CN114555776A - 细胞培养基片剂和制造方法 - Google Patents

Abstract

本文描述了有效地溶解的可用于培养细胞或微生物的干的细胞培养基、补料、补充剂、培养基子组、缓冲剂浓缩物或培养基组分的片剂、制造方法和使用方法。特别地，描述了压片的细胞培养基补料、补充剂、培养基子组或缓冲剂浓缩物的制剂。

Description

细胞培养基片剂和制造方法

相关领域的交叉应用

本申请根据35U.S.C.§119(e)要求2019年9月19日提交的美国临时专利申请第62/902,703号的优先权的权益，其通过引用整体并入本文。

技术领域

本文描述了有效地溶解的可用于培养细胞或微生物的干的细胞培养基、补料(feeds)、补充剂、培养基子组、缓冲剂浓缩物或培养基组分的片剂、制造方法和使用方法。特别地，描述了压片的细胞培养基补料(tableted cell culture media feed)、补充剂、培养基子组或缓冲剂浓缩物的制剂。

背景技术

细胞培养基为在受控的体外环境中维持或生长细胞提供营养。细胞培养基的特性和组成取决于特定的细胞需求和培养细胞的任何功能。培养基通常被制造为干粉、液体、液体浓缩物、附聚的培养基或附聚的培养基颗粒。参见例如美国专利第6,383,810号和第6,627,426号以及美国专利申请公开案美国专利第2018/0142203A1号和第20190048312A1号，其每一个都通过引用并入本文以用于与细胞培养基相关的教导。这些培养基形式中的每一种都具有特定的优点和缺点。例如，干粉易于使用和储存，但会产生潜在有害的粉尘，并且一些组分可能难以溶解。液体培养基和液体培养基浓缩物是“即用型”的，但通常需要补充剂，具有短的保质期并且难以批量灭菌。附聚的培养基和颗粒培养基克服了干粉培养基的许多缺点。这些培养基形式在需要时由最终用户溶解和消毒，并且可以存储长达2年。附聚的和造粒的培养基的唯一缺点是它们必须被称重以达到目标体积和放大的均匀质量，并且它们的制造生产率是可变的。

因此，需要压片的、干燥的、稳定的、有效溶解的细胞培养基产品，其可以以减少的加工步骤大量生产，并且适合于典型的灭菌方法、无需称重的目标体积和快速放大。

发明内容

本文所述的一个实施例是一种包含细胞培养基、补料或补充剂的压片的组合物，所述组合物包含：氨基酸、盐、缓冲剂、微量矿物质、维生素、碳水化合物、脂质、核酸、蛋白质；和润滑剂、填充剂、粘合剂或其组合。在一个方面中，压片的组合物于25℃的水中在约10-30分钟内溶解。另一方面，所述组合物包含：95-99质量％的氨基酸、盐、缓冲剂、微量矿物质、维生素、碳水化合物、脂质、核酸、蛋白质；和1-5质量％的包含硬脂酸镁的润滑剂。另一方面，所述组合物包含：90-99质量％的氨基酸、盐、缓冲剂、微量矿物质、维生素、碳水化合物、脂质、核酸、蛋白质；和1–5质量％的包含交联羧甲基纤维素钠的崩解剂；和1-5质量％的包含硬脂酸镁的润滑剂。

本文所述的另一个实施例是一种包含压片的细胞培养基、补料或补充剂组合物的组合物，其包含：培养基组分，所述培养基组分包含：20-65质量％的碳水化合物；20-40质量％的氨基酸；2-10质量％的无机盐或缓冲剂；1-5质量％的维生素；0.01-0.05质量％的微量矿物质；和压片组分，所述压片组分包含：1-10质量％的润滑剂、填充剂、粘合剂或其组合。在一个方面中，所述组合物包含：(a)20-65质量％的单糖或二糖，其包括葡萄糖、果糖、乳糖、海藻糖、麦芽糖或蔗糖；(b)20-40％的氨基酸，其包括丙氨酸、精氨酸、天冬氨酸、谷氨酸、甘氨酸、组氨酸、异亮氨酸、蛋氨酸、苯丙氨酸、脯氨酸、羟脯氨酸、丝氨酸、苏氨酸、色氨酸、缬氨酸、酪氨酸、半胱氨酸、赖氨酸、其盐或其组合；(c)2-10质量％的钠盐、钾盐、镁盐、钙盐、铵盐、磷酸盐、碳酸盐、硫酸盐或其组合；(d)1-5％的维生素，其包括视黄醇(A)、硫胺素(B1)、核黄素(B2)、烟酰胺(B3)、泛酸(B5)、吡哆胺(B6)、生物素(B7)、叶酸(B9)钴胺素(B12)、抗坏血酸(C)、胆钙化醇(D)、生育酚(E)、叶绿醌(K)、胆碱、肌醇、硫辛酸、对氨基苯甲酸、其盐或其组合；(e)0.01-0.05质量％的微量元素，包括铁、锰、铜、碘、锌、钴、氟化物、铬、钼、硒、镍、硅、钒、其盐或其组合；(f)1-5质量％的硬脂酸镁；(g)1-5质量％的交联羧甲基纤维素钠。另一方面，培养基组分包括附聚的干粉。另一方面，压片的培养基在25℃的水中在约10-30分钟内溶解。另一方面，压片的培养基具有约18kp-22kp的硬度。另一方面，压片的培养基具有约2.0g至5.0g的质量。另一方面，在用水重构后的压片的培养基表现出与类似的非压片的培养基相当的细胞活力水平和表达的蛋白质水平。

本文所述的另一个实施例是一种用于生产压片的细胞培养基、补料或补充剂组合物的方法，所述方法包括：(a)制备细胞培养基、补料或补充剂粉末或附聚的粉末；(b)将培养基粉末或附聚的粉末与一种或多种润滑剂、填充剂、粘合剂或其组合结合；以及(c)使用压片装置生产细胞培养基、补料或补充剂片剂。在一个方面中，细胞培养基、补料或补充剂是通过流化床附聚产生的附聚的粉末。另一方面，将细胞培养基、补料或补充剂粉末或附聚的粉末与润滑剂组合。另一方面，压片的组合物包含95-99质量％的细胞培养基、补料或补充剂粉末或附聚的粉末和1-5质量％的一种或多种润滑剂。另一方面，润滑剂包含硬脂酸镁。另一方面，将细胞培养基、补料或补充剂粉末或附聚的粉末与润滑剂和崩解剂组合。另一方面，压片的组合物包含95-99质量％的细胞培养基、补料或补充剂粉末或附聚的粉末；1-5质量％的一种或多种润滑剂；和1-5质量％的一种或多种崩解剂。另一方面，润滑剂包含硬脂酸镁并且崩解剂包含交联羧甲基纤维素钠。另一方面，片剂具有2.0至5.0g的质量。另一方面，片剂具有18-22kp的硬度。另一方面，片剂于25℃的水中在10-30分钟内溶解。

本文所述的另一个实施例是一种通过本文所述的任何方法生产的压片的细胞培养基、补料或补充剂。在一个方面中，片剂包含：培养基组分，所述培养基组分包含：20-65质量％的碳水化合物；20-40质量％的氨基酸；2-10质量％的无机盐或缓冲剂；1-5质量％的维生素；0.01–0.05质量％的微量矿物质；以及压片组分，所述压片组分包含：1-10质量％的润滑剂、填充剂、粘合剂或其组合。另一方面，片剂包含95-99质量％的细胞培养基、补料或补充剂；和1-5质量％的一种或多种润滑剂。另一方面，片剂包含90-99质量％的细胞培养基、补料或补充剂；1-5质量％的包含交联羧甲基纤维素钠的崩解剂；和1-5质量％的包含硬脂酸镁的润滑剂。另一方面，片剂具有2.0至5.0g的质量。另一方面，片剂具有18-22kp的硬度。另一方面，片剂于25℃的水中在10-30分钟内溶解。

本文所述的另一个实施例是一种试剂盒，所述试剂盒包含：包装，所述包装包含细胞培养基、补料、补充剂或缓冲剂的一个或多个片剂；稀释剂；适合于重构细胞培养基、补料、补充剂或缓冲剂的一个或多个一个或多个片剂的容器(receptacle)；和使用说明。

本文所述的另一个实施例是一种用于从压片的细胞培养基、补料、补充剂或缓冲剂组合物制备细胞培养基、补料、补充剂或缓冲剂的方法，该方法包括：(a)将细胞培养基、补料、补充剂或缓冲剂的一个或多个片剂与水组合直到溶解；(b)任选地，添加任何包含氨基酸、抗生素、血清或其它细胞培养基补充剂的补充剂；和(c)任选地，对重构的细胞培养基、补料、补充剂或缓冲剂进行灭菌。在一个方面中，灭菌包括过滤或γ辐射。另一方面，片剂于25℃的水中在约10-30分钟内溶解。

本文所述的另一个实施例是一种通过本文所述的方法制备的细胞培养基、补料、补充剂或缓冲剂。

本文所述的另一个实施例是一种包含细胞和本文所述的细胞培养基、补料、补充剂或缓冲剂的系统。

本文所述的另一个实施例是一种在由压片的细胞培养基重构的液体中培养细胞的方法，该方法包括：在合适的液体或缓冲剂中重构压片的细胞培养基、补料或补充剂；及在有利于生长的条件下，在重构的培养基中培养细胞。

本文所述的另一个实施例是一种优化细胞培养基组分的浓度的方法，该方法包括：测量细胞培养物中一种或多种培养基组分的浓度；确定一种或多种培养基组分是否在可接受的浓度范围内；如果需要，用压片的细胞培养基组合物补充细胞培养物中的一种或多种培养基组分。在一个方面中，测量包括选自HPLC、质谱法、ELISA或标准曲线测定的方法。另一方面，补充包括将压片的培养基组合物直接添加到培养物中或将压片的培养基组合物溶解在溶剂中，然后将溶解的压片的培养基组合物添加到细胞培养物中。

本文所述的另一个实施例是压片的细胞培养基、补料或补充剂用于制备细胞培养基、补料或补充剂的用途。

本文所述的另一个实施例是压片的细胞培养基、补料或补充剂用于培养细胞的用途。另一方面，用于培养的压片的细胞培养基、补料或补充剂被重构并且细胞在有利的生长条件下培养。

附图说明

图1A示出了由CHO CD EFFICIENTFEED B AGT营养补充剂(GIBCO)和不同量的硬脂酸镁形成的示例性培养基片剂。片剂包含约2.5g的培养基，为16mm×9.9mm，并且具有约19kp的硬度。参见表4。

图1B示出了由CHO CD EFFICIENTFEED B AGT营养补充剂(GIBCO)和2％硬脂酸镁形成的示例性培养基片剂及其在25℃的水中的崩解。在926mL的水中使用50g(20个片剂)进行崩解，其是推荐的培养基制备程序。包含2质量％硬脂酸镁的片剂在28分钟内崩解，并且包含5质量％硬脂酸镁的片剂在38分钟内崩解。参见表5。

图2A示出了在摇瓶中的CD OPTICHO(GIBCO)中生长的并补充有葡萄糖(阴性对照)、CHO CD EFFICIENTFEED B AGT(GIBCO)(阳性对照)或包含2质量％或5质量％硬脂酸镁的CHO CD EFFICIENTFEED B AGT片剂(“片剂补料”)的CHO DG44 LH细胞。补充有片剂补料的细胞培养物示出与补充有CHO CD EFFICIENTFEED B AGT(即非压片的补料；阳性对照)的细胞培养物相当的活细胞计数(例如，约14×10⁶个细胞/毫升)。与补充有CHO CDEFFICIENTFEED B AGT的细胞培养物相比，仅含有葡萄糖的未补充的细胞培养物示出较低的活细胞计数约10×10⁶个细胞/毫升(阴性对照)。

图2B作为散点图示出了与图2A相同的数据。

图3A示出来自图2A-2B中讨论的细胞培养物的IgG滴度。补充有片剂补料的细胞培养物示出与补充有CHO CD EFFICIENTFEED B AGT(即非压片的补料；阳性对照)的细胞培养物相当的IgG产量(约230μg/mL)。与补充有CHO CD EFFICIENTFEED B AGT的细胞培养物相比，仅含有葡萄糖的未补充的细胞培养物示出较低的IgG产量(约115μg/mL)。

图3B以散点图示出了与图3A相同的数据。

图4示出了用于生产培养基片剂的大规模制造过程的流程图。

图5示出了16.0mm(2.4g)CHO CD EFFICIENTFEED B AGT片剂的物理参数。图5A示出片剂质量；图5B示出片剂厚度；并且图5C分别示出了与对照限值相比的片剂硬度。参见表8-10。

图6示出了22.0mm(3.7g)CHO CD EFFICIENTFEED B AGT片剂的物理参数。图6A示出片剂质量；图6B示出片剂厚度；并且图6C分别示出了与对照限值相比的片剂硬度。参见表8-10。

具体实施方式

除非另有定义，否则本文所使用的所有技术术语和科学术语具有与本领域普通技术人员通常理解的含义相同的含义。例如，本文所述的与细胞和组织培养、分子生物学、免疫学、微生物学、遗传学以及蛋白质和核酸化学结合使用的任何命名法和技术是本领域中已知和常用的那些命名法和技术。在有冲突的情况下，将以本文件(包括定义)为准。优选的组合物、方法或材料在本文中进行了描述，尽管与本文所述的那些相似或等效的替代组合物、方法或材料可以用于本文所述的实施例的实践或测试。

如本文所使用的，术语如“包括(include)”、“包括(including)”、“含有(contain)”、“含有(containing)”、“具有”等意思是“包含(comprising)”。本公开还设想了“包含本文呈现的实施例或要素”、“由本文呈现的实施例或要素组成”和“基本上由本文呈现的实施例或要素组成”的其他实施例，无论是否明确阐述。

如本文所使用的，术语“一(a)”、“一个(an)”、“该”以及在本公开的上下文中(尤其是在权利要求的上下文中)使用的类似术语应被解释为涵盖单数和复数，除非本文另有说明或上下文明显矛盾。此外，除非另有说明，否则“一”、“一个”或“该”是指“一个或多个”。

如本文所使用的，术语“或”可以是连词或析取词。

所公开的所有范围都包括作为离散值的两个端点以及明确预期在范围内以相同精度指定的所有整数和分数。例如，0.1–2.0的范围包括0.1、0.2、0.3、0.4......2.0。如果端点被术语“约”修改，则指定的范围通过该范围内的任何值(包括端点)的至多±10的变化进行扩展。

如本文所使用的，当术语“约”或“大约(approximately)”应用于一个或多个感兴趣的值时，是指与所述的参考值相似的值，或在如由本领域普通技术人员确定的特定值的可接受误差范围内的值，其将部分地取决于如何测量或确定该值，如测量系统的限制。如本文所用的术语“约”是指任何值，包括在由术语“约”修饰的值的至多±10％的变化内的整数和分数分量。在某些方面中，术语“约”是指在所述参考值的任一方向(大于或小于)上落在所述参考值的20％、19％、18％、17％、16％、15％、14％、13％、12％、11％、10％、9％、8％、7％、6％、5％、4％、3％、2％、1％或更小以内的值的范围，除非另有说明或从上下文中另外显而易见的(除了这样的数字将超过可能值的100％)。可替代地，根据本领域中的实践，“约”可以表示在3个或多于3个标准偏差内。可替代地，如关于生物系统或过程，术语“约”可以表示在一个数量级内，在一些实施例中在值的5倍内，并且在一些实施例中在值的2倍内。如本文所使用的，任何值之前的符号“～”表示“约”。

如本文所使用的，术语“基本上”是指很大的或显著的程度，但不是完全。

如本文所使用的，术语“对照”或“参考”可互换使用并且指的是预定的值或范围，其用作评估测量的结果的基准。

如本文所使用的，术语“附聚的”、“先进造粒技术^TM(Advanced GranulationTechnology^TM)”或“AGT”(GIBCO)是指通过先进的制造工艺生产的颗粒状干培养基形式，从而以各种无血清、无蛋白和化学定义的干形式的培养基生产完整的培养基制剂。该培养基通常使用流化床技术制备，该流化床技术从起始材料产生具有增强的特性(例如，增强的溶解度)的附聚的粉末。该过程包括将粉末悬浮在向上移动的空气柱中，同时将受控和限定量的液体注入到粉末流中以产生湿润状态的粉末；然后可以使用温和的热量来干燥材料，从而产生附聚的粉末。附聚的培养基、补料、营养粉剂(nutritive powders)、补充剂等的制备、它们的性质以及制备附聚的培养基、补料、营养粉剂、补充剂等的自动pH和自动重量渗透摩尔浓度的方法已经在美国专利第6,383,810号和第6,627,426号以及美国专利申请公开案美国专利第2019/0048312A1号以及其他中描述，其每一个都通过引用并入用于与附聚的培养基相关的教导。

如本文所使用的，术语“片剂(tablet)”或“压片的(tableted)”是指已经被压缩成片剂形式的培养基、补料、培养基补充剂、培养基子组或缓冲剂。片剂与丸剂(pellets)的不同之处在于，它们具有限定的重量，可以快速大量生产，并且可以包含常规的药学上可接受的赋形剂，如润滑剂、粘合剂、崩解剂、包衣等。参见例如，美国专利公开案美国专利第2018/0142203A1号。此外，用于制造片剂的方法或工艺不同于丸剂，因为片剂是使用压缩工艺制造的，而丸剂是使用旋转流化床工艺制造的。

如本文所使用的，术语“粉末”或“干粉”是指用于细胞培养的培养基粉末或粉末状培养基组合物，其以干燥的颗粒形式存在，其总体外观可以是自由流动的。如本文所述，术语“粉末”包括附聚的粉末。如本文所使用的，术语“基础粉末”或“干基础粉末”是指其被压片前的干粉组合物。

如本文所使用的，术语“成分”是指可以在细胞培养基中用于维持或促进细胞的增殖的生长的任何化合物(无论是化学来源的还是生物来源的)。术语“组分”、“营养物”和“成分”可互换使用并且都意指这类化合物。用于细胞培养基的典型成分包括氨基酸、盐、金属、糖、碳水化合物、脂质、核酸、激素、维生素、脂肪酸、蛋白质等。促进或维持细胞离体的培育的其它成分可以由所属领域的技术人员根据具体需要进行选择。

如本文所使用的，术语“细胞培养物”或“培养物”是指在人工例如体外环境中维持细胞。然而，应当理解，术语“细胞培养物”是通用术语并且可以用于包括不仅单独的原核(例如，细菌)或真核(例如，动物、植物和真菌)细胞的培育，而且组织、器官、器官系统或整个生物体的培育，其中术语“组织培养物”、“器官培养物”、“器官系统培养物”或“器官型培养物”可与术语“细胞培养物”互换使用。

如本文所使用的，短语“细胞培养基”、“培养基”、“培养基制剂”或“培养基”(在每种情况下为复数“培养基(media)”)是指支持细胞的培育和/或生长的营养溶液；这些短语可互换使用。细胞培养基可以是基础培养基(一种需要额外成分来支持细胞生长的一般培养基)或具有所有或几乎所有组分以支持细胞生长的完全培养基。细胞培养基可能不含血清、不含蛋白质(一种或两种)，可能需要或可能不需要另外的组分，如生长因子、添加剂、补料、补充剂，以用于实现高效和稳健的细胞性能。

营养培养基也可以被分为可以如本文所述制备和使用的各种“子组”。可以组合这些子组以产生营养培养基。对于兼容的子组和相关的考虑事项的示例，参见美国专利第5,474,931号和第5,681,748号，它们通过引用并入本文用于此类教导。

如本文所使用的，术语“组合”是指混合或掺合细胞培养基制剂中的成分。组合可以以液体或粉末形式发生，或者与一种或多种粉末和一种或多种液体一起发生。在另一个示例中，可以混合两种或更多种粉状组分，然后使它们附聚以产生复杂的混合物，如培养基、培养基补充剂、培养基子组或缓冲剂。组合还包括将干组分与液体组分混合。

短语“浓缩物补料补充剂培养基(concentrate feed supplement medium)”或“浓缩的补料补充剂培养基(concentrated feed supplement medium)”可互换使用，并且是指包含至少一种浓度高于待补充的细胞培养基中所需浓度的组分的培养基。

如本文所使用的，术语“接触”是指将待培育的细胞置于含有待培育细胞的培养基的培养容器中。术语“接触”尤其包括将细胞与培养基混合、用培养基灌注细胞、将培养基移液到培养容器中的细胞上以及将细胞浸没在培养基中。

如本文所使用的，术语“培育”是指在有利于细胞的生长、分化或持续生存力的条件下，在人工环境中以活性或静止状态维持细胞。因此，“培育”可以与“细胞培养”或其任何上述同义词互换使用。

如本文所使用的，术语“培养容器”是指用于保持细胞的容器。容器可以是玻璃、塑料、金属或其他可以为培养、保持或储存细胞提供无菌环境的材料。

如本文所使用的，术语“提取物”是指包含物质的子组的组合物或浓缩的制剂，其通常通过机械(例如，通过压力处理)或化学(例如，通过蒸馏、沉淀、酶促作用或高盐处理)处理物质而形成。

术语“有效量”或“有效浓度”是指可供使用的成分的量。一个示例是培养基中维生素的量，细胞可利用该量用于通常与该维生素相关的生物过程。因此，有效量包括细胞可用于代谢的细胞培养成分(例如维生素或糖)的量。例如，可以根据本领域技术人员可获得的知识和/或通过实验确定来确定成分的有效量。

如本文所使用的，“补料”或“补充剂”是指当添加到标准培养物中的细胞中时，组合物可能有益于其维持、或扩增、或生长或活力，或影响其细胞性能，或增加培养寿命或维持细胞处于其中产物表达继续的假静止期，或导致最终产物滴度的显著增加。补料或补充剂在本公开中可互换使用，并且是指培养基组分的压片形式和液体形式(包括附聚的形式)，所述培养基组分包含重新平衡或补充或调节培养物或细胞培养系统中细胞的生长或性能所需的一种或多种氨基酸、糖、维生素、缓冲剂，有时包括肽、水解产物、级分、生长因子、激素等。补料或补充剂与细胞培养基的区别可能在于它被添加到可以培养细胞的细胞培养基中。如本领域技术人员将理解的，有时补料/补充剂可以主要包含重新平衡或补充或调节培养物或细胞培养系统中细胞的生长或性能所需的那些氨基酸、糖、维生素、缓冲剂等。补料或补充剂可以被浓缩或可以不被浓缩，或者仅对于某些组分进行部分浓缩。

细胞培养基由多种成分构成并且这些成分在培养基之间有所不同。术语“1×制剂”意思是指以工作浓度含有在细胞培养基中发现的一些或所有成分的任何水溶液。“1×制剂”可以指例如细胞培养基或该培养基的成分的任何子组。1×溶液中成分的浓度与在用于体外维持或培养细胞的细胞培养制剂中发现的该成分的浓度大致相同。用于体外培育细胞的细胞培养基是根据定义的1×制剂。当存在多种成分时，1×制剂中的每种成分的浓度大约等于细胞培养基中这些成分的浓度。例如，RPMI-1640培养基除了其它成分之外还含有0.2g/L L-精氨酸、0.05g/LL-天冬酰胺和0.02g/L L-天冬氨酸。这些氨基酸的“1×制剂”包含在溶液中大致相同浓度的这些成分。因此，当提及“1×制剂”时，预期溶液中的每一种成分具有与在所述细胞培养基中可见的浓度相同或大致相同的浓度。细胞培养基的1×制剂中的成分的浓度对于所属领域的技术人员来说是众所周知的。参见Banes等人，“用于无血清动物细胞培养的培养基、补充剂和底物的制备方法(Methods for Preparation ofMedia,Supplements and Substrate for Serum-Free Animal Cell Culture)”，AlanR.Liss,N.Y.(1984)，其通过引用整体并入本文。然而，与培养基相比，在1×制剂中重量渗透摩尔浓度和/或pH可能不同，特别是当在1X制剂中含有较少成分时。在各种培养基制剂中，任何组分的1×浓度不一定是恒定的。因此，当指代不同的培养基时，1×可能表示单个组分的不同浓度。然而，当一般使用时，1×将表示在所提及的培养基类型中常见的典型工作浓度。1×量是对于相关体积的培养基将产生1×浓度的成分的量。

如本文所使用的，“10×制剂”是指这样的溶液，其中该溶液中的每种成分比细胞培养基中相同成分浓缩约10倍。例如，RPMI-1640培养基的10×制剂可以包含除其他成分外2.0g/LL-精氨酸、0.5g/L L-天冬酰胺和0.2g/L L-天冬氨酸(比较上面的1×制剂)。“10×制剂”可以包含许多另外的成分，其浓度为在1x培养基中可见的浓度的约10倍。如将容易地显而易见的，“20×制剂”、“25×制剂”、“50×制剂”和“100×制剂”分别表示与工作的1×细胞培养基相比含有约20倍浓度、25倍浓度、50倍浓度或100倍浓度的成分的溶液。同样，培养基制剂和浓缩溶液的重量渗透摩尔浓度和pH可能变化。参见美国专利第5,474,931号，其涉及培养基浓缩物技术，并且通过引用并入本文用于此类教导。

如本文所使用的，“生理pH”大于约4且小于约9。其他或特定的pH或范围，例如大于4.2、4.5、4.8、5.0、5.2、5.5、5.7、5.8、6.0、6.2、6.5、6.7、6.8、7.0、7.2、7.4、7.5、7.8、8.0、8.2、8.4、8.5、8.7、8.8等，或约4.0至约9.0、约4.0至约5.0、约5.0至约6.0、约6.0至约7.0、约8.0至约9.0、约4.0至约6.0、约5.0至约7.0、约6.0至约8.0、约7.0至约9.0、约6.0至约9.0或约4.0至约7.0的最小或最大pH也可以用于溶解补充剂。一些补充剂虽然不是优选的，但可能仅在这些范围之外完全可溶。

如本文所述的“自动pH(auto-pH)”或“自动pH(auto-pHing)”培养基、培养基补充剂或缓冲剂是这样配制的制剂，使得在用溶剂再水合时，所得的培养基、培养基补充剂或缓冲溶液处于所需的pH，并且在使用前不需要用酸或碱调节pH。例如，配制为待在pH 7.4下使用的自动pH压片的培养基在用溶剂再水合后将处于pH 7.4，因此将在无需进一步调节pH的情况下立即使用。

如本文所用的短语“没有显著的生物和生化活性的损失”是指当与新鲜制备的营养培养基、培养基补充剂、培养基子组、缓冲剂或相同制剂的样品相比时，营养培养基、培养基补充剂、培养基子组、缓冲剂或感兴趣的样品的生物或生化活性降低小于约30％，优选地小于约25％，更优选地小于约20％，还更优选地小于约15％，并且最优选地小于约10％。

如本文所使用的，“溶剂”是溶解或已经溶解培养基的另一种成分的液体。溶剂可以用于制备培养基、用于制备培养基片剂、用于制备子组的片剂、或补充剂或其他制剂，以及用于重构片剂或稀释浓缩物以为培养细胞做准备。溶剂可以是极性的，例如水性溶剂，或非极性的，例如有机溶剂。溶剂可能是复杂的，即需要多于一种的成分来溶解成分。复杂的溶剂可以是两种液体(如醇和水)的简单混合物，或者可以是盐或其他固体在液体中的混合物。在一些情况下，可能需要两种、三种、四种、五种、六种或更多种组分来形成可溶性混合物。简单的溶剂(如乙醇或甲醇和水的混合物)是优选的，因为它们易于制备和处理。

如本文所使用的，将“润滑剂”添加到被压制成片剂的组合物中以帮助将颗粒压实成片剂并从模压机中排出片剂。润滑剂的实例包括硬脂酸镁、硬脂酸钙、硬脂酸锌、稳定的富马酸钠、硬脂酸、滑石、山嵛酸甘油酯或其组合。在一个方面中，润滑剂是硬脂酸镁。

如本文所使用的，“助流剂”是赋予组合物增强的流动性能的片剂组分。助流剂的实例包括胶体二氧化硅、气相二氧化硅或滑石。

如本文所使用的，“崩解剂”是有助于水合、崩解、分散和溶解的片剂组分。崩解剂的实例包括交联聚维酮、交联羧甲基纤维素钠、海藻酸、微晶纤维素、波拉克林钾(polacrilin potassium)、羟基乙酸淀粉钠、淀粉、预胶化淀粉或其组合。在一个方面中，崩解剂是具有特定粒度的交联聚维酮(例如，N-乙烯基-2-吡咯烷酮的交联均聚物)。另一方面，崩解剂是羟基乙酸淀粉钠。另一方面，崩解剂是交联羧甲基纤维素钠(例如，AC-DI-SOL，杜邦(DuPont))。

如本文所使用的，“填充剂”或“稀释剂”是增加组合物体积的组分。填充剂或稀释剂的实例包括乳糖、乳糖一水合物、葡萄糖、果糖、蔗糖、山梨糖醇、甘露醇、磷酸二钙二水合物、纤维素、乙基纤维素、甲基纤维素、微晶纤维素、交聚维酮或其组合。在一个实施例中，填充剂或稀释剂是微晶纤维素。另一方面，填充剂或稀释剂是微晶纤维素，如分别具有50μm或100μm的粒度的AVICEL PH-101或PH-102(FMC)。

如本文所使用的，“粘合剂”是提供增强的内聚力或拉伸强度(例如，硬度)的组分。粘合剂的实例包括磷酸氢钙、蔗糖、玉米(corn)(玉米(maize))淀粉、微晶纤维素和改性纤维素(例如，羟甲基纤维素)。

如本文所使用的，“包衣剂”是使片剂更光滑、控制崩解和释放速率、并使片剂更耐环境(延长其保质期)或增强外观的组分。包衣剂的实例包括羧甲基纤维素钠、醋酸纤维素、醋酸邻苯二甲酸纤维素、乙基纤维素、明胶、药用釉料、羟丙基纤维素、羟丙基甲基纤维素、羟丙基甲基纤维素邻苯二甲酸酯、甲基丙烯酸共聚物、甲基纤维素、聚乙酸邻苯二甲酸乙烯酯(polyvinyl acetate phthalate)、虫胶、蔗糖、二氧化钛、巴西棕榈蜡、微晶蜡、玉米醇溶蛋白或其组合。

如本文所使用的，“着色剂”是赋予组合物所需颜色的组分。着色剂的实例包括可商购获得的颜料，如FD&C蓝#1铝色淀、FD&C蓝#2、其他FD&C蓝颜色、二氧化钛、氧化铁和/或其组合。着色剂的其他实例包括用于组织培养基的典型pH指示剂(例如，酚红)。

如本文所使用的，“表面活性剂”是赋予组合物增强的溶解性和/或润湿性的组分。表面活性剂的实例包括月桂基硫酸钠(SLS)、硬脂酰富马酸钠(SSF)、PLURONIC表面活性剂、ADOGEN 464、ALKANOL 6112、BRIJ表面活性剂、IGEPAL表面活性剂、聚(乙二醇)山梨糖醇四油酸酯、聚(乙二醇)山梨糖醇六油酸酯、山梨糖醇单棕榈酸酯、NONIDET P-40、TRITON N-101、SPAN 80、TRITON X-100、TRITON X-114、TRITON X-405、吐温20、吐温40、吐温60、吐温85、ZONYL FS-300、ZONYL FSN或其组合。

术语“延长的时间段”是指比样品(例如，药物组合物、营养培养基、培养基补充剂、培养基子组或缓冲剂)的储存时间更长的时间段。如本文所使用的，“延长的时间段”因此意指在给定的储存条件下约1-36个月、约2-30个月、约3-24个月、约6-24个月、约9-18个月或约4-12个月，所述储存条件可以包括在约-70℃至约25℃、约-20℃至约25℃、约0℃至约25℃、约4℃至约25℃、约10℃至约25℃或约20℃至约25℃的温度下储存。用于确定药物或临床组合物、细胞培养试剂、营养物、营养培养基、培养基补充剂、培养基子组或缓冲剂的生物或生化活性的测定法是本领域众所周知的并且是普通技术人员熟悉的。

本文所述的一些实施例是用于营养培养基、细胞培养基、补料、培养基补充剂、培养基子组或缓冲剂的片剂组合物；用于生产营养培养基、培养基补充剂、补料、培养基子组或缓冲剂的片剂的方法；以及由此生产的压片的产品。如本文所述产生的压片的营养培养基、培养基补充剂和培养基子组包括可以用于支持细胞的生长的任何培养基、培养基补充剂或培养基子组(无血清或含血清)，所述细胞可以是细菌细胞、真菌细胞(特别是酵母细胞)、植物细胞或动物细胞(特别是昆虫细胞、线虫细胞或哺乳动物细胞，最优选地人细胞)，其中任何一种可以是体细胞、生殖细胞、正常细胞、患病的细胞、转化的细胞、突变细胞、干细胞、前体细胞或胚胎细胞。优选的此类营养培养基包括但不限于细胞培养基，最优选地细菌细胞培养基、植物细胞培养基或动物细胞培养基。优选的培养基补充剂包括但不限于未限定的补充剂，如细菌、动物或植物细胞、腺体、组织或器官的提取物，特别是牛垂体提取物、牛脑提取物和鸡胚提取物；和生物体液(特别是动物血清，并且最优选地牛血清，特别是胎牛血清、新生小牛血清或正常小牛血清、马血清、猪血清、大鼠血清、鼠血清、兔血清、猴血清、猿血清或人血清，其中的任何一种可以是胎儿血清)及其提取物(更优选地血清白蛋白，并且最优选地牛血清白蛋白或人血清白蛋白)。培养基补充剂还可以包括限定的替代品，如STEMPRO LIPOMAX替代品、OPTIMAB KNOCK-OUT血清替代品(GIBCO，赛默飞世尔科技有限公司(Thermo Fisher Scientific Inc.))等，它们可以用作上述未限定的培养基补充剂的替代品。此类补充剂还可以包含限定的组分，包括但不限于激素、细胞因子、神经递质、脂质、附着因子、蛋白质等。

在一个实施例中，压片的培养基、培养基补充剂、培养基子组或缓冲剂包括培养基、培养基补充剂、培养基子组或缓冲剂的附聚的粉末。在本文所述的一个方面中，附聚的营养培养基、培养基补充剂、培养基子组和缓冲剂是使用流化床技术以附聚培养基、培养基补充剂、培养基子组或缓冲剂的溶液来生产的。流化床技术是一种从起始材料生产具有改变的特性(特别是，例如溶解度)的附聚的粉末的工艺。在该技术的一般应用中，粉末被悬浮在向上移动的空气柱中，同时将受控和限定量的液体注入到粉末流中以产生湿润状态的粉末；然后使用温和的热量来干燥材料，产生附聚的粉末。在一个方面中，使用专有的先进造粒技术(AGT干培养基形式)(GIBCO)来生产附聚的培养基、培养基补充剂、培养基子组或缓冲剂。参见Jayme等人，“造粒技术在改善粉末状无血清培养基的物理性质和生物学性能中的新应用(ANovel Application of Granulation Technology to Improve PhysicalProperties and Biological Performance of Powdered Serum-Free Culture Media)”，载于：Shirahata等人(编辑)《动物细胞技术：基础和应用方面(Animal Cell Technology:Basic&Applied Aspects)》第12卷(2002)，多德雷赫特施普林格(Springer,Dordrecht)。具体的可商购获得的附聚的培养基、补充剂、补料和添加剂包括CD CHO AGT、CD OPTICHOAGT、CD FORTICHO AGT、VP-SFM AGT、OptiPro AGT、CD Hybridoma AGT、CHO CDEFFICIENTFEED A、B和C AGT、CHO CD EFFICIENTFEED A+、B+和C+AGT营养补充剂和FUNCTIONMAX滴度增强添加剂(FUNCTIONMAX TiterEnhancer Additive)(均来自GIBCO；各自的产品描述均通过引用并入本文用于此类教导)。

本文所述的制剂和方法可以用于制备任何营养培养基、培养基补充剂、培养基子组或缓冲剂的片剂，并且在不显著损失生物或生化活性的情况下储存持续延长的时间段。

任何营养培养基、培养基补充剂、培养基子组或缓冲剂均可以被形成为片剂或通过本文所述的方法制备。可以如本文所述制备的特别优选的营养培养基、培养基补充剂和培养基子组包括支持动物细胞、植物细胞、细菌细胞或酵母细胞的生长的细胞培养基、培养基补充剂和培养基子组。可以如本文所述制备的特别优选的缓冲剂包括平衡的盐溶液，其对于动物细胞、植物细胞、细菌细胞或酵母细胞是等渗的。

可以如本文所述制备的动物细胞培养基的实例包括但不限于DMEM、RPMI-1640、MCDB131、MCDB 153、MDEM、IMDM、MEM、M199、McCoy的5A、Williams培养基E、Leibovitz'sL-15培养基、格雷斯昆虫培养基(Grace's Insect Medium)、IPL-41昆虫培养基、TC-100昆虫培养基、施耐德果蝇培养基、Wolf&Quimby两栖动物培养基、F10营养混合物、F12营养混合物和细胞特异性无血清培养基(SFM)如被设计成支持角质形成细胞、内皮细胞、肝细胞、黑色素细胞、CHO细胞、293细胞、PerC6、杂交瘤、造血细胞、胚胎细胞、神经细胞等的培养的那些。具体的化学上限定的培养基产品包括CD CHO培养基(GIBCO)、CD OPTICHO培养基(GIBCO)、EX-CELL ADVANCED CHO培养基(Millipore Sigma-Aldrich)、HYCLONE ACTIPRO(GE医疗保健生命科学(GE Healthcare Life Sciences))。具体的补料补充剂包括CHO CD EFFICIENTFEEDA(或B)AGT营养补充剂(GIBCO)、CD EFFICIENTFEED C AGT营养补充剂(GIBCO)、EFFICIENTFEED A+AGT补充剂(GIBCO)、EFFICIENTFEED B+AGT补充剂(GIBCO)、RESUREGECD1补充剂(GIBCO)、HYCLONE细胞强化补充剂(各种版本)(GE医疗保健生命科学)、EX-CELLADVANCED CHO补料1(Millipore Sigma-Aldrich)等。适合于制备的其他培养基、培养基补充剂和培养基子组可商购获得。这些培养基、培养基补充剂和培养基子组以及许多其他常用的动物细胞培养基、培养基补充剂和培养基子组的制剂在本领域中是众所周知的并且在文献中有描述并且可从商业供应商例如赛默飞世尔科技有限公司、美国生命技术公司(Life Technologies)、Gibco、英杰生命技术有限公司(Invitrogen)等获得。

可以如本文所述制备的植物细胞培养基的实例包括但不限于Anderson植物培养基、CLC基础培养基、Gamborg培养基、Guillard海洋植物培养基、Provasoli海洋培养基、Kao和Michayluk培养基、Murashige和Skoog培养基、McCown木本植物培养基、Knudson兰科植物培养基、Lindemann兰科植物培养基或Vacin和Went培养基。可商购获得的这些培养基以及许多其他常用的植物细胞培养基的制剂是本领域已知的并且可从商业制造商获得。

可以如本文所述制备的细菌细胞培养基的实例包括但不限于胰蛋白酶大豆培养基、脑心浸液培养基、酵母提取物培养基、蛋白胨-酵母提取物培养基、牛肉浸液培养基、硫乙醇酸盐培养基、吲哚-硝酸盐培养基、MR-VP培养基、Simmons柠檬酸盐培养基、CTA培养基、胆汁七叶皂苷培养基(Bile Esculin Media)、博-让二氏培养基(Bordet-Gengou Media)、木炭酵母提取物(CYE)培养基、甘露醇-盐培养基、MacConkey培养基、曙红-亚甲蓝(EMB)培养基、塞-马氏培养基(Thayer-Martin Media)、沙门氏菌-志贺氏菌培养基和脲酶培养基。这些可商购获得的培养基以及许多其他常用的细菌细胞培养基的制剂在本领域中是众所周知的，并且可以在例如《DIFCO&BBL手册》，第2版。(贝克顿·迪金森公司(Becton,Dickinson and Company),2009)和《临床微生物学手册(the Manual of ClinicalMicrobiology)》(美国微生物学会(American Society for Microbiology)，华盛顿特区(Washington,D.C.))中找到。

可以如本文所述制备的真菌细胞培养基(特别是酵母细胞培养基)的实例包括但不限于沙氏培养基和酵母形态学培养基(YMA)。用于这些培养基的制剂是可商购获得的并且是本领域中已知的。

本文所述的一个实施例是压片的培养基、培养基补充剂、培养基子组或缓冲剂。示例性的片剂组合物在表1中示出。最小片剂组合物包含培养基、培养基补充剂、培养基子组或缓冲剂和润滑剂。可以任选地添加其他片剂赋形剂，如崩解剂、填充剂、助流剂、包衣剂、着色剂等，以调节片剂的性质，如溶解或崩解速率和稳定性。在一个方面中，培养基、培养基补充剂、培养基子组或缓冲剂是附聚的培养基、培养基补充剂、培养基子组。令人惊讶的是，发现附聚的培养基能够被压制成片剂。片剂溶解的时间与典型的附聚的培养基相当。可以添加少量润滑剂(0.5-5质量％)以改善压片过程并防止粘在压片模具上。令人惊讶的是，该润滑剂的量不影响在重构的片剂培养基中培养的哺乳动物细胞的细胞生长或蛋白质生产。培养基片剂提供了一种方便的方法来存储和准确地分配具有精确重量的培养基。例如，20个2.5g的片剂可以用水重构以产生1L的培养基。这消除了称量干粉或附聚的培养基的需要，减少了处理，节省了时间，并且允许快速放大。

另一个实施例是一种压片的培养基组合物，其包含培养基、培养基补充剂、培养基子组或缓冲剂；崩解剂和润滑剂。在一个方面中，崩解剂是交联羧甲基纤维素钠。另一方面，润滑剂是硬脂酸镁。

在一个方面中，压片的培养基、培养基补充剂、培养基子组或缓冲剂组合物包含约60质量％至约99质量％的培养基、培养基补充剂、培养基子组或缓冲剂，以及约1质量％至约40质量％的一种或多种与细胞培养物相容的可接受的压片赋形剂。在一个方面中，该组合物包含一种或多种润滑剂、一种或多种填充剂或稀释剂、一种或多种崩解剂、或一种或多种与细胞培养物相容的其他药学上可接受的赋形剂。在一个方面中，该组合物包含培养基、培养基补充剂、培养基子组或缓冲剂以及一种或多种润滑剂。在一个方面中，压片的培养基、培养基补充剂、培养基子组或缓冲剂包含如表1中的组合物。

在表2中提供了示例性的培养基制剂。示例性的培养基组合物可以被配制成液体或干粉，其在使用前在水中重构或溶解。液体组分(如胎牛血清)通常在干粉溶解后加入。也可以使用流化床技术将培养基制备成附聚的颗粒。可以将干粉培养基和附聚的培养基压制成如本文所述的片剂。

表2中所示的示例性的培养基制剂可以通过添加如表1中所示的润滑剂、填充剂或稀释剂、崩解剂或与细胞培养物相容的其他药学上可接受的赋形剂中的一种或多种被配制成片剂。在一个方面中，示例性的培养基与至少1-5质量％的一种或多种润滑剂组合以形成片剂。另一方面，示例性的培养基与至少1-5质量％的一种或多种润滑剂和1-5质量％的一种或多种崩解剂组合以形成片剂。另一方面，培养基是使用流化床技术附聚的。然后将附聚的培养基与至少1-5质量％的一种或多种润滑剂和1-5质量％的一种或多种崩解剂组合，然后使用标准压片技术(例如Korsh压片机)进行压片。

可以如本文所述制备的上述培养基、培养基补充剂、培养基子组或缓冲剂中的任何一种还可以包括一种或多种另外的组分，如指示剂或选择剂(例如，染料、抗生素、氨基酸、酶、底物等)、过滤器(例如木炭)、盐、多糖、离子、去污剂、稳定剂等。该实施例不限于目前配制的培养基，而是广泛适用于用于培养细胞的任何培养基制剂或补充剂。

在本文所述的另一个实施例中，压片的培养基可以包含一种或多种缓冲盐，优选地碳酸氢钠，其浓度足以为培养基提供最佳缓冲能力。在一个方面中，一种或多种缓冲剂包含乙酸、乙酰水杨酸、己二酸、海藻酸、抗坏血酸、天冬氨酸、苯甲酸、苯磺酸、亚硫酸、硼酸、丁酸(butanoic acid)、丁酸(butyric acid)、樟脑酸、樟脑磺酸、碳酸、柠檬酸、环戊烷丙酸、二葡萄糖酸、十二烷基硫酸、乙磺酸、甲酸、富马酸、甘油酸、甘油磷酸、甘氨酸(glycine)、甘氨酸(gly-glycine)、葡庚糖酸、葡糖酸、谷氨酸、戊二酸,乙醇酸、半硫酸、庚酸、己酸、马尿酸(hippuric acid)、氢溴酸、盐酸、氢碘酸、羟基乙磺酸、乳酸、马来酸、苹果酸、丙二酸、扁桃酸、甲磺酸、粘酸、萘磺酸、萘酸、烟酸、亚硝酸、草酸、壬酸、磷酸、丙酸、丙酮酸、糖精、水杨酸、山梨酸、琥珀酸、硫酸、酒石酸、硫氰酸、硫代乙醇酸(thioglycolicacid)、硫代硫酸、甲苯磺酸、十一碳烯酸、MES、bis-tris甲烷、ADA、ACES、bis-tris丙烷、PIPES、MOPSO、氯化胆胺、MOPS、BES、TES、HEPES、DIPSO、MOBS、乙酰氨基甘氨酸、TAPSO、TEA、POPSO、HEPPSO、EPS、HEPPS、三(羟甲基)甲基甘氨酸(Tricine)、三(羟甲基)氨基甲烷(氨丁三醇)、甘氨酰胺、甘氨酰甘氨酸、HEPBS、N,N-二羟乙基甘氨酸(Bicine)、TAPS、AMPB、CHES、AMP、AMPSO、CAPSO、CAPS、CABS、其组合或其盐。在一个方面中，缓冲剂包含磷酸盐、硫酸盐、碳酸盐、甲酸盐、乙酸盐、丙酸盐、丁酸盐、乳酸盐、甘氨酸、马来酸盐、丙酮酸盐、柠檬酸盐、乌头酸盐、异柠檬酸盐、α-酮戊二酸盐、琥珀酸盐、富马酸盐、苹果酸盐、草酰乙酸盐、天冬氨酸盐、谷氨酸盐、三(羟甲基)氨基甲烷(氨丁三醇)、其组合或其盐中的一种或多种。在一个方面中，缓冲剂是碳酸钠或碳酸氢钠。

根据本文所述的一个方面，缓冲盐(如碳酸氢钠)可以在压片前在培养基的附聚之前、期间或之后加入到培养基中。在本文所述的这一方面的一个实例中，碳酸氢钠可以在用合适的溶剂(如水、血清或pH调节剂，如酸(例如浓度为1M至5M、0.1M至5M，或优选地为1M的HCl)或碱(例如浓度为1M至5M、0.1M至5M或优选地为1M的NaOH)附聚之前、期间或之后添加到培养基中，使得在重构附聚的培养基时，培养基处于用于培育多种细胞类型的最佳或基本上最佳的pH。例如，通过本发明的方法制备的细菌细胞培养基在重构时将优选地具有约4-10、更优选地约5-9或约6-8.5的pH。通过本发明的方法制备的真菌(例如酵母)细胞培养基在重构时将优选地具有约3-8，更优选地约4-8或约4-7.5的pH；通过本发明的方法制备的动物细胞培养基在重构时优选地具有约6-8或约7-8，更优选地约7-7.5或约7.2-7.4的pH；并且通过本发明的方法制备的植物细胞培养基在重构时将优选地具有约4-8，优选地约4.5-7、5-6或5.5-6的pH。当然，待用于特定细胞类型的给定培养基的最佳pH也可以由普通技术人员使用本领域已知的方法凭经验确定。例如，胃细胞可以在远低于其他细胞的pH的pH下培养，例如pH 1-3。普通技术人员理解，适应恶劣环境的其他细胞可能具有特殊的耐受性或需要，其可能在满足通常培养的细胞的培养条件的正常范围之外。

在另一个实例中，一种或多种缓冲盐，例如碳酸氢钠，可以通过片剂形式被直接添加到营养培养基中。在相关的方面中，可以通过在流化床装置中将pH调节剂附聚到营养培养基中，通过将pH调节剂喷雾干燥到粉状的或附聚的营养培养基上，或通过其组合，将pH调节剂，如酸(例如HCl)或碱(例如NaOH)添加到可以含有一种或多种缓冲盐(如碳酸氢钠)的营养培养基中；这种方法避免了在粉状培养基的重构后随后添加pH调节剂。然后可以将该组合物形成为如本文所述的片剂。因此，本文所述的片剂营养培养基可用于体外培养或生长细胞，其在用溶剂(例如，水或血清)重构后，具有对于支持细胞培育或生长最佳的pH，而无需调整液体培养基的pH。这种类型的培养基(在本文中被定义为“自动pH调节培养基”)因此避免了在重构后向培养基中添加缓冲剂和在溶解缓冲剂后调节培养基的pH的耗时且容易出错的步骤。例如，根据这些方法制备的哺乳动物细胞培养基在重构后可以具有约7.1至约7.5、更优选地约7.1至约7.4、并且最优选地约7.2至约7.4或约7.2至约7.3的pH。

在另一个实施例中，自动pH调节培养基可以通过制备重构的培养基来生产，而无需添加任何缓冲系统或pH调节剂。在一个优选的此类方面中，可以通过调节存在于培养基中的缓冲系统来提供自动pH培养基。例如，如普通技术人员所知，培养基通常包含缓冲剂或缓冲系统。通过调节培养基中此类缓冲剂的pH相反形式(pH-opposing form)，产生了自动pH培养基，从而避免在培养基的重构前或重构时以及在使用前添加另外的缓冲剂或pH调节剂以达到合适的pH水平的需要。在本文所述的一个这类方面中，然后在培养基中使用某些培养基组分(特别是磷酸盐或其他缓冲盐)的pH相反形式，以在粉状培养基的重构时提供期望的pH。pH相反形式的组分是共轭的酸-碱对，其中该对的成员可以提高pH或降低pH，以达到溶液的所需pH。HEPES钠(提高pH)和HEPES-HCl(降低pH)是pH相反组分的实例。例如，如果要制备pH在4.5与7.2之间的重构的培养基，第一步是确定一元(降低pH)与二元(提高pH)磷酸盐的正确平衡，以便产生所需的pH。通常，一元和二元磷酸盐以约0.1mM至约10mM、约0.2mM至约9mM、约0.3mM至约8.5mM、约0.4mM至约8mM、约0.5mM至约7.5mM，约0.6mM至约7mM，或优选地约0.7mM至约7mM的浓度使用。如果在制剂中使用其他缓冲系统，则类似地确定碱性(通常为钠或一元)缓冲盐和相应的酸性(或pH相反的；通常为HCl或二元)缓冲盐的适当比率或平衡，以确保在用溶剂重构后，制剂将处于所需的最终pH。由于在溶液中存在的实际磷酸盐分子种类在给定的pH下是相同的，无论是添加碱性(例如钠或二元)还是酸性(例如HCl或二元)形式，预计这种调整不会影响缓冲能力。一旦确定了适当缓冲剂的pH相反形式的适当比率，就可以将这些组分添加到培养基(例如，干粉培养基)中以提供在重构时和在使用之前具有适当pH水平的培养基。

在一个实施例中，压片的培养基、培养基补充剂、培养基子组或缓冲剂在25℃的水中在约10-30分钟内溶解。在一个方面中，直到压片的培养基完全溶解的时间(例如，完全溶解速率或t₁₀₀)在约1分钟、约2.5分钟、约5分钟、约10分钟、约15分钟、约20分钟、约25分钟或约30分钟内。另一方面，完全溶解速率在约2分钟、约3分钟、约4分钟、约5分钟、约6分钟、约7分钟、约8分钟、约9分钟、约10分钟、约11分钟、约12分钟、约13分钟、约14分钟、约15分钟、约16分钟、约17分钟、约18分钟、约19分钟、约20分钟、约21分钟、约22分钟、约23分钟、约24分钟、约25分钟、约26分钟、约27分钟、约28分钟、约29分钟、约30分钟、约31分钟、约32分钟、约33分钟、约34分钟、约35分钟、约36分钟、约37分钟、约38分钟、约39分钟或约40分钟内。

在另一个实施例中，约50％的压片的培养基、培养基补充剂、培养基子组或缓冲剂在25℃的水中在约10-30分钟内溶解。在一个方面中，直到压片的培养基的50％溶解的时间(例如t₅₀)在约1分钟、约2.5分钟、约5分钟、约10分钟、约15分钟、约20分钟、约25分钟或约30分钟。另一方面，50％溶解速率在约2分钟、约3分钟、约4分钟、约5分钟、约6分钟、约7分钟、约8分钟、约9分钟、约10分钟、约11分钟、约12分钟、约13分钟、约14分钟、约15分钟、约16分钟、约17分钟、约18分钟、约19分钟、约20分钟、约21分钟、约22分钟、约23分钟、约24分钟、约25分钟、约26分钟、约27分钟、约28分钟、约29分钟、约30分钟、约31分钟、约32分钟、约33分钟、约34分钟、约35分钟、约36分钟、约37分钟、约38分钟、约39分钟或约40分钟内。

另一方面，单一的压片的培养基在25℃下在约50mL的水在约20-30分钟内完全溶解。另一方面，20个培养基片剂在25℃下在约930mL的水中在约20-30分钟内完全溶解。在一个方面中，崩解是根据美国药典(U.S.P.)方法<701>崩解进行的，其通过引用并入本文用于此类教导。

另一个实施例是压片的完全干粉培养基制剂，其在用溶剂重构培养基片剂时支持体外细胞培育，而不需要在使用前向培养基中添加任何补充营养组分。因此，根据本文所述的这一方面的培养基将优选地包含体外培育细胞所必需的营养组分，使得不需要在溶剂中包括另外的营养组分或者不需要在重构时和在使用之前将另外的营养组分添加到培养基中。因此，本文所述的这种完全培养基在用水或用替代的不含营养物的溶剂，如缓冲盐水溶液重构后将适用于体外培育细胞。这种完全培养基可以是自动pH调节培养基，并且可以包含一种或多种培养基补充剂(包括但不限于血清)、一种或多种氨基酸(包括但不限于L-谷氨酰胺)、胰岛素、转铁蛋白、一种或多种激素、一种或多种脂质、一种或多种生长因子、一种或多种细胞因子、一种或多种神经递质、动物组织、器官或腺体的一种或多种提取物、一种或多种酶、一种或多种蛋白质、一种或多种微量元素、一种或多种细胞外基质组分、一种或多种抗生素、一种或多种病毒抑制剂、一种或多种缓冲剂或其组合。

可以通过本发明的方法制备成片剂或可以被包含在本文所述的培养基中的培养基补充剂的实例包括但不限于动物血清，如牛血清、胎牛血清、新生小牛血清和小牛血清、人血清、马血清、猪血清、猴血清、猿血清、大鼠血清、鼠血清、兔血清、羊血清等，限定的替代品，如STEMPRO LIPOMAX、OPTIMAB、KNOCK-OUT血清替代品(GIBCO、赛默飞世尔科技有限公司)、激素(包括类固醇激素如皮质类固醇、雌激素、雄激素(例如睾酮)和肽类激素如胰岛素、细胞因子(包括生长因子(例如，EGF、αFGF、βFGF、HGF、IGF-1、IGF-2、NGF等)、白细胞介素、集落刺激因子、干扰素等)、神经递质、脂质(包括磷脂、鞘脂、脂肪酸、EXCYTE、胆固醇等)、附着因子(包括细胞外基质组分如纤连蛋白、玻连蛋白、层粘连蛋白、胶原蛋白、蛋白聚糖、糖胺聚糖等)，以及动物、组织(例如植物或细菌组织)、细胞、器官或腺体的提取物或水解产物(如牛垂体提取物、牛脑提取物、鸡胚提取物、牛胚胎提取物、鸡肉提取物、鸡组织提取物、跟腱及其提取物)等。可以通过本发明的方法产生或可以被包含在本文所述的培养基中的其他培养基补充剂包括多种蛋白质(如血清白蛋白，特别是牛或人血清白蛋白；免疫球蛋白及其片段或复合物；抑肽酶；血红蛋白；氯化血红素或正铁血红素；酶(如胰蛋白酶、胶原酶、胰酶或分散酶)；脂蛋白类；胎球蛋白；铁蛋白；等等)，其可以是天然的或重组的；维生素；氨基酸及其变体(包括但不限于L-谷氨酰胺和L-半胱氨酸)，酶辅因子；多糖；盐或离子(包括微量元素，如钼、钒、钴、锰、硒等的盐或离子)；和本领域普通技术人员将熟悉的可用于体外培育细胞的其他补充剂和组合物。通过本文所述的方法生产的培养基补充剂包括动物或哺乳动物(例如，人、鱼、牛、猪、马、猴、猿、大鼠、鼠、兔、羊、昆虫等)衍生的补充剂、成分或产品。这些血清和其他培养基补充剂是可商购获得的。可替代地，本文所述的血清和其他培养基补充剂可以从它们的天然来源中分离或通过本领域已知的方法重组产生，这些方法对于普通技术人员来说是常规的。参见Freshney,RI,《动物细胞的培养(Culture ofAnimal Cells)》，纽约:Alan R.Liss,Inc.,第74-78页(1983)，以及其中引用的参考文献；还参见Harlow,E和Lane,D.,《抗体:实验室手册(Antibodies:A Laboratory Manual)》,纽约冷泉港实验室(Cold Spring Harbor Laboratory),116-120(1988)。

由于均匀性和/或稳定性问题，通常以μg/mL或者甚至μg/L量存在于最终制剂中的组分通常已经被排除在标准粉状培养基之外，而是作为浓缩物通常被添加到重构的1×培养基中，从而增加了储存成本，并导致最终培养基的生产变得更加昂贵和低效。在一个方面中，可以通过首先制备组分的浓缩物然后将它们喷雾到将与浓缩物一起造粒的粉状培养基的一部分中来将这种低水平组分添加到基础粉末中。然后将其碾磨至与用于共混的本体的一般尺寸范围相同的一般尺寸范围内的粒度。以少量喷入组分的能力可能特别有助于开发包括微量元素、维生素、病毒抑制剂、生长因子、细胞因子等的培养基。具体地，除了其他之外，待添加到粉状培养基中的组分包括但不限于维生素，其包括视黄醇(A)、硫胺素(B1)、核黄素(B2)、烟酰胺(B3)、泛酸(B5)、吡哆胺(B6)、生物素(B7)、叶酸(B9)、钴胺素(B12)、抗坏血酸(C)、胆钙化醇(D)、生育酚(E)、叶绿醌(K)、胆碱、肌醇、硫辛酸、对氨基苯甲酸、其盐和微量元素，包括铁、锰、铜、碘、锌、钴、氟化物、铬、钼、硒、镍、硅、钒、其盐或其组合。以少量添加到本文所述的培养基中的另外的组分可以包括，例如，生长因子(例如，EGF、αFGF、βFGF、KGF、HGF、IGF-1、IGF-2、NGF、胰岛素等)、白细胞介素、集落刺激因子、干扰素、附着因子、细胞外基质组分(例如，胶原蛋白、层粘连蛋白、蛋白聚糖、糖胺聚糖、纤连蛋白、玻连蛋白等)、脂质(如磷脂、胆固醇、牛胆固醇浓缩物、脂肪酸、鞘脂等)；动物组织、腺体或器官的提取物；抗生素如GENETICIN羧苄青霉素、头孢噻肟、抗PPLO、FUNGIZONE、潮霉素、卡那霉素、新霉素、制霉菌素、青霉素或链霉素等；和病毒抑制剂(例如，本领域已知的蛋白酶抑制剂、核苷类似物等)。

可以如本文所述制备和/或可以被包含在培养基中的缓冲剂的实例包括但不限于缓冲盐水溶液、磷酸盐缓冲盐水(PBS)制剂、Tris缓冲盐水(TBS)制剂、HEPES缓冲盐水(HBS)制剂、Hanks的平衡盐溶液(HBSS)、Dulbecco的PBS(DPBS)、Earle的平衡盐溶液、Puck的盐溶液、Murashige和Skoog植物基础盐溶液、Keller的海洋植物基础盐溶液、Provasoli的海洋植物基础盐溶液、以及Kao和Michayluk的基础盐溶液等。这些可商购获得的缓冲剂以及许多其他常用缓冲剂的制剂在本领域中是众所周知的，并且可以在例如赛默飞世尔科技目录(Thermo Fisher Scientific Catalog)、《DIFCO&BBL手册》第2版.(贝克顿·迪金森公司,2009)，以及Millipore Sigma细胞培养目录中找到。

还描述了临床溶液的片剂，特别是用于肠外营养、电解质平衡或静脉内(IV)溶液的片剂。此类临床溶液包括但不限于林格氏液、乳酸林格氏液、5质量％的右旋糖水溶液、生理盐水(0.9质量％的NaCl)、低渗盐水(0.45质量％的NaCl)、5质量％的右旋糖盐水等。临床溶液可以进一步包含一种或多种药物组合物或其组分。

还描述了一种用于制备含有所需或有效量或浓度的成分的压片的营养培养基、培养基补充剂、培养基子组、缓冲剂或样品的方法，其中至少一种成分如糖(例如葡萄糖)维生素、氨基酸、盐、微量元素、生长因子和/或胺(例如，乙醇胺、精胺、亚精胺、腐胺或对氨基苯甲酸)以与最终产品相比更高的量被输入到制造过程中。在附聚过程期间补偿至少一种成分的有效浓度的损失或降低的方法包括计算或确定待添加到如本文所述的工艺中的成分的量，以得到最终所需的或有效量。

一种用于确定测试培养基中化合物(例如维生素)的有效浓度的方法如下。出于说明的目的使用维生素，将已知浓度的维生素连续稀释到缺乏维生素的培养基中。设置第二组连续稀释液，其中将测试培养基连续稀释到同样缺乏维生素的培养基中。然后将需要维生素以用于生长的细胞添加到两组连续稀释的样品中，并在适当的条件下培养。在一段时间后，测量细胞复制(例如，通过细胞计数或通过测量光密度)。绘制已知浓度的测量值以形成标准曲线，将来自测试培养基稀释液的测量值与标准曲线进行比较，以确定测试培养基中维生素的有效浓度。任何数量的类似测定可以用于确定样品中可用于细胞代谢的代谢物的量。

另一个实施例是一种用于对本文所述的营养培养基、培养基补充剂、培养基子组和缓冲剂进行灭菌，以及用于对通过标准方法如球磨或冻干制备的粉状营养培养基、培养基补充剂、培养基子组和缓冲剂进行灭菌的方法。还描述了用于对样品进行灭菌或基本灭菌的方法，所述样品包括本文所述的营养培养基、培养基补充剂、培养基子组和缓冲剂。此类另外的方法可以包括过滤、热灭菌、辐照或其他化学或物理方法。压片的营养培养基、培养基补充剂、培养基子组或缓冲剂(如本文所述制备可以在有利于灭菌的条件下进行辐照。由于营养培养基、培养基补充剂、培养基子组和缓冲剂通常在大体积溶液中制备，并且经常包含热不稳定组分，因此它们不适合通过辐射或通过加热进行灭菌。因此，营养培养基、培养基补充剂、培养基子组和缓冲剂通常通过污染物去除方法(如过滤)进行灭菌，这显著增加了制造此类培养基、培养基补充剂、培养基子组和缓冲剂所需的费用和时间。

根据本文所述的方法制备的压片的营养培养基、培养基补充剂、培养基子组或缓冲剂可以通过更便宜和更有效的方法进行灭菌。例如，粉状营养培养基、培养基补充剂、培养基子组或缓冲剂可以在有利于这些粉末的灭菌的条件下进行辐照。优选地，这种辐照是以散装方式完成的(即，在样品、营养培养基、培养基补充剂、培养基子组或缓冲剂的包装之后)，并且最优选地，这种辐照通过将本文所述的散装包装的样品、培养基、培养基补充剂、培养基子组或缓冲剂在一定条件下暴露于γ射线源而完成，所述条件使得可能存在于粉状样品培养基、培养基补充剂、培养基子组或缓冲剂中的细菌、真菌、孢子或病毒被灭活(即，被阻止复制)。可替代地，可以通过在包装前将样品、粉状培养基、培养基补充剂、培养基子组或缓冲剂暴露于γ射线源或紫外光源来完成辐照。本文所述的样品、培养基、培养基补充剂、培养基子组和缓冲剂可以替代地通过热处理灭菌(如果样品、营养培养基、培养基补充剂、培养基子组或缓冲剂的子组或组分是热稳定的)，例如通过快速巴氏杀菌或高压灭菌。如本领域普通技术人员将理解的，灭菌所需的辐照或加热的剂量和暴露时间将取决于待灭菌的材料的体积，并且可以由普通技术人员使用本领域已知的技术(如本文所述的技术)在无需过度实验的情况下容易地确定。

在本文所述的一个实施例中，将散装样品(例如，营养培养基、培养基补充剂、培养基子组或缓冲剂)(其优选地为粉状形式)暴露于总剂量为约10-100千戈瑞(kGy)，优选地总剂量为约15-75kGy、15-50kGy、15-40kGy、20-40kGy或25-45kGy，更优选地总剂量为约20-30kGy，并且最优选地总剂量为约25-35kGy的辐射源(例如，γ(伽玛)辐射)，持续约1小时至约7天，更优选地约1小时至约5天，1小时至约3天，约1-24小时或约1-5小时，并且最优选地约1-3小时(“正常剂量率”)。可替代地，本文所述的散装粉末可以在约1-5天的时间段内以约25-100kGy的总累积剂量的“慢剂量率”灭菌。在辐照期间，营养培养基、培养基补充剂、培养基子组或缓冲剂(其优选地为粉状形式)优选地被储存在约-70℃至约室温(约20-25℃)的温度下，最优选地被储存在在约-70℃下。当然，普通技术人员将理解，辐射剂量和暴露时间可以根据待辐射的材料的体积和/或质量进行调整；通过辐照或热处理对粉状材料进行灭菌所需的典型最佳辐照剂量、暴露时间和储存温度在本领域中是已知的。

在灭菌后，未包装的压片的营养培养基、培养基补充剂、培养基子组和缓冲剂可以在无菌条件下包装，例如通过在真空包装或本文所述的整合的粉末/溶剂包装中包装到容器如无菌管、小瓶、瓶子、袋、袋形物、盒子、纸箱、桶等中。如本文所述，然后可以将如培养基、培养基补充剂、培养基子组和缓冲剂的无菌包装样品储存延长的时间段。

本文所述的压片的营养培养基、培养基补充剂、培养基子组和缓冲剂容易溶于再水合溶剂中并且基本上是无尘的。为了使用，可以将压片的培养基、培养基补充剂、培养基子组或缓冲剂在一定体积的溶剂中“再水合”或“重构”，所述溶剂的体积足以产生溶剂化的培养基、培养基补充剂、培养基子组或缓冲剂的特定用途所需的营养物、电解质、离子和pH条件。这种重构特别容易，因为与粉状营养培养基、培养基补充剂、培养基子组或缓冲剂不同，压片的培养基、培养基补充剂、培养基子组和缓冲剂将容易溶解，并且将产生很少(如果有的话)粉尘或不溶性材料。

用于重构本文所述的压片的营养培养基、培养基补充剂、培养基子组、缓冲剂或样品的溶剂包括但不限于本文所述的溶剂，如水，如蒸馏水和/或去离子水、血清(牛血清或人血清，并且最特别是胎牛血清或小牛血清)、有机溶剂(二甲亚砜、丙酮、乙醇等)或其任何组合，其中的任何一种可以包含一种或多种另外的组分(例如，盐、多糖、离子、去污剂、稳定剂等)。例如，压片的培养基补充剂(如动物血清)和缓冲剂优选地在水中重构至1×最终浓度，或任选地重构至更高的浓度(例如，2×、2.5×、5×、10×、20×、25×、50×、100×、500×、1000×等)用于制备储备溶液或用于储存。可替代地，压片的培养基可以在水中的培养基补充剂(例如血清如FBS)溶液中重构，如其中培养基补充剂在水中以例如按体积计0.5％、1％、2％、2.5％、5％、7.5％、10％、15％、20％、25％、50％或更高(体积/体积)的浓度存在的那些溶液。

压片的样品(例如营养培养基、培养基补充剂、培养基子组或缓冲剂)的重构通常在无菌条件下完成以保持重构的样品的无菌性，尽管重构的样品可以在再水合后通过过滤或本领域中众所周知的其他灭菌方法进行灭菌。在其重构后，培养基、培养基补充剂、培养基子组和缓冲剂或其他样品应被储存在低于约10℃的温度下，优选地被储存在约0-4℃的温度下，直到使用。

根据本领域普通技术人员已知的标准细胞培养技术，重构的压片的营养培养基、培养基补充剂、培养基子组和缓冲剂可以用于培养或操作细胞。在此类技术中，使待培养的细胞在有利于细胞的培育或操作的条件(如受控的温度、湿度、光照和大气条件)下与本文所述的重构的培养基、培养基补充剂、培养基子组或缓冲剂接触。特别适合通过此类方法培育的细胞包括但不限于细菌细胞、鱼细胞、酵母细胞、植物细胞和动物细胞。此类细菌细胞、酵母细胞、植物细胞和动物细胞可从已知的培养物保藏中心商购获得，例如美国典型培养物保藏中心(弗吉尼亚州马纳萨斯(Manassas,Va.))和本领域普通技术人员将熟悉的其他保藏中心。用于通过这些方法培育的优选的动物细胞包括但不限于昆虫细胞(最优选地果蝇细胞、斜紋夜蛾(Spodoptera)细胞和粉纹夜蛾(Trichoplusia)细胞)、线虫细胞(最优选地秀丽隐杆线虫细胞)和哺乳动物细胞(最优选地CHO细胞、COS细胞、VERO细胞、BHK细胞、AE-1细胞、SP2/0细胞、L5.1细胞、杂交瘤细胞和人类细胞，如293细胞、PER-C6细胞和HeLa细胞)，其中的任何一种都可以是体细胞、生殖细胞、正常细胞、患病的细胞、转化的细胞、突变细胞、干细胞、前体细胞或胚胎细胞、胚胎干细胞(ES细胞)、用于病毒或载体生产的细胞(即293，PerC 6)，来自用于细胞或基因疗法的原代人类部位的细胞，即淋巴细胞、造血细胞、其他白细胞(WBC)、巨噬细胞、嗜中性粒细胞、树突状细胞，并且其中的任何一种都可以是锚定依赖性或锚定非依赖性(即“悬浮”)细胞。另一个方面是操作或培育用于组织或器官移植或工程改造的细胞和/或组织，即肝细胞、胰岛、成骨细胞、破骨细胞/软骨细胞、真皮或肌肉或其他结缔组织、上皮细胞、组织如角质形成细胞、神经来源的细胞、角膜、皮肤、器官和用作疫苗的细胞，即血细胞、造血细胞其他干细胞或祖细胞，以及各种组织类型的灭活的或修饰的肿瘤细胞。

另一个实施例是一种操作或培养一种或多种细胞的方法，其包括使所述细胞与本文所述的细胞培养试剂(特别是重构的压片的营养培养基、培养基补充剂、培养基子组或缓冲剂)接触，以及在有利于培育或操作一种或多种细胞的条件下孵育所述一种或多种细胞。可以根据本发明的方法培养或操作任何细胞，特别是细菌细胞、酵母细胞、植物细胞、动物细胞和本文所述的其他细胞或细胞系。根据本文所述的这一方面培养或操作的细胞可以是正常细胞、患病的细胞、转化的细胞、突变细胞、体细胞、生殖细胞、干细胞、前体细胞或胚胎细胞，其中的任何一种可以是已建立的细胞系或获自天然来源。

通过本发明的方法生产的压片的营养培养基、培养基补充剂和培养基子组是可以用于操作或支持细胞的生长的任何培养基、培养基补充剂或培养基子组(无血清或含血清)，所述细胞可以是细菌细胞、真菌细胞(特别是酵母细胞)、植物细胞或动物细胞(特别是昆虫细胞、线虫细胞或哺乳动物细胞，最优选地人细胞)，其中的任何一种可以是体细胞、生殖细胞、正常细胞、患病细胞、转化细胞、突变细胞、干细胞、前体细胞或胚胎细胞。优选的此类营养培养基包括但不限于细胞培养基，最优选地细菌细胞培养基、植物细胞培养基或动物细胞培养基。优选的培养基补充剂包括但不限于未限定的补充剂，如细菌、动物或植物细胞、腺体、组织或器官的提取物或水解产物(特别是牛垂体提取物、牛脑提取物和鸡胚提取物)；和生物体液或血液衍生产品(特别是动物血清，并且最优选地牛血清(特别是胎牛血清、新生小牛血清或正常小牛血清)、马血清、猪血清、大鼠血清、鼠血清、兔血清、猴血清、猿血清或人血清，其中的任何一种都可以是胎儿血清)及其提取物(更优选地血清白蛋白，并且最优选地牛血清白蛋白或人血清白蛋白)。培养基补充剂还可以包括限定的替代品，如STEMPRO LIPOMAX替代品、OPTIMAB替代品、KNOCK-OUT血清替代品(GIBCO，赛默飞世尔科技有限公司)等，它们可以用作上述未限定的培养基补充剂的替代品。此类补充剂还可以包含限定的组分，包括但不限于激素、细胞因子、神经递质、脂质、附着因子、蛋白质、氨基酸等。

本文所述的压片的培养基在用溶剂重构后，可以用于生物体(例如如丝状真菌、转基因植物(例如烟草、水稻和浮萍)、地衣或藻类)或源自上述生物体中的任何一种的细胞的生长和/或培育。

还描述了压片形式的培养基补充剂或补料。在一个方面中，补充剂包括一种或多种氨基酸。另一方面，使用氨基酸的盐。另一方面，盐是钠盐。另一方面，使用一元磷酸盐和二元磷酸盐。优选的阳离子是钠。另一方面，提供一元盐和二元盐，使得获得所得的pH，例如约8的pH。根据制剂，虽然一元盐与二元盐的比率可能由所需的pH决定，但应尝试不同的总盐浓度以优化溶解度，尤其是在使用浓缩的或高度浓缩的补充剂时。当评估盐浓度时，也可以确认pH。当氨基酸不作为盐提供时，优选地，酸的pH效应被三元磷酸盐(优选地磷酸三钠)抵消。虽然优选钠作为阳离子，但也可以使用其他金属如钾、钙、镁。如果需要特定的抗衡离子，则它可以作为磷酸盐获得。另一方面，补充剂粉末迅速溶解。另一方面，补充剂可以作为高度浓缩的混合物制备和使用，例如，其中一种或多种组分的浓度为被补充的培养基中该组分的浓度的约2×或更高，优选地3×、5×、8×、10×、12×、15×、20×、25×、50×、75×、85×、95×，或者甚至约100×或更多倍。可以独立地选择补充剂的每种所需成分的浓度。另一方面，补充剂通过在无菌条件下用水重构来制备。另一方面，补充剂通过过滤灭菌。

补充剂可能与被补充的培养基没有共同的成分，或者可能具有一种或多种共同的成分。补充剂可以以至少一种方式不同于被补充的培养基，如一种或多种成分的不同浓度，例如补充剂中两种成分的不同比率、不同的成分混合物、另外的成分或省略的成分。例如，补充剂可以在可行的程度上省略盐，并且可以包含例如显著提高浓度的生长因子或氨基酸。优选的补充剂制剂包含至少2种、更优选地3种、但可能至少4种、5种、6种、7种、8种、9种、10种、11种、12种、13种、14种、15种或更多种氨基酸，包括其盐或二聚体。

在一些实施例中，如本文所述的补料补充剂用于补充已经或正在用于培养细胞的培养基，例如，当培养细胞时，一些成分被细胞从培养基中去除。在本文所述的一些实施例中，补料补充剂尤其用于替代这些成分中的一些或全部。在一些实施例中，补充剂包含待补充的原始培养基中的大部分成分，但补料培养基缺少至少一种成分。在一些实施例中，与被补充的原始培养基中的浓度相比，补料补充剂缺乏1种、2种、3种、4种、5种、6种、7种、8种、9种、10种、11种、12种、13种、14种、15种或更多种成分。在一些实施例中，补料补充剂以浓缩的形式添加，例如以2×、3×、4×、5×、6×、7×、8×、9×、10×、15×、20×、30×、40×、50×、100×、200×、300×、400×、500×或1000×。浓缩形式是指补料补充剂中的成分中的至少一种的浓度高于培养基中所需的浓度。在一些实施例中，补料补充剂的成分可以例如基于相容的子组被分为多种补料补充剂培养基。

在一个实施例中，补料补充剂是片剂形式。压片的补料补充剂通常在进料前被重构。然而，可以将无菌的压片的补充剂直接添加到液体培养基中。通常，在这种情况下，补料被设置为使得片剂在与细胞接触之前经历充分的溶解或混合。

在另一个实施例中，将压片的培养基、补充剂、补料、子组或缓冲剂添加到培养物中以优化特定组分的浓度，补充耗尽的或省略的组分，或替换已经被培养物消耗或降解的组分。片剂可以在添加到培养物中之前溶解在溶剂中或以固体形式添加。

在另一个实施例中，分析细胞培养物以确定一种或多种培养基组分的浓度。典型的分析方法可以用于确定组分的浓度，如HPLC、质谱法、ELISA、标准曲线测定和本领域已知的其他方法。如果组分的浓度低于所需范围，则可以将压片的补充剂添加到培养物中以将浓度增加到所需范围。片剂可以在添加到培养物中之前溶解在溶剂中，或者以片剂形式添加并原位溶解。

在一些实施例中，补料补充剂的一部分成分由片剂重构，例如附聚的压片的补充剂。在一些实施例中，将另外的成分添加到重构的培养基或液体形式的压片的补充剂或补料中。在一些实施例中，压片的另外的成分包含氨基酸或抗生素。

细胞培养基的重量渗透摩尔浓度(重量渗透摩尔浓度的量度)很重要，因为它有助于调节物质进出细胞的流动。它通常通过在培养基中添加或减少盐来控制。重量渗透摩尔浓度的快速增加(例如，添加相对于基础生长培养基具有升高的重量渗透摩尔浓度的浓缩的补料补充剂)可能导致细胞应激、受损或死亡。在细胞培养/生长期间保持最佳重量渗透摩尔浓度范围对于细胞功能和/或生物生产成功是期望的。

基础生长培养基重量渗透摩尔浓度一般在250mOsmo/kg到350mOsmo/kg的范围内。在一些实施例中，本文所述的浓缩的补料补充剂的添加使重量渗透摩尔浓度增加约25mOsmo/kg或约0至约100mOsmo/kg、约0.01mOsmo/kg至约100mOsmo/kg、约0.1mOsmo/kg至约100mOsmo/kg、约1mOsmo/kg至约100mOsmo/kg、约10mOsmo/kg至约100mOsmo/kg、约50mOsmo/kg至约100mOsmo/kg、约75mOsmo/kg至约100mOsmo/kg、约1mOsmo/kg至约10mOsmo/kg、约1mOsmo/kg至约50mOsmo/kg、约1mOsmo/kg至约75mOsmo/kg、约10mOsmo/kg至约50mOsmo/kg、约15mOsmo/kg至约35mOsmo/kg、约25mOsmo/kg至约50mOsmo/kg或约20mOsmo/kg至约30mOsmo/kg。在一些实施例中，本文所述的浓缩的补料补充剂培养基(例如，5×浓缩的补料补充剂培养基)的重量渗透摩尔浓度具有约0至约1500mOsmo/kg；1mOsmo/kg至约1000mOsmo/kg；1mOsmo/kg至约750mOsmo/kg；1mOsmo/kg至约500mOsmo/kg；1mOsmo/kg至约400mOsmo/kg；1mOsmo/kg至约300mOsmo/kg；1mOsmo/kg至约200mOsmo/kg；1mOsmo/kg至约100mOsmo/kg；1mOsmo/kg至约50mOsmo/kg；50mOsmo/kg至约1000mOsmo/kg；100mOsmo/kg至约1000mOsmo/kg；300mOsmo/kg至约1000mOsmo/kg；500mOsmo/kg至约1000mOsmo/kg；750mOsmo/kg至约1000mOsmo/kg；100mOsmo/kg至约200mOsmo/kg；200mOsmo/kg至约300mOsmo/kg；300mOsmo/kg至约400mOsmo/kg；400mOsmo/kg至约500mOsmo/kg；450mOsmo/kg至约500mOsmo/kg；500mOsmo/kg至约600mOsmo/kg；550mOsmo/kg至约650mOsmo/kg；600mOsmo/kg至约700mOsmo/kg；750mOsmo/kg至约850mOsmo/kg；700mOsmo/kg至约800mOsmo/kg；800mOsmo/kg至约900mOsmo/kg；900mOsmo/kg至约1000mOsmo/kg；1000mOsmo/kg至约1250mOsmo/kg；或约1250mOsmo/kg至约1500mOsmo/kg的重量渗透摩尔浓度。在一些实施例中，与被补充或进料的培养基的重量渗透摩尔浓度相比，本文所述的浓缩的补料补充剂培养基的重量渗透摩尔浓度为约3.0×至约3.5×、约3.5×至约4.5×、约4.5×至约5.5×、约5.5×至约6.5×、约6.5×至约7.5×、约7.5×至约8.5×、约8.5×至约9.5×、约9.5×至约10.5×、约10.5×至约11.5×、约11.5×至约12.5×、约12.5×至约13.5×、约13.5×至约14.5×、约14.5×至18.5至约19.5×、约19.5×至约20.5×、约3×至约10×、约5×至约10×、约10×至约15×、约15×至约20×、约20×至约25×或约25×至约100×。

本文描述了用于以降低的成本制备压片的营养培养基、培养基补充剂、培养基子组、缓冲剂和细胞的方法。所述组合物和方法提供以降低的成本和减少的不便制备压片的营养培养基、培养基补充剂、培养基子组、缓冲剂和细胞。成本降低是由于几个因素。例如，压片的培养基、培养基补充剂、培养基子组和缓冲剂制剂可以用小得多的生产设备生产，因为不需要1×制剂所需的大型搅拌罐。此外，压片的培养基、培养基补充剂、培养基子组和缓冲剂制剂可以根据需要使用“即时”生产技术制备，这减少了库存、储存和劳动力成本。制备和运输培养基、培养基补充剂、培养基子组和缓冲剂制剂所需的时间可以从6-8周减少到少至一天。本文所述的自动pH调节的压片培养基还提供了显著的成本和时间节省，并降低了在根据使用传统的干粉或散装液体培养基的标准方法的pH调节过程期间可能发生的将污染物引入到重构的培养基中的趋势。

还描述了可以用于制备非常大量的1×培养基、培养基补充剂、培养基子组或缓冲剂(例如100,000升或更多)的压片的营养培养基、培养基补充剂、培养基子组或缓冲剂的制备，与根据其他常用技术生产的多个批次的多个质量控制测试相比，其将仅需要一次质量控制测试。重要的是，压片的培养基、培养基补充剂、培养基子组或缓冲剂制剂在批次之间更加一致，因为单独的组分更稳定。此外，压片的培养基、培养基补充剂、培养基子组或缓冲剂制剂可以容易地被分配以产生特定体积，而无需称量干燥组分。每个片剂都被重构为特定的体积。因此，根据需要扩大和制作非标准体积的培养基、培养基补充剂、培养基子组或缓冲剂是微不足道的。此外，片剂使重构期间的粉尘和处理最小化，这防止了暴露和潜在的污染。

本文所述的另一个实施例是一种用于生产压片形式的附聚的营养培养基粉末、附聚的培养基补充剂粉末、附聚的营养培养基子组粉末或附聚的缓冲剂粉末的方法，所述方法包括用包含至少一种溶解于其中的脂质的溶剂使营养培养基粉末、培养基补充剂粉末、营养培养基子组粉末或缓冲剂粉末附聚，所述溶剂递送所述至少一种脂质以用于并入到所述营养培养基粉末、培养基补充剂粉末、营养培养基子组粉末或缓冲剂粉末中。在一个方面中，附聚包括流化床附聚。然后将附聚的营养培养基粉末、培养基补充剂粉末、营养培养基子组粉末或缓冲剂粉末与润滑剂、填充剂、粘合剂或其组合中的一种或多种组合并压制成片剂。

本文所述的一个实施例是一种用于生产压片的细胞培养基、补料或补充剂组合物的方法，该方法包括：(a)制备细胞培养基、补料或补充剂粉末或附聚的粉末；(b)将培养基粉末或附聚的粉末与一种或多种润滑剂、填充剂、粘合剂或其组合结合；和(c)使用压片装置生产细胞培养基、补料或补充剂片剂。示例性的制造过程在图4中示出。示例性的制造过程在图4中示出。在一个实施例中，由于例如通过压片装置的个体化生产，可以控制片剂的形状、大小和重量。压片装置包括例如KORSH PH100旋转压片机等(参见实例)。

本文所述的压片的培养基、培养基补充剂、培养基子组、缓冲剂、细胞和含细胞的组合物理想地适用于试剂盒的制备。此类试剂盒可以包括一个或多个容器，如小瓶、试管、瓶子、包装、袋形物、桶等。每个容器可以包含本文所述的压片的细胞培养试剂、营养培养基、培养基补充剂、培养基子组、细胞或缓冲剂，或其组合中的一种或多种。此类压片的细胞培养试剂、营养培养基、培养基补充剂、培养基子组、缓冲剂或细胞可以是水合的或脱水的，但通常是通过本文所述的方法产生的脱水制剂。此类制剂可以是无菌的或基本上无菌的。

第一容器可以包含例如本文所述的压片的营养培养基、培养基补充剂、培养基子组或缓冲剂，或其任何组分或子组，如那些本文所述的本文所述的营养培养基、培养基补充剂、培养基子组或缓冲剂中的任何一种。另外的压片的、干燥或液体营养培养基、缓冲剂、提取物、补充剂、组分或子组可以被包含在本发明的试剂盒的另外的容器中。试剂盒还可以在一个或多个另外的容器中包含一种或多种细胞如细菌细胞、酵母细胞、植物细胞或动物细胞。此类细胞可以被冻干、干燥、冷冻或以其他方式保存，或者可以根据本文所述的方法喷雾干燥或者通过本文所述的方法处理。此外，本文所述的试剂盒可以进一步包含一个或多个另外的容器，所述容器包含例如L-谷氨酰胺，其任选地与一种或多种二价阳离子络合。试剂盒可以进一步包含一个或多个另外的容器，所述容器包含待用于重构干粉药物或临床组合物、细胞培养试剂、营养培养基、培养基补充剂、培养基子组和/或缓冲剂的溶剂；此类溶剂可以是水性的或有机的并且包括缓冲溶液、盐水溶液、营养培养基溶液、营养培养基补充剂溶液，包括血清如牛血清、胎牛血清、小牛血清、人血清或其组合。与本文所述的营养培养基、缓冲剂、药物组合物、提取物、补充剂、组分或子组的混合不相容的其他成分可以被包含在一个或多个另外的容器中以避免不相容组分的混合。示例性的试剂盒可以包括容器，所述容器包含用于重构的培养基片剂，其任选地具有足以容纳重构溶剂的体积、用于重构的说明书和用于接近片剂的装置，如撕条或用于引入重构溶剂的端口。

在给定的试剂盒中包含的容器的数量和类型(例如，用于制备营养培养基、培养基补充剂、培养基子组或缓冲剂)可以根据所需产品或待制备的药物或临床组合物、培养基、培养基补充剂、培养基子组或缓冲剂的类型而变化。通常，试剂盒将包含相应的容器，所述容器包含制备特定药物或临床组合物、培养基、培养基补充剂、培养基子组或缓冲剂所必需的组分或补充剂。然而，在本文所述的试剂盒中可以包括另外的容器，使得可以通过混合不同量的多种组分、补充剂、子组、缓冲剂、溶剂等来制备不同的药物或临床组合物、培养基、培养基补充剂、培养基子组或缓冲剂，以制备不同的药物或临床组合物、培养基、培养基补充剂、培养基子组或缓冲剂制剂。

对于相关领域的普通技术人员而言将显而易见的是，在不脱离任何实施例或其方面的范围的情况下，可以对本文所述的组合物、制剂、方法、工艺和应用进行适当的修改和调整。所提供的组合物、方法和实验是示例性的并且不旨在限制特定实施例中的任何一个的范围。本文公开的所有各种实施例、方面和选项可以以任何变化或迭代方式组合。本文所述的组合物、制剂、方法和工艺的范围包括本文所述的实施例、方面、选项、实例和优选的所有实际或潜在组合。本文所述的示例性组合物和制剂可以省略任何组分，替代本文公开的任何组分，或包括本文其他地方公开的任何组分。本文公开的任何组合物或制剂的任何组分的质量与制剂中任何其他组分的质量或与制剂中其他组分的总质量的比率在此被公开，就好像它们被明确公开一样。如果通过引用并入的任何专利或出版物中的任何术语的含义与本公开中使用的术语的含义相冲突，则以本公开中的术语或短语的含义为准。本文引用的所有专利和出版物均通过引用并入本文以用于其具体教导。

实例

实例1

评估了典型的CHO培养基CHO CD EFFICIENTFEED B AGT营养补充剂(GIBCO)被压制成片剂的能力。对培养基的材料性质进行了分析。参见表3。通过将500g的培养基装入手动2工位Carver压片机来生产片剂。片剂具有2.5–2.6g的质量并且具有16mm(5/8英寸)直径x 9.9mm。参见图1A。片剂崩解是使用标准粉末崩解装置进行的，该装置使用缓慢上升/下降搅拌。参见图1B。将片剂以每926mL的水50g(20个片剂)的比率加入水中。培养基与水的比例是标准CHO CD EFFICIENTFEED B AGT营养补充剂的推荐溶出速率。在25℃下，20个片剂在约22-23分钟内崩解(n＝3次实验)。

实例2

评估了使用片剂润滑剂硬脂酸镁的效果。使用CHO CD EFFICIENTFEED B AGT营养补充剂(GIBCO)培养基和不同量的按质量计1％至5％的硬脂酸镁进行了四项具体试验。

对于每种制剂，将不同量的粒状培养基与作为润滑剂的过筛的硬脂酸镁混合，以在500g总质量中达到所需的质量百分比。参见表4。将混合的培养基润滑剂混合物在KorschPH 100压片机(16.0mm模具)上压制成片剂(n＝3)，以便实现最大片剂重量、最佳硬度和厚度。

含有1质量％硬脂酸镁的混合的培养基润滑剂混合物在压缩时粘在下冲头和片剂模具壁上。含有≥2质量％硬脂酸镁的培养基混合物不会粘在压片机上。

使用常规螺旋桨混合器和室温约25℃的水以每926mL的水50g(20个片剂)的比率分析培养基片剂的崩解情况。参见表5。培养基与水的比例是标准CHO CD EFFICIENTFEEDBAGT营养补充剂的推荐溶出速率。

实例3

使用分批进料的60mL摇瓶来评估培养基片剂的细胞生长和免疫球蛋白生产率。将CHO DG44 LH细胞在CD OPTICHO(GIBCO)中培养至少3代。培养物补充有葡萄糖(阴性对照)、CHO CD EFFICIENTFEED B AGT(GIBCO)(阳性对照)或含有2质量％或5质量％硬脂酸镁的CHO CD EFFICIENTFEED B AGT片剂(“片剂补料”)。将片剂以每926mL的水50g(20个片剂)的速率在水中重构，通过0.1μm过滤器过滤，并且在无需进一步操作的情况下使用。片剂重构速率与CD EFFICIENTFEED B AGT的制备相当。每2天取样一次，持续12天时间，以监测细胞活力和IgG产生。补充有片剂补料的细胞培养物示出与补充有CHO CD EFFICIENTFEED BAGT(即非压片的补料；阳性对照)的细胞培养物相当的活细胞计数(例如，约14×10⁶个细胞/毫升)。与补充有CHO CD EFFICIENTFEED B AGT的细胞培养物相比，仅含有葡萄糖的未补充的细胞培养物示出较低的活细胞计数约10×10⁶个细胞/毫升(阴性对照)。参见图2A-2B。

该补充有片剂补料的细胞培养物示出与补充有CHO CD EFFICIENTFEED B AGT(即非压片的补料；阳性对照)的细胞培养物相当的IgG产量(约230μg/mL)。与补充有CHO CDEFFICIENTFEED B AGT的细胞培养物相比，仅含有葡萄糖的未补充的细胞培养物示出较低的IgG产量(约115μg/mL)。参见图3A-3B。

实例4

进行了一项DOE研究，以鉴定一种制剂，该制剂将使用Korsch PH 100压片机生产用于B型和D型工装的优质片剂。每个试验都是通过手动混合活性颗粒CHO CD EFFICIENTBAGT和赋形剂进行的。然后使用Carver压机(单个工位)手动将混合物压制成片剂。然后评估片剂的质量、厚度、硬度、脆度和崩解时间。在烧杯和螺旋桨混合器中使用约900mL的水(温度为25℃–30℃)进行崩解测试。脆度使用1个片剂在脆度鼓中下落100次进行(以25rpm进行4分钟)。

表6总结了由使用CHO CD EFFICIENTFEED B AGT片剂进行的Carver压片机(手动压片机，单个工位)实验设计(DOE)研究产生的物理数据。

表7总结了基于使用CHO CD EFFICIENTFEED B AGT片剂进行的DOE研究由在KORSHPH100旋转式压片机上的小规模试验产生的物理数据。

这些在KORSH PH100旋转式压片机上使用“B”型(16.0mm)和“D”型(22.0mm)模具的小规模压缩试验确定了片剂的关键质量属性，然后在KORSH PH100旋转式压片机上进行更大批量的生产。

实例5

干形式细胞培养基补料的放大片剂压缩

表8总结了使用高速KORSH PH100旋转式压片机制造的大规模批次的16.0mm和22.0mm片剂的组成。

选择两种不同批次大小18.0kg和35.95kg分别用于混合和压制2.4g和3.7g片剂。作为扩大规模的一部分，完成了以下批次。所有批次都是根据在对CHO CD EFFICIENTFEEDBAGT的小规模实验室试验期间建立的预定规格制造的；16.0mm(2.4g)和22.0mm(3.7g)。一般过程描述在图4中示出并在下面描述。

筛选

崩解剂交联羧甲基纤维素钠(AC-DI-SOL)使用#30目不锈钢筛网进行筛选。接下来，使用#30目不锈钢筛网筛选润滑剂硬脂酸镁。

混合

将大约一半的CD CHO EFFICIENTFEED B AGT原材料装入固定速度的PK 5ft3 V型混合机(24rpm)中，然后装入经筛选的交联羧甲基纤维素钠(AC-DI-SOL)。将剩余量的CHOCD EFFICIENTFEED B AGT原材料添加到混合机中并混合持续十(10)分钟。然后将筛选的硬脂酸镁添加到混合机中并混合持续三(3)分钟以产生最终混合物。

压缩

然后在六(6)台Korsh PH100旋转式压片机中压制最终的混合物。

表9总结了在使用高速KORSH PH100旋转式压片机大规模批量生产制备的16.0mm和22.0mm片剂期间产生的起始粉末和片剂的量。

表10总结了16mm(2.4g)片剂和22.0mm(3.7g)片剂的物理参数。

表10. 16mm(2.4g)片剂和22.0mm(3.7g)片剂的制造和物理参数

图5A、5B和5C分别示出了表9批次22中所示的16.0mm(2.4g)片剂的片剂重量、厚度和硬度。

图6A、6B和6C分别示出了表9批次21中所示的22.0mm(3.7g)片剂的片剂重量、厚度和硬度。

Claims (42)

1.一种包含细胞培养基、补料或补充剂的压片的组合物，所述压片的组合物包含：

氨基酸、盐、缓冲剂、微量矿物质、维生素、碳水化合物、脂质、核酸、蛋白质；和

润滑剂、填充剂、粘合剂或其组合。

2.根据权利要求1所述的组合物，其中所述压片的组合物于25℃的水中在约10-30分钟内溶解。

3.根据权利要求1所述的组合物，其中所述组合物包含：

95-99质量％的氨基酸、盐、缓冲剂、微量矿物质、维生素、碳水化合物、脂质、核酸、蛋白质；和

1-5质量％的包含硬脂酸镁的润滑剂。

4.根据权利要求1所述的组合物，其中所述组合物包含：

90–99质量％的氨基酸、盐、缓冲剂、微量矿物质、维生素、碳水化合物、脂质、核酸、蛋白质；和

1-5质量％的包含交联羧甲基纤维素钠的崩解剂；和

1-5质量％的包含硬脂酸镁的润滑剂。

5.一种包含压片的细胞培养基、补料或补充剂组合物的组合物，其包含：

培养基组分，所述培养基组分包含：

20-65质量％的碳水化合物；

20-40质量％的氨基酸；

2-10质量％的无机盐或缓冲剂；

1-5质量％的维生素；

0.01–0.05质量％的微量矿物质；和

压片组分，所述压片组分包含：

1-10质量％的润滑剂、填充剂、粘合剂或其组合。

6.根据权利要求5所述的组合物，其中所述组合物包含：

(a)20-65质量％的单糖或二糖，包括葡萄糖、果糖、乳糖、海藻糖、麦芽糖或蔗糖；

(b)20–40质量％的氨基酸，包括丙氨酸、精氨酸、天冬氨酸、谷氨酸、甘氨酸、组氨酸、异亮氨酸、蛋氨酸、苯丙氨酸、脯氨酸、羟脯氨酸、丝氨酸、苏氨酸、色氨酸、缬氨酸、酪氨酸、半胱氨酸、赖氨酸及其盐，或其组合；

(c)2-10质量％的钠盐、钾盐、镁盐、钙盐、铵盐、磷酸盐、碳酸盐、硫酸盐或其组合；

(d)1-5质量％的维生素，包括视黄醇(A)、硫胺素(B1)、核黄素(B2)、烟酰胺(B3)、泛酸(B5)、吡哆胺(B6)、生物素(B7)、叶酸(B9)钴胺素(B12)、抗坏血酸(C)、胆钙化醇(D)、生育酚(E)、叶绿醌(K)、胆碱、肌醇、硫辛酸、对氨基苯甲酸、其盐或其组合；

(e)0.01-0.05质量％的微量元素，包括铁、锰、铜、碘、锌、钴、氟化物、铬、钼、硒、镍、硅、钒、其盐或其组合；

(f)1-5质量％的硬脂酸镁；和

(g)1-5质量％的交联羧甲基纤维素钠。

7.根据权利要求5所述的组合物，其中所述培养基组分包括附聚的干粉。

8.根据权利要求5至7中任一项所述的组合物，其中所述压片的培养基于25℃的水中在约10-30分钟内溶解。

9.根据权利要求5至8中任一项所述的组合物，其中，所述压片的培养基具有约18-22kp的硬度。

10.根据权利要求5至9中任一项所述的组合物，其中，所述压片的培养基具有约2.0至5.0g的质量。

11.根据权利要求5至10中任一项所述的组合物，其中，所述压片的培养基在用水重构时表现出与类似的非压片的培养基相当的细胞活力水平和表达的蛋白质水平。

12.一种用于生产压片的细胞培养基、补料或补充剂组合物的方法，所述方法包括：

(a)制备细胞培养基、补料或补充剂粉末或附聚的粉末；

(b)将所述培养基粉末或附聚的粉末与一种或多种润滑剂、填充剂、粘合剂或其组合结合；和

(c)使用压片装置生产细胞培养基、补料或补充剂片剂。

13.根据权利要求12所述的方法，其中所述细胞培养基、补料或补充剂是通过流化床附聚产生的附聚的粉末。

14.根据权利要求12或13所述的方法，其中将所述细胞培养基、补料或补充剂粉末或附聚的粉末与润滑剂组合。

15.根据权利要求12至14中任一项所述的方法，其中所述压片的组合物包含95-99质量％的细胞培养基、补料或补充剂粉末或附聚的粉末和1-5质量％的一种或多种润滑剂。

16.根据权利要求12至15中任一项所述的方法，其中所述润滑剂包括硬脂酸镁。

17.根据权利要求12至14所述的方法，其中将所述细胞培养基、补料或补充剂粉末或附聚的粉末与润滑剂和崩解剂组合。

18.根据权利要求12至14或17中任一项所述的方法，其中，所述压片的组合物包含95-99质量％的细胞培养基、补料或补充剂粉末或附聚的粉末；1-5质量％的一种或多种润滑剂；和1-5质量％的一种或多种崩解剂。

19.根据权利要求12至14或17至18中任一项所述的方法，其中，所述润滑剂包括硬脂酸镁并且所述崩解剂包括交联羧甲基纤维素钠。

20.根据权利要求12至19中任一项所述的方法，其中所述片剂具有2.0至5.0g的质量。

21.根据权利要求12至20中任一项所述的方法，其中，所述片剂具有18-22kp的硬度。

22.根据权利要求12至21中任一项所述的方法，其中所述片剂于25℃的水中在10-30分钟内溶解。

23.一种通过根据权利要求12至22中任一项所述的方法生产的压片的细胞培养基、补料或补充剂。

24.根据权利要求23所述的压片的细胞培养基、补料或补充剂，其中所述片剂包含：

培养基组分，所述培养基组分包含：

20-65质量％的碳水化合物；

20-40质量％的氨基酸；

2-10质量％的无机盐或缓冲剂；

1-5质量％的维生素；

0.01–0.05质量％的微量矿物质；和

压片组分，所述压片组分包含：

1-10质量％的润滑剂、填充剂、粘合剂或其组合。

25.根据权利要求24所述的压片的细胞培养基、补料或补充剂，其中所述片剂包含95-99质量％的细胞培养基、补料或补充剂；和1-5质量％的一种或多种润滑剂。

26.根据权利要求24所述的压片的细胞培养基、补料或补充剂，其中所述片剂包含90-99质量％的细胞培养基、补料或补充剂；1-5质量％的包含交联羧甲基纤维素钠的崩解剂；和1-5质量％的包含硬脂酸镁的润滑剂。

27.根据权利要求23至26中任一项所述的压片的细胞培养基、补料或补充剂，其中所述片剂具有2.0g至5.0g的质量。

28.根据权利要求23至27中任一项所述的压片的细胞培养基、补料或补充剂，其中所述片剂具有18-22kp的硬度。

29.根据权利要求23至28中任一项所述的压片的细胞培养基、补料或补充剂，其中所述片剂于25℃的水中在10-30分钟内溶解。

30.一种试剂盒，所述试剂盒包括：包装，所述包装包含细胞培养基、补料、补充剂或缓冲剂的一个或多个片剂；稀释剂；适用于重构细胞培养基、补料、补充剂或缓冲剂的一个或多个一个或多个片剂的容器；和使用说明。

31.一种用于由压片的细胞培养基、补料、补充剂或缓冲剂组合物制备细胞培养基、补料、补充剂或缓冲剂的方法，所述方法包括：

(a)将细胞培养基、补料、补充剂或缓冲剂的一个或多个片剂与水组合直到溶解；

(b)任选地，添加包括氨基酸、抗生素、血清或其他细胞培养基补充剂的任何补充剂；和

(c)任选地，对重构的细胞培养基、补料、补充剂或缓冲剂进行灭菌。

32.根据权利要求31所述的方法，其中所述灭菌包括过滤或γ辐射。

33.根据权利要求31或32所述的方法，其中所述片剂于25℃的水中在约10-30分钟内溶解。

34.一种通过根据权利要求31至33中任一项所述的方法制备的细胞培养基、补料、补充剂或缓冲剂。

35.一种系统，其包括细胞和根据权利要求34所述的细胞培养基、补料、补充剂或缓冲剂。

36.一种在由压片的细胞培养基重构的液体中培养细胞的方法，所述方法包括：

在合适的液体或缓冲剂中重构压片的细胞培养基、补料或补充剂；和

在有利于生长的条件下在重构的培养基中培养所述细胞。

37.一种用于优化细胞培养基组分的浓度的方法，所述方法包括：

测量细胞培养物中一种或多种培养基组分的浓度；

确定所述一种或多种培养基组分是否在可接受的浓度范围内；

如果需要，用压片的细胞培养基组合物补充所述细胞培养物中的所述一种或多种培养基组分。

38.根据权利要求37所述的方法，其中所述测量包括选自HPLC、质谱法、ELISA或标准曲线测定的方法。

39.根据权利要求37所述的方法，其中所述补充包括将所述压片的培养基组合物直接添加到所述培养物中或将所述压片的培养基组合物溶解在溶剂中，然后将溶解的压片的培养基组合物添加到所述细胞培养物中。

40.压片的细胞培养基、补料或补充剂用于制备细胞培养基、补料或补充剂的用途。

41.一种压片的细胞培养基、补料或补充剂用于培养细胞的用途。

42.根据权利要求41所述的用途，其中用于培养的所述压片的细胞培养基、补料或补充剂被重构并且所述细胞在有利的生长条件下培养。

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