CN114469920B - 维甲酸和/或鼠李糖在制备药物和/或器械中的应用 - Google Patents
维甲酸和/或鼠李糖在制备药物和/或器械中的应用 Download PDFInfo
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Abstract
本申请提供维甲酸和/或鼠李糖在制备药物和/或器械中的应用，涉及医药技术领域，该药物可以用于促进毛囊生长或再生、促进毛发生长、预防或治疗脱发、修复皮肤伤口和瘢痕。与现有脱发治疗外用药物米诺地尔相比，维甲酸和/或鼠李糖可明显缩短毛发休止期，促进毛发大面积生长。动物实验证实体表涂抹维甲酸和/或鼠李糖可促进毛囊由静止期向生长期转变，维甲酸和鼠李糖联合应用促进毛囊生长的效果更好，有望成为有效治疗脱发的药物。
Description
技术领域
本申请涉及医药技术领域，尤其涉及维甲酸和/或鼠李糖在制备药物和/或器械中的应用。
背景技术
脱发发病率不断升高，严重影响患者身心健康。现有治疗手段主要包括手术治疗和非手术治疗。毛发移植术是目前治疗脱发最有效的方法，但供区毛囊(hair follicle,HF)的缺乏是其主要限制，此外患者精神心理状态、术者手术技巧等也会影响毛发移植效果。药物治疗主要有米诺地尔和非那雄胺，个体差异较大，也均存在不同程度的副作用。此外，毛囊与皮肤创伤修复密切相关，富含毛发区域的皮肤创伤较无毛或少毛区愈合迅速，且瘢痕形成较少，通过诱导皮肤损伤部位的毛囊再生有望实现皮肤结构和功能的完整愈合。因此，研发促进毛囊重新生长或再生的药物，促进皮肤结构、功能和外观恢复，是治疗脱发、皮肤损伤以及瘢痕等疾病的迫切需求。
发明内容
本申请的目的在于提供一种用于促进毛囊生长或再生、促进毛发生长、预防或治疗脱发、修复皮肤伤口和瘢痕的药物和/或器械。
为实现以上目的，本申请提供维甲酸和/或鼠李糖在制备药物和/或器械中的应用，所述药物和/或器械用于如下任一种或多种：
(a)促进毛囊生长或再生；
(b)促进毛发生长；
(c)预防或治疗脱发；
(d)修复皮肤伤口和瘢痕。
优选地，所述维甲酸包括天然的非芳香类维甲酸，以及通过改造维生素A的苯环、多烯侧链和极性终末基团中的任一结构而形成的维甲酸类衍生物。
优选地，所述天然的非芳香类维甲酸包括视黄醛、异维甲酸、全反式维甲酸和阿利维甲酸中的任一种或多种。
优选地，所述维甲酸类衍生物包括依曲替酯、阿维A、阿达帕林、他扎罗丁、贝沙罗丁中的任一种或多种。
优选地，所述鼠李糖包括α-鼠李糖、β-鼠李糖、及鼠李糖衍生物中的任一种或多种。
优选地，所述α-鼠李糖包括α-L-鼠李糖和/或α-D-鼠李糖。
优选地，所述β-鼠李糖包括β-L-鼠李糖和/或β-D-鼠李糖。
优选地，所述鼠李糖衍生物包括所述鼠李糖的代谢产物呋喃酮和/或所述鼠李糖的氧化产物甘露糖。
优选地，所述药物的剂型包括膏剂、霜剂、贴剂、注射剂中的任一种或多种。
优选地，所述器械包括水光针。
与现有技术相比，本申请的有益效果包括：
本申请提供维甲酸和/或鼠李糖在制备药物和/或器械中的应用，该药物和/或器械用于促进毛囊生长或再生、促进毛发生长、预防或治疗脱发、修复皮肤伤口和瘢痕。与现有脱发治疗外用药物米诺地尔相比，维甲酸和/或鼠李糖可明显缩短毛发休止期，促进毛发大面积生长。动物实验证实体表涂抹维甲酸和/或鼠李糖可促进毛囊由静止期向生长期转变，维甲酸和鼠李糖联合应用促进毛囊生长的效果更好，有望成为有效治疗脱发的药物。
附图说明
为了更清楚地说明本申请实施例的技术方案，下面将对实施例中所需要使用的附图作简单地介绍，应当理解，以下附图仅示出了本申请的某些实施例，因此不应被看作是对本申请范围的限定。
图1为应用高通量筛选技术筛选促毛囊再生的小分子化合物的部分基因表达热图；
图2为维甲酸和鼠李糖促进小鼠毛发生长的功能验证图，其中，(A)为小鼠背部涂抹两种药物不同时间点的大体观察Bars＝1cm；(B)为涂药不同时间点具有新生毛发的小鼠数量统计；(C)为根据小鼠背部皮肤颜色变黑的面积进行毛发生长情况评分；(D)为根据小鼠背部皮肤新生毛发覆盖的面积进行毛发生长情况评分。*，P<0.05；**，P<0.01；
图3为小鼠背部分别涂抹维甲酸及维甲酸与鼠李糖联合应用不同时间点的大体观察图，Bars＝1cm；
图4为小鼠背部分别涂抹维甲酸及维甲酸与鼠李糖联合应用不同时间点具有新生毛发的小鼠数量统计图；
图5a为小鼠背部分别涂抹维甲酸及维甲酸与鼠李糖联合应用根据小鼠背部皮肤颜色变黑的面积进行毛发生长情况评分；
图5b为小鼠背部分别涂抹维甲酸及维甲酸与鼠李糖联合应用根据小鼠背部皮肤新生毛发覆盖的面积进行毛发生长情况评分；
图6a为小鼠背部分别涂抹维甲酸及维甲酸与鼠李糖联合应用涂抹24天后背部皮肤的HE染色，bars＝200μM；
图6b为小鼠背部分别涂抹维甲酸及维甲酸与鼠李糖联合应用涂抹24天后毛囊数量统计图，与对照组相比，*，P<0.05；**，P<0.01，****，P<0.0001；与维甲酸组相比，#，P<0.05；
图6c为小鼠背部分别涂抹维甲酸及维甲酸与鼠李糖联合应用涂抹24天后皮肤厚度结果图，与对照组相比，*，P<0.05；**，P<0.01，****，P<0.0001；与维甲酸组相比，#，P<0.05；
图7为小鼠背部分别涂抹维甲酸与鼠李糖联合应用及2％米诺地尔小鼠背部不同时间点的大体观察，Bars＝1cm；
图8为小鼠背部分别涂抹维甲酸与鼠李糖联合应用及2％米诺地尔不同时间点具有新生毛发的小鼠数量统计；
图9为小鼠背部分别涂抹维甲酸与鼠李糖联合应用及2％米诺地尔的毛发生长情况评分，其中(A)为根据小鼠背部皮肤颜色变黑的面积进行毛发生长情况评分；(B)为根据小鼠背部皮肤新生毛发覆盖的面积进行毛发生长情况评分；
图10为小鼠背部分别涂抹维甲酸与鼠李糖联合应用及2％米诺地尔不同时间点小鼠背部皮肤的HE染色，bars＝200μM。
具体实施方式
如本文所用之术语：
“由……制备”与“包含”同义。本文中所用的术语“包含”、“包括”、“具有”、“含有”或其任何其它变形，意在覆盖非排它性的包括。例如，包含所列要素的组合物、步骤、方法、制品或装置不必仅限于那些要素，而是可以包括未明确列出的其它要素或此种组合物、步骤、方法、制品或装置所固有的要素。
连接词“由……组成”排除任何未指出的要素、步骤或组分。如果用于权利要求中，此短语将使权利要求为封闭式，使其不包含除那些描述的材料以外的材料，但与其相关的常规杂质除外。当短语“由……组成”出现在权利要求主体的子句中而不是紧接在主题之后时，其仅限定在该子句中描述的要素；其它要素并不被排除在作为整体的所述权利要求之外。
当量、浓度、或者其它值或参数以范围、优选范围、或一系列上限优选值和下限优选值限定的范围表示时，这应当被理解为具体公开了由任何范围上限或优选值与任何范围下限或优选值的任一配对所形成的所有范围，而不论该范围是否单独公开了。例如，当公开了范围“1～5”时，所描述的范围应被解释为包括范围“1～4”、“1～3”、“1～2”、“1～2和4～5”、“1～3和5”等。当数值范围在本文中被描述时，除非另外说明，否则该范围意图包括其端值和在该范围内的所有整数和分数。
在这些实施例中，除非另有指明，所述的份和百分比均按质量计。
“质量份”指表示多个组分的质量比例关系的基本计量单位，1份可表示任意的单位质量，如可以表示为1g，也可表示2.689g等。假如我们说A组分的质量份为a份，B组分的质量份为b份，则表示A组分的质量和B组分的质量之比a：b。或者，表示A组分的质量为aK，B组分的质量为bK(K为任意数，表示倍数因子)。不可误解的是，与质量份数不同的是，所有组分的质量份之和并不受限于100份之限制。
“和/或”用于表示所说明的情况的一者或两者均可能发生，例如，A和/或B包括(A和B)和(A或B)。
本申请提供维甲酸和/或鼠李糖在制备药物和/或器械中的应用，所述药物和/或器械用于如下任一种或多种：
(a)促进毛囊生长或再生；
(b)促进毛发生长；
(c)预防或治疗脱发；
(d)修复皮肤伤口和瘢痕。
可以理解的是，该药物和/或器械的有效成分可以只含有维甲酸，或者只含有鼠李糖，还可以为包括维甲酸和鼠李糖做为有效成分。该药物主要是通过促进毛囊生长或再生，以达到促进毛发生长的作用，从而可以用于预防或治疗脱发。同时由于皮肤伤口和瘢痕的修复也与毛囊生长相关，由于该药物和/或器械可以促进毛囊生长或再生，预示着该药物和/或器械也可以用于修复皮肤伤口和瘢痕。
在一实施例中，所述维甲酸包括天然的非芳香类维甲酸，以及通过改造维生素A的苯环、多烯侧链和极性终末基团中的任一结构而形成的维甲酸类衍生物。
优选地，所述天然的非芳香类维甲酸包括视黄醛、异维甲酸(13-顺式维甲酸)、全反式维甲酸和阿利维甲酸(9-顺式维甲酸)中的任一种或多种。
优选地，所述维甲酸类衍生物包括依曲替酯、阿维A、阿达帕林、他扎罗丁、贝沙罗丁中的任一种或多种。
在一实施例中，所述鼠李糖包括α-L-鼠李糖、β-鼠李糖、及鼠李糖衍生物中的任一种或多种。
优选地，所述α-鼠李糖包括α-L-鼠李糖和/或α-D-鼠李糖。
优选地，所述β-鼠李糖包括β-L-鼠李糖和/或β-D-鼠李糖。
优选地，所述鼠李糖衍生物包括所述鼠李糖的代谢产物呋喃酮和/或所述鼠李糖的氧化产物甘露糖。
优选地，所述药物的剂型包括膏剂、霜剂、贴剂、水光、注射剂中的任一种或多种。
优选地，所述器械包括水光针。
下面将结合具体实施例对本申请的实施方案进行详细描述，但是本领域技术人员将会理解，下列实施例仅用于说明本申请，而不应视为限制本申请的范围。实施例中未注明具体条件者，按照常规条件或制造商建议的条件进行。所用试剂或仪器未注明生产厂商者，均为可以通过市售购买获得的常规产品。
实施例1维甲酸(RA)和鼠李糖(Rhammnose)能显著促进人毛乳头细胞毛囊诱导功能相关基因的表达
毛乳头细胞(dermal papilla cells,DP)构成了毛囊干细胞(HFSCs)命运决定和分化的真皮微环境，是毛囊发育和周期性生长的“指挥官”，是多种损伤因素作用的靶点，也是毛囊再生药物开发中的经典效应细胞。
结合相关文献及前期研究经验，我们以人毛乳头细胞为模型，以毛乳头细胞毛囊诱导功能相关标志性基因A2M、ALPL、APOD、APOE、COL23A1、CRABP1、ITM2A、MGP、SERPINF1、SFRP2、FGF7、SERPINI1等作为目的基因，以毛乳头细胞失去毛囊诱导功能的相关基因如HAS2、ACTG2、COL11A1、HAPLN1、MYBL1等作为对照基因，应用HTS2技术(High ThroughputSequencing based High Throughput Screening,HTS2，参考Shao,W.et al.Protein&cell10,161-177)平台筛选具有潜在促毛囊生长活性的小分子化合物，结果如图1所示，部分基因表达热图显示具有潜在促毛囊生长或再生作用的小分子化合物对毛囊再生相关基因表达水平的调控，其中阳性对照(positive control)为文献中报道的促毛囊生长或再生作用的小分子化合物，INF563和INF453为筛选到的可能具有抑制毛囊再生的小分子化合物。
发现维甲酸(RA)和鼠李糖(Rhammnose)能显著促进人毛乳头A2M、ALPL、APOD、APOE、COL23A1、CRABP1、ITM2A、SFRP2等基因的表达，抑制毛乳头细胞转化为非毛乳头细胞的相关基因HAS2、ACTG2、COL11A1、HAPLN1、MYBL1的表达，提示二者具有促进毛乳头细胞毛囊诱导功能的潜力，可以用于促进毛囊生长和再生。
实施例2体表实验证实维甲酸和鼠李糖促进小鼠毛发生长
为验证维甲酸和鼠李糖体内促进小鼠毛发生长的功能，我们采用既往文献中公认的小鼠模型，将毛囊处于静止期(8周龄)的c57BL/6小鼠，剃除背部中心约3cm×2cm范围的毛发，随机分组，背部毛发剔除后分别应用80μM维甲酸和10mM鼠李糖二种药物进行涂抹，剃毛第3天起每日均匀涂抹上述药物各一次，每次约100ul/只，以同等稀释度的单独溶剂组(含1％的透明质酸钠)处理的小鼠为空白对照组。涂抹过程中定期拍照观察，评估皮肤颜色及毛囊生长情况。
其中，使用的维甲酸为全反式维甲酸(tretinoin，CAS No.302-79-4)，维甲酸的配置使用二甲基亚砜(Dimethyl sulfoxide，DMSO)做为溶剂，使用的鼠李糖为α-L-鼠李糖(CAS No.6155-35-7)，鼠李糖的配置以去离子水为溶剂，二者先配制成高浓度的储存液后再用去离子水稀释成工作浓度，然后分别加入终浓度为1％的透明质酸钠作为增稠剂便于涂抹。
结果如图2所示，在每天涂抹一次，连续涂抹14天后，维甲酸和鼠李糖均可明显促进毛囊进入生长期，具体表现为小鼠皮肤变黑以及新生毛发的出现；随着涂抹时间的延长，尽管对照组小鼠也逐渐进入生理性生长期(图2A)，但药物涂抹组具有新生毛发小鼠的数量(图2A&2B)以及小鼠背部皮肤颜色变黑的面积(图2C)和小鼠背部皮肤新生毛发覆盖的面积(图2D)均大于对照组，差异具有统计学意义。维甲酸和鼠李糖二者促进毛发生长的作用无明显差异。说明维甲酸和鼠李糖均可以用于促进毛发生长，从而用于预防或治疗脱发。
实施例3维甲酸和鼠李糖联合应用促进小鼠毛发生长
为进一步验证维甲酸和鼠李糖促进毛发生长的功能，我们联合应用二种药物，以单用维甲酸作为对照，同等稀释度的单独溶剂组小鼠作为空白对照，将毛囊处于静止期(8周龄)的c57BL/6小鼠背部毛发剔除后进行体表涂抹药物。在去离子水中添加终浓度为80μM的维甲酸和10mM的鼠李糖，混合后加入终浓度为1％的透明质酸钠得到维甲酸和鼠李糖混合的药物，涂抹方式与实施例2相同，结果如图3至图6所示。
维甲酸以及维甲酸和鼠李糖联合应用组均明显促进毛发生长(图3)，在连续涂抹15天后，部分小鼠进入生长期；18天和21天结果显示，维甲酸和鼠李糖联合应用组有新生毛发的小鼠数量略多于单独维甲酸组，但二者在24天时全部小鼠均有新生毛发出现(图4)。从小鼠皮肤处于生长期的面积进行评估，结果显示维甲酸和鼠李糖联合应用组促进小鼠毛囊进入生长期的效果好于维甲酸单独应用组(图5a)，差异具有统计学意义。就新生毛发面积而言，维甲酸和鼠李糖联合应用组促进毛发新生的效果与单独维甲酸组相比虽有提升的趋势(图5b)，但无统计学意义。
20天后取背部正中皮肤(1.5cm x 0.5cm)进行HE染色，结果如图6a所示，对照组毛囊处于休止期，而维甲酸组以及维甲酸和鼠李糖联合应用组则处于生长期，提示二者均明显促进毛囊进入生长期，其毛囊数量(图6b)及皮肤厚度(图6c)显著大于对照组，进一步证实了维甲酸以及维甲酸和鼠李糖联合应用促进毛发生长的功能，并且维甲酸和鼠李糖联合应用的促进作用强于单独使用维甲酸。
实施例4维甲酸和鼠李糖联合应用促进毛发生长的作用强于2％米诺地尔
米诺地尔是FDA认证的用于治疗脱发的外用药品，具有促进毛囊生长的作用，在很多研究中也作为阳性药物组。为进一步明确维甲酸和鼠李糖促进毛发生长的功能是否具有潜在的临床应用潜能，我们对比了维甲酸和鼠李糖联合应用和2％米诺地尔促进毛发生长的效果，维甲酸和鼠李糖联合应用实验参照实施例3进行，结果如图7至10所示。
维甲酸和鼠李糖的联合应用组毛囊进入生长期所需给药时间更短，同时间点毛囊进入生长期小鼠数量(图8)、进入生长期面积(图9A)以及新生毛发面积(图9B)均显著大于2％米诺地尔组，提示维甲酸和鼠李糖具有更好的促进毛发生长的作用。药物作用18天的皮肤取背部正中皮肤(1.5cm x 0.5cm)HE染色(图10)也可见维甲酸和鼠李糖组较2％米诺地尔组更早进入生长期。
最后应说明的是：以上各实施例仅用以说明本申请的技术方案，而非对其限制；尽管参照前述各实施例对本申请进行了详细的说明，本领域的普通技术人员应当理解：其依然可以对前述各实施例所记载的技术方案进行修改，或者对其中部分或者全部技术特征进行等同替换；而这些修改或者替换，并不使相应技术方案的本质脱离本申请各实施例技术方案的范围。
此外，本领域的技术人员能够理解，尽管在此的一些实施例包括其它实施例中所包括的某些特征而不是其它特征，但是不同实施例的特征的组合意味着处于本申请的范围之内并且形成不同的实施例。例如，在上面的权利要求书中，所要求保护的实施例的任意之一都可以以任意的组合方式来使用。公开于该背景技术部分的信息仅仅旨在加深对本申请的总体背景技术的理解，而不应当被视为承认或以任何形式暗示该信息构成已为本领域技术人员所公知的现有技术。
Claims (1)
1.维甲酸和鼠李糖在制备通过促进毛囊由静止期向生长期转变而促进毛发生长的药物中的应用，其特征在于，所述药物通过以下方法制备：
在去离子水中添加浓度为80μM的维甲酸和10mM的鼠李糖，混合后加入终浓度为1％的透明质酸钠得到维甲酸和鼠李糖混合药物；
所述维甲酸为全反式维甲酸，所述鼠李糖为α-L-鼠李糖；
所述药物通过涂抹方式施用；
所述药物的剂型为膏剂或霜剂。
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