CN114736945A - 脱脂工艺、胶原蛋白的提取方法 - Google Patents
脱脂工艺、胶原蛋白的提取方法 Download PDFInfo
- Publication number
- CN114736945A CN114736945A CN202210501790.6A CN202210501790A CN114736945A CN 114736945 A CN114736945 A CN 114736945A CN 202210501790 A CN202210501790 A CN 202210501790A CN 114736945 A CN114736945 A CN 114736945A
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- degreasing
- degreasing agent
- tissue
- ultrasonic treatment
- agent
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Pending
Links
- 238000005238 degreasing Methods 0.000 title claims abstract description 111
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims abstract description 56
- 102000008186 Collagen Human genes 0.000 title claims abstract description 35
- 108010035532 Collagen Proteins 0.000 title claims abstract description 35
- 229920001436 collagen Polymers 0.000 title claims abstract description 35
- 238000000605 extraction Methods 0.000 title abstract description 18
- 239000013527 degreasing agent Substances 0.000 claims abstract description 179
- 238000005237 degreasing agent Methods 0.000 claims abstract description 172
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 claims abstract description 69
- YMWUJEATGCHHMB-UHFFFAOYSA-N Dichloromethane Chemical compound ClCCl YMWUJEATGCHHMB-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 54
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 34
- 102000004882 Lipase Human genes 0.000 claims abstract description 20
- 108090001060 Lipase Proteins 0.000 claims abstract description 20
- 239000004367 Lipase Substances 0.000 claims abstract description 20
- 235000019421 lipase Nutrition 0.000 claims abstract description 20
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 claims description 151
- 238000009210 therapy by ultrasound Methods 0.000 claims description 114
- CDBYLPFSWZWCQE-UHFFFAOYSA-L Sodium Carbonate Chemical compound [Na+].[Na+].[O-]C([O-])=O CDBYLPFSWZWCQE-UHFFFAOYSA-L 0.000 claims description 50
- 239000007788 liquid Substances 0.000 claims description 26
- 229910000029 sodium carbonate Inorganic materials 0.000 claims description 25
- 239000003960 organic solvent Substances 0.000 claims description 19
- 239000007864 aqueous solution Substances 0.000 claims description 17
- OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N Methanol Chemical compound OC OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 9
- KFZMGEQAYNKOFK-UHFFFAOYSA-N Isopropanol Chemical compound CC(C)O KFZMGEQAYNKOFK-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 8
- 235000019441 ethanol Nutrition 0.000 claims description 8
- 239000011259 mixed solution Substances 0.000 claims description 7
- BDERNNFJNOPAEC-UHFFFAOYSA-N propan-1-ol Chemical compound CCCO BDERNNFJNOPAEC-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 6
- 241000282898 Sus scrofa Species 0.000 claims description 5
- 241000251468 Actinopterygii Species 0.000 claims description 3
- 241000283690 Bos taurus Species 0.000 claims description 3
- BVKZGUZCCUSVTD-UHFFFAOYSA-L Carbonate Chemical compound [O-]C([O-])=O BVKZGUZCCUSVTD-UHFFFAOYSA-L 0.000 claims description 3
- 241000283973 Oryctolagus cuniculus Species 0.000 claims description 3
- 241001494479 Pecora Species 0.000 claims description 3
- 210000002808 connective tissue Anatomy 0.000 claims description 3
- 210000002435 tendon Anatomy 0.000 claims description 3
- 241000283073 Equus caballus Species 0.000 claims description 2
- 230000009286 beneficial effect Effects 0.000 abstract description 9
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 44
- 241000282894 Sus scrofa domesticus Species 0.000 description 34
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 26
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 26
- 239000008367 deionised water Substances 0.000 description 20
- 229910021641 deionized water Inorganic materials 0.000 description 20
- 238000002156 mixing Methods 0.000 description 20
- 238000004140 cleaning Methods 0.000 description 14
- 230000000052 comparative effect Effects 0.000 description 14
- 230000002159 abnormal effect Effects 0.000 description 13
- 238000000527 sonication Methods 0.000 description 13
- 238000002791 soaking Methods 0.000 description 12
- 210000004003 subcutaneous fat Anatomy 0.000 description 12
- 229910021642 ultra pure water Inorganic materials 0.000 description 12
- 239000012498 ultrapure water Substances 0.000 description 12
- 238000005406 washing Methods 0.000 description 12
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 8
- 210000003491 skin Anatomy 0.000 description 7
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 5
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 4
- 238000011282 treatment Methods 0.000 description 4
- 210000001789 adipocyte Anatomy 0.000 description 3
- 230000002349 favourable effect Effects 0.000 description 3
- 238000002676 facial rejuvenation Methods 0.000 description 2
- 238000002347 injection Methods 0.000 description 2
- 239000007924 injection Substances 0.000 description 2
- BWHMMNNQKKPAPP-UHFFFAOYSA-L potassium carbonate Chemical compound [K+].[K+].[O-]C([O-])=O BWHMMNNQKKPAPP-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 2
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 2
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 2
- 239000002002 slurry Substances 0.000 description 2
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 2
- 210000004304 subcutaneous tissue Anatomy 0.000 description 2
- KIUKXJAPPMFGSW-DNGZLQJQSA-N (2S,3S,4S,5R,6R)-6-[(2S,3R,4R,5S,6R)-3-Acetamido-2-[(2S,3S,4R,5R,6R)-6-[(2R,3R,4R,5S,6R)-3-acetamido-2,5-dihydroxy-6-(hydroxymethyl)oxan-4-yl]oxy-2-carboxy-4,5-dihydroxyoxan-3-yl]oxy-5-hydroxy-6-(hydroxymethyl)oxan-4-yl]oxy-3,4,5-trihydroxyoxane-2-carboxylic acid Chemical compound CC(=O)N[C@H]1[C@H](O)O[C@H](CO)[C@@H](O)[C@@H]1O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O[C@H]2[C@@H]([C@@H](O[C@H]3[C@@H]([C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O3)C(O)=O)O)[C@H](O)[C@@H](CO)O2)NC(C)=O)[C@@H](C(O)=O)O1 KIUKXJAPPMFGSW-DNGZLQJQSA-N 0.000 description 1
- 241000283086 Equidae Species 0.000 description 1
- 238000000944 Soxhlet extraction Methods 0.000 description 1
- 241000282887 Suidae Species 0.000 description 1
- 230000002378 acidificating effect Effects 0.000 description 1
- 230000003796 beauty Effects 0.000 description 1
- 125000005587 carbonate group Chemical group 0.000 description 1
- 150000004649 carbonic acid derivatives Chemical class 0.000 description 1
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 1
- 210000004207 dermis Anatomy 0.000 description 1
- 239000000835 fiber Substances 0.000 description 1
- 229920002674 hyaluronan Polymers 0.000 description 1
- 229960003160 hyaluronic acid Drugs 0.000 description 1
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 1
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 1
- 230000007935 neutral effect Effects 0.000 description 1
- 210000000056 organ Anatomy 0.000 description 1
- 206010033675 panniculitis Diseases 0.000 description 1
- 239000002245 particle Substances 0.000 description 1
- -1 potassium carbonate Chemical class 0.000 description 1
- 229910000027 potassium carbonate Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000002994 raw material Substances 0.000 description 1
- 239000011550 stock solution Substances 0.000 description 1
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12P—FERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
- C12P21/00—Preparation of peptides or proteins
- C12P21/06—Preparation of peptides or proteins produced by the hydrolysis of a peptide bond, e.g. hydrolysate products
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
- C07K14/78—Connective tissue peptides, e.g. collagen, elastin, laminin, fibronectin, vitronectin or cold insoluble globulin [CIG]
Landscapes
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Zoology (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Gastroenterology & Hepatology (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Toxicology (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
Abstract
一种脱脂工艺、胶原蛋白的提取方法，涉及胶原蛋白提取技术领域。脱脂工艺包括以下步骤：将经过前处理的动物组织通过第一脱脂剂进行脱脂，第一脱脂剂包括二氯甲烷和乙醇，且不含脂肪酶。该脱脂工艺有利于提高脱脂率，从而有利于胶原蛋白的提取。
Description
技术领域
本申请涉及胶原蛋白提取技术领域，具体而言，涉及一种脱脂工艺、胶原蛋白的提取方法。
背景技术
随着社会的发展，很多女生现在都比较追求面部年轻化，也会通过一些医美项目来保持面部的年轻化，比如通过注射胶原蛋白、玻尿酸等。其中，胶原蛋白可以从动物的组织中进行提取，用于提取胶原蛋白的原材料一般为皮肤组织或者是器官组织，这些组织中脂肪的含量较高，皮肤组织中的皮下组织基本由脂肪细胞组成，真皮层中还有一些游离的脂肪细胞，这些脂肪细胞包裹在胶原纤维周围，也造成了胶原蛋白提取上的困难，而且，胶原中一旦有脂肪混入，无论进行中性还是酸性提取都无法除去，脂肪的存在也会影响杂蛋白的去除，从而影响胶原蛋白的纯度。因而，在进行胶原蛋白的提取过程中，通常需要先进行脱脂，才能保证最后将胶原蛋白有效地提取出来，脱脂越彻底，越有利于胶原蛋白的提取。
其中，脱脂的方法一般包括有机溶剂脱脂、脂肪酶脱脂，有的是采用一步法，有的采用两步法，然而，现有技术中，采用一步法进行脱脂时，即使将动物组织打成浆后进行脱脂，脱脂率最高一般也不超过90％，如何进一步提高脱脂率成为了该领域的难题。
发明内容
本申请实施例提供了一种脱脂工艺、胶原蛋白的提取方法，该脱脂工艺有利于提高脱脂率，从而有利于胶原蛋白的提取。
本申请实施例是这样实现的：
第一方面，本申请实施例提供一种脱脂工艺，脱脂工艺包括以下步骤：将经过前处理的动物组织通过第一脱脂剂进行脱脂，第一脱脂剂包括二氯甲烷和乙醇，且不含脂肪酶。
在一种可能的实施方案中，第一脱脂剂为体积比为1～5:1的二氯甲烷和无水乙醇的混合液，动物组织与第一脱脂剂的料液比为1g:1～6mL。
在一种可能的实施方案中，采用第一脱脂剂进行脱脂时伴随超声处理；可选地，超声处理为间断进行，每次超声处理的时间为5～20min，间隔时间为2～8min；可选地，采用第一脱脂剂进行超声处理的次数为2～10次。
在一种可能的实施方案中，将经过第一脱脂剂脱脂处理后的动物组织通过第二脱脂剂进行脱脂，第二脱脂剂包括有机溶剂、碳酸盐或脂肪酶，且第二脱脂剂与第一脱脂剂不同。
在一种可能的实施方案中，第二脱脂剂中的有机溶剂包括异丙醇、正丙醇和甲醇中的至少一种。
在一种可能的实施方案中，第二脱脂剂为碳酸钠水溶液。
在一种可能的实施方案中，第二脱脂剂中的碳酸钠水溶液中的碳酸钠的浓度为5～10％，动物组织与第二脱脂剂的料液比为1g:5～10mL。
在一种可能的实施方案中，动物组织包括动物皮肤组织、动物结缔组织和动物肌腱组织中的至少一种，动物包括猪、牛、羊、马、鱼和兔中的至少一种。
在一种可能的实施方案中，动物组织的尺寸为(1mm～5cm)*(1mm～5cm)。
第二方面，本申请实施例提供一种胶原蛋白的提取方法，其包括第一方面实施例的脱脂工艺。
本申请实施例至少具有如下有益效果：
本申请实施例的脱脂工艺，通过第一脱脂剂对经过前处理的动物组织进行脱脂，第一脱脂剂包括二氯甲烷和乙醇，且不含脂肪酶，经测试，在采用第一脱脂剂进行一步法脱脂时，能够达到较高的脱脂率，脱脂率最高能够达到96％以上。由于本申请实施例的脱脂工艺能够达到较高的脱脂率，因而更加有利于胶原蛋白的提取。
具体实施方式
下面将结合实施例对本申请的实施方案进行详细描述，但是本领域技术人员将会理解，下列实施例仅用于说明本申请，而不应视为限制本申请的范围。实施例中未注明具体条件者，按照常规条件或制造商建议的条件进行。所用试剂或仪器未注明生产厂商者，均为可以通过市售购买获得的常规产品。
以下针对本申请实施例的脱脂工艺、胶原蛋白的提取方法进行具体说明：
第一方面，本申请实施例提供一种脱脂工艺，脱脂工艺包括以下步骤：将经过前处理的动物组织通过第一脱脂剂进行脱脂，第一脱脂剂包括二氯甲烷和乙醇，且不含脂肪酶。
其中，动物组织的前处理指的是切除毛发、一些不能用来提取胶原或胶原含量较少的部分以及清洗血污等。可选地，动物组织包括动物皮肤组织、动物结缔组织和动物肌腱组织中的至少一种。例如，当采用的动物组织为动物皮肤组织时，可以先将动物皮肤组织的皮下脂肪、毛发、异常组织块去除，并清洗掉血污。
示例性地，上述的动物包括但不限定为猪、牛、羊、马、鱼和兔中的至少一种。
可以理解的是，在对动物组织进行前处理后，可以将动物组织切成条状或块状，再利用第一脱脂剂进行脱脂处理，动物组织切成小块后，与第一脱脂剂能够更加充分接触，有利于提高脱脂率。在一些可能的实施方案中，动物组织的尺寸为(1mm～5cm)*(1mm～5cm)，其中，上述的尺寸指的是长度和宽度的乘积。在胶原蛋白的提取工艺中，脱脂步骤完成后需要将脱脂剂分离出来，如果动物组织的尺寸太小，虽然有利于脱脂，但是不利于将脱脂剂分离出来，脱脂剂残留可能会影响后续的工序效果。上述的动物组织尺寸不仅有利于脱脂，脱脂剂也能有效地被分离出来。本申请的发明人曾经尝试将动物组织打成浆后与脱脂剂混合进行脱脂处理，但发现脱脂处理完成后，不能有效地将脱脂剂分离出来，在后续的酶解步骤中，会影响酶解效果。
示例性地，动物组织的尺寸为1mm*1mm、1mm*3mm、3mm*3mm、1mm*5mm、5mm*5mm、1mm*1cm、1cm*1cm、1cm*2cm、2cm*2cm、1cm*3cm、3cm*3cm、1cm*4cm、4cm*4cm、1cm*5cm或5cm*5cm。
本申请实施例的脱脂工艺，通过第一脱脂剂对经过前处理的动物组织进行脱脂，第一脱脂剂包括二氯甲烷和乙醇，且不含脂肪酶，经测试，在采用第一脱脂剂进行一步法脱脂时，能够达到较高的脱脂率，脱脂率最该能够达到96％以上。其中，本申请实施例的发明人在研究中发现，如果第一脱脂剂中含有脂肪酶时，脂肪酶虽然能够起到一定的脱脂作用，但是经脂肪酶脱脂的动物组织会有大量絮状物产生，不利于其他脱脂剂进行脱脂，且不容易将脂肪酶分离出来，脂肪酶残留可能会影响后续的工序效果。
需要说明的是，本申请中的一步法指的是采用脱脂剂A进行一次或多次脱脂，其中，脱脂剂A可以是一种脱脂剂，也可以是多种脱脂剂的混合物，多次脱脂时均采用的脱脂剂A，则属于一步法脱脂。两步法指的是采用不同的脱脂剂分别进行一次或多次脱脂，例如，第一步的脱脂采用的脱脂剂A进行一次或多次脱脂，第二步的脱脂采用的是脱脂剂B进行一次或多次脱脂，脱脂剂A可以是一种脱脂剂，也可以是多种脱脂剂的混合物，脱脂剂B可以是一种脱脂剂，也可以是多种脱脂剂的混合物，脱脂剂A和脱脂剂B不同，则属于两步法。
示例性地，采用第一脱脂剂进行脱脂时伴随超声处理。当进行超声处理时，超声波在第一脱脂剂中传播，第一脱脂剂微粒剧烈振动，从而有利于脱脂，提高脱脂率。
可选地，超声处理为间断进行，每次超声处理的时间为5～20min，间隔时间为2～8min。
其中，本申请的发明人研究发现，如果每次超声处理的时间过长，且不间隔合适的时间，可能会使得第一脱脂剂温度升高到一定程度而破坏胶原蛋白的结构。本申请实施例中，每次超声处理的时间为5～20min，每次超声处理的时间长短合适，既能够起到较好地促进第一脱脂剂脱脂的效果，又能避免超声处理时间过长造成温度升高过高而破坏胶原蛋白的结构。而且，相邻两次超声处理的间隔时间为2～8min，当超声处理使得第一脱脂剂的温度升高后，在间隔的时间里能够使得热量先散发部分，以避免下次超声处理时产生的热量造成温度升高过高而破坏胶原蛋白的结构。本申请实施例通过采用超声处理为间断进行的方式，每次超声处理的时间为5～20min，间隔时间为2～8min，从而能够起到较好的辅助脱脂的效果，且不容易破坏胶原蛋白的结构。
示例性地，每次超声处理的时间为5min、8min、10min、12min、15min、18min和20min中任一者或者任意两者之间的数值。
示例性地，相邻两次超声处理的间隔时间为2min、3min、4min、5min、7min和8min中任一者或者任意两者之间的数值。
其中，采用第一脱脂剂进行超声处理的次数为2～10次，例如为2次、3次、4次、5次、6次、7次、8次、9次或10次。可以理解的是，在采用第一脱脂剂进行脱脂时，也可以只进行一次超声处理，示例性地，进行一次超声处理的时间为5～20min；也可以进行大于10次的超声处理。
可选地，超声处理的频率为30～50KHz，例如为30KHz、35KHz、40KHz、45KHz和50KHz中的任一者或者任意两者之间的范围。
可选地，功率为100～300W，例如为100W、150W、200W、250W和300W中的任一者或者任意两者之间的范围。
在一些实施方案中，第一脱脂剂为体积比为1～5:1的二氯甲烷和无水乙醇的混合液，动物组织与第一脱脂剂的料液比为1g:1～6mL。
本申请的发明人在研究中发现，当二氯甲烷与无水乙醇的体积比为1～5:1，动物组织与第一脱脂剂的料液比为1g:1～6mL时，更加有利于达到较高的脱脂率。示例性地，二氯甲烷与无水乙醇的体积比为1：1、2：1、3：1、4：1和5:1中的任一者或者任意两者之间的数值。示例性地，动物组织与第一脱脂剂的料液比为1g:1mL、1g:2mL、1g:3mL、1g:4mL、1g:5mL和1g:6mL中的任一者或者任意两者之间的数值。
进一步地，当采用了第一脱脂剂对动物组织进行脱脂处理后，还可以将经过第一脱脂剂处理后的动物组织通采用第二脱脂剂进行脱脂，其中，第二脱脂剂包括有机溶剂、碳酸盐或脂肪酶，第二脱脂剂与第一脱脂剂不同。
当第一脱脂剂采用二氯甲烷和乙醇的混合液，第二脱脂剂采用碳酸盐或脂肪酶时，第二脱脂剂与第一脱脂剂明显不同，相较于只采用第一脱脂剂进行脱脂处理时，能够进一步提高脱脂率。当第一脱脂剂采用二氯甲烷和乙醇的混合液，第二脱脂剂采用的有机溶剂与第一脱脂剂不同时，相较于只采用第一脱脂剂进行脱脂处理，也能够进一步提高脱脂率。示例性地，第二脱脂剂中的有机溶剂包括异丙醇、正丙醇和甲醇中的至少一种。
其中，当依次采用第一脱脂剂、第二脱脂剂进行两步法脱脂时，由于第一脱脂剂采用的是二氯甲烷和乙醇的混合液，且不含脂肪酶，则不会影响到第二脱脂剂的脱脂。当第一脱脂剂包括二氯甲烷和无水乙醇且不含脂肪酶时，不管是采用一步法进行脱脂，还是采用两步法进行脱脂，都能达到比较好的脱脂效果。
在一些实施方案中，第二脱脂剂为碳酸钠水溶液。示例性地，碳酸钠水溶液中的碳酸钠的浓度为5～10％，动物组织与第二脱脂剂的料液比为1g:5～10mL。本申请的发明人在研究中发现，当采用上述浓度的碳酸钠水溶液以及上述的料液比时，提高脱脂率的程度更高。需要说明的是，本申请实施例中碳酸钠的浓度指的是质量百分浓度。另外，还可以采用其他的碳酸盐，例如碳酸钾。
示例性地，碳酸钠水溶液中的碳酸钠的浓度为5％、6％、7％、8％、9％和10％中的任一者或者任意两者之间的数值。
示例性地，动物组织与第二脱脂剂的料液比为1g:5mL、1g:6mL、1g:7mL、1g:8mL、1g:9mL或1g:10mL。
第二方面，本申请实施例提供一种胶原蛋白的提取方法，其包括第一方面实施例的脱脂工艺。
由于本申请实施例的脱脂工艺能够达到较高的脱脂率，因而更加有利于提取到胶原蛋白。
在一些实施方案中，胶原蛋白的提取方法包括以下步骤：脱脂、除杂蛋白和酶解。需要说明的是，胶原蛋白的提取方法是多样的，本申请实施例并不限定胶原蛋白的提取的具体步骤顺序，上述示例并不形成限定。
以下结合实施例对本申请的脱脂工艺、胶原蛋白的提取方法作进一步的详细描述。
实施例1
本实施例提供一种脱脂工艺，其包括以下步骤：
(1)将猪皮组织进行前处理，去除皮下脂肪与皮上猪毛，用纯水进行清洗，洗去多余的血污、除掉的猪毛。
(2)将清洗干净的猪皮裁剪成约1mm*1mm左右大小的组织块，用超纯水清洗至无明显深色血水，并去除异常组织块。
(3)将步骤(2)得到的猪皮组织块与第一脱脂剂混合均匀，浸泡2小时，超声处理5次，每次超声处理的时间为15min，相邻两次超声处理的间隔时间为5min，超声处理的频率为40KHz，功率为200W。超声处理后用去离子水漂洗4次，直至猪皮组织无有机溶剂气味。
其中，第一脱脂剂为体积比为2：1的二氯甲烷和无水乙醇的混合液，步骤(3)中的猪皮组织块与第一脱脂剂的料液比为1g:3mL。
实施例2
本实施例提供一种脱脂工艺，其包括以下步骤：
(1)将猪皮组织进行前处理，去除皮下脂肪与皮上猪毛，用纯水进行清洗，洗去多余的血污、除掉的猪毛。
(2)将清洗干净的猪皮裁剪成约1mm*1mm左右大小的组织块，用超纯水清洗至无明显深色血水，并去除异常组织块。
(3)将步骤(2)得到的猪皮组织块与第一脱脂剂混合均匀，浸泡2小时，超声处理4次，每次超声处理的时间为10min，相邻两次超声处理的间隔时间为3min，超声处理的频率为40KHz，功率为200W。超声处理后用去离子水漂洗4次，直至猪皮组织无有机溶剂气味。
其中，第一脱脂剂为体积比为4：1的二氯甲烷和无水乙醇的混合液，步骤(3)中的猪皮组织块与第一脱脂剂的料液比为1g:5mL。
实施例3
本实施例提供一种脱脂工艺，其包括以下步骤：
(1)将猪皮组织进行前处理，去除皮下脂肪与皮上猪毛，用纯水进行清洗，洗去多余的血污、除掉的猪毛。
(2)将清洗干净的猪皮裁剪成约1mm*1cm左右大小的组织块，用超纯水清洗至无明显深色血水，并去除异常组织块。
(3)将步骤(2)得到的猪皮组织块与第一脱脂剂混合均匀，浸泡2小时，超声处理6次，每次超声处理的时间为15min，相邻两次超声处理的间隔时间为5min，超声处理的频率为40KHz，功率为200W。超声处理后用去离子水漂洗4次，直至猪皮组织无有机溶剂气味。
其中，第一脱脂剂为体积比为2：1的二氯甲烷和无水乙醇的混合液，步骤(3)中的猪皮组织块与第一脱脂剂的料液比为1g:3mL。
实施例4
本实施例提供一种脱脂工艺，其包括以下步骤：
(1)将猪皮组织进行前处理，去除皮下脂肪与皮上猪毛，用纯水进行清洗，洗去多余的血污、除掉的猪毛。
(2)将清洗干净的猪皮裁剪成约3mm*1cm左右大小的组织块，用超纯水清洗至无明显深色血水，并去除异常组织块。
(3)将步骤(2)得到的猪皮组织块与第一脱脂剂混合均匀，浸泡2小时，超声处理6次，每次超声处理的时间为15min，相邻两次超声处理的间隔时间为5min，超声处理的频率为40KHz，功率为200W。超声处理后用去离子水漂洗4次，直至猪皮组织无有机溶剂气味。
其中，第一脱脂剂为体积比为2：1的二氯甲烷和无水乙醇的混合液，步骤(3)中的猪皮组织块与第一脱脂剂的料液比为1g:3mL。
实施例5
本实施例提供一种脱脂工艺，其包括以下步骤：
(1)将猪皮组织进行前处理，去除皮下脂肪与皮上猪毛，用纯水进行清洗，洗去多余的血污、除掉的猪毛。
(2)将清洗干净的猪皮裁剪成约3mm*1cm左右大小的组织块，用超纯水清洗至无明显深色血水，并去除异常组织块。
(3)将步骤(2)得到的猪皮组织块与第一脱脂剂混合均匀，浸泡2小时，超声处理6次，每次超声处理的时间为15min，相邻两次超声处理的间隔时间为5min，超声处理的频率为40KHz，功率为200W。超声处理后用去离子水漂洗4次，直至猪皮组织无有机溶剂气味。
其中，第一脱脂剂为体积比为2：1的二氯甲烷和无水乙醇的混合液，步骤(3)中的猪皮组织块与第一脱脂剂的料液比为1g:3mL。
(4)将经过第一脱脂剂脱脂处理后的动物组织与第二脱脂剂混合均匀，超声处理6次，每次超声处理的时间为10min，相邻两次超声处理的间隔时间为5min，超声处理的频率为40KHz，功率为200W。超声处理后用去离子水漂洗3次。
其中，第二脱脂剂为浓度为3％的碳酸钠水溶液，步骤(4)中的动物组织与第二脱脂剂的料液比为1g：3mL。
实施例6
本实施例提供一种脱脂工艺，其包括以下步骤：
(1)将猪皮组织进行前处理，去除皮下脂肪与皮上猪毛，用纯水进行清洗，洗去多余的血污、除掉的猪毛。
(2)将清洗干净的猪皮裁剪成约3mm*1cm左右大小的组织块，用超纯水清洗至无明显深色血水，并去除异常组织块。
(3)将步骤(2)得到的猪皮组织块与第一脱脂剂混合均匀，浸泡2小时，超声处理6次，每次超声处理的时间为15min，相邻两次超声处理的间隔时间为5min，超声处理的频率为40KHz，功率为200W。超声处理后用去离子水漂洗4次，直至猪皮组织无有机溶剂气味。
其中，第一脱脂剂为体积比为2：1的二氯甲烷和无水乙醇的混合液，步骤(3)中的猪皮组织块与第一脱脂剂的料液比为1g:3mL。
(4)将经过第一脱脂剂脱脂处理后的动物组织与第二脱脂剂混合均匀，超声处理6次，每次超声处理的时间为10min，相邻两次超声处理的间隔时间为5min，超声处理的频率为40KHz，功率为200W。超声处理后用去离子水漂洗3次。
其中，第二脱脂剂为浓度为3％的碳酸钠水溶液，步骤(4)中的动物组织与第二脱脂剂的料液比为1g：10mL。
实施例7
本实施例提供一种脱脂工艺，其包括以下步骤：
(1)将猪皮组织进行前处理，去除皮下脂肪与皮上猪毛，用纯水进行清洗，洗去多余的血污、除掉的猪毛。
(2)将清洗干净的猪皮裁剪成约3mm*1cm左右大小的组织块，用超纯水清洗至无明显深色血水，并去除异常组织块。
(3)将步骤(2)得到的猪皮组织块与第一脱脂剂混合均匀，浸泡2小时，超声处理6次，每次超声处理的时间为15min，相邻两次超声处理的间隔时间为5min，超声处理的频率为40KHz，功率为200W。超声处理后用去离子水漂洗4次，直至猪皮组织无有机溶剂气味。
其中，第一脱脂剂为体积比为2：1的二氯甲烷和无水乙醇的混合液，步骤(3)中的猪皮组织块与第一脱脂剂的料液比为1g:3mL。
(4)将经过第一脱脂剂脱脂处理后的动物组织与第二脱脂剂混合均匀，超声处理6次，每次超声处理的时间为10min，相邻两次超声处理的间隔时间为5min，超声处理的频率为40KHz，功率为200W。超声处理后用去离子水漂洗3次。
其中，第二脱脂剂为浓度为5％的碳酸钠水溶液，步骤(4)中的动物组织与第二脱脂剂的料液比为1g：3mL。
实施例8
本实施例提供一种脱脂工艺，其包括以下步骤：
(1)将猪皮组织进行前处理，去除皮下脂肪与皮上猪毛，用纯水进行清洗，洗去多余的血污、除掉的猪毛。
(2)将清洗干净的猪皮裁剪成约3mm*1cm左右大小的组织块，用超纯水清洗至无明显深色血水，并去除异常组织块。
(3)将步骤(2)得到的猪皮组织块与第一脱脂剂混合均匀，浸泡2小时，超声处理6次，每次超声处理的时间为15min，相邻两次超声处理的间隔时间为5min，超声处理的频率为40KHz，功率为200W。超声处理后用去离子水漂洗4次，直至猪皮组织无有机溶剂气味。
其中，第一脱脂剂为体积比为2：1的二氯甲烷和无水乙醇的混合液，步骤(3)中的猪皮组织块与第一脱脂剂的料液比为1g:3mL。
(4)将经过第一脱脂剂脱脂处理后的动物组织与第二脱脂剂混合均匀，超声处理6次，每次超声处理的时间为10min，相邻两次超声处理的间隔时间为5min，超声处理的频率为40KHz，功率为200W。超声处理后用去离子水漂洗3次。
其中，第二脱脂剂为浓度为5％的碳酸钠水溶液，步骤(4)中的动物组织与第二脱脂剂的料液比为1g：6mL。
实施例9
本实施例提供一种脱脂工艺，其包括以下步骤：
(1)将猪皮组织进行前处理，去除皮下脂肪与皮上猪毛，用纯水进行清洗，洗去多余的血污、除掉的猪毛。
(2)将清洗干净的猪皮裁剪成约3mm*1cm左右大小的组织块，浸泡2小时，用超纯水清洗至无明显深色血水，并去除异常组织块。
(3)将步骤(2)得到的猪皮组织块与第一脱脂剂混合均匀，超声处理6次，每次超声处理的时间为15min，相邻两次超声处理的间隔时间为5min，超声处理的频率为40KHz，功率为200W。超声处理后用去离子水漂洗4次，直至猪皮组织无有机溶剂气味。
其中，第一脱脂剂为体积比为2：1的二氯甲烷和无水乙醇的混合液，步骤(3)中的猪皮组织块与第一脱脂剂的料液比为1g:3mL。
(4)将经过第一脱脂剂脱脂处理后的动物组织与第二脱脂剂混合均匀，超声处理6次，每次超声处理的时间为10min，相邻两次超声处理的间隔时间为5min，超声处理的频率为40KHz，功率为200W。超声处理后用去离子水漂洗3次。
其中，第二脱脂剂为浓度为5％的碳酸钠水溶液，步骤(4)中的动物组织与第二脱脂剂的料液比为1g：10mL。
实施例10
本实施例提供一种脱脂工艺，其包括以下步骤：
(1)将猪皮组织进行前处理，去除皮下脂肪与皮上猪毛，用纯水进行清洗，洗去多余的血污、除掉的猪毛。
(2)将清洗干净的猪皮裁剪成约3mm*1cm左右大小的组织块，用超纯水清洗至无明显深色血水，并去除异常组织块。
(3)将步骤(2)得到的猪皮组织块与第一脱脂剂混合均匀，浸泡2小时，超声处理6次，每次超声处理的时间为15min，相邻两次超声处理的间隔时间为5min，超声处理的频率为40KHz，功率为200W。超声处理后用去离子水漂洗4次，直至猪皮组织无有机溶剂气味。
其中，第一脱脂剂为体积比为2：1的二氯甲烷和无水乙醇的混合液，步骤(3)中的猪皮组织块与第一脱脂剂的料液比为1g:3mL。
(4)将经过第一脱脂剂脱脂处理后的动物组织与第二脱脂剂混合均匀，超声处理6次，每次超声处理的时间为10min，相邻两次超声处理的间隔时间为5min，超声处理的频率为40KHz，功率为200W。超声处理后用去离子水漂洗3次。
其中，第二脱脂剂为浓度为10％的碳酸钠水溶液，步骤(4)中的动物组织与第二脱脂剂的料液比为1g：3mL。
实施例11
本实施例提供一种脱脂工艺，其包括以下步骤：
(1)将猪皮组织进行前处理，去除皮下脂肪与皮上猪毛，用纯水进行清洗，洗去多余的血污、除掉的猪毛。
(2)将清洗干净的猪皮裁剪成约3mm*1cm左右大小的组织块，用超纯水清洗至无明显深色血水，并去除异常组织块。
(3)将步骤(2)得到的猪皮组织块与第一脱脂剂混合均匀，浸泡2小时，超声处理6次，每次超声处理的时间为15min，相邻两次超声处理的间隔时间为5min，超声处理的频率为40KHz，功率为200W。超声处理后用去离子水漂洗4次，直至猪皮组织无有机溶剂气味。
其中，第一脱脂剂为体积比为2：1的二氯甲烷和无水乙醇的混合液，步骤(3)中的猪皮组织块与第一脱脂剂的料液比为1g:3mL。
(4)将经过第一脱脂剂脱脂处理后的动物组织与第二脱脂剂混合均匀，超声处理6次，每次超声处理的时间为10min，相邻两次超声处理的间隔时间为5min，超声处理的频率为40KHz，功率为200W。超声处理后用去离子水漂洗3次。
其中，第二脱脂剂为浓度为10％的碳酸钠水溶液，步骤(4)中的动物组织与第二脱脂剂的料液比为1g：10mL。
对比例1
本对比例提供一种脱脂工艺，其包括以下步骤：
(1)将猪皮组织进行前处理，去除皮下脂肪与皮上猪毛，用纯水进行清洗，洗去多余的血污、除掉的猪毛。
(2)将清洗干净的猪皮裁剪成约1mm*1mm左右大小的组织块，用超纯水清洗至无明显深色血水，并去除异常组织块。
(3)将步骤(2)得到的猪皮组织块与第一脱脂剂混合均匀，浸泡2小时，超声处理6次，每次超声处理的时间为15min，相邻两次超声处理的间隔时间为5min，超声处理的频率为40KHz，功率为200W。超声处理后用去离子水漂洗4次，直至猪皮组织无有机溶剂气味。
其中，第一脱脂剂为脂肪酶，步骤(3)中的猪皮组织块与第一脱脂剂的料液比为1g:3mL。
(4)将经过第一脱脂剂脱脂处理后的动物组织与第二脱脂剂混合均匀，超声处理6次，每次超声处理的时间为15min，相邻两次超声处理的间隔时间为5min。超声处理后用去离子水漂洗3次。
其中，第二脱脂剂为步体积比为2:1的二氯甲烷与无水乙醇的混合液，骤(4)中的动物组织与第二脱脂剂的料液比为1g：3mL。
对比例2
本对比例提供一种脱脂工艺，与实施例1的不同之处仅在于对比例2的第一脱脂剂为浓度为10％的碳酸钠水溶液。
试验例
采用索氏提取法对实施例1～实施例11及对比例1～对比例2的经过前处理后的猪皮组织、脱脂工艺后的猪皮组织的脂肪含量进行测定，其中，经过前处理后的猪皮组织的脂肪含量为M1，脱脂工艺后的猪皮组织的脂肪含量为M2，通过公式(M1-M2)/M1计算得到脱脂率，脱脂率的具体结果记录在表1中。需要说明的是，每个实施例和对比例均进行了两次平行样的测试，表格1中的脱脂率的计算结果是两次测试的平均值。
表1.实施例和对比例的脱脂率计算结果
结果分析：从表1的结果可以得知，本申请实施例的脱脂工艺能够达到较高的脱脂率，脱脂率最高可达到96％以上。通过对比实施例1与对比例1的结果可以得知，对比例1是先采用脂肪酶脱脂，再采用二氯甲烷和无水乙醇的混合液进行脱脂，而实施例1是直接采用二氯甲烷和无水乙醇的混合液进行脱脂，实施例1的脱脂率明显高于对比例1的脱脂率，说明了第一脱脂剂采用脂肪酶进行脱脂会不利于后续的脱脂。
通过对比实施例5～实施例10的结果可以发现，当第二脱脂剂采用的碳酸钠水溶液中的碳酸钠的浓度为5～10％，猪皮组织与碳酸钠水溶液的料液比为1g:5～10mL时，脱脂率相对更高。
通过对比实施例1、对比例1以及实施例10的结果可以发现，当单独采用碳酸钠进行脱脂时，脱脂效果较差。
以上仅为本申请的具体实施例而已，并不用于限制本申请，对于本领域的技术人员来说，本申请可以有各种更改和变化。凡在本申请的精神和原则之内，所作的任何修改、等同替换、改进等，均应包含在本申请的保护范围之内。
Claims (10)
1.一种脱脂工艺，其特征在于，所述脱脂工艺包括以下步骤：将经过前处理的动物组织通过第一脱脂剂进行脱脂，所述第一脱脂剂包括二氯甲烷和乙醇，且不含脂肪酶。
2.根据权利要求1所述的脱脂工艺，其特征在于，所述第一脱脂剂为体积比为1～5:1的二氯甲烷和无水乙醇的混合液，所述动物组织与所述第一脱脂剂的料液比为1g:1～6mL。
3.根据权利要求1所述的脱脂工艺，其特征在于，采用所述第一脱脂剂进行脱脂时伴随超声处理；可选地，超声处理为间断进行，每次超声处理的时间为5～20min，间隔时间为2～8min；可选地，采用所述第一脱脂剂进行超声处理的次数为2～10次。
4.根据权利要求1～3任一项所述的脱脂工艺，其特征在于，将经过所述第一脱脂剂脱脂处理后的所述动物组织通过第二脱脂剂进行脱脂，所述第二脱脂剂包括有机溶剂、碳酸盐或脂肪酶，且所述第二脱脂剂与所述第一脱脂剂不同。
5.根据权利要求4所述的脱脂工艺，其特征在于，所述第二脱脂剂中的所述有机溶剂包括异丙醇、正丙醇和甲醇中的至少一种。
6.根据权利要求4所述的脱脂工艺，其特征在于，所述第二脱脂剂为碳酸钠水溶液。
7.根据权利要求6所述的脱脂工艺，其特征在于，所述第二脱脂剂中的所述碳酸钠水溶液中的碳酸钠的浓度为5～10％，所述动物组织与所述第二脱脂剂的料液比为1g:5～10mL。
8.根据权利要求1～3任一项所述的脱脂工艺，其特征在于，所述动物组织包括动物皮肤组织、动物结缔组织和动物肌腱组织中的至少一种，所述动物包括猪、牛、羊、马、鱼和兔中的至少一种。
9.根据权利要求1～3任一项所述的脱脂工艺，其特征在于，所述动物组织的尺寸为(1mm～5cm)*(1mm～5cm)。
10.一种胶原蛋白的提取方法，其特征在于，包括权利要求1～9任一项所述的脱脂工艺。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN202210501790.6A CN114736945A (zh) | 2022-05-10 | 2022-05-10 | 脱脂工艺、胶原蛋白的提取方法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN202210501790.6A CN114736945A (zh) | 2022-05-10 | 2022-05-10 | 脱脂工艺、胶原蛋白的提取方法 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CN114736945A true CN114736945A (zh) | 2022-07-12 |
Family
ID=82284755
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CN202210501790.6A Pending CN114736945A (zh) | 2022-05-10 | 2022-05-10 | 脱脂工艺、胶原蛋白的提取方法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| CN (1) | CN114736945A (zh) |
Citations (6)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US20060240633A1 (en) * | 2004-10-01 | 2006-10-26 | Agilent Technologies, Inc. | Methods and systems for on-column protein delipidation |
| CN102296316A (zh) * | 2011-08-31 | 2011-12-28 | 蚌埠市钰诚五金工贸有限公司 | 一种脂肪酶脱脂剂及其制备方法 |
| CN103601803A (zh) * | 2013-11-22 | 2014-02-26 | 四川大学 | 一种从乳猪皮中制备未变性天然胶原的方法 |
| CN105985430A (zh) * | 2016-01-27 | 2016-10-05 | 成都市科乐生物技术有限公司 | 一种低温提取大分子胶原蛋白的方法 |
| CN107233621A (zh) * | 2017-06-02 | 2017-10-10 | 广州新诚生物科技有限公司 | 天然软组织去细胞基质的制备方法 |
| CN110563834A (zh) * | 2019-09-25 | 2019-12-13 | 成都奇璞生物科技有限公司 | 一种胶原的提取方法 |
-
2022
- 2022-05-10 CN CN202210501790.6A patent/CN114736945A/zh active Pending
Patent Citations (6)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US20060240633A1 (en) * | 2004-10-01 | 2006-10-26 | Agilent Technologies, Inc. | Methods and systems for on-column protein delipidation |
| CN102296316A (zh) * | 2011-08-31 | 2011-12-28 | 蚌埠市钰诚五金工贸有限公司 | 一种脂肪酶脱脂剂及其制备方法 |
| CN103601803A (zh) * | 2013-11-22 | 2014-02-26 | 四川大学 | 一种从乳猪皮中制备未变性天然胶原的方法 |
| CN105985430A (zh) * | 2016-01-27 | 2016-10-05 | 成都市科乐生物技术有限公司 | 一种低温提取大分子胶原蛋白的方法 |
| CN107233621A (zh) * | 2017-06-02 | 2017-10-10 | 广州新诚生物科技有限公司 | 天然软组织去细胞基质的制备方法 |
| CN110563834A (zh) * | 2019-09-25 | 2019-12-13 | 成都奇璞生物科技有限公司 | 一种胶原的提取方法 |
Non-Patent Citations (2)
| Title |
|---|
| 张琦等: "猪皮两步法有机溶剂脱脂的研究", 《陕西科技大学学报（自然科学版）》, vol. 10, no. 3, 7 September 2010 (2010-09-07), pages 78 - 82 * |
| 谭佳等: "鸡脚脱脂除杂蛋白预处理工艺", 《精细化工》, vol. 38, no. 1, 20 January 2021 (2021-01-20), pages 138 - 146 * |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| Widyasari et al. | Extraction and characterization of gelatin from chicken feet by acid and ultrasound assisted extraction | |
| RU2267933C2 (ru) | Способ изготовления коллагеновой укупорочной мембраны из свиной шкуры | |
| CA2708844C (en) | Preparation of high purity collagen | |
| RU2000130493A (ru) | Способ изготовления коллагеновой укупорочной мембраны из свиной шкуры | |
| WO2023040084A1 (zh) | 胶原三肽的提取方法及制备的胶原三肽 | |
| TWI664189B (zh) | 低內毒素膠原蛋白的製備方法 | |
| JP4738005B2 (ja) | 魚皮の前処理方法 | |
| CN114736945A (zh) | 脱脂工艺、胶原蛋白的提取方法 | |
| KR101329794B1 (ko) | 다공성 콜라겐 기질의 제조 방법 | |
| TWI600379B (zh) | 結合壓力與酵素萃取動物性成份水解物之方法 | |
| JP4587711B2 (ja) | 可溶性魚コラーゲン、その製造方法及びコラーゲン化粧料 | |
| AU2009324271B2 (en) | Preparation of high purity collagen | |
| RU2229821C2 (ru) | Способ получения белкового гидролизата из кератинсодержащего сырья | |
| US4581148A (en) | Depilating composition and method | |
| TWI482781B (zh) | 多孔狀膠原蛋白基質製備方法 | |
| RU2375385C1 (ru) | Способ получения белкового гидролизата | |
| JPH10276680A (ja) | 魚類ゼラチンの製造方法 | |
| CN114907470B (zh) | 一种从动物皮制取水解胶原蛋白的方法及水解胶原蛋白 | |
| CN113365672A (zh) | 使用超临界流体提取细胞外基质的方法及由此产生的用于组织再生的细胞外基质生物材料 | |
| RU2259779C2 (ru) | Способ получения коллагеновой дисперсии | |
| RU2240818C1 (ru) | Коллагенсодержащий продукт медицинского назначения "кололень" и способ его получения | |
| Bazhenova et al. | Modification of collagen-containing animal raw materials for use in food products | |
| RU2820352C1 (ru) | Порошковый коллагеновый материал и способ его получения | |
| Razali et al. | Effect of Ultrasonic Amplitude on the Yield and Properties of Barramundi (Lates calcarifer) Skin Collagen: Effect of Ultrasonic Amplitude on the Lates calcarifer Skin Collagen | |
| CN116548587A (zh) | 一种高凝胶强度鱼糜制品的制备方法 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| PB01 | Publication | ||
| PB01 | Publication | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination |