CN114685608A - 含有三硫醚键的环肽化合物或其衍生物、其合成方法和应用 - Google Patents

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Abstract

本发明公开了一种含有三硫醚键的环肽化合物或其衍生物、其合成方法和应用。所述三硫醚键的环肽化合物或其衍生物的结构式中包括式(I)所示的母核结构以及可与放射性核素配位标记的配体。本发明的含有三硫醚键的环肽化合物或其衍生物能够靶向内分泌肿瘤，能够在放射性核素标记后用于体内成像或者核素治疗，具有作为放射性药物前体在生物体内显影示踪和治疗内分泌肿瘤的作用，并且特异性好、毒性小、安全性高，具备一定的放射性药物成药潜力。
Figure DDA0002958744520000011

Description

含有三硫醚键的环肽化合物或其衍生物、其合成方法和应用
技术领域
本发明涉及生物医药领域，特别是涉及一种含三硫醚键的环肽化合物或其衍生物、其合成方法和应用。
背景技术
以三硫醚键结构为代表的多硫键骨架因其在调控生理活动等方面所发挥的关键作用而备受关注，近年来许多内源性的三硫醚化合物被报道，包括含三硫醚键结构的抗体等。同时，三硫醚键是许多天然产物的重要官能团，如Varacins A，DATS，Outovirin C等分子均具有极好的生理活性。
多肽类药物是介于传统小分子药和生物药之间的一类药物，目前已上市80余种，其中以环肽为基本骨架的多肽类药物占多数。由于多肽药物与受体蛋白通常基于蛋白-蛋白相互作用从而发挥药效，环肽分子相比于传统小分子药物具有更宽广的相互作用界面，针对传统意义上“不可成药”的靶点具有更好的成药潜力。因此对多肽类药物的开发近年来被科学界和制药工业界广泛认可和关注。
正电子发射计算机断层显像(PET-CT)技术是近十年来蓬勃兴起的一项核医学技术。将PET与CT完美融为一体，由PET提供病灶详尽的功能与代谢等分子信息，而CT提供病灶的精确解剖定位，一次显像可获得全身各方位的断层图像，具有灵敏、准确、特异及定位精确等特点，可直接了解全身整体状况，从而达到早期发现病灶和诊断疾病的目的。PET-CT的出现是医学影像学的又一次革命，被医学界公认为“现代医学高科技之冠”。
据统计，我国每年新发癌症患者逾390万，年花费超2200亿。尽管放射检测治疗领域的技术主要针对肿瘤患者，然而目前临床上能够作为放射性药物前体的药物种类较少，且普遍存在局限性，如特异性缺乏、不能有效靶向、毒性较大等。因此这类化合物的上市速度远远不足以满足核医学技术蓬勃发展的需求，亟需开发新颖的放射性药物前体。
因此，研发针对放射性药物前体的先导化合物，及其高活性衍生物具有十分重要的科学意义和社会意义。
发明内容
基于此，本发明提供了一种含有三硫醚键的环肽化合物或其衍生物，该环肽化合物或其衍生物能够在放射性核素标记后用于体内成像或者核素治疗，具备一定的放射性药物的成药潜力。
具体技术方案如下：
一种含有三硫醚键的环肽化合物或其衍生物或者其立体异构体或者其药学上可接受的盐，其特征在于，其结构式中包括式(I)所示的母核结构以及可与放射性核素配位标记的配体，
Figure BDA0002958744500000021
在其中一些实施例中，所述含有三硫醚键的环肽化合物或其衍生物具有如下式(II)所示结构：
Figure BDA0002958744500000031
其中，R1、R2、R3、R4和R5分别独立地选自：H、氨基酸的侧链；
R6选自：H、氨基酸失去氨基后的残基、羟基取代的C1-C6烷基；
L为
Figure BDA0002958744500000032
其中，R选自：取代或未取代的亚烷基、取代或未取代的含氧亚烷基、取代或未取代的含硫亚烷基；
Q为可与放射性核素配位标记的配体；
n选自：0、1以上的正整数。
在其中一些实施例中，R选自：C1-C10亚烷基、含氧C1-C10亚烷基。
在其中一些实施例中，R选自：C1-C6亚烷基、含氧C4-C8亚烷基。
在其中一些实施例中，L选自：
Figure BDA0002958744500000033
在其中一些实施例中，Q选自：
Figure BDA0002958744500000034
Figure BDA0002958744500000041
在其中一些实施例中，Q选自：
Figure BDA0002958744500000042
在其中一些实施例中，n为0，1-10之间的正整数。
在其中一些实施例中，n为0，1-5之间的正整数。
在其中一些实施例中，R1、R2、R3、R4和R5分别独立地选自：H、C1-C10烷基、R7取代的C1-C10烷基；
R7选自：C6-C10芳基、R8取代的C6-C10芳基、C5-C10杂芳基、R8取代的C5-C10杂芳基、C3-C6环烷基、羧基、羟基、氨基、C1-C6烷基酰基、卤素、巯基、C1-C6烷氧基、C1-C6烷硫基、氨基酰基、胍基、三苯甲硫基、三苯甲氨基羰基、叔丁氧羰基、叔丁氧羰基氨基、Pbf保护的胍基；
R8选自：C1-C6烷基、C3-C6环烷基、羧基、羟基、氨基、C1-C6烷基酰基、卤素、巯基、C1-C6烷氧基、C1-C6烷硫基、叔丁氧羰基、三苯甲基。
在其中一些实施例中，R1、R2、R3、R4和R5分别独立地选自：H、C1-C6烷基、R7取代的C1-C6烷基；
R7选自：苯基、萘基、羟基取代的苯基、羟基取代的萘基、吲哚基、咪唑基、羧基、羟基、氨基、巯基、甲硫基、氨基酰基、胍基、三苯甲硫基、三苯甲氨基羰基、叔丁氧羰基、叔丁氧羰基氨基、Pbf保护的胍基、三苯甲基咪唑基、叔丁氧羰基吲哚基。
在其中一些实施例中，R1、R2、R3、R4和R5分别独立地选自：H、甲基、正丙基、异丙基、2-甲基丙基、正丁基、异丁基、苯基甲基、对苯酚基甲基、对叔丁氧基苯基甲基、2-萘基甲基、3-吲哚甲基、N-叔丁氧羰基-3-吲哚基甲基、1-羟基乙基、1-叔丁氧基乙基、羟甲基、叔丁氧甲基、巯基甲基、三苯甲硫基甲基、2-甲硫基乙基、氨基酰基甲基、三苯甲氨基羰基甲基、氨基酰基乙基、三苯甲氨基羰基乙基、羧基甲基、叔丁氧羰基甲基、羧基乙基、叔丁氧羰基乙基、4-氨基丁基、4-叔丁氧羰基氨基丁基、3-胍基丙基、3-Pbf保护的胍基丙基、咪唑基甲基、三苯甲基咪唑基甲基。
在其中一些实施例中，R1选自：H、苯基甲基；R2选自：H、对苯酚基甲基、2-萘基甲基、苯基甲基；R3选自：H、3-吲哚甲基；R4选自：H、4-氨基丁基；R5选自：H、1-羟基乙基。
在其中一些实施例中，R6选自：H、苏氨酸残基、羟基取代的C1-C6烷基。
在其中一些实施例中，R6选自：H、1-(2-羟基乙基)乙酸基、2-羟基-1-(羟甲基)丙基。
本发明还提供了上述含有三硫醚键的环肽化合物或其衍生物的合成方法，该方法操作简单，合成周期短，成本低，所得产物的产率和纯度高。
具体技术方案如下：
一种上述的含有三硫醚键的环肽化合物或其衍生物的合成方法，其特征在于，包括如下步骤：
步骤A：将氨基酸和树脂以固相合成方法制备得到式(III)所示的多肽树脂；
Figure BDA0002958744500000061
其中，R为巯基保护基；
步骤B：脱去式(III)所示的多肽树脂中的巯基保护基，得到式(IV)所示的含有两个巯基的多肽树脂；
Figure BDA0002958744500000062
步骤C：式(IV)所示的含有两个巯基的多肽树脂中的巯基与硫源进行关环反应，得到式(V)所示的含有三硫醚键的环肽树脂；
Figure BDA0002958744500000063
步骤D：将式(V)所示的含有三硫醚键的环肽树脂进行收缩处理，然后经剪切液剪切，过滤除去树脂，将滤液纯化后即得式(II)所示的含有三硫醚键的环肽化合物或其衍生物；
Figure BDA0002958744500000071
一种上述的含有三硫醚键的环肽化合物或其衍生物的合成方法，其特征在于，包括如下步骤：
步骤a：将氨基酸和树脂以固相合成方法制备得到式(III)所示的多肽树脂；
Figure BDA0002958744500000072
其中，R为巯基保护基；
步骤b：将式(III)所示的多肽树脂进行收缩处理，然后经剪切液剪切，脱去式(III)所示的多肽树脂中的巯基保护基和树脂，过滤除去树脂，滤液用乙醚沉淀，收集沉淀，得式VI所示的含有两个巯基的多肽；
Figure BDA0002958744500000081
步骤c：式(VI)所示的含有两个巯基的多肽中的巯基与硫源进行关环反应，得到式(II)所示的含有三硫醚键的环肽化合物或其衍生物；
Figure BDA0002958744500000082
在其中一些实施例中，所述R选自：Trt、Mmt、StBu或乙酰氨基甲基。
在其中一些实施例中，所述树脂为MBHA树脂、CTC树脂或Wang树脂。
在其中一些实施例中，所述树脂的取代度为0.1-1.5mmol/g。
在其中一些实施例中，步骤B中所述脱去巯基保护基包括：用温和剪切液重复洗涤所述多肽树脂，直至溶液颜色由无色变为黄色再变为无色，以脱去巯基保护；所述温和剪切液为TFA、TIS和DCM的混合液。
在其中一些实施例中，步骤B中所述温和剪切液为体积比为2-4:4-6:90-94的TFA、TIS和DCM的混合液。
在其中一些实施例中，所述硫源选自如下化合物：
Figure BDA0002958744500000083
Figure BDA0002958744500000091
在其中一些实施例中，所述硫源为如下化合物：
Figure BDA0002958744500000092
在其中一些实施例中，所述硫源的制备方法包括如下步骤：在无水条件下，邻苯二甲酰亚胺和一氯化硫在DMF中反应18-22小时，反应温度为室温，所述邻苯二甲酰亚胺和一氯化硫的摩尔比为1.5-2.5:1。
在其中一些实施例中，式(IV)所示的含有两个巯基的多肽树脂中的巯基与硫源进行关环反应包括：将硫源微溶于溶剂中，加入所述含有两个巯基的多肽树脂中，在氮气或惰性气体的保护下进行关环反应，重复反应三遍，每遍1-4小时；所述溶剂为NMP、DMF、DCM、乙腈和甲醇中的一种或多种。
在其中一些实施例中，式(IV)所示的含有两个巯基的多肽树脂中的巯基与硫源进行关环反应包括：将硫源微溶于溶剂中，加入所述含有两个巯基的多肽树脂中，在氮气或惰性气体的保护下进行关环反应，重复反应三遍，每遍1.5-2.5小时；所述溶剂为NMP、DMF和DCM中的一种或多种。
在其中一些实施例中，式(IV)所示的含有两个巯基的多肽树脂中的巯基与硫源进行关环反应中所述溶剂为体积比为1：98-99的DCM和DMF的混合液。
在其中一些实施例中，所述硫源与步骤A或者步骤a中所述的氨基酸的摩尔比为1:2-3。
在其中一些实施例中，巯基与硫源进行关环反应的步骤中所述溶剂的用量与所述硫源的配比为2-3mL：1mmol。
在其中一些实施例中，所述收缩处理的试剂为甲醇。
在其中一些实施例中，步骤D和步骤b中所述剪切液为TFA、TIS和H2O的混合溶液，TFA、EDT、PhOH和H2O的混合溶液，TFA、EDT、TIS、PhOH和H2O的混合溶液。
在其中一些实施例中，所述TFA、TIS和H2O的混合溶液中TFA、TIS和H2O的体积比为94-96：2-3:2-3；所述TFA、EDT、PHOH和H2O的混合溶液中TFA、EDT、PhOH和H2O的体积比为92-98:4-6:2-4:1-3；所述TFA、EDT、TIS、PhOH和H2O的混合溶液中TFA、EDT、TIS、PhOH和H2O的体积比为76-84:4-6:4-6:4-6:4-6。
在其中一些实施例中，步骤D和步骤b中所述经剪切液剪切的反应时间为1-3小时。
在其中一些实施例中，步骤D中所述将滤液纯化包括如下步骤：滤液用乙醚沉淀，收集沉淀，用乙腈水溶液溶解，再用RP-HPLC系统进行分离，收集目的峰馏分进行浓缩，冷冻干燥，即得所述含有三硫醚键的环肽化合物。
在其中一些实施例中，式(VI)所示的含有两个巯基的多肽中的巯基与硫源进行关环反应包括：在乙腈水溶液中，将所述含有两个巯基的多肽与硫源反应1-5小时。
在其中一些实施例中，式(VI)所示的含有两个巯基的多肽中的巯基与硫源进行关环反应包括：在体积分数为45-55％的乙腈水溶液中，将所述含有两个巯基的多肽与硫源反应2-4小时。
本发明还提供了上述含有三硫醚键的环肽化合物或其衍生物的应用。
具体技术方案如下：
上述的含有三硫醚键的环肽化合物或其衍生物或者其立体异构体或者其药学性可接受的盐在制备诊断和/或治疗肿瘤的药物中的应用。
在其中一些实施例中，所述肿瘤为神经内分泌肿瘤。
在其中一些实施例中，所述神经内分泌肿瘤为生长抑素受体阳性神经内分泌肿瘤。
在其中一些实施例中，所述生长抑素受体阳性神经内分泌肿瘤为胰腺神经内分泌肿瘤、胃神经内分泌肿瘤、肠神经内分泌肿瘤、肝脏神经内分泌肿瘤、和淋巴结转移性神经内分泌肿瘤。
上述的含有三硫醚键的环肽化合物或其衍生物或者其立体异构体或者其药学上可接受的盐在制备放射性药物中的应用。
在其中一些实施例中，所述放射性药物为用于诊断和/或治疗肿瘤的放射性药物。
在其中一些实施例中，所述肿瘤为神经内分泌肿瘤。
在其中一些实施例中，所述神经内分泌肿瘤为生长抑素受体阳性神经内分泌肿瘤。
在其中一些实施例中，所述生长抑素受体阳性神经内分泌肿瘤为胰腺神经内分泌肿瘤、胃神经内分泌肿瘤、肠神经内分泌肿瘤、肝脏神经内分泌肿瘤、和淋巴结转移性神经内分泌肿瘤。
上述的含有三硫醚键的环肽化合物或其衍生物或者其立体异构体或者其药学上可接受的盐作为放射性药物前体在生物体内显影示踪的应用。
本发明还提供了一种预防和/或治疗肿瘤的药物。
具体技术方案如下：
一种预防和/或治疗肿瘤的药物，由活性成分和药物中可接受的辅料制备而成，所述活性成分包括有上述的含有三硫醚键的环肽化合物或其衍生物或者其立体异构体或者其药学上可接受的盐。
本发明还提供了一种放射性药物。
具体技术方案如下：
一种诊断和/或治疗肿瘤的放射性药物，由包括放射性核素及其标记化合物的组分制备而成，所述标记化合物包括有上述的含有三硫醚键的环肽化合物或其衍生物或者其立体异构体或者其药学上可接受的盐。
在其中一些实施例中，所述放射性药物为诊断肿瘤的放射性药物，所述放射性核素选自：18F，99mTc，67Ga，68Ga，89Zr，111In，203Pb。
在其中一些实施例中，所述放射性药物为治疗肿瘤的放射性药物，所述放射性核素选自：188Re，177Lu，90Y，109Pd,153Sm。
与现有技术相比，本发明具有以下有益效果：
本发明首次创造性地将三硫醚键结构引入多肽骨架中，制备得到了一类新的含有三硫醚键的环肽化合物或其衍生物。本发明的含有三硫醚键的环肽化合物或其衍生物能够靶向内分泌肿瘤，能够在放射性核素标记后用于体内成像或者核素治疗，具有作为放射性药物前体在生物体内显影示踪和肿瘤治疗的作用，并且特异性好、毒性小、安全性高，具备一定的放射性药物成药潜力。本发明通过药代动力学实验、动物实验等具体实例证明了该类化合物显影示踪的作用及其成药潜力，这类化合物在生物医药领域具有重要的潜在应用价值。
本发明的含有三硫醚键的环肽化合物或其衍生物的合成方法能够获得高纯度的式(II)所示含有三硫醚键的环肽化合物或其衍生物，最终制备的产品纯度达到98％及以上，并且该方法操作简单，合成周期短，成本低，适于大规模生产。
附图说明
图1为代表性硫源化合物硫代邻苯二甲酰亚胺的核磁谱图。
图2为代表性硫源化合物硫代邻苯二甲酰亚胺的电镜形貌图。
图3为实施例1制备的含三硫醚键的环肽化合物SP17的核磁谱图。
图4为实施例1制备的含三硫醚键的环肽化合物SP17的HPLC谱图。
图5为实施例1制备的含三硫醚键的环肽化合物SP17的MS谱图。
图6为实施例1制备的含三硫醚键的环肽化合物DOTA-PEG-TATE的HPLC谱图。
图7为实施例1制备的含三硫醚键的环肽化合物DOTA-PEG-TATE的MS谱图。
图8为实施例1制备的含三硫醚键的环肽化合物DOTA-BetaAla-TATE的HPLC谱图。
图9为实施例1制备的含三硫醚键的环肽化合物DOTA-BetaAla-TATE的MS谱图。
图10为实施例1制备的含三硫醚键的环肽化合物DOTA-AHX-TATE的HPLC谱图。
图11为实施例1制备的含三硫醚键的环肽化合物DOTA-AHX-TATE的MS谱图。
图12为实施例1制备的含三硫醚键的环肽化合物SP18的核磁谱图。
图13为实施例1制备的含三硫醚键的环肽化合物SP19的核磁谱图。
图14为实施例1制备的含三硫醚键的环肽化合物SP18的MS谱图。
图15为实施例1制备的含三硫醚键的环肽化合物SP19的MS谱图。
图16为实施例3的含有三硫醚键的环肽化合物SP17经放射性核素68Ga标记后的HPLC谱图。
图17为实施例3的含有三硫醚键的环肽化合物SP18经放射性核素68Ga标记后的HPLC谱图。
图18为实施例3的含有三硫醚键的环肽化合物SP19经放射性核素68Ga标记后的HPLC谱图。
图19为实施例3的含有三硫醚键的环肽化合物SP17经放射性核素68Ga标记后在荷瘤小鼠中的PET-CT(注射后1小时)图。
图20为实施例3的含有三硫醚键的环肽化合物SP18经放射性核素68Ga标记后在荷瘤小鼠中的PET-CT(注射后1小时)图。
图21为实施例3的含有三硫醚键的环肽化合物SP19经放射性核素68Ga标记后在荷瘤小鼠中的PET-CT(注射后1小时)图。
图22为实施例4的含有三硫醚键的环肽化合物SP17经放射性核素68Ga标记后在荷瘤小鼠不同脏器中的分布数据。
图23为实施例5的含有三硫醚键的环肽化合物SP17经放射性核素177Lu标记后对荷瘤小鼠的肿瘤治疗效果图。
具体实施方式
除非另有定义，本发明所使用的所有的技术和科学术语与属于本发明的技术领域的技术人员通常理解的含义相同。本发明的说明书中所使用的术语只是为了描述具体的实施例的目的，不用于限制本发明。
本发明的术语“包括”和“具有”以及它们任何变形，意图在于覆盖不排他的包含。例如包含了一系列步骤的过程、方法、装置、产品或设备没有限定于已列出的步骤或模块，而是可选地还包括没有列出的步骤，或可选地还包括对于这些过程、方法、产品或设备固有的其它步骤。
在本发明中提及的“多个”是指两个或两个以上。“和/或”，描述关联对象的关联关系，表示可以存在三种关系，例如，A和/或B，可以表示：单独存在A，同时存在A和B，单独存在B这三种情况。字符“/”一般表示前后关联对象是一种“或”的关系。
本发明提供了一种含有三硫醚键的环肽化合物或其衍生物或者其立体异构体或者其药学上可接受的盐，其结构式中包括式(I)所示的母核结构以及可与放射性核素配位标记的配体，
Figure BDA0002958744500000141
在其中一些实施方案中，所述的含有三硫醚键的环肽化合物或其衍生物具有如下式(II)所示结构：
Figure BDA0002958744500000142
其中，R1、R2、R3、R4和R5分别独立地选自：H、氨基酸的侧链；
R6选自：H、氨基酸失去氨基后的残基、羟基取代的C1-C6烷基；
L为
Figure BDA0002958744500000151
其中，R选自：取代或未取代的亚烷基、取代或未取代的含氧亚烷基、取代或未取代的含硫亚烷基；
Q为可与放射性核素配位标记的配体；
n选自：0、1以上的正整数，优选为0-10，更优选为0-5。
术语“氨基酸残基”是指组成多肽的氨基酸在形成肽键时氨基酸失水后剩余的部分。组成多肽的氨基酸在相互结合时，由于其部分基团参与了肽键的形成而失去一分子水，因此把多肽中的氨基酸单位称为氨基酸残基。
本发明用R1、R2、R3、R4和R5表示氨基酸的侧链，所述侧链是指氨基酸中的碳原子上的取代基(例如2位碳上的取代基)，例如丙氨酸(Ala)和缬氨酸(Val)的结构式分别如下：
Figure BDA0002958744500000152
则丙氨酸(Ala)的侧链是甲基，缬氨酸(Val)的侧链是异丙基；常见氨基酸(偶联有保护基的氨基酸)的结构式见下表1所示，从表1可知各种氨基酸的侧链取代基，例如：甲基、正丙基、异丙基、2-甲基丙基、正丁基、异丁基、苯基甲基、对苯酚基甲基、3-吲哚甲基、1-羟基乙基、羟甲基、巯基甲基、2-甲硫基乙基、氨基酰基甲基、氨基酰基乙基、羧基甲基、羧基乙基、4-氨基丁基、3-胍基丙基、咪唑基甲基。如果，侧链上含有氨基、羧基、羟基、巯基等干扰合成的基团，为防止氨基、羧基、羟基、巯基等基团在制备目标产物过程中发生反应，生成杂质，则对这些基团进行保护，对于本发明中需要保护侧链的氨基酸来说，本领域技术人员公知其侧链结构以及知晓采用常用的保护基(例如：tBu,Boc,Allyl,Alloc,Pbf,Fmoc,Cbz等)来保护氨基酸侧链上的氨基、羧基、羟基、巯基等基团，此时，用R1、R2、R3、R4和R5表示氨基酸的侧链也包括用保护基保护的侧链。例如，Fmoc-L-Cys(Trt)-OH是指在N端偶联有Fmoc保护基，在2位碳上的取代基甲巯基处偶联有Trt保护基的L-Cys，因此，其侧链是指-CH2S-Trt。
术语“烷基”是指包括具有特定碳原子数目的支链的和直链的饱和脂肪烃基。例如，“C1-C6烷基”中“C1-C6”的定义包括以直链或支链排列的具有1、2、3、4、5或6个碳原子的基团。例如，“C1-C6烷基”具体包括甲基、乙基、正丙基、异丙基、正丁基、叔丁基、异丁基、戊基、己基。
术语“环烷基”是指具有特定碳原子数目的单环饱和脂肪烃基。例如“环烷基”包括环丙基、环丁基、环戊基或环己基等。
术语“烷氧基”是指具有-O-烷基结构的基团，如-OCH3、-OCH2CH3、-OCH2CH2CH3、-O-CH2CH(CH3)2、-OCH2CH2CH2CH3、-O-CH(CH3)2等。
术语“烷硫基”是指具有-S-烷基结构的基团，如-SCH3、-SCH2CH3、-SCH2CH2CH3、-S-CH2CH(CH3)2、-SCH2CH2CH2CH3、-S-CH(CH3)2等。
术语“亚烷基”是指在“烷基”基础上少一个氢的基团，例如，-CH2-、-CH2CH2-、-CH2CH2CH2-、-CH2CH2CH2CH2-等。
术语“含氧亚烷基”是指“烷基”中的主链上的C原子被O原子取代的基团，如-CH2-O-CH2-、-CH2-O-CH2CH2-、-CH2CH2-O-CH2CH2-、-CH2CH2-O-CH2CH2-O-CH2CH2-、-CH2CH2-O-CH2CH2-O-CH2-等。
术语“含硫亚烷基”是指“烷基”中的主链上的C原子被S原子取代的基团，如-CH2-S-CH2-、-CH2-S-CH2CH2-、-CH2CH2-S-CH2CH2-、-CH2CH2-S-CH2CH2-S-CH2CH2-、-CH2CH2-S-CH2CH2-S-CH2-等。
术语“杂芳基”是指含有1个或多个选自O、N或S的杂原子的芳香环，本发明范围内的杂芳基包括但不限于：喹啉基、吡唑基、吡咯基、噻吩基、呋喃基、吡啶基、嘧啶基、吡嗪基、三氮唑基、咪唑基、噁唑基、异噁唑基、哒嗪基；“杂芳基”也理解为包括任何含有氮的杂芳基的N-氧化物衍生物。杂环取代基的连接可通过碳原子或通过杂原子实现。
正如本领域技术人员所理解的，本文中所用“卤素”(“halo”)或“卤”意指氯、氟、溴和碘。
本发明提供的含有三硫醚键的环肽化合物或其衍生物可以通过本领域常规的制备方法制备得到。
在其中一个实施方案中，本发明提供的含有三硫醚键的环肽化合物或其衍生物的合成方法，包括如下步骤：
步骤A：将氨基酸和树脂以固相合成方法制备得到式(III)所示的多肽树脂；
Figure BDA0002958744500000171
其中，R为巯基保护基；
步骤B：脱去式(III)所示的多肽树脂中的巯基保护基，得到式(IV)所示的含有两个巯基的多肽树脂；
Figure BDA0002958744500000172
步骤C：式(IV)所示的含有两个巯基的多肽树脂中的巯基与硫源进行关环反应，得到式(V)所示的含有三硫醚键的环肽树脂；
Figure BDA0002958744500000173
Figure BDA0002958744500000181
步骤D：将式(V)所示的含有三硫醚键的环肽树脂进行收缩处理，然后经剪切液剪切，过滤除去树脂，将滤液纯化后即得式(II)所示的含有三硫醚键的环肽化合物或其衍生物；
Figure BDA0002958744500000182
在另一实施方案中，本发明提供的含有三硫醚键的环肽化合物或其衍生物的合成方法，包括如下步骤：
步骤a：将氨基酸和树脂以固相合成方法制备得到式(III)所示的多肽树脂；
Figure BDA0002958744500000183
其中，R为巯基保护基；
步骤b：将式(III)所示的多肽树脂进行收缩处理，然后经剪切液剪切，脱去式(III)所示的多肽树脂中的巯基保护基和树脂，过滤除去树脂，滤液用乙醚沉淀，收集沉淀，得式VI所示的含有两个巯基的多肽；
Figure BDA0002958744500000191
步骤c：式(VI)所示的含有两个巯基的多肽中的巯基与硫源进行关环反应，得到式(II)所示的含有三硫醚键的环肽化合物或其衍生物；
Figure BDA0002958744500000192
本发明所用术语“硫源”是指能够提供硫原子以取代巯基氢的化合物，在本发明中更具体地是指在硫化关环形成三硫醚的反应中提供硫原子的关键中间体，例如包括但不限于如下化合物：
Figure BDA0002958744500000193
半胱氨酸(Cys)是本发明的含有三硫醚键的环肽化合物的合成方法中的必要氨基酸，其侧链甲巯基的保护基可为Trt、Mmt、StBu或乙酰氨基甲基等，通过筛选，优先使用Trt作为优选保护基。
本发明所述的含有三硫醚键的环肽化合物的合成方法可采用液相关环或者固相关环，以形成分子内三硫醚键，固相关环具体为：多肽树脂Cys巯基与硫源反应一步直接关环，采用室温固相反应条件，溶剂为NMP或DMF或DCM或乙腈或甲醇，按反应纯度和实际情况考虑，一般选择顺序为NMP>DMF>DCM和乙腈>甲醇。以DMF或者NMP为溶剂相比于DCM等溶剂，反应产物的纯度更高，收率更高，另外DCM在固相鼓氮气的条件下易挥发，相比于DMF和NMP不适合作为固相反应溶剂使用；NMP和DMF的性质及作用相似，但是DMF更廉价易得，因此最优选的溶剂为DMF。为减慢反应速率以减少副产物的生成，经过筛选，该反应以DMF为溶剂，滴加少量DCM助溶，体系中的部分固体会逐步溶解并缓慢反应成环，从而可以高收率地获得分子内三硫醚产物，DCM和DMF的最优配比为体积比为1：99。其中，滴加微量DCM是为了助溶，即使不加DCM，只有DMF也能较好的反应。
本发明所述的含有三硫醚键的环肽化合物的合成方法可以兼容多种树脂，主要的树脂选择为MBHA树脂、CTC树脂或Wang树脂，其区别在于多肽的C端差异，可根据实际情况选择。其中树脂取代度具体规格多由生产厂家自定，为本领域技术人员所公知，本发明优选取代度约为0.5mmol/g的树脂。
本发明所述的含有三硫醚键的环肽化合物的合成方法中，将氨基酸和树脂以固相合成方法制备得到式(III)所示的多肽树脂具体包括如下步骤：
步骤1：将所述树脂加入固相反应柱中，用溶剂进行溶胀处理；
步骤2：在氮气与惰性气体的保护下，将N端用Fmoc保护的氨基酸与步骤1处理后的树脂反应，得到树脂上连接有一个氨基酸的化合物，记为化合物Fmoc-AA-Resin；
步骤3：在所述化合物Fmoc-AA-Resin中加入脱保护试剂，脱去9-笏甲氧羰基保护基，所得产物记为化合物AA-Resin；
步骤4：将另一N端用Fmoc保护的氨基酸用偶联剂在有机溶剂中进行活化，然后将所得活化后的氨基酸混合溶液加入到所述化合物AA-Resin中，在氮气与惰性气体的保护下反应，所得产物记为化合物Fmoc-AA2-AA1-Resin；
循环步骤3和步骤4的操作，按多肽的序列设计依次进行氨基酸的酰胺键偶联反应，得到式(II)所示的多肽树脂。
该方法是基于固相合成，因此步骤1中对树脂的活化处理尤为关键，具体为：将树脂和DCM加入固相反应柱进行溶胀处理，若采用MBHA树脂，则用吗啉或哌啶的DMF或NMP溶液搅拌树脂，洗涤树脂后加入经缩合剂和DIEA活化的氨基酸的DMF或NMP溶液与树脂搅拌反应；若使用Wang树脂，则溶胀洗涤后加入经缩合剂与DIEA活化的氨基酸DMF或NMP溶液进行偶联反应；若使用CTC树脂，则DCM溶胀后氨基酸羧基端不活化，直接使用氨基酸在DIEA催化下在DCM中与树脂搅拌反应，之后用含甲醇与DIEA的DCM溶液封尾，氨基酸与树脂的偶联反应需要重复2遍。
基于固相合成的方法中，去除保护基时宜采用温和条件，以确保多肽在树脂上不会因脱保护操作而破坏或影响到其他氨基酸的保护基。9-笏甲氧羰基保护基作为本发明所述的含有三硫醚键的环肽化合物的固相合成方法中的N端保护基，保证其有效脱除是本发明合成方法杂质控制的关键之一。脱去9-笏甲氧羰基保护基团的脱保护试剂选择吗啉或哌啶的DMF或NMP溶液，若使用吗啉的DMF或NMP溶液，则体积比吗啉：DMF或NMP优选为1:1，若使用哌啶的DMF或NMP溶液，则体积比哌啶：DMF或NMP优选为1:10。Trt是本发明Cys巯基的优选保护基，Trt的脱除方式采取温和剪切液洗涤，该过程伴随明显的颜色变化，直至溶液颜色由无色变黄再变为无色，即反应结束。温和剪切液优选TFA：TIS：DCM的体积比为3:5:92的溶液。
在氨基酸进行酰胺键缩合的反应步骤中(步骤4)，优选的偶联剂为HATU/DIEA偶联体系，根据实际情况也可选择HCTU/DIEA偶联体系，或HOBT/DIC双体系偶联剂，或PyBOP/HOBt双体系偶联剂，或TBTU/HOBt双体系偶联剂。活化时的有机溶剂一般考虑选择NMP、DMF或者DCM，其优选顺序为NMP>DMF>DCM。
本发明还提供了所述含有三硫醚键的环肽化合物或其衍生物或者其立体异构体或者其药学上可接受的盐在抑制神经内分泌肿瘤生长、在生物体内显影示踪方面的用途。将所述含有三硫醚键的环肽化合物或其衍生物或者其立体异构体或者其药学上可接受的盐和药物中可接受的辅料即可制备成预防和/或治疗神经内分泌肿瘤的药物。将所述含有三硫醚键的环肽化合物或其衍生物用放射性核素标记后，可以用于体内成像，可以制备成放射性药物。本发明提供的含有三硫醚键的环肽化合物或其衍生物具有很强的靶向特异性，可以特异性富集在一肿瘤组织或者一些脏器中，因而所得放射性药物可以用于体内成像，或者用于肿瘤的诊断和/或治疗。所述放射性核素包括但不限于：18F，99mTc，67Ga,68Ga，89Zr，90Y，109Pd，111In，153Sm,177Lu，188Re,203Pb。其中，通过含配体HYNIC的化合物与放射性核素99mTc进行组合得到的化合物可以用于SPECT成像；通过含配体NOTA的化合物与放射性核素18F组合得到的化合物可以用于PET成像；通过含配体DOTA或者NOTA的化合物与放射性核素68Ga进行组合得到的化合物可以用于PET成像；通过含配体DOTA的化合物与放射性核素177Lu组合得到的化合物可以用于靶向核素治疗神经内分泌肿瘤；通过含配体DTPA的化合物与放射性核素111In组合得到的化合物可以用于SPECT成像；通过含配体DOTA的化合物与放射性核素90Y组合得到的化合物可以用于靶向核素治疗神经内分泌肿瘤。
在本发明具体实施方式中，所用到的各种常用化学试剂和实验材料，均为市售产品，所有偶联有保护基的氨基酸均可通过市售获得，本发明中的偶联有保护基的氨基酸购自于吉尔生化有限公司和南京肽业有限公司，所用CTC树脂购自南京肽业有限公司。其中，本发明具体合成过程中应用的一般性氨基酸的结构及反应添加优选当量比例见表1。
表1氨基酸结构、缩写及添加量
Figure BDA0002958744500000221
Figure BDA0002958744500000231
Figure BDA0002958744500000241
Figure BDA0002958744500000251
注：以上添加量的合成规模为0.25mmol，氨基酸物质的量通过(0.5mmol/g Resin×0.5g×*5eq.)计算得到。缩合试剂储备液的摩尔浓度为0.38mol/L。
0.0152mol×M(缩合试剂)溶于40ml DMF或NMP，得0.38mol/L的缩合试剂储备液。例：6.288g HCTU溶于40毫升DMF中，得0.38mol/L的HCTU/DMF储备液。
本发明涉及的英文及缩写的中文含义如下：
Figure BDA0002958744500000252
Figure BDA0002958744500000261
以下为具体实施例。其中，没有具体注明反应温度的反应均指在室温下反应，室温的温度范围可以是10-35℃；所述“用DMF和DCM交替洗涤树脂10遍”的溶剂用量为5-20ml，更具体地为每遍15ml DCM或者15mlDMF。
实施例1放射性药物前体化合物的制备
1、DOTA-TATE(SP17)
Figure BDA0002958744500000262
具体制备方法如下：
(1)称取取代度为0.5mmol/g的Wang树脂2g(合成规模1mmol)，加入到固相反应柱中，用DCM溶胀两遍，每遍15ml DCM，30分钟。
(2)按照树脂取代(官能团)与化合物物质的量比例为1：5:4.8分别称取Fmoc-Thr(tBu)-OH 1.99g(5mmol)和HATU 1.83g(4.8mmol)，用8ml NMP溶解混合后加入4ml DIEA(23mmol)活化。然后将活化的Thr氨基酸混合溶液加入到固相反应柱中，在氮气保护下反应2小时。该反应重复反应两遍，两次反应间隙用DMF和DCM交替洗涤树脂10遍。反应完成后用DMF和DCM交替洗涤树脂10遍。
(3)用DMF和DCM交替洗涤树脂10遍后，加入体积分数为50％的吗啉/NMP溶液20ml，在氮气的保护下反应2小时以脱去9-笏甲氧羰基保护基，重复反应两遍，两次反应的间隙用DCM和DMF交替洗涤树脂10遍。
(4)上述步骤完成后，用DMF和DCM交替洗涤树脂10遍。称取Fmoc-Cys(Trt)-OH2.93g(5mmol)和HATU 1.83g(4.8mmol)，用8ml NMP溶解混合后加入4ml DIEA活化。然后将活化的Cys氨基酸混合溶液加入到固相反应柱中，在氮气保护下反应2小时。该反应重复反应两遍，两次反应间隙用DCM和DMF交替洗涤树脂10遍。
(5)用DMF和DCM交替洗涤树脂10遍后，加入体积分数为50％的吗啉/NMP溶液20ml，在氮气的保护下反应2小时以脱去9-笏甲氧羰基保护基，重复反应两遍，两次反应的间隙用DCM和DMF交替洗涤树脂10遍。
(6)上述步骤完成后，用DMF和DCM交替洗涤树脂10遍。称取Fmoc-Thr(tBu)-OH1.99g(5mmol)和HATU 1.83g(4.8mmol)，用8ml NMP溶解混合后加入4ml DIEA活化。然后将活化的Thr氨基酸混合溶液加入到固相反应柱中，在氮气保护下反应2小时。该反应重复反应两遍，两次反应间隙用DCM和DMF交替洗涤树脂10遍。
(7)用DMF和DCM交替洗涤树脂10遍后，加入体积分数为50％的吗啉/NMP溶液20ml，在氮气的保护下反应2小时以脱去9-笏甲氧羰基保护基，重复反应两遍，两次反应的间隙用DCM和DMF交替洗涤树脂10遍。
(8)上述步骤完成后，用DMF和DCM交替洗涤树脂10遍。称取Fmoc-Lys(Boc)-OH2.345g(5mmol)和HATU 1.83g(4.8mmol)，用8ml NMP溶解混合后加入4ml DIEA活化。然后将活化的Lys氨基酸混合溶液加入到固相反应柱中，在氮气保护下反应2小时。该反应重复反应两遍，两次反应间隙用DCM和DMF交替洗涤树脂10遍。
(9)用DMF和DCM交替洗涤树脂10遍后，加入体积分数为50％的吗啉/NMP溶液20ml，在氮气的保护下反应2小时以脱去9-笏甲氧羰基保护基，重复反应两遍，两次反应的间隙用DCM和DMF交替洗涤树脂10遍。
(10)上述步骤完成后，用DMF和DCM交替洗涤树脂10遍。称取Fmoc-Trp(Boc)-OH(其α碳手性是D型氨基酸)2.635g(5mmol)和HATU 1.83g(4.8mmol)，用8ml NMP溶解混合后加入4ml DIEA活化。然后将活化的Trp氨基酸混合溶液加入到固相反应柱中，在氮气保护下反应2小时。该反应重复反应两遍，两次反应间隙用DCM和DMF交替洗涤树脂10遍。
(11)用DMF和DCM交替洗涤树脂10遍后，加入体积分数为50％的吗啉/NMP溶液20ml，在氮气的保护下反应2小时以脱去9-笏甲氧羰基保护基，重复反应两遍，两次反应的间隙用DCM和DMF交替洗涤树脂10遍。
(12)上述步骤完成后，用DMF和DCM交替洗涤树脂10遍。称取Fmoc-Tyr(tBu)-OH2.3g(5mmol)和HATU 1.83g(4.8mmol)，用8ml NMP溶解混合后加入4ml DIEA活化。然后将活化的Tyr氨基酸混合溶液加入到固相反应柱中，在氮气保护下反应2小时。该反应重复反应两遍，两次反应间隙用DCM和DMF交替洗涤树脂10遍。
(13)用DMF和DCM交替洗涤树脂10遍后，加入体积分数为50％的吗啉/NMP溶液20ml，在氮气的保护下反应2小时以脱去9-笏甲氧羰基保护基，重复反应两遍，两次反应的间隙用DCM和DMF交替洗涤树脂10遍。
(14)上述步骤完成后，用DMF和DCM交替洗涤树脂10遍。称取Fmoc-Cys(Trt)-OH2.93g(5mmol)和HATU 1.83g(4.8mmol)，用8ml NMP溶解混合后加入4ml DIEA活化。然后将活化的Cys氨基酸混合溶液加入到固相反应柱中，在氮气保护下反应2小时。该反应重复反应两遍，两次反应间隙用DCM和DMF交替洗涤树脂10遍。
(15)用DMF和DCM交替洗涤树脂10遍后，加入体积分数为50％的吗啉/NMP溶液20ml，在氮气的保护下反应2小时以脱去9-笏甲氧羰基保护基，重复反应两遍，两次反应的间隙用DCM和DMF交替洗涤树脂10遍。
(16)上述步骤完成后，用DMF和DCM交替洗涤树脂10遍。称取Fmoc-D-Phe-OH1.935g(5mmol)和HATU 1.83g(4.8mmol)，用8ml NMP溶解混合后加入4ml DIEA活化。然后将活化的Phe氨基酸混合溶液加入到固相反应柱中，在氮气保护下反应2小时。该反应重复反应两遍，两次反应间隙用DCM和DMF交替洗涤树脂10遍。
(17)用DMF和DCM交替洗涤树脂10遍后，加入体积分数为50％的吗啉/NMP溶液20ml，在氮气的保护下反应2小时以脱去9-笏甲氧羰基保护基，重复反应两遍，两次反应的间隙用DCM和DMF交替洗涤树脂10遍。
(18)上述步骤完成后，用DMF和DCM交替洗涤树脂10遍。称取“1,4,7,10-四氮杂环十二烷-1,4,7,10-四乙酸三叔丁酯(CAS＝137076-54-1)”1.15g(2mmol)，HCTU 0.8g(1.9mmol)，用8ml DMF溶解后，加入DIEA 4ml预活化，得预活化溶液。待上述预活化溶液充分溶解后，将上述溶液加入固相反应柱中反应2小时，上述反应重复反应两遍，两次反应间隙用DCM和DMF交替洗涤10遍。
(19)加入甲醇进行树脂收缩，然后用氮气流吹干树脂，得多肽树脂1.8g，暂存备用。
(20)制备硫源硫代邻苯二甲酰亚胺：
Figure BDA0002958744500000291
主要试剂为邻苯二甲酰亚胺和一氯化硫。将邻苯二甲酰亚胺(7.36g，0.05摩尔)溶解于无水DMF(40ml，干燥)中，并在室温下(无水条件下)将一氯化硫(S2Cl2，3.4g，0.025摩尔)分若干份滴加至溶液中。20分钟后出现沉淀。黄色混合物在室温下搅拌20小时，然后通过过滤收集无色结晶固体，洗涤过滤后即为产物粗品。通过TLC点板结合核磁和LC-MS进行监测，若硫代邻苯二甲酰亚胺纯度达95％以上则可直接使用，若纯度在80％以下则需要进一步用柱色谱或重结晶进行纯化；制备量较少时，可以选择DCM，MeOH为洗脱剂过柱子；制备量较多时可以直接在DMF中过滤，后处理用DMF洗涤滤饼，得微黄色固体。对本实施例所得产物粗品进行以下后处理：将所得产物粗品用DCM或氯仿溶解，加入部分硅胶旋蒸，使样品负载在硅胶上，然后湿法装硅胶柱，干法上样，用DCM和MeOH为流动相以体积比20:1，10:1，5:1梯度淋洗洗脱样品，收集洗脱溶液，旋蒸。用薄层色谱结合LC-MS初步监测产物，用核磁共振氢谱进一步监测产物。然后对于纯化后的产物，进一步油泵抽2小时，抽干成粉末，得到硫源硫代邻苯二甲酰亚胺12.9g，收率为85％，纯度为96％。其核磁谱图如图1所示，并且具有图2所示的形貌，将产物粗品后处理至具有图2所示的形貌时，具备较好的反应活性。
(21)将步骤(19)得到的多肽树脂，在固相反应柱中用15ml DCM溶胀30分钟后，用TFA：TIS：DCM的体积比为3:5:92的温和剪切液重复洗涤(每遍10mL)多肽树脂以去除Cys巯基的Trt保护基，该过程伴随明显颜色变化，直至溶液颜色由无色变黄再变为无色，即认为保护基已去除完毕。之后用DCM和DMF交替洗涤10遍。
(22)将步骤(20)合成的硫源硫代邻苯二甲酰亚胺0.65g(2mmol)微溶于体积比为1：99的DCM和DMF的混合溶剂(5mL)中，加入固相反应柱中，在氮气保护下与多肽进行环化反应，重复反应三遍，每遍两小时。为减慢反应速率，经过筛选该反应以DMF为溶剂，滴加少量DCM助溶，体系中的部分固体会逐步溶解并缓慢反应成环。反应结束后用LC-MS监测。
(23)用甲醇收缩树脂，随后用氮气吹干树脂，称重，得到环化后的多肽树脂2g。
(24)将TFA：TIS：H2O为95：2.5:2.5(体积比)的混合剪切液10mL加入固相反应柱将中，与上述环化后的多肽树脂反应2小时，过滤除去树脂。滤液适当抽走后用乙醚沉淀，离心收集沉淀，即为含三硫醚键的环肽粗品。
(25)将上述含有三硫醚键的环肽粗品用5％浓度(体积分数)的乙腈水溶液溶解，用0.2微米规格的滤膜过滤后采用RP-HPLC系统进行分离纯化，分离纯化的条件如下：色谱柱为反相C18柱，以水为A泵流动相，以乙腈为B泵流动相，以B泵浓度按体积比10％-98％梯度淋洗，时间设置为30分钟从10％增至98％，收集目的馏分，冷冻干燥，得纯度为98％的精肽46mg，总收率为3.2％。并用LC-MS进行进一步监测，相关谱图如图3-图5所示。
2、DOTA-PEG-TATE
Figure BDA0002958744500000301
当n为1时，其结构式具体为：
Figure BDA0002958744500000311
具体制备方法如下：
(1)称取取代度为0.5mmol/g的CTC树脂2g(合成规模1mmol)，加入到固相反应柱中，用DCM溶胀两遍，每遍15ml DCM，30分钟。
(2)按照树脂取代(官能团)与化合物物质的量比例为1：5称取Fmoc-Thr(tBu)-OH1.99g(5mmol)，用8ml DCM溶解后加入DIEA 4ml活化。然后将活化的Thr氨基酸混合溶液加入到固相反应柱中，在氮气保护下反应2小时。该反应重复反应两遍，两次反应间隙用15mlDCM洗涤树脂10遍。反应完成后用15ml DCM洗涤树脂10遍，再用含有甲醇和DIEA各2ml的15ml DCM溶液对树脂进行封尾处理。
(3)用DMF和DCM交替洗涤树脂10遍后，加入体积分数为50％的吗啉/NMP溶液20ml，在氮气的保护下反应2小时以脱去9-笏甲氧羰基保护基，重复反应两遍，两次反应的间隙用DCM和DMF交替洗涤树脂10遍。
(4)上述步骤完成后，用DMF和DCM交替洗涤树脂10遍。称取Fmoc-Cys(Trt)-OH2.93g(5mmol)和HATU 1.83g(4.8mmol)，用8ml NMP溶解混合后加入4ml DIEA活化。然后将活化的Cys氨基酸混合溶液加入到固相反应柱中，在氮气保护下反应2小时。该反应重复反应两遍，两次反应间隙用DCM和DMF交替洗涤树脂10遍。
(5)用DMF和DCM交替洗涤树脂10遍后，加入体积分数为50％的吗啉/NMP溶液20ml，在氮气的保护下反应2小时以脱去9-笏甲氧羰基保护基，重复反应两遍，两次反应的间隙用DCM和DMF交替洗涤树脂10遍。
(6)上述步骤完成后，用DMF和DCM交替洗涤树脂10遍。称取Fmoc-Thr(tBu)-OH1.99g(5mmol)和HATU 1.83g(4.8mmol)，用8ml NMP溶解混合后加入4ml DIEA活化。然后将活化的Thr氨基酸混合溶液加入到固相反应柱中，在氮气保护下反应2小时。该反应重复反应两遍，两次反应间隙用DCM和DMF交替洗涤树脂10遍。
(7)用DMF和DCM交替洗涤树脂10遍后，加入体积分数为50％的吗啉/NMP溶液20ml，在氮气的保护下反应2小时以脱去9-笏甲氧羰基保护基，重复反应两遍，两次反应的间隙用DCM和DMF交替洗涤树脂10遍。
(8)上述步骤完成后，用DMF和DCM交替洗涤树脂10遍。称取Fmoc-Lys(Boc)-OH2.345g(5mmol)和HATU 1.83g(4.8mmol)，用8ml NMP溶解混合后加入4ml DIEA活化。然后将活化的Lys氨基酸混合溶液加入到固相反应柱中，在氮气保护下反应2小时。该反应重复反应两遍，两次反应间隙用DCM和DMF交替洗涤树脂10遍。
(9)用DMF和DCM交替洗涤树脂10遍后，加入体积分数为50％的吗啉/NMP溶液20ml，在氮气的保护下反应2小时以脱去9-笏甲氧羰基保护基，重复反应两遍，两次反应的间隙用DCM和DMF交替洗涤树脂10遍。
(10)上述步骤完成后，用DMF和DCM交替洗涤树脂10遍。称取Fmoc-Trp(Boc)-OH(其α碳手性是D型氨基酸)2.635g(5mmol)和HATU 1.83g(4.8mmol)，用8ml NMP溶解混合后加入4ml DIEA活化。然后将活化的Trp氨基酸混合溶液加入到固相反应柱中，在氮气保护下反应2小时。该反应重复反应两遍，两次反应间隙用DCM和DMF交替洗涤树脂10遍。
(11)用DMF和DCM交替洗涤树脂10遍后，加入体积分数为50％的吗啉/NMP溶液20ml，在氮气的保护下反应2小时以脱去9-笏甲氧羰基保护基，重复反应两遍，两次反应的间隙用DCM和DMF交替洗涤树脂10遍。
(12)上述步骤完成后，用DMF和DCM交替洗涤树脂10遍。称取Fmoc-Tyr(tBu)-OH2.3g(5mmol)和HATU 1.83g(4.8mmol)，用8ml NMP溶解混合后加入4ml DIEA活化。然后将活化的Tyr氨基酸混合溶液加入到固相反应柱中，在氮气保护下反应2小时。该反应重复反应两遍，两次反应间隙用DCM和DMF交替洗涤树脂10遍。
(13)用DMF和DCM交替洗涤树脂10遍后，加入体积分数为50％的吗啉/NMP溶液20ml，在氮气的保护下反应2小时以脱去9-笏甲氧羰基保护基，重复反应两遍，两次反应的间隙用DCM和DMF交替洗涤树脂10遍。
(14)上述步骤完成后，用DMF和DCM交替洗涤树脂10遍。称取Fmoc-Cys(Trt)-OH2.93g(5mmol)和HATU 1.83g(4.8mmol)，用8ml NMP溶解混合后加入4ml DIEA活化。然后将活化的Cys氨基酸混合溶液加入到固相反应柱中，在氮气保护下反应2小时。该反应重复反应两遍，两次反应间隙用DCM和DMF交替洗涤树脂10遍。
(15)用DMF和DCM交替洗涤树脂10遍后，加入体积分数为50％的吗啉/NMP溶液20ml，在氮气的保护下反应2小时以脱去9-笏甲氧羰基保护基，重复反应两遍，两次反应的间隙用DCM和DMF交替洗涤树脂10遍。
(16)上述步骤完成后，用DMF和DCM交替洗涤树脂10遍。称取Fmoc-D-Phe-OH1.935g(5mmol)和HATU 1.83g(4.8mmol)，用8ml NMP溶解混合后加入4ml DIEA活化。然后将活化的Phe氨基酸混合溶液加入到固相反应柱中，在氮气保护下反应2小时。该反应重复反应两遍，两次反应间隙用DCM和DMF交替洗涤树脂10遍。
(17)用DMF和DCM交替洗涤树脂10遍后，加入体积分数为50％的吗啉/NMP溶液20ml，在氮气的保护下反应2小时以脱去9-笏甲氧羰基保护基，重复反应两遍，两次反应的间隙用DCM和DMF交替洗涤树脂10遍。
(18)上述步骤完成后，用DMF和DCM交替洗涤树脂10遍。称取Fmoc-PEG-OH 2.00g(5mmol)和HATU 1.83g(4.8mmol)，用8ml NMP溶解混合后加入4ml DIEA活化。然后将活化的PEG混合溶液加入到固相反应柱中，在氮气保护下反应2小时。该反应重复反应两遍，两次反应间隙用DCM和DMF交替洗涤树脂10遍。
(19)用DMF和DCM交替洗涤树脂10遍后，加入体积分数为50％的吗啉/NMP溶液20ml，在氮气的保护下反应2小时以脱去9-笏甲氧羰基保护基，重复反应两遍，两次反应的间隙用DCM和DMF交替洗涤树脂10遍。
(20)上述步骤完成后，用DMF和DCM交替洗涤树脂10遍。称取“1,4,7,10-四氮杂环十二烷-1,4,7,10-四乙酸三叔丁酯(CAS＝137076-54-1)”1.15g(2mmol)，HCTU 0.8g(1.9mmol)，用8ml DMF溶解后，加入DIEA 4ml预活化，得预活化溶液。待上述预活化溶液充分溶解后，将上述溶液加入固相反应柱N端脱除Fmoc基团的树脂中反应2小时，上述反应重复反应两遍，两次反应间隙用DCM和DMF交替洗涤10遍。
(21)加入甲醇进行树脂收缩，然后用氮气流吹干树脂，得多肽树脂2g，暂存备用。
(22)制备硫源硫代邻苯二甲酰亚胺：
Figure BDA0002958744500000341
主要试剂为邻苯二甲酰亚胺和一氯化硫。将邻苯二甲酰亚胺(7.36g，0.05摩尔)溶解于无水DMF(40ml，干燥)中，并在室温下(无水条件下)将一氯化硫(S2Cl2，3.4g，0.025摩尔)分若干份滴加至溶液中。20分钟后出现沉淀。黄色混合物在室温下搅拌20小时，然后通过过滤收集无色结晶固体，洗涤过滤后即为产物粗品。通过TLC点板结合核磁和LC-MS进行监测，若硫代邻苯二甲酰亚胺纯度达95％以上则可直接使用，若纯度在80％以下则需要进一步用柱色谱或重结晶进行纯化；制备量较少时，可以选择DCM，MeOH为洗脱剂过柱子；制备量较多时可以直接在DMF中过滤，后处理用DMF洗涤滤饼，得微黄色固体。对本实施例所得产物粗品进行以下后处理：将所得产物粗品用DCM或氯仿溶解，加入部分硅胶旋蒸，使样品负载在硅胶上，然后湿法装硅胶柱，干法上样，用DCM和MeOH为流动相以体积比20:1，10:1，5:1梯度淋洗洗脱样品，收集洗脱溶液，旋蒸。用薄层色谱结合LC-MS初步监测产物，用核磁共振氢谱进一步监测产物。然后对于纯化后的产物，进一步油泵抽2小时，抽干成粉末，得到硫源硫代邻苯二甲酰亚胺12.9g，收率为85％，纯度为96％。其核磁谱图如图1所示，并且具有图2所示的形貌，将产物粗品后处理至具有图2所示的形貌时，具备较好的反应活性。
(23)将步骤(21)得到的多肽树脂，在固相反应柱中用15ml DCM溶胀30分钟后，用TFA：TIS：DCM的体积比为3:5:92的温和剪切液重复洗涤(每次洗涤剪切液的用量为10ml)多肽树脂以去除Cys巯基的Trt保护基，该过程伴随明显颜色变化，直至溶液颜色由无色变黄再变为无色，即认为保护基已去除完毕。之后用DCM和DMF交替洗涤10遍。
(24)将步骤(22)合成的硫源硫代邻苯二甲酰亚胺0.65g(2mmol)微溶于体积比为1：99的DCM和DMF的混合溶剂(5mL)中，加入固相反应柱中，在氮气保护下与多肽进行环化反应，重复反应三遍，每遍两小时。为减慢反应速率，经过筛选该反应以DMF为溶剂，滴加少量DCM助溶，体系中的部分固体会逐步溶解并缓慢反应成环。反应结束后用LC-MS监测。
(25)用甲醇收缩树脂，随后用氮气吹干树脂，称重，得到环化后的多肽树脂2.1g。
(26)将TFA：TIS：H2O为95：2.5:2.5(体积比)的混合剪切液10mL加入固相反应柱将中，与上述环化后的多肽树脂反应2小时，过滤除去树脂。滤液适当抽走后用乙醚沉淀，离心收集沉淀，即为含三硫醚键的环肽粗品。
(27)将上述含有三硫醚键的环肽粗品用5％浓度(体积分数)的乙腈水溶液溶解，用0.2微米规格的滤膜过滤后采用RP-HPLC系统进行分离纯化，分离纯化的条件如下：色谱柱为反相C18柱，以水为A泵流动相，以乙腈为B泵流动相，以B泵浓度按体积比10％-98％梯度淋洗，时间设置为30分钟从10％增至98％，收集目的馏分，冷冻干燥，得纯度为98％的精肽50mg，总收率为3％。色谱柱为反相C18柱，并用LC-MS进行进一步监测。相关谱图如图6和图7所示。
3、DOTA-BetaAla-TATE
Figure BDA0002958744500000361
其制备方法如下：
步骤(1)-步骤(17)同“1、DOTA-TATE(SP17)”的制备。
步骤(18)：上述步骤完成后，用DMF和DCM交替洗涤树脂10遍。称取Fmoc-β-Ala-OH1.55g(5mmol)和HATU 1.83g(4.8mmol)，用8mL NMP溶解混合后加入4mL DIEA活化。然后将活化的Fmoc-β-Ala-OH混合溶液加入到固相反应柱中，在氮气保护下反应2小时。该反应重复反应两遍，两次反应间隙用DCM和DMF交替洗涤树脂10遍。
步骤(19)-步骤(27)同“2、DOTA-PEG-TATE”的制备。
得到纯度为98％的精肽54mg，总收率为3.5％。相关谱图如图8和图9所示。
4、DOTA-AHX-TATE
Figure BDA0002958744500000362
当n为1时，其结构式具体为：
Figure BDA0002958744500000371
其制备方法如下：
步骤(1)-步骤(17)同“1、DOTA-TATE(SP17)”的制备。
步骤(18)：上述步骤完成后，用DMF和DCM交替洗涤树脂10遍。称取Fmoc-AHX-OH1.76g(5mmol)和HATU 1.83g(4.8mmol)，用8mL NMP溶解混合后加入4mL DIEA活化。然后将活化的取Fmoc-AHX-OH混合溶液加入到固相反应柱中，在氮气保护下反应2小时。该反应重复反应两遍，两次反应间隙用DCM和DMF交替洗涤树脂10遍。
步骤(19)-步骤(27)同“2、DOTA-PEG-TATE”的制备。
得到纯度为98％的精肽49mg，总收率为3.1％。相关谱图如图10和图11所示。
5、DOTA-TOC(SP18)
Figure BDA0002958744500000372
5.1其制备方法如下：
(1)称取取代度为0.5mmol/g的CTC树脂2g(合成规模1mmol)，加入到固相反应柱中，用DCM溶胀两遍，每遍15ml DCM，30分钟。
(2)按照树脂取代(官能团)与化合物物质的量比例为1：5称取(2R,3R)-2-(Fmoc-氨基)-3-叔丁氧基-1-丁醇1.92g(5mmol)，用8mL DCM溶解后加入到固相反应柱中，在氮气保护下反应2小时。该反应重复反应两遍，两次反应间隙用15ml DCM交替洗涤树脂10遍。反应完成后用15ml DCM洗涤树脂10遍，再用含有甲醇和DIEA各2ml的15ml DCM溶液对树脂进行封尾处理。
步骤(3)-步骤(25)同“1、DOTA-TATE(SP17)”的制备。
得到纯度为99％的精肽38mg，总收率为2.9％。相关谱图如图12和图14所示。
5.2或者其制备方法如下：
(1)称取取代度为0.5mmol/g的H-Thr(tBu)-OL-2-Chlorotrityl Resin树脂2g(合成规模1mmol)，加入到固相反应柱中，用DCM溶胀两遍，每遍15ml DCM，30分钟。
(2)称取Fmoc-Cys(Trt)-OH 2.93g(5mmol)和HATU 1.83g(4.8mmol)，用8ml NMP溶解混合后加入4ml DIEA活化。然后将活化的Cys氨基酸混合溶液加入到固相反应柱中，在氮气保护下反应2小时。该反应重复反应两遍，两次反应间隙用DCM和DMF交替洗涤树脂10遍。
(3)用DMF和DCM交替洗涤树脂10遍后，加入体积分数为50％的吗啉/NMP 20ml溶液，在氮气的保护下反应2小时以脱去9-笏甲氧羰基保护基，重复反应两遍，两次反应的间隙用DCM和DMF交替洗涤树脂10遍。
(4)上述步骤完成后，用DMF和DCM交替洗涤树脂10遍。称取Fmoc-Thr(tBu)-OH1.99g(5mmol)和HATU 1.83g(4.8mmol)，用8ml NMP溶解混合后加入4ml DIEA活化。然后将活化的Thr氨基酸混合溶液加入到固相反应柱中，在氮气保护下反应2小时。该反应重复反应两遍，两次反应间隙用DCM和DMF交替洗涤树脂10遍。
(5)用DMF和DCM交替洗涤树脂10遍后，加入体积分数为50％的吗啉/NMP 20ml溶液，在氮气的保护下反应2小时以脱去9-笏甲氧羰基保护基，重复反应两遍，两次反应的间隙用DCM和DMF交替洗涤树脂10遍。
(6)上述步骤完成后，用DMF和DCM交替洗涤树脂10遍。称取Fmoc-Lys(Boc)-OH2.345g(5mmol)和HATU 1.83g(4.8mmol)，用8ml NMP溶解混合后加入4ml DIEA活化。然后将活化的Lys氨基酸混合溶液加入到固相反应柱中，在氮气保护下反应2小时。该反应重复反应两遍，两次反应间隙用DCM和DMF交替洗涤树脂10遍。
(7)用DMF和DCM交替洗涤树脂10遍后，加入体积分数为50％的吗啉/NMP 20ml溶液，在氮气的保护下反应2小时以脱去9-笏甲氧羰基保护基，重复反应两遍，两次反应的间隙用DCM和DMF交替洗涤树脂10遍。
(8)上述步骤完成后，用DMF和DCM交替洗涤树脂10遍。称取Fmoc-Trp(Boc)-OH(其α碳手性是D型氨基酸)2.635g(5mmol)和HATU 1.83g(4.8mmol)，用8ml NMP溶解混合后加入4ml DIEA活化。然后将活化的Trp氨基酸混合溶液加入到固相反应柱中，在氮气保护下反应2小时。该反应重复反应两遍，两次反应间隙用DCM和DMF交替洗涤树脂10遍。
(9)用DMF和DCM交替洗涤树脂10遍后，加入体积分数为50％的吗啉/NMP 20ml溶液，在氮气的保护下反应2小时以脱去9-笏甲氧羰基保护基，重复反应两遍，两次反应的间隙用DCM和DMF交替洗涤树脂10遍。
(10)上述步骤完成后，用DMF和DCM交替洗涤树脂10遍。称取Fmoc-Tyr(tBu)-OH2.3g(5mmol)和HATU 1.83g(4.8mmol)，用8ml NMP溶解混合后加入4ml DIEA活化。然后将活化的Tyr氨基酸混合溶液加入到固相反应柱中，在氮气保护下反应2小时。该反应重复反应两遍，两次反应间隙用DCM和DMF交替洗涤树脂10遍。
(11)用DMF和DCM交替洗涤树脂10遍后，加入体积分数为50％的吗啉/NMP 20ml溶液，在氮气的保护下反应2小时以脱去9-笏甲氧羰基保护基，重复反应两遍，两次反应的间隙用DCM和DMF交替洗涤树脂10遍。
(12)上述步骤完成后，用DMF和DCM交替洗涤树脂10遍。称取Fmoc-Cys(Trt)-OH2.93g(5mmol)和HATU 1.83g(4.8mmol)，用8ml NMP溶解混合后加入4ml DIEA活化。然后将活化的Cys氨基酸混合溶液加入到固相反应柱中，在氮气保护下反应2小时。该反应重复反应两遍，两次反应间隙用DCM和DMF交替洗涤树脂10遍。
(13)用DMF和DCM交替洗涤树脂10遍后，加入体积分数为50％的吗啉/NMP 20ml溶液，在氮气的保护下反应2小时以脱去9-笏甲氧羰基保护基，重复反应两遍，两次反应的间隙用DCM和DMF交替洗涤树脂10遍。
(14)上述步骤完成后，用DMF和DCM交替洗涤树脂10遍。称取Fmoc-D-Phe-OH1.935g(5mmol)和HATU 1.83g(4.8mmol)，用8ml NMP溶解混合后加入4ml DIEA活化。然后将活化的Phe氨基酸混合溶液加入到固相反应柱中，在氮气保护下反应2小时。该反应重复反应两遍，两次反应间隙用DCM和DMF交替洗涤树脂10遍。
(15)用DMF和DCM交替洗涤树脂10遍后，加入体积分数为50％的吗啉/NMP 20ml溶液，在氮气的保护下反应2小时以脱去9-笏甲氧羰基保护基，重复反应两遍，两次反应的间隙用DCM和DMF交替洗涤树脂10遍。
(16)上述步骤完成后，用DMF和DCM交替洗涤树脂10遍。称取“1,4,7,10-四氮杂环十二烷-1,4,7,10-四乙酸三叔丁酯(CAS＝137076-54-1)”1.15g(2mmol)，HCTU 0.8g(1.9mmol)，用8ml DMF溶解后，加入DIEA 4ml预活化，得预活化溶液。待上述预活化溶液充分溶解后，将上述溶液加入固相反应柱中反应2小时，上述反应重复反应两遍，两次反应间隙用DCM和DMF交替洗涤10遍。
(17)加入甲醇进行树脂收缩，然后用氮气流吹干树脂，得多肽树脂2.1g。
(18)将TFA：TIS：H2O为95：2.5:2.5(体积比)的混合剪切液加入固相反应柱将中，与步骤(17)所得多肽树脂反应2小时，过滤除去树脂。滤液适当抽走后用乙醚沉淀，离心收集沉淀，得多肽粗品。
(19)制备硫源硫代邻苯二甲酰亚胺：
Figure BDA0002958744500000401
主要试剂为邻苯二甲酰亚胺和一氯化硫。将邻苯二甲酰亚胺(7.36g，0.05摩尔)溶解于无水DMF(40ml，干燥)中，并在室温下(无水条件下)将一氯化硫(S2Cl2，3.4g，0.025摩尔)分若干份滴加至溶液中。20分钟后出现沉淀。黄色混合物在室温下搅拌20小时，然后通过过滤收集无色结晶固体，洗涤过滤后即为产物粗品。通过TLC点板结合核磁和LC-MS进行监测，若硫代邻苯二甲酰亚胺纯度达95％以上则可直接使用，若纯度在80％以下则需要进一步用柱色谱或重结晶进行纯化；制备量较少时，可以选择DCM，MeOH为洗脱剂过柱子；制备量较多时可以直接在DMF中过滤，后处理用DMF洗涤滤饼，得微黄色固体。对本实施例所得产物粗品进行以下后处理：将所得产物粗品用DCM或氯仿溶解，加入部分硅胶旋蒸，使样品负载在硅胶上，然后湿法装硅胶柱，干法上样，用DCM和MeOH为流动相以体积比20:1，10:1，5:1梯度淋洗洗脱样品，收集洗脱溶液，旋蒸。用薄层色谱结合LC-MS初步监测产物，用核磁共振氢谱进一步监测产物。然后对于纯化后的产物，进一步油泵抽2小时，抽干成粉末，得到硫源硫代邻苯二甲酰亚胺12.9g，收率为85％，纯度为96％。其核磁谱图如图1所示，并且具有图2所示的形貌，将产物粗品后处理至具有图2所示的形貌时，具备较好的反应活性。
(20)将步骤(18)得到的多肽粗品，在体积分数为50％的乙腈水溶液中和步骤(19)制备的硫源硫代邻苯二甲酰亚胺0.65g(2mmol)反应3小时，之后旋干，即为含有三硫醚键的环肽粗品。
(21)将上述含三硫醚键的环肽粗品用5％浓度(体积分数)的乙腈水溶液溶解，用0.2微米规格的滤膜过滤后采用RP-HPLC系统进行分离纯化，分离纯化的条件如下：色谱柱为反相C18柱，以水(含0.1％的冰乙酸)为A泵流动相(需提前超声)，以乙腈为B泵流动相，按体积比5％-98％梯度淋洗。收集目的馏分，冷冻干燥，得纯度为98％的精肽55mg，总收率为3.8％。
以下化合物6-化合物48的制备方法参照以上化合物1-化合物5的制备方法，其中结构式中n的取值范围为1-10之间的正整数。
6、DOTA-PEG-TOC
Figure BDA0002958744500000421
7、DOTA-BetaAla-TOC
Figure BDA0002958744500000422
8、DOTA-AHX-TOC
Figure BDA0002958744500000423
9、DOTA-NOC(SP19)
Figure BDA0002958744500000431
其核磁谱图如图13所示，MS谱图如图15所示。
10、DOTA-PEG-NOC
Figure BDA0002958744500000432
11、DOTA-BetaAla-NOC
Figure BDA0002958744500000433
12、DOTA-AHX-NOC
Figure BDA0002958744500000441
13、NOTA-TATE
Figure BDA0002958744500000442
14、NOTA-PEG-TATE
Figure BDA0002958744500000443
15、NOTA-BetaAla-TATE
Figure BDA0002958744500000451
16、NOTA-AHX-TATE
Figure BDA0002958744500000452
17、NOTA-TOC
Figure BDA0002958744500000453
18、NOTA-PEG-TOC
Figure BDA0002958744500000461
19、NOTA-BetaAla-TOC
Figure BDA0002958744500000462
20、NOTA-AHX-TOC
Figure BDA0002958744500000463
21、NOTA-NOC
Figure BDA0002958744500000471
22、NOTA-PEG-NOC
Figure BDA0002958744500000472
23、NOTA-BetaAla-NOC
Figure BDA0002958744500000473
24、NOTA-AHX-NOC
Figure BDA0002958744500000481
25、HYNIC-TATE
Figure BDA0002958744500000482
26、HYNIC-PEG-TATE
Figure BDA0002958744500000483
27、HYNIC-BetaAla-TATE
Figure BDA0002958744500000491
28、HYNIC-AHX-TATE
Figure BDA0002958744500000492
29、HYNIC-TOC
Figure BDA0002958744500000493
30、HYNIC-PEG-TOC
Figure BDA0002958744500000501
31、HYNIC-BetaAla-TOC
Figure BDA0002958744500000502
32、HYNIC-AHX-TOC
Figure BDA0002958744500000503
33、HYNIC-NOC
Figure BDA0002958744500000511
34、HYNIC-PEG-NOC
Figure BDA0002958744500000512
35、HYNIC-BetaAla-NOC
Figure BDA0002958744500000513
36、HYNIC-AHX-NOC
Figure BDA0002958744500000521
37、DTPA-TATE
Figure BDA0002958744500000522
38、DTPA-PEG-TATE
Figure BDA0002958744500000523
39、DTPA-BetaAla-TATE
Figure BDA0002958744500000531
40、DTPA-AHX-TATE
Figure BDA0002958744500000532
41、DTPA-TOC
Figure BDA0002958744500000533
42、DTPA-PEG-TOC
Figure BDA0002958744500000541
43、DTPA-BetaAla-TOC
Figure BDA0002958744500000542
44、DTPA-AHX-TOC
Figure BDA0002958744500000543
45、DTPA-NOC
Figure BDA0002958744500000551
46、DTPA-PEG-NOC
Figure BDA0002958744500000552
47、DTPA-BetaAla-NOC
Figure BDA0002958744500000553
48、DTPA-AHX-NOC
Figure BDA0002958744500000561
实施例2放射性核素和实施例1所得化合物配位形成放射性药物化合物
(1)通过以下177Lu标记的方法制备得到了化合物61-化合物72：
将100μg多肽溶解在1mL 0.25mol/L的醋酸钠溶液(pH＝5)中，用0.05mol/L的HCl将177LuCl3(10-20mCi)溶液稀释至4mL；混合上述2种溶液，100℃条件下反应30min，冷却后将反应瓶内的液体通过C18小柱压入废液瓶。最后将1ml体积分数70％的乙醇水溶液通过C18柱和无菌滤膜注入反应瓶,通过N2鼓气法，去除溶剂中的乙醇，得到最终溶液中的乙醇体积分数约10％。该溶液可以直接用于实验鼠尾静脉注射。采用HPLC法对177Lu-多肽进行质量控制，放化纯＞95％方可使用。
(2)通过以下90Y标记方法制备得到了化合物73-化合物84：
将100μg多肽溶解在1mL 0.25mol/L的醋酸钠溶液(pH＝5)中，用0.05mol/L的HCl将90YCl3(10-20mCi)溶液稀释至4mL；混合上述2种溶液，90℃条件下反应30min，冷却后将反应瓶内的液体通过Sep-Pak C18小柱压入废液瓶。最后将1mL体积分数70％的乙醇水溶液通过Sep-Pak C18柱和无菌滤膜注入反应瓶,通过N2鼓气法，去除溶剂中的乙醇，得到最终溶液中的乙醇体积分数约10％。该溶液可以直接用于实验鼠尾静脉注射。采用HPLC法对177Lu-多肽进行质量控制，放化纯＞98％方可使用。
(3)通过以下68Ga标记方法制备得到了化合物85-化合物108：
取5mL的0.1mol/L HCl溶液，缓慢注射到锗镓发生器进行淋洗，待排出1.5mL左右淋洗液时开始收集淋出液体(HCl体系68GaCl3奶液，约1.3×109Bq，3.5mL)。称取60μg多肽前体，加入1.2mL的1.5mol/L醋酸钠(pH＝5)溶液，再向该体系加入全部上述新鲜淋洗的68GaCl3奶液，100℃加热反应10min。反应结束后，将体系中的液体经0.22μm针式无菌过滤器除菌。
(4)通过以下18F标记的方法制备得到了化合物109-化合物120：
首先制备18F生理盐水溶液：在回旋加速器上用核反应18O(p,n)18F制得[18F]F-,然后富集在Sep-Park light QMA柱上，用5mL去离子水淋洗以除去吸附在QMA柱上的金属杂质离子，用0.2-1mL生理盐水洗脱得到25-150mCi的18F-的生理盐水溶液。
制备多肽-[18F]AlF螯合物：向1.5mL的EP管中加入10uL 2nmol/L的AlCl3,300uL0.1mol/L pH＝4的醋酸钠缓冲溶液，然后加入100uL 25-150mCi 18F-的生理盐水混合溶液物，3分钟后，再加入1000uL 1mg/mL的多肽去离子水溶液。混合物摇匀后在110℃反应10-30分钟，冷却至室温，用HPLC测定标记效率。
纯化：将以上所得到的反应液缓慢注入事先活化过的Sep-Pak C18柱，再用20mL蒸馏水淋洗除去水溶性杂质，吹干后用700uL的乙醇淋洗，淋洗液用生理盐水稀释至乙醇含量小于10％，用HPLC测定其保留时间和放化纯。
(5)通过以下99mTc标记的方法制备得到了化合物121-化合物132：
将含有20-50ug的HYNIC-多肽冻干小瓶注入5mg TPPTS，6.5mg甘氨酸，40mg甘露糖醇，38.5mg琥珀酸二钠六水合物，12.7mg的琥珀酸溶液及1.0-1.5mL的Na99mTcO4溶液(具有20-30mCi活度的生理盐水)，将上述反应液在沸水浴中反应10-20分钟，随后，将反应液在室温下静置5分钟，可得到99mTc-多肽溶液样品。用HPLC测定其保留时间和放化纯。
(6)通过以下111In标记的方法制备得到了化合物133-化合物144：
将0.2mL溶有多肽偶联物(浓度0.2-0.5mg/mL)的NaOAc(pH＝5.0)缓冲溶液加入到西林瓶中，加入10-50μL放射性核素111InCl3(20-50mCi)，100℃水浴加热西林瓶，反应10-20分钟，反应结束后室温冷却10分钟，用HPLC测定其保留时间和放化纯。
以下为具体化合物，其中结构式中n的取值范围为1-10之间的正整数。
61、DOTA-TATE-117Lu(SP17-177Lu)
Figure BDA0002958744500000581
62、DOTA-PEG-TATE
Figure BDA0002958744500000582
63、DOTA-BetaAla-TATE
Figure BDA0002958744500000591
64、DOTA-AHX-TATE
Figure BDA0002958744500000592
65、DOTA-TOC
Figure BDA0002958744500000593
66、DOTA-PEG-TOC
Figure BDA0002958744500000601
67、DOTA-BetaAla-TOC
Figure BDA0002958744500000602
68、DOTA-AHX-TOC
Figure BDA0002958744500000603
69、DOTA-NOC
Figure BDA0002958744500000611
70、DOTA-PEG-NOC
Figure BDA0002958744500000612
71、DOTA-BetaAla-NOC
Figure BDA0002958744500000613
72、DOTA-AHX-NOC
Figure BDA0002958744500000621
73、DOTA-TATE
Figure BDA0002958744500000622
74、DOTA-PEG-TATE
Figure BDA0002958744500000623
75、DOTA-BetaAla-TATE
Figure BDA0002958744500000631
76、DOTA-AHX-TATE
Figure BDA0002958744500000632
77、DOTA-TOC
Figure BDA0002958744500000633
78、DOTA-PEG-TOC
Figure BDA0002958744500000641
79、DOTA-BetaAla-TOC
Figure BDA0002958744500000642
80、DOTA-AHX-TOC
Figure BDA0002958744500000643
81、DOTA-NOC
Figure BDA0002958744500000651
82、DOTA-PEG-NOC
Figure BDA0002958744500000652
83、DOTA-BetaAla-NOC
Figure BDA0002958744500000653
84、DOTA-AHX-NOC
Figure BDA0002958744500000661
85、DOTA-TATE(SP17-68Ga)
Figure BDA0002958744500000662
86、DOTA-PEG-TATE
Figure BDA0002958744500000663
87、DOTA-BetaAla-TATE
Figure BDA0002958744500000671
88、DOTA-AHX-TATE
Figure BDA0002958744500000672
89、DOTA-TOC(SP18-68Ga)
Figure BDA0002958744500000673
90、DOTA-PEG-TOC
Figure BDA0002958744500000681
91、DOTA-BetaAla-TOC
Figure BDA0002958744500000682
92、DOTA-AHX-TOC
Figure BDA0002958744500000683
93、DOTA-NOC(SP19-68Ga)
Figure BDA0002958744500000691
94、DOTA-PEG-NOC
Figure BDA0002958744500000692
95、DOTA-BetaAla-NOC
Figure BDA0002958744500000693
96、DOTA-AHX-NOC
Figure BDA0002958744500000701
97、NOTA-TATE
Figure BDA0002958744500000702
98、NOTA-PEG-TATE
Figure BDA0002958744500000703
99、NOTA-BetaAla-TATE
Figure BDA0002958744500000711
100、NOTA-AHX-TATE
Figure BDA0002958744500000712
101、NOTA-TOC
Figure BDA0002958744500000713
102、NOTA-PEG-TOC
Figure BDA0002958744500000721
103、NOTA-BetaAla-TOC
Figure BDA0002958744500000722
104、NOTA-AHX-TOC
Figure BDA0002958744500000723
105、NOTA-NOC
Figure BDA0002958744500000731
106、NOTA-PEG-NOC
Figure BDA0002958744500000732
107、NOTA-BetaAla-NOC
Figure BDA0002958744500000733
108、NOTA-AHX-NOC
Figure BDA0002958744500000741
109、NOTA-TATE
Figure BDA0002958744500000742
110、NOTA-PEG-TATE
Figure BDA0002958744500000743
111、NOTA-BetaAla-TATE
Figure BDA0002958744500000751
112、NOTA-AHX-TATE
Figure BDA0002958744500000752
113、NOTA-TOC
Figure BDA0002958744500000753
114、NOTA-PEG-TOC
Figure BDA0002958744500000761
115、NOTA-BetaAla-TOC
Figure BDA0002958744500000762
116、NOTA-AHX-TOC
Figure BDA0002958744500000763
117、NOTA-NOC
Figure BDA0002958744500000771
118、NOTA-PEG-NOC
Figure BDA0002958744500000772
119、NOTA-BetaAla-NOC
Figure BDA0002958744500000773
120、NOTA-AHX-NOC
Figure BDA0002958744500000781
121、HYNIC-TATE
Figure BDA0002958744500000782
122、HYNIC-PEG-TATE
Figure BDA0002958744500000783
123、HYNIC-BetaAla-TATE
Figure BDA0002958744500000791
124、HYNIC-AHX-TATE
Figure BDA0002958744500000792
125、HYNIC-TOC
Figure BDA0002958744500000793
126、HYNIC-PEG-TOC
Figure BDA0002958744500000801
127、HYNIC-BetaAla-TOC
Figure BDA0002958744500000802
128、HYNIC-AHX-TOC
Figure BDA0002958744500000803
129、HYNIC-NOC
Figure BDA0002958744500000811
130、HYNIC-PEG-NOC
Figure BDA0002958744500000812
131、HYNIC-BetaAla-NOC
Figure BDA0002958744500000813
132、HYNIC-AHX-NOC
Figure BDA0002958744500000821
133、DTPA-TATE
Figure BDA0002958744500000822
134、DTPA-PEG-TATE
Figure BDA0002958744500000823
135、DTPA-BetaAla-TATE
Figure BDA0002958744500000831
136、DTPA-AHX-TATE
Figure BDA0002958744500000832
137、DTPA-TOC
Figure BDA0002958744500000833
138、DTPA-PEG-TOC
Figure BDA0002958744500000841
139、DTPA-BetaAla-TOC
Figure BDA0002958744500000842
140、DTPA-AHX-TOC
Figure BDA0002958744500000843
141、DTPA-NOC
Figure BDA0002958744500000851
142、DTPA-PEG-NOC
Figure BDA0002958744500000852
143、DTPA-BetaAla-NOC
Figure BDA0002958744500000853
144、DTPA-AHX-NOC
Figure BDA0002958744500000861
实施例3荷瘤小鼠PET-CT实验
利用实施例2中的方法通过放射性核素68GaCl3标记本发明的含有三硫醚键的环肽化合物SP17、SP18和SP19，得化合物SP17-68Ga、SP18-68Ga、和SP19-68Ga(其HPLC谱图如图16-图18所示)，将68Ga标记后的多肽分子SP17-68Ga、SP18-68Ga、和SP19-68Ga注射进皮下移植有SSTR2受体高表达的Bon-1肿瘤的小鼠体内后，通过PET-CT实验检验多肽在小鼠体内的分布情况。实验方法如下：
动物实验小鼠选用平均体重20g的Balb/c裸鼠，在烧杯中逐一称重(去烧杯重量)，在无菌环境下饲养，观察并及时更换鼠粮及垫料。
在细胞培养皿中培养SSTR2受体高表达的Bon-1肿瘤细胞，每日更换培养基，并观察细胞状态，在细胞生长至60％-70％左右时传代。
待小鼠饲养及细胞生长状态良好时，将SSTR2受体高表达的Bon-1肿瘤细胞接种至饲养的小鼠皮下，继续饲养，观察肿瘤生长情况。待肿瘤明显时取肿瘤大小相近的小鼠称重，采用穿耳孔法进行分组编号，每组5只。
将68Ga标记后的多肽分子SP17-68Ga、SP18-68Ga、和SP19-68Ga尾静脉注射进皮下移植有SSTR2受体高表达的Bon-1肿瘤的小鼠体内后，通过PET-CT实验检验多肽在小鼠体内的分布情况。
实验结果如图19-21所示：带有放射性核素标记的环肽化合物SP17-68Ga、SP18-68Ga、和SP19-68Ga展示出良好的肿瘤摄取能力。
实施例4小鼠体内分布实验
动物实验小鼠选用平均体重20g的Balb/c裸鼠，在烧杯中逐一称重(去烧杯重量)，在无菌环境下饲养，观察并及时更换鼠粮及垫料。
在细胞培养皿中培养SSTR2受体高表达的Bon-1肿瘤细胞，每日更换培养基，并观察细胞状态，在细胞生长至60％-70％左右时传代。
待小鼠饲养及细胞生长状态良好时，将SSTR2受体高表达的Bon-1肿瘤细胞接种至饲养的小鼠皮下。继续饲养，观察肿瘤生长情况。待肿瘤明显时取肿瘤大小相近的小鼠称重，采用穿耳孔法进行分组编号，每组5只。
1.85MBq SP17-68Ga经尾静脉注射到荷SSTR2受体高表达的Bon-1肿瘤裸鼠体内。
分别在60min,120min后处死裸鼠，取心，肝，脾，肺，肾，脑，胃，小肠，肠管淋巴结，精巢，骨骼，肌肉，肿瘤，胸腺，胰腺，膀胱，称取质量，并利用伽马-计数器测定放射性技术，计算％总注射剂量/每克组织。
结果如图22所示，肿瘤对SP17-68Ga的摄取在60min时可达到2.65％ID/g，摄取较高的脏器为肾脏和脾脏，且放射性药物主要经由肾-膀系统排出体内。
实施例5肿瘤抑制实验
动物实验小鼠选用平均体重20g的Balb/c裸鼠，在烧杯中逐一称重(去烧杯重量)，在无菌环境下饲养，观察并及时更换鼠粮及垫料。
在细胞培养皿中培养SSTR2受体高表达的Bon-1肿瘤细胞，每日更换培养基，并观察细胞状态，在细胞生长至60％-70％左右时传代。
待小鼠饲养及细胞生长状态良好时，将SSTR2受体高表达的Bon-1肿瘤细胞接种至饲养的小鼠皮下。继续饲养，观察肿瘤生长情况。待肿瘤明显时取肿瘤大小相近的小鼠称重，采用穿耳孔法进行分组编号，每组5只。
其中一组尾静脉注射0.5mCi/每只SP17-177Lu，另外一组注射等体积的生理盐水(对照组)。
治疗过程中每隔3天测试小鼠体重和用游标卡尺测定肿瘤最大长径及垂直短径，通过公式计算肿瘤体积V。计算公式为V＝ab2/2(a为最大长径，b为垂直短径)，同时密切关注荷瘤小鼠一般情况如饮食，皮肤色泽，精神状态，活动情况等，动态监测药物毒副作用。
结果表明(图23)，通过单次尾静脉注射0.5mCi药物，在注射后两周内，实验组小鼠的肿瘤大小明显小于对照组小鼠。表明，SP17-177Lu可以有效的抑制神经内分泌肿瘤的生长。
以上所述实施例的各技术特征可以进行任意的组合，为使描述简洁，未对上述实施例中的各个技术特征所有可能的组合都进行描述，然而，只要这些技术特征的组合不存在矛盾，都应当认为是本说明书记载的范围。
以上所述实施例仅表达了本发明的几种实施方式，其描述较为具体和详细，但并不能因此而理解为对发明专利范围的限制。应当指出的是，对于本领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明构思的前提下，还可以做出若干变形和改进，这些都属于本发明的保护范围。因此，本发明专利的保护范围应以所附权利要求为准。

Claims (50)

1.一种含有三硫醚键的环肽化合物或其衍生物或者其立体异构体或者其药学上可接受的盐，其特征在于，其结构式中包括式(I)所示的母核结构以及可与放射性核素配位标记的配体，
Figure FDA0002958744490000011
2.根据权利要求1所述的含有三硫醚键的环肽化合物或其衍生物或者其立体异构体或者其药学上可接受的盐，其特征在于，具有如下式(II)所示结构：
Figure FDA0002958744490000012
其中，R1、R2、R3、R4和R5分别独立地选自：H、氨基酸的侧链；
R6选自：H、氨基酸失去氨基后的残基、羟基取代的C1-C6烷基；
L为
Figure FDA0002958744490000013
其中，R选自：取代或未取代的亚烷基、取代或未取代的含氧亚烷基、取代或未取代的含硫亚烷基；
Q为可与放射性核素配位标记的配体；
n：0、1以上的正整数。
3.根据权利要求1所述的含有三硫醚键的环肽化合物或其衍生物或者其立体异构体或者其药学上可接受的盐，其特征在于，R选自：C1-C10亚烷基、含氧C1-C10亚烷基。
4.根据权利要求3所述的含有三硫醚键的环肽化合物或其衍生物或者其立体异构体或者其药学上可接受的盐，其特征在于，R选自：C1-C6亚烷基、含氧C4-C8亚烷基。
5.根据权利要求4所述的含有三硫醚键的环肽化合物或其衍生物或者其立体异构体或者其药学上可接受的盐，其特征在于，L选自：
Figure FDA0002958744490000021
6.根据权利要求1所述的含有三硫醚键的环肽化合物或其衍生物或者其立体异构体或者其药学上可接受的盐，其特征在于，Q选自：
Figure FDA0002958744490000022
7.根据权利要求1所述的含有三硫醚键的环肽化合物或其衍生物或者其立体异构体或者其药学上可接受的盐，其特征在于，n为0，1-10之间的正整数。
8.根据权利要求1所述的含有三硫醚键的环肽化合物或其衍生物或者其立体异构体或者其药学上可接受的盐，其特征在于，n为0，1-5之间的正整数。
9.根据权利要求1-8任一项所述的含有三硫醚键的环肽化合物或其衍生物或者其立体异构体或者其药学上可接受的盐，其特征在于，R1、R2、R3、R4和R5分别独立地选自：H、C1-C10烷基、R7取代的C1-C10烷基；
R7选自：C6-C10芳基、R8取代的C6-C10芳基、C5-C10杂芳基、R8取代的C5-C10杂芳基、C3-C6环烷基、羧基、羟基、氨基、C1-C6烷基酰基、卤素、巯基、C1-C6烷氧基、C1-C6烷硫基、氨基酰基、胍基、三苯甲硫基、三苯甲氨基羰基、叔丁氧羰基、叔丁氧羰基氨基、Pbf保护的胍基；
R8选自：C1-C6烷基、C3-C6环烷基、羧基、羟基、氨基、C1-C6烷基酰基、卤素、巯基、C1-C6烷氧基、C1-C6烷硫基、叔丁氧羰基、三苯甲基。
10.根据权利要求9所述的含有三硫醚键的环肽化合物或其衍生物或者其立体异构体或者其药学上可接受的盐，其特征在于，R1、R2、R3、R4和R5分别独立地选自：H、C1-C6烷基、R7取代的C1-C6烷基；
R7选自：苯基、萘基、羟基取代的苯基、羟基取代的萘基、吲哚基、咪唑基、羧基、羟基、氨基、巯基、甲硫基、氨基酰基、胍基、三苯甲硫基、三苯甲氨基羰基、叔丁氧羰基、叔丁氧羰基氨基、Pbf保护的胍基、三苯甲基咪唑基、叔丁氧羰基吲哚基。
11.根据权利要求10所述的含有三硫醚键的环肽化合物或其衍生物或者其立体异构体或者其药学上可接受的盐，其特征在于，R1、R2、R3、R4和R5分别独立地选自：H、甲基、正丙基、异丙基、2-甲基丙基、正丁基、异丁基、苯基甲基、对苯酚基甲基、对叔丁氧基苯基甲基、2-萘基甲基、3-吲哚甲基、N-叔丁氧羰基-3-吲哚基甲基、1-羟基乙基、1-叔丁氧基乙基、羟甲基、叔丁氧甲基、巯基甲基、三苯甲硫基甲基、2-甲硫基乙基、氨基酰基甲基、三苯甲氨基羰基甲基、氨基酰基乙基、三苯甲氨基羰基乙基、羧基甲基、叔丁氧羰基甲基、羧基乙基、叔丁氧羰基乙基、4-氨基丁基、4-叔丁氧羰基氨基丁基、3-胍基丙基、3-Pbf保护的胍基丙基、咪唑基甲基、三苯甲基咪唑基甲基。
12.根据权利要求11所述的含有三硫醚键的环肽化合物或其衍生物或者其立体异构体或者其药学上可接受的盐，其特征在于，R1选自：H、苯基甲基；R2选自：H、对苯酚基甲基、2-萘基甲基、苯基甲基；R3选自：H、3-吲哚甲基；R4选自：H、4-氨基丁基；R5选自：H、1-羟基乙基。
13.根据权利要求1-8任一项所述的含有三硫醚键的环肽化合物或其衍生物或者其立体异构体或者其药学上可接受的盐，其特征在于，R6选自：H、苏氨酸残基、羟基取代的C1-C6烷基。
14.根据权利要求13所述的含有三硫醚键的环肽化合物或其衍生物或者其立体异构体或者其药学上可接受的盐，其特征在于，R6选自：H、1-(2-羟基乙基)乙酸基、2-羟基-1-(羟甲基)丙基。
15.根据权利要求1所述的含有三硫醚键的环肽化合物或其衍生物或者其立体异构体或者其药学上可接受的盐，其特征在于，所述含有三硫醚键的环肽化合物或其衍生物选自如下化合物：
Figure FDA0002958744490000041
Figure FDA0002958744490000051
Figure FDA0002958744490000061
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Figure FDA0002958744490000131
Figure FDA0002958744490000141
Figure FDA0002958744490000151
Figure FDA0002958744490000161
其中，各n分别独立的选自：1-5之间的正整数。
16.一种权利要求2-15任一项所述的含有三硫醚键的环肽化合物或其衍生物的合成方法，其特征在于，包括如下步骤：
步骤A：将氨基酸和树脂以固相合成方法制备得到式(III)所示的多肽树脂；
Figure FDA0002958744490000162
其中，R为巯基保护基；
步骤B：脱去式(III)所示的多肽树脂中的巯基保护基，得到式(IV)所示的含有两个巯基的多肽树脂；
Figure FDA0002958744490000171
步骤C：式(IV)所示的含有两个巯基的多肽树脂中的巯基与硫源进行关环反应，得到式(V)所示的含有三硫醚键的环肽树脂；
Figure FDA0002958744490000172
步骤D：将式(V)所示的含有三硫醚键的环肽树脂进行收缩处理，然后经剪切液剪切，过滤除去树脂，将滤液纯化后即得式(II)所示的含有三硫醚键的环肽化合物或其衍生物；
Figure FDA0002958744490000173
17.一种权利要求2-15任一项所述的含有三硫醚键的环肽化合物或其衍生物的合成方法，其特征在于，包括如下步骤：
步骤a：将氨基酸和树脂以固相合成方法制备得到式(III)所示的多肽树脂；
Figure FDA0002958744490000181
其中，R为巯基保护基；
步骤b：将式(III)所示的多肽树脂进行收缩处理，然后经剪切液剪切，脱去式(III)所示的多肽树脂中的巯基保护基和树脂，过滤除去树脂，滤液用乙醚沉淀，收集沉淀，得式VI所示的含有两个巯基的多肽；
Figure FDA0002958744490000182
步骤c：式(VI)所示的含有两个巯基的多肽中的巯基与硫源进行关环反应，得到式(II)所示的含有三硫醚键的环肽化合物或其衍生物；
Figure FDA0002958744490000191
18.根据权利要求16或17所述的含有三硫醚键的环肽化合物或其衍生物的合成方法，其特征在于，所述R选自：Trt、Mmt、StBu或乙酰氨基甲基。
19.根据权利要求16或17所述的含有三硫醚键的环肽化合物或其衍生物的合成方法，其特征在于，所述树脂为MBHA树脂、CTC树脂或Wang树脂。
20.根据权利要求16或17所述的含有三硫醚键的环肽化合物或其衍生物的合成方法，其特征在于，所述树脂的取代度为0.1-1.5mmol/g。
21.根据权利要求16所述的含有三硫醚键的环肽化合物或其衍生物的合成方法，其特征在于，步骤B中所述脱去巯基保护基包括：用温和剪切液重复洗涤所述多肽树脂，直至溶液颜色由无色变为黄色再变为无色，以脱去巯基保护；所述温和剪切液为TFA、TIS和DCM的混合液。
22.根据权利要求21所述的含有三硫醚键的环肽化合物或其衍生物的合成方法，其特征在于，步骤B中所述温和剪切液为体积比为2-4:4-6:90-94的TFA、TIS和DCM的混合液。
23.根据权利要求16或17所述的含有三硫醚键的环肽化合物或其衍生物的合成方法，其特征在于，所述硫源选自如下化合物：
Figure FDA0002958744490000192
Figure FDA0002958744490000201
24.根据权利要求23所述的含有三硫醚键的环肽化合物或其衍生物的合成方法，其特征在于，所述硫源为如下化合物：
Figure FDA0002958744490000202
所述硫源的制备方法包括如下步骤：在无水条件下，邻苯二甲酰亚胺和一氯化硫在DMF中反应18-22小时，反应温度为室温，所述邻苯二甲酰亚胺和一氯化硫的摩尔比为1.5-2.5:1。
25.根据权利要求16所述的含有三硫醚键的环肽化合物或其衍生物的合成方法，其特征在于，式(IV)所示的含有两个巯基的多肽树脂中的巯基与硫源进行关环反应包括：将硫源微溶于溶剂中，加入所述含有两个巯基的多肽树脂中，在氮气或惰性气体的保护下进行关环反应，重复反应三遍，每遍1-4小时；所述溶剂为NMP、DMF、DCM、乙腈和甲醇中的一种或多种。
26.根据权利要求25所述的含有三硫醚键的环肽化合物或其衍生物的合成方法，其特征在于，式(IV)所示的含有两个巯基的多肽树脂中的巯基与硫源进行关环反应包括：将硫源微溶于溶剂中，加入所述含有两个巯基的多肽树脂中，在氮气或惰性气体的保护下进行关环反应，重复反应三遍，每遍1.5-2.5小时；所述溶剂为NMP、DMF和DCM中的一种或多种。
27.根据权利要求16或17所述的含有三硫醚键的环肽化合物的固相合成方法，其特征在于，所述硫源与步骤A或者步骤a中所述的氨基酸的摩尔比为1:2-3。
28.根据权利要求16所述的含有三硫醚键的环肽化合物的固相合成方法，其特征在于，巯基与硫源进行关环反应的步骤中所述溶剂的用量与所述硫源的配比为2-3mL：1mmol。
29.根据权利要求16或17所述的含有三硫醚键的环肽化合物或其衍生物的合成方法，其特征在于，所述收缩处理的试剂为甲醇。
30.根据权利要求16或17所述的含有三硫醚键的环肽化合物或其衍生物的合成方法，其特征在于，步骤D和步骤b中所述剪切液为TFA、TIS和H2O的混合溶液，TFA、EDT、PhOH和H2O的混合溶液，TFA、EDT、TIS、PhOH和H2O的混合溶液。
31.根据权利要求30所述的含有三硫醚键的环肽化合物或其衍生物的合成方法，其特征在于，所述TFA、TIS和H2O的混合溶液中TFA、TIS和H2O的体积比为94-96：2-3:2-3；所述TFA、EDT、PHOH和H2O的混合溶液中TFA、EDT、PhOH和H2O的体积比为92-98:4-6:2-4:1-3；所述TFA、EDT、TIS、PhOH和H2O的混合溶液中TFA、EDT、TIS、PhOH和H2O的体积比为76-84:4-6:4-6:4-6:4-6。
32.根据权利要求16或17所述的含有三硫醚键的环肽化合物或其衍生物的合成方法，其特征在于，步骤D和步骤b中所述经剪切液剪切的反应时间为1-3小时。
33.根据权利要求16所述的含有三硫醚键的环肽化合物或其衍生物的合成方法，其特征在于，步骤D中所述将滤液纯化包括如下步骤：滤液用乙醚沉淀，收集沉淀，用乙腈水溶液溶解，再用RP-HPLC系统进行分离，收集目的峰馏分进行浓缩，冷冻干燥，即得所述含有三硫醚键的环肽化合物。
34.根据权利要求17所述的含有三硫醚键的环肽化合物或其衍生物的合成方法，其特征在于，式(VI)所示的含有两个巯基的多肽中的巯基与硫源进行关环反应包括：在乙腈水溶液中，将所述含有两个巯基的多肽与硫源反应1-5小时。
35.根据权利要求34所述的含有三硫醚键的环肽化合物或其衍生物的合成方法，其特征在于，式(VI)所示的含有两个巯基的多肽中的巯基与硫源进行关环反应包括：在体积分数为45-55％的乙腈水溶液中，将所述含有两个巯基的多肽与硫源反应2-4小时。
36.权利要求1-15任一项所述的含有三硫醚键的环肽化合物或其衍生物或者其立体异构体或者其药学性可接受的盐在制备诊断和/或治疗肿瘤的药物中的应用。
37.根据权利要求36所述的应用，其特征在于，所述肿瘤为神经内分泌肿瘤。
38.根据权利要求37所述的应用，其特征在于，所述神经内分泌肿瘤为生长抑素受体阳性神经内分泌肿瘤。
39.根据权利要求38所述的应用，其特征在于，所述生长抑素受体阳性神经内分泌肿瘤为胰腺神经内分泌肿瘤、胃神经内分泌肿瘤、肠神经内分泌肿瘤、肝脏神经内分泌肿瘤、和淋巴结转移性神经内分泌肿瘤。
40.权利要求1-15任一项所述的含有三硫醚键的环肽化合物或其衍生物或者其立体异构体或者其药学上可接受的盐在制备放射性药物中的应用。
41.根据权利要求40所述的应用，其特征在于，所述放射性药物为用于诊断和/或治疗肿瘤的放射性药物。
42.根据权利要求41所述的应用，其特征在于，所述肿瘤为神经内分泌肿瘤。
43.根据权利要求42所述的应用，其特征在于，所述神经内分泌肿瘤为生长抑素受体阳性神经内分泌肿瘤。
44.根据权利要求43所述的应用，其特征在于，所述生长抑素受体阳性神经内分泌肿瘤为胰腺神经内分泌肿瘤、胃神经内分泌肿瘤、肠神经内分泌肿瘤、肝脏神经内分泌肿瘤、和淋巴结转移性神经内分泌肿瘤。
45.权利要求1-15任一项所述的含有三硫醚键的环肽化合物或其衍生物或者其立体异构体或者其药学上可接受的盐作为放射性药物前体在生物体内显影示踪的应用。
46.一种诊断和/或治疗肿瘤的药物，其特征在于，由活性成分和药物中可接受的辅料制备而成，所述活性成分包括有权利要求1-15任一项所述的含有三硫醚键的环肽化合物或其衍生物或者其立体异构体或者其药学上可接受的盐。
47.一种诊断和/或治疗肿瘤的放射性药物，其特征在于，由包括放射性核素及其标记化合物的组分制备而成，所述标记化合物包括有权利要求1-15任一项所述的含有三硫醚键的环肽化合物或其衍生物或者其立体异构体或者其药学上可接受的盐。
48.根据权利要求47所述的放射性药物，其特征在于，所述放射性药物为诊断肿瘤的放射性药物，所述放射性核素选自：18F，99mTc，67Ga，68Ga，89Zr，111In，123I，203Pb。
49.根据权利要求47所述的放射性药物，其特征在于，所述放射性药物为治疗肿瘤的放射性药物，所述放射性核素选自：188Re，177Lu，90Y，109Pd，153Sm。
50.根据权利要求47所述的放射性药物，其特征在于，选自如下化合物：
Figure FDA0002958744490000231
Figure FDA0002958744490000241
Figure FDA0002958744490000251
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Figure FDA0002958744490000311
Figure FDA0002958744490000321
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Figure FDA0002958744490000341
Figure FDA0002958744490000351
Figure FDA0002958744490000361
Figure FDA0002958744490000371
Figure FDA0002958744490000381
Figure FDA0002958744490000391
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Figure FDA0002958744490000421
Figure FDA0002958744490000431
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