CN114651175A - 用于确定hplc系统中用于色谱柱的操作流率的方法 - Google Patents
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Abstract
公开一种用于确定HPLC系统(1)中用于色谱柱(4)的操作流率的方法。方法包括：针对一个或多个流率测量/计算没有色谱柱(4)的系统(1)的压力；使函数拟合到流率和对应的压力；根据函数和用于色谱柱(4)的预定推荐流率来计算在预定推荐流率下的系统压降。通过将系统压降与最大柱压力限度求总和并确定系统压降对总和压力的贡献来确定操作流率。如果该贡献超过1%，用于柱的操作流率确定为与低于预定最大柱压力限度的在压力监测器处的压力对应的流率，该压力监测器布置在柱之前。
Description
技术领域
本文件涉及用于确定高效液体色谱系统中用于色谱柱的操作流率的方法，涉及包括用于确定此类操作流率的系统控制器的高效液体色谱系统，并涉及用于执行该方法的计算机程序和计算机程序产品。
背景技术
高效液体色谱(HPLC)系统(如来自Cytiva™ Life Sciences的ÄKTA™系统)用来从由化合物的混合物组成的样品中分离、识别和量化化合物(诸如生物分子)。样品溶解在流体流动相中，该流体流动相携带混合物通过不动、不混溶的固定相，该固定相通常为填充有(功能化的)粒子的柱，这些粒子典型地在直径上1-10微米。基于所关注的化合物朝相的亲和性来选择相。混合物的化合物以不同的速度行进通过柱，引起它们分离。保留时间(化合物通过介质的移动速率)取决于与固定相的相互作用强度、所使用的溶剂的组分和流动相的流率来变化。由柱分离的化合物可借助于质谱法、UV/VIS光吸收、荧光、光散射或折射率来检测。
HPLC系统的分离能力随着较小的固定相粒径而增加，因为相的表面积增加。然而，较小的粒径增加对流动的阻力，使得期望使用高压力。
对于每个柱，存在柱可承受而不破裂的特定的最大流动压力。该压力取决于固定相的材料和柱它本身的材料。对于每个柱，还存在预定推荐流体流率，柱的分离能力在该预定推荐流体流率下优化。
HPLC系统中的所有构件(即，流通池、阀、泵、柱等)用不同的管道来连接至彼此。所关注的样品在管道中稀释，其引起对系统分辨率的负面影响。分辨率将随着管道直径增加而降低。窄管道增加分辨率，而关于较窄管道的缺点是系统中的背压增加。
背压是反对流体通过系统的期望流率的阻力或力，其导致摩擦损失和压降，且因此降低通过柱的流体流率。为补偿压降，使得通过柱的流体流率保持在推荐的预定流率下，由泵施加的压力可增加。因此，存在增加的压力接近或超过HPLC系统和所使用的特定柱的最大压力能力的风险。
HPLC系统可包括：系统泵压力监测器，其测量在系统泵之后的压力；在样品泵之后的压力监测器，其测量样品压力；以及在柱阀的入口端口和出口端口处的压力监测器，以测量柱前压力和柱后压力。增量(delta)柱压力是柱前压力与柱后压力之间的差。压力警报可设置用于在系统泵之后的系统压力和/或用于增量柱压力，以警告用户已达到系统或柱的最大压力或者压力已超过预设限度。当已超过预设限度时，系统可自动停止。
EP288584示出一种色谱系统，其包括紧接地布置在泵之后的仅一个压力监测器。控制器布置成基于所记录的系统压力、流径的特性以及系统中液体的粘度和流率来估计柱前压力。
对于无经验的HPLC用户来说，可难以知道如何设置操作流率来安全地运行色谱系统，而没有由于使用过高流率引起立即的压力警报和系统停止的风险。
发明内容
本公开内容的目标是提供用于确定高效液体色谱系统中用于色谱柱的操作流率的方法，使得色谱系统可安全地运行，而没有由于使用过高流率引起立即的压力警报和系统停止的风险。其它目标是提供包括用于确定此类操作流率的系统控制器的高效液体色谱系统，以及用于执行该方法的计算机程序和计算机程序产品。
本发明由所附独立专利权利要求限定。非限制性实施例产生自从属专利权利要求、附图和以下描述。
根据第一方面，提供一种用于确定高效液体色谱系统中用于色谱柱的操作流率的方法。系统包括：用于液体介质的液体储器；与液体储器流体连通的色谱柱，其中，色谱柱具有预定推荐流率和预定最大柱压力限度；系统泵，其能够布置成迫使液体从液体储器以一定的流率通过色谱柱；流体流径，其连接液体储器、系统泵和色谱柱；以及压力监测器，其布置在色谱柱之前。方法包括：a) 针对一个或多个流率测量或计算没有色谱柱的系统的压力；b) 使函数拟合到流率和对应的测量或计算的压力；c) 根据函数和用于色谱柱的预定推荐流率来计算在预定推荐流率下的系统压降；以及d) 通过将系统压降与预定最大柱压力限度求总和并确定系统压降对总和压力的贡献来确定用于色谱柱的操作流率，其中，如果该贡献超过1%，用于色谱柱的操作流率确定为低于预定最大柱压力限度的流率。
高效液体色谱(HPLC)系统可为来自Cytiva™ Life Sciences的ÄKTA™系统。柱可为适于HPLC系统的本领域中已知的任何柱。
针对一个或多个流率测量或计算了没有色谱柱的系统的压力，使函数拟合到流率和对应的测量或计算的压力。如果流率是线性的且0 ml/min的流率对应于0 MPa的压力，测量或计算仅一个压力(即，在用于柱的预定推荐流率下)可足够。否则，两个或更多个流率可为必要的。
使用函数和用于色谱柱的预定推荐流率，计算在预定推荐流率下的系统压降。
背压是反对流体通过系统的期望流率的阻力或力，其导致摩擦损失和压降，且因此降低通过柱的流体流率。为补偿压降，使得通过柱的流体流率保持在推荐的预定流率下，由泵施加的压力可增加。因此，存在增加的压力接近或超过HPLC系统和所使用的特定柱的最大压力能力的风险。
确定特定系统中用于色谱柱的操作流率，其补偿系统压降。确定操作流率可包括计算，该计算可为迭代过程或逼近。确定用于色谱柱的操作流率包括：将系统压降与预定最大柱压力限度求总和，并确定系统压降对总和压力的贡献，其中，如果该贡献超过1%，用于柱的操作流率确定为与低于预定最大柱压力限度的在压力监测器处的压力对应的流率。在系统(具有柱)的压力监测器处的压力是组合的柱压力和系统压力。
在一些实施例中，如果系统压降对总和压力的贡献超过1%，用于柱的操作流率确定为与比预定最大柱压力限度低1-20%、1-15%或1-10%的在系统(具有色谱柱)的压力监测器处的压力对应的流率。用于柱的操作流率确定为充分减小以避免系统中瞬时过压警报的流率。用于柱的操作流率还应充分高以用于使测量令人满意地执行。
如果计算/测量的压降低于1%或为零，操作流率保持在与用于柱的预定推荐流率相同的流率下。
上文描述的方法可为自动或至少半自动的方法。大多数的特征和数据可自动地插入到系统中。因此，无经验的用户也可容易执行方法。
通过上文的方法，HPLC用户(且无经验的HPLC用户也)将能够设置操作流率来安全地运行色谱系统，而没有由于对系统和柱使用过高流率引起立即的压力警报(由通过系统增加的压力引起)的风险。
可针对一个或多个流率借助于压力监测器来测量系统的压力，其中，色谱柱用管道替代或绕过(bypass)。
系统可设有阀，这些阀可布置成自动地绕过柱，因此可使柱的绕过成为自动过程。所使用的流率优选地包括处于低流率(诸如100 μl/min)的一个或多个流率和处于高流率(诸如10 ml/min)的一个或多个流率。所使用的流率取决于哪个柱要在系统中使用。
在方法的步骤b)中，可通过从借助于压力监测器测量的其中色谱柱用管道替代或绕过的系统的压力中减去借助于压力监测器测量的其中色谱柱与系统断开的系统的压力来针对一个或多个流率计算系统的压力。
系统可设有阀，这些阀可布置成自动地绕过柱，因此可使柱的绕过成为自动过程。柱与系统断开在这里意味着没有用管道替代/绕过柱，而是在系统中提供间隙，使得所测量的压力是在柱之前的系统的压力。如果在柱之前的系统的压力是高的(即，比没有柱(柱用管道绕过)的总系统压力高10%或更多)，可使用计算压力的该方式。所使用的流率优选地包括处于低流率(诸如100 μl/min)的一个或多个流率和处于高流率(诸如10 ml/min)的一个或多个流率。所使用的流率取决于哪个柱要在系统中使用。
备选地，在上文描述的方法的步骤a)中，可使用伯努利公式在没有色谱柱的情况下针对一个或多个流率计算系统的压力，该伯努利公式：
ΔP = (128*L*Q*η) / (π*d4)
其中，d是流体流径的内径(mm)，Q是流率(ml/min)，L是流径的长度(mm)，且η是液体介质的粘度(cP)。
在该备选方案中，系统的压力不是在系统中由压力监测器所测量的，而是针对用于没有色谱柱的系统的一个或多个流率所计算的。流体流径是在系统中用来连接液体储器、系统泵和色谱柱以及还有系统的其它部分(诸如流通池、阀等)的管道。因此，为了执行该计算，需要关于所使用的液体和色谱系统的一些数据。所使用的流率优选地包括处于低流率(诸如100 μl/min)的一个或多个流率和处于高流率(诸如10 ml/min)的一个或多个流率。所使用的流率取决于哪个柱要在系统中使用。
可针对至少两个不同的流率(优选地至少三个不同的流率)在没有色谱柱的情况下测量或计算系统的压力。
更高数量的流率可改善该方法。不同流率的数量可为四个、五个、六个或更多个。
如果所确定的系统压降对总和压力的贡献超过5%、10%、15%或20%，用于色谱柱的操作流率确定为与低于预定最大柱压力限度的在系统泵处的压力对应的流率。
选择哪个水平(level)作为关于系统压降对总和压力的贡献的下限(即，1%、5%、10%、15%或20%)可通过理论计算来确定，该理论计算假定仅来自柱的压力将非常接近于在预定推荐流率下的最大压力，而系统内的压力没有任何影响。限定关于系统压降对总和压力的贡献的下限，可避免当在预定流率下运行时不会引起任何警报的关于柱的不必要的小降低。该限度应设置有安全裕度，以避免停止。
方法还可包括通过在预定推荐流率下借助于压力监测器测量压力并从其中减去在预定推荐流率下没有色谱柱的系统的测量或计算的压力来计算/测量系统中关于色谱柱的增量压力。
使用该方法，即使系统设有布置在柱之前的仅一个压力监测器，可计算增量压力。传统上，借助于布置在柱之前的第一压力监测器和布置在柱之后的第二压力柱来计算增量压力。然后，压力上的差是增量压力。在柱之后的系统中增加压力监测器可负面地影响色谱系统的分辨率。
该增量压力可用来保护柱，使得柱的固定相(填充床)不受损坏。压力警报可设置成处于预定最大床压力，该预定最大床压力通常是用于填充床的压力(或稍微低于该压力)加上在没有柱的情况下计算/测量的压力。
根据第二方面，提供一种高效液体色谱系统，其包括：a) 用于液体介质的液体储器；与液体储器流体连通的色谱柱，所述色谱柱具有预定推荐流率和预定最大柱压力限度；至少一个系统泵，其能够布置成迫使液体从液体储器以一定的流率通过色谱柱；流体流径，其连接液体储器、系统泵和色谱柱；以及压力监测器，其布置在色谱柱之前；以及b) 系统控制器，其用于确定用于系统的色谱柱的操作流率，其中，系统控制器布置成执行上文描述的步骤a)至d)。
根据第三方面，提供一种计算机程序，其包括用于当程序在计算机上运行时执行上文描述的方法的程序代码手段。
根据第四方面，提供一种计算机程序产品，其包括存储在计算机可读介质上的程序代码手段，该程序代码手段用于当程序在计算机上运行时执行上文描述的方法。
附图说明
图1示意性地示出高效液体色谱系统。
图2示出用于确定高效液体色谱系统中用于色谱柱的操作流率的方法。
图3示出具有在没有色谱柱的改型的ÄKTA™系统中在不同流率下测量的压力的图形(graph)，该柱使用管道绕过。
具体实施方式
在图1中示出高效液体色谱(HPLC)系统1。HPLC系统1可用来从由化合物的混合物组成的样品中分离、识别和量化化合物(诸如生物分子)。样品2可溶解于/注入流体流动相(液体介质3)，其携带混合物通过色谱柱4。色谱柱可例如为尺寸排除柱、亲和柱、疏水相互作用柱、离子交换柱或反相柱。柱可具有不动、不混溶的固定相，该固定相通常包括填充的(功能化的)粒子，这些粒子通常在直径上1-10 μm。
样品2的化合物以不同的速度行进通过柱4，引起它们分离。保留时间(化合物通过介质的移动速率)取决于与固定相的相互作用强度、所使用的液体介质的组分和流动相的流率来变化。
HPLC系统1的分离能力随着较小的固定相粒径而增加，因为相的表面积增加。然而，较小的粒径增加对流动的阻力，使得期望使用高压力。
对于每个色谱柱4，存在预定推荐流率，柱的分离能力在该预定推荐流率下优化，其取决于固定相的材料和柱它本身的材料。对于每个柱，还存在最大柱压力限度，其是柱可承受而不破裂的最高压力。该压力取决于固定相的材料和柱它本身的材料。
由柱4分离的化合物可由检测器5使用例如质谱法、UV/VIS光吸收、荧光、光散射或折射率来检测。
HPLC系统1还包括至少一个系统泵6，其布置成迫使液体从液体储器3以一定的流率通过色谱柱4。
压力监测器7测量在系统泵6之后在色谱柱之前的压力。压力监测器7的准确位置可随着不同的HPLC系统1来变化。在一些配置中，多于一个的压力监测器可布置在系统泵6与柱4之间。
流体流径连接液体储器3、系统泵6和色谱柱4以及HPLC系统中的其它构件，即，流通池、阀等(未示出)。流径可由不同的管道构成。
样品在管道中稀释，其引起对系统分辨率的负面影响。分辨率将随着管道直径增加而降低。窄管道增加分辨率，而关于较窄管道的缺点是系统中的背压增加。
背压是反对流体通过系统1的期望流率的阻力或力，其导致摩擦损失和压降，且因此降低通过柱4的流体流率。为补偿压降，使得通过柱4的流体流率保持在推荐的预定流率下，由系统泵6施加的压力可增加。因此，存在增加的压力接近或超过HPLC系统和所使用的特定柱的最大压力能力的风险。
对于无经验的HPLC用户来说，可难以知道如何设置操作流率来安全地运行色谱系统1，而没有由于使用过高流率引起立即的压力警报和系统停止的风险。
在图2中示出用于确定图1的高效液体色谱系统1中用于色谱柱4的操作流率的方法100。
方法包括以下步骤：a) 针对一个或多个流率测量101a或计算101b、101c没有色谱柱的系统的压力。
可借助于压力监测器7在没有色谱柱的情况下针对一个或多个流率测量101a系统的压力。如果多于一个的压力监测器布置在系统泵6与柱4之间，用最接近于柱4布置的压力监测器7测量的压力是该方法中测量101a的压力。在图3中示出具有在没有色谱柱的情况下在不同流率下测量的压力的图形的示例。
没有色谱柱4在这里意味着用流体流径、管道替代/绕过柱。系统1可设有阀(未示出)，其可布置成自动地绕过柱4，因此可使柱4的绕过成为自动过程。
如果在柱4之前的系统的压力是高的，可通过从借助于压力监测器7测量的其中色谱柱4用管道替代或绕过的系统的压力中减去借助于压力监测器7测量的其中色谱柱与系统断开的系统的压力来针对一个或多个流率计算系统的压力。
柱4与系统断开在这里意味着没有用管道替代/绕过柱，而是在系统中提供间隙，使得所测量的压力是在柱4之前的系统的压力。
备选地，可使用伯努利公式在没有色谱柱4的情况下针对一个或多个流率计算101c系统的压力，该伯努利公式：
ΔP = (128*L*Q*η) / (π*d4)
其中，d是流体流径的内径(mm)，Q是流率(ml/min)，L是流径的长度(mm)，且η是液体介质的粘度(cP)。
在该备选方案中，系统1的压力不是在系统中由压力监测器7所测量的，而是针对用于没有色谱柱4的系统的一个或多个流率所计算的。流体流径是在系统中用来连接液体储器、系统泵和色谱柱以及还有系统的其它部分(诸如流通池、阀等)的管道。因此，为了执行该计算，需要关于所使用的液体和色谱系统1的一些数据。
在粘度不是已知的情况下，可假定使用水，由此可使用如下的已知表达式来针对不同的温度估计粘度：
V [cP] = A × 10B/(T – C)，其中，T = 温度[K]；A = 0.02414；B = 247.8 K；C= 140 K。
在方法的下一步骤b)中，使函数拟合102到流率和对应的测量或计算的压力。
随后，在方法的步骤c)中，可根据函数和用于柱的预定推荐流率来计算在预定推荐流率下的系统压降。系统压降可根据图3中的图形计算为在预定推荐流率下的压力，该预定推荐流率在图形中指示为A)，该压力在图形中指示为B)。
在方法的步骤d)中，确定104特定系统1中用于色谱柱4的操作流率，其补偿系统压降。确定操作流率可包括计算，该计算可为迭代过程或逼近。确定104用于色谱柱4的操作流率包括：将系统压降与柱的预定最大压力限度求总和，并确定系统压降对总和压力的贡献。如果该贡献超过1%，用于柱4的操作流率确定为与低于预定最大柱压力限度的在压力监测器处的压力对应的流率。
在图1中，系统控制器8布置成用于确定用于高效液体色谱系统1的色谱柱4的操作流率，其中，系统控制器8布置成执行上文论述的步骤a)至d)。
通过上文的方法，HPLC用户(且无经验的HPLC用户也)将能够设置操作流率来安全地运行色谱系统1，而没有由于对系统和柱使用过高流率引起立即的压力警报(由通过系统增加的压力引起)的风险。
方法还可包括通过在预定推荐流率下借助于压力监测器7测量压力并从其中减去使用来自方法的步骤102的函数在预定推荐流率下没有色谱柱4的系统的测量或计算的压力来计算/测量105系统1中关于柱4的增量压力。
使用该方法，即使系统设有布置在柱4之前的唯一的压力监测器7，可计算增量压力。传统上，借助于布置在柱之前的第一压力监测器和布置在柱之后的第二压力柱来计算增量压力。然后，压力上的差是增量压力。在柱4之后的系统1中增加压力监测器可负面地影响色谱系统的分辨率。
该增量压力可用来保护柱，使得柱的固定相(填充床)不受损坏。压力警报可设置成处于预定最大床压力，该预定最大床压力通常是用于填充床的压力(或稍微低于该压力)加上在没有柱4的情况下计算/测量的压力。
如果增量压力是限制性因素，该者可使增量压力限度警报以在没有柱的情况下测量或计算的相同的压力量增加，而不是降低流率。这给定了在计算/测量中所包括的仅是在柱之后的构件。备选地，可测量用于没有柱的整个系统的流率，且然后可移除在柱之后的构件，且因此得到由这些柱后构件所生成的压力。该增加仅只要不超过柱硬件压力限度就可进行。
接着在下文的表1中的是使用上文描述的方法进行的计算的示例，该方法用于确定用于在来自Cytiva™ Life Sciences的改型的ÄKTA™纯系统中使用的一系列不同柱4的操作流率。该ÄKTA™纯系统是通过将所有的管道更换成具有0.2 mm的较小内径的管道来改型的，因此与具有原始管道的ÄKTA™纯系统相比产生具有增加的背压的HPLC系统。
使用水作为液体介质在各种流率下针对柱4测量101a或计算101b系统压力。在图3中的图形中，示出针对不同流率(在没有柱的情况下)测量101a的系统压力。使函数拟合102到流率和对应的测量/计算的压力，图3。当使用除了水以外的其它液体介质时，该者可使用特定的液体来重复测试。
在一个示例中，用于柱4(来自Cytiva™ Life Sciences的200增加5/150柱)的预定推荐流率是0.45 ml/min，且柱4具有2 MPa的最大柱压力限度。在图3中指示为A)的预定流率下，在图3中指示为B)的压降是0.32 MPa。压降与最大柱压力限度的总和是2.32 MPa。压降对总和压力的贡献是16%，且因此超过1%。用于柱的操作流率确定为与在压力监测器处的压力(即，组合的柱压力和系统压力)对应的流率，该压力比预定最大柱压力限度(即，1.9Mpa)低5%，且所确定的用于柱的操作流率是0.370 ml/min，其对应于比预定推荐流率低约18%的流率。所确定的操作流率可四舍五入到具有不超过两个有效数字的流率。
在来自表1的另一示例中，如上文论述的那样计算101b系统的压力。用于柱(来自Cytiva™ Life Sciences的S 75 5/150柱)的预定推荐流率是0.3 ml/min，且柱具有1.8MPa的最大柱压力限度。通过从借助于压力监测器测量的其中色谱柱用管道替代或绕过的系统的压力中减去借助于压力监测器7测量的其中色谱柱与系统(无管道使用)断开的系统1的压力来针对不同的流率计算101b系统的压力。使函数拟合到所计算的压力和对应的流率(未示出，但类似于图3中的图形)。在预定流率下的压降是在布置成迫使液体通过没有柱(柱用管道绕过)的系统1时在压力监测器7处的压力(在这里是0.39 MPa)与在预定推荐流率下具有断开的柱的系统的压力(在这里是0.18 MPa)之间的差，且是0.21 MPa。压降与最大柱压力限度的总和是2.01 MPa。压降对总和压力的贡献是12%，且因此超过1%。用于柱的操作流率确定为与在压力监测器处的压力(即，组合的柱压力和系统压力)对应的流率，该压力比预定最大柱压力限度(即，1.74 Mpa)低3%，且所确定的用于柱的操作流率是0.26ml/min，其对应于比预定推荐流率低约12%的流率。
表1
对于表1中示出的计算，贡献的限度设置成10%。贡献的限度可设置成低至1%。备选地，它可设置成处于更高的限度，诸如15%或20%。这里，低于10%的压力贡献不被认为是问题，且所确定的操作流率保持在与用于柱的预定推荐流率相同的流率下。选择哪个水平作为关于系统压降对总和压力的贡献的下限可通过理论计算来确定，该理论计算假定仅来自柱的压力将非常接近于在预定推荐流率下的最大压力，而系统内的压力没有任何影响。限定关于系统压降对总和压力的贡献的下限，可避免当在预定流率下运行时不会引起任何警报的关于柱的不必要的小降低。该限度应优选地设置有安全裕度，以避免系统由于使用过高流率而停止。
虽然上文的描述包含多个特征，这些不应被解释为限制本文中描述的构思的范围，而应被解释为仅提供所描述的构思的一些示例性实施例的说明。将了解的是，当前描述的构思的范围完全包含对本领域技术人员来说可变得显然的其它实施例，且当前描述的构思的范围因此不应受限。对要素的呈单数的引用不旨在意指“一个且仅一个”(除非明确地如此陈述)，而是“一个或多个”。为本领域普通技术人员所已知的对于上文描述的实施例的要素来说的所有结构的和功能的等同物明确地并入本文中，且旨在由此所包含。
Claims (11)
1.一种用于确定高效液体色谱系统(1)中用于色谱柱(4)的操作流率的方法，所述系统包括：
用于液体介质的液体储器(3)，
与所述液体储器流体连通的色谱柱(4)，所述色谱柱具有预定推荐流率和预定最大柱压力限度，
系统泵(6)，所述系统泵(6)能够布置成迫使液体从所述液体储器(3)以一定的流率通过所述色谱柱(4)，
流体流径，所述流体流径连接所述液体储器(3)、所述系统泵(6)和所述色谱柱(4)，以及
压力监测器(7)，所述压力监测器(7)布置在所述色谱柱(4)之前，
所述方法包括：
a) 针对一个或多个流率测量(101a)或计算(101b、101c)没有所述色谱柱(4)的所述系统(1)的压力，
b) 使函数拟合(102)到所述流率和对应的测量或计算的压力，
c) 根据所述函数和用于所述色谱柱(4)的所述预定推荐流率来计算(103)在所述预定推荐流率下的系统压降，以及
d) 通过将所述系统压降与所述预定最大柱压力限度求总和并确定所述系统压降对总和压力的贡献来确定(104)用于所述色谱柱(4)的操作流率，其中，如果该贡献超过1%，用于所述色谱柱(4)的操作流率确定为与低于所述预定最大柱压力限度的在所述压力监测器处的压力对应的流率。
2.根据权利要求1所述的方法，其中，针对一个或多个流率借助于所述压力监测器(7)来测量(101a)所述系统(1)的压力。
3.根据权利要求2所述的方法，其中，所述色谱柱用管道替代或绕过。
4.根据任一前述权利要求所述的方法，其中，通过从借助于所述压力监测器测量的所述系统的压力中减去借助于所述压力监测器(7)测量的其中所述色谱柱与所述系统断开的所述系统(1)的压力来针对一个或多个流率计算(101b)所述系统(1)的压力。
5. 根据任一前述权利要求所述的方法，其中，使用伯努利公式在没有所述色谱柱(4)的情况下针对一个或多个流率计算(101c)所述系统(1)的压力，所述伯努利公式：
ΔP = (128*L*Q*η) / (π*d4)
其中，d是所述流体流径的内径(mm)，Q是所述流率(ml/min)，L是所述流径的长度(mm)，且η是所述液体介质的粘度(cP)。
6.根据任一前述权利要求所述的方法，其中，针对至少两个不同的流率、优选地至少三个不同的流率在没有所述色谱柱(4)的情况下测量(101a)或计算(101b)所述系统(1)的压力。
7.根据任一前述权利要求所述的方法，其中，如果所确定的所述系统压降对所述总和压力的贡献超过5%、10%、15%或20%，用于所述色谱柱(4)的操作流率确定为与低于所述预定最大柱压力限度的在所述系统泵处的压力对应的流率。
8.根据任一前述权利要求所述的方法，还包括：
通过在所述预定推荐流率下借助于所述压力监测器(7)测量压力并从其中减去在所述预定推荐流率下没有所述色谱柱(4)的所述系统(1)的测量或计算的压力来计算/测量(105)所述系统(1)中关于所述色谱柱(4)的增量压力信号。
9. 一种高效液体色谱系统(1)，其包括：a) 用于液体介质的液体储器(3)；与所述液体储器流体连通的色谱柱(4)，所述色谱柱(4)具有预定推荐流率和预定最大柱压力限度；至少一个系统泵(6)，所述至少一个系统泵(6)能够布置成迫使液体从所述液体储器(3)以一定的流率通过所述色谱柱(4)；流体流径，所述流体流径连接所述液体储器(3)、所述系统泵(6)和所述色谱柱(4)；以及压力监测器(7)，所述压力监测器(7)布置在所述色谱柱(4)之前；以及b) 系统控制器(8)，所述系统控制器(8)用于确定用于所述系统(1)的色谱柱(4)的操作流率，其中，所述系统控制器(8)布置成执行根据任一前述权利要求所述的步骤。
10.一种计算机程序，其包括用于当所述程序在计算机上运行时执行根据权利要求1至8中任一项所述的方法的程序代码手段。
11.一种计算机程序产品，其包括存储在计算机可读介质上的程序代码手段，所述程序代码手段用于当程序在计算机上运行时执行根据权利要求1至8中任一项所述的方法。
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