CN114814238A - Caf22检测试剂在制备aki诊断组合物中的应用 - Google Patents

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Abstract

本发明公开了集聚蛋白C末端片段(CAF22)检测试剂在制备急性肾损伤(AKI)诊断试剂盒中的应用及其试剂盒，本发明通过利用CAF22作为AKI的诊断标志物，为AKI的诊断提供了一种新的生物标志物；本发明还将进行检测CAF22与其他AKI生物标志物联合，能够提高AKI早期诊断的准确度和灵敏度，对AKI的早期诊断或动态检测方面有较高的应用价值。

Description

CAF22检测试剂在制备AKI诊断组合物中的应用
技术领域
本发明涉及生物诊断领域，具体涉及集聚蛋白C末端片段(CAF22)检测试剂在制备急性肾损伤诊断试剂盒中的应用。
背景技术
急性肾损伤(Acute Kidney Injury，AKI)是危重病人和心血管手术患者的常见并发症，它发病率和死亡率高，在心脏手术患者术后发病率约5％-47％，ICU患者的AKI死亡率高达50％-70％。AKI如果治疗不及时，可能会发展为慢性肾脏病或需要永久透析。因此，对AKI的早期诊断和及时干预和治疗，可以有效防止病情进一步恶化、改善患者预后。为提高对AKI的诊疗水平，改善全球肾脏病预后组织(KDIGO)在2012年发布了《KDIGO急性肾损伤临床实践指南》，指南中将血清肌酐(SCr)和尿量两个指标作为AKI的诊断和分期标准。但这两个指标在AKI的诊断上都存在诸多缺陷。第一，SCr和尿量实际上是肾功能的生物标志物，并不是肾脏损伤的标志物。第二，Scr是肾小球滤过率(GFP)的替代指标，其浓度表示肌酐生成和排泄的平衡，但在GFP低于正常水平50％时，才会反映在SCr的升高上，因此Scr会延迟对AKI的诊断；第三，SCr会受到患者生理、病理状态和使用药物情况等众多外界因素的影响。第四，尿量情况改变可能和肾损伤的程度并不一致，例如患者处于脱水状态或使用利尿剂都会导致尿量改变，尿量对AKI诊断的特异性较差。
常规项目mALB、IgG、TRF、NAG、β2-微球蛋白，可以作为肾功能是否异常的指标。但无法作为AKI的诊断指标，而在肾损伤的早期介入会降低与AKI有关的死亡率，因此急需一种新的生物标志物，对AKI具有特异性好，能够在早期诊断及时反应。
发明内容
有鉴于此，本发明的目的在于提供一种检测集聚蛋白C末端片段的试剂在制备用于评估受试者急性肾损伤的组合物中的应用，集聚蛋白(Agrin)是一种大型蛋白多糖，是肾小球和肾小管基底膜的主要硫酸肝素蛋白多糖，在肾脏中高度表达。Agrin会被神经胰蛋白酶从β位点裂解，产生22kDa的C端片段，即，集聚蛋白C末端片段(C-terminal Fragment ofAgrin22，CAF22)。CAF22主要通过肾小球滤过从循环中清除，过滤后的CAF22被近端小管重吸收。当发生肾功能损伤时，肾脏对CAF22的清除率下降、导致尿液中的CAF22水平变高。研究发现，CAF22的变化与肾小球滤过率和尿白蛋白水平呈正相关关系，因此本发明将CAF22作为一种反映急性肾损伤的新型生物标志物。
为达到上述目的，本发明提供如下技术方案：
检测集聚蛋白C末端片段的捕获剂在制备用于评估受试者急性肾损伤(AKI)状态的组合物中的应用。
优选的，所述应用包括对聚蛋白C末端片段进行检测，并将检测结果与受试者的急性肾损伤状态相关联。
优选的，所述捕获剂为特异识别所述集聚蛋白C末端片段的抗体或其衍生物。
优选的，所述抗体衍生物包括能够特异性识别集聚蛋白C末端片段的：抗体功能性片段、抗原结合片段、偶联抗体、人源化抗体、重组抗体、双抗体、嵌合抗体、单克隆抗体、去免疫化的抗体、完全人抗体、单链抗体、Fv片段、Fd片段、Fab片段、Fab’片段或F(ab’)2片段中的至少一种。
优选的，其中所述应用进一步包括：
对选自如下标志物的一种或多种进行检测：中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白、白介素18、肾损伤分子-1、肝型-脂肪酸结合蛋白、金属蛋白酶组织抑制剂2、胰岛素样生长因子结合蛋白7；
并连同对聚蛋白C末端片段的检测结果一起对受试者急性肾损伤状态进行评估。
优选的，所述相评估包括对受试者的急性肾损伤的预测、诊断、分期、预后或监测中的至少一种。
优选的，所述应用包括检测集聚蛋白C末端片段的浓度和/或活性。
优选的，所述应用包括测量至少一种如下标志物的浓度和/或活性：中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白、白介素18、肾损伤分子-1、肝型-脂肪酸结合蛋白、金属蛋白酶组织抑制剂2、胰岛素样生长因子结合蛋白7。
优选的，所述体液为血清或尿液。更优选的，所述体液为肾穿刺前的随机尿液样本或血清样本。
优选的，所述组合物为ELISA检测组合物、免疫比浊检测组合物，免疫层析检测组合物或化学发光免疫检测组合物；
优选的，所述组合物为化学发光免疫检测组合物，所述化学发光免疫检测组合物包含偶联物标记的集聚蛋白C末端片段抗体、化学发光标记物标记的集聚蛋白C末端片段抗体、链霉亲和素磁微粒和化学发光底物；
所述偶联物标记为生物素酯标记；
所述化学发光标记为碱性磷酸酶、吖啶酯及其衍生物、辣根过氧化物酶或三联吡啶钌中的一种或多种；
所述化学发光底物为NaOH和H2O2、鲁米诺、(金钢烷)-1,2-二氧乙烷或其衍生物、APS-5或三丙胺中的一种或多种。
作为本发发明优选的技术方案，所述偶联物标记的集聚蛋白C末端片段抗体的工作浓度为0.1-2.0μg/mL；所述化学发光标记物标记的集聚蛋白C末端片段抗体的工作浓度为0.1-2.0μg/mL；所述链霉亲和素磁微粒的工作浓度为0.2-2.0mg/mL，粒径为1.0-5.0μm。
作为本发发明优选的技术方案，所述偶联物标记的集聚蛋白C末端片段抗体保存于含有NaCl、蛋白、表面活性剂和防腐剂的缓冲液中；所述化学发光标记物标记的集聚蛋白C末端片段抗体保存于含NaCl、蛋白、表面活性剂和防腐剂的缓冲液中。
更优选的，缓冲液成分可以为PBS、Tris、MES、TBS或HEPES；表面活性剂可以为吐温类、Brij类、曲拉通中的一种或多种组合；防腐剂为苯酚、苯甲酸钠、proclin、叠氮化钠中的一种或多种组合。
另一方面，本发明提供了一种试剂盒，所述试剂盒包括上述组合物。
作为本发发明优选的技术方案，所述组合物还包括集聚蛋白C末端片段校准品和集聚蛋白C末端片段质控品。
另一方面，本发明还公开了集聚蛋白C末端片段作为评估受试者急性肾损伤状态的增效指标的用途，所述增效指标与肾损伤标志物联用能够提升所述肾损伤标志物对急性肾损伤损伤的诊断效果，所述肾损伤标志物为能够指示肾损伤的标志物，所述评估包括分析获自所述受试者的体液样品中的所述聚蛋白C末端片段和至少一种所述肾损伤标志物以提供联合分析结果；
本文使用的术语“受试者”是指人或非人生物体。因此，本文所述的方法和组合物可用于人和兽医疾病。进一步，当受试者优选地为活生物体时，本发明也可用于死后分析。优选的受试者是人类，并且最优选的是“患者”，本文使用的患者是指接受用于疾病或病症的医疗护理的活的人类。这包括没有确定的疾病的人，其正在检查病理学现象。优选的，所述受试者选自ICU患者。
本发明所述：急性肾损伤AKI(也称为急性肾衰竭，或ARF)是肾小球过滤突然(典型地在约48小时至1周内检测)降低。这种过滤能力的损失导致由肾正常排泄的含氮(尿素和肌酸酐)废物和非含氮废物产品滞留，尿输出减少或它们两者。报道了AKI并发了约5％的入院率，4-15％的心肺旁路手术以及高达30％的重症监护入院率。AKI可被以因果关系来分为肾前、肾内或肾后。肾内疾病可被进一步分为肾小球异常、管状异常、间隙异常和血管异常。
本文使用的术语“诊断”是指本领域技术人员通过其可估计和/或确定患者是否患有给定的疾病或病症的可能性的方法，是一种辅助诊断。在本发明的情况下，“诊断”包括使用用于本发明的肾损伤标记物的分析结果，最优选地免疫分析，任选地，与其他临床特征一起使用，以从患者得到的样品和分析来实现诊断(即，发生或未发生)急性肾损伤。这样的诊断是“确定”，其不意味着暗示诊断是100％准确。因此，在预确定诊断阈值的一侧的测量的生物标记物的水平表示受试者发生疾病的可能性较大，相对于测量水平在预确定诊断阈值的另一侧。
类似地，预后风险表示给定过程或结果将发生的可能性。水平或预后指标的水平的变化是指患者的不利结果的“表示可能性增加”，所述预后指标水平的变化反过来与致病的可能性的增加有关(例如将会发生AKI)。
本文使用的术语“体液样品”是指为了诊断、预后、分类或评估例如患者或移植供体的相关受试者的目的而获得的体液样品。在一些实施方式中，这种样品可为了确定正在进行的病症的结果或关于病症的治疗方案的效果来获得。体液样品包括血液，血清，血浆，脑脊液，尿液，唾液，痰，胸腔积液等。此外，本领域技术人员会意识到一些体液样品可更易于在分馏和纯化步骤之后来分析，例如，全血分离为血清或血浆组分。
本文使用的术语“抗体”是指肽或多肽，其源自基本上免疫球蛋白基于编码或免疫球蛋白基因后模拟或免疫球蛋白基因或其片段，能够特异性结合抗原或表位。
本文使用的术语“设定成检测集聚蛋白C末端片段”：包括使含有或怀疑含有相关生物标记物的样品与至少一种特异性结合至生物标记物的抗体接触。然后，产生表示复合物的存在或量的信号，所述复合物由样品中的多肽结合至抗体形成。
本文使用的术语分析物的“与存在或数量有关的信号”反应了这种理解。分析信号通常与分析物的存在和分析物的量有关，通过使用相关分析物的已知浓度来估算的标准曲线。
本发明的有益效果在于：本发明将CAF22作为AKI的诊断标志物，为AKI的诊断提供了一种新的生物标志物，在对AKI的早期诊断或动态检测方面有较高的应用价值。且本发明基于CAF22联合其他生物标志物，可以进一步提高检测的灵敏度和准确性，为诊断提供更多的可能性。在临床治疗中，一旦检测到急性肾衰竭的指标，对该疾病或条件的干预和治疗就开始了，临床医生可以应用本发明的方法和试剂盒监测所述治疗或干预的过程。通常，当肾损伤的治疗开始并持续时，可取得一个或一个以上后续的治疗后的尿样，并分析生物标记物的存在。改善的程度可以表示为样品中测定CAF22水平的相应的降低。
此外，CAF22还可以与其他肾损伤生物标志物联合用于AKI的诊断，能够提高检测的灵敏度和准确性，对AKI的早期诊断或动态检测具有重要意义。
附图说明
为了使本发明的目的、技术方案和有益效果更加清楚，本发明提供如下附图进行说明：
图1为CAF22试剂盒稀释线性；
图2为CAF22对AKI诊断的ROC曲线；
图3为CAF22联合NGAL对AKI诊断的ROC曲线；
图4为CAF22联合TIMP2和KIM-1诊断的ROC曲线；
图5为CAF22联合NGAL、FABP和TIMP2诊断的ROC曲线；
图6为CAF22联合IGFBP7、IL-18诊断的ROC曲线。
具体实施方式
下面结合附图和具体实施例对本发明作进一步说明，以使本领域的技术人员可以更好的理解本发明并能予以实施，但所举实施例不作为对本发明的限定。
实施例1、样本收集
共收集50例非AKI患者尿液样本和182例AKI患者尿液样本。
非AKI患者尿液样本来源为门诊和住院病人，在收集样本前后一周未出现AKI症状；AKI患者尿液样本来源于ICU，根据KIDGO标准诊断为AKI。
表1、KIDGO标准
Figure BDA0003621431610000051
样本采集和处理：对患者的尿液进行采集，3000rpm离心10min，将上清液转移到离心管中，处理后的尿液样本在4℃保存不超过一周，或放置在-20℃(但避免反复冻融)。
实施例2、CAF22化学发光检测试剂盒的制备方法
本发明的CAF22化学发光检测试剂盒，主要包括偶联物标记的CAF22抗体、化学发光标记物标记的CAF22抗体、链霉亲和素磁微粒、化学发光底物、CAF22标准品和质控品。
本发明的CAF22化学发光检测试剂盒的制备方法，主要包括以下步骤：
步骤1)制备偶联物标记的CAF22抗体
在除盐后的CAF22抗体中按摩尔比1:10比例加入活化剂生物素酯，混匀后室温下避光反应4小时。将反应后的溶液加入至预润洗后的PD-10纯化柱中进行纯化。纯化后的偶联物用A280进行浓度测定，并加入等体积甘油后于-20℃保存。使用时，用含50mM pH 7.4的PBS、0.15M NaCl、1g/L牛血清白蛋白、5g/L吐温20、质量分数0.1％叠氮化钠的缓冲液稀释到浓度为0.2μg/mL，作为R1。
本步骤中，生物素酯标记物可以是Sulfo-NHS-Biotin、Sulfo-NHS-LC-Biotin、Sulfo-NHS-LC-LC-Biotin；优选的，生物素酯标记物为Sulfo-NHS-LC-LC-Biotin；PBS可以替换为Tris、MES、TBS、HEPES中的一种；吐温20可以使用其他吐温类、Brij类、曲拉通中的一种或多种组合；叠氮化钠可以使用其他防腐剂如苯酚、苯甲酸钠和proclin的一种或多种组合。
步骤2)制备化学发光标记物标记的CAF22抗体
将除盐后的CAF22抗体按摩尔比1:5比例用2-IT进行活化，活化后CAF22抗体过G-25柱除盐。按摩尔比1:20比例用Sulfo-SMCC对碱性磷酸酶进行活化，活化后CAF22抗体过G-25柱除盐。将活化后的CAF22抗体和活化后的碱性磷酸酶充分混匀，在4℃冰箱静置反应24h，用AKTA PRIME系统纯化碱性磷酸酶标记的抗体。将纯化后的碱性磷酸酶标记物用含50mM pH 7.4PBS、0.1％酪蛋白、0.05％吐温20、0.1％叠氮化钠的缓冲液稀释到浓度为0.2μg/mL，作为R2。
本步骤中，碱性磷酸酶还可以用其他化学发光物标记物替换，如吖啶酯及其衍生物、辣根过氧化物酶或三联吡啶钌中的一种或多种；PBS可以替换为Tris、MES、TBS、HEPES中的一种；吐温20可以使用其他吐温类、Brij类、曲拉通中的一种或多种组合；叠氮化钠可以使用其他防腐剂如苯酚、苯甲酸钠和proclin的一种或多种组合。
步骤3)制备链霉亲和素磁微粒
将高浓度的链霉亲和素磁微粒用磁珠稀释液稀释为1mg/mL，磁珠稀释液含50mMpH 7.4PBS、0.1％牛血清白蛋白、0.05％吐温20、0.1％叠氮化钠的缓冲液，磁珠粒径为1.0-5.0μm。
步骤4)准备化学发光底物
本步骤中，化学发光检测试剂盒的底物可以是NaOH和H2O2、鲁米诺、(金钢烷)-1,2-二氧乙烷或其衍生物、APS-5或三丙胺中的一种或多种。
步骤4)试剂盒组装
将稀释后的偶联物标记的CAF22抗体、稀释后的化学发光标记物标记的CAF22抗体和链霉亲和素磁微粒、化学发光底物、CAF22校准品和质控品分别灌装于同全自动化学发光免疫分析仪配套的试剂盒中，组成CAF22化学发光检测试剂盒。
校准品：用含质量分数1％BSA的20mM pH 7.4的PBS缓冲液将重组CAF22蛋白稀释至1000.0ng/mL、800.0ng/mL、400.0ng/mL、200.0ng/mL、100.0ng/mL、50.0ng/mL、10.0ng/mL、0.0ng/mL。
质控品：用含1％BSA的20mM pH 7.4的PBS缓冲液将重组CAF22蛋白稀释至100.0ng/mL和500.0ng/mL。
实施例3、CAF22化学发光检测试剂盒检测CAF22方法
本发明的测定CAF22的化学发光检测试剂盒包括试剂R1、试剂R2和链霉亲和素磁珠、化学发光底物及CAF22校准品和质控品。
R1是生物素偶联的CAF22抗体，保存在50mM pH 7.4的PBS和0.15M NaCl中，缓冲液中还含有质量分数0.1％叠氮化钠、0.5g/L吐温20和1g/L牛血清白蛋白。
R2是碱性磷酸酶标记的CAF22抗体，保存在0.05M PBS和0.15M NaCl中，缓冲液中还含有0.1％叠氮化钠、0.5g/L吐温20和1g/L酪蛋白钠。
链霉亲和素磁珠浓度为1mg/mL，磁珠粒径为2.8μM。
化学发光底物为APS-5。
以全自动化学发光免疫分析仪为检测工具，检测模式为夹心法，仪器的反应杯中加入20μL测试样本或校准品或质控品、50μL生物素标记的CAF22抗体和50μL碱性磷酸酶标记的CAF22抗体，将混合液送入孵育盘，37℃孵育10min；然后加入30μL链霉亲和素包被的磁珠，混匀后送入孵育盘，37℃孵育5min后进行磁分离；在混合物中加入200μL发光底物APS-5，充分混匀反应后测试发光光值。
本实施例中，生物素标记的CAF22抗体工作浓度为0.1-2.0μg/mL，碱性磷酸酶标记的CAF22抗体工作浓度为0.1-2.0μg/mL，链霉亲和素包被的磁珠工作浓度为0.2-2.0mg/mL均可用于检测。
实施例4、CAF22化学发光检测试剂盒基础性能
(1)CAF22试剂盒灵敏度
将浓度为0ng/mL的校准品(CALA)用CAF22试剂盒检测20次，计算平均值和标准差，再测试相邻校准品点(CALB)，结果如表1所示。将A、B两点光值两点回归得到方程。把CAL A的平均值加两倍标准差的数值带入回归方程，对应的浓度值为灵敏度。
表1、CAF22试剂盒灵敏度检测
Figure BDA0003621431610000081
通过测试和计算，CAF22化学发光检测试剂盒的灵敏度为0.3ng/mL。
(2)CAF22试剂盒线性
用样本稀释液将浓度为1000ng/mL的样本分别按1/1、3/4、1/2、1/4、1/8、1/16、1/32、1/64、1/128的稀释比例进行稀释，稀释后的样本用CAF22试剂盒测试，记录样本测试浓度和对应稀释比例，CAF22试剂盒稀释线性如图1所示，结果显示，在7.75ng/mL～500ng/mL校准曲线R2>0.99。
(3)CAF22试剂盒重复性
分别92ng/mL和642ng/mL的样本10次，计算其均值和变异系数，结果如表2所示。
表2CAF22试剂盒精密度检测
测试次数 样本1(ng/ml) 样本2(ng/ml)
Rep1 92.25 639.67
Rep2 95.96 634.88
Rep3 94.50 650.18
Rep4 91.34 638.53
Rep5 88.63 616.55
Rep6 90.11 629.83
Rep7 94.44 674.86
Rep8 93.89 646.31
Rep9 90.39 648.56
Rep10 94.77 649.34
SD 2.43 15.34
Mean 92.63 642.87
批内-CV 2.62％ 2.39％
结果显示，样本1和样本2的批内-CV分别为2.62％和2.39％，表明本发明的试剂盒稳定性好。
实施例5、本发明包含的CAF22检测试剂盒在AKI早期诊断中的应用
本实施例样本为实施例1中的样本。
本发明包含的CAF22化学发光检测试剂盒在对患者体液样本的检测步骤如下：
步骤1)：样本采集和处理：对患者的尿液进行采集，3000rpm离心10min，将上清液转移到离心管中，处理后的尿液样本在4℃保存不超过一周，或放置在-20℃，但避免反复冻融。
步骤2)：作为实施例，试剂盒采用R1为生物素标记的CAF22抗体，R2为碱性磷酸酶标记的抗体，磁珠为链霉亲和素包被的磁珠。
步骤3)，定标，在全自动化学发光免疫分析仪上扫描试剂盒和CAF22主曲线条码，将校准品放在样本位，随后仪器可对CAF22项目进行定标。
步骤4)，质控，在仪器上检测质控品的光值，并通过标曲自动计算浓度，若质控品浓度在标识范围内，则通过测试，否则需要再次测试，质控合格以后对样本进行测试。
步骤5)，样本测试，在样本位放入尿液样本，仪器测定光值并自动通过标曲计算浓度，根据检测浓度和参考范围判断结果。
根据非AKI病人和AKI病人的CAF22测量结果(表3)。
表3、非AKI病人和AKI病人的CAF22测量值(浓度ng/mL)
Figure BDA0003621431610000101
Figure BDA0003621431610000111
绘制ROC曲线(绘制工具为medcalc，利用样本的试剂盒检测结果与急性肾损伤的病理检测标准作为比对，软件可以计算出急性肾损伤程度的阈值，与阈值比对，便能够根据检测结果，对急性肾损伤进行预测、诊断、分期、预后、分类和监测)，如图2所示，计算曲线下面积(AUC)为0.9210，95％置信区间为0.8871-0.9549。当AUC>0.5时表明预测方法有效，而>0.85表明预测方法非常有效，CAF22对AKI的诊断有很好的特异性和灵敏度，在临床上有较高的使用价值和诊断价值。
实施例6标志物联合检测
本实施例主要说明将CAF22与其他肾功能指标联合检测，可以进一步提高检测的灵敏度。
(a)CAF22联合NGAL
将NGAL浓度对AKI诊断情况以及NGAL联合CAF22对AKI的诊断情况绘制ROC曲线，结果如图3所示。结果显示，NGAL对AKI诊断的AUC为0.8050；NGAL联合CAF22后，ROC增加到0.9397。结果表明，联合CAF22这项指标，对诊断AKI的有效性有提高。
(b)CAF22联合TIMP2、KIM-1
结果如图4所述，TIMP2对AKI诊断的AUC为0.8288，KIM-1对AKI诊断的AUC为0.8035，CAF22联合TIMP2、KIM-1的AUC增加到0.9246。
(c)CAF22联合NGAL、L-FABP、TIMP2
结果如图5所示，NGAL对AKI诊断的AUC为0.8050，L-FABP对AKI诊断的AUC为0.8203，TIMP2对AKI诊断的AUC为0.8288，CAF22联合NGAL、FABP、TIMP2的AUC增加到0.9382。
(d)CAF22联合IGFBP7、IL-18
结果如图6所示，IGFBP7对AKI诊断的AUC为0.8254，IL-18对AKI诊断的AUC为0.7846，CAF22联合IGFBP7、IL-18的AUC增加到0.9077。
结合(a)-(d)可以看出，CAF22联合其他指标检测能够提高检测的灵敏度和准确性，但联合不同指标间存在差别，并不是联合的指标越多，灵敏度就越高，其中存在着复杂的计算关系。
以上所述实施例仅是为充分说明本发明而所举的较佳的实施例，本发明的保护范围不限于此。本技术领域的技术人员在本发明基础上所作的等同替代或变换，均在本发明的保护范围之内。本发明的保护范围以权利要求书为准。

Claims (11)

1.检测集聚蛋白C末端片段的捕获剂在制备用于评估受试者急性肾损伤状态的组合物中的应用。
2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述应用包括对聚蛋白C末端片段进行检测，并将检测结果与受试者的急性肾损伤状态相关联。
3.根据权利要求1或2所述的应用，其特征在于，所述捕获剂为特异识别所述集聚蛋白C末端片段的抗体或其衍生物。
4.根据权利要求3所述的应用，其特征在于，所述抗体衍生物包括能够特异性识别集聚蛋白C末端片段的：抗体功能性片段、抗原结合片段、偶联抗体、人源化抗体、重组抗体、双抗体、嵌合抗体、单克隆抗体、去免疫化的抗体、完全人抗体、单链抗体、Fv片段、Fd片段、Fab片段、Fab’片段或F(ab’)2片段中的至少一种。
5.根据权利要求1或2所述的应用，其特征在于，其中所述应用进一步包括：
对选自如下标志物的一种或多种进行检测：中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白、白介素18、肾损伤分子-1、肝型-脂肪酸结合蛋白、金属蛋白酶组织抑制剂2、胰岛素样生长因子结合蛋白7；
并连同对聚蛋白C末端片段的检测结果一起对受试者急性肾损伤状态进行评估。
6.根据权利要求1-5任意一项所述的应用，其特征在于，所述相评估包括对受试者的急性肾损伤的预测、诊断、分期、预后或监测中的至少一种。
7.根据权利要求1或2所述的应用，其特征在于，所述应用包括检测集聚蛋白C末端片段的浓度和/或活性。
8.根据权利要求5所述的应用，其特征在于，所述应用包括测量至少一种如下标志物的浓度和/或活性：中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白、白介素18、肾损伤分子-1、肝型-脂肪酸结合蛋白、金属蛋白酶组织抑制剂2、胰岛素样生长因子结合蛋白7。
9.根据权利要求1-7所述的应用，其特征在于，所述体液为血清或尿液。
10.根据权利要求1-9任意一项所述的应用，其特征在于，所述组合物为ELISA检测组合物、免疫比浊检测组合物，免疫层析检测组合物或化学发光免疫检测组合物；
优选的，所述组合物为化学发光免疫检测组合物，所述化学发光免疫检测组合物包含偶联物标记的集聚蛋白C末端片段抗体、化学发光标记物标记的集聚蛋白C末端片段抗体、链霉亲和素磁微粒和化学发光底物；
所述偶联物标记为生物素酯标记；
所述化学发光标记为碱性磷酸酶、吖啶酯及其衍生物、辣根过氧化物酶或三联吡啶钌中的一种或多种；
所述化学发光底物为NaOH和H2O2、鲁米诺、(金钢烷)-1,2-二氧乙烷或其衍生物、APS-5或三丙胺中的一种或多种。
11.集聚蛋白C末端片段作为评估受试者急性肾损伤状态的增效指标的用途，所述增效指标与肾损伤标志物联用能够提升所述肾损伤标志物对急性肾损伤的诊断效果，所述肾损伤标志物为能够指示肾损伤的标志物，所述评估包括分析获自所述受试者的体液样品中的所述聚蛋白C末端片段和至少一种所述肾损伤标志物以提供联合分析结果；
以及将所述联合分析结果与所述受试者的急性肾损伤状态相关联；
优选的，所述肾损伤标志物选自以下的一种或多种：NGAL、IL-18、KIM-1、L-FABP、TIMP2或IGFBP7。
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Title
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