CN114468176A - 一种产蛋末期中草药添加剂及其应用 - Google Patents
一种产蛋末期中草药添加剂及其应用 Download PDFInfo
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Abstract
本发明公开了一种产蛋末期中草药添加剂及其应用，属于饲料添加剂技术领域，其中草药添加剂的技术方案要点是：按重量份剂，所述中草药添加剂包括当归10‑20份、黄芪10‑40份、淫羊藿5‑15份、益母草30‑50份、鱼腥草10‑30份，达到改善蛋鸡输卵管健康的效果。
Description
技术领域
本发明涉及饲料添加剂领域，尤其是涉及一种产蛋末期中草药添加剂及其应用。
背景技术
随着现代化养殖的发展，蛋鸡的生产性能、生产质量成为经营者关注的主要问题，而蛋鸡是唯一一种自发性输卵管癌高发的非人类动物，在两岁以上的母鸡中自发性输卵管癌的发病率高达24%。由于癌细胞会转移到相似的组织，进而造成卵黄性腹膜炎，导致母鸡进入产蛋后期时产蛋率显著下降、次品率增加、蛋品质下降、经济效益下滑，同时母鸡长期受各种应急因素的影响，输卵管炎和输卵管壁变薄，也会导致蛋壳强度、产蛋率和蛋品质的下降。
在此情形下，由于中草药添加剂毒副作用小、无抗药性、绿色环保等受到越来越多的关注，同时通过有益菌剂发酵后能够进一步提高中草药添加剂的适口性，中草药的综合利用率也逐渐提升，但是目前中草药添加剂能够改善蛋鸡的产蛋质量以及产蛋量，但是对于蛋鸡本身的健康状况没有改善。
发明内容
为了改善蛋鸡输卵管健康，本发明提供一种产蛋末期中草药添加剂及其应用。
第一方面本发明提供一种产蛋末期中草药添加剂，采用如下的技术方案：
一种产蛋末期中草药添加剂，按重量份剂，所述中草药添加剂包括当归10-20份、黄芪10-40份、淫羊藿5-15份、益母草30-50份、鱼腥草10-30份。
优选的，所述中草药添加剂包括当归10-20份、黄芪20-40份、淫羊藿10-15份、益母草40-50份、鱼腥草20-30份。
通过采用上述技术方案，本申请采用当归、黄芪、淫羊藿、益母草、鱼腥草这五种中草药成分互相配合，不仅不会产生毒性，同时还具有补血养血、活血化瘀、利尿消肿的功效，此外这五种中草药的配合使用，使得中草药添加剂的有效成分中含有挥发油、蔗糖、棕榈酸、单月桂脂酸、淫羊藿苷、植物淄醇等多种营养成分，不仅具有抗氧化、抗病毒的效果，能够有效降低蛋鸡输卵管炎的发病率，同时显著改善了子宫部与膨大部的抗氧化酶活性及抗氧化基因水平，进而提高了蛋鸡的生产性能和蛋品质。
优选的，所述当归、黄芪采用如下制备方法制得：按重量份将当归、黄芪置于发酵袋中，再加入中草药添加剂总量0.03-0.07%的微生物发酵菌种，再加入水，使得待发酵料的总含水量为待发酵量重量的40-50%，在温度为35-40℃的条件下发酵5-7天得发酵物。
优选的，所述微生物发酵菌种由枯草芽孢杆菌、凝结芽孢杆菌、黑曲霉菌、地衣芽孢杆菌按重量比为1：(0.5-1.5)：(0.5-1.5)：(0.5-2)混合而成，每种菌剂的含量大于1×1011cfu/g。
通过采用上述技术方案，当归、黄芪中含有丰富的微量元素以及营养成分，能够抑制血小板聚集及血栓形成，促进红细胞生成、造血干细胞增值，抗心肌缺血缺氧等，对子宫平滑肌具有双向调节作用。而采用枯草芽孢杆菌、凝结芽孢杆菌、黑曲霉菌、地衣芽孢杆菌对当归、黄芪进行发酵后，能够使得植物细胞壁被破碎的更加完全，有益成分的吸收速度提高，抗氧化功能更加显著，能够进一步改善输卵管健康。
优选的，所述益母草采用如下制备方法制得：将益母草置于发酵袋中，加入中草药添加剂总量0.3-0.9%的复合酶，再加入水，使得待酶解益母草的总含水量为待酶解益母草重量的40-50%在温度为50-60℃的条件下酶解2-6h得酶解益母草。
优选的，所述复合酶包括木聚糖酶、纤维素酶、漆酶，木聚糖酶、纤维素酶、漆酶按照重量比为（3-5）:（1-2）:2。
通过采用上述技术方案，益母草采用聚糖酶、纤维素酶、漆膜酶解后，使得益母草中的活性成分能够在蛋鸡输卵管中发挥充分作用，能够显著改善子宫部抗氧化酶的活性，有效保证蛋鸡产蛋末期的产蛋质量以及蛋品质。
本申请第二方面提供一种产蛋末期中草药添加剂在饲料中的应用，所述添加剂占全价料重量的0.2-0.8%。
综上所述，本发明具有以下有益效果：本申请的中草药添加剂选择当归、黄芪、淫羊藿、益母草、鱼腥草这五种中草药的组合时，能够对蛋鸡的生产性能、蛋白质、抗炎、抗氧化、免疫、抗病毒等均具有很好的作用效果，此外，本申请通过长期试验研究，这五种中草药的组合，不仅能够改善饲料适口性，同时能够有效改善蛋鸡子宫部和膨大部的抗氧化能力，进而提高蛋鸡的产蛋量。
具体实施方式
以下结合应用例对本发明作进一步详细说明。
本申请原料均采用市售。
采用烘干法测当归、黄芪、淫羊藿、益母草、鱼腥草的含水量，如下表所示
| 名称 | 当归 | 黄芪 | 淫羊藿 | 益母草 | 鱼腥草 |
| 含水量/% | 6.7 | 6.32 | 8.38 | 8.35 | 7.09 |
注：总含水量=额外加水量+中草药原料本身含水量
制备例1
当归、黄芪采用如下制备步骤：
（1）将当归、黄芪分别粉碎并过60目筛，
（2）将步骤（1）得到的当归粉末、黄芪粉末分别置于发酵呼吸袋中；
（3）向水中加入中草药添加剂总量0.03%的微生物发酵菌剂，再加入发酵呼吸袋中，使得待发酵料的总含水量为待发酵料重量的40%，后在温度为35℃的条件下发酵5天得发酵料，将发酵料置于干燥箱中，在55℃的条件下干燥，每两小时排一次干燥箱中的水，等干燥后粉碎，过60目筛后备用；其中微生物发酵剂包括枯草芽孢杆菌、凝结芽孢杆菌、黑曲霉菌、地衣芽孢杆菌，枯草芽孢杆菌、凝结芽孢杆菌、黑曲霉菌、地衣芽孢杆菌按重量比为1：1：1：1混合，各菌种含量如表1所示。
对比制备例1
当归、黄芪采用如下制备步骤：
（1）将当归、黄芪分别粉碎并过60目筛；
（2）将步骤（1）得到的当归、黄芪粉末置于发酵呼吸袋中；
（3）向水中加入中草药添加总量0.03%的复合酶，再加入发酵呼吸袋中，使得待酶解料的总含水量为待酶解料重量的40%，然后在温度为50℃的条件下酶解2h得酶解当归、酶解黄芪，将酶解当归、酶解黄芪分别置于干燥箱中，在55℃的条件下干燥，每两小时排一次干燥箱中的水，待干燥后粉碎，过60目筛后备用；其中复合酶包括木聚糖酶、纤维素酶、漆酶，木聚糖酶、纤维素酶、漆酶按照重量比为4:1.5:2，即木聚糖酶18.4g、纤维素酶6.9g、漆酶9.2g。
制备例2
当归、黄芪采用如下制备步骤：
（1）将当归、黄芪分别粉碎并过60目筛，
（2）将步骤（1）得到的当归粉末、黄芪粉末分别置于发酵呼吸袋中；
（3）向水中加入中草药添加剂总量0.05%的微生物发酵菌剂，再加入发酵呼吸袋中，使得待发酵料的总含水量为待发酵料重量的45%，后在温度为37℃的条件下发酵5天，得发酵料，将发酵料置于置于干燥箱中，在55℃的条件下干燥，每两小时排一次干燥箱中的水，待干燥后粉碎，过60目筛后备用；其中微生物发酵剂包括枯草芽孢杆菌、凝结芽孢杆菌、黑曲霉菌、地衣芽孢杆菌，枯草芽孢杆菌、凝结芽孢杆菌、黑曲霉菌、地衣芽孢杆菌按重量比为1：1：1：1混合，各菌种含量如表1所示。
制备例3
当归、黄芪采用如下制备步骤：
（1）将当归、黄芪分别粉碎并过60目筛，
（2）将步骤（1）得到的当归粉末、黄芪粉末分别置于发酵呼吸袋中；
（3）向水中加入中草药添加剂总量0.07%的微生物发酵菌剂，再加入发酵呼吸袋中，使得待发酵料的总含水量为待发酵料重量的50%，后在温度为40℃的条件下发酵7天，得发酵料，将发酵料置于干燥箱中，在55℃的条件下干燥，每两小时排一次干燥箱中的水，待干燥后粉碎，过60目筛后备用；其中微生物发酵剂包括枯草芽孢杆菌、凝结芽孢杆菌、黑曲霉菌、地衣芽孢杆菌，枯草芽孢杆菌、凝结芽孢杆菌、黑曲霉菌、地衣芽孢杆菌按重量比为1：1：1：1混合，各菌种含量如表1所示。
制备例4
当归、黄芪采用如下制备步骤，与制备例2的不同之处在于：
枯草芽孢杆菌、凝结芽孢杆菌、黑曲霉菌、地衣芽孢杆菌按重量比为1：1.5：0.5：2混合，其余与制备例2均相同，各菌种含量如表1所示。
制备例5
当归、黄芪采用如下制备步骤，与制备例2的不同之处在于：
枯草芽孢杆菌、凝结芽孢杆菌、黑曲霉菌、地衣芽孢杆菌按重量比为1：0.5：1.5：0.5混合，其余与制备例2均相同，各菌种含量如表1所示。
制备例1-5中中草药添加剂总量均为115kg。
表1制备例1-5各菌种具体含量 单位： g
| 类型 | 微生物发酵菌剂总添加量 | 枯草芽孢杆菌 | 凝结芽孢杆菌 | 黑曲霉菌 | 地衣芽孢杆菌 |
| 制备例1 | 34.5 | 8.625 | 8.625 | 8.625 | 8.625 |
| 制备例2 | 57.5 | 14.375 | 14.375 | 14.375 | 14.375 |
| 制备例3 | 80.5 | 20.125 | 20.125 | 20.125 | 20.125 |
| 制备例4 | 57.5 | 11.5 | 5.75 | 17.25 | 23 |
| 制备例5 | 57.5 | 16.429 | 8.214 | 24.643 | 8.214 |
制备例6
益母草采用如下制备步骤：
（1）将益母草粉碎过60目筛；
（2）将步骤（1）得到的益母草粉末置于发酵呼吸袋中；
（3）向水中加入中草药添加总量0.3%的复合酶，再加入发酵呼吸袋中，使得待酶解益母草的总含水量为待酶解益母草重量的40%，然后在温度为50℃的条件下酶解2h得酶解益母草，将酶解益母草置于干燥箱中，在55℃的条件下干燥，每两小时排一次干燥箱中的水，待干燥后粉碎，过60目筛后备用；其中复合酶包括木聚糖酶、纤维素酶、漆酶，木聚糖酶、纤维素酶、漆酶按照重量比为4:1.5:2，具体含量如表2所示。
对比制备例6
益母草采用如下制备步骤：
（1）将益母草粉碎过60目筛；
（2）将步骤（1）得到的益母草粉末置于发酵呼吸袋中；
（3）向水中加入中草药添加剂总量0.3%的微生物发酵菌剂，再加入发酵呼吸袋中，使得待发酵益母草的总含水量为待发酵益母草重量的40%，后在温度为35℃的条件下发酵5天得发酵益母草，将发酵益母草置于干燥箱中，在55℃的条件下干燥，每两小时排一次干燥箱中的水，待干燥后粉碎，过60目筛后备用；其中微生物发酵剂包括枯草芽孢杆菌、凝结芽孢杆菌、黑曲霉菌、地衣芽孢杆菌，枯草芽孢杆菌、凝结芽孢杆菌、黑曲霉菌、地衣芽孢杆菌按重量比为1：1：1：1混合，即枯草芽孢杆菌、凝结芽孢杆菌、黑曲霉菌、地衣芽孢杆菌的重量均为86.25g。
制备例7
益母草采用如下制备步骤：
（1）将益母草粉碎过60目筛；
（2）将步骤（1）得到的益母草粉末置于发酵呼吸袋中；
（3）向水中加入中草药添加总量0.5%的复合酶，再加入发酵呼吸袋中，使得待发酵益母草的总含水量为待发酵益母草重量的45%，然后在温度为55℃的条件下酶解4h得酶解益母草，将酶解益母草置于干燥箱中，在55℃的条件下干燥，每两小时排一次干燥箱中的水，待干燥后粉碎，过60目筛后备用；其中复合酶包括木聚糖酶、纤维素酶、漆酶，木聚糖酶、纤维素酶、漆酶按照重量比为4:1.5:2，具体含量如表2所示。
制备例8
益母草采用如下制备步骤：
（1）将益母草粉碎过60目筛；
（2）将步骤（1）得到的益母草粉末置于发酵呼吸袋中；
（3）向水中加入中草药添加总量0.9%的复合酶，再加入发酵呼吸袋中，使得待发酵益母草的总含水量为待发酵益母草重量的50%，然后在温度为60℃的条件下酶解6h得酶解益母草，将酶解益母草置于干燥箱中，在55℃的条件下干燥，每两小时排一次干燥箱中的水，待干燥后粉碎，过60目筛后备用；其中复合酶包括木聚糖酶、纤维素酶、漆酶，木聚糖酶、纤维素酶、漆酶按照重量比为4:1.5:2，具体含量如表2所示。
制备例9
益母草采用如下制备步骤，与制备例6的不同之处在于：
木聚糖酶、纤维素酶、漆酶按照重量比为3:1:2混合，其余均与制备例6中的相同，具体含量如表2所示。
制备例10
益母草采用如下制备步骤，与制备例6的不同之处在于：
木聚糖酶、纤维素酶、漆酶按照重量比为5:2:2混合，其余均与制备例6中的相同，具体含量如表2所示。
制备例6-10中中草药添加剂总量均为115kg。
表2制备例6-10中各酶的具体含量，单位：g
| 类型 | 木聚糖酶 | 纤维素酶 | 漆酶 |
| 制备例6 | 184 | 69 | 92 |
| 制备例7 | 307 | 115 | 153 |
| 制备例8 | 552 | 207 | 276 |
| 制备例9 | 207 | 69 | 69 |
| 制备例10 | 191 | 77 | 77 |
实施例1-4
一种产蛋末期中草药添加剂的制备方法，包括如下步骤：分别将当归、黄芪、淫羊藿、益母草、鱼腥草粉碎过60目筛，然后混合均匀，得到中草药添加剂，具体含量如表1所示。
表3应用例1-4中草药添加剂成分配比表 单位：kg
| 类型 | 当归 | 黄芪 | 益母草 | 淫羊藿 | 鱼腥草 |
| 应用例1 | 10 | 10 | 5 | 30 | 10 |
| 应用例2 | 10 | 20 | 10 | 40 | 20 |
| 应用例3 | 15 | 30 | 10 | 40 | 20 |
| 应用例4 | 20 | 40 | 15 | 50 | 30 |
对比实施例3-1
一种产蛋末期中草药添加剂的制备方法，与应用例3的不同之处在于，当归、黄芪、益母草、淫羊藿、鱼腥草分别采用制备例1的制备步骤进行发酵处理，其余均与应用例3中的相同。
对比实施例3-2
一种产蛋末期中草药添加剂的制备方法，与应用例3的不同之处在于，当归、黄芪、益母草、淫羊藿、鱼腥草分别采用制备例6的方法进行酶解处理，其余均与应用例3中的相同。
实施例5
一种产蛋末期中草药添加剂的制备方法，与应用例3的不同之处在于，当归、黄芪采用制备例1制备得到的当归、黄芪，其余与应用例3中的相同。
对比实施例5
一种产蛋末期中草药添加剂的制备方法，与应用例3的不同之处在于，当归、黄芪采用对比制备例1得到的当归、黄芪，其余与应用例3中的相同。
实施例6
一种产蛋末期中草药添加剂的制备方法，与应用例3的不同之处在于，当归、黄芪采用制备例2制备得到的当归、黄芪，其余与应用例3中的相同。
实施例7
一种产蛋末期中草药添加剂的制备方法，与应用例3的不同之处在于，当归、黄芪采用制备例3制备得到的当归、黄芪，其余与应用例3中的相同。
实施例8
一种产蛋末期中草药添加剂的制备方法，与应用例3的不同之处在于，当归、黄芪采用制备例4制备得到的当归、黄芪，其余与应用例3中的相同。
实施例9
一种产蛋末期中草药添加剂的制备方法，与应用例3的不同之处在于，当归、黄芪采用制备例5制备得到的当归、黄芪，其余与应用例3中的相同。
实施例10
一种产蛋末期中草药添加剂的制备方法，与应用例3的不同之处在于，益母草采用制备例6制备得到的酶解益母草，其余与应用例3中的相同。
对比实施例10
一种产蛋末期中草药添加剂的制备方法，与应用例3的不同之处在于，益母草采用对比制备例6制备得到的酶解益母草，其余与应用例3中的相同。
实施例11
一种产蛋末期中草药添加剂的制备方法，与应用例3的不同之处在于，益母草采用制备例7制备得到的酶解益母草，其余与应用例3中的相同。
实施例12
一种产蛋末期中草药添加剂的制备方法，与应用例3的不同之处在于，益母草采用制备例8制备得到的酶解益母草，其余与应用例3中的相同。
实施例13
一种产蛋末期中草药添加剂的制备方法，与应用例3的不同之处在于，益母草采用制备例9制备得到的酶解益母草，其余与应用例3中的相同。
实施例14
一种产蛋末期中草药添加剂的制备方法，与应用例3的不同之处在于，益母草采用制备例10制备得到的酶解益母草，其余与应用例3中的相同。
实施例15
一种产蛋末期中草药添加剂的制备方法，与应用例3的不同之处在于，当归、黄芪采用制备例2得到的当归、黄芪，益母草采用制备例6制备得到的酶解益母草，其余与应用例3中的相同。
对实施例3、对比实施例3-1和对比实施例3-2中的五种中草药成分检测，检测方法如下，检测结果如表4所示。
1、多糖测定及提取方法
（1）多糖提取方法：准确称取5g的药品，置于锥形瓶中，加入蒸馏水（料液比1:8）。放到水浴锅中，在90℃的条件下，水浴加热2.5h。将加热后的药品用纱布过滤，在3500r/min的条件下，离心10min，取上清液，放到旋转蒸发浓缩仪中，将溶液体积浓缩至10ml，加入4-6倍体积的95%乙醇，摇晃后静置，片刻后会有沉淀析出，将溶液放到离心管中，3500r/min离心10min，弃上清液取沉淀。将沉淀放到65℃干燥箱中干燥1.5h，即可得到粗多糖。
（2）标准曲线的制备
分别吸取0.2ml，0.4ml，0.6ml，0.8ml，1.0ml，1.2ml的标准品溶液，加蒸馏水至2ml并摇匀。加入5%的苯酚溶液1ml并摇匀，加5ml的浓硫酸并摇匀，在温室内静置10min，沸水浴15min，再冰浴冷却至室温。用酶标仪在490nm的波长下测定吸光度，以多糖浓度为横坐标，以吸光值为纵坐标，绘制标准曲线。
（3）测定多糖含量
抽取多糖粗提液0.5ml，用纯水稀释至100ml，抽取1ml提取液，加水1ml，0.5%苯酚溶液1ml，5ml浓H2SO4，放置10min。用酶标仪490nm，测OD值，以标准品的浓度为纵坐标（y），以OD值为横坐标（x），绘制标准曲线，y = 3.6895x + 0.0139（R2 = 0.9975），计算得到多糖浓度。
2、黄酮测定及提取方法
(1)提取方法
准确称取5g药品置于圆底烧瓶中，加入75ml（料液比1:15）的乙醇，乙醇浓度为70%，在70℃的条件下，水浴加热100min。将加热后的溶液过滤，并用相同浓度的乙醇定容至100ml的容量瓶中待测。
(2)标准曲线的制备
取样品对照品25mg，置于50ml的容量瓶中，加入少量95%的乙醇溶解并定容至刻度，摇匀，即得样品对照品溶液（0.5mg/ml），分别吸取样品对照品溶液0.2、0.4、0.6、0.8、1.0、1.2ml，置于10ml的具塞试管中，各加水至5.0ml，之后加入5%的亚硝酸钠溶液0.6ml，摇匀，放6min。再加入10%的硝酸铝溶液0.6ml，摇匀后放6min。加入4%的氢氧化钠溶液3.0ml，加水至刻度，摇匀后放置15min，用酶标仪510nm的波长下测定吸光度。
(3)黄酮含量的测定
分别粗提液取1ml，加入4%的氢氧化钠溶液3.0ml，加水至刻度，摇匀后放置15min，用酶标仪在510nm的波长下测定吸光度。以标准品的浓度为纵坐标（y），以吸光度为横坐标（x），绘制标准曲线，y = 2.2931x + 0.152（R2 =0.9839），计算得到黄酮浓度。
3、绿原酸测定及提取方法
（1）提取方法
准确称取干物质1g左右，置于锥形瓶中，量取50ml95%的乙醇溶解样品，并置于85℃的恒温水浴箱中4h。放置、冷却至室温，过滤，然后加95%的乙醇将提取液定容至250ml容量瓶，待用。
（2）标准曲线的制备
精密称取绿原酸标准样品1g，用95%乙醇溶解，转移到250ml容量瓶中，加95%乙醇到刻度，混匀。精密吸取0.2、0.4、0.6、0.8、1.2ml到25ml容量瓶中，加95%乙醇到刻度，混匀，在330nm处测定吸光度，以绿原酸标准品的浓度为横坐标，以其吸光度为纵坐标绘制标准曲线，并求出相应的回归方程。
（3）绿原酸测定
准确吸取样品提取液5ml于25ml容量瓶中，加95%的乙醇稀释到刻度，得到待测样品液。以95%的乙醇作空白，用酶标仪在330nm处测定OD值，由标准曲线计算出待测样品液浓度，以标准品的浓度为纵坐标（y），以OD值为横坐标（x），绘制标准曲线，y = 0.9316x -0.0058（R2 = 0.9805），计算得到绿原酸浓度。
生物碱测定及提取方法
（1）生物碱提取
益母草总生物碱的提取：益母草药材5g，加入12倍量70%乙醇提取2h，重提1次，合并滤液，4℃冰箱过夜；抽滤，浓缩，冷冻干燥备用。精密量取溶液2mL置25mL量瓶中，精密加入新制的2%浓硫酸溶液6ml，摇匀，用0.1mol/L盐酸稀释至刻度，摇匀，冰水浴中放1h。
（2）标准曲线的绘制
精密称取生物碱标准样品1g(0.25mmol)，用95%乙醇溶解，转移到250ml容量瓶中，加95%乙醇到刻度，混匀。精密吸取0.1、0.2、0.4、0.6、0.8、1mL到25ml容量瓶中，加95%乙醇到刻度，混匀，此为标准系列溶液。在330nm处测定吸光度，以生物碱标准品的浓度为横坐标，以其吸光度为纵坐标绘制标准曲线，并求出相应的回归方程。
（3）生物碱测定
分别取溶液10mL，3900r/min离心10min，取上清，用酶标仪在520nm波长处测定OD值，以标准品的浓度为纵坐标（y），以OD值为横坐标（x），绘制标准曲线：y = 4.3613x +0.3053（R2 = 0.9861），计算得到生物碱浓度。
五种中草药主要成分的比较，通过计算，具体浓度含量如表4所示。
表4五种中草药主要成分含量
| 处理方法 | 实施例3（不处理） | 对比实施例3-1（发酵） | 对比实施例3-2（酶解） |
| 当归多糖含量/% | 7.74 | 17.05 | 8.28 |
| 黄芪多糖含量/% | 10.58 | 21.06 | 11.93 |
| 淫羊藿黄酮含量/% | 7.58 | 8.14 | 7.99 |
| 鱼腥草绿原酸含量/% | 11.87 | 12.80 | 11.63 |
| 益母草生物碱含量/% | 1.39 | 1.37 | 2.52 |
饲喂试验
选取健康、体况相近的68周龄京红蛋鸡330只，随机分成22组，每组15只，各组间初始产蛋率无显著差异，将实施例和对比实施例得到的中草药添加剂加入全价饲料中得到应用例和对比应用例，分别进行饲喂京红蛋鸡，其中全价饲料包括玉米62kg、豆粕24kg、石粉9kg、预混料5kg、中草药添加剂0.2kg，中草药添加剂占全价料重量的0.2%；其中预混料为每千克饲料提供VA 12500IU，VD35250IU，VE21.25mg，VK3 4.375mg，VB1 2.5mg，VB2 11.25mg，VB6 6.25mg，VB12 3mg，烟酰胺50mg，泛酸钙40.75mg，叶酸6mg，生物素2.375mg，Fe 87.5mg，Zn 68mg，Cu 9.5mg，Mn 75mg，碘1.5mg，硒0.5mg。
预饲期1周，正饲期6周，每天记录平均蛋重、平均产蛋率，每两周为计算单位计算平均日采食量和料蛋比。分别于正饲期的第2、4、6的周末用蛋壳强度分析仪测定蛋壳强度，用综合蛋白质分析仪测其蛋壳厚度、蛋白高度、哈夫单位和蛋黄颜色，用游标卡尺测其蛋形指数，检测结果如下表所示。
正饲结束后，每组随机取一只鸡，静脉处死取血，相同位置取其输卵管膨大部和子宫部，分别测其抗氧化酶活力、抗氧化基因。
抗氧化酶活性检测：取0.1g组织匀浆，加入1mL生理盐水，用震荡研磨仪将其研磨粉碎，在离心机4000r/min的条件下离心10min，取上清液，采用南京建成生产的抗氧化试剂盒测定抗氧化酶活力，并严格按照试剂盒说明书中的步骤进行操作。
抗氧化基因检测步骤：
一、组织中总RNA的提取
（1）取0.1g组织于1.5mL Rnase-Free离心管中，加入1mL Trizol 使组织破碎，将破碎后的组织液转移到新的1.5mL Rnase-Free离心管中,冰上孵育5min；
（2）静置后加入200μL氯仿，上下颠倒充分混匀，冰置3min，置于高速冷冻离心机中，在4℃、12000rpm的条件下离心10min；
（3）离心结束后，小心取出试管，离心完成后的混合物分为三层，分别是下层为红色的酚-氯仿相、中间相以及上层的无色水相，RNA存在于上层无色水相，取400μL无色水相于新1.5mL Rnase-Free离心管中；
（4）加入预冷的异丙醇500μL，上下颠倒2-3次离心管，后冰上静置10min，在4℃、12000rpm的条件下离心10min，弃去试管中液体，保留底部沉淀；
（5）加入1mL预冷的80%乙醇溶液洗涤RNA沉淀，轻轻摇晃使沉淀悬浮，在4℃、12000rpm的条件下离心10min，弃乙醇（将此步骤重复2-3次）；
（6）弃乙醇后，将上述得到的带有RNA沉淀的离心管放在超净台上室温静置至透明，向晾干的RNA沉淀中加入RNA-Free Water，震荡混匀，后用于总RNA的检测和反转录；
总RNA检测：取1μL RNA样品，采用Genova Nano分光光度计测定RNA浓度及A260/A280的吸光值，比值在1.8-2.1之间指示时，RNA质量可靠；
（7）将RNA反转录成cDNA。
二、抗氧化基因的检测
取cDNA 2.8μL、去离子水28μL、mix酶35μL、基因引物4.2μL，使用美国Aglilent(my18025525)Qpcr仪器测其基因差异表达。
对照组为只饲喂全价饲料，即全价饲料中不添加本申请的中草药添加剂。
表5蛋鸡产蛋性能检测结果表
| 项目 | 产蛋率/% | 平均日耗料量/g | 料蛋比 | 平均蛋重/g |
| 对照组 | 75.74 | 125.13 | 2.78 | 55.31 |
| 应用例1 | 78.63 | 123.01 | 2.54 | 59.25 |
| 应用例2 | 79.26 | 122.15 | 2.51 | 60.31 |
| 应用例3 | 80.74 | 121.23 | 2.45 | 61.13 |
| 对比应用例3-1 | 80.96 | 120.91 | 2.39 | 61.95 |
| 对比应用例3-2 | 80.89 | 121.24 | 2.38 | 61.83 |
| 应用例4 | 79.89 | 121.94 | 2.68 | 60.98 |
| 应用例5 | 81.02 | 121.26 | 2.35 | 61.52 |
| 对比应用例5 | 80.56 | 121.31 | 2.39 | 61.42 |
| 应用例6 | 81.78 | 120.15 | 2.31 | 61.89 |
| 应用例7 | 81.54 | 120.54 | 2.33 | 61.63 |
| 应用例8 | 81.65 | 120.21 | 2.31 | 61.85 |
| 应用例9 | 81.72 | 120.26 | 2.31 | 61.87 |
| 应用例10 | 80.96 | 121.06 | 2.41 | 61.26 |
| 对比应用例10 | 80.54 | 121.15 | 2.42 | 61.02 |
| 应用例11 | 81.23 | 120.78 | 2.37 | 61.28 |
| 应用例12 | 81.31 | 120.81 | 2.37 | 61.35 |
| 应用例13 | 81.32 | 120.65 | 2.33 | 61.46 |
| 应用例14 | 81.42 | 120.23 | 2.34 | 61.42 |
| 应用例15 | 84.76 | 118.23 | 2.23 | 64.26 |
将应用例15得到的中草药添加剂按照全价料的0.4%和0.8%加入全价料后，分别得到应用例16和应用例17，分别测定应用例16和应用例17饲喂蛋鸡后的产蛋性能，检测结果如续表5中所示。
续表5应用例16-17蛋鸡产蛋性能检测结果表
| 项目 | 产蛋率/% | 平均日耗料量/g | 料蛋比 | 平均蛋重/g |
| 应用例16 | 85.19 | 117.65 | 2.19 | 64.82 |
| 应用例17 | 85.13 | 118.36 | 2.21 | 63.41 |
结合表4和表5：
采用申请应用例和对比应用例的饲料饲喂蛋鸡后，蛋鸡的产蛋率和平均蛋重相比于对照组均增高，同时平均日耗料和料蛋比相比于对照组均降低，说明本申请的中草药添加剂对蛋鸡的产蛋性能具有促进作用。
从应用例3、对比应用例3-1、对比应用例3-2与应用例15相比，将5种中草药全部进行发酵处理或全部采用酶解处理后，其得到的结果比应用例15的结果差，且从表4的主要成分含量中也可以看出，对比实施例3-1和对比实施例3-2中5种中草药成分含量的总量多于实施例3中的5种中草药成分的含量，但是从表4中也可以看出，当归、黄芪采用发酵的方式时，其多糖含量优于不处理和酶解的，淫羊藿采用不处理方式时，黄酮含量最高，鱼腥草采用不处理方式、酶解剂发酵方式后，绿原酸的含量基本差不多，而益母草采用酶解时生物碱含量最高，也从本申请的应用例15中可以看出，应用例15的各项数据均优于对比应用例3-1和对比应用例3-2，说明本申请应用例15的方案相对来说不仅可提高蛋鸡的产蛋性能，同时还能够降低中草药处理的成本。
从应用例15-17中可以看出，应用例16中的各项性能较佳，说明当中草药添加剂的量为全价饲料重量的0.4%时，饲喂效果较好。
表6鸡蛋综合蛋白质检测结果表
| 项目 | 蛋壳强度（Kgf） | 蛋白高度(mm) | 蛋黄颜色 | 哈夫单位 | 蛋形指数 |
| 对照组 | 2.46 | 4.88 | 5.12 | 63.52 | 1.30 |
| 应用例1 | 2.54 | 4.99 | 5.52 | 66.43 | 1.32 |
| 应用例2 | 2.61 | 5.08 | 5.61 | 67.12 | 1.31 |
| 应用例3 | 2.67 | 5.10 | 5.66 | 67.56 | 1.32 |
| 对比应用例3-1 | 2.71 | 5.11 | 5.70 | 67.68 | 1.32 |
| 对比应用例3-2 | 2.68 | 5.11 | 5.69 | 67.64 | 1.32 |
| 应用例4 | 2.65 | 5.08 | 5.60 | 67.42 | 1.31 |
| 应用例5 | 2.73 | 5.13 | 5.75 | 67.72 | 1.32 |
| 对比应用例5 | 2.70 | 5.11 | 5.69 | 67.64 | 1.32 |
| 应用例6 | 2.79 | 5.16 | 5.83 | 67.79 | 1.31 |
| 应用例7 | 2.81 | 5.15 | 5.78 | 67.73 | 1.31 |
| 应用例8 | 2.80 | 5.15 | 5.85 | 67.78 | 1.31 |
| 应用例9 | 2.76 | 5.17 | 5.80 | 67.80 | 1.31 |
| 应用例10 | 2.69 | 5.14 | 5.72 | 67.83 | 1.31 |
| 对比应用例10 | 2.67 | 5.15 | 5.65 | 67.62 | 1.31 |
| 应用例11 | 2.73 | 5.13 | 5.76 | 67.60 | 1.32 |
| 应用例12 | 2.78 | 5.18 | 5.81 | 67.63 | 1.32 |
| 应用例13 | 2.75 | 5.15 | 5.83 | 67.63 | 1.31 |
| 应用例14 | 2.76 | 5.16 | 5.82 | 67.62 | 1.32 |
| 应用例15 | 3.00 | 5.22 | 6.14 | 69.18 | 1.31 |
将应用例15得到的中草药添加剂按照全价料的0.4%和0.8%加入全价料后，分别得到应用例16和应用例17，分别测定应用例16和应用例17饲喂蛋鸡后的产蛋性能，检测结果如续表6中所示。
续表6鸡蛋综合蛋白质检测结果表
| 项目 | 蛋壳强度（Kgf） | 蛋白高度(mm) | 蛋黄颜色 | 哈夫单位 | 蛋形指数 |
| 应用例16 | 3.00 | 5.17 | 6.04 | 69.51 | 1.31 |
| 应用例17 | 2.83 | 5.78 | 6.12 | 72.72 | 1.32 |
从表6中可以看出：
采用本申请应用例和对比应用例得到的饲料饲喂蛋鸡后，鸡蛋的蛋壳强度、蛋白高度、蛋黄颜色、哈夫单位均优于对照组中的蛋壳强度、蛋白高度、蛋黄颜色以及哈夫单位，说明本申请的中草药添加剂能够提高鸡蛋的综合蛋品质。
表7中草药添加剂对膨大部部抗氧化能力的影响
| 项目 | 过氧化氢酶U/mgpro | 超氧化物歧化酶U/ML | 谷胱甘肽过氧化物酶U/ML | 羟自由基清除能力U/ML | 超氧阴离子清除能力U/L | 丙二醛NMOL/ML |
| 对照组 | 272.45 | 164.73 | 9.10 | 465.74 | 442.36 | 14.02 |
| 应用例1 | 279.15 | 168.15 | 9.45 | 457.23 | 444.78 | 13.58 |
| 应用例2 | 280.35 | 171.54 | 9.84 | 478.74 | 447.36 | 13.34 |
| 应用例3 | 281.93 | 174.25 | 9.96 | 481.56 | 450.50 | 12.15 |
| 对比应用例3-1 | 283.67 | 180.67 | 10.25 | 488.73 | 460.12 | 11.56 |
| 对比应用例3-2 | 284.93 | 181.73 | 10.13 | 485.36 | 455.73 | 11.47 |
| 应用例4 | 282.56 | 169.45 | 9.43 | 473.42 | 450.87 | 11.89 |
| 应用例5 | 285.45 | 187.62 | 10.24 | 487.64 | 462.74 | 11.46 |
| 对比应用例5 | 282.52 | 182.71 | 9.78 | 483.46 | 455.23 | 11.73 |
| 应用例6 | 286.73 | 192.22 | 10.31 | 495.71 | 467.21 | 11.46 |
| 应用例7 | 288.31 | 197.53 | 10.29 | 500.36 | 473.58 | 11.41 |
| 应用例8 | 287.67 | 195.43 | 10.26 | 497.34 | 470.61 | 11.39 |
| 应用例9 | 288.02 | 196.33 | 10.25 | 494.56 | 472.37 | 11.42 |
| 应用例10 | 283.51 | 176.32 | 10.04 | 485.76 | 455.87 | 11.96 |
| 对比应用例10 | 282.89 | 176.16 | 9.96 | 482.23 | 450.87 | 12.16 |
| 应用例11 | 283.89 | 180.41 | 10.04 | 491.36 | 467.31 | 11.92 |
| 应用例12 | 285.67 | 183.73 | 10.04 | 496.73 | 472.54 | 11.87 |
| 应用例13 | 284.36 | 184.28 | 10.04 | 495.27 | 469.73 | 11.86 |
| 应用例14 | 285.53 | 183.93 | 10.04 | 493.56 | 470.26 | 11.89 |
| 应用例15 | 293.76 | 224.33 | 13.89 | 522.41 | 491.28 | 5.05 |
将应用例15得到的中草药添加剂按照全价料的0.4%和0.8%加入全价料后，分别得到应用例16和应用例17，分别测定应用例16和应用例17饲喂蛋鸡后的产蛋性能，检测结果如续表7中所示。
续表7中草药添加剂对膨大部部抗氧化能力的影响
| 项目 | 过氧化氢酶U/mgpro | 超氧化物歧化酶U/ML | 谷胱甘肽过氧化物酶U/ML | 羟自由基清除能力U/ML | 超氧阴离子清除能力U/L | 丙二醛NMOL/ML |
| 应用例16 | 325.44 | 269.30 | 24.12 | 724.27 | 523.03 | 7.54 |
| 应用例17 | 314.45 | 355.99 | 14.44 | 698.48 | 477.72 | 5.66 |
从表7中可以看出：
饲喂本申请应用例和对比应用例得到的饲料时，其过氧化氢酶、超氧化物歧化酶、谷胱甘肽过氧化物酶、羟自由基清除能力、超氧阴离子清除能力的含量均优于对照组中的含量，且本申请应用例和对比应用例的丙二醛含量远远低于对照组的中含量，说明饲喂本申请应用例和对比应用例的饲料时，能够有效提高膨大部的抗氧化能力。
表8中草药添加剂对子宫部抗氧化能力的影响
| 项目 | 过氧化氢酶U/mgpro | 超氧化物歧化酶U/ML | 谷胱甘肽过氧化物酶U/ML | 羟自由基清除能力U/ML | 超氧阴离子清除能力U/L | 丙二醛NMOL/ML |
| 对照组 | 14.26 | 180.09 | 42.19 | 18.43 | 1966.23 | 40.79 |
| 应用例1 | 14.57 | 182.16 | 42.56 | 19.23 | 1972.36 | 38.65 |
| 应用例2 | 14.72 | 183.25 | 42.63 | 19.89 | 1973.98 | 36.21 |
| 应用例3 | 14.96 | 183.69 | 43.21 | 21.26 | 1977.52 | 35.56 |
| 对比应用例3-1 | 15.02 | 184.02 | 43.26 | 22.32 | 1978.93 | 35.26 |
| 对比应用例3-2 | 15.08 | 183.98 | 43.54 | 22.74 | 1979.89 | 35.15 |
| 应用例4 | 14.86 | 183.71 | 42.86 | 20.36 | 1973.21 | 36.68 |
| 应用例5 | 15.29 | 184.56 | 43.58 | 22.34 | 1982.53 | 35.23 |
| 对比应用例5 | 14.93 | 183.52 | 43.42 | 21.56 | 1980.74 | 35.43 |
| 应用例6 | 15.34 | 184.89 | 44.02 | 24.87 | 1983.54 | 34.23 |
| 应用例7 | 15.54 | 184.92 | 44.11 | 25.56 | 1984.32 | 33.16 |
| 应用例8 | 15.42 | 184.35 | 43.98 | 23.74 | 1982.97 | 33.58 |
| 应用例9 | 15.32 | 184.67 | 43.76 | 23.69 | 1983.02 | 33.26 |
| 应用例10 | 14.98 | 183.73 | 43.62 | 22.67 | 1979.64 | 34.69 |
| 对比应用例10 | 14.65 | 182.31 | 43.59 | 21.78 | 1977.56 | 35.11 |
| 应用例11 | 15.07 | 184.56 | 43.78 | 23.86 | 1979.23 | 34.21 |
| 应用例12 | 15.11 | 184.62 | 44.97 | 24.02 | 1983.69 | 34.02 |
| 应用例13 | 15.28 | 184.26 | 44.65 | 23.87 | 1982.10 | 34.11 |
| 应用例14 | 15.23 | 184.37 | 44.72 | 23.64 | 1981.56 | 34.17 |
| 应用例15 | 16.98 | 188.69 | 45.38 | 31.3 | 2092.79 | 28.78 |
将应用例15得到的中草药添加剂按照全价料的0.4%和0.8%加入全价料后，分别得到应用例16和应用例17，分别测定应用例16和应用例17饲喂蛋鸡后的产蛋性能，检测结果如续表8中所示。
续表8中草药添加剂对子宫部抗氧化能力的影响
| 项目 | 过氧化氢酶U/mgpro | 超氧化物歧化酶U/ML | 谷胱甘肽过氧化物酶U/ML | 羟自由基清除能力U/ML | 超氧阴离子清除能力U/L | 丙二醛NMOL/ML |
| 应用例16 | 33.21 | 171.12 | 42.66 | 18.1 | 1923.35 | 24.06 |
| 应用例17 | 22.03 | 192.58 | 57.65 | 20.83 | 1983.69 | 27.48 |
从表8中可以看出：
饲喂本申请应用例和对比应用例的饲料时，其过氧化氢酶、超氧化物歧化酶、谷胱甘肽过氧化物酶、羟自由基清除能力、超氧阴离子清除能力的含量均优于对照组中的含量，说明饲喂本申请应用例和对比应用例的饲料时，能够有效提高子宫部的抗氧化能力。
检测应用例3、应用例15的中草药添加剂对蛋鸡子宫部、膨大部抗氧化基因的影响，同时将应用例15得到的中草药添加剂按照全价料的0.4%和0.8%加入全价料后，分别得到应用例16和应用例17，分别测定应用例16和应用例17的添加量对蛋鸡子宫部抗氧化基因的影响。
表9中草药添加剂对子宫部抗氧化基因的影响
| 类型 | 对照组 | 应用例3 | 应用例15 | 应用例16 | 应用例17 |
| CAT | 0.99 | 1.12 | 3.40 | 3.55 | 0.71 |
| SOD1 | 0.91 | 1.23 | 6.21 | 3.30 | 1.53 |
| SOD2 | 1.07 | 1.12 | 2.97 | 0.62 | 0.67 |
| GPX1 | 0.98 | 1.03 | 1.63 | 1.94 | 1.84 |
| GPX4 | 1.13 | 1.69 | 5.58 | 2.13 | 1.26 |
| Nrf2 | 1.10 | 1.25 | 1.20 | 3.28 | 1.53 |
表10中草药添加剂对膨大部抗氧化基因的影响
| 类型 | 对照组 | 应用例3 | 应用例15 | 应用例16 | 应用例17 |
| CAT | 0.97 | 1.02 | 3.76 | 1.74 | 3.83 |
| SOD1 | 1.23 | 1.68 | 3.26 | 1.28 | 2.49 |
| SOD2 | 1.08 | 1.19 | 1.30 | 1.36 | 2.06 |
| GPX1 | 1.03 | 1.52 | 3.11 | 1.74 | 5.16 |
| GPX4 | 0.95 | 2.02 | 4.29 | 3.83 | 3.98 |
| Nrf2 | 0.91 | 1.11 | 1.98 | 1.13 | 1.96 |
结合表9和表10中可以看出：
与对照组相比，在全价饲料中添加0.2%、0.4%.08%时的中草药添加剂时，显著提高了CAT、SOD1、SOD2、GPX1、GPX4的表达量，以及Nrf2信号通路mRNA的表达水平，进而说明本申请中草药添加剂能够有效提高蛋鸡子宫部和膨大部的抗氧化能力。
本具体实施方式的应用例均为本发明的较佳应用例，并非依此限制本发明的保护范围，故：凡依本发明的结构、形状、原理所做的等效变化，均应涵盖于本发明的保护范围之内。
Claims (7)
1.一种产蛋末期中草药添加剂，其特征在于：按重量份剂，所述中草药添加剂包括当归10-20份、黄芪10-40份、淫羊藿5-15份、益母草30-50份、鱼腥草10-30份。
2.根据权利要求1所述的一种产蛋末期中草药添加剂，其特征在于：所述中草药添加剂包括当归10-20份、黄芪20-40份、淫羊藿10-15份、益母草40-50份、鱼腥草20-30份。
3.根据权利要求1或2所述的一种产蛋末期中草药添加剂，其特征在于：所述当归、黄芪采用如下制备方法制得：按重量份将当归、黄芪分别置于发酵袋中，再加入中草药添加剂总量0.03-0.07%的微生物发酵菌种，再加入水，使得待发酵料的总含水量为待发酵量重量的40-50%，在温度为35-40℃的条件下发酵5-7天得发酵物。
4.根据权利要求3所述的一种产蛋末期中草药添加剂，其特征在于：所述微生物发酵菌种由枯草芽孢杆菌、凝结芽孢杆菌、黑曲霉菌、地衣芽孢杆菌按重量比为1：(0.5-1.5)：(0.5-1.5)：(0.5-2)混合而成，每种菌剂的含量大于1×1011cfu/g。
5.根据权利要求1或2所述的一种产蛋末期中草药添加剂，其特征在于：所述益母草采用如下制备方法制得：将益母草置于发酵袋中，加入中草药添加剂总量0.3-0.9%的复合酶，再加入水，使得待酶解益母草的总含水量为待酶解益母草重量的40-50%在温度为50-60℃的条件下酶解2-6h得酶解益母草。
6.根据权利要求5所述的一种产蛋末期中草药添加剂，其特征在于：所述复合酶包括木聚糖酶、纤维素酶、漆酶，木聚糖酶、纤维素酶、漆酶按照重量比为（3-5）:（1-2）:2。
7.一种产蛋末期中草药添加剂在饲料中的应用，其特征在于：所述中草药添加剂占全价料重量的0.2-0.8%。
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|---|---|---|---|---|
| CN117562190A (zh) * | 2024-01-19 | 2024-02-20 | 山东菁华农牧发展有限公司 | 一种改善蛋鸡产蛋后期蛋品质量和产蛋性能的饲料添加剂 |
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| CN103947875A (zh) * | 2014-04-15 | 2014-07-30 | 河南师范大学 | 一种中药饲料添加剂及其应用 |
| CN105233096A (zh) * | 2015-11-11 | 2016-01-13 | 郑州后羿制药有限公司 | 一种提高蛋鸡产蛋率的中兽药及其制备方法 |
| CN106879859A (zh) * | 2016-12-30 | 2017-06-23 | 河南金尔康生物科技有限公司 | 一种益母催情增蛋散饲料添加剂及其制备方法、应用 |
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2022
- 2022-03-08 CN CN202210219218.0A patent/CN114468176A/zh active Pending
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