CN114557997A - 一种用于防治牙痛的水芹菜组合物及其制备方法和应用 - Google Patents

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Abstract

本发明涉及生物医药技术领域，具体涉及一种用于防治牙痛的水芹菜组合物及其制备方法和应用。水芹菜组合物由以下重量份数的原料制成：黄酮类化合物，3‑180份；不饱和脂肪酸类化合物，3‑100份；所述黄酮类化合物包括芹菜素、木犀草素和香叶木素，芹菜素1‑80份、木犀草素1‑80份、香叶木素1‑20份；所述不饱和脂肪酸类化合物包括绿原酸、咖啡酸和没食子酸，绿原酸1‑70份、咖啡酸1‑21份、没食子酸1‑9份。本发明利用气相色谱‑质谱联用、液相色谱‑质谱联用将芹菜中的化合物进行提取分离，利用培养基筛选发现黄酮类化合物和不饱和脂肪酸类化合物共同作用，被用于制备牙龈炎症药物进而治疗牙痛有显著效果。

Description

一种用于防治牙痛的水芹菜组合物及其制备方法和应用
技术领域
本发明涉及生物医药技术领域，具体来说是一种用于防治牙痛的水芹菜组合物及其制备方法和应用。
背景技术
牙痛是一种很常见也很普遍的病症，引起牙痛疾病的原因有很多，比如：牙髓炎、牙周炎、根尖周炎以及龋病，导致这些疾病的原因往往是由于饮食习惯不当、口腔卫生不洁、物理创伤、细菌、蛀虫滋生等。当牙髓受伤害时，若不进行治疗，牙髓将难以抵御外部环境的刺激，有的牙髓还会出现急性浆液性化脓或慢性溃疡等多种症状；当牙周膜发生炎症时，其功能会降低，会使我们在咀嚼时感到疼痛，一旦炎症进一步发展，还可能会出现溃烂；而由于各种原因导致的局部感染从而出现牙龈肿胀和剧烈疼痛，其进一步恶化可导致智齿周围炎、颌骨炎、颈部蜂窝组织炎等。可见，牙齿疾病若不及时治疗将会严重危及我们的健康。
目前，对于牙痛的治疗常采取药物治疗、应急处理和根尖治疗法三种；在面对大部分牙齿疾病引发的疼痛时，多以口服药物为主进行治疗，口服药物采用头孢菌素类抗生素和止痛药物为主，头孢菌素类抗生素虽然可以对牙痛发挥作用，但是多次服用却会产生耐药性；市面上常用的止痛药物为布洛芬胶囊和高乌甲素片，但是二者都具有一定的副作用；服用布洛芬胶囊可能会导致病人出现恶心、呕吐，胃有烧灼的症状，服用高乌甲素也有可能导致个别患者出现荨麻疹、心慌胸闷、头晕等症状。
目前关于芹菜方面的研究很多，已证得芹菜成分包括黄酮类化合物：芹菜素、芦丁、槲皮素、木犀草素等；脂肪酸：伞性花子油酸、油酸、亚油酸、亚麻酸、棕榈酸、硬脂酸等；挥发油：月桂烯、柠檬烯等；香豆素类化合物：呋喃香豆素等；苯酞类化合物：丁基笨酞；三萜类化合物等。而依据芹菜这些基本的成分还展开了对其相关功能的探究；比如专利公开号CN103153322B就以水芹菜为对象，提出了含有水芹菜提取物作为有效成分的学习能力或记忆力障碍预防或治疗用组合物及其制造方法，该发明的组合物相对于组合物总质量，以固体成分为基础，含有水芹菜提取物0.1～50％；根据该发明包含水芹菜提取物作为有效成分的组合物，根据通常的方法可制成散剂、颗粒剂、片剂、胶囊剂、混悬液、乳液、糖浆、气雾剂等口服型剂型、外用剂、栓剂及灭菌注射溶液的形态使用，使用范围广泛。
虽然现有技术公开了芹菜中组合物的作用，例如上述的针对学习能力或记忆力障碍预防或治疗用组合物及其制造方法的芹菜中组合物，但是有关芹菜与牙痛联系的研究尚未见报道，因此本发明的目的在于提供由天然物得到的没有毒性和副作用，具有强力的缓解牙疼效果，能够预防或治疗牙疼的药物组合物。
发明内容
针对上述现有技术存在的不足，本发明提供了一种利用芹菜中组合成分治疗牙痛的方法；本发明利用气相色谱-质谱联用(GC-MS)、液相色谱-质谱联用将芹菜中的黄酮类化合物、酚酸类化合物、三萜类化合物、香豆素类化合物等物质进行提取分离，利用培养基筛选发现黄酮类化合物、不饱和脂肪酸两大类物质共同作用对治疗牙痛有显著效果。
为实现上述目的，本发明的技术方案如下：
一种用于防治牙痛的水芹菜组合物，由以下重量份数的原料制成：黄酮类化合物，3-180份；不饱和脂肪酸类化合物，3-100份；
所述黄酮类化合物包括芹菜素、木犀草素和香叶木素，芹菜素1-80份、木犀草素1-80份、香叶木素1-20份；
所述不饱和脂肪酸类化合物包括绿原酸、咖啡酸和没食子酸，绿原酸1-70份、咖啡酸1-21份、没食子酸1-9份。
优选的，所述黄酮类化合物与不饱和脂肪酸类化合物的质量比为3-90:3-50。
优选的，所述黄酮类化合物与不饱和脂肪酸类化合物的质量比为9：5。
优选的，所述水芹菜组合物按照如下步骤提取：
(1)将水芹菜榨汁后，进行醇提操作，得到样品液；
(2)向步骤(1)的样品液中加入体积分数为20％的盐酸溶液，于80-95℃下水浴水解1-2h，用乙醚反复萃取后浓缩干燥，再用无水乙醇溶解，得到提取液；
其中，所述样品液和盐酸溶液的体积比为1-5：2-10。
(3)利用气相色谱-质谱联用、液相色谱-质谱联用分析步骤(2)提取液中的组分；
(4)利用层析柱分离提纯步骤(2)提取液中组分，得到水芹菜组合物。
本发明还保护了用于防治牙痛的水芹菜组合物的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：
步骤1、按重量份数称取以下原料：黄酮类化合物，3-180份；不饱和脂肪酸类化合物，3-100份，备用；
步骤2、将步骤(1)的原料制成药学上可接受的药物制剂。
优选的，若所述药物制剂为口服散剂，则包括如下步骤：
称取水芹菜组合物、乳糖、小苏打，混合后填充到气密包中制成散剂；
其中，所述水芹菜组合物、乳糖、小苏打的质量比为1-10:0.1-1:0.03-0.5。
优选的，若所述药物制剂为片剂，则包括如下步骤：
称取水芹菜组合物、玉米淀粉、乳糖、硬脂酸镁、干淀粉、去离子水，混合后打片制成片剂；
其中，所述水芹菜组合物、玉米淀粉、乳糖、硬脂酸镁、干淀粉、去离子水的质量比为1-10:0.1-1:0.1-1:0.002-0.01:0.02-0.1:1-10；
本发明还保护了用于防治牙痛的水芹菜组合物在制备牙龈炎症药物中的应用，所述牙龈炎症为牙髓炎，所述牙髓炎为由清洁不到位、细菌堆积或上火引起的牙龈发炎。
与现有技术相比，本发明的有益效果：
1、本发明提供的组合物是由水芹菜提取得到，未发现毒性和副作用，具有强力的缓解牙疼效果，是能够预防或治疗牙疼的药物组合物；由于本发明的用于防治牙痛的水芹菜组合物具有强效抑制葡萄球菌、白色念珠菌、变形链球菌、放线粘杆菌、产黑色素类杆菌、牙龈炎杆菌和伴放线嗜血菌等致病菌，并且该组合物还具有消炎效果，因此本发明组合物将广泛用于治疗两类牙髓炎，一是因为清洁不到位、细菌堆积引起的牙龈炎症，二是因为上火导致牙龈发炎的牙龈炎症；且可针对不同人群进行不同配比的调配，或是制作不同的药物制剂形态。
2、本申请针对牙痛治疗，提出了水芹菜中能够治疗牙痛的相关组合成分，它能够根治部分引起牙痛的疾病，能够作为镇痛药物辅助治疗牙齿类疾病，也能够缓解牙痛带来的困扰，该组合成分相比于现有技术常用的牙痛类治疗药物更加的绿色健康、服用安全，且没有副作用。
附图说明
图1为白色念珠菌(真菌)在培养基内的生长情况图；
图2为培养基内加入实施例2的水芹菜组合物后白色念珠菌(真菌)在培养基内的生长情况图。
具体实施方式
下面对本发明的具体实施方式进行详细描述，但应当理解本发明的保护范围并不受具体实施方式的限制。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动的前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。本发明各实施例中所述实验方法，如无特殊说明，均为常规方法。
下述实验方法和检测方法，如没有特殊说明，均为常规方法；下述试剂和原料，如没有特殊说明，均为市售。
本发明的水芹菜采摘自乐山水田旁边种植区，其适宜生长在土质疏松、土层肥沃且凉爽的地方，其收获期为11月中旬。
本发明实施例的水芹菜组合物均是按照如下步骤进行提取的：
(1)将水芹菜榨汁后，进行醇提操作，得到样品液；
(3)向步骤(1)的样品液中加入体积分数为20％的盐酸溶液，于90℃下水浴水解1h，用乙醚反复多次萃取后，回收乙醚并浓缩干燥，再用无水乙醇溶解，得到提取液；
其中，所述样品液和盐酸溶液的体积比为2：5；
(3)利用气相色谱-质谱联用、液相色谱-质谱联用分析步骤(2)提取液中的组分；
(4)利用层析柱分离提纯提取液中的组分，得到水芹菜组合物。
实施例1
一种用于防治牙痛的水芹菜组合物的制备方法，包括如下步骤：
(1)称量：按照质量比为9：5的比例称取黄酮类化合物、不饱和脂肪酸类化合物备用；
其中，所述黄酮类化合物包括芹菜素、木犀草素和香叶木素，所述芹菜素30份；木犀草素80份；香叶木素20份；所述不饱和脂肪酸类化合物包括绿原酸、咖啡酸和没食子酸，所述绿原酸60份，所述咖啡酸8份；所述没食子酸4份；
(2)将1.01g的水芹菜组合物、100mg的乳糖、100mg的小苏打，混合后填充到气密包中制造散剂。
实施例2
一种用于防治牙痛的水芹菜组合物的制备方法，包括如下步骤：
(1)称量：按照质量比为9：5的比例称取黄酮类化合物、不饱和脂肪酸类化合物备用；
其中，所述黄酮类化合物包括芹菜素、木犀草素和香叶木素，所述芹菜素20份；木犀草素60份；香叶木素10份；所述不饱和脂肪酸类化合物包括绿原酸、咖啡酸和没食子酸，所述绿原酸42份，所述咖啡酸5份；所述没食子酸3份；
(2)将0.7g的水芹菜组合物、100mg的玉米淀粉、100mg的乳糖、2mg的硬脂酸镁、20mg的干淀粉、去离子水混合后，打片制造成片剂。
实施例3
一种用于防治牙痛的水芹菜组合物的制备方法，包括如下步骤：
(1)称量：按照质量比为1：1的比例称取黄酮类化合物、不饱和脂肪酸类化合物备用；
其中，所述黄酮类化合物包括芹菜素、木犀草素和香叶木素，所诉芹菜素1份；木犀草素1份；香叶木素1份；所述不饱和脂肪酸类化合物包括绿原酸、咖啡酸和没食子酸，所述绿原酸1份；所述咖啡酸1份；所述没食子酸1份；
(2)每0.03g芹菜组合物兑水并稀释至100mL后，与雪梨汁混合，二者质量比4∶1，然后添加质量分数为10％的蔗糖，质量分数为0.10％的柠檬酸，质量分数为0.28％的功能稳定剂，功能稳定剂包括质量分数为0.08％的柠檬酸钠，质量分数为0.1％的β-环糊精，质量分数为0.1％的果胶。
实施例4
一种用于防治牙痛的水芹菜组合物的制备方法，包括如下步骤：
(1)称量：按照质量比为3：100的比例称取黄酮类化合物、不饱和脂肪酸类化合物备用；
所述黄酮类化合物包括芹菜素、木犀草素和香叶木素，芹菜素1份、木犀草素1份、香叶木素1份；
所述不饱和脂肪酸类化合物包括绿原酸、咖啡酸和没食子酸，绿原酸70份、咖啡酸21份、没食子酸9份；
(2)将1g的水芹菜组合物、100mg的乳糖、100mg的小苏打，混合后填充到气密包中制造散剂。
实施例5
一种用于防治牙痛的水芹菜组合物的制备方法，包括如下步骤：
(1)称量：按照质量比为180：3的比例称取黄酮类化合物、不饱和脂肪酸类化合物备用；
所述黄酮类化合物包括芹菜素、木犀草素和香叶木素，芹菜素80份、木犀草素80份、香叶木素20份；
所述不饱和脂肪酸类化合物包括绿原酸、咖啡酸和没食子酸，绿原酸1份、咖啡酸1份、没食子酸1份；
(3)将1g的水芹菜组合物、100mg的乳糖、100mg的小苏打，混合后填充到气密包中制造散剂。
实施例6
与实施例2的制备步骤相同，不同之处仅在于，将黄酮类化合物与不饱和脂肪酸类化合物的质量比由9：5替换为9：1。
实施例7
与实施例2的制备步骤相同，不同之处仅在于，将黄酮类化合物与不饱和脂肪酸类化合物的质量比由9：5替换为9：2。
实施例8
与实施例2的制备步骤相同，不同之处仅在于，将黄酮类化合物与不饱和脂肪酸类化合物的质量比由9：5替换为9：3。
实施例9
与实施例2的制备步骤相同，不同之处仅在于，将黄酮类化合物与不饱和脂肪酸类化合物的质量比由9：5替换为9：4。
实施例10
与实施例2的制备步骤相同，不同之处仅在于，将黄酮类化合物与不饱和脂肪酸类化合物的质量比由9：5替换为9：6。
实施例11
与实施例2的制备步骤相同，不同之处仅在于，将黄酮类化合物、不饱和脂肪酸类化合物的质量比由9：5替换为9：7。
实施例12
与实施例2的制备步骤相同，不同之处仅在于，将黄酮类化合物、不饱和脂肪酸类化合物的质量比由9：5替换为9：8。
实施例13
与实施例2的制备步骤相同，不同之处仅在于，将黄酮类化合物、不饱和脂肪酸类化合物的质量比由9：5替换为9：9。
本发明利用气相色谱-质谱联用(GC-MS)、液相色谱-质谱联用将芹菜中的黄酮类化合物、酚酸类化合物、三萜类化合物、香豆素类化合物等物质进行提取分离，利用培养基抑菌试验以及促炎性酶类活性测定筛选发现黄酮类化合物、不饱和脂肪酸两大类物质共同作用对治疗牙痛有显著效果，并对这两大类物质中包括的各种物质再次进行分离和抑菌试验得出最佳组合物(木犀草素、芹菜素、香叶木素、绿原酸、咖啡酸、没食子酸)及配比(黄酮类化合物与不饱和脂肪酸类的比值为9：5)。
抑菌试验采用玉米琼脂培养基接种培养，接种4天后镜检观察白色念珠菌(真菌)菌落的生长情况，以抑菌率大于70％为选择标准，抑菌率最大的为最佳组合；黄酮类化合物与不饱和脂肪酸类最佳配比的确定采用从小到大的系列配比进行抑菌试验，试验结果如表1，根据表1，可确定最佳抑菌效果为黄酮类化合物(木犀草素、芹菜素、香叶木素)与饱和脂肪酸类(绿原酸、咖啡酸、没食子酸)的配比为9：5，即9：5为最佳配比。
表1水芹菜组分不同配比抑菌试验结果表
Figure BDA0003556950000000101
Figure BDA0003556950000000111
结果表明，可根据患者的症状的病情选择二者不同的配比，例如采用实施例2和实施例10的配比，增强药效，加强抑菌效果，针对牙龈炎症状严重的患者；采用实施例9及剩余实施例的配比下减弱药效，针对牙龈炎症状较轻的患者；另外经过临床研究表明，本发明的水芹菜组合物质对常见的牙疼和口腔溃疡等口腔疾病具有显著的疗效。
采用本发明实施例2制得的水芹菜组合物进行抑菌实验，下面研究白色念珠菌(真菌)在培养基中生长情况，图1为未加水芹菜组合物的状况，图2为加入水芹菜组合物的状况，可见图1中长出了大量菌落，图2未见菌落长出，说明水芹菜组合物具有优异的抑菌作用。
采用本发明的水芹菜组合物还进行了临床试验，实验结果如下所示：
案例1：
患者：饶某；性别：男；年龄：44岁：职业：教师；居住地：乐山；饮食习惯：嗜辣；卫生习惯：刷牙规律；
牙疼症状：发炎疼痛；症状：牙龈出血、水肿一月有余，常感到口干舌燥，牙周带挤压后有脓液溢出；
使用时间：2020年12月，服用方式：先用清水漱口清理干净口腔，然后含水芹菜组合物片剂2片，一天三次，三天一个疗程；
治疗效果：使用一天后临床症状大部分消失，牙龈出血症状有所缓解，水肿基本消了；牙周微生物检测，使用前后微生物种类和数量均减少90％以上，见附图1。
案例2：
患者：高某；性别：女；年龄：60岁；职业：退休；居住地：乐山；饮食习惯：嗜甜；卫生习惯：刷牙不规律；
牙疼症状：牙龈红肿，触动容易出血，当进食凉、热、酸、甜等刺激性食物时会导致牙齿出现剧烈的疼痛；
使用时间：2020年12月，服用方式：先用清水漱口清理干净口腔，然后含水芹菜组合物散剂2片，一天两次，早晚各一次，兑水口服，3天一个疗程。
治疗效果：服用一周后牙龈红肿症状消失，触动不再容易出血，当进食凉、热、酸、甜等刺激性食物时牙齿没有出现剧烈的疼痛；牙周微生物检测，使用前后微生物种类和数量均减少93％以上。
显然，本领域的技术人员可以对本发明进行各种改动和变型而不脱离本发明的精神和范围。这样，倘若本发明的这些修改和变型属于本发明权利要求及其等同技术的范围之内，则本发明也意图包含这些改动和变型在内。

Claims (8)

1.一种用于防治牙痛的水芹菜组合物，其特征在于，由以下重量份数的原料制成：黄酮类化合物，3-180份；不饱和脂肪酸类化合物，3-100份；
所述黄酮类化合物包括芹菜素、木犀草素和香叶木素，芹菜素1-80份、木犀草素1-80份、香叶木素1-20份；
所述不饱和脂肪酸类化合物包括绿原酸、咖啡酸和没食子酸，绿原酸1-70份、咖啡酸1-21份、没食子酸1-9份。
2.根据权利要求1所述的一种用于防治牙痛的水芹菜组合物，其特征在于，所述黄酮类化合物与不饱和脂肪酸类化合物的质量比为3-90:3-50。
3.根据权利要求1所述的一种用于防治牙痛的水芹菜组合物，其特征在于，所述黄酮类化合物与不饱和脂肪酸类化合物的质量比为9：5。
4.根据权利要求1所述的用于防治牙痛的水芹菜组合物，其特征在于，所述水芹菜组合物按照如下步骤提取：
(1)将水芹菜榨汁后，进行醇提操作，得到样品液；
(2)向步骤(1)的样品液中加入体积分数为20％的盐酸溶液，于80-95℃下水浴水解1-2h，用乙醚反复萃取后浓缩干燥，再用无水乙醇溶解，得到提取液；
其中，所述样品液和盐酸溶液的体积比为1-5：2-10；
(3)利用气相色谱-质谱联用、液相色谱-质谱联用分析步骤(2)提取液中的组分；
(4)利用层析柱分离提纯步骤(2)提取液中组分，得到水芹菜组合物。
5.一种权利要求1-4任一项所述的用于防治牙痛的水芹菜组合物的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：
步骤1、按重量份数称取以下原料：黄酮类化合物，3-180份；不饱和脂肪酸类化合物，3-100份，备用；
步骤2、将步骤(1)的原料制成药学上可接受的药物制剂。
6.根据权利要求5所述的用于防治牙痛的水芹菜组合物的制备方法，其特征在于，若所述药物制剂为口服散剂，则包括如下步骤：
称取水芹菜组合物、乳糖、小苏打，混合后填充到气密包中制成散剂；
其中，所述水芹菜组合物、乳糖、小苏打的质量比为1-10:0.1-1:0.03-0.5。
7.根据权利要求5所述的用于防治牙痛的水芹菜组合物的制备方法，其特征在于，若所述药物制剂为片剂，则包括如下步骤：
称取水芹菜组合物、玉米淀粉、乳糖、硬脂酸镁、干淀粉、去离子水，混合后打片制成片剂；
其中，所述水芹菜组合物、玉米淀粉、乳糖、硬脂酸镁、干淀粉、去离子水的质量比为1-10:0.1-1:0.1-1:0.002-0.01:0.02-0.1:1-10。
8.一种权利要求1所述的用于防治牙痛的水芹菜组合物在制备牙龈炎症药物中的应用。
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