CN114460314B - 一种多种维生素d类似物检测试剂盒及检测方法 - Google Patents

一种多种维生素d类似物检测试剂盒及检测方法 Download PDF

Info

Publication number
CN114460314B
CN114460314B CN202210381820.4A CN202210381820A CN114460314B CN 114460314 B CN114460314 B CN 114460314B CN 202210381820 A CN202210381820 A CN 202210381820A CN 114460314 B CN114460314 B CN 114460314B
Authority
CN
China
Prior art keywords
detection
carbon chain
sample
vitamin
fat
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Active
Application number
CN202210381820.4A
Other languages
English (en)
Other versions
CN114460314A (zh
Inventor
郝存
余占江
陈永强
平凡
高巍巍
李凡
韦莹倩
刘先路
赵苓苓
时鸿
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Pro Med Beijing Technology Co ltd
Original Assignee
Pro Med Beijing Technology Co ltd
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Pro Med Beijing Technology Co ltd filed Critical Pro Med Beijing Technology Co ltd
Priority to CN202210381820.4A priority Critical patent/CN114460314B/zh
Publication of CN114460314A publication Critical patent/CN114460314A/zh
Application granted granted Critical
Publication of CN114460314B publication Critical patent/CN114460314B/zh
Active legal-status Critical Current
Anticipated expiration legal-status Critical

Links

Images

Classifications

    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
    • G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
    • G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
    • G01N33/82—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving vitamins or their receptors
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
    • G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
    • G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
    • G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
    • G01N33/543—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor with an insoluble carrier for immobilising immunochemicals
    • G01N33/544—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor with an insoluble carrier for immobilising immunochemicals the carrier being organic
    • G01N33/548—Carbohydrates, e.g. dextran
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
    • G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
    • G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
    • G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
    • G01N33/558—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor using diffusion or migration of antigen or antibody
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
    • G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
    • G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
    • G01N33/58—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving labelled substances
    • G01N33/582—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving labelled substances with fluorescent label
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
    • G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
    • G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
    • G01N33/58—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving labelled substances
    • G01N33/585—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving labelled substances with a particulate label, e.g. coloured latex

Abstract

本发明公开了一种多种维生素D类似物检测试剂盒，包括样本稀释液母液和检测卡，检测卡由外壳和检测条组成，检测条包括PVC底板，PVC底板上面依次粘有吸水垫、硝酸纤维素膜、样品垫，所述硝酸纤维素膜上设置有检测线和质控线，样本稀释液母液中含有荧光微球标记脂溶性小分子，所述荧光微球与脂溶性小分子之间通过短碳链偶联；所述检测线位置包被有所述脂溶性小分子抗体，本发明的试剂盒可以及时快速检测质控品中各种形态的维生素D类似物的含量，可以实时快速监测质控品的质量，保证试剂的稳定性。

Description

一种多种维生素D类似物检测试剂盒及检测方法
技术领域
本申请涉及分析检测技术领域，具体而言，涉及一种多种维生素D类似物检测试剂盒及检测方法。
背景技术
目前维生素D的免疫测定方法主要有化学发光法、酶联免疫法、荧光免疫法等。主要检测25羟基维生素D总（D2+D3）或者25羟基维生素D3，检测的样本主要是血清或者血浆样本，检测的范围在0-200ng/mL。
在25羟基维生素D总（D2+D3）或者25羟基维生素D3检测用试剂盒的生产和质控过程中，经常会用到各种形态的维生素D类似物作为质控品来保证试剂盒的质量。例如，在25羟基维生素D总（D2+D3）的试剂盒生产和检测过程中，用25羟基维生素D3和25羟基维生素D2来检测25羟基维生素D总（D2+D3）试剂盒的灵敏度、线性范围、精密度等指标，用维生素D3、1，25-二羟维生素D3、24，25-二羟维生素D3、维生素D2、1，25-二羟维生素D2、24，25-二羟维生素D2来检测25羟基维生素D总（D2+D3）试剂盒的特异性。在25羟基维生素D3的试剂盒生产和检测过程中，用25羟基维生素D3来检测25羟基维生素D3试剂盒的灵敏度、线性范围、精密度等指标，用维生素D3、1，25-二羟维生素D3、24，25-二羟维生素D3、25羟基维生素D2、维生素D2、1，25-二羟维生素D2、24，25-二羟维生素D2等各种形态的维生素D类似物来检测25羟基维生素D3试剂盒的特异性。各种形态的维生素D类似物（25羟基维生素D3、维生素D3、1，25-二羟维生素D3、24，25-二羟维生素D3、25羟基维生素D2、维生素D2、1，25-二羟维生素D2、24，25-二羟维生素D2等）对试剂盒的质量控制均有非常重要的作用。
在25羟基维生素D总（D2+D3）和在25羟基维生素D3的试剂盒生产和检验过程中，质量人员对25羟基维生素D3和25羟基维生素D2质控品质量情况非常重视，但经常会忽略维生素D3、1，25-二羟维生素D3、24，25-二羟维生素D3、25羟基维生素D2、维生素D2、1，25-二羟维生素D2、24，25-二羟维生素D2等特异性质控品的质量，从而引起试剂盒的特异性问题，因此检测质控品中不同形态的维生素D类似物的含量具有重要的意义。
现有技术中检测各个形态维生素D类似物的方法主要是质谱法和免疫试剂盒法，但是质谱法耗时时间长，价格昂贵。而免疫试剂盒检测，只能检测25羟基维生素D总(D2+D3)或者25羟基维生素D3，不能检测干扰物质，例如不能检测维生素D3、1，25-二羟维生素D3、24，25-二羟维生素D3、维生素D2、1，25-二羟维生素D2、24，25-二羟维生素D2等。
发明内容
本发明提供了一种多种维生素D类似物检测试剂盒，包括样本稀释液母液和检测卡，检测卡由外壳和检测条组成，检测条包括PVC底板，PVC底板上面依次粘由吸水垫、硝酸纤维素膜、样品垫，所述硝酸纤维素膜上设置有检测线和质控线，所述样本稀释液母液中含有荧光微球标记脂溶性小分子，所述荧光微球与脂溶性小分子之间通过短碳链偶联；所述检测线位置包被有所述脂溶性小分子抗体。
所述脂溶性小分子为25羟基维生素D3或25羟基维生素D2。
和/或，所述维生素D类似物为维生素D3、1，25-二羟维生素D3、24，25-二羟维生素D3、25羟基维生素D2、维生素D2、1，25-二羟维生素D2、24，25-二羟维生素D2。
所述短碳链为包括4-10个碳的短链。具体的，所述短碳链为γ-氨基丁酸、5-氨基戊酸、6-氨基己酸、7-氨基庚酸、8-氨基辛酸、9-氨基壬酸或10-氨基癸酸的一种或多种。
所述样本稀释液母液的制备方法包括：
（1）活化荧光微球的羧基，使其与短碳链的氨基反应，进而将短碳链偶联到荧光微球上；
（2）继续活化步骤（1）获得的荧光微球上偶联的短碳链的羧基，使其与脂溶性小分子的氨基反应，将脂溶性小分子偶联到短碳链上，进而形成荧光微球-短碳链-脂溶性小分子结构。
进一步的，
（1）所述样本稀释液母液的制备方法还包括采用封闭剂封闭所述荧光微球-短碳链-脂溶性小分子结构标记过程中剩余的羧基活化位点，所述质控线位置包被对应的封闭剂抗体；
优选的，所述封闭剂为BSA；
和/或，（2）所述活化是通过添加EDC和NHS溶液反应完成的。
具体的，所述样本稀释液母液的制备方法包括：
（1）每1mL荧光微球中加入200uL 质量百分比浓度为1-5%的EDC、200uL质量百分比浓度为1-5%的NHS,震荡1-5小时，10000×g离心30min；
（2）取沉淀用复溶液复溶到1mL，加入1-30mg短碳链，震荡1-5小时，10000×g离心30min；
（3）取沉淀用复溶液复溶到1mL，加入200uL质量百分比浓度为1-5%的EDC，200uL质量百分比浓度为1-5%的NHS，震荡1-5小时，10000×g离心30min；
（4）沉淀用复溶液复溶到1mL，加入1-30mg 25羟基维生素D3-3-氨基醚或25羟基维生素D2-3-氨基醚，震荡1-5小时，加入质量百分比浓度为10%的BSA 100uL，震荡30min，10000×g离心30min，沉淀用0.01mol/L pH值为7.0±1磷酸缓冲液复溶到10mL，作为样本稀释液母液；
所述复溶液为含万分之一体积的tween-20的0.01mol/L磷酸盐缓冲液。
进一步的，硝酸纤维素膜检测线位置包被有1mg/ml的25羟基维生素D3抗体或25羟基维生素D2抗体，质控线位置包被有1mg/ml BSA抗体。
本发明还提供一种维生素D类似物检测方法，包括如下步骤：
（1）用磷酸缓冲液对前述的试剂盒中的样本稀释液母液进行稀释作为样本稀释液；
（2）将样本稀释液与待测样品按9:1的比例混合；
（3）将混合后的样品加入前述的试剂盒的检测卡样品垫上的加样孔位置中；
（4）15min后，放入荧光免疫分析仪里面检测。
进一步的，
（1）用0.01mol/L pH值为7.0±1磷酸缓冲液对样本稀释液母液进行100倍稀释作为样本稀释液；
（2）通过检测不同浓度的各类型的维生素D类似物标准品的信号值，获得浓度值和信号值的标准曲线，导入到荧光免疫分析仪里面，通过检测信号值，来推导待测样品中维生素D类似物的含量；
（3） 所述荧光免疫分析仪为PMDT9000荧光免疫分析仪。
本发明的有益效果包括：本发明的试剂盒可以及时快速检测质控品中各种形态的维生素D类似物（维生素D3、1，25-二羟维生素D3、24，25-二羟维生素D3、25羟基维生素D2、维生素D2、1，25-二羟维生素D2、24，25-二羟维生素D2等等）的含量，可以实时快速监测质控品的质量，从而保证试剂的稳定性。
附图说明
图1为本发明的维生素D类似物检测试剂盒中的检测条的结构示意图；
图2为本发明的维生素D类似物检测试剂盒检测原理示意图；
其中，1为PVC底板，2为样品垫，3为硝酸纤维素膜，4为吸水垫，5为检测线，6为质控线，7为结合在荧光微球表面疏水区的与荧光微球偶联的25羟基维生素D3，8为短碳链，9为荧光微球表面，10为游离的维生素D类似物，11为露出荧光微球的疏水区的与荧光微球偶联的25羟基维生素D3。
具体实施方式
下面结合实施例对本发明进行进一步说明和描述，但所描述的实施例仅仅是本发明的一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明和实施例中，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他发明和实施例，都属于本发明保护的范围。
下述实施例中所使用的实验方法如无特殊说明，均为常规方法。
下述实施例中所用的材料、试剂等，如无特殊说明，均可从商业途径得到。
实施例1、一种维生素D类似物检测试剂盒
试剂盒包括样本稀释液母液和检测卡，检测卡由塑料外壳和检测条组成，检测条包括PVC底板1，PVC底板1上面依次粘有吸水垫4、硝酸纤维素膜3、样品垫2，硝酸纤维素膜3质控线（C线）6位置包被有BSA抗体，检测线（T线）5位置包被有25羟基维生素D3抗体（如图1所示）。样本稀释液母液里面含有荧光微球标记的25羟基维生素D3。
试剂盒的制备方法：
1.样本稀释液母液制备方法
（1）1mL荧光微球（固体含量为1%，购自Bangs Laboratories）中加入200uL 质量百分比浓度为1-5%的EDC（1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐）,和200uL质量百分比浓度为1-5%的NHS（N-羟基琥珀酰亚胺）,震荡1-5小时，10000×g离心30min。
（2）取沉淀用复溶液复溶到1mL，之后加入1-30mg短碳链8（购自麦克林）（短碳链8选择包括4-10个C短碳，例如γ-氨基丁酸、5-氨基戊酸、6-氨基己酸、7-氨基庚酸、8-氨基辛酸、9-氨基壬酸、10-氨基癸酸），震荡1-5小时，10000×g离心30min。
（3）取沉淀用复溶液复溶到1mL，之后加入200uL 质量百分比浓度为1-5%的EDC和200uL质量百分比浓度为1-5%的NHS,震荡1-5小时，10000×g离心30min。
（4）取沉淀用复溶液复溶到1mL，加入1-30mg 25羟基维生素D3-3氨基醚（购自中诺康健），震荡1-5小时，加入质量百分比10%的BSA 100uL，震荡30min，10000×g离心30min，沉淀用0.01mol/L pH值为7.0±1磷酸缓冲液复溶到10mL，作为样本稀释液母液。
本实施例中所用复溶液为含万分之一（体积比）的tween-20的0.01mol/L磷酸盐缓冲液。
检测时，用0.01mol/L pH值为7.0±1磷酸缓冲液对母液进行100倍稀释作为样本稀释液。
2.检测条的制备方法
PVC底板1中间位置粘有硝酸纤维素膜3，硝酸纤维素膜3检测线（T线）5位置包被有1mg/ml的25羟基维生素D3抗体（购自中诺康健），质控线（C线）6位置包被有1mg/ml BSA抗体（购自中诺康健）。在PVC底板1上靠近质控线6一端粘有吸水垫4，PVC底板1上靠近检测线5一端粘有样品垫2，样品垫2位置设置有加样孔。
检测原理：
荧光微球表面9为脂溶性材质，25羟基维生素D3是脂溶性维生素，不溶于磷酸盐缓冲液。在磷酸缓冲液中，短碳链8、25羟基维生素D3由于疏水作用力，紧贴在荧光微球表面9的疏水区域，不能被固相载体包被的25羟基维生素D3抗体识别。加入样本后，样本中如含有游离的维生素D类似物10（维生素D3、1，25-二羟维生素D3、24，25-二羟维生素D3、25羟基维生素D2、维生素D2、1，25-二羟维生素D2、24，25-二羟维生素D2等），因为样本中这些游离的维生素D类似物也是脂溶性，且具有比偶联的25羟基维生素D3更小的空间位阻，可以和与微球偶联的25羟基维生素D3竞争结合微球表面的疏水区域，使与微球偶联的25羟基维生素D3露出疏水区域，从而可以被固相载体包被的25羟基维生素D3抗体识别（图2)。
样本中游离的维生素D类似物10越多，露出荧光微球的疏水区域的与微球偶联的25羟基维生素D3越多，被固相载体包被的25羟基维生素D3抗体识别的荧光微球越多，被25羟基维生素D3抗体识别的荧光微球的含量与样本中游离的维生素D含量正相关，通过使用PMDT9000荧光免疫分析仪检测检测线（T线）5位置荧光微球的含量，可以检测样本中维生素D类似物的含量。
正常情况下，无论有无游离维生素D类似物，样本稀释液中的荧光微球-BSA均会与质控线6的BSA抗体结合。质控线6可以辅助判断加样过程或者试剂组装过程是否准确，如果加样量偏少或者检测条的各结构间连接有问题则没有质控线。
使用方法：
取90uL样本稀释液，10uL质控品混合，加入到检测卡的加样孔位置，开始计时，15min后，放入到PMDT9000荧光免疫分析仪里面检测。
通过检测不同浓度的各类型的维生素D类似物标准品的信号值（如表1所示），把浓度值和信号值做成标准曲线，导入到PMDT9000里面。用导入标准曲线的PMDT9000荧光免疫分析仪测定已知浓度的标准品的测量浓度值，通过测量浓度值和标准品的实际浓度值（结果如表2所示）的分析发现，采用本实施例的标准曲线的测量偏差均小于5%，说明本发明的检测试剂盒测量准确性高。
检测时，可以通过检测信号值，来推导质控品里面维生素D类似物的含量。
表1 不同浓度（nmol/L）下，各个类型的维生素D类似物标准品的信号值结果
Figure 297970DEST_PATH_IMAGE002
表2本实施例的试剂盒的检测质量分析
Figure 152794DEST_PATH_IMAGE004
实施例2、一种维生素D类似物检测试剂盒
本实施例的试剂盒与实施例1的试剂盒相比，区别在于硝酸纤维素膜3检测线（T线）5位置包被有浓度为1mg/mL的25羟基维生素D2抗体。样本稀释液母液里面含有荧光微球标记的25羟基维生素D2，其制备方法与实施例1基本相同，区别仅在于步骤（4）中，加入1-30mg 25羟基维生素D2-3氨基醚。
本实施例的试剂盒可以检测维生素D3、1，25-二羟维生素D3、24，25-二羟维生素D3、25羟基维生素D3、维生素D2、1，25-二羟维生素D2、24，25-二羟维生素D2的含量。

Claims (8)

1.一种多种维生素D类似物检测试剂盒，包括样本稀释液母液和检测卡，检测卡由外壳和检测条组成，检测条包括PVC底板，PVC底板上面依次粘有吸水垫、硝酸纤维素膜、样品垫，所述硝酸纤维素膜上设置有检测线和质控线，其特征在于，所述样本稀释液母液中含有荧光微球标记脂溶性小分子，所述荧光微球与脂溶性小分子之间通过短碳链偶联：活化荧光微球的羧基，使其与短碳链的氨基反应，进而将短碳链偶联到荧光微球上；继续活化荧光微球上偶联的短碳链的羧基，使其与脂溶性小分子的氨基反应，将脂溶性小分子偶联到短碳链上；
所述检测线位置包被有所述脂溶性小分子的抗体；
所述脂溶性小分子为25羟基维生素D3-3-氨基醚或25羟基维生素D2-3-氨基醚；
所述维生素D类似物为维生素D3、1，25-二羟维生素D3、24，25-二羟维生素D3、25羟基维生素D2、维生素D2、1，25-二羟维生素D2、24，25-二羟维生素D2。
2.根据权利要求1所述的多种维生素D类似物检测试剂盒，其特征在于，所述短碳链为包括4-10个碳的短链。
3.根据权利要求2所述的多种维生素D类似物检测试剂盒，其特征在于，所述短碳链为γ-氨基丁酸、5-氨基戊酸、6-氨基己酸、7-氨基庚酸、8-氨基辛酸、9-氨基壬酸或10-氨基癸酸的一种或多种。
4.根据权利要求1-3任一项所述的多种维生素D类似物检测试剂盒，其特征在于，所述样本稀释液母液的制备方法包括：
（1）活化荧光微球的羧基，使其与短碳链的氨基反应，进而将短碳链偶联到荧光微球上；
（2）继续活化步骤（1）获得的荧光微球上偶联的短碳链的羧基，使其与脂溶性小分子的氨基反应，将脂溶性小分子偶联到短碳链上，进而形成荧光微球-短碳链-脂溶性小分子结构；
所述样本稀释液母液的制备方法还包括：a.采用封闭剂封闭所述荧光微球-短碳链-脂溶性小分子结构标记过程中剩余的羧基活化位点，所述质控线位置包被对应的封闭剂抗体；和/或，b.所述活化是通过添加EDC和NHS溶液反应完成的。
5.根据权利要求4所述的多种维生素D类似物检测试剂盒，其特征在于，所述样本稀释液母液的制备方法包括：
（1）每1mL荧光微球中加入200uL 质量百分比浓度为1-5%的EDC、200uL质量百分比浓度为1-5%的NHS，震荡1-5小时，10000×g离心30min；
（2）取沉淀用复溶液复溶到1mL，加入1-30mg短碳链，震荡1-5小时，10000×g离心30min；
（3）取沉淀用复溶液复溶到1mL，加入200uL质量百分比浓度为1-5%的EDC，200uL质量百分比浓度为1-5%的NHS，震荡1-5小时，10000×g离心30min；
（4）取沉淀用复溶液复溶到1mL，加入1-30mg 25羟基维生素D3-3-氨基醚或25羟基维生素D2-3-氨基醚，震荡1-5小时，加入质量百分比浓度为10%BSA 100uL，震荡30min，10000×g离心30min，沉淀用0.01mol/L pH值为7.0±1磷酸缓冲液复溶到10mL，作为样本稀释液母液；
所述复溶液为含万分之一体积的tween-20的0.01mol/L磷酸缓冲液。
6.根据权利要求5所述的多种维生素D类似物检测试剂盒，其特征在于，硝酸纤维素膜检测线位置包被有1mg/ml的25羟基维生素D3抗体或25羟基维生素D2抗体，质控线位置包被有1mg/ml BSA抗体。
7.一种多种维生素D类似物检测方法，其特征在于，包括如下步骤：
（1）用磷酸缓冲液对权利要求1-6任一项所述的试剂盒中的样本稀释液母液进行稀释作为样本稀释液；
（2）将样本稀释液与待测样品按9:1的比例混合；
（3）将混合后的样品加入权利要求1-6任一项所述的试剂盒的检测卡样品垫上的加样孔位置中；
（4）15min后，放入荧光免疫分析仪里面检测。
8.根据权利要求7所述的方法，其特征在于，包括如下一项或多项：
（1）用0.01mol/L pH值为7.0±1磷酸缓冲液对样本稀释液母液进行100倍稀释作为样本稀释液；
（2）通过检测不同浓度的各类型的维生素D类似物标准品的信号值，获得浓度值和信号值的标准曲线，导入到荧光免疫分析仪里面；
（3）所述荧光免疫分析仪为PMDT9000荧光免疫分析仪。
CN202210381820.4A 2022-04-13 2022-04-13 一种多种维生素d类似物检测试剂盒及检测方法 Active CN114460314B (zh)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN202210381820.4A CN114460314B (zh) 2022-04-13 2022-04-13 一种多种维生素d类似物检测试剂盒及检测方法

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN202210381820.4A CN114460314B (zh) 2022-04-13 2022-04-13 一种多种维生素d类似物检测试剂盒及检测方法

Publications (2)

Publication Number Publication Date
CN114460314A CN114460314A (zh) 2022-05-10
CN114460314B true CN114460314B (zh) 2022-06-24

Family

ID=81418449

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN202210381820.4A Active CN114460314B (zh) 2022-04-13 2022-04-13 一种多种维生素d类似物检测试剂盒及检测方法

Country Status (1)

Country Link
CN (1) CN114460314B (zh)

Family Cites Families (11)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US11225655B2 (en) * 2010-04-16 2022-01-18 Nuevolution A/S Bi-functional complexes and methods for making and using such complexes
WO2013172967A1 (en) * 2012-05-17 2013-11-21 Extend Biosciences, Inc Carriers for improved drug delivery
US20170151339A1 (en) * 2014-06-30 2017-06-01 Tarveda Therapeutics, Inc. Targeted conjugates and particles and formulations thereof
CN104076155B (zh) * 2014-07-10 2016-08-31 深圳市新产业生物医学工程股份有限公司 用于检测25-羟基维生素d的检测剂及制备方法和应用
CN106405071B (zh) * 2016-09-06 2018-01-05 北京华科泰生物技术有限公司 25‑羟基维生素d3荧光免疫层析用活化荧光乳胶微球
CN107656076A (zh) * 2017-08-11 2018-02-02 普菲特益斯生物科技（北京）有限公司 一种高灵敏检测25羟基维生素d的时间分辨荧光免疫层析检测试剂及其制备方法
CN207992246U (zh) * 2018-02-09 2018-10-19 广东优尼德生物科技有限公司 一种检测25-羟基维生素d的荧光层析试剂盒
CN108181465B (zh) * 2018-02-09 2024-01-23 广东优尼德生物科技有限公司 检测25-羟基维生素d的荧光层析试剂盒及其定量检测方法
CN109633144B (zh) * 2018-12-28 2020-07-14 南昌大学 一种以聚集诱导发光荧光微球为信标载体制备的荧光免疫层析试纸条
CN110488004A (zh) * 2019-09-26 2019-11-22 北京华科泰生物技术股份有限公司 一种用于检测末梢血的25-羟基维生素d试剂盒及其制备方法和应用
CN113391076B (zh) * 2021-07-20 2023-04-07 深圳健丰源科技有限公司 一种25-羟基维生素d的免疫检测方法及其应用

Also Published As

Publication number Publication date
CN114460314A (zh) 2022-05-10

Similar Documents

Publication Publication Date Title
US11268968B2 (en) Solution for dissociating vitamin D from vitamin-D binding protein, associated detection method and use
US4786589A (en) Immunoassay utilizing formazan-prelabeled reactants
US20100068725A1 (en) Direct determination of vitamin d in serum or plasma
CN101377490A (zh) 用于检测疾病相关标志物的磁微粒分离化学发光免疫分析测定试剂盒及其制备方法
CN113834944B (zh) 一种红细胞中叶酸的量子点荧光检测方法
CN106855572A (zh) 一种胃泌素释放肽前体化学发光免疫检测试剂盒及其制备方法
DE60212840T2 (de) Immunassayverfahren
CN113848330B (zh) 一种同型半胱氨酸和维生素b12的检测方法、检测试纸条及其应用
CN109188003B (zh) 测定25-羟基维生素d的方法
CN111289758B (zh) 用于h-fabp定量检测的试剂盒、h-fabp定量检测的方法
CN107356743B (zh) 一种用于检测肌红蛋白的测定试剂盒
CN114460314B (zh) 一种多种维生素d类似物检测试剂盒及检测方法
US20190271711A1 (en) Processing reagent and use thereof in assays for detection of analytes associated with a binding protein
CN109188002A (zh) 用于测定25-羟基维生素d的试剂盒
CN106596919A (zh) 一种抗核糖核蛋白70抗体IgG测定试剂盒（化学发光法）及其制备方法
EP2309265B1 (en) Method of assaying complex and kit to be used therefor
CN107102140A (zh) 一种谷氨酸脱羧酶抗体化学发光免疫检测试剂盒及其制备方法
CN115201183A (zh) 一种单人份S100β蛋白化学发光测定试剂盒及其测定方法
CN112129933B (zh) 一种免疫分析系统中抗生物素干扰的试剂、试剂盒及方法
SU416969A3 (zh)
EP0713094B1 (de) Heterogener Immunoassay mittels präzipitierbarer Festphase
CN106855574A (zh) 一种ⅲ型前胶原n端肽化学发光免疫检测试剂盒及其制备方法
CN112986567A (zh) 一种多项目快速定量毒品检测盒试剂成分配比和制备方法
US20040072260A1 (en) Method for assaying receptor binding property and reagent for the assay
CN112180080B (zh) 一种小分子三重免疫层析检测方法以及试纸条和试剂盒

Legal Events

Date Code Title Description
PB01 Publication
PB01 Publication
SE01 Entry into force of request for substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination
GR01 Patent grant
GR01 Patent grant