CN114622015B - 一种基于循环肿瘤DNA预测非小细胞肺癌术后复发的NGS panel及其用途 - Google Patents

Abstract

本发明提供了一种检测769个基因突变的NGS panel在制备预测非小细胞肺癌术后复发的试剂盒中的用途以及一种预测非小细胞肺癌术后复发的试剂盒。通过可检测769个基因的NGS panel结合高通量测序对非小细胞肺癌患者血浆中的ctDNA进行检测，可以在围手术期准确有效地预测患者术后复发风险，具有重要的临床应用价值。

Description

一种基于循环肿瘤DNA预测非小细胞肺癌术后复发的NGSpanel及其用途

技术领域

本发明属于生物医药领域，具体涉及一种预测非小细胞肺癌术后复发的试剂盒。

背景技术

肺癌是全球发病率和死亡率最高的恶性肿瘤，每年约有170万患者死于肺癌。非小细胞肺癌(NSCLC)是肺癌最常见的病理类型，约占肺癌的85％。手术切除作为NSCLC的重要治疗方式，可治愈部分患者，然而部分患者在手术后仍出现复发。NSCLC一旦复发，治愈几率极低。辅助化疗目前已作为标准治疗方式用于II-III期和高风险IB期NSCLC的术后治疗。然而，辅助化疗对患者的5年生存率仅提高4％-5％。微弱的生存获益反映出目前基于TNM分期的风险评估方式在预测NSCLC术后复发风险方面的缺陷和不足。此外，目前临床上常用的血清肿瘤标志物，如CEA、NSE、CA125等也无法有效预测NSCLC的复发。因此，开发能有效预测NSCLC术后复发的新指标和新方法，对指导NSCLC术后治疗具有重大的临床意义。

循环肿瘤DNA(Circulating tumor DNA,ctDNA)是由肿瘤细胞释放入血液循环的DNA片段。由于ctDNA携带有与原发肿瘤组织一致的分子遗传学改变，所以能全面反映患者体内肿瘤细胞的遗传信息和演变进程。与组织活检相比，ctDNA检测具有创伤小、实时、动态等优势，并能克服肿瘤的异质性。近年来，基于二代测序技术(Next-generationsequencing,NGS)的ctDNA检测在肿瘤早期诊断、分子分型、疗效监测和预后评估等方面展现出重要的实用价值。

目前，基于ctDNA进行NSCLC术后复发监测的NGS panel往往只能进行较少数量的基因突变的检测，可能造成ctDNA中肺癌相关基因突变的漏检。因此，需要开发更全面追踪肺癌ctDNA的NGS panel，更准确、有效地预测NSCLC术后复发，为NSCLC患者制定个性化的治疗方案提供精确的参考信息，将具有非常重要的临床意义和良好的经济适用性。

发明内容

本发明的目的在于提供一种基于ctDNA预测非小细胞肺癌术后复发的NGS panel。

本发明提供了一种检测下列769个基因突变的试剂在制备预测非小细胞肺癌术后复发的试剂盒中的用途：

ABCA13、ABCA8、ABCB1、ABCC2、ABCC9、ABL1、ACADSB、ACOT13、ACRC、ADCY8、AGAP1、AK7、AKT1、AKT2、AKT3、ALDH5A1、ALK、ALOX12B、ALS2CR11、AMBRA1、AMER1、ANAPC7、ANKRD28、ANKRD46、ANO1、APAF1、APC、APOL2、APOPT1、AQR、ARAF、AR、ARHGAP26、ARHGAP4、ARHGAP6、ARHGEF12、ARHGEF3、ARID1A、ARID1B、ARID2、ARID4A、ARID5B、ARL13B、ARL4A、ARL6IP6、ARMC5、ASB11、ASH1L、ASPH、ASXL1、ASXL2、ATG3、ATG4C、ATIC、ATM、ATP6V0A1、ATP6V0A2、ATP6V0A4、ATP6V0E1、ATP8A1、ATR、ATRX、AURKA、AURKB、AXIN1、AXIN2、AXL、B2M、BAP1、BARD1、BCAS1、BCL2、BCL2L11、BCL2L1、BCL6、BCOR、BCR、BIRC3、BIVM-ERCC5、BLM、BMPR1A、BRAF、BRCA1、BRCA2、BRD4、BRIP1、BRMS1L、BRS3、BTF3、BTG1、BTK、C22orf23、C5orf15、C5orf42、C7orf66、C8orf34、CAB39、CACNA1E、CACNA2D1、CALD1、CALM2、CALR、CARD11、CASP8、CAST、CBFB、CBL、CBR3、CBR4、CCDC157、CCDC18、CCND1、CCND2、CCND3、CCNE1、CD274、CD40、CD74、CD79A、CD79B、CDA、CDC73、CDCA8、CDH1、CDK12、CDK4、CDK6、CDK8、CDKL3、CDKN1A、CDKN1B、CDKN2A、CDKN2B、CDKN2C、CDO1、CEBPA、CEP120、CEP290、CHD1、CHD2、CHEK1、CHEK2、CHRM3、CHURC1-FNTB、CIC、CLASP2、CLEC16A、CLEC9A、CNKSR3、CNOT8、COL15A1、COX18、CPS1、CREBBP、CRKL、CSF1R、CSF3R、CTAGE5、CTCF、CTLA4、CTNNB1、CTSC、CUL3、CXCR4、CYBA、CYFIP1、CYLD、CYP19A1、CYP2B6、CYP2C19、CYP2C8、CYP2D6、DARS2、DAXX、DCHS2、DDR1、DDR2、DDX19B、DDX58、DEPDC5、DHFR、DIAPH1、DIAPH2、DICER1、DIS3、DLC1、DMXL1、DNAJB1、DNAJC11、DNMT1、DNMT3A、DNMT3B、DOCK11、DOT1L、DPP6、DPYD、DSCAM、E2F3、EBP、EED、EGFR、EIF1AX、EIF4E、EIF4G3、ELFN1、ELMOD2、EML4、ENOSF1、ENSA、EP300、EPCAM、EPG5、EPHA3、EPHA5、EPHA7、EPHB1、EPYC、ERBB2、ERBB3、ERBB4、ERCC1、ERCC2、ERCC3、ERCC4、ERG、ERI1、ERRFI1、ESR1、ETV1、ETV4、ETV5、ETV6、EWSR1、EXOSC8、EZH2、EZR、FAM149A、FAM153B、FAM161A、FAM175A、FAM184B、FAM20A、FAM46C、FANCA、FANCC、FANCD2、FANCF、FANCG、FAS、FAT1、FBXO11、FBXW7、FGF10、FGF16、FGF19、FGF3、FGF4、FGF6、FGFR1、FGFR2、FGFR3、FGFR4、FH、FLCN、FLI1、FLOT1、FLT1、FLT3、FLT4、FMNL2、FMO1、FMR1、FNBP4、FOLH1B、FOXA1、FOXL2、FOXO1、FOXP1、FPGT-TNNI3K、FUBP1、FUS、FXR1、GABRP、GALNT12、GALNT14、GANC、GATA1、GATA2、GATA3、GIPC1、GLI1、GMEB1、GNA11、GNA13、GNAQ、GNAS、GPC4、GPM6A、GRB10、GREM1、GRIK2、GRIN2A、GSK3B、GSKIP、GSTA1、GSTM1、GSTP1、GUCY1A2、H3F3A、HAUS2、HAUS6、HCAR2、HDGFRP3、HERC6、HEY1、HGF、HIST1H1C、HIST1H3B、HLA-A、HLA-B、HLA-C、HMCN1、HNF1A、HNF4A、HOMER1、HRAS、HSD17B11、HSD3B1、HSPA1B、HSPA4、HSPA5、HSPH1、HTT、HYOU1、IARS、ICOSLG、ID2、ID3、IDH1、IDH2、IGF1、IGF1R、IGF2、IKBKE、IKZF1、IL10、IL13RA1、IL7R、IMPG1、INHBA、INPP4A、INPP4B、IRF4、IRF6、IRF8、IRS2、ITGAL、JAK1、JAK2、JAK3、JUN、KDM5A、KDM5C、KDM6A、KDR、KEAP1、KIAA1210、KIAA1841、KIT、KLF4、KMT2A、KMT2C、KMT2D、KPNA4、KPNB1、KRAS、KTN1、LAMA3、LATS1、LATS2、LEPR、LMO1、LNPEP、LONRF3、LRP2、LRRC16A、LRRC34、LYN、MALT1、MAP2K1、MAP2K2、MAP2K4、MAP3K13、MAP3K1、MAP3K4、MAP4K3、MAP4K5、MAPK1、MAPKAP1、MAPKBP1、MARK1、MARK3、MAX、MCL1、MDC1、MDM2、MDM4、MED12、MED12L、MED14、MED19、MEF2BNB-MEF2B、MEIS1、MEN1、MET、METTL9、MITF、MLH1、MLH3、MMP16、MMP3、MPL、MRE11A、MRPL19、MS4A13、MSANTD3-TMEFF1、MSH2、MSH3、MSH6、MTF1、MTF2、MTHFR、MTOR、MTR、MTRR、MUTYH、MYADM、MYB、MYC、MYCL、MYCN、MYD88、MYO10、MYOD1、MYOM1、MZT2A、NAB1、NAMPT、NAPG、NAV1、NBAS、NBEAL1、NBN、NCOA6、NCOR1、NEDD4L、NEO1、NF1、NF2、NFE2L2、NFKBIA、NFXL1、NKAP、NKX2-1、NLRP7、NOTCH1、NOTCH2、NOTCH3、NOTCH4、NPM1、NR1I3、NRAS、NRG1、NRG4、NSD1、NT5C2、NTHL1、NTRK1、NTRK2、NTRK3、NUDT13、NUP85、NUP93、OSBP、OTOGL、OTOS、PAK1、PAK7、PALB2、PAPOLG、PAQR8、PARD6B、PARK2、PARP1、PARP2、PARP3、PARP8、PAX3、PAX5、PBRM1、PDCD1、PDCD1LG2、PDE4D、PDGFRA、PDGFRB、PDPK1、PDS5A、PFKP、PGBD1、PGR、PGRMC2、PHF20、PIGF、PIK3C2G、PIK3C3、PIK3CA、PIK3CB、PIK3CD、PIK3CG、PIK3R1、PIK3R3、PIM1、PKHD1、PLCG2、PLEKHA1、PLEKHH2、PLXNC1、PMS1、PMS2、PNO1、POLA1、POLD1、POLE、POSTN、PPARG、PPP1R21、PPP2R1A、PRDM1、PREX2、PRKAR1A、PRKCI、PRKDC、PRPF39、PRPF4、PTCH1、PTEN、PTK2、PTPN11、PTPN4、PTPRD、PTPRJ、PTPRS、PTPRT、PURA、RAB2B、RABGAP1L、RAC1、RAD21、RAD50、RAD51B、RAD51C、RAD51D、RAD51、RAD52、RAD54L、RAF1、RALGAPB、RAP2B、RARA、RASA1、RB1、RBM10、RBM27、RECQL4、REL、RET、RFC1、RFWD2、RHOA、RHOT1、RICTOR、RIPK2、RIT1、RNF112、RNF19A、RNF43、ROBO1、ROS1、RPF2、RPRD1A、RPS6KB1、RPTOR、RRM1、RRP1B、RUNX1、RWDD1、RYBP、RYR2、SASH1、SCOC、SDHA、SDHAF2、SDHB、SDHC、SEL1L3、SEMA3C、SEMA3E、SERTAD4、SETD2、SF3B1、SFXN4、SH2D1A、SHQ1、SHROOM3、SIMC1、SIPA1L2、SKA3、SLC13A1、SLC22A2、SLC25A13、SLC30A5、SLC31A1、SLC35B1、SLC7A8、SLC9C2、SLCO1B1、SLCO1B3、SLIT1、SLX4、SMAD2、SMAD3、SMAD4、SMARCA4、SMARCB1、SMO、SNX6、SOCS1、SOD2、SOX17、SOX2、SOX9、SPEN、SPOP、SRC、SRSF3、SRY、STAB2、STAG2、STARD4、STAT3、STK11、STMN1、STRBP、STT3A、STYX、SUCLG1、SUFU、SUZ12、SYK、SYNE2、TAF15、TAOK3、TARBP1、TBC1D8B、TBCD、TBX3、TECPR2、TENM3、TERT、TET1、TET2、TFDP1、TFRC、TGFBR1、TGFBR2、TMEM126B、TMEM127、TMEM132D、TMEM67、TMPRSS15、TMPRSS2、TMTC4、TNFAIP3、TNFRSF14、TNFSF13B、TNIK、TNKS、TNRC18、TOP1、TOP2B、TP53、TP63、TPH1、TPM1、TRA2A、TRAF7、TRIM24、TRIM25、TSC1、TSC2、TSHR、TSN、TTC1、TTC6、TTN、TUBD1、TXNDC16、TXNRD1、U2AF1、UBAP2L、UBE2E3、UBE4A、UBN2、UBXN7、UGT1A1、ULK2、ULK4、UMPS、UPF2、USP11、USP34、USP9Y、UTS2、UTY、VEGFA、VHL、VSIG10、WDR5、WHSC1、WHSC1L1、WT1、XIAP、XPC、XPO1、XRCC1、XRCC2、YAP1、YLPM1、YWHAE、ZBBX、ZBTB40、ZDHHC17、ZDHHC20、ZMYM2、ZMYM4、ZNF195、ZNF280D、ZNF283、ZNF2、ZNF367、ZNF711、ZNF805、ZNF91、ZZZ3、ADGRG6、CFAP221、CFAP53、CXCL8、GPAT3、MALRD1、PRELID3B、RIC1、SUGCT、TERT-promoter、SDHD、PIK3R2、P2RY8、CRLF2、ALG9；所述试剂盒包括同时检测769个基因突变的试剂。

进一步地，上述试剂为基因测序用试剂，优选为高通量测序用试剂。

更进一步地，上述高通量测序用试剂为检测基因突变的NGS panel。

更进一步地，上述试剂是检测人血浆中ctDNA基因突变的试剂。

本发明还提供了一种预测非小细胞肺癌术后复发的试剂盒，它含有检测上述769个基因突变的试剂。

进一步地，上述试剂为基因测序用试剂，优选为高通量测序用试剂。

更进一步地，上述高通量基因测序用试剂为检测基因突变的NGS panel。

更进一步地，上述试剂是检测人血浆中ctDNA基因突变的试剂。

本发明的有益效果如下：

(1)本发明的试剂盒用于血液ctDNA检测，能够准确、有效地鉴别NSCLC术后复发高风险和低风险患者；

(2)本发明的试剂盒用于血液ctDNA检测，能够在术前和术后1个月内预测NSCLC患者术后复发。临床上辅助治疗开始的时间通常在术后1-2月内，因此本发明可以为NSCLC患者术后辅助治疗决策的制定提供参考。

(3)手术切除主要用于I-III NSCLC患者的治疗，其中目前临床上I期患者所占比例最大。本发明对I期和II-III期患者术后复发均有显著预测作用，具有良好的临床适用性。

(4)本发明的NGS panel为固定panel，具有成本低、使用便捷、检测周期短的优点。

本发明所述NGS panel是指基于二代测序技术的基因panel，它是一种可通过二代测序技术同时检测多个基因的组合的检测产品。

ctDNA指血液循环肿瘤DNA。

本发明所述的769个基因的Ensembl ID如下：

ABCA13：ENSG00000179869；ABCA8：ENSG00000141338；

ABCB1：ENSG00000085563；ABCC2：ENSG00000023839；

ABCC9：ENSG00000069431；ABL1：ENSG00000097007；

ACADSB：ENSG00000196177；ACOT13：ENSG00000112304；

ACRC：ENSG00000147174；ADCY8：ENSG00000155897；

AGAP1：ENSG00000157985；AK7：ENSG00000140057；

AKT1：ENSG00000142208；AKT2：ENSG00000105221；

AKT3：ENSG00000117020；ALDH5A1：ENSG00000112294；

ALK：ENSG00000171094；ALOX12B：ENSG00000179477；

ALS2CR11：ENSG00000155754；AMBRA1：ENSG00000110497；

AMER1：ENSG00000184675；ANAPC7：ENSG00000196510；

ANKRD28：ENSG00000206560；ANKRD46：ENSG00000186106；

ANO1：ENSG00000131620；APAF1：ENSG00000120868；

APC：ENSG00000134982；APOL2：ENSG00000128335；

APOPT1：ENSG00000256053；AQR：ENSG00000021776；

ARAF：ENSG00000078061；AR：ENSG00000169083；

ARHGAP26：ENSG00000145819；ARHGAP4：ENSG00000089820；

ARHGAP6：ENSG00000047648；ARHGEF12：ENSG00000196914；

ARHGEF3：ENSG00000163947；ARID1A：ENSG00000117713；

ARID1B：ENSG00000049618；ARID2：ENSG00000189079；

ARID4A：ENSG00000032219；ARID5B：ENSG00000150347；

ARL13B：ENSG00000169379；ARL4A：ENSG00000122644；

ARL6IP6：ENSG00000177917；ARMC5：ENSG00000140691；

ASB11：ENSG00000165192；ASH1L：ENSG00000116539；

ASPH：ENSG00000198363；ASXL1：ENSG00000171456；

ASXL2：ENSG00000143970；ATG3：ENSG00000144848；

ATG4C：ENSG00000125703；ATIC：ENSG00000138363；

ATM：ENSG00000149311；ATP6V0A1：ENSG00000033627；

ATP6V0A2：ENSG00000185344；ATP6V0A4：ENSG00000105929；

ATP6V0E1：ENSG00000113732；ATP8A1：ENSG00000124406；

ATR：ENSG00000175054；ATRX：ENSG00000085224；

AURKA：ENSG00000087586；AURKB：ENSG00000178999；

AXIN1：ENSG00000103126；AXIN2：ENSG00000168646；

AXL：ENSG00000167601；B2M：ENSG00000166710；

BAP1：ENSG00000163930；BARD1：ENSG00000138376；

BCAS1：ENSG00000064787；BCL2：ENSG00000171791；

BCL2L11：ENSG00000153094；BCL2L1：ENSG00000171552；

BCL6：ENSG00000113916；BCOR：ENSG00000183337；

BCR：ENSG00000186716；BIRC3：ENSG00000023445；

BIVM-ERCC5：ENSG00000270181；BLM：ENSG00000197299；

BMPR1A：ENSG00000107779；BRAF：ENSG00000157764；

BRCA1：ENSG00000012048；BRCA2：ENSG00000139618；

BRD4：ENSG00000141867；BRIP1：ENSG00000136492；

BRMS1L：ENSG00000100916；BRS3：ENSG00000102239；

BTF3：ENSG00000145741；BTG1：ENSG00000133639；

BTK：ENSG00000010671；C22orf23：ENSG00000128346；

C5orf15：ENSG00000113583；C5orf42：ENSG00000197603；

C7orf66：ENSG00000205174；C8orf34：ENSG00000165084；

CAB39：ENSG00000135932；CACNA1E：ENSG00000198216；

CACNA2D1：ENSG00000153956；CALD1：ENSG00000122786；

CALM2：ENSG00000143933；CALR：ENSG00000179218；

CARD11：ENSG00000198286；CASP8：ENSG00000064012；

CAST：ENSG00000153113；CBFB：ENSG00000067955；

CBL：ENSG00000110395；CBR3：ENSG00000159231；

CBR4：ENSG00000145439；CCDC157：ENSG00000187860；

CCDC18：ENSG00000122483；CCND1：ENSG00000110092；

CCND2：ENSG00000118971；CCND3：ENSG00000112576；

CCNE1：ENSG00000105173；CD274：ENSG00000120217；

CD40：ENSG00000101017；CD74：ENSG00000019582；

CD79A：ENSG00000105369；CD79B：ENSG00000007312；

CDA：ENSG00000158825；CDC73：ENSG00000134371；

CDCA8：ENSG00000134690；CDH1：ENSG00000039068；

CDK12：ENSG00000167258；CDK4：ENSG00000135446；

CDK6：ENSG00000105810；CDK8：ENSG00000132964；

CDKL3：ENSG00000006837；CDKN1A：ENSG00000124762；

CDKN1B：ENSG00000111276；CDKN2A：ENSG00000147889；

CDKN2B：ENSG00000147883；CDKN2C：ENSG00000123080；

CDO1：ENSG00000129596；CEBPA：ENSG00000245848；

CEP120：ENSG00000168944；CEP290：ENSG00000198707；

CHD1：ENSG00000153922；CHD2：ENSG00000173575；

CHEK1：ENSG00000149554；CHEK2：ENSG00000183765；

CHRM3：ENSG00000133019；CHURC1-FNTB：ENSG00000125954；

CIC：ENSG00000079432；CLASP2：ENSG00000163539；

CLEC16A：ENSG00000038532；CLEC9A：ENSG00000197992；

CNKSR3：ENSG00000153721；CNOT8：ENSG00000155508；

COL15A1：ENSG00000204291；COX18：ENSG00000163626；

CPS1：ENSG00000021826；CREBBP：ENSG00000005339；

CRKL：ENSG00000099942；CSF1R：ENSG00000182578；

CSF3R：ENSG00000119535；CTAGE5：ENSG00000150527；

CTCF：ENSG00000102974；CTLA4：ENSG00000163599；

CTNNB1：ENSG00000168036；CTSC：ENSG00000109861；

CUL3：ENSG00000036257；CXCR4：ENSG00000121966；

CYBA：ENSG00000051523；CYFIP1：ENSG00000068793；

CYLD：ENSG00000083799；CYP19A1：ENSG00000137869；

CYP2B6：ENSG00000197408；CYP2C19：ENSG00000165841；

CYP2C8：ENSG00000138115；CYP2D6：ENSG00000100197；

DARS2：ENSG00000117593；DAXX：ENSG00000204209；

DCHS2：ENSG00000197410；DDR1：ENSG00000204580；

DDR2：ENSG00000162733；DDX19B：ENSG00000157349；

DDX58：ENSG00000107201；DEPDC5：ENSG00000100150；

DHFR：ENSG00000228716；DIAPH1：ENSG00000131504；

DIAPH2：ENSG00000147202；DICER1：ENSG00000100697；

DIS3：ENSG00000083520；DLC1：ENSG00000164741；

DMXL1：ENSG00000172869；DNAJB1：ENSG00000132002；

DNAJC11：ENSG00000007923；DNMT1：ENSG00000130816；

DNMT3A：ENSG00000119772；DNMT3B：ENSG00000088305；

DOCK11：ENSG00000147251；DOT1L：ENSG00000104885；

DPP6：ENSG00000130226；DPYD：ENSG00000188641；

DSCAM：ENSG00000171587；E2F3：ENSG00000112242；

EBP：ENSG00000147155；EED：ENSG00000074266；

EGFR：ENSG00000146648；EIF1AX：ENSG00000173674；

EIF4E：ENSG00000151247；EIF4G3：ENSG00000075151；

ELFN1：ENSG00000225968；ELMOD2：ENSG00000179387；

EML4：ENSG00000143924；ENOSF1：ENSG00000132199；

ENSA：ENSG00000143420；EP300：ENSG00000100393；

EPCAM：ENSG00000119888；EPG5：ENSG00000152223；

EPHA3：ENSG00000044524；EPHA5：ENSG00000145242；

EPHA7：ENSG00000135333；EPHB1：ENSG00000154928；

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ERCC1：ENSG00000012061；ERCC2：ENSG00000104884；

ERCC3：ENSG00000163161；ERCC4：ENSG00000175595；

ERG：ENSG00000157554；ERI1：ENSG00000104626；

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ETV5：ENSG00000244405；ETV6：ENSG00000139083；

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FANCC：ENSG00000158169；FANCD2：ENSG00000144554；

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FAS：ENSG00000026103；FAT1：ENSG00000083857；

FBXO11：ENSG00000138081；FBXW7：ENSG00000109670；

FGF10：ENSG00000070193；FGF16：ENSG00000196468；

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FGF4：ENSG00000075388；FGF6：ENSG00000111241；

FGFR1：ENSG00000077782；FGFR2：ENSG00000066468；

FGFR3：ENSG00000068078；FGFR4：ENSG00000160867；

FH：ENSG00000091483；FLCN：ENSG00000154803；

FLI1：ENSG00000151702；FLOT1：ENSG00000137312；

FLT1：ENSG00000102755；FLT3：ENSG00000122025；

FLT4：ENSG00000037280；FMNL2：ENSG00000157827；

FMO1：ENSG00000010932；FMR1：ENSG00000102081；

FNBP4：ENSG00000109920；FOLH1B：ENSG00000134612；

FOXA1：ENSG00000129514；FOXL2：ENSG00000183770；

FOXO1：ENSG00000150907；FOXP1：ENSG00000114861；

FPGT-TNNI3K：ENSG00000259030；FUBP1：ENSG00000162613；

FUS：ENSG00000089280；FXR1：ENSG00000114416；

GABRP：ENSG00000094755；GALNT12：ENSG00000119514；

GALNT14：ENSG00000158089；GANC：ENSG00000214013；

GATA1：ENSG00000102145；GATA2：ENSG00000179348；

GATA3：ENSG00000107485；GIPC1：ENSG00000123159；

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GNA11：ENSG00000088256；GNA13：ENSG00000120063；

GNAQ：ENSG00000156052；GNAS：ENSG00000087460；

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GRIK2：ENSG00000164418；GRIN2A：ENSG00000183454；

GSK3B：ENSG00000082701；GSKIP：ENSG00000100744；

GSTA1：ENSG00000243955；GSTM1：ENSG00000134184；

GSTP1：ENSG00000084207；GUCY1A2：ENSG00000152402；

H3F3A：ENSG00000163041；HAUS2：ENSG00000137814；

HAUS6：ENSG00000147874；HCAR2：ENSG00000182782；

HDGFRP3：ENSG00000166503；HERC6：ENSG00000138642；

HEY1：ENSG00000164683；HGF：ENSG00000019991；

HIST1H1C：ENSG00000187837；HIST1H3B：ENSG00000124693；

HLA-A：ENSG00000206503；HLA-B：ENSG00000234745；

HLA-C：ENSG00000204525；HMCN1：ENSG00000143341；

HNF1A：ENSG00000135100；HNF4A：ENSG00000101076；

HOMER1：ENSG00000152413；HRAS：ENSG00000174775；

HSD17B11：ENSG00000198189；HSD3B1：ENSG00000203857；

HSPA1B：ENSG00000204388；HSPA4：ENSG00000170606；

HSPA5：ENSG00000044574；HSPH1：ENSG00000120694；

HTT：ENSG00000197386；HYOU1：ENSG00000149428；

IARS：ENSG00000196305；ICOSLG：ENSG00000160223；

ID2：ENSG00000115738；ID3：ENSG00000117318；IDH1：ENSG00000138413；IDH2：ENSG00000182054；IGF1：ENSG00000017427；

IGF1R：ENSG00000140443；IGF2：ENSG00000167244；

IKBKE：ENSG00000143466；IKZF1：ENSG00000185811；

IL10：ENSG00000136634；IL13RA1：ENSG00000131724；

IL7R：ENSG00000168685；IMPG1：ENSG00000112706；

INHBA：ENSG00000122641；INPP4A：ENSG00000040933；

INPP4B：ENSG00000109452；IRF4：ENSG00000137265；

IRF6：ENSG00000117595；IRF8：ENSG00000140968；

IRS2：ENSG00000185950；ITGAL：ENSG00000005844；

JAK1：ENSG00000162434；JAK2：ENSG00000096968；

JAK3：ENSG00000105639；JUN：ENSG00000177606；

KDM5A：ENSG00000073614；KDM5C：ENSG00000126012；

KDM6A：ENSG00000147050；KDR：ENSG00000128052；

KEAP1：ENSG00000079999；KIAA1210：ENSG00000250423；

KIAA1841：ENSG00000162929；KIT：ENSG00000157404；

KLF4：ENSG00000136826；KMT2A：ENSG00000118058；

KMT2C：ENSG00000055609；KMT2D：ENSG00000167548；

KPNA4：ENSG00000186432；KPNB1：ENSG00000108424；

KRAS：ENSG00000133703；KTN1：ENSG00000126777；

LAMA3：ENSG00000053747；LATS1：ENSG00000131023；

LATS2：ENSG00000150457；LEPR：ENSG00000116678；

LMO1：ENSG00000166407；LNPEP：ENSG00000113441；

LONRF3：ENSG00000175556；LRP2：ENSG00000081479；

LRRC16A：ENSG00000079691；LRRC34：ENSG00000171757；

LYN：ENSG00000254087；MALT1：ENSG00000172175；

MAP2K1：ENSG00000169032；MAP2K2：ENSG00000126934；

MAP2K4：ENSG00000065559；MAP3K13：ENSG00000073803；

MAP3K1：ENSG00000095015；MAP3K4：ENSG00000085511；

MAP4K3：ENSG00000011566；MAP4K5：ENSG00000012983；

MAPK1：ENSG00000100030；MAPKAP1：ENSG00000119487；

MAPKBP1：ENSG00000137802；MARK1：ENSG00000116141；

MARK3：ENSG00000075413；MAX：ENSG00000125952；

MCL1：ENSG00000143384；MDC1：ENSG00000137337；

MDM2：ENSG00000135679；MDM4：ENSG00000198625；

MED12：ENSG00000184634；MED12L：ENSG00000144893；

MED14：ENSG00000180182；MED19：ENSG00000156603；

MEF2BNB-MEF2B：ENSG00000064489；MEIS1：ENSG00000143995；

MEN1：ENSG00000133895；MET：ENSG00000105976；

METTL9：ENSG00000197006；MITF：ENSG00000187098；

MLH1：ENSG00000076242；MLH3：ENSG00000119684；

MMP16：ENSG00000156103；MMP3：ENSG00000149968；

MPL：ENSG00000117400；MRE11A：ENSG00000020922；

MRPL19：ENSG00000115364；MS4A13：ENSG00000204979；

MSANTD3-TMEFF1：ENSG00000251349；MSH2：ENSG00000095002；

MSH3：ENSG00000113318；MSH6：ENSG00000116062；

MTF1：ENSG00000188786；MTF2：ENSG00000143033；

MTHFR：ENSG00000177000；MTOR：ENSG00000198793；

MTR：ENSG00000116984；MTRR：ENSG00000124275；

MUTYH：ENSG00000132781；MYADM：ENSG00000179820；

MYB：ENSG00000118513；MYC：ENSG00000136997；

MYCL：ENSG00000116990；MYCN：ENSG00000134323；

MYD88：ENSG00000172936；MYO10：ENSG00000145555；

MYOD1：ENSG00000129152；MYOM1：ENSG00000101605；

MZT2A：ENSG00000173272；NAB1：ENSG00000138386；

NAMPT：ENSG00000105835；NAPG：ENSG00000134265；

NAV1：ENSG00000134369；NBAS：ENSG00000151779；

NBEAL1：ENSG00000144426；NBN：ENSG00000104320；

NCOA6：ENSG00000198646；NCOR1：ENSG00000141027；

NEDD4L：ENSG00000049759；NEO1：ENSG00000067141；

NF1：ENSG00000196712；NF2：ENSG00000186575；

NFE2L2：ENSG00000116044；NFKBIA：ENSG00000100906；

NFXL1：ENSG00000170448；NKAP：ENSG00000101882；

NKX2-1：ENSG00000136352；NLRP7：ENSG00000167634；

NOTCH1：ENSG00000148400；NOTCH2：ENSG00000134250；

NOTCH3：ENSG00000074181；NOTCH4：ENSG00000204301；

NPM1：ENSG00000181163；NR1I3：ENSG00000143257；

NRAS：ENSG00000213281；NRG1：ENSG00000157168；

NRG4：ENSG00000169752；NSD1：ENSG00000165671；

NT5C2：ENSG00000076685；NTHL1：ENSG00000065057；

NTRK1：ENSG00000198400；NTRK2：ENSG00000148053；

NTRK3：ENSG00000140538；NUDT13：ENSG00000166321；

NUP85：ENSG00000125450；NUP93：ENSG00000102900；

OSBP：ENSG00000110048；OTOGL：ENSG00000165899；

OTOS：ENSG00000178602；PAK1：ENSG00000149269；

PAK7：ENSG00000101349；PALB2：ENSG00000083093；

PAPOLG：ENSG00000115421；PAQR8：ENSG00000170915；

PARD6B：ENSG00000124171；PARK2：ENSG00000185345；

PARP1：ENSG00000143799；PARP2：ENSG00000129484；

PARP3：ENSG00000041880；PARP8：ENSG00000151883；

PAX3：ENSG00000135903；PAX5：ENSG00000196092；

PBRM1：ENSG00000163939；PDCD1：ENSG00000188389；

PDCD1LG2：ENSG00000197646；PDE4D：ENSG00000113448；

PDGFRA：ENSG00000134853；PDGFRB：ENSG00000113721；

PDPK1：ENSG00000140992；PDS5A：ENSG00000121892；

PFKP：ENSG00000067057；PGBD1：ENSG00000137338；

PGR：ENSG00000082175；PGRMC2：ENSG00000164040；

PHF20：ENSG00000025293；PIGF：ENSG00000151665；

PIK3C2G：ENSG00000139144；PIK3C3：ENSG00000078142；

PIK3CA：ENSG00000121879；PIK3CB：ENSG00000051382；

PIK3CD：ENSG00000171608；PIK3CG：ENSG00000105851；

PIK3R1：ENSG00000145675；PIK3R3：ENSG00000117461；

PIM1：ENSG00000137193；PKHD1：ENSG00000170927；

PLCG2：ENSG00000197943；PLEKHA1：ENSG00000107679；

PLEKHH2：ENSG00000152527；PLXNC1：ENSG00000136040；

PMS1：ENSG00000064933；PMS2：ENSG00000122512；

PNO1：ENSG00000115946；POLA1：ENSG00000101868；

POLD1：ENSG00000062822；POLE：ENSG00000177084；

POSTN：ENSG00000133110；PPARG：ENSG00000132170；

PPP1R21：ENSG00000162869；PPP2R1A：ENSG00000105568；

PRDM1：ENSG00000057657；PREX2：ENSG00000046889；

PRKAR1A：ENSG00000108946；PRKCI：ENSG00000163558；

PRKDC：ENSG00000253729；PRPF39：ENSG00000185246；

PRPF4：ENSG00000136875；PTCH1：ENSG00000185920；

PTEN：ENSG00000171862；PTK2：ENSG00000169398；

PTPN11：ENSG00000179295；PTPN4：ENSG00000088179；

PTPRD：ENSG00000153707；PTPRJ：ENSG00000149177；

PTPRS：ENSG00000105426；PTPRT：ENSG00000196090；

PURA：ENSG00000185129；RAB2B：ENSG00000129472；

RABGAP1L：ENSG00000152061；RAC1：ENSG00000136238；

RAD21：ENSG00000164754；RAD50：ENSG00000113522；

RAD51B：ENSG00000182185；RAD51C：ENSG00000108384；

RAD51D：ENSG00000185379；RAD51：ENSG00000051180；

RAD52：ENSG00000002016；RAD54L：ENSG00000085999；

RAF1：ENSG00000132155；RALGAPB：ENSG00000170471；

RAP2B：ENSG00000181467；RARA：ENSG00000131759；

RASA1：ENSG00000145715；RB1：ENSG00000139687；

RBM10：ENSG00000182872；RBM27：ENSG00000091009；

RECQL4：ENSG00000160957；REL：ENSG00000162924；

RET：ENSG00000165731；RFC1：ENSG00000035928；

RFWD2：ENSG00000143207；RHOA：ENSG00000067560；

RHOT1：ENSG00000126858；RICTOR：ENSG00000164327；

RIPK2：ENSG00000104312；RIT1：ENSG00000143622；

RNF112：ENSG00000128482；RNF19A：ENSG00000034677；

RNF43：ENSG00000108375；ROBO1：ENSG00000169855；

ROS1：ENSG00000047936；RPF2：ENSG00000197498；

RPRD1A：ENSG00000141425；RPS6KB1：ENSG00000108443；

RPTOR：ENSG00000141564；RRM1：ENSG00000167325；

RRP1B：ENSG00000160208；RUNX1：ENSG00000159216；

RWDD1：ENSG00000111832；RYBP：ENSG00000163602；

RYR2：ENSG00000198626；SASH1：ENSG00000111961；

SCOC：ENSG00000153130；SDHA：ENSG00000073578；

SDHAF2：ENSG00000167985；SDHB：ENSG00000117118；

SDHC：ENSG00000143252；SEL1L3：ENSG00000091490；

SEMA3C：ENSG00000075223；SEMA3E：ENSG00000170381；

SERTAD4：ENSG00000082497；SETD2：ENSG00000181555；

SF3B1：ENSG00000115524；SFXN4：ENSG00000183605；

SH2D1A：ENSG00000183918；SHQ1：ENSG00000144736；

SHROOM3：ENSG00000138771；SIMC1：ENSG00000170085；

SIPA1L2：ENSG00000116991；SKA3：ENSG00000165480；

SLC13A1：ENSG00000081800；SLC22A2：ENSG00000112499；

SLC25A13：ENSG00000004864；SLC30A5：ENSG00000145740；

SLC31A1：ENSG00000136868；SLC35B1：ENSG00000121073；

SLC7A8：ENSG00000092068；SLC9C2：ENSG00000162753；

SLCO1B1：ENSG00000134538；SLCO1B3：ENSG00000111700；

SLIT1：ENSG00000187122；SLX4：ENSG00000188827；

SMAD2：ENSG00000175387；SMAD3：ENSG00000166949；

SMAD4：ENSG00000141646；SMARCA4：ENSG00000127616；

SMARCB1：ENSG00000099956；SMO：ENSG00000128602；

SNX6：ENSG00000129515；SOCS1：ENSG00000185338；

SOD2：ENSG00000112096；SOX17：ENSG00000164736；

SOX2：ENSG00000181449；SOX9：ENSG00000125398；

SPEN：ENSG00000065526；SPOP：ENSG00000121067；

SRC：ENSG00000197122；SRSF3：ENSG00000112081；

SRY：ENSG00000184895；STAB2：ENSG00000136011；

STAG2：ENSG00000101972；STARD4：ENSG00000164211；

STAT3：ENSG00000168610；STK11：ENSG00000118046；

STMN1：ENSG00000117632；STRBP：ENSG00000165209；

STT3A：ENSG00000134910；STYX：ENSG00000198252；

SUCLG1：ENSG00000163541；SUFU：ENSG00000107882；

SUZ12：ENSG00000178691；SYK：ENSG00000165025；

SYNE2：ENSG00000054654；TAF15：ENSG00000172660；

TAOK3：ENSG00000135090；TARBP1：ENSG00000059588；

TBC1D8B：ENSG00000133138；TBCD：ENSG00000141556；

TBX3：ENSG00000135111；TECPR2：ENSG00000196663；

TENM3：ENSG00000218336；TERT：ENSG00000164362；

TET1：ENSG00000138336；TET2：ENSG00000168769；

TFDP1：ENSG00000198176；TFRC：ENSG00000072274；

TGFBR1：ENSG00000106799；TGFBR2：ENSG00000163513；

TMEM126B：ENSG00000171204；TMEM127：ENSG00000135956；

TMEM132D：ENSG00000151952；TMEM67：ENSG00000164953；

TMPRSS15：ENSG00000154646；TMPRSS2：ENSG00000184012；

TMTC4：ENSG00000125247；TNFAIP3：ENSG00000118503；

TNFRSF14：ENSG00000157873；TNFSF13B：ENSG00000102524；

TNIK：ENSG00000154310；TNKS：ENSG00000173273；

TNRC18：ENSG00000182095；TOP1：ENSG00000198900；

TOP2B：ENSG00000077097；TP53：ENSG00000141510；

TP63：ENSG00000073282；TPH1：ENSG00000129167；

TPM1：ENSG00000140416；TRA2A：ENSG00000164548；

TRAF7：ENSG00000131653；TRIM24：ENSG00000122779；

TRIM25：ENSG00000121060；TSC1：ENSG00000165699；

TSC2：ENSG00000103197；TSHR：ENSG00000165409；

TSN：ENSG00000211460；TTC1：ENSG00000113312；

TTC6：ENSG00000139865；TTN：ENSG00000155657；

TUBD1：ENSG00000108423；TXNDC16：ENSG00000087301；

TXNRD1：ENSG00000198431；U2AF1：ENSG00000160201；

UBAP2L：ENSG00000143569；UBE2E3：ENSG00000170035；

UBE4A：ENSG00000110344；UBN2：ENSG00000157741；

UBXN7：ENSG00000163960；UGT1A1：ENSG00000241635；

ULK2：ENSG00000083290；ULK4：ENSG00000168038；

UMPS：ENSG00000114491；UPF2：ENSG00000151461；

USP11：ENSG00000102226；USP34：ENSG00000115464；

USP9Y：ENSG00000114374；UTS2：ENSG00000049247；

UTY：ENSG00000183878；VEGFA：ENSG00000112715；

VHL：ENSG00000134086；VSIG10：ENSG00000176834；

WDR5：ENSG00000196363；WHSC1：ENSG00000109685；

WHSC1L1：ENSG00000147548；WT1：ENSG00000184937；

XIAP：ENSG00000101966；XPC：ENSG00000154767；

XPO1：ENSG00000082898；XRCC1：ENSG00000073050；

XRCC2：ENSG00000196584；YAP1：ENSG00000137693；

YLPM1：ENSG00000119596；YWHAE：ENSG00000108953；

ZBBX：ENSG00000169064；ZBTB40：ENSG00000184677；

ZDHHC17：ENSG00000186908；ZDHHC20：ENSG00000180776；

ZMYM2：ENSG00000121741；ZMYM4：ENSG00000146463；

ZNF195：ENSG00000005801；ZNF280D：ENSG00000137871；

ZNF283：ENSG00000167637；ZNF2：ENSG00000163067；

ZNF367：ENSG00000165244；ZNF711：ENSG00000147180；

ZNF805：ENSG00000204524；ZNF91：ENSG00000167232；

ZZZ3：ENSG00000036549；ADGRG6：ENSG00000112414；

CFAP221：ENSG00000163075；CFAP53：ENSG00000172361；

CXCL8：ENSG00000169429；GPAT3：ENSG00000138678；

MALRD1：ENSG00000204740；PRELID3B：ENSG00000101166；

RIC1：ENSG00000107036；SUGCT：ENSG00000175600；

TERT-promoter：ENSG00000164362；

SDHD：ENSG00000204370；

PIK3R2：ENSG00000105647；

P2RY8：ENSG00000182162；

CRLF2：ENSG00000205755；

ALG9：ENSG00000086848。

显然，根据本发明的上述内容，按照本领域的普通技术知识和惯用手段，在不脱离本发明上述基本技术思想前提下，还可以做出其它多种形式的修改、替换或变更。

以下通过实施例形式的具体实施方式，对本发明的上述内容再作进一步的详细说明。但不应将此理解为本发明上述主题的范围仅限于以下的实例。凡基于本发明上述内容所实现的技术均属于本发明的范围。

附图说明

图1为实施例的受试者入组流程。

图2为实施例中NSCLC患者任一ctDNA阳性组对比持续ctDNA阴性组的KM生存曲线。

图3为实施例中I期患者任一ctDNA阳性组对比持续ctDNA阴性组的KM生存曲线。

图4为实施例中II-III期患者任一ctDNA阳性组对比持续ctDNA阴性组的KM生存曲线。

图5为实施例中术前ctDNA阳性组对比ctDNA阴性组的KM生存曲线。

图6为实施例中术后3天ctDNA阳性组对比ctDNA阴性组的KM生存曲线。

图7为实施例中术后1月ctDNA阳性组对比ctDNA阴性组的KM生存曲线。

具体实施方式

实施例1、本发明NGS panel检测血液ctDNA并预测非小细胞肺癌术后复发的方法

发明人于2017年9月至2019年6月开展了一项前瞻性队列研究，对基于本发明NGSpanel的血液ctDNA检测在NSCLC术后复发预测中的作用进行了分析。

本研究中ctDNA检测在无锡臻和生物科技有限公司进行。本发明NGS panel由NimbleGen公司制备并提供。

1.方法

(1)患者入组和样本采集：前瞻性纳入接受根治性切除的I-III期NSCLC患者，采集患者术前、术后3天和术后1月血液标本，同时收集患者肿瘤组织标本。患者术后每3-6月进行影像学复查，主要观察终点为无复发生存期(Recurrence-free survival,RFS)。

(2)DNA提取：使用MagMAX Cell-Free DNA(cfDNA)Isolation(ThermoFisher,USA)试剂盒提取血浆游离DNA。提取的DNA浓度使用Qubit dsDNA HS(High Sensitivity)AssayKit(Themo Fisher,USA)进行测定，并用Agilent 2100BioAnalyzer(Agilent,USA)对提取的DNA的质量进行评估。

(4)目标捕获和测序：使用HyperCap Target Enrichment Kit(Roche,Swiss)进行目标区域的捕获。捕获使用的Panel为本发明包括769个基因的panel(基因变异列表如前所述)，平均测序深度为3704×，cfDNA的平均测序深度为8793×，使用的测序策略为PE150。

(5)采用组织先验的方式识别血浆ctDNA突变，存在突变则定义为ctDNA阳性。

(6)统计分析：使用R软件包的生存率和Survminer分析NSCLC患者RFS。P值<0.05被认为具有统计学意义。

2.结果

(1)本研究共对来自313例I-III期NSCLC患者的902例围术期血浆标本进行分析，包括术前血浆313例、术后3天血浆280例、术后1月血浆309例，如图1所示。如图2所示，ctDNA在任一时间点出现阳性的患者(任一ctDNA阳性组)术后复发风险显著高于ctDNA在所有时间点持续阴性的患者(持续ctDNA阴性组)。相对于持续ctDNA阴性组，任一ctDNA阳性组的风险比(hazard ratio,HR)为4.8(P<0.001)。并且在校正常见的临床因素(如性别、年龄、吸烟史、肿瘤大小、TNM分期)后，任一ctDNA阳性是NSCLC术后复发的独立危险因素，如表1所示。

表1.Cox回归分析结果

(2)在亚组分析中，ctDNA阳性对I期和II-III期NSCLC患者术后复发均有预测作用。如图3和图4所示，任一ctDNA阳性组患者复发风险显著高于持续ctDNA阴性组患者(I期：HR 5.5，P<0.001；II-III期：HR 3.6，P＝0.004)。

(3)如图5-图7所示，当对各时间点单独分析时，术前、术后3天和术后1月的ctDNA状态均与NSCLC术后复发风险显著相关。相较于术前和术后3天，术后1月ctDNA阳性对NSCLC术后复发的预测效能更高(术前：HR 5.1，P<0.001；术后3天：HR 5.2，P<0.001；术后1月：HR17.2，P<0.001)。

3.结论

围手术期ctDNA在术前至术后1个月内均可有效预测NSCLC患者术后复发，且相比于术前和术后3天，术后1月ctDNA阳性对患者复发风险的预测均效能更高，说明术后1月可作为围手术期ctDNA检测的优选时间点。

一方面，利用本发明的试剂盒，在术前即可有效预测NSCLC患者术后复发的风险，对于存在其他基础性疾病而难以承受手术创伤的患者，可以为是否要对其进行手术治疗的临床决策提供参考；另一方面，本发明在术后一月内均可有效预测NSCLC患者的术后复发，而临床上辅助治疗开始的时间通常在术后1-2月内，因此本发明可以为NSCLC患者术后辅助治疗决策的制定提供参考。

此外，目前手术切除主要用于I-III NSCLC患者的治疗，而上述结果可以说明本发明对I-III期患者术后复发均有显著预测作用，具有良好的临床适用性。

总之，基于本发明对人血浆中ctDNA的769个基因突变信息进行检测，可在围手术期准确、有效地预测NSCLC患者术后复发，为术后治疗方案的制定提供参考，具有显著的临床价值和良好的应用前景。

Claims (4)

1.同时检测下列769个基因突变的试剂在制备预测非小细胞肺癌术后复发的试剂盒中的用途，所述试剂是检测人血浆中ctDNA基因突变的试剂：

ABCA13、ABCA8、ABCB1、ABCC2、ABCC9、ABL1、ACADSB、ACOT13、ACRC、ADCY8、AGAP1、AK7、AKT1、AKT2、AKT3、ALDH5A1、ALK、ALOX12B、ALS2CR11、AMBRA1、AMER1、ANAPC7、ANKRD28、ANKRD46、ANO1、APAF1、APC、APOL2、APOPT1、AQR、ARAF、AR、ARHGAP26、ARHGAP4、ARHGAP6、ARHGEF12、ARHGEF3、ARID1A、ARID1B、ARID2、ARID4A、ARID5B、ARL13B、ARL4A、ARL6IP6、ARMC5、ASB11、ASH1L、ASPH、ASXL1、ASXL2、ATG3、ATG4C、ATIC、ATM、ATP6V0A1、ATP6V0A2、ATP6V0A4、ATP6V0E1、ATP8A1、ATR、ATRX、AURKA、AURKB、AXIN1、AXIN2、AXL、B2M、BAP1、BARD1、BCAS1、BCL2、BCL2L11、BCL2L1、BCL6、BCOR、BCR、BIRC3、BIVM-ERCC5、BLM、BMPR1A、BRAF、BRCA1、BRCA2、BRD4、BRIP1、BRMS1L、BRS3、BTF3、BTG1、BTK、C22orf23、C5orf15、C5orf42、C7orf66、C8orf34、CAB39、CACNA1E、CACNA2D1、CALD1、CALM2、CALR、CARD11、CASP8、CAST、CBFB、CBL、CBR3、CBR4、CCDC157、CCDC18、CCND1、CCND2、CCND3、CCNE1、CD274、CD40、CD74、CD79A、CD79B、CDA、CDC73、CDCA8、CDH1、CDK12、CDK4、CDK6、CDK8、CDKL3、CDKN1A、CDKN1B、CDKN2A、CDKN2B、CDKN2C、CDO1、CEBPA、CEP120、CEP290、CHD1、CHD2、CHEK1、CHEK2、CHRM3、CHURC1-FNTB、CIC、CLASP2、CLEC16A、CLEC9A、CNKSR3、CNOT8、COL15A1、COX18、CPS1、CREBBP、CRKL、CSF1R、CSF3R、CTAGE5、CTCF、CTLA4、CTNNB1、CTSC、CUL3、CXCR4、CYBA、CYFIP1、CYLD、CYP19A1、CYP2B6、CYP2C19、CYP2C8、CYP2D6、DARS2、DAXX、DCHS2、DDR1、DDR2、DDX19B、DDX58、DEPDC5、DHFR、DIAPH1、DIAPH2、DICER1、DIS3、DLC1、DMXL1、DNAJB1、DNAJC11、DNMT1、DNMT3A、DNMT3B、DOCK11、DOT1L、DPP6、DPYD、DSCAM、E2F3、EBP、EED、EGFR、EIF1AX、EIF4E、EIF4G3、ELFN1、ELMOD2、EML4、ENOSF1、ENSA、EP300、EPCAM、EPG5、EPHA3、EPHA5、EPHA7、EPHB1、EPYC、ERBB2、ERBB3、ERBB4、ERCC1、ERCC2、ERCC3、ERCC4、ERG、ERI1、ERRFI1、ESR1、ETV1、ETV4、ETV5、ETV6、EWSR1、EXOSC8、EZH2、EZR、FAM149A、FAM153B、FAM161A、FAM175A、FAM184B、FAM20A、FAM46C、FANCA、FANCC、FANCD2、FANCF、FANCG、FAS、FAT1、FBXO11、FBXW7、FGF10、FGF16、FGF19、FGF3、FGF4、FGF6、FGFR1、FGFR2、FGFR3、FGFR4、FH、FLCN、FLI1、FLOT1、FLT1、FLT3、FLT4、FMNL2、FMO1、FMR1、FNBP4、FOLH1B、FOXA1、FOXL2、FOXO1、FOXP1、FPGT-TNNI3K、FUBP1、FUS、FXR1、GABRP、GALNT12、GALNT14、GANC、GATA1、GATA2、GATA3、GIPC1、GLI1、GMEB1、GNA11、GNA13、GNAQ、GNAS、GPC4、GPM6A、GRB10、GREM1、GRIK2、GRIN2A、GSK3B、GSKIP、GSTA1、GSTM1、GSTP1、GUCY1A2、H3F3A、HAUS2、HAUS6、HCAR2、HDGFRP3、HERC6、HEY1、HGF、HIST1H1C、HIST1H3B、HLA-A、HLA-B、HLA-C、HMCN1、HNF1A、HNF4A、HOMER1、HRAS、HSD17B11、HSD3B1、HSPA1B、HSPA4、HSPA5、HSPH1、HTT、HYOU1、IARS、ICOSLG、ID2、ID3、IDH1、IDH2、IGF1、IGF1R、IGF2、IKBKE、IKZF1、IL10、IL13RA1、IL7R、IMPG1、INHBA、INPP4A、INPP4B、IRF4、IRF6、IRF8、IRS2、ITGAL、JAK1、JAK2、JAK3、JUN、KDM5A、KDM5C、KDM6A、KDR、KEAP1、KIAA1210、KIAA1841、KIT、KLF4、KMT2A、KMT2C、KMT2D、KPNA4、KPNB1、KRAS、KTN1、LAMA3、LATS1、LATS2、LEPR、LMO1、LNPEP、LONRF3、LRP2、LRRC16A、LRRC34、LYN、MALT1、MAP2K1、MAP2K2、MAP2K4、MAP3K13、MAP3K1、MAP3K4、MAP4K3、MAP4K5、MAPK1、MAPKAP1、MAPKBP1、MARK1、MARK3、MAX、MCL1、MDC1、MDM2、MDM4、MED12、MED12L、MED14、MED19、MEF2BNB-MEF2B、MEIS1、MEN1、MET、METTL9、MITF、MLH1、MLH3、MMP16、MMP3、MPL、MRE11A、MRPL19、MS4A13、MSANTD3-TMEFF1、MSH2、MSH3、MSH6、MTF1、MTF2、MTHFR、MTOR、MTR、MTRR、MUTYH、MYADM、MYB、MYC、MYCL、MYCN、MYD88、MYO10、MYOD1、MYOM1、MZT2A、NAB1、NAMPT、NAPG、NAV1、NBAS、NBEAL1、NBN、NCOA6、NCOR1、NEDD4L、NEO1、NF1、NF2、NFE2L2、NFKBIA、NFXL1、NKAP、NKX2-1、NLRP7、NOTCH1、NOTCH2、NOTCH3、NOTCH4、NPM1、NR1I3、NRAS、NRG1、NRG4、NSD1、NT5C2、NTHL1、NTRK1、NTRK2、NTRK3、NUDT13、NUP85、NUP93、OSBP、OTOGL、OTOS、PAK1、PAK7、PALB2、PAPOLG、PAQR8、PARD6B、PARK2、PARP1、PARP2、PARP3、PARP8、PAX3、PAX5、PBRM1、PDCD1、PDCD1LG2、PDE4D、PDGFRA、PDGFRB、PDPK1、PDS5A、PFKP、PGBD1、PGR、PGRMC2、PHF20、PIGF、PIK3C2G、PIK3C3、PIK3CA、PIK3CB、PIK3CD、PIK3CG、PIK3R1、PIK3R3、PIM1、PKHD1、PLCG2、PLEKHA1、PLEKHH2、PLXNC1、PMS1、PMS2、PNO1、POLA1、POLD1、POLE、POSTN、PPARG、PPP1R21、PPP2R1A、PRDM1、PREX2、PRKAR1A、PRKCI、PRKDC、PRPF39、PRPF4、PTCH1、PTEN、PTK2、PTPN11、PTPN4、PTPRD、PTPRJ、PTPRS、PTPRT、PURA、RAB2B、RABGAP1L、RAC1、RAD21、RAD50、RAD51B、RAD51C、RAD51D、RAD51、RAD52、RAD54L、RAF1、RALGAPB、RAP2B、RARA、RASA1、RB1、RBM10、RBM27、RECQL4、REL、RET、RFC1、RFWD2、RHOA、RHOT1、RICTOR、RIPK2、RIT1、RNF112、RNF19A、RNF43、ROBO1、ROS1、RPF2、RPRD1A、RPS6KB1、RPTOR、RRM1、RRP1B、RUNX1、RWDD1、RYBP、RYR2、SASH1、SCOC、SDHA、SDHAF2、SDHB、SDHC、SEL1L3、SEMA3C、SEMA3E、SERTAD4、SETD2、SF3B1、SFXN4、SH2D1A、SHQ1、SHROOM3、SIMC1、SIPA1L2、SKA3、SLC13A1、SLC22A2、SLC25A13、SLC30A5、SLC31A1、SLC35B1、SLC7A8、SLC9C2、SLCO1B1、SLCO1B3、SLIT1、SLX4、SMAD2、SMAD3、SMAD4、SMARCA4、SMARCB1、SMO、SNX6、SOCS1、SOD2、SOX17、SOX2、SOX9、SPEN、SPOP、SRC、SRSF3、SRY、STAB2、STAG2、STARD4、STAT3、STK11、STMN1、STRBP、STT3A、STYX、SUCLG1、SUFU、SUZ12、SYK、SYNE2、TAF15、TAOK3、TARBP1、TBC1D8B、TBCD、TBX3、TECPR2、TENM3、TERT、TET1、TET2、TFDP1、TFRC、TGFBR1、TGFBR2、TMEM126B、TMEM127、TMEM132D、TMEM67、TMPRSS15、TMPRSS2、TMTC4、TNFAIP3、TNFRSF14、TNFSF13B、TNIK、TNKS、TNRC18、TOP1、TOP2B、TP53、TP63、TPH1、TPM1、TRA2A、TRAF7、TRIM24、TRIM25、TSC1、TSC2、TSHR、TSN、TTC1、TTC6、TTN、TUBD1、TXNDC16、TXNRD1、U2AF1、UBAP2L、UBE2E3、UBE4A、UBN2、UBXN7、UGT1A1、ULK2、ULK4、UMPS、UPF2、USP11、USP34、USP9Y、UTS2、UTY、VEGFA、VHL、VSIG10、WDR5、WHSC1、WHSC1L1、WT1、XIAP、XPC、XPO1、XRCC1、XRCC2、YAP1、YLPM1、YWHAE、ZBBX、ZBTB40、ZDHHC17、ZDHHC20、ZMYM2、ZMYM4、ZNF195、ZNF280D、ZNF283、ZNF2、ZNF367、ZNF711、ZNF805、ZNF91、ZZZ3、ADGRG6、CFAP221、CFAP53、CXCL8、GPAT3、MALRD1、PRELID3B、RIC1、SUGCT、TERT-promoter、SDHD、PIK3R2、P2RY8、CRLF2、ALG9。

2.如权利要求1所述的用途，其特征在于，所述试剂为基因测序用试剂。

3.如权利要求2所述的用途，其特征在于，所述基因测序用试剂为高通量测序用试剂。

4.如权利要求3所述的用途，其特征在于，所述高通量测序用试剂为检测基因突变的NGS panel。

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