CN114848816B - 一种多功能、多靶点抗阿尔兹海默症的纳米治疗剂及其制备方法和应用 - Google Patents

一种多功能、多靶点抗阿尔兹海默症的纳米治疗剂及其制备方法和应用 Download PDF

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Abstract

本发明公开了一种多功能、多靶点抗阿尔兹海默症（AD）的纳米治疗剂及其制备方法和应用。所述纳米治疗剂为Tf‑Fe2+‑Que NPs，由Tf和Fe2+及Que按一定配比通过自组装形成，其中Tf能够通过受体介导的方式促进颗粒靶向穿透BBB，Fe2+‑Que复合物能够提供光热效应以及多靶点抗AD的疗效。本发明所制备的纳米治疗剂，不仅能够协同受体介导转运和光热效应显著提升BBB穿透功能，而且具有结合化学治疗和光热治疗协同促进Aβ降解的效果，以及通过清除ROS、抑制BACE1活性等多靶点途径治疗AD的性能。所述纳米治疗剂制备方法简单，原料易得且生物安全性高，治疗功能多样化，具备多靶点抗AD的潜质。

Description

一种多功能、多靶点抗阿尔兹海默症的纳米治疗剂及其制备 方法和应用
技术领域
本发明属于纳米材料制备和生物医学应用领域，具体涉及一种多功能、多靶点抗阿尔兹海默症（AD）的纳米治疗剂及其制备方法和应用，该纳米治疗剂具有高效穿透血脑屏障（blood-brain barrier，简称BBB）的功能，优异的光热性能和多靶点抗AD的能力（包括降解Aβ蛋白纤维、清除活性氧（ROS）和下调β-分泌酶1（BACE1）活性），能够通过受体介导转运效应、光热效应与药物治疗相联合方式提高抗AD的疗效。
背景技术
阿尔兹海默症（Alzheimer’s disease，简称AD），俗称“老年性痴呆症”，是一种不可逆的、渐进式的中枢神经退行性疾病。它会造成患者大脑的记忆、认知和行为功能损伤，身体功能丧失和持续性脑萎缩，最终导致死亡。近年来，AD发病率不断攀升，为患者和社会带来的负担愈加沉重。因此，攻克AD成为了医药领域的前沿问题。
作为一种典型的多因异质型神经类疾病，AD药物研发所面临的首要问题是如何突破脑内稳态防御机制BBB的阻碍，将药物高效准确地送达到病灶部位。与脑部运输受限的小分子药物相比，纳米载体由于其独特的尺寸效应能够通过胞吞和胞吐穿越BBB，提高其药物递送效率。同时，在纳米载体表面连接受体结合组件（例如脑靶向肽RVG-29、转铁蛋白、乳铁蛋白、冰片）和通过载体自身光热效应扩张屏障细胞的致密结构是进一步提高其BBB穿透性能最为常用的手段。尽管已经有协同受体转运效应与光热效应突破BBB的纳米制剂被研发，但大多制备过程复杂（需要复杂的靶分子后修饰过程），材料难降解，治疗方式单一化，难以实现针对多种AD致病因素的联合治疗。
由于AD致病机制复杂，药物穿过BBB到达病灶部位后，通过何种方式展开治疗也是AD药物研发面临的巨大难题。近期研究发现，Aβ蛋白纤维化、Tau蛋白异常磷酸化形成神经纤维缠结（NFTs）过程以及脑部ROS浓度升高和BACE1活性过表达都会加剧AD进展，并且它们之间相互关联、互相促进，使得现有的单一靶点治疗无法收获理想的疗效。因而，多靶点抗AD的治疗被给予了更高的期望。不幸的是，多靶点药物的开发除了要面临BBB的拦截效应之外，还必须考虑复杂的合成过程、药物治疗通路串扰和潜在的生物毒性等缺陷。因此开发一种BBB穿透率高、多靶点抗AD疗效好且毒副作用小的治疗剂，对AD的临床治疗具有重要意义。
发明内容
根据目前AD药物所存在的弊端和药物的研发需求，本发明旨在提供一种多功能、多靶点抗阿尔兹海默症（AD）的纳米治疗剂Tf-Fe2+-Que NPs及其制备方法和应用，属于纳米材料制备和生物医学领域。
本发明将转铁蛋白（Tf）直接作为组装单元合成纳米治疗剂Tf-Fe2+-Que NPs，能够通过结合血脑屏障（blood-brain barrier，简称BBB）表面转铁蛋白受体的方式高效穿透BBB，实现药物在脑部的有效积累；同时避免了在纳米颗粒表面修饰靶分子需要复杂的后修饰过程。
本发明将槲皮素（Que）作为组装单元合成纳米治疗剂Tf-Fe2+-Que NPs，能够通过Fe2+的螯合配位与纳米结构的协调作用，提升Que的稳定性，水溶性和抗氧化性能，从而发挥降解Aβ蛋白纤维、清除活性氧（ROS）和抑制β-分泌酶1（BACE1）的活性等功能，即可实现单一药物多靶点、多通路抑制AD相关致病因素的作用。
本发明利用Fe2+和Que配位后的近红外光吸收特性，使纳米治疗剂Tf-Fe2+-QueNPs具备优异的光热转换功能。通过结合光热效应的协同作用，纳米治疗剂Tf-Fe2+-Que NPs即能够通过打开BBB表面的致密结构进一步提高药物穿透BBB的效率，又能通过局部温度的升高进一步促进Aβ蛋白纤维的分解。
本发明所制备的纳米治疗剂Tf-Fe2+-Que NPs具有以下特性：能够通过受体介导转运效应、光热效应与药物治疗相联合方式实现多功能、多靶点抗AD的显著疗效。
本发明提供了多功能、多靶点抗AD的自组装纳米治疗剂Tf-Fe2+-Que NPs的制备方法，包括以下步骤：
1）将Tf充分溶解到超纯水中，得到Tf储备液；
2）将Fe2+溶解到去离子水中，得到Fe2+储备液；
3）将Que用合适的有机溶剂充分溶解，得到Que储备液；
4）将步骤1）中的Tf储备液在一定转速下，加入适量PBS溶液（10 mM，pH=7.4），混合均匀后，依次加入步骤2）中的Fe2+储备液和步骤3）中的Que储备液，使用Tris-HCl缓冲液调节反应溶液的pH，反应一段时间后，反应产物经12000 rpm高速离心获得，得到高纯度产物Tf-Fe2+-Que NPs。
优选的，步骤3）中所用的溶剂选自二甲亚砜、无水乙醇、无水丙酮、六氟异丙醇中的任意一种。
优选的，步骤4）中所述的反应转速为500-2000 rpm。
优选的，步骤4）中所述的反应溶液pH为7~10。
优选的，步骤4）中合成纳米颗粒的动力光散射粒径为50~200 nm，电位为-40 mV~-10 mV。
优选的，上述Tf-Fe2+-Que NPs的制备方法包括以下步骤：
1）称取4.0 mg的Tf溶于1.0 mL超纯水，配置为4.0 mg/mL的Tf储备液；
2）称取0.0055 g的FeSO4·7H2O溶于100 μL HCl（0.1M）溶液中，然后加入900 μL超纯水配置成浓度为0.02 M Fe2+储备液；
3）称取0.0060 g的Que溶于1.0 mL无水乙醇中，配置成浓度为0.02 M Que储备液；
4）在反应瓶中加入200 μL Tf储备液，然后加入150 μL PBS（10 mM，pH=7.4）溶液，在1000 rpm搅拌条件下用0.01 M Tris-HCl缓冲液调节反应溶液的pH至8.0，随后加入30 μL Fe2+储备液和30μL Que储备液，继续搅拌5 min，补入超纯水定容至500 μL后继续反应10min，反应结束后取出反应液在12000 rpm条件下离心15 min，弃去上清液，加入去离子水继续水洗三次，最后将Tf-Fe2+-Que NPs用去离子水分散得到最终产品。
为了证明Tf在纳米颗粒中发挥受体介导穿透BBB的功能，将Tf替换为牛血清白蛋白（BSA）合成 BSA-Fe2+-Que NPs（记为：BFQ NPs）作为Tf-Fe2+-Que NPs的对照组。所述BSA-Fe2+-Que NPs的制备方法包括以下步骤：
1）称取4.0 mg的BSA溶于1.0 mL超纯水，配置为4.0 mg/mL的BSA储备液；
2）称取0.0055 g的FeSO4·7H2O溶于100 μL HCl（0.1M）溶液中，然后加入900 μL超纯水配置成浓度为0.02 M Fe2+储备液；
3）称取0.0060 g的Que溶于1.0 mL无水乙醇中，配置成浓度为0.02 M Que储备液；
4）在反应瓶中加入100 μL BSA储备液，然后加入150 μL PBS溶液（10 mM，pH=7.4），在1000 rpm搅拌条件下用0.01 M Tris-HCl缓冲液调节反应溶液的pH至8.0，随后加入30 μL Fe2+储备液和30 μL Que储备液，继续搅拌5 min，补入超纯水定容至500 μL后继续反应10 min，反应结束后取出反应液在12000 rpm条件下离心15 min，弃去上清液，加入去离子水继续水洗三次，最后将BSA-Fe2+-Que NPs用去离子水分散得到最终产品BSA-Fe2+-Que NPs。
本发明的显著优点在于：
（1）本发明所述的自组装纳米治疗剂Tf-Fe2+-Que NPs同时具备高效穿透BBB的功能和良好的多靶点抗AD性能（包括降解Aβ蛋白纤维、清除ROS和下调BACE1活性）。
（2）本发明所述的自组装纳米治疗剂Tf-Fe2+-Que NPs具有优异的光热转换能力和光热稳定性，可通过光热效应协同提升纳米颗粒对BBB的穿透能力和Aβ纤维的降解效果。
（3）本发明所述的自组装纳米治疗剂Tf-Fe2+-Que NPs，其制备过程简单可控，且具有良好的生物相容性和生物可降解性。
附图说明
图1a为实施例1所制Tf-Fe2+-Que NPs的粒径图；图1b为实施例1所制Tf-Fe2+-QueNPs的电位图。
图2为实施例1所制Tf-Fe2+-Que NPs的TEM图。
图3a为实施例1所制Tf-Fe2+-Que NPs在PBS中七天内的粒径变化图；图3b为实施例1所制Tf-Fe2+-Que NPs在DMEM中七天内的粒径变化图。
图4为实施例1所制Tf-Fe2+-Que NPs（1、3、5、7、10 μg/mL）与Que（1、3、5、7、10 μg/mL）对ROS清除能力比较图。
图5a为实施例1所制Tf-Fe2+-Que NPs（5、10、15、20 μg/mL）与Que（5 μg/mL）对BACE1（50 mM）活性抑制荧光数据图；图5b实施例1所制Tf-Fe2+-Que NPs（5、10、15、20 μg/mL）与Que（5 μg/mL）对BACE1（50 mM）活性抑制量化图。
图6a为实施例1所制Tf-Fe2+-Que NPs（5、10、15、20 μg/mL）的光热升温曲线图；图6b为实施例1所制Tf-Fe2+-Que NPs（20 μg/mL）的光热循环图。
图7为实施例1所制Tf-Fe2+-Que NPs生物相亲性表征图。
图8为应用实施例1中淀粉样蛋白Aβ纤维与Tf-Fe2+-Que NPs（5、10、15、20 μg/mL）在NIR照射条件下分别一起孵育0、5、10、15 min所测得的荧光数据图。
图9为应用实施例1中淀粉样蛋白Aβ纤维与Tf-Fe2+-Que NPs在有无NIR照射条件下一起孵育24小时后的AFM图，其中a为Aβ（20 μM）+ 0 μg/mL Tf-Fe2+-Que NPs，b为Aβ（20 μM）+ 15 μg/mL Tf-Fe2+-Que NPs，c为Aβ（20 μM）+ 15 μg/mL Tf-Fe2+-Que NPs + NIR。
图10a为应用实施例1中构建的BBB模型图；图10b为应用实施例1中BSA-Fe2+-QueNPs（20 μg/mL）、Tf-Fe2+-Que NPs（20 μg/mL）和Tf-Fe2+-Que NPs（20 μg/mL + NIR）的BBB穿透效率图。
图11为应用实施例1中BBB模型下室的PC12细胞对RhB、BSA-Fe2+-Que NPs（20 μg/mL，RhB标记）、Tf-Fe2+-Que NPs（20 μg/mL，RhB标记）和Tf-Fe2+-Que NPs（20 μg/mL + NIR，RhB标记）摄取情况的共聚焦图。
具体实施方式
为了使本发明所述的内容更加便于理解，下面结合具体实施方式对本发明所述的技术方案做进一步的说明，但是本发明不仅限于此。
实施例1
1）称取4.0 mg的转铁蛋白（Tf）溶于1.0 mL超纯水，配置为4.0 mg/mL的Tf储液。
2）称取0.0055 g的FeSO4·7H2O溶于100 μL HCl（0.1M）溶液中，然后加入900 μL超纯水，配置成浓度为0.02 M的Fe2+储备液。
3）称取0.0060g的槲皮素（Que）溶于1.0 mL无水乙醇中，配置成浓度为0.02 M的Que储备液。
4）在反应瓶中加入200 μL Tf储备液，然后加入150 μL PBS溶液（10 mM，pH=7.4），在1000 rpm搅拌条件下用0.01 M Tris-HCl缓冲液调节反应溶液的pH至8.0。随后加入30 μL Fe2+储备液和30 μL Que储备液，继续搅拌5 min，补入超纯水定容至500 μL后继续搅拌反应10 min，反应结束后取出反应液在12000 rpm条件下离心15 min，弃去上清液，向沉淀中加入去离子水继续水洗三次，最后将水洗后的沉淀用去离子水分散得到最终产品Tf-Fe2+-Que NPs。
1. 将所得Tf-Fe2+-Que NPs加入到纯水中，以Que的药物含量进行定量，配制成浓度为10 μg/mL的溶液，测其粒径和电位，结果如图1所示。由图1a可见，Tf-Fe2+-Que NPs的粒径为92 nm。由图1b可见，Tf-Fe2+-Que NPs的电位为-29.0 mV。
2. 将10 μg/mL Tf-Fe2+-Que NPs溶液滴加到铜网上，待其干燥后，进行电镜表征，结果如图2所示。由图2可见，Tf-Fe2+-Que NPs的粒径约为85~110 nm，尺寸均一且分散性良好，为形貌边界不规则的块状颗粒。
3. 将反应得到的Tf-Fe2+-Que NPs分别加入到PBS（10 mM，pH=7.4）和DMEM培养液中封口保存，在一周内每天取样测量其粒径变化，结果如图3所示。由图3可见，七天内纳米颗粒在PBS和DMEM培养液中的粒径没有发生很大的变化，表明Tf-Fe2+-Que NPs的具有良好的分散性和稳定性。
4. 为了考察Tf-Fe2+-Que NPs的清除活性氧（ROS）能力，使用DPPH法测量ROS清除率：首先配制1.0 mM DPPH的乙醇溶液，取100 µL DPPH溶液，加入不同浓度的Tf-Fe2+-QueNPs，加入无水乙醇定容到1.0 mL，使DPPH最终浓度为0.1 mM，Tf-Fe2+-Que NPs的浓度依次为1、3、5、7、10 μg/mL。用同样方法配制浓度依次为1、3、5、7、10 μg/mL的Que反应液。避光条件下反应半小时，测定各组的紫外吸收值，结果如图4所示。由图4可见，不同浓度下Tf-Fe2+-Que NPs清除ROS的能力均强于Que，说明Tf-Fe2+-Que NPs提高了Que的ROS清除能力。
5. 为了考察Tf-Fe2+-Que NPs的β-分泌酶1（BACE1）活性抑制能力，采用BACE1活性检测试剂盒进行检测。准备6个1.5 mL离心管，编号1，2，3，4，5，6。首先，在每个管中加入5 μL底物探针Reagent D，20 μL BACE1（1.0 μg/μL），之后在1号管中补入Reagent C缓冲溶液至200 μL作为对照组，其余2，3，4，5，6号管中分别加入10 μL Qμe与Tf-Fe2+-Que NPs，补入缓冲液Reagent C至200 μL，配制成药物浓度分别为5 μg/mL Qμe和5 μg/mL、10 μg/mL、15μg/mL、20 μg/mL Tf-Fe2+-Que NPs的待测量组。
将以上6组溶液转入96孔板，37℃孵育25 min后测量每孔的荧光强度（激发波长360 nm，发射波长490 nm，结果如图5所示。由图5可见，Que单体仅使BACE1活性降低了13.8%，而同等条件下Tf-Fe2+-Que NPs组的酶活性降低了22.6%。此外，随Tf-Fe2+-Que NPs浓度的提高，BACE1的活性逐步降至30.5%，说明Tf-Fe2+-Que NPs具有良好的抑制BACE1活性能力。
6. 为了考察Tf-Fe2+-Que NPs的光热转换能力，采用2 W/cm2的808 nm近红外激光照射1.0 mL Tf-Fe2+-Que NPs（5、10、15、20 μg/mL）溶液，起始温度为25℃，温度采用热电偶温度计测量。每30 s记录一次温度，共测量10 min内Tf-Fe2+-Que NPs的温度变化曲线，结果如图6a所示。由图6a所见，随着光照时间的延长，各组溶液的温度持续上升，即便是在5 μg/mL的最低浓度下，溶液温度依然可以从室温25℃升至42℃，表明Tf-Fe2+-Que NPs具有良好的光热转换能力。
7. 为了考察Tf-Fe2+-Que NPs的光热稳定性，采用2 W/cm2的808 nm近红外激光照射1.0 mL Tf-Fe2+-Que NPs（20 μg/mL）溶液，起始温度为25℃，温度采用热电偶温度计测量。光照15 min后停止光照，待温度降为25℃后继续光照，如此循环6次，记录6次循环中Tf-Fe2+-Que NPs的温度变化曲线，结果如图6b所示。由图6b所见，6个光热循环周期的峰型和峰值基本保持一致，说明Tf-Fe2+-Que NPs的光热稳定性良好。
8. 为了考察Tf-Fe2+-Que NPs的生物相亲性，将Tf-Fe2+-Que NPs和鼠嗜铬细胞瘤细胞（PC12细胞）共孵育，判断Tf-Fe2+-Que NPs的毒性情况。
待PC12细胞生长至90%左右进行细胞传代操作，其步骤如下：去掉培养瓶中的旧培养基，然后加入2.0 mL PBS溶液（10 mM，pH=7.4）清洗3次，之后加入1.0 mL胰蛋白酶消化细胞1分钟左右，去除胰酶，加入2.0 mL RPMI-1640培养基停止消化并轻柔吹打细胞使细胞悬浮得到细胞原液，取1/4体积的细胞原液分装入新的培养瓶中，置于37℃，5% CO2培养箱中继续培养。
取出一部分PC12细胞原液用RPMI-1640培养液稀释使其密度为105个/mL，并以每孔104个细胞接种至96孔板中，置于37℃，5% CO2的培养箱中培养24小时后，移去孔板中旧培养液，加入浓度依次为5、10、15、20、25 μg/mL的Tf-Fe2+-Que NPs培养液，每个浓度设置4个重复孔。培养6小时后，吸出培养液并用PBS（10 mM，pH=7.4）清洗2次，加入100 μL新鲜培养液继续培养18小时后，每孔加入10 μL浓度为5.0 mg/mL的MTT，孵育4~6小时，小心移去培养液，加入150 μL DMSO，放入恒温摇床中在37℃、150 rpm条件下培养15分钟，然后用酶标仪测量各孔溶液在490 nm处的吸收值，计算存活率，以评价Tf-Fe2+-Que NPs的生物相亲性，结果如图7所示。由图7可见，Tf-Fe2+-Que NPs在浓度为25 μg/mL时，细胞存活率也在95%以上，说明Tf-Fe2+-Que NPs的生物相亲性好。
应用实施例1
a）将Aβ蛋白进行预处理，先将Aβ蛋白用高极性溶剂六氟异丙醇（HFIP）溶解，然后在4℃、450 rpm下搅拌2小时，经冷冻干燥后，用10mM pH=7.4的PBS溶液重新溶解，得到浓度为250 μM的淀粉样蛋白储备液。
b）将步骤a）制备的淀粉样蛋白储备液用PBS（10mM，pH=7.4）稀释到20 μM，然后将其加入到96孔板中，每孔加入100 μL，于恒温摇床中37℃、150 rpm培养48小时使其长出纤维。
c）将实施例1制得的Tf-Fe2+-Que NPs分别加入步骤b）制得的纤维中，使所得混合液中Tf-Fe2+-Que NPs的浓度分别为0 μg/mL、5 μg/mL、10 μg/mL、15 μg/mL，继续于恒温摇床中37℃、150 rpm孵育24小时。
1. 将步骤c）中的混合液从恒温摇床中取出，采用2 W/cm2的808 nm近红外激光分别照射0、5、10、15 min后，每孔加入100 μL 硫黄素ThT（100 μM）继续孵育15 min，利用多功能荧光检测仪检测各孔的荧光强度（ThT荧光光谱的激发波长设置为450 nm，发射波长为490 nm），结果如图8所示。由图8所见，随Tf-Fe2+-Que NPs浓度的不断升高，各时间点内的荧光强度均呈现下降趋势，表明Tf-Fe2+-Que NPs自身具有降解Aβ纤维的能力。另一方面，同种浓度Tf-Fe2+-Que NPs溶液的荧光强度随NIR照射时间延长同样出现了下降趋势，表明Tf-Fe2+-Que NPs能够通过光热效应进一步分解Aβ纤维。
2. 将上述所得混合溶液进行超滤处理，然后取超滤上清液20 μL滴加到云母片上，待其干燥后用去离子水清洗1~2次，干燥后进行原子力显微镜测试，结果如图9所示。由图9可见，Aβ纤维具有明显的长链网状结构，而加入Tf-Fe2+-Que NPs的Aβ纤维网状结构逐渐解聚，且随着Tf-Fe2+-Que NPs浓度的增加和近红外光照时间的延长，纤维量加剧减少，这进一步说明Tf-Fe2+-Que NPs在光照条件下具有良好的解聚Aβ纤维功能。
3. 为考察Tf-Fe2+-Que NPs穿透血脑屏障（blood-brain barrier，简称BBB）效果，采用bEnd.3细胞构建BBB模型，结果如图10a所示。由图10a可见，首先将bEnd.3细胞（1x105个/孔）接种到Transwell板的上层小室中孵育6~8天。期间每隔一段时间，使用细胞电阻仪Millicell ERS（Millipore，USA）检测BBB模型中跨内皮细胞电阻值（TEER），当TEER大于200Ω·cm2时即认定为BBB建模成功。之后，将PC12细胞接种于Transwell板下室底部，继续培养24 h使其贴壁生长，并进行后续试验。
4. 使用罗丹明b（RhB）标记Tf-Fe2+-Que NPs与BSA-Fe2+-Que NPs（Que含量均为20μg/mL）分别加入BBB模型上层小室的培养液中。培养10 h后，对Tf-Fe2+-Que NPs进行NIR照射15 min。最后，分别收集各组上层小室和下层小室中的培养液，使用多功能荧光检测仪检测各组RhB的荧光强度（设置激发波长为550 nm，发射波长为580 nm），结果如图10b所示。由图10b可见，同等浓度下Tf-Fe2+-Que NPs的BBB穿透率为40%，明显高于BSA-Fe2+-Que NPs（BBB穿透率为12%），说明Tf的存在显著提高了Tf-Fe2+-Que NPs的BBB穿透性能。使用NIR照射15 min后，Tf-Fe2+-Que NPs的BBB穿透率提高至50%，表明光热效应为Tf-Fe2+-Que NPs的跨膜运输提供了增益效果。
5. 使用RhB标记Tf-Fe2+-Que NPs与BSA-Fe2+-Que NPs（Que含量均为20 μg/mL）以及单独的RhB分别加入BBB模型上层小室的培养液中。培养10 h后，对Tf-Fe2+-Que NPs进行NIR照射15 min。最后，使用共聚焦观察各组下层小室的荧光强度，结果如图11所示。由图11可见，RhB单体无法透过BBB，因而在视野中没有红色荧光出现。同等浓度下，Tf-Fe2+-QueNPs及Tf-Fe2+-Que NPs + NIR组均能够高效穿透BBB，视野中出现明显的红色荧光，且荧光强度明显高于BSA-Fe2+-Que NPs组。这一结果表明Tf-Fe2+-Que NPs能够通过Tf受体结合与光热效应的协同作用，高效突破BBB屏障。
以上所述仅为本发明的较佳实施例，凡依本发明申请专利范围所做的均等变化与修饰，皆应属本发明的涵盖范围。

Claims (6)

1.一种多功能、多靶点抗阿尔兹海默症的纳米治疗剂，其特征在于：所述纳米治疗剂的组成包括转铁蛋白Tf、亚铁离子Fe2+以及槲皮素Que，所述纳米治疗剂为Tf-Fe2+-Que NPs。
2.根据权利要求1所述的的纳米治疗剂，其特征在于：所述纳米治疗剂具备穿透血脑屏障的功能、光热性能，可降解Aβ蛋白纤维、清除活性氧和下调β-分泌酶活性。
3.一种制备权利要求1所述的纳米治疗剂的方法，其特征在于：所述方法包括以下步骤：
1）根据Tf、Fe2+和Que各自的溶解特性分别将它们溶解在一定溶剂中，得到反应储液；
2）将步骤1）所得反应储液按一定摩尔比例依次加入反应瓶获得反应溶液，调节反应液pH值后，反应一段时间后离心获得产物Tf-Fe2+-Que NPs。
4.根据权利要求3所述的方法，其特征在于：步骤1）中，所用的溶剂选自超纯水、去离子水、二甲亚砜、无水乙醇、无水丙酮、六氟异丙醇。
5.根据权利要求3所述的方法，其特征在于：步骤2）中，所述的反应溶液中Tf、Fe2+和Que的摩尔比范围为（0.1 ~ 4）: 1 :（0.1 ~ 4）。
6.根据权利要求3所述的方法，其特征在于：步骤2），将所述反应液的pH调节为7 ~ 10。
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