色产物TM-1，产率10％。
产物TM-1的HMRI谱如图1所示：H NMR(DMSO,400MHz)δ6.87(s,1H),4.70(d,J ＝8Hz,1H),4.40(dd,J＝4,8Hz,3H),3.60(dt,J＝4,12Hz,1H),3.58-3.40(m,3H),3.43-3.32(m,4H),2.65(dd,J＝4,8Hz,1H),2.50(dd,J＝4,8Hz,1H).
实施例2化合物TM2的制备
TM2合成的反应式如下：
TM2合成的具体步骤为：
1、将2,3,4,6-四-O-苄基-Α-D-吡喃葡萄糖基三氯乙酰亚胺酯(5g,7.32mmol,1.0eq)溶于 DCM(80mL)，再加入无水MgSO4(.3.51g,29.2mmol,4.0eq)然后冷却至-42℃，然后加入三氟甲烷磺酸银(silver trifluoromethanesulfonate，0.56g,2.1mmol,0.3eq)和叔丁基二甲基羟乙氧基硅烷(2-((tert-butyldimethylsiyl)ethen-1-ol,2.57g,14.6mmol,2.0eq)，于-42℃～0℃搅拌1h。用DCM 萃取浓缩，快速柱(flash column)分离(PE/EA的体积比是3：1),得到黄色产物2。
2、将产物2(4g,6.8mmol,1.0eq.)溶于DCM(40mL)，加入TEA(1.38g,13.68ml,2.0eq)和 2,2-二氯乙酰氯(2,2-dichloroactyl chloride 1.51g,10.26mmol,1.5eq)，混合物室温搅拌1h。产物用二氯甲烷萃取浓缩，快速柱(flash column)分离(PE/EA的体积比是5：1)，得到产物3，产率 84％；
3、将产物3(1g,1.44mmol,1.0eq.)溶解于MeOH(8mL)和THF(2mL)的混合溶剂中，按1： 10加入Pd(OH)/C催化剂0.1g，在氢气环境下搅拌70分钟，温度25℃。完成后过滤去除催化剂Pd/C，滤液真空浓缩干燥，用制备高压液相层析分离得产物TM-2，产率10％。
产物TM2的HMRI谱如图2所示，H NMR(DMSO,400MHz)δ6.91(s,1H),5.00(brs,1H),4.39(d,J＝4,8Hz,2H),4.18(d,J＝12Hz,2H),4.11(d,J＝12Hz,1H),3.77(dt,J＝4,12Hz,1H),3.63-3.51(m,1H),3.50-3.41(m,1H),3.39-3.10(m,2H),3.10(q,J＝12Hz,1H),2.97(q,J＝ 12Hz,1H),2.50(dd,J＝4,8Hz,2H).
以下通过生物学实验证明本发明的有益效果。
试验例1本发明化合物抑制癌细胞生长(MTT)实验
将实施例1和2两种化合物、二氯乙酸用MTT实验观察其对培养皿中癌细胞生长的抑制作用，计算其抑制50％癌细胞生长所需要的浓度水平(IC50值)。
一、实验试剂及细胞
肿瘤细胞株A549，SW620；
药物：二氯乙酸；化合物TM-1；化合物TM-2。
二、对照品的实验过程
取二氯乙酸13.2uL，加10mL DMEM，配置成16M的储备液；保存于4℃。
取16M的储备液1mL，加入9mL DMEM，配置成1600mM的储备液；保存于4℃。
取1600uM的储备液1mL，加入9mL DMEM，配置成160mM的储备液；保存于4℃。
取160mM的储备液5uL，加入4.995mL DMEM，配置成160uM的工作液；
将160uM的工作液用2.5mL，加入2.5DMEM稀释成80uM工作液；
以此类推，利用逐级稀释，制备40um,20um,10um,5um,2.5um的工作液.。
每次工作液现配现用。
使用96孔板接种细胞，每孔1*104个细胞，外圈加入200ul PBS。
铺板24小时后，加入药物培养48小时。
48小时后将培养液吸出，用PBS清洗2遍，加入配置的CCK8，孵育2小时后检测。
酶标仪设置波长为450nm，每次检测前震动5s。
三、对照品的实验结果
铺板示意图如表1所示：
表1
PBS PBS PBS PBS PBS PBS PBS PBS PBS PBS PBS PBS
PBS 160 80 40 20 10 5 2.5 0 PBS PBS PBS
PBS 160 80 40 20 10 5 2.5 0 PBS PBS PBS
PBS 160 80 40 20 10 5 2.5 0 PBS PBS PBS
PBS 160 80 40 20 10 5 2.5 0 PBS PBS PBS
PBS 160 80 40 20 10 5 2.5 0 PBS PBS PBS
PBS 160 80 40 20 10 5 2.5 0 PBS PBS PBS
PBS PBS PBS PBS PBS PBS PBS PBS PBS PBS PBS PBS
四、对照品的实验结果
利用graphpad进行线性拟合，计算IC50值。
A549细胞：IC50＝49.82uM
SW620细胞：IC50＝107.7uM。
五、化合物TM-1和化合物TM-2的实验过程
取化合物TM-1储备液1uL(浓度为150mM)，加9.999mL DMEM，配置成150uM的工作液。
取150uM的工作液4mL，加入2mL DMEM，配置成100uM的工作液。
取100uM的工作液2mL，加入2mL DMEM，配置成50uM的工作液。
以此类推，利用逐级稀释，制备25um,12.5um,6.25um,3.125um的工作液。
每次工作液现配现用。
化合物TM-2同样的稀释方式。
使用96孔板接种细胞，每孔1*104个细胞，外圈加入200ul PBS。
铺板24小时后，加入药物培养48小时。
48小时后将培养液吸出，用PBS清洗2遍，加入配置的CCK8，孵育2小时后检测。
酶标仪设置波长为450nm，每次检测前震动5s。
铺板示意图如表2和表3所示：表2为SW620(107um的配置很难配准，因此选择100um，化合物TM-1和化合物TM-2均此布板方式)；表3为A549(49.82um的配置很难配准，因此选择50um，化合物TM-1和化合物TM-2均此布板方式)。
表2
PBS PBS PBS PBS PBS PBS PBS PBS PBS PBS PBS PBS
PBS 150 100 50 25 12.5 6.25 3.125 0 100二氯 PBS PBS
PBS 150 100 50 25 12.5 6.25 3.125 0 100二氯 PBS PBS
PBS 150 100 50 25 12.5 6.25 3.125 0 100二氯 PBS PBS
PBS 150 100 50 25 12.5 6.25 3.125 0 100二氯 PBS PBS
PBS 150 100 50 25 12.5 6.25 3.125 0 100二氯 PBS PBS
PBS 150 100 50 25 12.5 6.25 3.125 0 100二氯 PBS PBS
PBS PBS PBS PBS PBS PBS PBS PBS PBS PBS PBS PBS
表3
六、化合物TM-1和TM-2的实验结果
利用graphpad进行线性拟合，计算IC50值。
A549细胞：化合物TM-1IC50＝51.43uM，化合物TM-2IC50＝29.37Um；
SW620细胞：化合物TM-1IC50＝38.12uM，化合物TM-2IC50＝12.89uM。
需要说明的是，本说明书中描述的具体特征、结构、材料或者特点可以在任一个或多个实施例中以合适的方式结合。此外，在不相互矛盾的情况下，本领域的技术人员可以将本说明书中描述的不同实施例以及不同实施例的特征进行结合和组合。

Claims (13)

1.式Ⅰ所示的糖基化合物或其立体异构体：
其中，R1选自R2～R5均为-H；X为O；R6选自未取代的C1～C6烷基。
2.如权利要求1所述的化合物或其立体异构体，其特征是：R6选自甲基、乙基、正丙基、异丙基或正丁基。
3.如权利要求2所述的化合物或其立体异构体，其特征是：R6选自乙基。
4.如权利要求1所述的化合物或其立体异构体，其特征是：所述化合物选自：
5.如权利要求4所述的化合物或其立体异构体，其特征是：所述化合物为以下结构：
6.权利要求1～5任一项所述化合物或其立体异构体在制备预防和/或治疗肿瘤细胞株药物中的用途；所述肿瘤细胞株选自肿瘤细胞A549或SW620中至少一种。
7.抗肿瘤的药物组合物，其特征是：它是以权利要求1～5任一项所述化合物或其立体异构体为活性成分，加入药学上可接受的辅料或者辅助性成分制备而成的制剂。
8.抗肿瘤的联合用药物，其特征是：它含有用于同时或者分别给药的权利要求7所述的药物组合物，以及其它抗肿瘤药物。
9.权利要求5所述化合物或其立体异构体的制备方法，其特征是：包括以下两种合成路线：
合成路线一：
S1、化合物1通过与乙二醇反应得到化合物2；S2、化合物2与二氯乙酰氯进行反应得到化合物3；S3、化合物3通过苄基脱保护反应即得目标化合物TM-1；
合成路线二：
a、化合物1通过与原料1反应得到化合物2，所述化合物2为化合物2.1和2.2的混合物；b、化合物2与二氯乙酰氯进行反应得到化合物3；c、化合物3通过苄基脱保护反应即得目标化合物TM-2；
10.如权利要求9所述的制备方法，其特征是：合成路线一中，
步骤S1中，化合物1溶于DCM，再加入PPh3及CBr4，得反应混合物；将乙二醇、TMU、TEAB溶于THF中，加入反应混合物中，反应后，稀释、萃取浓缩、分离，得化合物2；
其中，化合物1与乙二醇的摩尔比为1～3：1；
步骤S2中，化合物2溶于DCM，加入TEA、2,2-二氯乙酰氯，反应后，分离得化合物3；
其中，化合物2与2,2-二氯乙酰氯的摩尔比为0.1～1：1；
步骤S3中，化合物3加入溶剂中，再加入钯催化剂，在氢气环境下，进行脱保护基反应；
其中，步骤S3中，反应温度为10-40℃；反应时间为0.5-2h；
钯催化剂选自Pd(OH)2/C、Pd/C、Pd/SiO2、Pd/Al2O3、Pd(OH)2/Al2O3、Pd/(PSi-Al2O3)、Pd/Dowex、Pd-Fe、Pd-Pt或Pd/BaSO4；
步骤S3中，反应溶剂为MeOH和THF的混合溶剂，MeOH和THF的体积比为4：1；
化合物3与催化剂质量比为9～11：1。
11.如权利要求10所述的制备方法，其特征是：步骤S3中，反应温度为25℃；反应时间为70分钟。
12.如权利要求9所述的制备方法，其特征是：合成路线二中，
步骤a中，化合物1溶于DCM，加入无水MgSO4后冷却至-42℃，再加入三氟甲烷磺酸银、叔丁基二甲基羟乙氧基硅烷，-42℃～0℃反应完毕后，分离得化合物2；
其中，化合物1：无水MgSO4：三氟甲烷磺酸银：叔丁基二甲基羟乙氧基硅烷质量比为1～3：1～2：0.1～0.3：1；
步骤b中，化合物2溶于DCM，加入TEA、2,2-二氯乙酰氯，反应后，分离得化合物3；其中，化合物2与2,2-二氯乙酰氯摩尔比为0.1～1：1；
步骤c中，化合物3加入溶剂中，再加入钯催化剂，在氢气环境下，进行脱保护基反应；
其中，步骤c中，反应温度为10-40℃；反应时间为0.5-2h；
钯催化剂选自Pd(OH)2/C、Pd/C、Pd/SiO2、Pd/Al2O3、Pd(OH)2/Al2O3、Pd/(PSi-Al2O3)、Pd/Dowex、Pd-Fe、Pd-Pt或Pd/BaSO4；
步骤c中，反应溶剂为MeOH和THF的混合溶剂，MeOH和THF的体积比为4：1；
化合物3与催化剂质量比为9～11：1。
13.如权利要求12所述的制备方法，其特征是：步骤c中，反应温度为25℃；反应时间为70分钟。
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