CN114621191B - Ezh2抑制剂及其制备和应用 - Google Patents

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Abstract

本发明公开了一种EZH2抑制剂及其制备和应用，结构式如(I)所示。本发明的EZH2抑制剂具有优异的抑制活性，可用于EZH2抑制剂药物或抗肿瘤药物的制备。

Description

EZH2抑制剂及其制备和应用
技术领域
本发明涉及抑制剂及制备方法和用途，特别涉及一种EZH2抑制剂及其制备和应用。
背景技术
EZH2基因是果蝇zeste基因增强子的人类同源物，EZH2位于7q35染色体，是一种组蛋白赖氨酸甲基转移酶，参与DNA甲基化从而抑制其他基因转录。EZH2在人类癌症中高度扩增，并与癌症的发展有密切关联。EZH2功能涉及调控细胞的分化调节,染色质重塑,DNA复制,细胞周期调控，细胞衰老，人胚胎干细胞干性的维持和分化,B淋巴细胞和T淋巴细胞的增殖和成熟等过程。EZH2除了以PRC2依赖的组蛋白甲基化方式，调节基因的表达，如沉默HOX(Homeobox)基因，在胚胎发育过程中发挥重要作用外，EZH2还可以调节-些非组蛋白底物，如细胞浆中的EZH2能通过促进Actin的极化，影响其极化形式F-Actin功能的发挥，如影响T细胞的抗原识别，成纤维细胞中圆形背褶的形成等过程。EZH2还可以使GATA4 299位赖氨酸甲基化，减少P300对其乙酰化，进而抑制其作为转录子的活性。迄今为止，诸多研究发现，EZH2在多种肿瘤组织中存在异常表达，参与疾病的发生、发展，甚至影响疾病的疗效及预后，因此，EZH2作为分子治疗靶点前景广阔。
发明内容
发明目的：本发明的目的是提供一种EZH2抑制剂及其制备方法和应用。
技术方案：所述的EZH2抑制剂，结构式如下(Ⅰ)所示，
其中，Z为未取代或取代的芳香环。
优选的化合物，选自如下任意结构：
所述的EZH2抑制剂的制备方法，合成路线如下所示：
(1)3-氨基-5-溴苯甲酸W1溶解在甲醇中再滴加二氯亚砜，得到W2，
3-乙氧基丙烯酸W3和二氯亚砜反应生成W4；
(2)W2和W4在吡啶作用下反应生成W5；
(3)W5经过浓硫酸反应成环生成W6，再经过碱性NaOH水解得到W7；
(4)W7与W8在PYBOP催化下得W9；
(5)W9与取代的硼酸在Pd(Ph3)4作用下生成通式Ⅰ的化合物。
一种药物组合物，其含有治疗有效量的一种或多种如权利要求1所述的具有通式I所示结构的EZH2抑制剂及药学上可接受的载体或辅料。
所述的EZH2抑制剂在制备EZH2抑制剂药物或抗肿瘤药物中的应用。
有益效果：与现有技术相比，本发明的EZH2抑制剂具有优异的抑制活性，可用于EZH2抑制剂药物或抗肿瘤药物的制备。
具体实施方式
本发明中，所采用的药效学试验方法，是本领域技术人员所熟用的方法；所采用的所用原料是本领域技术人员可通过市购的途径所获得的。
实施例1:化合物W-(1-12)的合成路线如下所示：
(1)化合物3和化合物4通过取代反应制备化合物5，其中化合物3，化合物4，化合物5的结构式依次分别是：
合成化合物5时，反应在有机溶剂中进行，有机溶剂选择二氯甲烷；反应在碱性条件存在下进行，碱选自吡啶。制备时，将化合物3和化合物4溶于有机溶剂中，加入碱，反应时间为4小时，反应温度0℃。
(2)化合物5制备化合物6，其中化合物6的结构如下：
合成化合物6时，反应在浓硫酸中进行。制备时，将化合物5溶于浓硫酸中，在常温下反应八个小时，倒入冰水中析出，用乙醇重结晶，制得化合物6。
(3)化合物6通过水解反应生成化合物7，合成该步反应时，反应在甲醇中进行，在碱性条件下反应，碱是氢氧化钠。制备时将化合物6溶于甲醇，加入氢氧化钠水溶液，反应时间为2小时，温度为60摄氏度。
(4)化合物7和化合物8通过取代反应制备化合物9，其中化合物7，化合物8，化合物9的结构式依次分别是：
合成化合物9时，反应在有机溶剂中进行，有机溶剂选择二甲亚砜；催化剂采用PYBOP。制备时，将化合物7和化合物8溶于有机溶剂中，加入PYBOP，反应时间为12小时，反应温度为室温。
(5)化合物9通过酰胺反应生成化合物W-(1-12)，合成该步反应时，反应在有机溶剂中进行，有机溶剂选择二氧六环；反应溶剂在碱性和催化剂存在下进行，碱选择碳酸氢钠，催化剂选自Pd(PPh3)4。制备时将反应物与碳酸钠溶于有机溶剂中，在氮气条件下反应15分钟，加入催化剂，在氮气条件下100摄氏度反应3个小时。
具体地，
1.化合物2即3-氨基-5-溴苯甲酸甲酯的制备
在圆底烧瓶中加入化合物1即3-氨基-5-溴苯甲酸(4.5g)，甲醇(50ml)中在0摄氏度搅拌下滴加SOCl2(3ml)，反应18小时后用TLC点板检测反应是否反应完全，待反应完全后，加入饱和碳酸氢钠溶液至析出固体，抽滤得棕色固体。
2.化合物4即3-乙氧基丙烯酰氯的制备
在圆底烧瓶中加入化合物3即3-乙氧基丙烯酸(1.28g)，加入适量二氯甲烷使其溶解，滴加SOCl2(0.8ml)，40摄氏度下回流2个小时，旋蒸浓缩得到化合物4.
3.化合物5即3-溴-5-(3-乙氧基丙酰胺)苯甲酸甲酯的制备
在圆底烧瓶中加入化合物2(2.53g)，加入适量DCM溶解，加入吡啶(1.52ml)，搅拌下加入化合物4(1.28g)溶于适量DCM中，在零摄氏度下反应5个小时后用TLC点板检测反应是否反应完全，待反应完全后，倒入水中，用稀盐酸调节pH为中性，萃取，干燥抽滤，柱层析纯化得到纯品化合物5。
化合物5的检测数据如下：
1H NMR(600MHz,CDCl3)δ8.17(s,1H),7.94(s,1H),7.84(s,1H),7.68–7.61(m,1H),7.57(s,1H),5.34(d,J＝12.0Hz,1H),3.93(dd,J＝14.1,7.1Hz,2H),3.89(s,3H),1.34(t,J＝7.0Hz,3H).
MS calcd for C13H13BrNO4[M+H]+m/z:329.0263,found329.0298
4.化合物6即7-溴-2-氧代-1,2-二氢喹啉-5-甲酸甲酯的制备
在圆底烧瓶中加入化合物5(2.50g)和浓硫酸(12ml)，搅拌在常温下反应8个小时后倒入冰水中，有淡黄色固体产生，抽滤干燥,，用乙醇重结晶得淡黄色固体化合物6。
化合物6的检测数据如下：
1H NMR(600MHz,CDCl3)δ12.44(s,1H),8.94(d,J＝9.1Hz,1H),7.99(s,1H),7.77(s,1H),4.08–3.89(m,3H).
MS calcd for C11H8BrNO3[M+H]+m/z:280.9688,found280.9358
4.化合物7即7-溴-2-氧代-1,2-二氢喹啉-5-羧酸的制备
在圆底烧瓶中加入化合物6(0.75g)，加入适量甲醇，加入氢氧化钠(0.21g)水溶液，在60摄氏度回流2个小时，反应完全后，旋蒸除掉溶剂，残余物加盐酸直到pH＝7,然后加柠檬酸水溶液直到pH＝5～6。水层用甲醇/二氯甲烷萃取,无水硫酸钠干燥，旋蒸得到化合物7。
化合物7的检测数据如下：
1H NMR(600MHz,DMSO)δ13.32(s,1H),12.07(s,1H),8.74(t,J＝10.1Hz,1H),7.73(s,2H),6.62(d,J＝10.0Hz,1H).
MS calcd for C10H6BrNO3[M+H]+m/z:266.9531,found266.9576
5.化合物9即7-溴-N-((4,6-二甲基-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-基)甲基)-2-氧代-1,2-二氢喹啉-5-甲酰胺的制备
在圆底烧瓶中加入化合物7(0.64g)，溶解在70mL DMS0中，搅拌下加4,6-二甲基-3-氨甲基吡啶-2(1H)一酮(0.32g)。室温搅拌15min,然后加六氟磷酸苯并三唑-1-基-氧基三吡咯烷基磷(PYB0P),室温搅拌过夜，直到反应完全(展开剂:乙酸乙酯/乙醇＝5:1),反应混合物倒入500mL冰水中，搅拌30min,抽滤得到固体,用500mL水洗涤,真空干燥器干燥,得到的固体搅拌下加乙腈(75mLX2),抽滤,真空干燥器干燥。得到的固体搅拌下再加100mL二氯甲烷，抽滤,减压下彻底干燥得到固体产物化合物9。
化合物9的检测数据如下：
1H NMR(600MHz,DMSO)δ11.93(s,1H),11.54(s,1H),8.64(s,1H),8.09(s,1H),7.53(s,1H),7.31(s,1H),6.57(s,1H),5.88(s,1H),4.31(s,2H),2.17(d,J＝47.0Hz,6H).
MS calcd for C18H16BrN3O3[M+H]+m/z:401.0375,found401.0567
6.化合物w-1即N-((4,6-二甲基-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-基)甲基)-7-(4-(甲基)苯基)-2-氧代-1,2-二氢喹啉-5-甲酰胺的制备
在圆底烧瓶中加入化合物9(0.5g)，加入二氧六环/水混合物(10mL/1.4mL)，搅拌下加4-(4-吗啉甲基)苯硼酸频哪酯(0.379g)，随后加碳酸钠(0.4g)。溶液用氮气净化15min,然后加四(三苯基膦)钯(0.28g)，溶液再用氮气净化10min。反应混合物加热到100℃反应4h。薄层跟踪反应进程,展开剂:甲醇/二氯甲烷(1:10)，加水50mL,用甲醇/二氯甲烷(1:9)萃取。有机层用无水硫酸钠干燥，减压浓缩。粗产物柱层析，洗脱剂:甲醇/二氯甲烷(1:10)，得到产物w-1
化合物w-1的检测数据如下：
1H NMR(600MHz,CDCl3)δ11.76(s,1H),8.96(d,J＝9.9Hz,1H),8.13(d,J＝1.5Hz,1H),7.71(d,J＝8.7Hz,1H),7.69(d,J＝7.3Hz,2H),7.56–7.50(m,3H),7.45(dd,J＝14.2,6.9Hz,2H),7.26(s,3H),6.81(d,J＝9.9Hz,1H),4.99(dd,J＝17.1,1.8Hz,1H),4.93(d,J＝10.2Hz,1H),4.48(q,J＝7.1Hz,2H),1.46(d,J＝7.1Hz,3H),1.42(s,3H),0.89(dd,J＝14.4,7.5Hz,4H).
MS calcd for C29H30N4O4[M+H]+m/z:498.2267,found498.2231
7.化合物w-2即N-((4,6-二甲基-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-基)甲基)-2-氧代-7-苯基-1,2-二氢喹啉-5-甲酰胺的制备
在圆底烧瓶中加入化合物9(0.5g)，加入二氧六环/水混合物(10mL/1.4mL)，搅拌下加)苯硼酸频哪酯(0.255g)，随后加碳酸钠(0.4g)。溶液用氮气净化15min,然后加四(三苯基膦)钯(0.28g)，溶液再用氮气净化10min。反应混合物加热到100℃反应4h。薄层跟踪反应进程,展开剂:甲醇/二氯甲烷(1:10)，加水50mL,用甲醇/二氯甲烷(1:9)萃取。有机层用无水硫酸钠干燥，减压浓缩。粗产物柱层析，洗脱剂:甲醇/二氯甲烷(1:10)，得到产物w-2
化合物w-2的检测数据如下：
1H NMR(600MHz,DMSO)δ11.88(s,1H),11.55(s,1H),8.62(s,1H),8.22(d,J＝9.7Hz,1H),7.70(s,1H),7.60(s,1H),7.53(s,1H),7.49(s,1H),6.54(d,J＝9.0Hz,1H),5.89(s,1H),5.32(s,1H),4.35(s,2H),2.23(s,3H),2.12(s,3H).
MS calcd for C24H21N3O3[M+H]+m/z:399.1583,found399.1465
8.化合物w-3即N-((4,6-二甲基-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-基)甲基)-2-氧代-7-(吡啶-3-基)-1,2-二氢喹啉-5-甲酰胺的制备
在圆底烧瓶中加入化合物9(0.5g)，加入二氧六环/水混合物(10mL/1.4mL)，搅拌下加)吡啶硼酸频哪酯(0.256g)，随后加碳酸钠(0.4g)。溶液用氮气净化15min,然后加四(三苯基膦)钯(0.28g)，溶液再用氮气净化10min。反应混合物加热到100℃反应4h。薄层跟踪反应进程,展开剂:甲醇/二氯甲烷(1:10)，加水50mL,用甲醇/二氯甲烷(1:9)萃取。有机层用无水硫酸钠干燥，减压浓缩。粗产物柱层析，洗脱剂:甲醇/二氯甲烷(1:10)，得到产物w-3
化合物w-3的检测数据如下：
1H NMR(600MHz,DMSO)δ11.88(s,1H),11.55(s,1H),8.62(s,1H),8.22(d,J＝9.7Hz,1H),7.70(s,1H),7.60(s,1H),7.53(s,1H),6.54(d,J＝9.0Hz,1H),5.89(s,1H),5.32(s,1H),4.35(s,2H),2.23(s,3H),2.12(s,3H).
MS calcd for C23H20N4O3[M+H]+m/z:400.1535,found400.1531
9.化合物w-4即7-([1,1′-联苯]-4-基)-N-((4,6-二甲基-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-基)甲基)-2-氧代-1，2-二氢喹啉-5-甲酰胺的制备
在圆底烧瓶中加入化合物9(0.5g)，加入二氧六环/水混合物(10mL/1.4mL)，搅拌下加)联苯硼酸频哪酯(0.35g)，随后加碳酸钠(0.4g)。溶液用氮气净化15min,然后加四(三苯基膦)钯(0.28g)，溶液再用氮气净化10min。反应混合物加热到100℃反应4h。薄层跟踪反应进程,展开剂:甲醇/二氯甲烷(1:10)，加水50mL,用甲醇/二氯甲烷(1:9)萃取。有机层用无水硫酸钠干燥，减压浓缩。粗产物柱层析，洗脱剂:甲醇/二氯甲烷(1:10)，得到产物w-4
化合物w-4的检测数据如下：
1H NMR(600MHz,DMSO)δ11.92(s,1H),11.55(s,1H),8.67(s,1H),8.24(d,J＝9.6Hz,1H),7.83(s,4H),7.75(d,J＝7.3Hz,3H),7.67(s,1H),7.65–7.60(m,2H),7.56(s,2H),7.52–7.48(m,2H),6.55(d,J＝9.8Hz,1H),5.89(s,1H),4.37(s,2H),3.57(s,1H),2.24(s,3H),2.12(s,3H).
MS calcd for C30H25N3O3[M+H]+m/z:475.1896,found475.1894
10.化合物w-5即N-((4,6-二甲基-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-基)甲基)-7-(萘-1-基)-2-氧代-1,2-二氢喹啉-5-甲酰胺的制备
在圆底烧瓶中加入化合物9(0.5g)，加入二氧六环/水混合物(10mL/1.4mL)，搅拌下加)萘硼酸频哪酯(0.375g)，随后加碳酸钠(0.4g)。溶液用氮气净化15min,然后加四(三苯基膦)钯(0.28g)，溶液再用氮气净化10min。反应混合物加热到100℃反应4h。薄层跟踪反应进程,展开剂:甲醇/二氯甲烷(1:10)，加水50mL,用甲醇/二氯甲烷(1:9)萃取。有机层用无水硫酸钠干燥，减压浓缩。粗产物柱层析，洗脱剂:甲醇/二氯甲烷(1:10)，得到产物w-5
化合物w-5的检测数据如下：
1H NMR(600MHz,DMSO)δ11.89(s,1H),11.52(s,1H),8.66(t,J＝4.9Hz,1H),8.28(s,1H),8.22(d,J＝9.8Hz,1H),8.09–8.04(m,2H),8.00–7.96(m,1H),7.87(dd,J＝8.5,1.8Hz,1H),7.74(d,J＝1.2Hz,1H),7.64(d,J＝1.6Hz,1H),7.58(ddd,J＝9.4,5.6,3.5Hz,2H),6.55(t,J＝9.7Hz,1H),5.88(s,1H),4.38(d,J＝4.9Hz,2H),2.24(s,3H),2.11(s,3H).MS calcd for C28H23N3O3[M+H]+m/z:449.1739,found449.1722
11.化合物w-6即N-((4,6-二甲基-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-基)甲基)-2-氧代-7-(4-苯氧基苯基)-1,2-二氢喹啉-5-甲酰胺的制备
在圆底烧瓶中加入化合物9(0.5g)，加入二氧六环/水混合物(10mL/1.4mL)，搅拌下加)4-苯氧基苯硼酸(0.323g)，随后加碳酸钠(0.4g)。溶液用氮气净化15min,然后加四(三苯基膦)钯(0.28g)，溶液再用氮气净化10min。反应混合物加热到100℃反应4h。薄层跟踪反应进程,展开剂:甲醇/二氯甲烷(1:10)，加水50mL,用甲醇/二氯甲烷(1:9)萃取。有机层用无水硫酸钠干燥，减压浓缩。粗产物柱层析，洗脱剂:甲醇/二氯甲烷(1:10)，得到产物w-6
化合物w-6的检测数据如下：
1H NMR(600MHz,DMSO)δ11.89(s,1H),11.53(s,1H),8.64(d,J＝4.8Hz,1H),8.21(d,J＝9.9Hz,1H),7.73(d,J＝8.6Hz,2H),7.57(s,1H),7.47(s,1H),7.43(t,J＝7.8Hz,2H),7.19(t,J＝7.4Hz,1H),7.15(d,J＝8.6Hz,1H),7.09(d,J＝8.4Hz,2H),6.53(d,J＝9.9Hz,1H),5.88(s,1H),5.76(s,2H),4.35(d,J＝4.9Hz,2H),2.23(s,3H),2.11(s,3H).
MS calcd for C30H25N3O4[M+H]+m/z:491.1845,found491.1842
12.化合物w-7即7-(2,6-二甲氧基苯基)-N-((4,6-二甲基-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-基)甲基)-2-氧代-1,2-二氢喹啉-5-甲酰胺的制备
在圆底烧瓶中加入化合物9(0.5g)，加入二氧六环/水混合物(10mL/1.4mL)，搅拌下加)2,6-二甲氧基苯硼酸(0.323g)，随后加碳酸钠(0.4g)。溶液用氮气净化15min,然后加四(三苯基膦)钯(0.28g)，溶液再用氮气净化10min。反应混合物加热到100℃反应4h。薄层跟踪反应进程,展开剂:甲醇/二氯甲烷(1:10)，加水50mL,用甲醇/二氯甲烷(1:9)萃取。有机层用无水硫酸钠干燥，减压浓缩。粗产物柱层析，洗脱剂:甲醇/二氯甲烷(1:10)，得到产物w-7
化合物w-7的检测数据如下：
1H NMR(600MHz,DMSO)δ11.79(s,1H),11.49(s,1H),8.46(t,J＝4.9Hz,1H),8.20(d,J＝9.9Hz,1H),7.35(t,J＝8.4Hz,1H),7.22(d,J＝0.7Hz,1H),7.05(d,J＝1.4Hz,1H),6.78(t,J＝12.0Hz,2H),6.53(t,J＝11.2Hz,1H),5.85(s,1H),4.30(d,J＝4.9Hz,2H),3.67(d,J＝7.1Hz,6H),2.25–2.16(m,3H),2.09(s,3H).
MS calcd for C26H25N3O5[M+H]+m/z:459.1794,found459.1782
13.化合物w-8即N-((4,6-二甲基-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-基)甲基)-7-(6-甲氧基萘-2-基)-2-氧代-1,2-二氢喹啉-5-甲酰胺的制备
在圆底烧瓶中加入化合物9(0.5g)，加入二氧六环/水混合物(10mL/1.4mL)，搅拌下加6甲氧基-2-萘苯硼酸(0.305g)，随后加碳酸钠(0.4g)。溶液用氮气净化15min,然后加四(三苯基膦)钯(0.28g)，溶液再用氮气净化10min。反应混合物加热到100℃反应4h。薄层跟踪反应进程,展开剂:甲醇/二氯甲烷(1:10)，加水50mL,用甲醇/二氯甲烷(1:9)萃取。有机层用无水硫酸钠干燥，减压浓缩。粗产物柱层析，洗脱剂:甲醇/二氯甲烷(1:10)，得到产物w-8
化合物w-8的检测数据如下：
1H NMR(600MHz,DMSO)δ11.92(s,1H),11.56(s,1H),8.66(d,J＝20.5Hz,1H),8.22(d,J＝10.5Hz,1H),8.10(d,J＝9.8Hz,1H),8.00–7.91(m,1H),7.83(s,1H),7.67(d,J＝52.5Hz,1H),7.54(s,1H),7.39(s,1H),7.32(s,2H),6.56(t,J＝10.1Hz,1H),5.89(d,J＝4.4Hz,1H),4.35(dd,J＝42.3,4.5Hz,3H),3.91(s,1H),3.57(s,1H),2.23(d,J＝22.5Hz,3H),2.12(s,3H).
MS calcd for C29H25N3O4[M+H]+m/z:479.1845,found479.1835
13.化合物w-9即N-((4,6-二甲基-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-基)甲基)-7-(喹啉基)-2-氧代-1,2-二氢喹啉-5-甲酰胺的制备
在圆底烧瓶中加入化合物9(0.5g)，加入二氧六环/水混合物(10mL/1.4mL)，搅拌下加喹啉-8-基硼酸(0.305g)，随后加碳酸钠(0.4g)。溶液用氮气净化15min,然后加四(三苯基膦)钯(0.173g)，溶液再用氮气净化10min。反应混合物加热到100℃反应4h。薄层跟踪反应进程,展开剂:甲醇/二氯甲烷(1:10)，加水50mL,用甲醇/二氯甲烷(1:9)萃取。有机层用无水硫酸钠干燥，减压浓缩。粗产物柱层析，洗脱剂:甲醇/二氯甲烷(1:10)，得到产物w-9
化合物w-9的检测数据如下：
1H NMR(600MHz,DMSO)δ11.89(s,1H),11.52(s,1H),8.66(t,J＝4.9Hz,1H),8.28(s,1H),8.22(d,J＝9.8Hz,1H),8.09–8.04(m,2H),8.00–7.96(m,1H),7.87(dd,J＝8.5,1.8Hz,1H),7.74(d,J＝1.2Hz,1H),7.58(ddd,J＝9.4,5.6,3.5Hz,2H),6.55(t,J＝9.7Hz,1H),5.88(s,1H),4.38(d,J＝4.9Hz,2H),2.24(s,3H),2.11(s,3H).
MS calcd for C27H22N4O3[M+H]+m/z:450.1692,found450.1677
14.化合物w-10即7-(苯并呋喃-4-基)-N-((4,6-二甲基-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-基)甲基)-2-氧代-1,2-二氢喹啉-5-甲酰胺的制备
在圆底烧瓶中加入化合物9(0.5g)，加入二氧六环/水混合物(10mL/1.4mL)，搅拌下加苯并呋喃-4-基硼酸(0.162g)，随后加碳酸钠(0.4g)。溶液用氮气净化15min,然后加四(三苯基膦)钯(0.173g)，溶液再用氮气净化10min。反应混合物加热到100℃反应4h。薄层跟踪反应进程,展开剂:甲醇/二氯甲烷(1:10)，加水50mL,用甲醇/二氯甲烷(1:9)萃取。有机层用无水硫酸钠干燥，减压浓缩。粗产物柱层析，洗脱剂:甲醇/二氯甲烷(1:10)，得到产物w-10
化合物w-10的检测数据如下：
1H NMR(600MHz,DMSO)δ11.89(s,1H),11.52(s,1H),8.66(t,J＝4.9Hz,1H),8.28(s,1H),8.22(d,J＝9.8Hz,1H),8.09–8.04(m,2H),8.00–7.96(m,1H),7.87(dd,J＝8.5,1.8Hz,1H),7.58(ddd,J＝9.4,5.6,3.5Hz,2H),6.55(t,J＝9.7Hz,1H),5.88(s,1H),4.38(d,J＝4.9Hz,2H),2.24(s,3H),2.11(s,3H).
MS calcd for C26H21N3O4[M+H]+m/z:439.1532,found439.1521
15.化合物w-11即N-((4,6-二甲基-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-基)甲基)-7-(1H-茚-7-基)-2-氧代-1,2-二氢喹啉-5-甲酰胺的制备
在圆底烧瓶中加入化合物9(0.5g)，加入二氧六环/水混合物(10mL/1.4mL)，搅拌下加茚硼酸(0.160g)，随后加碳酸钠(0.4g)。溶液用氮气净化15min,然后加四(三苯基膦)钯(0.173g)，溶液再用氮气净化10min。反应混合物加热到100℃反应4h。薄层跟踪反应进程,展开剂:甲醇/二氯甲烷(1:10)，加水50mL,用甲醇/二氯甲烷(1:9)萃取。有机层用无水硫酸钠干燥，减压浓缩。粗产物柱层析，洗脱剂:甲醇/二氯甲烷(1:10)，得到产物w-11化合物w-11的检测数据如下：
1H NMR(600MHz,DMSO)δ11.89(s,1H),11.52(s,1H),8.66(t,J＝4.9Hz,1H),8.28(s,1H),8.22(d,J＝9.8Hz,1H),8.09–8.04(m,2H),8.00–7.96(m,1H),7.87(dd,J＝8.5,1.8Hz,1H),7.58(ddd,J＝9.4,5.6,3.5Hz,2H),6.55(t,J＝9.7Hz,1H),5.88(s,1H),4.38(d,J＝4.9Hz,2H),3.32(d,2H),2.24(s,3H),2.11(s,3H).
MS calcd for C27H23N3O3[M+H]+m/z:437.1739,found437.1721
16.化合物w-12即7-(4-溴苯基)-N-((4,6-二甲基-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-基)甲基)-2-氧代-1,2-二氢喹啉-5-甲酰胺的制备
在圆底烧瓶中加入化合物9(0.5g)，加入二氧六环/水混合物(10mL/1.4mL)，搅拌下加4-溴苯硼酸(0.2g)，随后加碳酸钠(0.4g)。溶液用氮气净化15min,然后加四(三苯基膦)钯(0.173g)，溶液再用氮气净化10min。反应混合物加热到100℃反应4h。薄层跟踪反应进程,展开剂:甲醇/二氯甲烷(1:10)，加水50mL,用甲醇/二氯甲烷(1:9)萃取。有机层用无水硫酸钠干燥，减压浓缩。粗产物柱层析，洗脱剂:甲醇/二氯甲烷(1:10)，得到产物w-12
化合物w-12的检测数据如下：
1H NMR(600MHz,DMSO)δ11.88(s,1H),11.55(s,1H),8.62(s,1H),8.22(d,J＝9.7Hz,1H),7.70(s,1H),7.60(s,1H),7.53(s,1H),6.54(d,J＝9.0Hz,1H),5.89(s,1H),5.32(s,1H),4.35(s,2H),2.23(s,3H),2.12(s,3H).
MS calcd for C24H20BrN3O3[M+H]+m/z:477.0688,found477.0625
17.化合物w-13即N-((4,6-二甲基-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-基)甲基)-2-氧代-7-(对甲苯基)-1,2-二氢喹啉-5-甲酰胺
在圆底烧瓶中加入w9(0.2g，0.50mmol)，加入二氧六环/水混合物(10mL/1.4mL)，搅拌下加4-甲苯硼酸(0.082g，0.60mmol)，随后加碳酸钠(0.168g，1.58mmol)。溶液用氮气净化15min,然后加四(三苯基膦)钯(0.56g，0.5mmol)，溶液再用氮气净化10min。反应混合物加热到102℃反应4h。用TLC检测反应进程，反应完全后，加水50mL,用二氯甲烷萃取。有机层用无水硫酸钠干燥，减压浓缩。粗产物柱层析，得到w-13。
1H NMR(600MHz,DMSO-d6)δ:11.83(s,1H),11.54(s,1H),8.63(t,J＝4.9Hz,1H),8.18(d,J＝9.9Hz,1H),7.62(dt,J＝4.9,2.5Hz,2H),7.50(d,J＝1.7Hz,1H),7.27(d,J＝8.0Hz,1H),7.22(s,1H),7.16–7.13(m,1H),6.52(d,J＝9.8Hz,1H),5.88(s,1H),3.57(s,2H),2.23–2.17(m,6H),2.11(s,3H).
MS calcd for C25H23N3O3[M+H]+m/z:414.1733,found 414.3557
18.化合物w-14即N-((4,6-二甲基-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-基)甲基)-7-(3-甲氧基-4-甲基苯基)-2-氧代-1,2-二氢喹啉-5甲酰胺
在圆底烧瓶中加入w9(0.2g，0.50mmol)，加入二氧六环/水混合物(10mL/1.4mL)，搅拌下加(2-甲氧基-3-甲基苯基)硼酸(0.100g，0.60mmol)，随后加碳酸钠(0.168g，1.58mmol)。溶液用氮气净化15min,然后加四(三苯基膦)钯(0.56g，0.5mmol)，溶液再用氮气净化10min。反应混合物加热到102℃反应4h。用TLC检测反应进程，反应完全后，加水50mL,用二氯甲烷萃取。有机层用无水硫酸钠干燥，减压浓缩。粗产物柱层析，得到w-14。
1H NMR(600MHz,DMSO-d6)δ:11.83(s,1H),11.54(s,1H),8.18(d,J＝9.9Hz,1H),7.62(dt,J＝4.9,2.5Hz,2H),7.50(d,J＝1.7Hz,1H),7.27(d,J＝8.0Hz,1H),7.22(s,1H),7.16-7.13(m,1H),6.52(d,J＝9.8Hz,1H),5.90-5.85(m,1H),3.88(d,J＝5.9Hz,3H),3.57(s,2H),2.23-2.17(m,6H),2.11(s,3H).
MS calcd for C26H25N3O4[M-Na]+m/z:420.5030,found 420.1000
19.化合物w-15即4-(((((4,6-二甲基-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-基)甲基)氨基甲酰基)-2-氧代-1,2-二氢喹啉-7-基)苯甲酸
在圆底烧瓶中加入w9(0.2g，0.50mmol)，加入二氧六环/水混合物(10mL/1.4mL)，搅拌下加4-羧基苯硼酸(0.100g，0.60mmol)，随后加碳酸钠(0.168g，1.58mmol)。溶液用氮气净化15min,然后加四(三苯基膦)钯(0.56g，0.5mmol)，溶液再用氮气净化10min。反应混合物加热到102℃反应4h。用TLC检测反应进程，反应完全后，加水50mL,用二氯甲烷萃取。有机层用无水硫酸钠干燥，减压浓缩。粗产物柱层析，得到w-15。
1H NMR(600MHz,DMSO-d6)δ:11.88(s,1H),11.55(s,1H),8.62(s,1H),8.22(d,J＝9.7Hz,1H),7.70(s,2H),7.60(s,1H),7.55-7.43(m,3H),6.54(d,J＝9.0Hz,1H),5.89(s,1H),4.35(s,2H),2.23(s,3H),2.12(s,3H).
MS calcd for C25H21N3O5[M+Na]+m/z:466.1481,found 466.1731
20.化合物w-16即N-((4,6-二甲基-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-基)甲基)-7-(4-氟-3-甲氧基苯基)-2-氧代-1,2-二氢喹啉-5甲酰胺
在圆底烧瓶中加入w9(0.2g，0.50mmol)，加入二氧六环/水混合物(10mL/1.4mL)，搅拌下加3-氟-2-甲氧基苯基硼酸(0.102g，0.60mmol)，随后加碳酸钠(0.168g，1.58mmol)。溶液用氮气净化15min,然后加四(三苯基膦)钯(0.56g，0.5mmol)，溶液再用氮气净化10min。反应混合物加热到102℃反应4h。用TLC检测反应进程，反应完全后，加水50mL,用二氯甲烷萃取。有机层用无水硫酸钠干燥，减压浓缩。粗产物柱层析，得到w-16。
1H NMR(600MHz,DMSO-d6)δ:1.86(s,1H),11.54(s,1H),8.63(d,J＝4.9Hz,1H),8.19(d,J＝9.8Hz,1H),7.59(d,J＝1.2Hz,1H),7.50(d,J＝1.5Hz,1H),7.45(dd,J＝8.2,1.9Hz,1H),7.36(dd,J＝11.3,8.4Hz,1H),7.26(dd,J＝4.2,2.1Hz,1H),6.54(d,J＝9.8Hz,1H),5.88(s,1H),4.36(d,J＝4.9Hz,2H),3.94(s,3H),2.24(s,3H),2.11(s,3H).
MS calcd for C25H22FN3O4[M+H]+m/z:448.2628,found 448.2130
实施例2目标化合物的体外活性评价
以下体外活性评价方法为常规方法，本领域技术人员可按照常规手段自行检测，也可以委托生物公司进行检测。
(1)H3K27me3酶联免疫吸附试验
1.组蛋白提取物在100μL包被缓冲液(含0.05％牛血清白蛋白的PBS)中稀释至最终浓度400ng。
2.在96孔板中每孔加入100μL样品，紧密密封，在4℃孵育过夜。次日，用300μL洗涤缓冲液(PBS，0.05％)冲洗3次，然后用300μL封闭缓冲液(PBS，0.05％，2％BSA)在室温下封堵2h。将100μL检测抗体(细胞信号9733H3K27me3在阻断缓冲液中稀释为1：2000；Abcamab1791总组蛋白H3在阻断缓冲液中稀释为1：5000)加入各平板的每孔，室温孵育1.5h。另一轮洗涤后，每孔加入1：2000(H3K27me3)100μL，室温孵育1.5h。
3.在另一轮洗涤之后，通过向每个孔中加入100μL TMB底物，孵育平板10分钟，向每个孔中加入100μLDMSO，轻轻摇动，并在450nm处读取吸光度来进行检测。用酶标仪在波长570nm下测量每孔的光密度(OD)。
(2)抑制肿瘤增殖与活性实验
采用MTT比色法检测待测化合物对Pfeiffer细胞增殖及毒性。用酶联免疫检测仪在570nm波长处测定其光吸收值(OD值)可定量显示活细胞比例。若实验测得的OD值越大，说明活细胞数量越多(或表示药物毒性越小)。实验所用细胞均为指数生长期。
操作步骤：
1.用含10％胎牛血清(FBS)的RPMI1640培养液(含2000mg/L葡萄糖，300mg/LL谷氨酰胺，25mMHEPES(5958mg/L)，2000mg/L碳酸氢钠，5mg/L酚红，双抗，培养Pfeiffer细胞，并将培养基置于37℃含5％CO2的潮湿环境中。
2.将Pfeiffer细胞以1×105细胞/孔的密度接种于96孔细胞培养板上。培养36h后,将Pfeiffer细胞接种于浓度分别为10μg/ml,1μg/ml,0.10μg/ml,0.01μg/ml的含待测化合物和对照药物他泽司他溶液中(DMSO为溶剂)。在37℃、5％CO2的潮湿空气中培养48h。
3.向每孔中加入20μLMTT溶液(6mg/ml，pH＝7.4，PBS为溶剂))继续培养5h。
4.将96孔板进行离心处理，去除培养液。向每孔中加入150μLDMSO，振荡12min使晶体溶解。用酶标仪在波长570nm下测量每孔的光密度(OD)。细胞增殖抑制率计算如下：抑制率(％)＝[1-OD570(处理)/OD570(对照组)]×100％。
采用中值效应法对数据进行分析，计算抑制细胞增殖50％的药物剂量IC50值。所有实验结果均经统计处理，实验结果如下表1：
表1化合物抑制Pfeiffer肿瘤细胞增殖实验数据(uM)
结果分析：经过对改造后的衍生物进行抑制肿瘤细胞增殖实验，绝大多数目标化合物对肿瘤细胞有较好的抑制增殖作用，在16个化合物中，化合物w-1、w-2、w-5，w-13表现三个化合物与阳性对照药tazemetostat的IC50值相似，三个化合物的通性结构是尾部有苯环，w-6，w-7，w-8，w-12，w-14，w-16均显著优于对照tazemetostat，尤其是w-7和w-8，w-14，w-16他们结构均是苯环上连接供电子基团甲氧基，化合物的抗增殖能力强性。

Claims (4)

1.一种EZH2抑制剂，结构式为如下任一种：
2.权利要求1所述的EZH2抑制剂的制备方法，其特征在于：合成路线如下所示：
(1)3-氨基-5-溴苯甲酸W1溶解在甲醇中再滴加二氯亚砜，得到W2，
3-乙氧基丙烯酸W3和二氯亚砜反应生成W4；
(2)W2和W4在吡啶作用下反应生成W5；
(3)W5经过浓硫酸反应成环生成W6，再经过碱性NaOH水解得到W7；
(4)W7与W8在PYBOP催化下得W9；
(5)W9与取代的硼酸在Pd(Ph3)4作用下生成通式Ⅰ的化合物，所述通式Ⅰ为权利要求1所述的结构。
3.一种药物组合物，其含有治疗有效量的一种或多种如权利要求1所述的EZH2抑制剂及药学上可接受的载体或辅料。
4.权利要求1所述的EZH2抑制剂在制备EZH2抑制剂药物或抗肿瘤药物中的应用。
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