CN114540481A - 一种慢性疼痛治疗靶点及其应用 - Google Patents

Abstract

本发明涉及一种慢性疼痛治疗靶点，该治疗靶点为ALKBH5。本发明首次提出疼痛模型中特异性、差异性高表达的ALKBH5，并发现降低ALKBH5表达可显著缓解慢性疼痛，提示ALKBH5在慢性疼痛发生发展中起重大作用，为慢性疼痛药物研制以及预防和治疗提供了新的可能性。

Description

一种慢性疼痛治疗靶点及其应用

技术领域

本发明涉及生物医药技术领域，尤其涉及一种慢性疼痛治疗靶点及其应用。

背景技术

慢性疼痛(如三叉神经痛、坐骨神经痛、癌性疼痛、偏头痛等)是严重危害人类身心健康和生活质量的慢性疾病，被喻为“不死的癌症”，其反复疼痛发作、迁延难治的特征使患者长期遭受折磨，而且会诱发焦虑、抑郁和恐惧等恶性情绪或精神异常，甚至会引起个体产生自杀倾向，严重危害患者的生命及生活质量。

目前，关于慢性疼痛治疗药物的研究已非常广泛，如曹晓攀通过巴氯芬联合腺苷钴胺治疗三叉神经痛(巴氯芬联合腺苷钴胺治疗三叉神经痛的效果[J].中国现代医生,2021,59(6):42-44,48.)，吴昱等发现加巴喷丁治疗坐骨神经痛的疗效明显(加巴喷丁与卡马西平治疗坐骨神经痛的疗效比较[J].蛇志,2021,33(1):49-51.DOI:10.3969/j.issn.1001-5639.2021.01.014.)，梁军利等指出托吡酯联合文拉法辛治疗慢性偏头痛伴广泛性焦虑障碍可减少患者头痛发作天数，减轻偏头痛疼痛程度(托吡酯滴定联合文拉法辛治疗慢性偏头痛伴广泛性焦虑障碍的临床疗效及托吡酯有效剂量研究[J].中国全科医学,2021,24(2):243-247,252.DOI:10.12114/j.issn.1007-9572.2020.00.573.)。综上，在众多能缓解疼痛的制剂中，根据药理作用机制，主要可分为两类：非甾体抗炎镇痛药及阿片受体激动药。前者仅对轻中度疼痛有效，用药后容易出现胃出血等严重副作用；后者止痛效果强烈，但对慢性神经性痛疗效差，且患者长期使用后机体产生耐受及药物成瘾。因此，寻求新的安全有效的止痛药物，但又能避免严重副作用的新的制剂显得尤为迫切。

ALKBH5作为一类m6A RNA去甲基化酶，具有在细胞核中去除前体mRNA中的m6A功能，主要参与哺乳动物生殖系统发育与肿瘤发生。然而，ALKBH5是否在疼痛中具有作用，以及是否参与疼痛调节，目前仍未可知。

发明内容

为解决上述技术问题，本发明首次公开了在疼痛模型中特异性、差异性高表达的ALKBH5，并发现降低ALKBH5的表达可显著缓解慢性疼痛，因此其可作为慢性疼痛新的治疗靶点，为慢性疼痛的治疗以及临床辅助诊断技术提供了新的方向。

本发明的第一个目的是提供一种慢性疼痛治疗靶点，该治疗靶点为m6A RNA去甲基化酶(ALKBH5)。

本发明的第二个目的是公开ALKBH5抑制剂在制备慢性疼痛预防或治疗药物中的应用。

进一步地，上述ALKBH5抑制剂为小干扰RNA，该小干扰RNA靶向抑制ALKBH5的表达。

表观遗传学是组织炎症、损伤和疾病状态等不良因素刺激导致慢性疼痛形成的重要机制。RNA修饰在表观遗传学调控中扮演重要的角色，这些修饰包括m6A、m5C、m1A等，广泛存在于mRNA、tRNA、rRNA和其他非编码RNA上，可影响RNA的结构、输出和稳定性等，进而实现对基因表达、细胞分化及功能的调控，广泛参与机体的生理和病理过程，如胚胎发育、炎症和疼痛疾病。加强疼痛的RNA修饰调控等生物学机制研究，将不仅有助于发现临床疼痛治疗药物的有益靶标，并且对于提高人类生活质量和健康水平具有重大意义。本发明提供的小干扰RNA通过靶向抑制m6A RNA去甲基化酶ALKBH5表达及功能，缓解疼痛行为反应，可用于制备治疗以ALKBH5为靶点的三叉神经痛、神经病理性痛、偏头痛及恶性肿瘤的预防或治疗药物。

进一步地，小干扰RNA包含核苷酸序列GGAUCCUGGAAAUGGACAA。

进一步地，上述小干扰RNA的正义链包含如下核苷酸序列：5′-GGAUCCUGGAAAUGGACAA-3′；反义链包含如下核苷酸序列：5′-UUGUCCAUUUCCAGGAUCC-3′。

进一步地，小干扰RNA包含悬挂碱基TT，该悬挂碱基TT位于小干扰RNA的正义链和反义链的3′末端。

进一步地，小干扰RNA可采用胆固醇、磷酸化和巯基化中的至少一种进行修饰，以增加小干扰RNA的膜通透性。

进一步地，慢性疼痛为三叉神经痛、坐骨神经痛、癌性疼痛、偏头痛等。

本发明的第三个目的是提供一种预防或治疗慢性疼痛的药物，该药物以ALKBH5为靶点进行设计，降低ALKBH5的表达。

进一步地，上述药物由0.1-100％的小干扰RNA和99.9-0％的药用辅料组成；小干扰RNA包含核苷酸序列GGAUCCUGGAAAUGGACAA。

本发明的第四个目的是提供一种用于诊断慢性疼痛的试剂盒，该试剂盒包含用于检测ALKBH5表达量或分泌量的试剂。该试剂盒可用于诊断待测个体慢性疼痛的程度，或预测待测个体慢性疼痛的发病风险程度。

进一步地，该试剂盒中还包含扩增ALKBH5的引物对。

借由上述方案，本发明至少具有以下优点：

本发明首先通过高通量基因测序技术，发现TG组织中与RNA修饰相关、表达丰度高，且差异性表达的14个mRNA，采用实时定量PCR方法进行验证，首次发现了在疼痛模型中特异性、差异性高表达的ALKBH5。实时荧光定量PCR结果显示，注射可靶向抑制ALKBH5表达的物质可显著翻转慢性疼痛模型大鼠机械性痛敏反应。本发明发现ALKBH5高表达于慢性疼痛患者中，是独立的不利因素，因此ALKBH5可作为慢性疼痛相关的生物标志物，在慢性疼痛的预防、治疗、药物筛选等方面具有巨大的潜力。

上述说明仅是本发明技术方案的概述，为了能够更清楚了解本发明的技术手段，并可依照说明书的内容予以实施，以下以本发明的较佳实施例并配合详细附图说明如后。

附图说明

为了使本发明的内容更容易被清楚的理解，下面根据本发明的具体实施例并结合附图，对本发明作进一步详细的说明。

图1为眶下神经慢性压迫性损伤(CCI-ION)模型大鼠的疼痛阈值情况及差异性表达情况；其中，A为眶下神经慢性压迫性损伤(CCI-ION)模型大鼠机械性痛阈值图；B为高通量测序结果显示CCI-ION模型大鼠TG组织差异性高表达的mRNAs；

图2为CCI-ION模型大鼠TG组织ALKBH5表达情况；其中，A为荧光定量PCR检测CCI-ION模型大鼠TG组织ALKBH5基因表达变化情况；B为蛋白电泳检测CCI-ION模型大鼠TG组织ALKBH5蛋白表达变化情况；

图3为TG内定位注射siRNA干扰序列可有效降低CCI-ION模型大鼠TG组织ALKBH5的蛋白表达水平；

图4为动物行为学检测显示TG定位注射siRNA干扰序列显著翻转CCI-ION模型大鼠机械性痛敏反应；

图5为正常大鼠TG定位注射慢病毒过表达ALKBH5基因后的变化情况；其中，A为正常大鼠TG内定位注射慢病毒过表达ALKBH5基因后ALKBH5蛋白水平；B为正常大鼠TG定位注射慢病毒过表达ALKBH5基因后其机械痛阈值情况；

图6为SNI模型大鼠的疼痛阈值及鞘内注射siRNA干扰序列后的痛敏反应情况；其中，A为SNI模型大鼠机械性痛阈值图；B动物行为学检测显示鞘内注射siRNA干扰序列显著翻转SNI模型大鼠机械性痛敏反应。

具体实施方式

下面结合附图和具体实施例对本发明作进一步说明，以使本领域的技术人员可以更好地理解本发明并能予以实施，但所举实施例不作为对本发明的限定。

实施例1高通量测序结果显示CCI-ION模型大鼠TG组织差异性高表达的mRNAs

(1)眶下神经慢性压迫性损伤(CCI-ION)模型及机械痛阈值测定

成年雄性健康的Sprague-Dawley大鼠，体重180–250克，由苏州大学实验动物中心提供。动物中心的卫生级核定文件编号：SYXK(苏)2007-0035。

建立模型：采用4％水合氯醛按照1毫升/100克的剂量以腹腔注射方式对大鼠进行麻醉，大鼠仰卧位固定在手术台上，于左上颌第一磨牙水平用无菌刀片划开，采用钝性弯曲的玻璃棒小心分离周围组织，直至暴露眶下神经。在其两端分别用5-0丝线进行结扎，间距为2毫米，力度不宜过大。手术结束后，用棉球擦拭血迹并涂抹青霉素钠防止感染。假手术组只需按上述方法钝性分离眶下神经，无需结扎。

用von Frey细丝(Stoelting公司，型号NC12775)刺激大鼠须垫部，直至大鼠出现逃避行为视为阳性反应。从1克开始，连续刺激大鼠须垫部5次，若有三次出现阳性反应，则给予小一级的机械刺激；若未能出现阳性反应，则给予大一级的机械刺激。设定15克为最大的机械刺激强度，并且在双盲的条件下进行，将实验动物出现阳性反应的最小强度视为大鼠的机械痛阈值。最终痛阈值计算公式为：50％阈值(克)＝(10^[Xf+Kδ])/10000。

(2)高通量测序

大鼠麻醉后断头置于冰上，暴露其TG，利用无菌手术刀及显微解剖镊取手术侧TG，尽量去除其纤维连接，立即置于1.5毫升灭菌离心管中，装在干冰中运输至公司。经过RNA提取、样品检测、文库构建、库检和上机测序，最后进行生物信息分析，筛选CCI-ION模型大鼠TG组织差异性表达的mRNAs。测序过程由上海欧易公司完成。

如图1A所示，取SD大鼠12只，分为2组，每组6只。第一组为假手术组，第二组为CCI-ION模型组。与假手术组相比，CCI-ION模型组大鼠从14天开始须垫部机械痛阈值显著降低，并可持续至28天(***p<0.001vs.假手术组，N＝6)。如图1B所示，选取假手术组及CCI-ION模型组第14天大鼠各3只，TG进行高通量测序，筛选出CCI-ION模型组大鼠TG组织表达丰度高、与RNA修饰相关、差异性表达的mRNAs共14个。荧光定量PCR结果显示，相对于假手术组大鼠，CCI-ION模型组大鼠TG组织差异性表达的5个mRNAs中ALKBH5升高最为显著(*p<0.05vs.假手术组，n＝3)。

实施例2荧光定量PCR检测CCI-ION模型大鼠TG组织ALKBH5蛋白表达显著升高

(1)眶下神经慢性压迫性损伤(CCI-ION)模型的建立(同实施例1)。

(2)RNA提取及实时荧光定量PCR

使用灭菌器械提取大鼠TG置于1.5毫升灭菌离心管中，加入1毫升Trizol，将组织破碎为匀浆，置于冰上静置30分钟。加入100微升三氯甲烷，于离心机中4度、12000转/分钟离心20分钟。将上层水相吸到新的离心管，加入等体积的异丙醇后置于冰箱-20度中静置20分钟。于离心机中4度，12000转/分钟离心15分钟，弃上清液，加入75％乙醇洗涤沉淀。4度，7500转/分钟离心5分钟，弃掉上清液，加入20微升DEPC水溶解沉淀。最后使用NanoDrop2000测量RNA浓度。实时荧光定量PCR中，使用5×PrimeScript RT Master Mix将所提取的RNA逆转录成cDNA。ALKBH5基因的前引物序列：CCACATTGCCACCCAGCTAT；后引物序列：GGACTCATAGGACTTGCGCC；GAPDH前引物序列：GCTGAGTATGTCGTGGAGT；后引物序列：CAGTCTTCTGAGTGGCAGTG，引物由锐博生物公司合成。Trizol购自Takara，逆转录试剂盒购自Takara，SYBR荧光染料购自Bimake。

蛋白提取及蛋白电泳：大鼠麻醉，取TG，EP管内加入适量PBS洗净组织上残留血液，然后加入蛋白酶抑制(1:100)和PMSF(终浓度1mM)，按照100ul/10mg加入RIPA裂解液。超声破碎，组织匀浆。4℃，12,000rpm，离心30min。吸取上清液，用双蒸水按照浓度为0、50、100、250、500、1000和2000μg/ml稀释标准蛋白。按照A液：B液＝50:1的比例配置BCA工作液，充分混匀置于室温备用。酶标仪测定标准蛋白样品与待测蛋白样品的吸光度。根据标准曲线计算蛋白样品浓度。按比例加入6×loading buffer、双蒸水和DTT配置成蛋白上样液，变性5min，置于-30℃备用。蛋白电泳配制10％分离胶，5％浓缩胶。样品加入5μl合适的marker与20μl蛋白样品，电转，封闭后孵育一抗ALKBH5(1:1000，兔抗，Abcam)及GAPDH(1:1000，Abcam)，4℃孵育过夜。孵育羊抗兔二抗(1:5000，Abcam)，显影后，软件分析图像，得出数据并处理。

如图2A所示，选取假手术组及CCI-ION模型组大鼠各4只，分别提取假手术组、CCI-ION模型7天、14天、21天及28天大鼠TG组织RNA。荧光定量PCR检测结果显示，与假手术组相比，CCI-ION模型组14天后大鼠TG中ALKBH5 mRNA表达显著升高，且可持续至术后第28天(**p<0.01，***p<0.001vs.假手术组,n＝4)。如图2B所示，选取假手术组及CCI-ION模型组大鼠各3只，分别提取假手术组及CCI-ION模型组，0天、7天、14天、21天及28天大鼠TG组织蛋白。蛋白电泳结果显示，与假手术组相比，CCI-ION模型组14天后大鼠TG中ALKBH5蛋白表达显著升高，且可持续至术后第28天(*p<0.05vs.假手术组,n＝3)。

实施例3siRNA干扰序列可有效降低CCI-ION模型大鼠TG中ALKBH5表达

(1)蛋白提取(同实施例2)。

(2)蛋白电泳(同实施例2)。

(3)大鼠TG立体定位注射siRNA干扰序列：将大鼠麻醉后固定于脑立体定位仪上，手术刀划开头皮，H₂O₂腐蚀组织，暴露冠状缝与矢状缝。以二者交点即前囟点为原点定位：前囟点向后3毫米，中线向左3毫米，颅骨表面以下11.7毫米。注射ALKBH5 siRNA以及对照siRNA(购自吉玛基因)，注射终浓度为50微摩尔/升，每只大鼠注射3微升，5分钟注射完，留针10分钟。

如图3所示，大鼠28只，分为4组，每组7只。第一组假手术组大鼠；第二组为CCI-ION模型组大鼠，定位注射生理盐水；第三组为CCI-ION模型组大鼠，TG定位注射阴性对照siRNA，第四组为CCI-ION模型组大鼠，TG定位注射ALKBH5的siRNA干扰序列(GGAUCCUGGAAAUGGACAA)(Pubmed Blast结果显示siRNA序列具有特异性，由锐博生物公司化学合成，并经胆固醇修饰以增加膜通透性)。连续注射两天，分别取假手术组、CCI-ION模型组第14天、CCI-ION模型组+注射对照siRNA和CCI-ION模型组+注射ALKBH5 siRNA 3天后的大鼠TG组织，进行蛋白电泳检测。与对照组相比，siRNA注射3天后大鼠TG中ALKBH5表达显著降低(*p<0.05vs.假手术组，^#p<0.05vs.CCI-ION模型组+注射对照siRNA)。以上结果表明，siRNA干扰序列(GGAUCCUGGAAAUGGACAA)能有效降低CCI-ION模型大鼠TG组织中ALKBH5表达。

实施例4行为学检测显示TG定位注射siRNA干扰序列显著翻转CCI-ION模型大鼠痛敏

(1)眶下神经慢性压迫性损伤(CCI-ION)模型的建立(同实施例1)。

(2)大鼠须垫部机械痛阈值测定(同实施例1)。

(3)大鼠TG立体定位注射siRNA干扰序列(同实施例3)。

如图4所示，取正常SD大鼠28只，分为4组，每组7只。第一组为假手术组+注射对照siRNA。第二组为假手术组+注射ALKBH5 siRNA；第三组为CCI-ION模型组+注射对照siRNA，第四组为CCI-ION模型组+注射ALKBH5 siRNA(序列同实施例3)。如图4所示，CCI-ION模型组大鼠注射siRNA后第3天，大鼠机械痛阈值显著回升，并可以持续至注射后第7天(***p<0.001vs.假手术组，^###p<0.001vs.CCI-ION模型组+注射对照siRNA)。表明TG内定位注射siRNA干扰序列(GGAUCCUGGAAAUGGACAA)可以显著缓解CCI-ION模型诱导的大鼠疼痛行为反应，该siRNA具有明显的镇痛作用。

实施例5正常大鼠TG定位注射慢病毒过表达ALKBH5后，其机械痛阈值显著降低

(1)大鼠须垫部机械痛阈值测定(同实施例1)。

(2)正常大鼠TG立体定位注射ALKBH5过表达慢病毒(lenti-ALKBH5过表达组)以及对照组(lenti-ALKBH5对照组，购自吉玛基因)，病毒滴度为1×10⁸TU，每只大鼠注射3微升，5分钟注射完，留针10分钟。

如图5A所示，大鼠各组8只，分别提取TG组织。正常大鼠TG立体定位注射lenti-ALKBH5过表达慢病毒(lenti-ALKBH5过表达组)后，ALKBH5表达显著升高。如图5B所示，取正常SD大鼠24只，分为3组，每组8只。第一组为正常大鼠TG定位注射生理盐水，第二组为大鼠TG定位注射ALKBH5的慢病毒空载体(lenti-ALKBH5对照组)，第三组为大鼠TG定位注射过表达ALKBH5的慢病毒(lenti-ALKBH5过表达组)。结果显示，lenti-ALKBH5过表达组大鼠机械痛阈值显著降低(第3天)，到第7天达到最低，可维持至第14天(***p<0.001vs.lenti-ALKBH5对照组)。以上结果表明，siRNA干扰序列(GGAUCCUGGAAAUGGACAA)对三叉神经痛的镇痛作用是通过特异性靶向抑制ALKBH5而实现的。

实施例6行为学检测显示鞘内注射siRNA干扰序列显著翻转SNI坐骨神经痛模型大鼠痛敏

(1)大鼠SNI模型的建立

采用常用、经典的坐骨神经分支(胫腓总神经)选择性损伤，建立坐骨神经痛大鼠模型(spared nerve injury,SNI)。坐骨神经通过股二头肌切开暴露。然后用5.0丝线结扎胫腓总神经，同时切断。手术结束时，用5.0丝线将肌肉和皮肤分成两层缝合，然后在伤口上涂抹利多卡因凝胶。对于假手术，以上述相同方式暴露坐骨神经，不结扎和切断神经。使用von Frey纤维丝(Ugo Basile)刺激足拓部，每次刺激持续时间为1–2秒。出现阳性反应的最小强度计作机械缩爪阈值(PWT)。

(2)ALKBH5 siRNA对SNI模型大鼠的疼痛行为学的影响

SNI对大鼠机械痛阈值的影响：大鼠16只，分成二组，每组8只。第一组为假手术组，第二组为SNI模型组。分别各组不同时间点的机械痛阈值。如图6A所示，SNI模型组第3天的缩爪机械痛阈值显著降低，并可持续至少10天(***p<0.001vs.假手术组；双因素方差分析)。而假手术组的缩爪机械痛阈值没有明显变化。可知，SNI显著降低大鼠的缩爪机械痛阈值。如图6B所示，取正常SD大鼠24只，分为4组，每组6只。第一组为假手术组+注射对照siRNA。第二组为假手术组+注射ALKBH5 siRNA；第三组为SNI模型组+注射对照siRNA，第四组为SNI模型组+注射ALKBH5 siRNA。SNI模型组大鼠注射siRNA后第3天，大鼠机械痛阈值显著回升，并可以持续至注射后第7天(***p<0.001vs.假手术组，###p<0.001vs.CCI-ION模型组+注射对照siRNA)。表明鞘内注射siRNA干扰序列(GGAUCCUGGAAAUGGACAA)可以显著缓解SNI模型诱导的大鼠疼痛行为反应，该siRNA具有明显的镇痛作用。

本发明通过高通量测序方法，在实施例1及实施例2中，研究了CCI-ION模型大鼠TG组织中ALKBH5表达发生了显著变化，发现ALKBH5在大鼠TG组织中表达，且CCI-ION造模后其表达水平明显升高。并在实施例3中，研究了siRNA干扰序列(GGAUCCUGGAAAUGGACAA)对大鼠TG中ALKBH5表达的影响，发现了siRNA干扰序列可靶向抑制大鼠TG中ALKBH5的表达。

本发明通过动物学实验，在实施例4及实施例5中，研究了siRNA干扰序列对CCI-ION诱导的三叉神经痛模型大鼠机械痛阈值的影响，发现三叉定位注射siRNA干扰序列可以缓解CCI-ION诱导的大鼠疼痛行为反应，具有镇痛作用。此外，研究了ALKBH5过表达慢病毒对大鼠须垫部痛阈值的改变，发现三叉定位注射lenti-ALKBH5可诱导的大鼠疼痛行为反应，进一步证实了ALKBH5是重要的分子靶点。在实施例6中，研究了siRNA干扰序列对SNI诱导的坐骨神经痛模型大鼠机械痛阈值的影响，发现鞘内注射siRNA干扰序列可以缓解SNI诱导的大鼠疼痛行为反应，具有镇痛作用。

本发明发现了siRNA干扰序列可通过靶向抑制ALKBH5的表达，显著翻转CCI-ION模型及SNI模型大鼠机械性痛敏反应，具有明显的镇痛作用。因此，该siRNA干扰序列还可应用在制备用于治疗和/或预防以ALKBH5为靶点的疾病药物中，如三叉神经痛、坐骨神经痛、偏头痛及癌性疼痛等。

显然，上述实施例仅仅是为清楚地说明所作的举例，并非对实施方式的限定。对于所属领域的普通技术人员来说，在上述说明的基础上还可以做出其它不同形式变化或变动。这里无需也无法对所有的实施方式予以穷举。而由此所引申出的显而易见的变化或变动仍处于本发明创造的保护范围之中。

序列表

<110> 苏州大学

<120> 一种慢性疼痛治疗靶点及其应用

<160> 6

<170> SIPOSequenceListing 1.0

<210> 2

<211> 19

<212> RNA

<213> （人工序列）

<400> 2

ggauccugga aauggacaa 19

<210> 2

<211> 19

<212> RNA

<213> （人工序列）

<400> 2

uuguccauuu ccaggaucc 19

<210> 3

<211> 20

<212> DNA

<213> （人工序列）

<400> 3

ccacattgcc acccagctat 20

<210> 4

<211> 20

<212> DNA

<213> （人工序列）

<400> 4

ggactcatag gacttgcgcc 20

<210> 5

<211> 19

<212> DNA

<213> （人工序列）

<400> 5

gctgagtatg tcgtggagt 19

<210> 6

<211> 20

<212> DNA

<213> （人工序列）

<400> 6

cagtcttctg agtggcagtg 20

Claims (10)

1.一种慢性疼痛治疗靶点，其特征在于：所述慢性疼痛治疗靶点为ALKBH5。

2.ALKBH5抑制剂在制备慢性疼痛预防或治疗药物中的应用。

3.根据权利要求2所述的应用，其特征在于：所述ALKBH5抑制剂为小干扰RNA，所述小干扰RNA靶向抑制ALKBH5的表达。

4.根据权利要求3所述的应用，其特征在于：所述小干扰RNA包含核苷酸序列GGAUCCUGGAAAUGGACAA。

5.根据权利要求3所述的应用，其特征在于：所述小干扰RNA的正义链包含如下核苷酸序列：5′-GGAUCCUGGAAAUGGACAA-3′；所述小干扰RNA的反义链包含如下核苷酸序列：5′-UUGUCCAUUUCCAGGAUCC-3′。

6.根据权利要求3所述的应用，其特征在于：所述小干扰RNA包含悬挂碱基TT；所述悬挂碱基TT位于小干扰RNA的正义链和反义链的3′末端。

7.根据权利要求3所述的应用，其特征在于：所述小干扰RNA采用胆固醇、磷酸化和巯基化中的至少一种方式进行修饰。

8.一种预防或治疗慢性疼痛的药物，其特征在于：所述药物以ALKBH5为靶点进行设计，降低ALKBH5的表达。

9.根据权利要求8所述的药物，其特征在于：所述药物由0.1-100％的小干扰RNA和99.9-0％的药用辅料组成；所述小干扰RNA包含核苷酸序列GGAUCCUGGAAAUGGACAA。

10.一种用于诊断慢性疼痛的试剂盒，其特征在于：所述试剂盒包含用于检测ALKBH5表达量或分泌量的试剂。

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