CN114503955A - 一种非酒精性脂肪肝动物模型及建立方法 - Google Patents
一种非酒精性脂肪肝动物模型及建立方法 Download PDFInfo
- Publication number
- CN114503955A CN114503955A CN202210266150.1A CN202210266150A CN114503955A CN 114503955 A CN114503955 A CN 114503955A CN 202210266150 A CN202210266150 A CN 202210266150A CN 114503955 A CN114503955 A CN 114503955A
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- animal model
- feeding
- nr4a
- fatty liver
- alcoholic fatty
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Pending
Links
- 208000008338 non-alcoholic fatty liver disease Diseases 0.000 title claims abstract description 46
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims abstract description 34
- 238000011713 fatty liver animal model Methods 0.000 title claims abstract description 31
- 108091008638 NR4A Proteins 0.000 claims abstract description 36
- 238000010171 animal model Methods 0.000 claims abstract description 27
- 238000003209 gene knockout Methods 0.000 claims abstract description 14
- 208000032928 Dyslipidaemia Diseases 0.000 claims abstract description 10
- 208000017170 Lipid metabolism disease Diseases 0.000 claims abstract description 10
- 208000008589 Obesity Diseases 0.000 claims abstract description 9
- 235000020824 obesity Nutrition 0.000 claims abstract description 9
- 241000699670 Mus sp. Species 0.000 claims description 39
- 241000699666 Mus <mouse, genus> Species 0.000 claims description 19
- 238000011813 knockout mouse model Methods 0.000 claims description 17
- 230000003044 adaptive effect Effects 0.000 claims description 16
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 claims description 9
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 claims description 5
- 150000001720 carbohydrates Chemical class 0.000 claims description 3
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 claims description 3
- 230000003203 everyday effect Effects 0.000 claims description 2
- 210000004185 liver Anatomy 0.000 abstract description 9
- 230000004060 metabolic process Effects 0.000 abstract description 9
- HVCOBJNICQPDBP-UHFFFAOYSA-N 3-[3-[3,5-dihydroxy-6-methyl-4-(3,4,5-trihydroxy-6-methyloxan-2-yl)oxyoxan-2-yl]oxydecanoyloxy]decanoic acid;hydrate Chemical compound O.OC1C(OC(CC(=O)OC(CCCCCCC)CC(O)=O)CCCCCCC)OC(C)C(O)C1OC1C(O)C(O)C(O)C(C)O1 HVCOBJNICQPDBP-UHFFFAOYSA-N 0.000 abstract description 5
- 229930186217 Glycolipid Natural products 0.000 abstract description 5
- 230000001575 pathological effect Effects 0.000 abstract description 4
- 230000000694 effects Effects 0.000 abstract description 3
- 208000030159 metabolic disease Diseases 0.000 abstract description 3
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 10
- WZUVPPKBWHMQCE-UHFFFAOYSA-N Haematoxylin Chemical compound C12=CC(O)=C(O)C=C2CC2(O)C1C1=CC=C(O)C(O)=C1OC2 WZUVPPKBWHMQCE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 10
- 210000005228 liver tissue Anatomy 0.000 description 8
- 238000010186 staining Methods 0.000 description 8
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 8
- 102000015779 HDL Lipoproteins Human genes 0.000 description 5
- 108010010234 HDL Lipoproteins Proteins 0.000 description 5
- NPGIHFRTRXVWOY-UHFFFAOYSA-N Oil red O Chemical compound Cc1ccc(C)c(c1)N=Nc1cc(C)c(cc1C)N=Nc1c(O)ccc2ccccc12 NPGIHFRTRXVWOY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 5
- 238000011160 research Methods 0.000 description 5
- 238000011814 C57BL/6N mouse Methods 0.000 description 4
- KFZMGEQAYNKOFK-UHFFFAOYSA-N Isopropanol Chemical compound CC(C)O KFZMGEQAYNKOFK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 4
- CTQNGGLPUBDAKN-UHFFFAOYSA-N O-Xylene Chemical compound CC1=CC=CC=C1C CTQNGGLPUBDAKN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 238000007490 hematoxylin and eosin (H&E) staining Methods 0.000 description 4
- 238000005406 washing Methods 0.000 description 4
- 208000004930 Fatty Liver Diseases 0.000 description 3
- PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N Glycerine Chemical compound OCC(O)CO PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 206010019708 Hepatic steatosis Diseases 0.000 description 3
- 230000037396 body weight Effects 0.000 description 3
- 238000009395 breeding Methods 0.000 description 3
- 230000001488 breeding effect Effects 0.000 description 3
- 238000004043 dyeing Methods 0.000 description 3
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 3
- 208000010706 fatty liver disease Diseases 0.000 description 3
- 150000002632 lipids Chemical class 0.000 description 3
- 230000008506 pathogenesis Effects 0.000 description 3
- 231100000240 steatosis hepatitis Toxicity 0.000 description 3
- IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N Atomic nitrogen Chemical compound N#N IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 101001109700 Homo sapiens Nuclear receptor subfamily 4 group A member 1 Proteins 0.000 description 2
- 206010022489 Insulin Resistance Diseases 0.000 description 2
- 102100022679 Nuclear receptor subfamily 4 group A member 1 Human genes 0.000 description 2
- 241000700159 Rattus Species 0.000 description 2
- 230000009286 beneficial effect Effects 0.000 description 2
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 2
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 2
- 235000014633 carbohydrates Nutrition 0.000 description 2
- 230000000052 comparative effect Effects 0.000 description 2
- 230000008021 deposition Effects 0.000 description 2
- 238000007710 freezing Methods 0.000 description 2
- 230000003902 lesion Effects 0.000 description 2
- 239000000463 material Substances 0.000 description 2
- 230000006371 metabolic abnormality Effects 0.000 description 2
- 230000007170 pathology Effects 0.000 description 2
- 238000007789 sealing Methods 0.000 description 2
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 2
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 2
- 208000001072 type 2 diabetes mellitus Diseases 0.000 description 2
- 239000008096 xylene Substances 0.000 description 2
- 206010002091 Anaesthesia Diseases 0.000 description 1
- 241000282472 Canis lupus familiaris Species 0.000 description 1
- 235000019733 Fish meal Nutrition 0.000 description 1
- 102100037181 Fructose-1,6-bisphosphatase 1 Human genes 0.000 description 1
- 108010010803 Gelatin Proteins 0.000 description 1
- 208000034826 Genetic Predisposition to Disease Diseases 0.000 description 1
- 102000058058 Glucose Transporter Type 2 Human genes 0.000 description 1
- 102100036264 Glucose-6-phosphatase catalytic subunit 1 Human genes 0.000 description 1
- 101710099339 Glucose-6-phosphatase catalytic subunit 1 Proteins 0.000 description 1
- 101000877537 Homo sapiens Beta-enolase Proteins 0.000 description 1
- 101001028852 Homo sapiens Fructose-1,6-bisphosphatase 1 Proteins 0.000 description 1
- 206010020772 Hypertension Diseases 0.000 description 1
- 206010061218 Inflammation Diseases 0.000 description 1
- 206010067125 Liver injury Diseases 0.000 description 1
- 238000013232 NAFLD rodent model Methods 0.000 description 1
- 206010028980 Neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 102000016978 Orphan receptors Human genes 0.000 description 1
- 108070000031 Orphan receptors Proteins 0.000 description 1
- 241000283973 Oryctolagus cuniculus Species 0.000 description 1
- 229930040373 Paraformaldehyde Natural products 0.000 description 1
- 108091006299 SLC2A2 Proteins 0.000 description 1
- 235000019764 Soybean Meal Nutrition 0.000 description 1
- 108010074436 Sterol Regulatory Element Binding Protein 1 Proteins 0.000 description 1
- 229930006000 Sucrose Natural products 0.000 description 1
- CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N Sucrose Chemical compound O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@]1(CO)O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N 0.000 description 1
- 241000282887 Suidae Species 0.000 description 1
- 240000008042 Zea mays Species 0.000 description 1
- 235000005824 Zea mays ssp. parviglumis Nutrition 0.000 description 1
- 235000002017 Zea mays subsp mays Nutrition 0.000 description 1
- 230000037005 anaesthesia Effects 0.000 description 1
- 230000006907 apoptotic process Effects 0.000 description 1
- 230000008827 biological function Effects 0.000 description 1
- 238000010241 blood sampling Methods 0.000 description 1
- 210000005252 bulbus oculi Anatomy 0.000 description 1
- 230000023852 carbohydrate metabolic process Effects 0.000 description 1
- 235000021256 carbohydrate metabolism Nutrition 0.000 description 1
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 description 1
- 230000008859 change Effects 0.000 description 1
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 1
- RNFNDJAIBTYOQL-UHFFFAOYSA-N chloral hydrate Chemical compound OC(O)C(Cl)(Cl)Cl RNFNDJAIBTYOQL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229960002327 chloral hydrate Drugs 0.000 description 1
- HVYWMOMLDIMFJA-DPAQBDIFSA-N cholesterol Chemical compound C1C=C2C[C@@H](O)CC[C@]2(C)[C@@H]2[C@@H]1[C@@H]1CC[C@H]([C@H](C)CCCC(C)C)[C@@]1(C)CC2 HVYWMOMLDIMFJA-DPAQBDIFSA-N 0.000 description 1
- 235000005822 corn Nutrition 0.000 description 1
- 230000007547 defect Effects 0.000 description 1
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 1
- 238000011161 development Methods 0.000 description 1
- 235000005911 diet Nutrition 0.000 description 1
- 230000000378 dietary effect Effects 0.000 description 1
- 230000004069 differentiation Effects 0.000 description 1
- 239000012153 distilled water Substances 0.000 description 1
- 239000003651 drinking water Substances 0.000 description 1
- 235000020188 drinking water Nutrition 0.000 description 1
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 1
- YQGOJNYOYNNSMM-UHFFFAOYSA-N eosin Chemical compound [Na+].OC(=O)C1=CC=CC=C1C1=C2C=C(Br)C(=O)C(Br)=C2OC2=C(Br)C(O)=C(Br)C=C21 YQGOJNYOYNNSMM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000004467 fishmeal Substances 0.000 description 1
- 230000008014 freezing Effects 0.000 description 1
- 229920000159 gelatin Polymers 0.000 description 1
- 239000008273 gelatin Substances 0.000 description 1
- 235000019322 gelatine Nutrition 0.000 description 1
- 235000011852 gelatine desserts Nutrition 0.000 description 1
- 230000004110 gluconeogenesis Effects 0.000 description 1
- 231100000234 hepatic damage Toxicity 0.000 description 1
- 235000009200 high fat diet Nutrition 0.000 description 1
- 238000001727 in vivo Methods 0.000 description 1
- 230000006698 induction Effects 0.000 description 1
- 230000008595 infiltration Effects 0.000 description 1
- 238000001764 infiltration Methods 0.000 description 1
- 210000004969 inflammatory cell Anatomy 0.000 description 1
- 230000004054 inflammatory process Effects 0.000 description 1
- 229910052500 inorganic mineral Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000007928 intraperitoneal injection Substances 0.000 description 1
- 230000037356 lipid metabolism Effects 0.000 description 1
- 210000005229 liver cell Anatomy 0.000 description 1
- 230000008818 liver damage Effects 0.000 description 1
- 230000003908 liver function Effects 0.000 description 1
- 230000002503 metabolic effect Effects 0.000 description 1
- 239000011707 mineral Substances 0.000 description 1
- 235000010755 mineral Nutrition 0.000 description 1
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 1
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 1
- 238000010172 mouse model Methods 0.000 description 1
- 230000007935 neutral effect Effects 0.000 description 1
- 229910052757 nitrogen Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000012188 paraffin wax Substances 0.000 description 1
- 229920002866 paraformaldehyde Polymers 0.000 description 1
- 244000052769 pathogen Species 0.000 description 1
- 230000001717 pathogenic effect Effects 0.000 description 1
- 231100000915 pathological change Toxicity 0.000 description 1
- 230000036285 pathological change Effects 0.000 description 1
- 230000008569 process Effects 0.000 description 1
- 230000002035 prolonged effect Effects 0.000 description 1
- 108020003175 receptors Proteins 0.000 description 1
- 102000005962 receptors Human genes 0.000 description 1
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 1
- 239000004455 soybean meal Substances 0.000 description 1
- 239000005720 sucrose Substances 0.000 description 1
- 208000024891 symptom Diseases 0.000 description 1
- 208000011580 syndromic disease Diseases 0.000 description 1
- UFTFJSFQGQCHQW-UHFFFAOYSA-N triformin Chemical compound O=COCC(OC=O)COC=O UFTFJSFQGQCHQW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 210000003934 vacuole Anatomy 0.000 description 1
- 235000015112 vegetable and seed oil Nutrition 0.000 description 1
- 239000008158 vegetable oil Substances 0.000 description 1
- 239000011782 vitamin Substances 0.000 description 1
- 229940088594 vitamin Drugs 0.000 description 1
- 229930003231 vitamin Natural products 0.000 description 1
- 235000013343 vitamin Nutrition 0.000 description 1
- 239000001993 wax Substances 0.000 description 1
Images
Classifications
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A01—AGRICULTURE; FORESTRY; ANIMAL HUSBANDRY; HUNTING; TRAPPING; FISHING
- A01K—ANIMAL HUSBANDRY; AVICULTURE; APICULTURE; PISCICULTURE; FISHING; REARING OR BREEDING ANIMALS, NOT OTHERWISE PROVIDED FOR; NEW BREEDS OF ANIMALS
- A01K67/00—Rearing or breeding animals, not otherwise provided for; New or modified breeds of animals
- A01K67/027—New or modified breeds of vertebrates
- A01K67/0275—Genetically modified vertebrates, e.g. transgenic
- A01K67/0276—Knock-out vertebrates
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A01—AGRICULTURE; FORESTRY; ANIMAL HUSBANDRY; HUNTING; TRAPPING; FISHING
- A01K—ANIMAL HUSBANDRY; AVICULTURE; APICULTURE; PISCICULTURE; FISHING; REARING OR BREEDING ANIMALS, NOT OTHERWISE PROVIDED FOR; NEW BREEDS OF ANIMALS
- A01K2207/00—Modified animals
- A01K2207/25—Animals on a special diet
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A01—AGRICULTURE; FORESTRY; ANIMAL HUSBANDRY; HUNTING; TRAPPING; FISHING
- A01K—ANIMAL HUSBANDRY; AVICULTURE; APICULTURE; PISCICULTURE; FISHING; REARING OR BREEDING ANIMALS, NOT OTHERWISE PROVIDED FOR; NEW BREEDS OF ANIMALS
- A01K2227/00—Animals characterised by species
- A01K2227/10—Mammal
- A01K2227/105—Murine
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A01—AGRICULTURE; FORESTRY; ANIMAL HUSBANDRY; HUNTING; TRAPPING; FISHING
- A01K—ANIMAL HUSBANDRY; AVICULTURE; APICULTURE; PISCICULTURE; FISHING; REARING OR BREEDING ANIMALS, NOT OTHERWISE PROVIDED FOR; NEW BREEDS OF ANIMALS
- A01K2267/00—Animals characterised by purpose
- A01K2267/03—Animal model, e.g. for test or diseases
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A01—AGRICULTURE; FORESTRY; ANIMAL HUSBANDRY; HUNTING; TRAPPING; FISHING
- A01K—ANIMAL HUSBANDRY; AVICULTURE; APICULTURE; PISCICULTURE; FISHING; REARING OR BREEDING ANIMALS, NOT OTHERWISE PROVIDED FOR; NEW BREEDS OF ANIMALS
- A01K2267/00—Animals characterised by purpose
- A01K2267/03—Animal model, e.g. for test or diseases
- A01K2267/035—Animal model for multifactorial diseases
- A01K2267/0362—Animal model for lipid/glucose metabolism, e.g. obesity, type-2 diabetes
Landscapes
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Environmental Sciences (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Zoology (AREA)
- Animal Husbandry (AREA)
- Biodiversity & Conservation Biology (AREA)
- Investigating Or Analysing Biological Materials (AREA)
Abstract
本发明涉及一种动物模型建立技术领域，具体而言，涉及一种非酒精性脂肪肝动物模型及建立方法。该动物模型采用NR4A1‑/‑基因敲除的小鼠建立。采用NR4A1‑/‑基因敲除的小鼠建立非酒精性脂肪肝动物模型，充分利用了NR4A1‑/‑基因与糖代谢和肝脏的脂肪代谢的关系，使NR4A1‑/‑基因敲除的小鼠糖脂代谢紊乱，经高脂饲养后可使脂肪沉积于肝脏，形成非酒精性脂肪肝；该方法操作简单，效果明显。该动物模型伴有肥胖、血脂异常等特征，与NAFLD临床病理相似度高。
Description
技术领域
本发明涉及动物模型建立技术领域，具体而言，涉及一种非酒精性脂肪肝动物模型及建立方法。
背景技术
非酒精性脂肪肝(non-alcoholic fatty liver disease，NAFLD)是排除酒精和其他明确损肝因素以外，导致肝细胞内脂肪沉积过度为主要特征的临床病理综合征，可分为原发性和继发性两大类，前者与胰岛素抵抗和遗传易感性有关，而后者为某些特殊原因导致的。非酒精性脂肪肝(NAFLD)通常还会伴有肥胖、胰岛素抵抗、高血压和血脂异常等症状。近年来，随着经济的发展，人们生活水平提高，饮食结构发生改变，脂肪肝的发病率呈现逐年上升的趋势。因此，建立一个稳定可靠、病理演变过程符合的NAFLD动物模型，对研究NAFLD的发病机制及其治疗方法具有重要意义。
现有技术中的动物模型采用的动物种类很多，如兔、猪、犬、鼠等。不同的动物种类所建立的动物模型特征也不相同。在传统的动物模型中，采用大鼠的居多，然而，大鼠动物模型的特征单一，仅有肥胖特征，血脂和脂肪肝特征不明显，或只具有脂肪肝的特征，血脂异常的特征较差。这样的动物模型与NAFLD临床病理相似度低，参考价值有限。
另外，现有技术中的动物模型还存在建立周期较长、稳定性差等缺点。
发明内容
本发明所要解决的技术问题是提供一种非酒精性脂肪肝动物模型及建立方法。
本发明解决上述技术问题的技术方案如下：
本发明提供一种非酒精性脂肪肝动物模型的建立方法，所述动物模型采用NR4A1-/-基因敲除的小鼠建立。
进一步，所述NR4A1-/-基因敲除的小鼠为6～8周龄，体重为18～22g。
进一步，所述NR4A1-/-基因敲除的小鼠为SPF级雄性。
进一步，包括以下步骤：
1)、将所述NR4A1-/-基因敲除的小鼠分为每笼8只；
2)、对各笼所述NR4A1-/-基因敲除的小鼠进行适应性饲养；
3)、将经过适应性饲养的所述NR4A1-/-基因敲除的小鼠进行高脂饲料饲养。
进一步，所述步骤2)中，所述适应性饲养的环境为温度22～25℃、湿度50％、12小时昼夜交替；对所述NR4A1-/-基因敲除的小鼠投喂的饲料为普通饲料，并自由饮水；所述适应性饲养的周期为1周。
进一步，所述步骤3)中，所述高脂饲料饲养的环境为温度22～25℃、湿度50％、12小时昼夜交替；所述高脂饲料饲养的投喂周期为，每日早晚各一次，并且每次每笼投喂30g高脂饲料；所述高脂饲料饲养的周期为16周。
进一步，所述步骤3)中，所述高脂饲料的组分及各组分的质量百分比为，蛋白质20％、碳水化合物20％、脂肪60％。
进一步，所述步骤3)完成后，检测所述NR4A1-/-基因敲除的小鼠血清中TC、TG、LDL、HDL、AST和ALT指标。
本发明还提供一种非酒精性脂肪肝动物模型，所述动物模型采用如上述的非酒精性脂肪肝动物模型的建立方法建立。
进一步，所述动物模型中的小鼠同时具备肥胖及血脂异常的特征。
本发明的技术方案有益效果在于：
1)本发明的非酒精性脂肪肝动物模型的建立方法，采用NR4A1-/-基因敲除的小鼠建立，充分利用了NR4A1-/-基因与糖代谢和肝脏的脂肪代谢的关系，使NR4A1-/-基因敲除的小鼠糖脂代谢紊乱，经高脂饲养后可使脂肪沉积于肝脏，形成非酒精性脂肪肝；该方法操作简单，效果明显。
2)本发明的非酒精性脂肪肝动物模型的建立方法，饲养周期短、成本低，效率高，能够有效提高非酒精性脂肪肝动物模型的建立周期。
3)本发明的非酒精性脂肪肝动物模型，伴有肥胖、血脂异常等特征，与NAFLD临床病理相似度高。
4)本发明的非酒精性脂肪肝动物模型，为研究NAFLD发病机制特别是与糖脂代谢异常相关方面提供了一种良好的动物模型。
附图说明
图1为本发明的非酒精性脂肪肝动物模型的建立方法中，实施例1的对照组与模型组小鼠体重变化折线图；其中，con为对照组，Mod为模型组，纵坐标为体重，横坐标为周数；
图2为本发明的非酒精性脂肪肝动物模型的建立方法中，实施例1的对照组与模型组小鼠血清血脂四项TC、TG、HDL、LDL结果柱形图；其中，con为对照组，Mod为模型组，纵坐标为浓度，横坐标为项目；
图3为本发明的非酒精性脂肪肝动物模型的建立方法中，实施例1的对照组与模型组小鼠血清肝功能ALT，AST结果柱形图；其中，con为对照组，Mod为模型组，纵坐标为浓度，横坐标为项目；
图4为本发明的非酒精性脂肪肝动物模型的建立方法中，实施例1的对照组小鼠肝组织HE染色图，放大倍数为100倍；
图5为本发明的非酒精性脂肪肝动物模型的建立方法中，实施例1的模型组小鼠肝组织HE染色图，放大倍数为100倍；
图6为本发明的非酒精性脂肪肝动物模型的建立方法中，实施例1的对照组小鼠肝组织油红O染色图，放大倍数为100倍；
图7为本发明的非酒精性脂肪肝动物模型的建立方法中，实施例1的模型组小鼠肝组织油红O染色图，放大倍数为100倍。
具体实施方式
以下结合附图对本发明的原理和特征进行描述，所举实例只用于解释本发明，并非用于限定本发明的范围。
NR4A1被称为核孤儿受体，研究表明其可以调控细胞凋亡、炎症、肿瘤等，还有研究证明NR4A1参与糖代谢以及能量供应和肝脏的脂肪代谢，能够上调糖异生相关基因ENO3、G6Pase、FBP1和GLUT2的表达，下调脂代谢基因SREBP1c的表达。该基因参与多种生物学功能，具有多种研究用途。本发明是利用其与脂代谢的关系，首次采用该基因敲除小鼠建立NAFLD模型。
本发明的非酒精性脂肪肝动物模型的建立方法，其动物模型采用NR4A1-/-基因敲除的小鼠建立。
本发明的动物模型建立方法，采用NR4A1-/-基因敲除小鼠建立，该方法基于上述NR4A1-/-基因与糖代谢和肝脏的脂肪代谢的关系，使NR4A1-/-基因敲除的小鼠糖脂代谢紊乱，经高脂饲养后可使脂肪沉积于肝脏，形成非酒精性脂肪肝，并且血脂异常。本发明的动物模型与NAFLD临床病理相似度高。
优选的，NR4A1-/-基因敲除的小鼠为6～8周龄，体重为18～22g；该周龄和体重范围内的小鼠，具有饲养周期短、脂肪沉积速度快的优点，能够大幅度降低动物模型的建立周期。
进一步优选的，NR4A1-/-基因敲除的小鼠为7周龄，体重为20g。
本发明的非酒精性脂肪肝动物模型的建立方法，具体包括以下步骤：
1)、将NR4A1-/-基因敲除的小鼠分为每笼6～10只；每笼6～10只的饲养密度，既能够保证每只小鼠具有足够的活动空间，避免饲养过密导致小鼠发生应激性反应而影响体内代谢情况，还能够使小鼠尽快适应环境，缩短适应性饲养的时间；同时，该饲养密度还能有效节省饲养空间。
优选的，小鼠分为每笼8只。
2)、对各笼所述NR4A1-/-基因敲除的小鼠进行适应性饲养；在进行高脂饲料饲养前，先对小鼠进行适应性饲养，可以使小鼠体内的代谢情况稳定，有助于在高脂饲料饲养期间快速积累脂肪。
优选的，适应性饲养的环境为温度22～25℃、湿度50％、12小时昼夜交替；对所述NR4A1-/-基因敲除的小鼠投喂的饲料为普通饲料，并自由饮水；适应性饲养的周期为1周。
其中，普通饲料的成分具体包括，大豆粕、鱼粉、植物油、麸皮、玉米、维生素、矿物质等。本发明采用的普通饲料均为商品化饲料，生物学研究中均已得到认可。
3)、将经过适应性饲养的所述NR4A1-/-基因敲除的小鼠进行高脂饲料饲养。
其中，高脂饲料饲养的环境与适应性饲养的环境相同，为温度22～25℃、湿度50％、12小时昼夜交替；对所述NR4A1-/-基因敲除的小鼠早晚各一次的定量投喂，投喂量为每笼30g，并自由饮水；高脂饲料饲养的周期为16周。
本发明的模型建立方法中，适应性饲养和高脂饲料饲养的环境相同，不仅能够使小鼠快速适应，提高整体的建模周期，同时能够使小鼠的身体状态始终保持稳定。
优选的，在上述步骤3)完成后，检测NR4A1-/-基因敲除的小鼠血清中TC、TG、LDL、HDL、AST和ALT指标。
在完成高脂饲养后，可对小鼠进行上述指标的检测，以确定非酒精性脂肪肝动物模型建立是否成功。
本发明的非酒精性脂肪肝动物模型中的小鼠同时具备肥胖及血脂异常的特征。
以下通过实施例对本发明的动物模型建立方法进行具体说明：
实施例1
本实施例采用NR4A1-/-基因敲除小鼠和C57BL/6N小鼠分别进行饲养，以说明本发明的方法能够建立非酒精性脂肪肝动物模型，同时通过实验验证本发明的动物模型同时伴有肥胖、血脂异常等特征。
对比试验中的动物饲料为普通饲料和高脂饲料(D12492)购买于派克生物；NR4A1-/-基因敲除小鼠购自美国Jackson Laboratory，C57BL/6N小鼠购买于北京维通利华实验动物技术有限公司。
其中，高脂饲料(D12492)的具体组分以及各组分的质量百分比为，20％蛋白质、20％碳水化合物、60％脂肪；该高脂饲料与普通饲料相比脂肪含量高。
本对比试验选用SPF级雄性NR4A1-/-基因敲除小鼠和C57BL/6N小鼠，按照鼠种随机分为模型组和对照组，共2组，每组12只。其中，SPF级雄性NR4A1-/-基因敲除小鼠的周龄为6～8周，体重为18～22g。SPF级雄性C57BL/6N小鼠的周龄为6～8周，体重为18～22g。
动物饲养条件均为SFP级国际标准。
分组后，对各组小鼠进行适应性喂养，适应性饲养的条件为，温度22～25℃，湿度50％，12小时昼夜交替。
采用普通饲料适应性喂养1周后，模型组给予高脂饲料，对照组继续给予普通饲料。高脂饲料喂养的具体方式为，早晚各一次定量投喂，每笼30g。高脂饲料喂养期间，小鼠自由饮水，水源为SPF级灭菌水。
在高脂饲养器件，每周对各组小鼠称量体重一次。各组的体重结果如见图1所示。
通过图1可知，模型组小鼠喂养5周后体重增长速率明显高于对照组(P<0.05)。
高脂饲料喂养16周后，对各组小鼠进行以下检测。检测前先对各组小鼠禁食12小时。
血清检测：禁食后，采用4％水合氯醛腹腔注射麻醉，摘取眼球取血，全血室温静置30min，3000rpm离心10min取上层血清。全自动生化分析仪检测血清中TC、TG、LDL、HDL、AST和ALT指标，结果见图2、图3。
由图2可知，模型组小鼠血清胆固醇TC、甘油三酯TG、高密度脂蛋白HDL均高于对照组小鼠(P<0.05)；由图3可知，与对照组小鼠相比血清ALT，AST分别升高56％(P<0.01)，27％(P<0.05)。
肝组织病理学检测：分别取两组小鼠的肝组织进行4％多聚甲醛固定，再分别做石蜡切片HE染色。具体方法为，组织固定后，经75％，85％，95％，两次无水乙醇，两次二甲苯，两次浸蜡后包埋，切片机切片4um。切染色前56℃烤片2小时，经二甲苯X 2，无水乙醇X 2，95％酒精，85％酒精，75％酒精，蒸馏水每组各5min脱蜡至水，苏木素染核2min，苏木素分化液分化10-15s，苏木素返蓝液返蓝1min，流水稍冲洗，伊红染液染色5min，经75％酒精，85％酒精，95％酒精，无水乙醇各1min，二甲苯透明，中性树胶封片，显微镜下观察拍照。染色的结果如图4、图5所示。
由HE染色结果可知，图4的对照组肝组织结构紧凑清晰，无病变；图5的模型组肝组织有脂肪空泡及气球样病变并且有大量炎症细胞浸润。
再对冰冻切片进行油红O染色。具体方法为，组织固定后，经10％、20％、30％蔗糖溶液脱水，OCT包埋，液氮速冻脱模，冰冻切片机切片10um。切片室温复温后，PBS洗去包埋剂，60％异丙醇浸染2min，油红O染液染色10min，异丙醇稍洗切片，苏木素复染核，苏木素返蓝液返蓝1min，流水稍冲洗，甘油明胶封片，显微镜下观察拍照。结果如图6和图7所示。
由油红O染色结果可知，图6的对照组肝脏结构清晰，无脂滴沉积；而图7的模型组肝组织形态全无，脂肪性病变，脂滴大量沉积，细胞核被挤到边缘。
综上所述，利用NR4A1-/-基因敲除小鼠，经高脂饲养诱导成功建立了伴有肥胖、血脂异常等特征的非酒精性脂肪肝动物模型。该动物模型为研究NAFLD发病机制特别是与糖脂代谢异常相关方面提供了一种良好的动物模型。
在本说明书的描述中，参考术语“一个实施例”、“一些实施例”、“示例”、“具体示例”、或“一些示例”等的描述意指结合该实施例或示例描述的具体特征、结构、材料或者特点包含于本发明的至少一个实施例或示例中。在本说明书中，对上述术语的示意性表述不必须针对的是相同的实施例或示例。而且，描述的具体特征、结构、材料或者特点可以在任一个或多个实施例或示例中以合适的方式结合。此外，在不相互矛盾的情况下，本领域的技术人员可以将本说明书中描述的不同实施例或示例以及不同实施例或示例的特征进行结合和组合。
以上所述仅为本发明的较佳实施例，并不用以限制本发明，凡在本发明的精神和原则之内，所作的任何修改、等同替换、改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。
Claims (5)
1.一种非酒精性脂肪肝动物模型的建立方法，其特征在于，所述动物模型采用NR4A1-/-基因敲除的小鼠建立；
所述NR4A1-/-基因敲除的小鼠为6～8周龄，体重为18～22g；
包括以下步骤：
1)、将所述NR4A1-/-基因敲除的小鼠分为每笼6～10只；
2)、对每笼所述NR4A1-/-基因敲除的小鼠进行适应性饲养；
3)、对每笼经过适应性饲养的所述NR4A1-/-基因敲除的小鼠进行高脂饲料饲养；
所述步骤2)中，所述适应性饲养的环境为温度22～25℃、湿度50％、12小时昼夜交替；所述适应性饲养的投喂饲料为普通饲料，周期为1周；
所述步骤3)中，所述高脂饲料饲养的环境为温度22～25℃、湿度50％、12小时昼夜交替；所述高脂饲料饲养的投喂周期为，每日早晚各一次，并且每次每笼投喂30g高脂饲料；所述高脂饲料饲养的周期为16周；
所述步骤3)中，所述高脂饲料的组分及各组分的质量百分比为，蛋白质20％、碳水化合物20％、脂肪60％。
2.根据权利要求1所述一种非酒精性脂肪肝动物模型的建立方法，其特征在于，所述NR4A1-/-基因敲除的小鼠为SPF级雄性。
3.根据权利要求1所述一种非酒精性脂肪肝动物模型的建立方法，其特征在于，所述步骤3)完成后，检测所述NR4A1-/-基因敲除的小鼠血清中TC、TG、LDL、HDL、AST和ALT指标。
4.一种非酒精性脂肪肝动物模型，其特征在于，所述动物模型采用如权利要求1～3任意一项所述的非酒精性脂肪肝动物模型的建立方法建立。
5.根据权利要求4所述一种非酒精性脂肪肝动物模型，其特征在于，所述动物模型中的小鼠，具备肥胖和血脂异常的特征。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN202210266150.1A CN114503955A (zh) | 2022-03-15 | 2022-03-15 | 一种非酒精性脂肪肝动物模型及建立方法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN202210266150.1A CN114503955A (zh) | 2022-03-15 | 2022-03-15 | 一种非酒精性脂肪肝动物模型及建立方法 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CN114503955A true CN114503955A (zh) | 2022-05-17 |
Family
ID=81553359
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CN202210266150.1A Pending CN114503955A (zh) | 2022-03-15 | 2022-03-15 | 一种非酒精性脂肪肝动物模型及建立方法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| CN (1) | CN114503955A (zh) |
Citations (5)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN101745113A (zh) * | 2008-12-03 | 2010-06-23 | 中国科学院上海生命科学研究院 | 他汀类物质在制备脂肪肝防治药物中的用途 |
| CN105850868A (zh) * | 2016-03-28 | 2016-08-17 | 大连大学 | 一种利用ApoE-/-小鼠建立非酒精性脂肪肝模型的方法 |
| CN105850867A (zh) * | 2016-03-28 | 2016-08-17 | 大连大学 | 一种非酒精性脂肪肝小鼠模型的建立方法 |
| US20200239448A1 (en) * | 2017-08-10 | 2020-07-30 | The Texas A&M University System | Nr4a1 ligands, pharmaceutical compositions, and related methods of use |
| CN112703193A (zh) * | 2018-08-07 | 2021-04-23 | 弗门尼舍公司 | 5-取代的4-氨基-1H-苯并[c][1,2,6]噻二嗪2,2-二氧化物及其制剂和用途 |
-
2022
- 2022-03-15 CN CN202210266150.1A patent/CN114503955A/zh active Pending
Patent Citations (5)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN101745113A (zh) * | 2008-12-03 | 2010-06-23 | 中国科学院上海生命科学研究院 | 他汀类物质在制备脂肪肝防治药物中的用途 |
| CN105850868A (zh) * | 2016-03-28 | 2016-08-17 | 大连大学 | 一种利用ApoE-/-小鼠建立非酒精性脂肪肝模型的方法 |
| CN105850867A (zh) * | 2016-03-28 | 2016-08-17 | 大连大学 | 一种非酒精性脂肪肝小鼠模型的建立方法 |
| US20200239448A1 (en) * | 2017-08-10 | 2020-07-30 | The Texas A&M University System | Nr4a1 ligands, pharmaceutical compositions, and related methods of use |
| CN112703193A (zh) * | 2018-08-07 | 2021-04-23 | 弗门尼舍公司 | 5-取代的4-氨基-1H-苯并[c][1,2,6]噻二嗪2,2-二氧化物及其制剂和用途 |
Non-Patent Citations (3)
| Title |
|---|
| CHAO L C 等: "Insulin resistance and altered systemic glucose metabolism in mice lacking Nur77", 《DIABETES》 * |
| 秦丹丹 等: "NR4A1对糖脂代谢的调控作用", 《中国科学:生命科学》 * |
| 麻莉 等: "景虎通脉方抗ApoE-/-小鼠动脉粥样硬化的作用机制研究", 《中成药》 * |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| Kim et al. | Obesity-associated improvements in metabolic profile through expansion of adipose tissue | |
| El-Tarabany | Impact of temperature-humidity index on egg-laying characteristics and related stress and immunity parameters of Japanese quails | |
| Incharoen et al. | Histology of intestinal villi and epithelial cells in chickens fed low-crude protein or low-crude fat diets | |
| Xue et al. | Molecular mechanisms of lipid metabolism disorder in livers of ewes with pregnancy toxemia | |
| Kay et al. | Once-daily milking during a feed deficit decreases milk production but improves energy status in early lactating grazing dairy cows | |
| Attia et al. | Performance, blood profile, carcass and meat traits and tissue morphology in growing rabbits fed mannanoligosaccharides and zinc-bacitracin continuously or intermittently. | |
| Omede et al. | Physico-chemical properties of late-incubation egg amniotic fluid and a potential in ovo feed supplement | |
| Clouard et al. | Prenatal, but not early postnatal, exposure to a Western diet improves spatial memory of pigs later in life and is paired with changes in maternal prepartum blood lipid levels | |
| Louden et al. | TallyHO obese female mice experience poor reproductive outcomes and abnormal blastocyst metabolism that is reversed by metformin | |
| CN103462948B (zh) | 一种非酒精性脂肪肝病模型制备方法 | |
| CN116807021A (zh) | 一种营养组分在制备具有抗肠炎和/或保护肠道屏障完整性的产品中的应用 | |
| CN109997787B (zh) | 一种非酒精性脂肪性肝炎向肝细胞癌转化的大鼠培育方法及应用 | |
| Sykes et al. | Lipid characterization of both wild and cultured eggs of cuttlefish (Sepia officinalis L.) throughout the embryonic development | |
| CN114503955A (zh) | 一种非酒精性脂肪肝动物模型及建立方法 | |
| Chalmeh et al. | Comparison of circulating metabolic and hepatic indices between fat-tailed and semifat-tailed ewes in different pre and post-partum periods | |
| CN102517333A (zh) | 自发性HHcy相关动脉粥样硬化转基因小鼠动物模型及其制备方法 | |
| Carollo et al. | Immunohistochemical aspects of Ito and Kupffer cells in the liver of domesticated and wild ruminants | |
| Bieniarz et al. | Changes in the ovaries of adult carp | |
| CN109479956A (zh) | 一种具有调节血脂作用的人源混合乳酸菌发酵乳及其应用 | |
| Fatemi et al. | Effect of tryptophan supplementation in protein deficient diets on performance, gut development and immune responses in broiler chickens | |
| CN112111554A (zh) | 一种评价化妆品抗衰老化功效的方法 | |
| Amur et al. | Semen characteristics and fertility of three strains of Noiler cocks | |
| CN109662062A (zh) | 高酪蛋白日粮诱导断奶仔猪营养性腹泻模型的建立方法 | |
| CN115136928B (zh) | 一种树鼩ⅱ型糖尿病快速的造模方法 | |
| Zhou et al. | [Retracted] Exploratory Study on Expression of Fatty Tissue in Gestational Diabetes Mouse |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| PB01 | Publication | ||
| PB01 | Publication | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| RJ01 | Rejection of invention patent application after publication | ||
| RJ01 | Rejection of invention patent application after publication |
Application publication date: 20220517 |