CN114574370B - 降解生物质菌株的筛选方法、木霉菌及应用 - Google Patents

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Abstract

本发明涉及微生物菌剂技术领域，尤其是涉及一种降解生物质菌株的筛选方法、木霉菌及应用。本发明提供一种木霉菌，所述木霉菌的菌株保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，菌种保藏号为CGMCC No.23890，保藏地址为北京市朝阳区北辰西路1号院3号中国科学研究院微生物研究所，保藏日期为2021年12月06日，分类命名为Piloderma sp.。本发明提供的木霉菌对木质素有强降解能力，其培养液的过氧化酶活力和漆酶活力高，且酶活力持续时间久，适合用于降解包括来源于中药的生物质，值得推广应用，具备显著的经济价值。

Description

降解生物质菌株的筛选方法、木霉菌及应用
技术领域
本发明涉及微生物菌剂技术领域，尤其是涉及一种降解生物质菌株的筛选方法、Piloderma及应用。
背景技术
生物质(biomass)是指通过光合作用形成的可循环或再生的有机质，是继煤炭、石油、天然气之外的第四大能源。广义上，生物质包括所有植物、微生物以及植物、微生物为实物的动物及其生产的废弃物。有代表性的生物质如农作物、农作物废弃物等。狭义上，生物质主要是指农业生产过程中出粮食、果实以外的秸秆、树木等木质纤维素。各生物质之间存在着相互依赖和相互作用的关系，对人类的衣食、医药、能源等方面有着广泛而重要的作用。
生物质中含有大量的木质纤维素，这些木质纤维素是导致生物质资源难以被利用的原因之一。木质纤维素是一种结构复杂的大分子，它可包含高达80％(w/w)糖和木质素。木质纤维素中的糖主要为聚合物纤维素和半纤维素，而不是生物质能源生产过程中使用的简单糖或淀粉，作为生物质中的一种，中草药药渣中木质纤维素的含量比例高，难以被水解，从而阻碍了中草药药渣生物质转化为生物能源的通路，因此中草药药渣的水解关键是木质纤维素的水解。据报道目前主要水解木质纤维素的微生物是真菌。
木质素是木质纤维素中最难水解的物质，具有抗生物水解及水分输送等功能。是由对香豆醇、芥子醇、松柏醇、5-羟基柏醇四种醇单体连接而成的三维网状芳香族高聚体化合物，常见的三种苯丙烷包括愈创木基丙烷单元、紫丁香基丙烷单元、对羟基苯基丙烷单元，这三种基本结构通过随意组合、共聚化、聚合形成不均匀性、无旋光性、交叉键和高度分散的木质素。根据木质素单体的不同，木质素可分为3种基本类型即愈创木基木质素(Guajacyl lignin，G-木质素)、紫丁香基木质素(Syringyl lignin，S-木质素)、对羟基苯基木质素(Hydroxy-phenyl lignin，H-木质素)。木质素的水解产物不能用于生产生物乙醇，但水解木质素有助于破坏木质纤维素结构。
目前国际已发现白腐真菌能高效降解木质素，其中黄孢原毛平革菌作为模式菌株被广泛研究，但其并不具有广泛的普适性，例如我国是中药大国，中草药药渣主要为中草药煎熬或者提炼之后所剩的残渣，为生物质的一种，主要由一些植物的根、茎、叶等组织构成，因此木质纤维素含量极高，木质素含量最多能达到30％，而中药残渣中还含有众多抑菌组分，已发现的白腐真菌降解中药残渣的效果并不显著。
鉴于此，特提出本发明。
发明内容
本发明的目的在于提供一种具有广泛生物质降解能力的菌株，以缓解了现有用于降解生物质的菌株对来源于中药的生物质降解能力低的现状。
本发明的另一目的在于，提供一种能够获得具有降解中药来源生物质能力的菌株的筛选方法。
本发明还有一个目的在于，提供上述得到的菌株在降解中药来源生物质中的应用。
为了解决上述技术问题，实现上述目的，本发明提供以下技术方案：
第一方面，本发明提供一种Piloderma，所述Piloderma的菌株保藏于中国微生物保藏管理委员会普通微生物中心，菌种保藏号为CGMCC No.23890，保藏地址为北京市朝阳区北辰西路1号院3号中科院微生物研究所，保藏日期为2021年12月06日，分类命名为Piloderma sp.。
第二方面，本发明提供一种降解生物质菌株的筛选方法，所述筛选方法包括，采用木质素初筛培养基培养生物质的浸出物得到初筛菌株，再采用马铃薯葡萄糖-苯胺蓝培养基对初筛菌株进行复筛，对复筛得到菌株的基因组进行分子生物学鉴定；所述生物质来源于中药和/或中药渣；按照质量百分比，所述木质素初筛培养基的组成包括，碱木质素4.0g，硫酸铵2.66g，七水硫酸镁0.5g，磷酸二氢钾1.0g，磷酸氢二钠0.2g，琼脂20g，pH6.6，ddH2O1000ml。
在可选实施方式中，所述中药包括黄姜和/或珊瑚姜；所述中药渣包括黄姜药渣和/或珊瑚姜药渣。
在可选实施方式中，对复筛得到菌株进行分子生物学鉴定后，还包括对复筛得到菌株降解生物质的能力进行评价的步骤。
在可选实施方式中，所述评价的步骤包括，检测复筛得到菌株的培养液中与降解生物质相关的酶的活力。
在可选实施方式中，所述与降解生物质相关的酶包括木质素过氧化物酶和/或漆酶。
第三方面，本发明提供一种菌剂，所述菌剂包括前述实施方式所述的Piloderma或采用前述任一项实施方式所述筛选方法筛选得到的菌株。
第四方面，本发明前述实施方式所述Piloderma、采用前述任一项实施方式所述筛选方法筛选得到的菌株或前述实施方式所述的菌剂在降解生物质中或者在制备生物质降解产品中的应用。
可选实施方式中，所述生物质包括木质素。
可选实施方式中，所述木质素的来源包括中药和/或中药渣。
本发明提供的Piloderma对木质素有强降解能力，其培养液的过氧化酶活力和漆酶活力高，且酶活力持续时间久，适合用于降解包括来源于中药的生物质，值得推广应用，具备显著的经济价值。
本发明提供的降解生物质菌株的筛选方法，从来源于中药和/或中药渣的生物质浸出物出发，筛选具有生物质降解能力的菌株，能够得到普适的生物质降解菌株，扩大了菌株的应用领域，为中药残渣再利用提供了新途径。
附图说明
为了更清楚地说明本发明具体实施方式或现有技术中的技术方案，下面将对具体实施方式或现有技术描述中所需要使用的附图作简单地介绍，显而易见地，下面描述中的附图是本发明的一些实施方式，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据这些附图获得其他的附图。
图1为本发明实施例1中得到的8株复筛得到菌株脱色圈结果图；
图2为本发明复筛得到的8株菌株木质素过氧化物酶酶活检测结果；
图3为本发明复筛得到的8株菌株漆酶酶活检测结果；
图4为应用例1摇瓶发酵结果图；
图5为应用例2摇瓶发酵结果图；
图6为应用例3摇瓶发酵结果图；
图7为应用例4摇瓶发酵结果图。
具体实施方式
为使本发明实施例的目的、技术方案和优点更加清楚，下面将结合本发明实施例中的附图，对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。通常在此处附图中描述和示出的本发明实施例的组件可以以各种不同的配置来布置和设计。
因此，以下对在附图中提供的本发明的实施例的详细描述并非旨在限制要求保护的本发明的范围，而是仅仅表示本发明的选定实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有作出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。
应注意到：相似的标号和字母在下面的附图中表示类似项，因此，一旦某一项在一个附图中被定义，则在随后的附图中不需要对其进行进一步定义和解释。
在某一具体实施方式中，本发明提供一种Piloderma菌株，所述Piloderma菌株的菌株保藏于中国微生物保藏管理委员会普通微生物中心，菌种保藏号为CGMCC No.23890，保藏地址为北京市朝阳区北辰西路1号院3号中科院微生物研究所，保藏日期为2021年12月06日，分类命名为Piloderma sp.。
在另一具体实施方式中，本发明提供一种降解生物质菌株的筛选方法，所述筛选方法包括，采用木质素初筛培养基培养生物质的浸出物得到初筛菌株，再采用马铃薯葡萄糖-苯胺蓝培养基对初筛菌株进行复筛，对复筛得到菌株的基因组进行分子生物学鉴定；所述生物质来源于中药和/或中药渣；按照质量百分比，所述木质素初筛培养基的组成包括，碱木质素4.0g，硫酸铵2.66g，七水硫酸镁0.5g，磷酸二氢钾1.0g，磷酸氢二钠0.2g，琼脂20g，pH6.6，ddH2O 1000ml。
可选地，所述中药包括黄姜和/或珊瑚姜；所述中药渣包括黄姜药渣和/或珊瑚姜药渣。
可选地，对复筛得到菌株进行分子生物学鉴定后，还包括对复筛得到菌株降解生物质的能力进行评价的步骤。
在可选实施方式中，所述评价的步骤包括，检测复筛得到菌株的培养液中与降解生物质相关的酶的活力。
在众多降解生物质相关的酶中，水解木质纤维素需要一个复合酶系，其中降解木质素的胞外木质素水解酶家族主要包括木质素过氧化物酶(LiP)、漆酶(Lac)、锰过氧化物酶(MnP)、多功能过氧化物酶(VP)和其他辅助酶[10]。在这些酶中，LiP、Lac、MnP为最关键的三大类酶，如今对Lac及MnP的降解木质素能力方面进行了深层次的探讨，如Elisashvili V等研究了白腐担子菌生产漆酶和锰过氧化物酶的生理调控生理活动与相关机制，发现酶的产量依赖于菌株的种类，且碳源和木质纤维素底物在酶的产生中起着至关重要的作用；日本学者Yumi Yamasaki等通过建立乙醇发酵白腐菌Phlebia sp.MG-60的聚乙二醇转化方法，获得了锰过氧化物酶同工酶2基因(MGmnp2)转化子，对木质素降解有较高的选择性；陈建军等对成功筛选出的高效木质素降解菌黄孢原毛平革菌的产漆酶条件进行了多方面探讨。而对于高效降解木质素菌株的LiP方面的研究甚少，LiP是一种同工酶，其主要作用是使木质素分子中的主要链接键断裂，因此被认为在木质素降解中起着十分关键的作用。
在可选实施方式中，所述与降解生物质相关的酶包括木质素过氧化物酶和/或漆酶。
在另一具体实施方式中，本发明提供一种菌剂，所述菌剂包括前述实施方式所述的Piloderma或采用前述任一项实施方式所述筛选方法筛选得到的菌株。
在另一具体实施方式中，本发明前述实施方式所述Piloderma、采用前述任一项实施方式所述筛选方法筛选得到的菌株或前述实施方式所述的菌剂在降解生物质中或者在制备生物质降解产品中的应用。
可选实施方式中，所述生物质包括木质素。
木质素是植物细胞壁结构中最丰富的成分之一，是自然界中仅次于纤维素的第二丰富的有机可再生资源，同时也是微生物最难降解的成分之一。它是一种相对疏水的芳香杂聚合物，主要由愈创木酰基、丁香基和对羟基苯基三种不同的苯丙基组成。在木质纤维素生物质中，木质素与碳水化合物通过醚键或酯键交联，其在植物细胞壁中的主要功能是提供结构支撑、抗渗透、抗微生物攻击和抗氧化应激。由于木质素的组成中有许多非特异性的键类型及其与纤维素和半纤维素的缠绕，因此为植物提供了支撑强度，但这也造成了高效降解和使用木质纤维素材料的最大障碍。
可选实施方式中，所述木质素的来源包括中药和/或中药渣。
下面结合附图，对本发明的一些实施方式作详细说明。在不冲突的情况下，下述的实施例及实施例中的特征可以相互组合。
实施例1
本实施例提供了一种降解生物质菌株的筛选方法，所述筛选方法从中药渣出发筛选得到多株能够用于降解生物质的菌株，具体包括以下步骤：
1.1药渣来源
采用5点取样法从贵州正业集团采集的姜黄药渣。
1.2方法
1.2.1从药渣中分离菌株
称取药渣样品2g于100ml锥形瓶中，加入50mL无菌ddH2O，28℃，180r/min恒温摇床孵育12h后取出，静置1h，吸取2ml上清液接种于马铃薯葡萄糖琼脂培养基(PDA)，用封口膜封板避免污染，28℃恒温孵育3～7天，待长出菌后用三区划线法连续分离培养直至获得单一菌种，共得到42株真菌。
1.2.2水解木质素能力的菌株初步筛选
将药渣中分离出的真菌分别接种在木质素初筛培养基的固体平板上，28℃恒温培养3～5天，筛选其中能生长且长势较佳的菌株作进一步筛选，所述木质素初筛培养基的组成为碱木质素4.0g，硫酸铵2.66g，七水硫酸镁0.5g，磷酸二氢钾1.0g，磷酸氢二钠0.2g，琼脂20g，pH6.6，ddH2O 1000ml。
1.2.3水解木质素能力的菌株的复筛
将上一步筛出的菌株纯化后取菌丝分别点种在马铃薯葡萄糖琼脂-苯胺蓝培养基(PDA-blue)上，置于25℃避光恒温静置培养，分别于第3、5、7、9天观察菌株周围脱色圈的直径，测量透明圈直径(D)与菌落直径(d)的比值(D/d)，可初步判断纤维素分解菌酶活力的大小，以不接种菌的培养基作为阴性对照，共得到8株菌株，分别命名为ZYJHYZ246、ZYJHYZ254、ZYJHYZ257、ZYJHYZ263、ZYJHYZ267、ZYJHYZ268、ZYJHYZ269、ZYJHYZ270，培养5天后上述8株菌株脱色圈情况如图1所示，图1中由左到右、由上至下编号从小到大排列，由图1可以看出，筛选菌株在PDA-blue培养基上恒温孵育，8株菌均出现了大小不同的脱色圈。此外，上述所有菌在培养的第3天时都开始可见有脱色圈的出现，其中ZYJHYZ246、ZYJHYZ254、ZYJHYZ257周围的脱色圈最为明显，ZYJHYZ254、ZYJHYZ257在培养第7天时整个平板颜色已趋近于透明。ZYJHYZ254、ZYJHYZ257与ZYJHYZ269生长速度最快，在第7天时已遍布培养基，且脱色效果也较好。ZYJHYZ263、ZYJHYZ267的菌株生长速度与其他5株相比较慢，且水解圈较小，脱色圈颜色也较淡，ZYJHYZ268号菌株的产生的透明圈较小，但整个平板颜色变淡了很多。ZYJHYZ246菌株生长速度较慢，但其脱色效果明显，到第11天时整个平板已接近透明。
表1复筛得到8株真菌在PDA-blue培养基上培养第3、5、7、9、11天时的D/d比值
1.2.4菌种鉴定
对上一步筛选出的菌株进行分子生物学鉴定。按Ezup柱式真菌基因组DNA抽提试剂盒的操作步骤提取DNA，以ITS4/ITS5为引物，通过PCR扩增其转录间隔区(internaltran-scribed spacer，ITS)基因序列后送生工公司测序；将测序结果在美国国立生物技术信息中心(national center for biotechnology information，NCBI)中与已知菌株进行相似度比较，并结合菌株的形态，鉴定种属，对密切相关的序列进行比对和手动校正，鉴定结果如下：
>ZYJHYZ246 ITS5 Coniochaeta velutina
GCCGAAAGGCTACTTAAAACCATCGCGAACTCGTCCAAGTTGCTTCGGCGGCGCGGCCTCCCTCACGGGGGCGCCGCAGCCCCGCCTCTCCGGAGGTGTGGGGCGCCCGCCGGAGGTACGAAACTCTGTATTATAGTGGCATCTCTGAGTAAAAAACAAATAAGTTAAAACTTTCAACAACGGATCTCTTGGTTCTGGCATCGATGAAGAACGCAGCGAAATGCGATAAGTAATGTGAATTGCAGAATTCAGTGAATCATCGAATCTTTGAACGCACATTGCGCCCGCTAGTACTCTAGCGGGCATGCCTGTTCGAGCGTCATTTCAACCCTCAAGCCCTGCTTGGTGTTGGGGCCCTACGGCTGCCGTAGGCCCTGAAAGGAAGTGGCGGGCTCGCTACAACTCCGAGCGTAGTAATTCATTATCTCGCTAGGGACGTTGCGGCGCGCTCCTGCCGTTAAAGACCATCTTTAACTCAAGGTTGACCTCGGATCAGGTAGGAATACCCGCTGAACTTAAGCA(SEQ ID No.1)。
>ZYJHYZ254 Phaeophlebiopsis sp.
AACAAGGTTTCCGTAGGTGAACCTGCGGAaGGAtCATTATCGAGTTTTGAAACGGGTTGTAGCTGGCCTTTCTAACCAGGAAGGCATGTGCACGCCTGGCTCATTCCACTCTTCAACCTCTGTGCACTTATTGTAGGTCGGTGGAAAGCTTGGAGCTTTTTTAATTAAAAGCCTTCAAGTTGGAAGCCTTCCTATGTTTTACTACAAACGCTTCAGTTATAGAATGTTTATCTTGCGTATAACGCATTTATATACAACTTTCAGCAACGGATCTCTTGGCTCTCGCATCGATGAAGAACGCAGCGAAATGCGATAAGTAATGTGAATTGCAGAATTCAGTGAATCATCGAATCTTTGAACGCACCTTGCGCTCCCTGGTATTCCGGGGAGCATGCCTGTTTGAGTGTCATGGAATTCTCAACCTCTTAAATTTTTGTTAACCAAAAGTTTAAGAGGCTTGGACTTGGAGGCTTGTGCTGGCTCTAATTTGTTGAGTCGGCTCCTCTTAAATGCATTAGCGTGAATGTTTACGGATCGCTTCGGTGTGATAATTATCTGCGCCGTGGTTGTGAAGTATCGATAAGTTTACGCTTCTAATCGTCCTTTCAATAGGACAATTGATAAACTTGACATCTGGCCTCAAATCAGGTAGGACTACCCGCTGAACTTAAGCATAT(SEQ ID No.2)。
>ZYJHYZ257 Bjerkandera adusta
GGTTAGAAGCGTGAACACTAGAATACCCTCCACAGCAACGCAGATAATTATCACGCTGAAGCGGCTGGTAACGTTCGCACTAATGCATTTCAGAGGAGCCGACTACGAGAGCCGGCACGACCTCCAAGTCCAAGCCTTCATCAATAAAGCTGAAGGTTGAGAATTCCATGAGACTCAAACAGGCATGCTCCTCGGAATACCAAGGAGCGCAAGGTGCGTTCAAAGATTCGATGATTCACTGAATTCTGCAATTCACATTACTTATCGCATTTCGCTGCGTTCTTCATCGATGCGAGAGCCAAGAGATCCGTTGCTGAAAGTTGTATATAATTGCGTTATAGCAAAGTATGACATTCTAAAACTGAATCGTTTGTAGTAAAGCATAAGCCCGACACCTACAAGTGCGCGAACGCACCCACAAGCCGGCCTATGAAAAGTGCACAGAAGTTGAGAGTGGATGAGACAGGCGTGCACATGCCCTTGCGAGCCAGCAGACAACCCATTCAAAACTCGATAATGATC CTTCCGCAGGTTCACCTACGGAAACCTTGTTACGACTTTTTACTTC(SEQ ID No.3)。
>ZYJHYZ263 Nemania diffusa
TTGGAAGTAAAAAATCGTAACAAGGTCTCCGTTGGTGAACCAGCGGAGGGATCATTAAAGAGTGTAATAACTCCCAAACCCATGTGAACATACCTCATGTTGCCTCGGCAGGTCGTGCCTCCCTCGTAGGTCCTACCCTGTAGGCTCTTACCCGGAAGGCGCGGGTACCCCTGCCGGTGGCCCAGGAAACTCTGTCTCATCGTTGAATTCTGAACCTATAACTAAATAAGTTAAAACTTTCAACAACGGATCTCTTGGTTCTGGCATCGATGAAGAACGCAGCGAAATGCGATAAGTAATGTGAATTGCAGAATTCAGTGAATCATCGAATCTTTGAACGCACATTGCGCCCATTAGTATTCTAGTGGGCATGCCTGTTCGAGCGTCATTTCAACCCTTAAGCCCTTGTTGCTTAGCGTTGGGAGCCTACGGCACCGTAGCTCCCCAAAGTCAGTGGCGGAGCCGGCTCACACTCTAGACGTAGTAATTTCTCACCTCGCCTATAGTTGGACCGGTCCCCTGCCGTAAAACGCCCCAGTATTTAAAAGGTTGACCTCGAATCAGGTAGGAATACCCGCTGAACTTAAGCATATCAAAA(SEQ ID No.4)。
>ZYJHYZ267 Cryptomarasmius crescentiae
TTTCCTGAGGGGAAATTCGGCAGGAACCAGCTACTAGATGGTTCGATTAGTCTTTCGCCCCTATACCCAAATTCGACGATCGATTTGCACGTCAGAATCGCTACGAGCCTCCACCAGAGTTTCCTCTGGCTTCACCCTATTCAGGCATAGTTCACCATCTTTCGGGTCCCAACATACATGCTCTACCGCGGAGCCGTCAGAAAACGTCTGGTCCGGGCGTCGATGCACTCTAAAGAGTTCTCAACTTTCACTTTCATTGCGCGCTCGGGTTTTCCACCCAAACACTCGCAGGCATGTTAGACTCCTTGGTCCGTGTTTCAAGACGGGTCGATTAAAGCCATTATGCCAGCATCCTAAGCACGAACGTGGTACAAGACCCGGCCTTTCGGCGTGCTGAGTTCCTCAGTCCCAACCGTTGTATACAACCAAGGGCTATAACACTCCCGAGGGAGCCACATTCCCCTAGCCTTTATCCAACGGTCAAAACTGATGCTGACCCGTCCACTAGGAAGTACATCAAGCAGAAGCAAGACTGATTCCCAGCAGACGCGACTGGACTTTAAGCGTTTC CCTTTCAACAATTTCACGTACTGTTTAACTCTCTTTCCAAAGTTCTTTTCATCTTTCCCTCACGGTACTTGTTTGCTATCGGTCTCTCGCCAATATTTAGCTTTAGATGGAATTTACCACCCATTTAGTGCTGCATTCCCAAACAACACGACTCTTTGAGAGCGCACCACAATGTACTGGGAGTCCGTGTCAAAGACGGGATTCTCACCCTCTATGACGCTCCATTCCAGGAGACTTGTACACGGTCCAGCACGGGCAACGCTTCTCTAAATTACAACTCGGACAGCGGAGCTGCCAGATTTTAAATTTGAGCTTTTCCCTCTTCACTCGCAGTTACTAGGGGAATCCTTGTTAGTTTCTTTTCCTCCGCTATTGGAAATGCACA(SEQ ID No.5)。
>ZYJHYZ268 Piloderma sp.
TGGAAGTAAAAATCGTAACAAGGTTTCCGAGtGAaCcTGCGGAaGgAtCATTATCGAATGATTAAGCCCTGGCTGTAGCTGGCCTTTCGAGGCATGTGCACGCCTGTGGTGAATTCATCCATACACACCTGTGAACCTATTGTGGGACGCCCTTCGGGGTGAATCCCATGTTTTACACACACTCTTGTATGTCTATAGAATGTAAAGCTTGTATTGCCGTAAAACGCAAACTTATACAACTTTCAACAACGGATCTCTTGGCTCTCGCATCGATGAAGAACGCAGCGAAATGCGATAAGTAATGTGAATTGCAGATTTTCAGTGAATCATCGAATCTTTGAACGCACCTTGCGCTCCTTGGTATTCCGAGGAGCATGCCTGTTTGAGTGTCATTAAATTCTCAACCCCTAACGGATTTGCGTCTGGGAGGGGCTTGGACTTGGAGCGTGCTGGCCTTTGTTGGTCGGCTCCTCTTAAATGCATCAGCGGAAAGGTATTTGCTTTCTGAGCATCAGTGTGATAATATGTTGCGCTGTTGTTGGAATGGCAATGTCCGCTTAGAATGGTCTTCGGACAAACTTCATTtGAAACtTGACCTCAAATCAGGTAGgACCCGTGAACTTAAGCATATCAAAAGCCCGAAGAGAAGCA(SEQ ID No.6)。
>ZYJHYZ269 Neopestalotiopsis clavispora
TCGTAACAAGGTCTCCGTTGGTGAACCAGCGGAGGGATCATTATAGAGTTTTCTAAACTCCCAACCCATGTGAACTTACCTTTTGTTGCCTCGGCAGAAGTTATAGGTCTTCTTATAGCTGCTGCCGGTGGACCATTAAACTCTTGTTATTTTATGTAATCTGAGCGTCTTATTTTAATAAGTCAAAACTT TCAACAACGGATCTCTTGGTTCTGGCATCGATGAAGAACGCAGCGAAATGCGATAAGTAATGTGAATTGCAGAATTCAGTGAATCATCGAATCTTTGAACGCACATTGCGCCCATTAGTATTCTAGTGGGCATGCCTGTTCGAGCGTCATTTCAACCCTTAAGCCTAGCTTAGTGTTGGGAATCTACTTCTCTTAGGAGTTGTAGTTCCTGAAATACAACGGCGGATTTGTAGTATCCTCTGAGCGTAGTAATTTTTTTCTCGCTTTTGTTAGGTGCTATAACTCCCAGCCGCTAAACCCCCAATTTTTTGTGGTTGACCTCGGATCAGGTAGGAATACCCGCTGAACTTAAGCATATCAAAAGGCCGG(SEQ ID No.7)。
>ZYJHYZ270 Cladosporium subuliforme
CTGATCGAGGTCACCTTAGAATGGGGTTGTTTTACGGCGTAGCCTCCCGAACACCCTTTAGCGAATAGTTTCCACAACGCTTAGGGGACAGAAGACCCAGCCGGTCGATTTGAGGCACGCGGCGGACCGCGTTGCCCAATACCAAGCGAGGCTTGAGTGGTGAAATGACGCTCGAACAGGCATGCCCCCCGGAATACCAGGGGGCGCAATGTGCGTTCAAAGATTCGATGATTCACTGAATTCTGCAATTCACATTACTTATCGCATTTCGCTGCGTTCTTCATCGATGCCAGAACCAAGAGATCCGTTGTTAAAAGTTTTAATTTATTAATTAAGTTTACTCAGACTGCAAAGTTACGCAAGAGTTTGAAGTGTCCACCCGGAGCCCCCGCCCGAAGGCAGGGTCGCCCCGGAGGCAACAGAGTCGGACAACAAAGGGTTATGAACATCCCGGTGGTTAGACCGGGGTCACTTGTAATGATCCCTCCGCAGGTTCACCTACGGAGACCTTGTTA(SEQIDNo.8)。
实施例2
本实施例对实施例筛选得到的降解生物质菌株进行酶活力检测，具体步骤为：
2.1粗酶液的提取
将实施例1复筛出的生长良好的菌株接种于种子培养基中28℃、150r/min培养3～5天，称取用ddH2O洗净后的菌丝球2g(湿重)转接于100ml木质素降解液体培养基中，28℃150r/min振摇培养11天，从第3天起隔天吸取2ml培养液，4℃、14000r/min离心10min得上清，存于-20℃待测酶活。
2.2木质素过氧化物酶酶活检测
用ABTS法测定：以2，2'-azino-bis(3-ethylbenzothiazoline-6-sulphonicacid，ABTS)及H2O2为底物，反应体系为：125μl ddH2O，10μl H2O2，25μl400mM briffon-Robinson buffer(pH 4.5)，20μl酶上清液，20μl ABTS加入到96孔板中，25℃孵育1h后，以漩涡混匀器低速混匀，在436nm处测定吸光值，每个菌株均重复测定三次取平均值，检测结果如图2所示，从图2可知，所有菌均产生了高低不同的LiP酶活，总体来说，其中阳性对照菌的酶活最高，从第3天开始产酶，在第7天达到了峰值，为223.59U/umol，其次是所筛菌株中的ZYJHYZ268号菌，在第3天时达到了峰值，此后呈逐渐递减趋势，第3天酶活达到了176.85U/umol，是ZYJHYZ267的4.12倍。此外，ZYJHYZ246、ZYJHYZ257的总体产酶能力也达到了150U/umol以上，除ZYJHYZ263外，其他菌的LiP酶活在第7天后都开始消减。
2.3漆酶酶活检测
以ABTS为底物，反应体系为：140μl ddH2O，20μl glycine-HCl(500mM，pH 3.0)，20μl酶上清液，20μl ABTS加入到96孔板中，25℃孵育过夜后，以漩涡混匀器低速混匀，在436nm处测定吸光值，每个菌株均重复测定三次取平均值，检测结果如图3所示，从图3可知，阳性对照菌与ZYJHYZ268的Lac酶活明显高于其他菌，其中阳性对照菌的最高酶活为141.23U/umol，ZYJHYZ268在第5天达到了峰值，酶活为250.83U/umol，是ZYJHYZ267的7.85倍。大多数菌的产酶峰值在第5～7天，也偶见个别菌株峰值在第3天。
酶活定义：一个单位的酶活力值(U)被定义为产生1μmol的还原糖所需要的酶量。计算公式如下：式中ε为ABTS氧化态的摩尔消光系数(36000L·mol-1·cm-1)，t的单位为h。
对比例1
本实施例提供了一种降解生物质菌株的筛选方法，与实施例1的区别在于，选用的中药渣为余甘子药渣，并采用实施例2的方法对筛选得到的菌株进行酶活力检测，实施例3结果如下表(发酵第3～11天酶活值)：
经一个月筛选得到30余株真菌，利用实施例1级实施例2筛选后取其中效果最显著的一株菌，编号为ZYJHYZ299，鉴定为Isaria farinosa，在NCBI数据库中登陆号为MZ321996，ITS序列如下：
>ZYJHYZ299 Isaria farinosa
GAAGTCGGGGGTTTTACGGCGTGGCCACGTCGGGGTTCCGGTGCGAGTTGGATTACTACGCAGAGGTCGCCGCGGACGGGCCGCCACTTCATTTCGGGGCCGGCGGTATACGGCCGGTCCCCAACGCCGATTTCCCCAAAGGGAAGTCGAGGGTTGAAATGACGCTCGAACAGGCATGCCCGCCAGAATGCTGGCGGGCGCAATGTGCGTTCAAAGATTCGATGATTCACTGAATTCTGCAATTCACATTACTTATCGCATTTCGCTGCGTTCTTCATCGATGCCAGAACCAAGAGATCCGTTGTTGAAAGTTTTGATTCATTTGTGTTGCCTTGCGGCGGATTCAGAAGATACTGAGAATACAGAGTTTGGGGGTCTCCGGCGGCCGCCTGGATCCAGGCCGCGGCCGGCGCGGGGCCGGCCGGACGCTGGGGCGAGTCCGCCGAAGCAACGATAGGTATGTTCACAGAAGGGTTTGGGAGTTGAAAACTCGGTAATGATCCCTCCGCTGGTTCACCAACGGAGACCTTGTTA(SEQ ID No.9)。
应用例1
取相同量余甘子叶片，粉碎处理后，替换木质素为底物，利用本发明中菌株ZYJHYZ268 Piloderma sp.进行发酵实验，发酵条件同实施例2，发酵半个月后烘干检测底物总体减少质量及木质素剩余量。
结果：如图4所示，余甘子叶片发酵15天后底物剩余量。
经计算余甘子叶片质量减少了63.23％，木质素总比减少51.78％。
应用例2
取具体的非中药残渣，采用本申请权利要求1的Piloderma，或含有该菌的菌剂处理中药残渣，证明本申请的菌株对生物质处理具有普适性。
取相同量农业废弃物秸秆，粉碎处理后，替换木质素为底物，利用本发明中菌株ZYJHYZ268 Piloderma sp.进行发酵实验，发酵条件同实施例2，发酵半个月后烘干检测底物总体减少质量及木质素剩余量。
结果：如图5所示，秸秆发酵15天后底物剩余量。
经计算余甘子叶片质量减少了52.5％，木质素总比减少39.21％。
应用例3
采用对比例1或对比例2中的菌株重复应用例1和2，证明其他方法得到的菌株对于中药生物质不具有普适性。
对比例1所用菌株为白腐菌，购自中国微生物保藏中心，保藏编号为NDM3-2，发酵15天后总质量减少了30.4％，木质素减少了22.16％。结果如图6所示。
应用例4所用菌株为黄孢原毛平革菌，购自荷兰CBS真菌多样性保藏中心，编号为CBS 246.84，发酵15天后总质量减少了36.23％，木质素减少了27％。结果如图7所示。
最后应说明的是：以上各实施例仅用以说明本发明的技术方案，而非对其限制；尽管参照前述各实施例对本发明进行了详细的说明，本领域的普通技术人员应当理解：其依然可以对前述各实施例所记载的技术方案进行修改，或者对其中部分或者全部技术特征进行等同替换；而这些修改或者替换，并不使相应技术方案的本质脱离本发明各实施例技术方案的范围。
SEQUENCE LISTING
<110> 贵州医科大学 贵州拜乐锦生物技术有限公司
<120> 降解生物质菌株的筛选方法、木霉菌及应用
<160> 9
<170> PatentIn version 3.5
<210> 1
<211> 522
<212> DNA
<213> Coniochaeta velutina
<400> 1
gccgaaaggc tacttaaaac catcgcgaac tcgtccaagt tgcttcggcg gcgcggcctc 60
cctcacgggg gcgccgcagc cccgcctctc cggaggtgtg gggcgcccgc cggaggtacg 120
aaactctgta ttatagtggc atctctgagt aaaaaacaaa taagttaaaa ctttcaacaa 180
cggatctctt ggttctggca tcgatgaaga acgcagcgaa atgcgataag taatgtgaat 240
tgcagaattc agtgaatcat cgaatctttg aacgcacatt gcgcccgcta gtactctagc 300
gggcatgcct gttcgagcgt catttcaacc ctcaagccct gcttggtgtt ggggccctac 360
ggctgccgta ggccctgaaa ggaagtggcg ggctcgctac aactccgagc gtagtaattc 420
attatctcgc tagggacgtt gcggcgcgct cctgccgtta aagaccatct ttaactcaag 480
gttgacctcg gatcaggtag gaatacccgc tgaacttaag ca 522
<210> 2
<211> 677
<212> DNA
<213> Phaeophlebiopsis sp.
<400> 2
aacaaggttt ccgtaggtga acctgcggaa ggatcattat cgagttttga aacgggttgt 60
agctggcctt tctaaccagg aaggcatgtg cacgcctggc tcattccact cttcaacctc 120
tgtgcactta ttgtaggtcg gtggaaagct tggagctttt ttaattaaaa gccttcaagt 180
tggaagcctt cctatgtttt actacaaacg cttcagttat agaatgttta tcttgcgtat 240
aacgcattta tatacaactt tcagcaacgg atctcttggc tctcgcatcg atgaagaacg 300
cagcgaaatg cgataagtaa tgtgaattgc agaattcagt gaatcatcga atctttgaac 360
gcaccttgcg ctccctggta ttccggggag catgcctgtt tgagtgtcat ggaattctca 420
acctcttaaa tttttgttaa ccaaaagttt aagaggcttg gacttggagg cttgtgctgg 480
ctctaatttg ttgagtcggc tcctcttaaa tgcattagcg tgaatgttta cggatcgctt 540
cggtgtgata attatctgcg ccgtggttgt gaagtatcga taagtttacg cttctaatcg 600
tcctttcaat aggacaattg ataaacttga catctggcct caaatcaggt aggactaccc 660
gctgaactta agcatat 677
<210> 3
<211> 568
<212> DNA
<213> Bjerkandera adusta
<400> 3
ggttagaagc gtgaacacta gaataccctc cacagcaacg cagataatta tcacgctgaa 60
gcggctggta acgttcgcac taatgcattt cagaggagcc gactacgaga gccggcacga 120
cctccaagtc caagccttca tcaataaagc tgaaggttga gaattccatg agactcaaac 180
aggcatgctc ctcggaatac caaggagcgc aaggtgcgtt caaagattcg atgattcact 240
gaattctgca attcacatta cttatcgcat ttcgctgcgt tcttcatcga tgcgagagcc 300
aagagatccg ttgctgaaag ttgtatataa ttgcgttata gcaaagtatg acattctaaa 360
actgaatcgt ttgtagtaaa gcataagccc gacacctaca agtgcgcgaa cgcacccaca 420
agccggccta tgaaaagtgc acagaagttg agagtggatg agacaggcgt gcacatgccc 480
ttgcgagcca gcagacaacc cattcaaaac tcgataatga tccttccgca ggttcaccta 540
cggaaacctt gttacgactt tttacttc 568
<210> 4
<211> 598
<212> DNA
<213> Nemania diffusa
<400> 4
ttggaagtaa aaaatcgtaa caaggtctcc gttggtgaac cagcggaggg atcattaaag 60
agtgtaataa ctcccaaacc catgtgaaca tacctcatgt tgcctcggca ggtcgtgcct 120
ccctcgtagg tcctaccctg taggctctta cccggaaggc gcgggtaccc ctgccggtgg 180
cccaggaaac tctgtctcat cgttgaattc tgaacctata actaaataag ttaaaacttt 240
caacaacgga tctcttggtt ctggcatcga tgaagaacgc agcgaaatgc gataagtaat 300
gtgaattgca gaattcagtg aatcatcgaa tctttgaacg cacattgcgc ccattagtat 360
tctagtgggc atgcctgttc gagcgtcatt tcaaccctta agcccttgtt gcttagcgtt 420
gggagcctac ggcaccgtag ctccccaaag tcagtggcgg agccggctca cactctagac 480
gtagtaattt ctcacctcgc ctatagttgg accggtcccc tgccgtaaaa cgccccagta 540
tttaaaaggt tgacctcgaa tcaggtagga atacccgctg aacttaagca tatcaaaa 598
<210> 5
<211> 955
<212> DNA
<213> Cryptomarasmius crescentiae
<400> 5
tttcctgagg ggaaattcgg caggaaccag ctactagatg gttcgattag tctttcgccc 60
ctatacccaa attcgacgat cgatttgcac gtcagaatcg ctacgagcct ccaccagagt 120
ttcctctggc ttcaccctat tcaggcatag ttcaccatct ttcgggtccc aacatacatg 180
ctctaccgcg gagccgtcag aaaacgtctg gtccgggcgt cgatgcactc taaagagttc 240
tcaactttca ctttcattgc gcgctcgggt tttccaccca aacactcgca ggcatgttag 300
actccttggt ccgtgtttca agacgggtcg attaaagcca ttatgccagc atcctaagca 360
cgaacgtggt acaagacccg gcctttcggc gtgctgagtt cctcagtccc aaccgttgta 420
tacaaccaag ggctataaca ctcccgaggg agccacattc ccctagcctt tatccaacgg 480
tcaaaactga tgctgacccg tccactagga agtacatcaa gcagaagcaa gactgattcc 540
cagcagacgc gactggactt taagcgtttc cctttcaaca atttcacgta ctgtttaact 600
ctctttccaa agttcttttc atctttccct cacggtactt gtttgctatc ggtctctcgc 660
caatatttag ctttagatgg aatttaccac ccatttagtg ctgcattccc aaacaacacg 720
actctttgag agcgcaccac aatgtactgg gagtccgtgt caaagacggg attctcaccc 780
tctatgacgc tccattccag gagacttgta cacggtccag cacgggcaac gcttctctaa 840
attacaactc ggacagcgga gctgccagat tttaaatttg agcttttccc tcttcactcg 900
cagttactag gggaatcctt gttagtttct tttcctccgc tattggaaat gcaca 955
<210> 6
<211> 651
<212> DNA
<213> Piloderma sp.
<400> 6
tggaagtaaa aatcgtaaca aggtttccga gtgaacctgc ggaaggatca ttatcgaatg 60
attaagccct ggctgtagct ggcctttcga ggcatgtgca cgcctgtggt gaattcatcc 120
atacacacct gtgaacctat tgtgggacgc ccttcggggt gaatcccatg ttttacacac 180
actcttgtat gtctatagaa tgtaaagctt gtattgccgt aaaacgcaaa cttatacaac 240
tttcaacaac ggatctcttg gctctcgcat cgatgaagaa cgcagcgaaa tgcgataagt 300
aatgtgaatt gcagattttc agtgaatcat cgaatctttg aacgcacctt gcgctccttg 360
gtattccgag gagcatgcct gtttgagtgt cattaaattc tcaaccccta acggatttgc 420
gtctgggagg ggcttggact tggagcgtgc tggcctttgt tggtcggctc ctcttaaatg 480
catcagcgga aaggtatttg ctttctgagc atcagtgtga taatatgttg cgctgttgtt 540
ggaatggcaa tgtccgctta gaatggtctt cggacaaact tcatttgaaa cttgacctca 600
aatcaggtag gacccgtgaa cttaagcata tcaaaagccc gaagagaagc a 651
<210> 7
<211> 560
<212> DNA
<213> Neopestalotiopsis clavispora
<400> 7
tcgtaacaag gtctccgttg gtgaaccagc ggagggatca ttatagagtt ttctaaactc 60
ccaacccatg tgaacttacc ttttgttgcc tcggcagaag ttataggtct tcttatagct 120
gctgccggtg gaccattaaa ctcttgttat tttatgtaat ctgagcgtct tattttaata 180
agtcaaaact ttcaacaacg gatctcttgg ttctggcatc gatgaagaac gcagcgaaat 240
gcgataagta atgtgaattg cagaattcag tgaatcatcg aatctttgaa cgcacattgc 300
gcccattagt attctagtgg gcatgcctgt tcgagcgtca tttcaaccct taagcctagc 360
ttagtgttgg gaatctactt ctcttaggag ttgtagttcc tgaaatacaa cggcggattt 420
gtagtatcct ctgagcgtag taattttttt ctcgcttttg ttaggtgcta taactcccag 480
ccgctaaacc cccaattttt tgtggttgac ctcggatcag gtaggaatac ccgctgaact 540
taagcatatc aaaaggccgg 560
<210> 8
<211> 515
<212> DNA
<213> Cladosporium subuliforme
<400> 8
ctgatcgagg tcaccttaga atggggttgt tttacggcgt agcctcccga acacccttta 60
gcgaatagtt tccacaacgc ttaggggaca gaagacccag ccggtcgatt tgaggcacgc 120
ggcggaccgc gttgcccaat accaagcgag gcttgagtgg tgaaatgacg ctcgaacagg 180
catgcccccc ggaataccag ggggcgcaat gtgcgttcaa agattcgatg attcactgaa 240
ttctgcaatt cacattactt atcgcatttc gctgcgttct tcatcgatgc cagaaccaag 300
agatccgttg ttaaaagttt taatttatta attaagttta ctcagactgc aaagttacgc 360
aagagtttga agtgtccacc cggagccccc gcccgaaggc agggtcgccc cggaggcaac 420
agagtcggac aacaaagggt tatgaacatc ccggtggtta gaccggggtc acttgtaatg 480
atccctccgc aggttcacct acggagacct tgtta 515
<210> 9
<211> 534
<212> DNA
<213> Isaria farinosa
<400> 9
gaagtcgggg gttttacggc gtggccacgt cggggttccg gtgcgagttg gattactacg 60
cagaggtcgc cgcggacggg ccgccacttc atttcggggc cggcggtata cggccggtcc 120
ccaacgccga tttccccaaa gggaagtcga gggttgaaat gacgctcgaa caggcatgcc 180
cgccagaatg ctggcgggcg caatgtgcgt tcaaagattc gatgattcac tgaattctgc 240
aattcacatt acttatcgca tttcgctgcg ttcttcatcg atgccagaac caagagatcc 300
gttgttgaaa gttttgattc atttgtgttg ccttgcggcg gattcagaag atactgagaa 360
tacagagttt gggggtctcc ggcggccgcc tggatccagg ccgcggccgg cgcggggccg 420
gccggacgct ggggcgagtc cgccgaagca acgataggta tgttcacaga agggtttggg 480
agttgaaaac tcggtaatga tccctccgct ggttcaccaa cggagacctt gtta 534

Claims (4)

1. 一种Piloderma菌株，其特征在于，所述Piloderma菌株保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，菌种保藏号为CGMCC No. 23890。
2.一种菌剂，其特征在于，包括权利要求1所述的Piloderma菌株。
3.权利要求1所述Piloderma菌株、或权利要求2所述的菌剂在降解木质素中或者在制备木质素降解产品中的应用。
4.根据权利要求3所述的应用，其特征在于，所述木质素的来源包括中药和/或中药渣。
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Citations (10)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO1992001046A1 (en) * 1990-07-06 1992-01-23 Valtion Teknillinen Tutkimuskeskus Laccase production by recombinant organisms
WO2008085356A1 (en) * 2007-01-03 2008-07-17 Danisco Us, Inc., Genencor Division Conditioning biomass for microbial growth
CN101503659A (zh) * 2009-03-11 2009-08-12 中国农业大学 一种哈茨木霉菌株及其应用
CN101591679A (zh) * 2009-07-07 2009-12-02 南京大学 利用混合菌种提高天然牧草生产燃料乙醇利用率的方法
FI124476B (en) * 2012-05-24 2014-09-15 Roal Oy Improved endoglucanases for handling cellulosic material
CN106434386A (zh) * 2016-11-24 2017-02-22 郑州大学 用于降解秸秆的微生物、菌剂及其制备方法和应用
CN108642122A (zh) * 2018-04-30 2018-10-12 天津大学 检测降解木质素菌的降解能力的方法
CN108913604A (zh) * 2018-06-28 2018-11-30 贵州医科大学 一种白酒丢糟的高效水解菌株的筛选方法
CN109517743A (zh) * 2018-12-28 2019-03-26 山东省科学院生态研究所 一株木霉菌株st02及其应用
CN110997907A (zh) * 2017-05-26 2020-04-10 核酸有限公司 末端转移酶在核酸合成中的用途

Family Cites Families (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US10813960B2 (en) * 2000-10-04 2020-10-27 Paul Edward Stamets Integrative fungal solutions for protecting bees and overcoming colony collapse disorder (CCD)
AU2002244133A1 (en) * 2001-02-20 2002-09-04 Paul Stamets Delivery systems for mycotechnologies, mycofiltration and mycoremediation
US8975058B2 (en) * 2012-05-24 2015-03-10 Roal Oy Endoglucanases for treatment of cellulosic material

Patent Citations (10)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO1992001046A1 (en) * 1990-07-06 1992-01-23 Valtion Teknillinen Tutkimuskeskus Laccase production by recombinant organisms
WO2008085356A1 (en) * 2007-01-03 2008-07-17 Danisco Us, Inc., Genencor Division Conditioning biomass for microbial growth
CN101503659A (zh) * 2009-03-11 2009-08-12 中国农业大学 一种哈茨木霉菌株及其应用
CN101591679A (zh) * 2009-07-07 2009-12-02 南京大学 利用混合菌种提高天然牧草生产燃料乙醇利用率的方法
FI124476B (en) * 2012-05-24 2014-09-15 Roal Oy Improved endoglucanases for handling cellulosic material
CN106434386A (zh) * 2016-11-24 2017-02-22 郑州大学 用于降解秸秆的微生物、菌剂及其制备方法和应用
CN110997907A (zh) * 2017-05-26 2020-04-10 核酸有限公司 末端转移酶在核酸合成中的用途
CN108642122A (zh) * 2018-04-30 2018-10-12 天津大学 检测降解木质素菌的降解能力的方法
CN108913604A (zh) * 2018-06-28 2018-11-30 贵州医科大学 一种白酒丢糟的高效水解菌株的筛选方法
CN109517743A (zh) * 2018-12-28 2019-03-26 山东省科学院生态研究所 一株木霉菌株st02及其应用

Non-Patent Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
Identification of laccase-like genes in ectomycorrhizal basidiomycetes and transcriptional regulation by nitrogen in Piloderma byssinum;David M Chen等;New Phytol;全文 *
不同微生物菌株及其组合处理对玉米秸秆瘤胃降解率的影响;张立霞等;动物营养学报;全文 *
长期秸秆还田与施肥对潮土酶活性和真菌群落的影响;李月等;生态环境学报;全文 *

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