CN114431177A - 一种综合抗逆贻贝的筛选方法 - Google Patents

Abstract

本发明公开了一种综合抗逆贻贝的筛选方法，经过准备养殖系统、监测养殖环境，经监测合格后将贻贝放入养殖系统，通过外观形态和体重观察对贻贝进行首轮筛选后，再依次进行应激后摄食恢复速度、捕食者存在条件下贻贝足丝生长行为、自组织行为和呼吸代谢的筛选，选择优质的繁殖用贻贝亲本。本发明借助行为生理学方法，利用贻贝生长状态、应激后摄食恢复、反哺食行为、生理代谢与个体的能量储存和环境适应力密切相关设计科学合理的筛选方法，可以简单、快速且高效地得到抗逆性强、食欲强的健康贻贝，对于贻贝的可持续养殖具有重要意义。

Description

一种综合抗逆贻贝的筛选方法

技术领域

本发明属于水产养殖技术领域，特别涉及一种综合抗逆的贻贝筛选方法。

背景技术

近年来，随着海洋资源和空间的开发利用，海洋生态系统持续恶化，海岸侵蚀、赤潮等海洋环境灾害频发，对海洋生物造成了巨大的影响。此外，由于我国水产养殖管理和育种理论落后，水域环境逐年恶化，种质资源衰退，给水产养殖业造成巨大损失。贻贝是近海渔业捕捞和水产养殖的重要对象，为人类提供大量优质蛋白。目前贻贝全球年产量约90万吨，其中养殖产量达80万吨。在贻贝正常养殖过程中，不可避免的要遇到各种环境变化和人为的胁迫，养殖群体中的“体弱或亚健康”的个体会出现厌食而首先发病，并传染整个群体，引发大规模的灾害。因此在养殖前将健壮活泼和体弱不活泼的个体分选，然后进行饲养可以避免养殖灾害的发生。养殖的健壮群体也为进一步对生长等性状的筛选提供了抗逆(应激)性强的群体，提高繁育的良种率，降低养殖成本。进行贻贝抗逆筛选会促进贻贝养殖业的健康持续发展，对我国水产养殖管理和育种技术的提高和促进贻贝产业技术升级具有重大意义。

发明内容

针对上述问题，本发明的目的是提供一种能实现简便、高效率的贻贝健康状况的筛选方法。

为实现上述目的，本发明提供一种综合抗逆贻贝的筛选方法，包括以下步骤：

S1：养殖系统用消毒剂消毒后，经淡水冲洗并浸泡，注入盐度为25‰–35‰的过滤天然海水或经稀释的浓缩海水，其循环水系统内投放酵母膏粉和光合细菌后运转若干天，培养过滤槽中的生物膜；

S2：监测养殖环境，使其达到预先设定的环境指标；

S3：将需要引进养殖系统的贻贝放入高锰酸钾溶液中消毒浸泡，再用曝气海水浸洗，放入上述养殖系统；

S4：在同龄贻贝中筛选出个体肥大、壳表新鲜、鳃完整和性腺饱满的个体；

S5：对步骤S4筛选出的贻贝，利用空气暴露应激后食欲恢复速度快慢筛选应激后食欲恢复快的活泼健康个体，让其恢复若干小时；

S6：利用捕食者存在条件下贻贝足丝生长情况筛选足丝生长多的活泼健康个体，让其恢复若干小时；

S7：利用贻贝的自组织行为筛选自组织移动距离长的活泼健康个体，让其恢复若干小时；

S8：利用全自动间断流动呼吸运动计量仪对待筛选的贻贝进行呼吸代谢测定，筛选呼吸代谢较低的健康个体，完成贻贝的筛选。

优选地，步骤S1中，消毒剂为漂白粉，其中有效余氯应大于30ppm，淡水冲洗3次，浸泡1天，循环水系统还投放0.02g/L酵母膏粉和0.2ml/L光合细菌，新使用的循环水系统至少运转30天，曾持续使用过的系统运转一周。

优选地，步骤S2中，养殖预先设定的环境指标为：盐度:25‰–35‰、pH:8.1±0.1、温度:15–25℃和溶氧浓度≥6mg/L，光照条件为12:12h(光照:黑暗)。

优选地，步骤S3中，高猛酸钾浓度为10–20mg/L，消毒时间5–10分钟。

优选地，步骤S4中，个体肥大的个体为体重前三分之一的个体。

优选地，步骤S5中，将贻贝从养殖池中取出，放在平面处空气暴露30min，放入装有等体积藻液的呼吸瓶中，藻液密度为200万–300万cells/mL，用气石在瓶底轻微充气，保证摄食期间瓶内藻液的均匀分布；在摄食开始和摄食2h时从呼吸瓶中吸取藻液，通过测量藻液浓度变化测量贻贝的摄食率，将摄食率数值从大到小排列，选取摄食率前二分之一的贻贝进行后续筛选。

优选地，步骤S6中，贻贝和捕食者置于同一水箱中，贻贝放于捕食者周围，每只贻贝用一个圆桶状的PVC板包裹，作为贻贝受到捕食者气味影响后足丝生长附着的基质，筛选时间为72h，水箱周围用气石不断曝气，全程不进行投喂，记录足丝数，将足丝数从大到小排列，选取足丝生长数前二分之一的贻贝进行后续筛选。

优选地，步骤S7中，贻贝均匀摆放在底部有网格的水箱中，周围用气石不断曝气，筛选期为24h，用照相机记录贻贝每小时的位置情况，根据位置变化计算贻贝自组织的运动距离，将运动距离的数值从大到小进行排列，选取运动距离前二分之一的贻贝进行后续筛选。

优选地，步骤S8中，采用小型呼吸室，设定的环境指标为：盐度:25‰–30‰、pH:8.1±0.1、温度:15–25℃和溶氧浓度≥6mg/L，将呼吸室中的水体流动设置循环周期，每个周期分为三部分：第一部分为外部蓄水箱缓慢向呼吸室内加入新水的过程，第二部分为等待时间，第三部分为测量呼吸室内水体中溶氧变化时间，利用公式计算出其耗氧值；开始前系统中不放贝进行若干循环以监测水体中背景耗氧值，而后对贻贝标准代谢率进行测定，将标准代谢率数值从大到小进行排列，选取标准代谢率后二分之一的贻贝作为繁殖用亲贝，至此筛选结束。

本发明采取以上技术方案，具有以下有益效果：

(1)本发明利用个体行为、代谢和环境适应性相关的特点，依据不同健康状况、能量储存、活泼性的贻贝在受到外界各种刺激后，应激恢复时间和应激应对方式不同的原理，对贻贝进行筛选。

(2)利用应激行为反应对不同贻贝进行区分，将应激后不容易恢复和体质较弱的个体从贝类群体中区分开来，保证贝类整体抗逆能力而达到健康养殖促进生长的目的。

(3)利用贻贝生长所表现出的外部形态特征作为贻贝抗逆筛选的第一指标，利用贻贝个体应激后的摄食恢复作为贻贝抗逆筛选的第二指标，利用贻贝在捕食者气味胁迫下足丝的生长情况作为贻贝抗逆筛选的第三指标，利用贻贝自组织行为的移动距离作为贻贝抗逆筛选的第四指标，利用贻贝呼吸代谢率作为贻贝抗逆筛选的第五指标。

(4)贻贝的抗应激性能与抗病性能密切相关，本发明挑选出来的贻贝个体具有总体抗逆性强的特点。

(5)本发明通过多轮筛选，筛选出抗应激强、食欲强的健康个体进行后续养殖，有利于筛选抗病个体，减少群体中“亚健康”贝类数目，提高贝类群体整体抗病性能，本发明可以广泛应用于大规模水产养殖领域中。

(6)本发明所需仪器简单、操作方便快捷，所采用的筛选方法在一般贻贝养殖场地均可实施，实用性强。

综上所述，本发明中贻贝抗逆健康个体的挑选方法为：利用贻贝形态观测、应激后食欲恢复、应激下的足丝生长特性、自组织行为和呼吸代谢与其疾病感染应激紧密相关的原理，采用多次筛选、淘汰体弱不活泼个体的方法，从一般贻贝群体中筛选出抗逆、食欲强的贝类个体，保持贻贝群体健康，提高养殖产量和成活率。

附图说明

图1为实施例1中筛选的健康活泼贻贝和淘汰的体弱不活泼贻贝在20℃时的存活率。

图2为实施例1中筛选的健康活泼贻贝和淘汰的体弱不活泼贻贝在30℃时的存活率。

图3为实施例1中筛选的健康活泼贻贝和淘汰的体弱不活泼贻贝在0.1ug/L BDE-47条件下的存活率。

图4为实施例1中筛选的健康活泼贻贝和淘汰的体弱不活泼贻贝在10ug/L BDE-47条件下的存活率。

具体实施方式

下面将结合本发明实施例，对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。

本发明利用个体行为、代谢和环境适应性相关的特点，依据不同体质、能量储存、活泼性的贻贝在受到外界各种刺激，恢复时间、应激表现不同的原理，对贻贝进行多重筛选。体质好活泼性强的贻贝在受到空气暴露刺激后能在短时间内迅速恢复，并开始摄食，受到捕食者气味刺激后会较快生长出大量足丝将自己附着在基质上，在正常状态下会更快的形成聚群，并且在正常情况代谢较低，能储存大量能量；体质差活泼性弱的贻贝受到空气暴露的严重刺激后不能在短时间内迅速恢复，短时间内不会开始摄食，在受到捕食者气味刺激后不会快速生长出大量足丝，在正常状态下不会很快形成聚群，代谢速率较高。筛选时需使用科学合理的检测方法，既避免贻贝因筛选强度过大而死亡，又能够准确选出健康活泼的贻贝，故需依据合理的筛选方法和健康评价方法。

下面结合实施实例对本发明进行解释说明。

实施例1

S1、养殖系统用消毒剂漂白粉消毒后，经淡水冲洗并浸泡，注入盐度为25‰–35‰的过滤天然海水或经稀释的浓缩海水，其循环水系统内投放酵母膏粉和光合细菌后运转若干天，培养过滤槽中的生物膜；其中，消毒剂中有效余氯应大于30ppm，淡水冲洗3次，浸泡1天，循环水系统还需投放0.02g/L酵母膏粉和0.2ml/L光合细菌，新使用的循环水系统至少运转30天，持续使用过的系统运转一周。

S2、监测养殖环境，使其达到预先设定的环境指标为：盐度:25‰–30‰，pH:8.1±0.1，温度:22±1℃，溶氧浓度≥6mg/L，光照条件:12:12h(光照:黑暗)。

S3、将需要引进养殖系统的厚壳贻贝放入浓度为10–20mg/L的高锰酸钾溶液中消毒浸泡5–10分钟，再用曝气海水浸洗，放入上述养殖系统。

S4、在同龄厚壳贻贝中，筛选出个体肥大(体重前三分之一的个体)，壳表新鲜，鳃完整，性腺饱满的个体。

S5、对步骤S4筛选出的厚壳贻贝，利用空气暴露应激后食欲恢复速度快慢筛选出应激后食欲恢复快的活泼健康个体，然后让其恢复若干小时；摄食开始前制作小球藻的浓度-吸光度标准曲线，将厚壳贻贝从养殖池中取出，放在平面处空气暴露30min，放入装有500mL藻液的呼吸瓶中，藻液密度统一，为200万–300万cells/mL。用气石在瓶底轻微充气，保证摄食期间瓶内藻液的均匀分布，在开始和摄食2h时从呼吸瓶中吸取藻液，利用酶标仪，在680nm的波长下记录吸光度，根据吸光度变化计算厚壳贻贝的摄食率，将摄食率数值从大到小排列，选取摄食率前二分之一的厚壳贻贝进行后续筛选。

S6、利用捕食者存在条件下厚壳贻贝足丝生长情况筛选出足丝生长多的活泼健康个体，然后让其恢复若干小时；其中，厚壳贻贝和捕食者置于同一水箱中，捕食者放于水箱中央的实验笼中，厚壳贻贝放于捕食者周围，每只厚壳贻贝用一个圆桶状的PVC板包裹，以此来作为厚壳贻贝受到捕食者气味影响后足丝生长附着的基质，厚壳贻贝的放置密度大约为每升水一只贝。实验期为72h，实验水箱周围用气石不断曝气，全程不进行投喂，记录足丝数。将足丝数从大到小排列，选取足丝生长数前二分之一的厚壳贻贝进行后续筛选。

S7、利用厚壳贻贝的自组织行为筛选出自组织移动距离长的活泼健康个体，然后让其恢复若干小时；其中，厚壳贻贝均匀摆放在底部有网格的水箱中，周围用气石不断曝气，筛选期为24h，用照相机记录厚壳贻贝每小时的位置情况，根据位置变化计算厚壳贻贝自组织的运动距离，将运动距离的数值从大到小进行排列，选取运动距离前二分之一的厚壳贻贝进行后续筛选。

S8、利用全自动间断流动呼吸运动计量仪对待筛选的厚壳贻贝进行呼吸代谢测定，筛选出呼吸代谢低的健康个体，完成厚壳贻贝的筛选；其中，呼吸室采用贝类专门定制的小型呼吸室，容积460mL，设定的环境指标为盐度:25‰–30‰，pH:8.1±0.1，温度:22±1℃，溶氧浓度≥6mg/L。将呼吸室中的水体流动设置循环周期，每个周期分为三部分，第一部分为外部蓄水箱缓慢向呼吸室内加入新水的过程，第二部分为等待时间，第三部分为测量呼吸室内水体中溶氧变化时间，利用公式计算出其耗氧值，开始前系统中不放贝至少进行若干循环用以监测水体中背景耗氧值，而后对厚壳贻贝标准代谢率进行测定，将标准代谢率数值从大到小进行排列，选取标准代谢率后二分之一的厚壳贻贝作为繁殖用亲贝，至此筛选结束。

实施例2

S1、养殖系统用消毒剂漂白粉消毒后，经淡水冲洗并浸泡，注入盐度为25‰–35‰的过滤天然海水或经稀释的浓缩海水，其循环水系统内投放酵母膏粉和光合细菌后运转若干天，培养过滤槽中的生物膜；其中，消毒剂中有效余氯应大于30ppm，淡水冲洗3次，浸泡1天，循环水系统还需投放0.02g/L酵母膏粉和0.2ml/L光合细菌，新使用的循环水系统至少运转30天，曾持续使用过的系统运转一周。

S2、监测养殖环境，使其达到预先设定的环境指标：盐度:28‰–33‰，pH:8.1±0.1，温度:16±1℃，溶氧浓度≥6mg/L，光照条件:12:12h(光照:黑暗)。

S3、将需要引进养殖系统的紫贻贝放入浓度为10–20mg/L的高锰酸钾溶液中消毒浸泡5–10分钟，再用曝气海水浸洗，放入上述养殖系统。

S4、在同龄紫贻贝中，筛选出个体肥大(体重前三分之一的个体)、壳表新鲜、鳃完整、性腺饱满的个体。

S5、对步骤S4筛选出的紫贻贝，利用空气暴露应激后食欲恢复速度快慢筛选出应激后食欲恢复快的活泼健康个体，然后让其恢复若干小时；其中，摄食开始前制作小球藻的浓度-吸光度标准曲线。开始时将紫贻贝从养殖池中取出，放在平面处空气暴露30min，放入装有500mL藻液的呼吸瓶中，藻液密度统一，为200万–300万cells/mL。用气石在瓶底轻微充气，保证摄食期间瓶内藻液的均匀分布。在开始和摄食2h时从呼吸瓶中吸取藻液，利用酶标仪，在680nm的波长下，记录吸光度，根据吸光度变化计算紫贻贝的摄食率。将摄食率数值从大到小排列，选取摄食率前二分之一的紫贻贝进行后续筛选。

S6、利用捕食者存在条件下紫贻贝足丝生长情况筛选出足丝生长多的活泼健康个体，然后让其恢复若干小时；其中，紫贻贝和捕食者置于同一水箱中，捕食者放于水箱中央的实验笼中，紫贻贝放于捕食者周围，每只紫贻贝用一个圆桶状的PVC板包裹，以此来作为紫贻贝受到捕食者气味影响后足丝生长附着的基质，紫贻贝的放置密度大约为每升水一只贝，实验期为72h，水箱周围用气石不断曝气，全程不进行投喂，记录足丝数。将足丝数从大到小排列，选取足丝生长数前二分之一的紫贻贝进行后续筛选。

S7、利用紫贻贝的自组织行为筛选出自组织移动距离长的活泼健康个体，然后让其恢复若干小时；其中，紫贻贝均匀摆放在底部有网格的水箱中，周围用气石不断曝气，筛选期为24h，用照相机记录紫贻贝每小时的位置情况，根据位置变化计算紫贻贝自组织的运动距离。将运动距离的数值从大到小进行排列，选取运动距离前二分之一的紫贻贝进行后续筛选。

S8、利用全自动间断流动呼吸运动计量仪对待筛选的紫贻贝进行呼吸代谢测定，筛选出呼吸代谢低的健康个体，完成紫贻贝的筛选；其中，呼吸室采用贝类专门定制的小型呼吸室，容积460mL，设定的环境指标为盐度:28‰–33‰，pH:8.1±0.1，温度:16±1℃，溶氧浓度≥6mg/L。将呼吸室中的水体流动设置循环周期，每个周期分为三部分，第一部分为外部蓄水箱缓慢向呼吸室内加入新水的过程，第二部分为等待时间，第三部分为测量呼吸室内水体中溶氧变化时间，利用公式计算出其耗氧值。实验开始前系统中不放贝至少进行若干循环用以监测水体中背景耗氧值，而后对紫贻贝标准代谢率进行测定。将标准代谢率数值从大到小进行排列，选取标准代谢率后二分之一的紫贻贝作为繁殖用亲贝，至此筛选结束。

实施例3

S1、养殖系统用消毒剂漂白粉消毒后，经淡水冲洗并浸泡，注入盐度为25‰–35‰的过滤天然海水或经稀释的浓缩海水，其循环水系统内投放酵母膏粉和光合细菌后运转若干天，培养过滤槽中的生物膜；其中，消毒剂中有效余氯应大于30ppm，淡水冲洗3次，浸泡1天，循环水系统还需投放0.02g/L酵母膏粉和0.2ml/L光合细菌，新使用的循环水系统至少运转30天，曾持续使用过的系统运转一周。

S2、监测养殖环境，使其达到预先设定的环境指标：盐度:28‰–32‰，pH:8.1±0.1，温度:25±1℃，溶氧浓度≥6mg/L，光照条件:12:12h(光照:黑暗)。

S3、将需要引进养殖系统的翡翠贻贝放入浓度为10–20mg/L的高锰酸钾溶液中消毒浸泡5-10分钟，再用曝气海水浸洗，放入上述养殖系统。

S4、在同龄翡翠贻贝中，筛选出个体肥大(体重前三分之一的个体)，壳表新鲜，鳃完整，性腺饱满的个体。

S5、对步骤S4筛选出的翡翠贻贝，利用空气暴露应激后食欲恢复速度快慢筛选出应激后食欲恢复快的活泼健康个体，然后让其恢复若干小时；其中，摄食开始前制作小球藻的浓度-吸光度标准曲线。开始时将翡翠贻贝从养殖池中取出，放在平面处空气暴露30min，放入装有500mL藻液的呼吸瓶中，藻液密度统一，为200万–300万cells/mL。用气石在瓶底轻微充气，保证摄食期间瓶内藻液的均匀分布，在开始和摄食2h时从呼吸瓶中吸取藻液，利用酶标仪，在680nm的波长下记录吸光度，根据吸光度变化计算翡翠贻贝的摄食率。将摄食率数值从大到小排列，选取摄食率前二分之一的翡翠贻贝进行后续筛选。

S6、利用捕食者存在条件下翡翠贻贝足丝生长情况筛选出足丝生长多的活泼健康个体，然后让其恢复若干小时；其中，翡翠贻贝和捕食者置于同一水箱中，捕食者放于水箱中央的实验笼中，翡翠贻贝放于捕食者周围，每只翡翠贻贝用一个圆桶状的PVC板包裹，以此来作为翡翠贻贝受到捕食者气味影响后足丝生长附着的基质，翡翠贻贝的放置密度大约为每升水一只贝。实验期为72h，实验水箱周围用气石不断曝气，全程不进行投喂，记录足丝数。将足丝数从大到小排列，选取足丝生长数前二分之一的翡翠贻贝进行后续筛选。

S7、利用翡翠贻贝的自组织行为筛选出自组织移动距离长的活泼健康个体，然后让其恢复若干小时；其中，翡翠贻贝均匀摆放在底部有网格的水箱中，周围用气石不断曝气，筛选期为24h，用照相机记录翡翠贻贝每小时的位置情况，根据位置变化计算翡翠贻贝自组织的运动距离。将运动距离的数值从大到小进行排列，选取运动距离前二分之一的翡翠贻贝进行后续筛选。

S8、利用全自动间断流动呼吸运动计量仪对待筛选的翡翠贻贝进行呼吸代谢测定，筛选出呼吸代谢低的健康个体，完成翡翠贻贝的筛选；其中，呼吸室采用贝类专门定制的小型呼吸室，容积460mL。设定的环境指标为盐度:28‰–32‰，pH:8.1±0.1，温度:25±1℃，溶氧浓度≥6mg/L。将呼吸室中的水体流动设置循环周期，每个周期分为三部分，第一部分为外部蓄水箱缓慢向呼吸室内加入新水的过程，第二部分为等待时间，第三部分为测量呼吸室内水体中溶氧变化时间，利用公式计算出其耗氧值。开始前系统中不放贝至少进行若干循环用以监测水体中背景耗氧值，而后对翡翠贻贝标准代谢率进行测定。将标准代谢率数值从大到小进行排列，选取标准代谢率后二分之一的翡翠贻贝作为繁殖用亲贝，至此筛选结束。

实施例4

S1、养殖系统用消毒剂漂白粉消毒后，经淡水冲洗并浸泡，注入盐度为25‰–35‰的过滤天然海水或经稀释的浓缩海水，其循环水系统内投放酵母膏粉和光合细菌后运转若干天，培养过滤槽中的生物膜；其中，消毒剂中有效余氯应大于30ppm，淡水冲洗3次，浸泡1天，循环水系统还需投放0.02g/L酵母膏粉和0.2ml/L光合细菌，新使用的循环水系统至少运转30天，持续使用过的系统运转一周。

S2、监测养殖环境，使其达到预先设定的环境指标：盐度:25‰–30‰，pH:8.1±0.1，温度:22±1℃，溶氧浓度≥6mg/L，光照条件:12:12h(光照:黑暗)。

S3、将需要引进养殖系统的条纹隔贻贝放入浓度为10–20mg/L的高锰酸钾溶液中消毒浸泡5-10分钟，再用曝气海水浸洗，放入上述养殖系统。

S4、在同龄条纹隔贻贝中，筛选出个体肥大(体重前三分之一的个体)、壳表新鲜、鳃完整、性腺饱满的个体。

S5、对步骤S4筛选出的条纹隔贻贝，利用空气暴露应激后食欲恢复速度快慢筛选出应激后食欲恢复快的活泼健康个体，然后让其恢复若干小时；其中，摄食实验开始前制作小球藻的浓度-吸光度标准曲线。实验时将条纹隔贻贝从养殖池中取出，放在平面处空气暴露30min，放入装有500mL藻液的呼吸瓶中，藻液密度统一，为200万–300万cells/mL。用气石在瓶底轻微充气，保证摄食期间瓶内藻液的均匀分布，在开始和摄食2h时从呼吸瓶中吸取藻液，利用酶标仪，在680nm的波长下记录吸光度，根据吸光度变化计算条纹隔贻贝的摄食率。将摄食率数值从大到小排列，选取摄食率前二分之一的条纹隔贻贝进行后续筛选。

S6、利用捕食者存在条件下条纹隔贻贝足丝生长情况筛选出足丝生长多的活泼健康个体，然后让其恢复若干小时；其中，条纹隔贻贝和捕食者置于同一水箱中，捕食者放于水箱中央的实验笼中，条纹隔贻贝放于捕食者周围，每只条纹隔贻贝用一个圆桶状的PVC板包裹，以此来作为条纹隔贻贝受到捕食者气味影响后足丝生长附着的基质，条纹隔贻贝的放置密度大约为每升水一只贝，实验期为72h，实验水箱周围用气石不断曝气，全程不进行投喂，记录足丝数。将足丝数从大到小排列，选取足丝生长数前二分之一的条纹隔贻贝进行后续筛选。

S7、利用条纹隔贻贝的自组织行为筛选出自组织移动距离长的活泼健康个体，然后让其恢复若干小时；其中，条纹隔贻贝均匀摆放在底部有网格的水箱中，周围用气石不断曝气，筛选期为24h，用照相机记录条纹隔贻贝每小时的位置情况，根据位置变化计算条纹隔贻贝自组织的运动距离。将运动距离的数值从大到小进行排列，选取运动距离前二分之一的条纹隔贻贝进行后续筛选。

S8、利用全自动间断流动呼吸运动计量仪对待筛选的条纹隔贻贝进行呼吸代谢测定，筛选出呼吸代谢低的健康个体，完成条纹隔贻贝的筛选；其中，呼吸室采用贝类专门定制的小型呼吸室，容积460mL，设定的环境指标为盐度:25‰–30‰，pH:8.1±0.1，温度:22±1℃，溶氧浓度≥6mg/L，将呼吸室中的水体流动设置循环周期，每个周期分为三部分，第一部分为外部蓄水箱缓慢向呼吸室内加入新水的过程，第二部分为等待时间，第三部分为测量呼吸室内水体中溶氧变化时间，利用公式计算出其耗氧值。开始前系统中不放贝至少进行若干循环用以监测水体中背景耗氧值；而后对条纹隔贻贝标准代谢率进行测定。将标准代谢率数值从大到小进行排列，选取标准代谢率后二分之一的条纹隔贻贝作为繁殖用亲贝，至此筛选结束。

测试结果

以实施例1为测试样本，其他实施例效果类似于实施例1。

将用本发明方法选出的活泼贻贝与不活泼贻贝，以及它们的子代各自挑选出二十个进行抗逆性测试。

(1)子代贻贝的环境抗逆性测试

1)应激后2h内摄食率(feeding rate，cell L^-1h^-1)；2)应激后足丝生长数量(byssus number)。

表1

	feeding rate	byssus number
			活泼贻贝	1.25×10<sup>9</sup>	17
不活泼贻贝	2.79×10<sup>8</sup>	3

由表1可以看出筛选出的养殖贻贝所拥有的环境抗逆指标更好。

(2)筛选出的健康贻贝和淘汰贻贝温度耐受性

测试结果见图1和2所示，由图可见筛选出的健康活泼贻贝比淘汰的体弱不活泼贻贝的温度耐受性更强。

(3)筛选出的健康贻贝和淘汰贻贝毒物(BDE-47)耐受性

测试结果见图3和4所示，由图可见筛选出的健康活泼贻贝比淘汰的体弱不活泼贻贝的毒物(BDE-47)耐受性更强。

最后应说明的是，以上所述仅为本发明的优选实施例而已，并不用于限制本发明，尽管参照前述实施例对本发明进行了详细的说明，对本领域的技术人员来说，其依然可以对前述各实施例所记载的技术方案进行修改，或者对其中部分技术特征进行等同替换,凡在本发明的精神和原则之内，所作的任何修改、等同替换、改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。

Claims (9)

1.一种综合抗逆贻贝的筛选方法，其特征在于，包括以下步骤：

S1：养殖系统用消毒剂消毒后，经淡水冲洗并浸泡，注入盐度为25‰–35‰的过滤天然海水或经稀释的浓缩海水，其循环水系统内投放酵母膏粉和光合细菌后运转若干天，培养过滤槽中的生物膜；

S2：监测养殖环境，使其达到预先设定的环境指标；

S3：将需要引进养殖系统的贻贝放入高锰酸钾溶液中消毒浸泡，再用曝气海水浸洗，放入上述养殖系统；

S4：在同龄贻贝中筛选出个体肥大、壳表新鲜、鳃完整和性腺饱满的个体；

S5：对步骤S4筛选出的贻贝，利用空气暴露应激后食欲恢复速度快慢筛选应激后食欲恢复快的活泼健康个体，让其恢复若干小时；

S6：利用捕食者存在条件下贻贝足丝生长情况筛选足丝生长多的活泼健康个体，让其恢复若干小时；

S7：利用贻贝的自组织行为筛选自组织移动距离长的活泼健康个体，让其恢复若干小时；

S8：利用全自动间断流动呼吸运动计量仪对待筛选的贻贝进行呼吸代谢测定，筛选呼吸代谢较低的健康个体，完成贻贝的筛选。

2.根据权利要求1所述综合抗逆贻贝的筛选方法，其特征在于，步骤S1中，消毒剂为漂白粉，其中有效余氯应大于30ppm，淡水冲洗3次，浸泡1天，循环水系统还投放0.02g/L酵母膏粉和0.2ml/L光合细菌，新使用的循环水系统至少运转30天，曾持续使用过的系统运转一周。

3.根据权利要求1所述综合抗逆贻贝的筛选方法，其特征在于，步骤S2中，养殖预先设定的环境指标为：盐度:25‰–35‰，pH:8.1±0.1，温度:15–25℃，溶氧浓度≥6mg/L，光照条件为12:12h(光照:黑暗)。

4.根据权利要求1所述综合抗逆贻贝的筛选方法，其特征在于，步骤S3中，高猛酸钾浓度为10–20mg/L，消毒时间5–10分钟。

5.根据权利要求1所述综合抗逆贻贝的筛选方法，其特征在于，步骤S4中，个体肥大的个体为体重前三分之一的个体。

6.根据权利要求1所述综合抗逆贻贝的筛选方法，其特征在于，步骤S5中，将贻贝从养殖池中取出，放在平面处空气暴露30min，放入装有等体积藻液的呼吸瓶中，藻液密度为200万–300万cells/mL，用气石在瓶底轻微充气，保证摄食期间瓶内藻液的均匀分布；在摄食开始和摄食2h时从呼吸瓶中吸取藻液，测量贻贝的摄食率，将摄食率数值从大到小排列，选取摄食率前二分之一的贻贝进行后续筛选。

7.根据权利要求1所述综合抗逆贻贝的筛选方法，其特征在于，步骤S6中，贻贝和捕食者置于同一水箱中，贻贝放于捕食者周围，每只贻贝用一个圆桶状的PVC板包裹，作为贻贝受到捕食者气味影响后足丝生长附着的基质，筛选时间为72h，水箱周围用气石不断曝气，全程不进行投喂，记录足丝数，将足丝数从大到小排列，选取足丝生长数前二分之一的贻贝进行后续筛选。

8.根据权利要求1所述综合抗逆贻贝的筛选方法，其特征在于，步骤S7中，贻贝均匀摆放在底部有网格的水箱中，周围用气石不断曝气，筛选期为24h，用照相机记录贻贝每小时的位置情况，根据位置变化计算贻贝自组织的运动距离，将运动距离的数值从大到小进行排列，选取运动距离前二分之一的贻贝进行后续筛选。

9.根据权利要求1所述综合抗逆贻贝的筛选方法，其特征在于，步骤S8中，采用小型呼吸室，设定的环境指标为：盐度:25‰–30‰，pH:8.1±0.1，温度:15–25℃，溶氧浓度≥6mg/L，将呼吸室中的水体流动设置循环周期，每个周期分为三部分：第一部分为外部蓄水箱缓慢向呼吸室内加入新水的过程，第二部分为等待时间，第三部分为测量呼吸室内水体中溶氧变化时间，利用公式计算出其耗氧值，开始前系统中不放贝进行若干循环以监测水体中背景耗氧值，而后对贻贝标准代谢率进行测定，将标准代谢率数值从大到小进行排列，选取标准代谢率后二分之一的贻贝作为繁殖用亲贝，至此筛选结束。

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