CN114423411A - 榄仁提取物的化妆品或保健品用途 - Google Patents
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Abstract
本发明涉及榄仁提取物的化妆品和/或营养品用途，用于对抗和/或预防和/或治疗和/或减缓健康角蛋白纤维、优选健康头发的老化。本发明进一步涉及一种美容护理方法，其特征在于：将榄仁提取物局部应用至健康角蛋白纤维、特别是健康头发的至少一个区域，以对抗和/或预防和/或治疗和/或减缓健康角蛋白纤维、优选健康头发的老化。最后，本发明还涉及榄仁提取物，其用于治疗和/或预防角蛋白纤维、优选头发生长的减少，和/或角蛋白纤维、优选头发脱落的增加，这些现象与病理学相关，特别是脱发，优选老年脱发或雄激素性脱发、休止期脱发或斑秃。
Description
本发明的主题是榄仁(Terminalia catappa)提取物用于对抗和/或预防和/或治疗和/或减缓健康角蛋白纤维、优选健康头发的老化以及维持和/或增加健康皮肤、优选健康头皮的皮肤稳态，以及预防和/或减少和/或消除由皮肤菌群的一种或多种共生微生物菌株引起的健康皮肤、优选健康头皮的难看和/或不愉快和/或不舒服的表现，以及榄仁提取物用于治疗和/或预防角蛋白纤维、优选毛发生长减少和/或角蛋白纤维、优选头发脱落增加，这些现象与病理有关，特别是脱发，优选老年性或雄激素性脱发、休止期脱发或斑秃。
角蛋白纤维是表皮性组织的惰性结构。它主要由角质化的死细胞组成。不同类型的角蛋白纤维根据其位置、生长和功能进行区分：睫毛、眉毛、体毛，尤其是络腮胡和唇胡，以及头发，也称为毛发纤维。优选，根据本发明的角蛋白纤维选自毛发纤维(头发)、睫毛、眉毛，和络腮胡和/或唇胡的体毛，甚至更优选它是毛发纤维。一般来说，三个主要的同心部分构成角蛋白纤维：中心的髓质(或髓管)，中间区域的皮质，最后是形成表面鳞片的角质层。皮质区代表毛干的主要部分(占总重量的90％)。它是色素沉着的场所，并赋予角蛋白纤维物理和机械性能。角质层是角蛋白纤维的保护膜，由高度角化的非色素细胞组成，形成头发的外层鳞片。髓质位于毛干的中心。它由大的无核细胞组成，与皮质细胞相比透明或略带色素。
能够合成角蛋白纤维、特别是毛发的器官是毛囊。在头发的情况下，延伸到头皮下，在其他角质纤维的情况下延伸到皮肤的表皮下，并且可以分为三个大致相似长度的部分：漏斗部或浅部、峡部或中部、球部或下段。毛囊由活细胞如角质形成细胞、成纤维细胞和黑素细胞以及细胞外基质组成。通过生物结构的细胞和分子的相互作用使得能够合成毛干。它是在毛囊最深处产生的：球部，向皮肤表面生长，特别是头皮表面的头发。先前被细胞包围的毛干在皮脂管口高度处的漏斗部中游离，皮脂管是伴随毛囊的附属物。在头发的头皮根部或与皮肤的交界处可见的角蛋白纤维、特别是毛发纤维，可以被认为是新生纤维。在皮肤、特别是头皮中所含的根部不可见的纤维可以称为芽前纤维。毛发纤维的平均生长时间平均为3-4年。在正常平均条件下，其生长速度估计为1厘米/月。发茎从产生位置到与头皮表面齐平大约需要2周时间。一个6厘米的芽茎大约需要6个月才能形成。
在老化过程中，角蛋白纤维、特别是毛发纤维的结构和功能品质会恶化。头发和睫毛更细，从而更脆弱。头发也更难梳理和整理。睫毛和眉毛更难安置和化妆。
角蛋白纤维、特别是头发的老化包括角蛋白纤维(特别是毛发的)老化和毛囊的老化。包含毛囊的头皮在毛囊的行为和老化以及毛发纤维的质量和生长中也起着非常重要的作用。
随着年龄的增长，纤维的质量会下降，使其在与环境接触时变得更加脆弱。老化的头发比年轻的头发更细、更易受损、更脆。头发缺乏蓬松感、光泽和活力。
漂白剂、染料、洗涤剂、直发剂等化学品的使用直接影响毛发纤维的结构和功能特性。这些产品对毛发纤维的影响可以通过离体方法对头发进行评估。具体而言，与毛发纤维的弹性和可变形性有关的机械性能可以通过测量抗拉力来评估。纤维的表面结构质量也可以通过诸如光学显微镜或电子显微镜等的成像技术进行评估。
因此，与较年轻的头发相比，老年的头发更容易受损、更细，尤其难以梳理和定型并且易断，尤其是分叉。这种头发表面质量的缺失是可见的且难看的。头发也反射较少的光，因此明显缺少光泽，较不发亮。这种老化也会对脱发产生影响，随着时间的推移会导致头发变得脆弱和脱发。头发因此显得不那么浓密。其他角蛋白纤维呈现出相同的老化现象，改变了它们的质量和数量，这对睫毛和眉毛来说是特别难看的且通常是不受欢迎的。
美容方法通常包括修复表皮性皮肤组织、特别是角蛋白纤维的结构，以恢复它们的完整性和/或它们的视觉特性。
用于促进或维持毛发密度的策略可以分为三种类型：刺激生长期，减少现有头发的脱落，例如通过刺激将头发固定在头皮上，或通过形成和促进新的生长周期和新头发的生长。尤其是刺激头发生长和对抗脱发的药学领域的成分是已知的。这些成分是用于治疗脱发、主要是雄激素性脱发或激素依赖病理性脱发的特定化学分子。在化妆品领域，也存在解决方案。
TRPV1(瞬时受体电位家族香草醛1型受体)是TRP(瞬时受体电位)通道家族的非选择性膜阳离子通道(Ca2+、Mg2+、Na+、K+、Cs+)。它在细胞膜上形成一个端口，使得离子在细胞之间或内部介质和外部介质之间可以被动迁移。
TRPV1最初在感觉神经元中被描述为各种伤害性刺激的整合中心，特别是疼痛和热感。然而，该通道也在其他细胞类型中表达，包括构成皮肤的细胞(角质形成细胞、黑素细胞)和毛囊(外鞘的角质形成细胞、基质的角质形成细胞)(BodóE1等人，A hot new twistto hair biology:involvement of vanilloid receptor-1(VR1/TRPV1)signaling inhuman hair growth control.Am J Pathol.2005Apr；166(4):985-98)。还观察到这种受体的活性随着年龄的增长而增加，尤其是在健康皮肤中(Lee YM等人。Increased expressionof TRPV1 channel in intrinsically aged and photoaged human skin in vivo.ExpDermato.2009May；18(5):431-6)，从而积极参与健康皮肤、特别是健康头皮和健康角蛋白纤维、特别是健康头发的老化。
事实上，已经观察到TRPV1的激活能够导致产生改变所诱导的良好毛发生长的信号。已经观察到，辣椒素对TRPV1的激活抑制了角蛋白纤维、特别是头发的伸长，并诱导了毛囊细胞的凋亡，特别是促进了角蛋白纤维、特别是头发的退化(退行期)(Tóth BI等人。Endocannabinoids modulate human epidermal keratinocyte proliferation andsurvival via the sequential engagement of cannabinoid receptor-1and transientreceptor potential vanilloid-1.J Invest Dermatol.2011May；131(5):1095-104)。此外，在激活TRPV1后，体内参与毛发生长的生长因子的产生被改变。这尤其已在表现出毛发生长周期缺陷的trpv1基因缺陷小鼠身上得到证实(BíróT,BodóE,Telek A,Géczy T,Tychsen B,Kovács L,Paus R.Hair cycle control by vanilloid receptor-1(TRPV1):evidence from TRPV1 knockout mice.J Invest Dermatol.2006Aug；126(8):1909-12)。
还观察到TRPV1参与细胞分化和增殖，因此参与表皮屏障的稳态。有缺陷的TRPV1通道导致皮肤屏障缺陷，辣椒素(一种TRPV1的激活剂)延迟表皮屏障的恢复(Denda M etal.Effects of skin surface temperature on epidermal permeability barrierhomeostasis.J Invest Dermatol.2007Mar；127(3):654-9.Epub 2006Oct 19)。
出乎意料地，申请人发现榄仁提取物具有抑制TRPV1活化和表达的活性，该提取物对健康角蛋白纤维、尤其是健康头发、在皮肤、优选健康头皮上起作用，使得其成为令人感兴趣的活性成分。
此外，维持共生微生物菌群的质量和良好的平衡状态对于健康皮肤、优选健康头皮和/或健康角蛋白纤维、优选健康头发的良好状况至关重要。
在皮肤中，来自共生菌群的微生物，特别是表皮葡萄球菌(S.epidermidis)、马拉色菌限制性酵母菌(Malassezia restricta)和痤疮丙酸杆菌(P.acnes)具有显著的脂肪酶活性(Juntachai W等人，The lipolytic enzymes activities of Malasseziaspecies.Med Mycol.2009；47(5):477-84)。甘油三酯和皮脂酯可以被细菌脂肪酶分解并转化为可以激活TRPV1受体的脂质衍生物(Bin Saif GA,Ericson ME,Yosipovitch G.Theitchy scalp--scratching for an explanation.Exp Dermatol.2011Dec；20(12):959-68)，因此是健康皮肤、优选健康头皮发热的原因。因此，美容和/或保健品治疗通常旨在维持和/或减少健康皮肤、优选健康头皮的细菌、特别是痤疮丙酸杆菌的生长。痤疮丙酸杆菌是一种革兰氏阳性共生细菌，可能与炎症型疾病、特别是痤疮有关(Leyden JJ等人，Propionibacterium levels in patients with and without acne vulgaris.J InvestDermatol.1975Oct；65(4):382-4)。在这种皮肤病中，痤疮丙酸杆菌的刺激显著增加TRPV1的表达(J Cell Biochem.2018Nov；119(11):9141-9153.doi:10.1002/jcb.27176.Epub2018Aug 13.Sirtuin6 inhibits c-triggered inflammation through TLR4 abrogationregulated by ROS and TRPV1/CGRP.Zhang R1,Li H1,Guo Q1,Zhang L1,Zhu J1,Ji J1)，从而提高了TRPV活性。
然而，与健康区域相比，健康头皮上头皮屑的增加已被证明与表皮葡萄球菌和马拉色菌限制性酵母菌的增加和痤疮丙酸杆菌的减少以及受头皮屑影响的头皮区域的较高量的氧化脂质有关(Arch Dermatol Res.2016Apr；308(3):153-63.doi:10.1007/s00403-016-1623-1.Epub 2016Feb 3.Exploration of scalp surface lipids revealssqualene peroxide as a potential actor in dandruff condition.Jourdain R1,MogaA2,Vingler P3,El Rawadi C3,Pouradier F4,Souverain L3,Bastien P3,Amalric N2,Breton L3)。
出乎意料地，申请人发现榄仁提取物可以维持和/或减少在健康皮肤、尤其是头皮中由皮肤菌群的一种或多种共生微生物菌株诱导的TRPV1的活化，特别是维持和/或降低一种或多种共生微生物菌株的脂肪酶活性，和/或维持和/或减少表皮葡萄球菌生物膜的形成，和/或预防以及维持和/或减少健康头皮上的表皮葡萄球菌与痤疮丙酸杆菌的比率。
榄仁提取物是一种完整的活性成分，用于护理角蛋白纤维、特别是头发，以及皮肤、特别是头皮。另一个优势是它是来自符合供应规则的可持续发展链的天然资源。它也是一种化学稳定的提取物，未表现出过敏特性，可以很容易地以工业化规模生产。
榄仁植物或“印度榄仁树(Indian badamier)”是荆芥科的一个非常常见的物种。它是一种高5到25m的树，它的树枝是水平且垂直的。榄仁植物在热带和亚热带的广泛地理分布部分解释了其多年来在非洲、亚洲和美洲民间医学中的重要用途。
在外用方面，榄仁植物主要用于风湿病的护理。在内用方面，它用于治疗胃肠道、呼吸系统和心血管疾病。在伤口和溃疡的情况下，茎皮提取物因其收敛作用(单宁)而外用。
申请FR2753371公开了榄仁植物提取物单独或与其他活性化合物组合在用于皮肤和表皮性组织的外用化妆品和/或药物组合物中的用途，特别是用于抗炎、舒缓、收敛、紧致、抗压保护和恢复(UV-R、污染、各种机械、物理和化学侵蚀)。它还公开了用于皮肤、头发或指甲，更通常为表皮性组织的局部美容、皮肤病学或药物组合物或制剂，其特征在于它们特别包含美容或药学有效量的榄仁植物提取物作为活性剂。这些组合物被描述为在皮肤水平上具有显著的局部抗炎、舒缓、紧致和收敛作用，在皮肤和头皮水平上具有抗皮肤老化和抗刺激作用。
然而，该申请未公开榄仁提取物对角蛋白纤维老化的作用，也未公开其对健康皮肤、优选健康头皮的皮肤稳态的作用，也未公开其对由皮肤菌群的一种或多种共生微生物菌株引起的健康皮肤、优选健康头皮的难看和/或不愉快和/或不适表现的作用。
专利申请FR2951942公开了至少一种榄仁属植物或其一种提取物作为促进和/或诱导和/或刺激表皮性组织色素沉着的活性剂和/或作为预防和/或限制和/或减少皮肤表皮性组织的脱色和/或变白、特别是作为预防和/或限制皮肤病的活性剂的用途。根据该发明的有用的提取物是从榄仁的叶子，或者甚至从毛诃子(Terminalia belerica)、柯子(Terminalia chebula)、阿朱那榄仁树(Terminalia Arjuna)、榄仁(Terminalia catappa)的树皮制备的。
因此，在本发明的上下文中，根据本发明的榄仁提取物不用作促进和/或诱导和/或刺激角蛋白纤维色素沉着的活性剂，和/或不用作预防和/或限制和/或减少角质纤维的脱色和/或变白的活性剂。
申请DE102013018981公开了一种通过超临界CO2提取获得榄仁属提取物，特别是榄仁、柯子和毛柯子的提取物，优选榄仁提取物的方法，以及使用该提取物使皮肤恢复活力、加速受压皮肤的再生、软化皮肤和/或延缓皮肤老化的用途。然而，该申请没有公开榄仁提取物在对抗和/或预防和/或治疗和/或减缓健康角蛋白纤维、优选健康头发的老化方面的任何美容和/或保健品用途。
因此，据申请人所知，现有技术没有公开或暗示榄仁提取物用于对抗和/或预防和/或治疗和/或减缓健康角蛋白纤维、特别是健康头发的老化的美容和/或保健品用途。也没有公开或暗示榄仁提取物用于维持和/或增加健康皮肤、优选健康头皮的皮肤稳态的美容和/或保健品用途，也没有公开或暗示榄仁提取物用于预防和/或减少和/或消除由皮肤菌群一种或多种的共生微生物菌株引起的健康皮肤、优选健康头皮的难看和/或不愉快和/或不舒服的表现的美容和/或保健品用途。
本发明的目的是提供一种全新的化妆品和/或保健品活性成分，其能够维持和/或降低TRPV1在健康毛囊、特别是健康头发的毛囊中的活性，和/或降低TRPV1在健康毛囊、特别是健康头发的毛囊中的表达。
这种成分具有对抗和/或预防和/或治疗和/或减缓健康角蛋白纤维、特别是健康头发老化的优点。
本发明的第二方面还提供了一种全新的化妆品和/或保健品活性成分，其能够维持和/或降低TRPV1在健康皮肤、优选在健康头皮中的活性，和/或维持和/或降低TRPV1在健康皮肤、优选在健康头皮中的表达。
这种成分具有维持和/或增加健康皮肤、优选健康头皮的皮肤稳态的优点。
本发明的另一方面还在于提供一种全新的化妆品和/或保健品活性成分，和/或能够预防和/或减少和/或消除健康皮肤、优选健康头皮的由皮肤菌群的一种或多种共生微生物菌株诱导的难看和/或不愉快和/或不舒服的表现。
这种新的化妆品和/或活性成分的优点是对于皮肤、特别是头皮，和/或角蛋白纤维、特别是头发是局部可接受的，无毒，容易获得，并且易于以工业化规模制备并包装。
本发明的第一个目的涉及根据本发明的榄仁提取物用于对抗和/或预防和/或治疗和/或减缓健康角蛋白纤维、优选健康头发的化妆品和/或保健品用途。
在本发明的含义内，术语“化妆品用途和/或化妆品组合物”是指非药物用途和/或组合物，即不需要治疗性处理，即意指用于健康皮肤、尤其是健康头皮的任何区域，和/或健康的角蛋白纤维，优选健康头发。
术语“健康的皮肤”或“健康的头皮”或“健康的角蛋白纤维”或“健康的头发”是指皮肤、头皮、角蛋白纤维或头发的区域，根据本发明的所述提取物被应用在该区域上，该区域在皮肤科医生看来是“非病理性的”，也就是说没有表现出任何感染，真菌如癣，球形马拉色菌或白色念珠菌、疤痕、疾病、炎症、创口、伤口、湿疹、牛皮癣、寄生虫病、狼疮、白癜风和/或其他皮肤病，特别是诸如脱发的病理，优选老年性或雄激素性脱发、休止期脱发或斑秃。
在本发明的含义内，术语“保健品用途和/或保健品组合物”是指用于非药物口服施用的用途和/或组合物，不是对抗人类或动物疾病的治愈和/或预防性质的治疗性处理。
因此，在本发明的含义内，其为根据本发明的提取物的化妆品和/或保健品用途，优选化妆品用途。
在本发明的含义内，术语“角蛋白纤维”是指构成人类毛发系统的所有纤维，特别是睫毛、眉毛、体毛，特别是络腮胡和唇胡，和/或头发，优选头发。
在本发明的含义内，术语“健康角蛋白纤维、优选健康头发的老化”是指与年龄相关的健康角蛋白纤维、优选健康头发的所有生理变化，也就是说，健康的角蛋白纤维、优选健康的头发的内在老化。这些改变不包括健康角蛋白纤维、优选健康头发的脱色和/或变白。因此，该提取物不用于对抗和/或预防和/或治疗和/或减缓健康角蛋白纤维、优选健康头发的脱色和/或变白。优选，这些改变不包括健康角蛋白纤维、优选健康头发强度的降低。因此，优选，提取物不用于维持和/或增加健康角蛋白纤维、优选健康头发的强度，和/或增强健康角蛋白纤维、优选健康头发。优选，健康角蛋白纤维、优选健康头发的这些生理改变包括健康角蛋白纤维、优选健康头发的生物力学性质的降低，和/或健康角蛋白纤维、优选健康头发的角质层质量的降低，和/或减少健康角蛋白纤维、优选健康头发的生长，和/或增加健康角蛋白纤维、优选健康头发的脱落，生物力学性质选自柔顺性、抗性、弹性和/或可塑性。
因此，本发明的一个目的涉及根据本发明的榄仁提取物用于对抗和/或预防和/或治疗和/或减缓健康角蛋白纤维、优选健康头发的老化的化妆品和/或保健品用途，特别是维持和/或增加健康角蛋白纤维、优选健康头发的生物力学性质、优选维持和/或增加新形成的健康角蛋白纤维、优选新形成的健康头发的生物力学性质，和/或维持和/或改善健康角蛋白纤维、优选健康头发的角质层质量、优选维持和/或改善新形成的健康角蛋白纤维、优选新形成的健康头发的角质层质量，和/或维持和/或增加健康角蛋白纤维、优选健康头发的生长，和/或预防和/或减少健康角蛋白纤维、优选健康头发的脱落，生物力学特性选自柔顺性、抗性、弹性和/或可塑性。
在本发明的含义内，术语“维持和/或增加健康角蛋白纤维、优选健康头发的生物力学特性”是指用根据本发明的提取物处理维持和/或增加柔顺性、抗性、弹性和/或可塑性，也就是说相对于未用根据本发明的提取物处理的健康角蛋白纤维、优选健康头发，用根据本发明的提取物处理的健康角蛋白纤维、优选健康头发的脆性外观得以维持和/或减少。与未用根据本发明的提取物处理的健康角蛋白纤维、优选健康头发相比，优选用根据本发明的提取物处理的健康角蛋白纤维、优选健康头发的脆性外观得以维持和/或减少。
如下所述，健康角蛋白纤维、优选健康头发的生物力学特性尤其可以通过分析干燥和/或湿健康角蛋白纤维、特别是干燥和/或湿健康头发上的张力和/或触觉感官测试来测量，特别是通过拉伸试验(Dia-Stron)，测量用根据本发明的提取物处理的健康角蛋白纤维、优选健康头发相对于没有用根据本发明的提取物处理的健康角蛋白纤维、优选健康头发的断裂伸长。
优选，提取物用于维持和/或增加新形成的健康角蛋白纤维、优选新形成的健康头发的生物力学性质，所述生物力学性质选自柔顺性、抗性、弹性和/或可塑性。
在本发明的含义内，术语“新形成的健康角蛋白纤维”或“新形成的健康头发”是指在应用根据本发明的提取物之后形成的健康角蛋白纤维或健康头发的部分。因此，不包括在应用根据本发明的提取物之前存在的健康角蛋白纤维或健康头发部分。
角质层是角质纤维、尤其是头发表面的保护膜。它的质量特别影响角蛋白纤维、特别是头发的视觉特性。事实上，角质层在老化过程中受损，角蛋白纤维的鳞片、特别是头发的鳞片，从角蛋白纤维、特别是头发的角蛋白纤维上抬起甚至脱离。因此，角质纤维、特别是头发变得无光泽、脆性、易断，特别是分叉、分裂和/或卷曲。它们也更难成形。角蛋白纤维、特别是头发的这种表面质量的缺失是可见且难看的。角蛋白纤维、特别是头发，实际上也反射更少的光，因此明显更不亮，光泽更少。
在本发明的含义内，术语“维持和/或改善健康角蛋白纤维、优选健康头发的角质层的质量”是指，随着时间的推移维持和/或改善健康角蛋白纤维、尤其是健康头发的角质层的视觉、结构和/或功能状态，与健康角蛋白纤维的角质层状态、尤其是健康、未受损和/或年轻头发的角质层状态相当。优选，这涉及维持和/或增加健康角蛋白纤维、优选健康头发的光泽、亮度和/或厚度。优选，它涉及维持和/或改善新形成的健康角质纤维、优选新形成的健康头发的角质层质量。
优选，相对于未用根据本发明的提取物处理，用根据本发明的提取物处理，纤维健康角蛋白、尤其是健康头发、优选新形成健康角蛋白纤维、优选新形成健康头发的角质层的视觉、结构和/或功能状态具有至少1％，优选至少2％，更优选至少5％的增加。
角质层的质量可以通过本领域技术人员已知的任何方法来评估。例如，使用的评估方法是：
-对角蛋白纤维进行感官测试，特别是在头发上，由受过训练的外来志愿者以定义其视觉或触觉感觉进行。
-专家(尤其是美发师)的评估测试或消费者问卷的自我评估。这些测试可以在具有角蛋白纤维、特别是头发因老化而受损的志愿者身上进行。根据角蛋白纤维、特别是头发可感知的视觉或触觉质量标准评估配方中产品的有效性。
在本发明的含义内，术语“预防健康角蛋白纤维、优选健康头发脱落”是指，相对于未用本发明的提取物处理的健康的角蛋白纤维、特别是健康头发，用根据本发明的提取物处理，预防健康角蛋白纤维、优选健康头发脱落增加。
在本发明的含义内，术语“减少角蛋白纤维、特别是头发脱落”是指，相对于在毛发周期的休止期，即在脱发期，未经处理的健康的角蛋白纤维、优选头发的数量，在毛发周期的休止期，也就是说在脱发期，用根据本发明的提取物处理的健康角蛋白纤维、优选健康头发的量减少至少1％，优选至少2％，更优选至少5％。
健康角蛋白纤维、优选健康头发脱落的测量可以通过测量生长期(头发周期的生长期)角蛋白纤维、特别是头发，与脱落期(休止期)角蛋白纤维、特别是头发的比率来进行，或通过测量由根据本发明的提取物处理的志愿者与未处理的志愿者相比掉落并收集的头发的重量来进行，或者仅通过消费者感知来评估。
在本发明的含义内，术语“维持和/或增加角蛋白纤维、优选毛发的生长”是指，与在不存在根据本发明的提取物的情况下，角蛋白纤维、优选毛发的生长动力学相比，在根据本发明的提取物的存在下，角蛋白纤维、优选毛发的生长动力学的维持和/或增加。
优选，相对于未用本发明的提取物处理的健康角蛋白纤维、优选健康头发，用根据本发明的提取物处理的健康角蛋白纤维、优选健康的头发的长度增加至少1％，优选至少2％，更优选至少5％。
健康角蛋白纤维的长度可以通过本领域技术人员已知的任何常规方法测量。具体而言，它可以通过比较用根据本发明的提取物处理的纤维的茎的露出部分的长度与未处理的纤维的茎的露出部分的长度来测量。这种比较通常在体内或离体进行，对于未处理的对照纤维和用根据本发明的提取物处理的纤维，在时间T0时漂白新出现的纤维并在时间Tx时测量着色纤维的生长长度。
本发明的一个目的还涉及根据本发明的榄仁提取物用于对抗和/或预防和/或治疗和/或减缓角蛋白纤维、特别是头发的老化的化妆品和/或保健品用途，其特征在于该提取物使得可以维持和/或降低TRPV1在健康毛囊、特别是健康头发的毛囊中的活性，和/或维持和/或降低TRPV1在健康毛囊、尤其是健康头发的毛囊中的表达。
本发明的优选实施方案还涉及根据本发明的榄仁提取物用于对抗和/或预防和/或治疗和/或减缓健康角蛋白纤维、优选健康头发的老化的化妆品和/或保健品用途，特别是维持和/或增加健康角蛋白纤维、优选健康头发的生物力学性质，优选维持和/或增加新形成的健康角蛋白纤维、优选新形成的健康头发的生物力学性质，和/或维持和/或改善健康角蛋白纤维、优选健康头发的角质层质量，优选保护和/或维持新形成的健康角蛋白纤维、优选新形成的健康头发的角质层质量，和/或预防和/或减少健康皮肤、优选健康头皮的过热感，和/或维持和/或增加健康皮肤、优选健康头皮的皮肤屏障，和/或维持和/或增加健康角蛋白纤维、优选健康头发的生长，和/或用于预防和/或减少健康角蛋白纤维、优选健康头发脱落，其特征在于提取物使得可以维持和/或降低TRPV1在健康毛囊、特别是健康头发的毛囊中的活性，和/或维持和/或降低TRPV1在健康毛囊、特别是健康头发中的表达，生物力学特性选自柔顺性、抗性、弹性和/或可塑性。
在本发明的含义内，术语“维持TRPV1在健康毛囊、特别是健康头发的毛囊中的活性”是指，与不存在根据本发明的提取物的情况下检测到的活性相比，预防TRPV1受体在健康毛囊、特别是健康头发的毛囊中的活性增加，特别是预防在健康毛囊、特别是健康头发的毛囊的内在老化过程中观察到的TRPV1受体活性的增加。优选，它涉及维持健康毛囊、特别是健康头发的毛囊的健康角质形成细胞中TRPV1的活性。
在本发明的含义内，术语“降低TRPV1在健康毛囊、特别是健康头发毛囊中的活性”是指，相对于不存在本发明的提取物时检测到的活性，在根据本发明的榄仁提取物的存在下，能够降低健康毛囊、特别是健康头发毛囊中受体的活性，优选降低至少10％，更优选降低至少20％，更优选降低至少50％，特别是降低在健康毛囊、特别是健康头发的毛囊内在老化期间观察到的TRPV1受体的活性。优选，降低健康毛囊、特别是健康头发的毛囊的健康角质形成细胞中TRPV1的活性。
优选，根据本领域技术人员已知的标准方法，通过荧光法测量TRPV1受体的活性。更优选，根据实施例2中描述的方案进行测量。
在本发明的含义内，术语“维持TRPV1在健康毛囊、特别是健康头发的毛囊中的表达”是指，相对于不存在根据本发明的提取物的情况下检测到的基因表达和/或蛋白质合成，能够预防TRPV1在毛囊，特别是健康头发的毛囊中的基因表达和/或蛋白质合成水平的增加，特别是预防在健康毛囊、特别是健康头发的毛囊在内在老化期间观察到的TRPV1基因表达和/或蛋白质合成的增加。优选，它是在健康毛囊的健康角质形成细胞、特别是健康毛发的毛囊的健康角质形成细胞中维持TRPV1的表达。优选，在健康毛囊中，特别是在健康头发的毛囊中维持TRPV1的蛋白质合成，更优选，在健康毛囊的健康角质形成细胞中、特别是在健康头发的毛囊的健康角质形成细胞中维持TRPV1的蛋白质合成。
在本发明的含义内，术语“降低TRPV1在健康毛囊、特别是健康头发的毛囊中的表达”是指，相对于不存在根据本发明的提取物的情况下测得的基因表达和/或蛋白质合成，在根据本发明的榄仁提取物的存在下，TRPV1在健康毛囊、特别是健康头发的毛囊中的基因表达和/或蛋白质合成水平降低，优选降低至少10％，更优选降低至少50％，还更优选降低至少70％，特别是在健康毛囊、特别是健康头发毛囊的内在老化期间观察到的TRPV1的基因表达水平和/或蛋白质合成。优选，在健康毛囊的健康角质形成细胞、特别是健康毛发的毛囊的健康角质形成细胞中TRPV1的表达降低。优选，在健康毛囊、特别是健康头发的毛囊中TRPV1蛋白质合成的减少，更优选，在健康毛囊的健康角质形成细胞中、尤其是在健康头发毛囊的健康角质形成细胞中，TRPV1的蛋白质合成减少。
优选，根据本领域技术人员已知的标准方法，通过蛋白质印迹测量TRPV1的蛋白质合成。更优选，根据实施例3中描述的方案进行测量。
此外，本发明的一个目的还涉及根据本发明的榄仁提取物用于维持和/或增加健康皮肤、优选健康头皮的皮肤稳态的化妆品和/或保健品用途。
在本发明的含义内，术语“皮肤稳态”是指维持细胞交换、增殖和/或分化功能之间的平衡，优选细胞增殖和/或分化功能之间的平衡。
可以通过本领域技术人员已知的任何常规方法测量皮肤稳态的维持和/或增加。
优选，如上所述，可以通过测量根据本发明的提取物维持和/或降低健康皮肤中、优选在健康头皮中TRPV1的活性和/或维持和/或降低皮肤、优选的健康头皮中TRPV1的表达的能力来间接评估。
因此，优选，本发明涉及根据本发明的榄仁提取物的化妆品和/或保健品用途，用于维持和/或增加健康皮肤、优选健康头皮的皮肤稳态，优选用于维持和/或降低健康皮肤、优选健康头皮中TRPV1的活性，和/或维持和/或降低TRPV1在健康皮肤、优选健康头皮中的表达。
在本发明的含义内，术语“维持健康皮肤、优选健康头皮中TRPV1的活性”是指，相对于不存在根据本发明的提取物的情况下检测到的活性，能够预防健康皮肤、优选健康的头皮中TRPV1受体的活性增加，特别是预防在健康皮肤、优选健康头皮的内在老化过程中观察到的TRPV1受体活性的增加。优选，维持健康皮肤、特别是健康头皮的健康角质形成细胞中TRPV1的活性。
在本发明的含义内，术语“降低健康皮肤、优选健康头皮中TRPV1的活性”是指，相对于不存在根据本发明的提取物时检测到的活性，在根据本发明的榄仁提取物存在下，能够降低健康皮肤、优选健康头皮中TRPV1受体的活性，优选降低至少10％，更优选降低至少20％，还更优选降低至少50％，特别是降低在健康皮肤、优选健康头皮的内在老化过程中观察到的TRPV1受体的活性。优选，健康皮肤、特别是健康头皮的健康角质形成细胞中TRPV1的活性降低。
优选，根据本领域技术人员已知的标准方法，通过荧光法测量TRPV1受体的活性。更优选，它根据实施例2中描述的方案进行测量。
在本发明的含义内，术语“维持健康皮肤、优选健康头皮中TRPV1的表达”是指，相对于不存在根据本发明的提取物的情况下检测到的基因表达和/或蛋白质合成，能够预防健康皮肤、特别是健康头发的毛囊中TRPV1的基因表达和/或蛋白质合成水平的增加，特别是预防在健康皮肤、优选健康头皮的内在老化过程中观察到的TRPV1的基因表达和/或蛋白质合成水平的增加。优选，是维持健康皮肤的健康角质形成细胞、特别是健康头皮的健康角质形成细胞中TRPV1的表达。优选，是维持在健康皮肤、特别是健康头发的毛囊中TRPV1的蛋白质合成，更优选，是维持在健康皮肤的健康角质形成细胞、特别是在健康头皮的健康角质形成细胞中TRPV1的蛋白质合成。
在本发明的含义内，术语“降低健康皮肤、优选健康头皮中TRPV1的表达”是指，相对于不存在本发明的榄仁提取物的情况下检测到的基因表达和/或蛋白质合成，在存在本发明的榄仁提取物的情况下，在健康皮肤、优选健康头皮中TRPV1的基因表达和/或蛋白质合成水平降低，优选降低至少10％、更优选降低至少50％、还更优选降低至少70％，特别是在健康皮肤、优选头皮的内在老化过程中观察到的TRPV1的基因表达和/或蛋白质合成水平。优选，在健康皮肤的健康角质形成细胞、特别是健康头皮的健康角质形成细胞中TRPV1表达的降低。优选，在健康皮肤、特别是健康头发的毛囊中TRPV1蛋白质合成的减少，更优选在健康皮肤的健康角质形成细胞、尤其是健康头皮的健康角质形成细胞中TRPV1蛋白质合成的减少。
优选地，根据本领域技术人员已知的标准方法，通过蛋白质印迹测量TRPV1的蛋白质合成。更优选，根据实施例3中描述的方案进行测量。
此外，本发明的一个目的还涉及根据本发明的榄仁提取物的化妆品和/或保健品用途，用于预防和/或减少和/或消除在健康的皮肤、优选健康的头皮中由皮肤菌群的一种或多种共生微生物菌株诱导的难看的和/或不愉快的和/或不舒服的表现。
在本发明的含义内，术语“皮肤菌群的共生微生物菌株”是指，在健康皮肤、特别是健康头皮上存在或带入的所有真菌、酵母菌和/或细菌。优选，这些菌是存在或带入到健康皮肤、特别是健康头皮的皮肤菌群的共生细菌，特别选自：人葡萄球菌(Staphylococcushominis)、华氏葡萄球菌(Staphylococcus warneri)、头状葡萄球菌(Staphylococcuscapitis)、表皮葡萄球菌(Staphylococcusepidermidis)、白色念珠菌(Candida albicans)、马拉色菌(Malassezia)，特别是限制性马拉色菌(Malasseziarestricta)、链球菌(Streptocoques)、葡萄球菌(Staphylocoques)，特别是金黄色葡萄球菌(Staphylococcusaureus)、痤疮丙酸杆菌(Propionibacterium acnes)和/或铜绿假单胞菌(Pseudomonasaeruginosa)，优选选自表皮葡萄球菌、限制性马拉色菌、金黄色葡萄球菌和/或痤疮丙酸杆菌，更优选自表皮葡萄球菌(下文称为表皮葡萄球菌)和/或痤疮丙酸杆菌(下文称为痤疮丙酸杆菌)。
在本发明的含义内，术语“由皮肤菌群的一种或多种共生微生物菌株引起的健康皮肤、优选健康头皮的难看和/或不愉快和/或不舒服的表现”是指,由皮肤共生微生物菌群引起的所有非病理性缺陷。优选，它们选自健康皮肤、优选健康头皮的热和/或过热感觉，和/或健康头皮的头皮屑。优选，这些缺陷与由皮肤的共生微生物菌群引起的炎症过程无关和/或不是由炎症过程引起的。
因此，本发明的另一个目的涉及根据本发明的榄仁提取物化妆品和/或营养品用途，用于预防和/或减少和/或消除由皮肤菌群的一种或多种共生微生物菌株诱导的健康皮肤、优选健康头皮的难看和/或不愉快和/或不舒服的表现，优选预防和/或减少健康皮肤、优选健康头皮热和/或过热的感觉，和/或预防和/或减少头皮屑在健康头皮上的出现。
优选，可以通过评价由皮肤菌群的一种或多种共生微生物菌株诱导的TRPV1活化的维持和/或降低来间接评价健康皮肤、优选健康头皮中热和/或过热的预防和/或减少，特别是共生菌群细菌的脂肪酶活性的维持和/或减少。
因此，本发明的优选方案涉及根据本发明的榄仁提取物的化妆品和/或保健品用途，以预防和/或减轻健康皮肤、优选健康头皮中的热和/或过热的感觉，特别是维持和/或减少由皮肤菌群的一种或多种共生微生物菌株诱导的TRPV1的活化。
在本发明的含义内，术语“维持和/或减少皮肤菌群的一种或多种共生微生物菌株诱导的TRPV1的活化”是指预防增加和/或减少由皮肤菌群的一种或多种共生微生物菌株诱导的TRPV1受体的表达，优选由皮肤菌群的一种或多种共生菌株诱导，还优选由痤疮丙酸杆菌诱导。优选，相对于未经本发明的提取物处理的健康皮肤、优选健康头皮，在用根据本发明的提取物处理的健康皮肤、优选健康头皮中，优选降低至少10％，优选降低至少20％，优选降低至少40％。
根据优选方式，维持和/或降低皮肤菌群的一种或多种共生细菌菌株诱导的TRPV1受体的活性特别包括维持和/或降低皮肤菌群的一种或多种共生细菌菌株、优选表皮葡萄球菌和/或痤疮丙酸杆菌的脂肪酶活性。优选，相对于未用本发明的提取物处理的健康皮肤、优选头皮，用本发明的提取物处理的健康皮肤、优选健康头皮的皮肤菌群的一种或多种共生细菌菌株、优选表皮葡萄球菌和/或痤疮丙酸杆菌的脂肪酶活性降低至少10％，优选降低至少20％，更优选降低至少50％。
优选，可以根据本领域技术人员已知的常规方法，通过荧光法测量由皮肤菌群的一种或多种共生微生物菌株诱导的TRPV1受体的活性。更优选，根据实施例5中所述的方案进行测量。
优选，可以根据本领域技术人员已知的常规方法，通过蛋白质印迹来进行由皮肤菌群的一种或多种共生微生物菌株的TRPV1受体表达的测量。更优选，根据实施例5中所述的方案进行测量。
优选，可以根据本领域技术人员已知的常规方法，通过荧光测定法来测量皮肤菌群的一种或多种共生细菌菌株的脂肪酶的活性。更优选，根据实施例6中所述的方案进行测量。
本发明的一个具体实施方案涉及根据本发明的榄仁提取物的化妆品和/或保健品用途，用于预防和/或减少和/或消除由皮肤菌群的一种或多种共生微生物菌株诱导的健康皮肤、优选健康头皮的难看和/或不愉快和/或不适表现，特别是维持和/或减少健康皮肤、优选健康头皮上表皮葡萄球菌生物膜的形成。
在本发明的含义内，术语“维持和/或减少表皮葡萄球菌生物膜的形成”是指，相对于未经本发明的提取物处理的健康皮肤、优选头皮中，用根据本发明的提取物处理的健康皮肤、优选健康头皮中，预防增加和/或减少表皮葡萄球菌生物膜的形成。优选降低至少10％，优选降低至少20％，优选降低至少40％。
可以根据本领域技术人员已知的常规方法，特别是通过专家(特别是美发师)的评价测试或者通过消费者问卷的自我评价来评价健康头皮上头皮屑出现的预防和/或减少。根据角蛋白纤维、特别是头发的可感知视觉质量标准，评估配方中产品的有效性。
优选，可以通过测量健康头皮上的表皮葡萄球菌与痤疮丙酸杆菌的比率来间接评估健康头皮上头皮屑出现的预防和/或减少。
因此，本发明的优选模式涉及根据本发明的榄仁提取物的化妆品和/或保健品用途，用于预防和/或减少健康头皮上头皮屑的出现，优选维持和/或降低健康头皮上表皮葡萄球菌与痤疮丙酸杆菌的比率。
术语“维持和/或降低健康头皮上的表皮葡萄球菌与痤疮丙酸杆菌的比率”是指，相对于未经本发明的提取物处理的健康头皮中，用根据本发明的提取物处理的健康头皮的表面预防葡萄球菌与痤疮丙酸杆菌浓度的比率维持和/或降低，优选葡萄球菌与痤疮丙酸杆菌浓度的比率减少至少10％、优选减少至少20％、甚至更优选减少至少50％；优选相对于未经本发明的提取物处理的健康头皮中，用根据本发明的提取物处理的健康头皮，维持和/或减少表皮葡萄球菌的生长，优选减少至少10％，更优选减少至少20％，还更优选减少至少30％；和/或相对于未经本发明的提取物处理的健康头皮中，用根据本发明的提取物处理的健康头皮，维持和/或增加痤疮丙酸杆菌的生长增加至少10％，优选增加至少20％，更优选增加至少30％。
优选，可以通过已知的常规方法，采用光密度法来进行皮肤菌群的一种或多种共生细菌菌株、优选表皮葡萄球菌和/或痤疮丙酸杆菌的浓度的测量。更优选，根据实施例4中描述的方案进行测量。
本发明的提取物是榄仁提取物，可以从整株植物或植物的一个或多个部分提取，特别是选自根、树皮、种子、胚芽和/或地上部分，特别是茎、花、枝和/或叶子，及其混合物。根据本发明的提取物优选从榄仁的地上部分提取，更优选，它是叶提取物。
可以通过本领域技术人员已知的各种提取方法，获得根据本发明的提取物，例如选自浸渍、热煎、研磨，包括超声研磨，借助于混合器，或者也可以是在亚临界条件下，通过在水中提取得到根据本发明的提取物。优选，通过浸渍进行提取。
提取可以采用干燥或新鲜的材料进行，优选是干燥的，相对于材料和提取溶剂的总重量计，其重量为0.01％至30％(w/w)，优选为0.1％至20％(w/w)，非常优选为0.5％至约15％(w/w)，甚至更优选约4％或约10％(w/w)。
提取可以在4℃至300℃、优选4℃至100℃的温度范围内进行。在本发明的一个优选实施方案中，提取在60℃至90℃、优选70℃至85℃、甚至更优选约80℃的温度下进行。
根据一个替代实施方案中，提取在4℃至20℃的温度范围内进行，同样优选在环境温度下进行，即在20℃左右进行。
在本发明的另一个替代实施方案中，提取在亚临界条件下的水中进行，温度范围为100℃至300℃，优选为120℃至250℃，甚至优选约120℃或约140℃。提取可以在单一给定温度或连续升高的温度下进行。在本发明的一个有利实施方案中，提取在120℃的单一温度下进行。在另一种方案中，按照100℃和200℃之间的三个温度梯度进行，例如120℃、140℃、然后160℃，或者110℃、130℃、然后150℃，或者120℃、145℃、然后170℃。
在“亚临界条件”下提取是指，在水存在下、在温度高于100℃且压力低于221巴(2.21×107Pa)的条件下进行提取，使得水保持液态但具有比室温下的水低的粘度和表面张力，从而增加其介电常数。
因此，提取压力在150巴(1.5×107Pa)和250巴(2.5×107Pa)之间，优选在200(2×107Pa)和221巴(2.21×107)Pa)之间，优选在加压提取高压釜中进行提取。
一般而言，提取可以进行30分钟至24小时，优选30分钟至12小时，更优选1小时至5小时，并且更优选1小时至2小时。非常优选，提取进行一小时内。
根据本发明的提取物可以通过在溶剂或溶剂混合物中提取获得，优选质子极性溶剂，并且优选水、醇、二醇、多元醇、99/1至1/99(w/w)的水/醇、水/二醇或水/多元醇的混合物(如水与乙醇、甘油和/或丁二醇和/或其他二醇，如木糖醇和/或丙二醇等的混合物)，优选在单一溶剂水中进行。
在本发明的含义内，术语“质子极性溶剂”是指具有偶极矩和氢键中能够接受至少一个氢的溶剂。
在一个优选的实施方案中，根据本发明的提取物通过水性提取获得。在本发明的含义内，术语“通过水性提取获得的提取物”是指，相对于水溶液的总重量计，通过用包含按重量计超过60％(w/w)、优选至少70％(w/w)、特别优选至少80％(w/w)、更特别优选至少90％(w/w)重量、还特别优选至少95％(w/w)重量的水的水溶液提取获得的提取物，甚至更优选不包含任何二醇，特别优选不包含任何醇，更特别优选仅包含水。
在另一个替代实施方案中，提取可以在碳酸C6-C16二烷基酯型溶剂和庚烷的存在下进行。根据该实施方案，根据本发明的提取物可以通过将要提取的榄仁部分(植物/溶剂比＝1/10)加入到包含碳酸二烷基酯的提取溶剂中，更优选选自碳酸二辛基酯和碳酸二乙基己基酯，在80℃下搅拌2小时。
根据另一个实施方案，提取在包含椰子水的溶剂中进行。根据该实施方案，根据本发明的提取物可以如下获得：在搅拌下，将榄仁部分(植物/溶剂比＝1/10)加入到pH调节至3或4的提取溶剂(水、椰子水的混合物)中，在80℃下保持1小时，采用封闭环境以防止溶剂蒸发。然后将提取物冷却、离心并通过0.45μm过滤。
在本发明的另一个替代实施方案中，提取可以在非离子表面活性剂存在下进行，优选选自BASF以名称
1200UP销售的月桂基葡糖苷或辛基/癸基葡糖苷(
810UP)，优选辛基/癸基葡糖苷(
810UP)。相对于提取物的总重量计，非离子表面活性剂的重量浓度可以为0.5％至5％(w/w)，优选为0.5至1％(w/w)，甚至优选为1％(w/w)。
优选根据本发明，在提取步骤之后将获得的提取物以0.45μm的截止阈值过滤。可以在提取的任何阶段，根据本领域技术人员已知的技术，对提取物进行额外的脱色和/或除味步骤。特别是，提取物可能会变色。
此外，提取后获得的提取物可以通过蒸发溶剂进行浓缩，或者例如通过冷冻干燥或通过在雾化介质例如麦芽糖糊精的存在下雾化来干燥，然后得到粉末形式的提取物。
根据本发明的优选方案，所获得的榄仁提取物在甘油中配制，相对于最终提取物的总重量计，甘油的浓度为至少20％(w/w)、优选至少50％(w/w)，更优选至少70％(w/w)。非常优选，相对于最终提取物的总重量计，甘油的浓度约为80％(w/w)。
本发明的提取物优选根据下述实施方案之一获得：
-在本发明的第一个实施方案中，提取物是通过在作为唯一溶剂的水中浸渍获得的，相对于溶剂和材料的总重量计，碎叶的量为10％(w/w)，浸渍在80℃的温度下持续1小时。然后在实施例1a)中描述的条件下，将提取物离心、过滤，然后用甘油配制，相对于最终提取物的总重量计，甘油的最终量为80％(v/v)。
-在本发明的第二个实施方案中，提取物是通过在作为唯一溶剂的水中浸渍获得的，相对于溶剂和材料的总重量计，碎叶的量为5％(w/w)，浸渍在20℃的温度下持续2小时。在实施例1b)中所述的条件下，将粗提取物离心、倾析然后过滤，然后在麦芽糖糊精的存在下雾化，相对于最终提取物的总重量计，麦芽糖糊精的最终量为70％(w/w)。
-在第三个实施方案中，提取物通过在乙醇:水混合物(80:20；v/v)中浸渍获得的，相对于溶剂和材料的总重量计，碎叶的量为10％(w/w)，浸渍在80℃的温度下持续一小时。然后在实施例1c)中所述的条件下，将提取物离心、倾析、过滤，然后在麦芽糖糊精的存在下雾化，相对于最终提取物的总重量计，麦芽糖糊精的最终量为80％(w/w)。
-在本发明的第四个实施方案中，提取物是通过在作为唯一溶剂的水中浸渍获得的，相对于溶剂和材料重量计，碎叶的量为20％(w/w)，浸渍在80℃的温度下持续1小时。在实施例1d)中描述的条件下，将粗提物离心、倾析后过滤，然后在麦芽糖糊精的存在下雾化，相对于最终提取物的总重量计，麦芽糖糊精的最终量为60％(w/w)。
-在本发明的第五个实施方案中，提取物是通过在亚临界条件下、在水作为唯一溶剂的水中提取获得的，相对于材料和溶剂的总重量计，碎叶的量为4％(w/w)，在实施例1e)所述的条件下，在5mL/min的流速和120℃的温度及足够的压力下使水处于液态。
-在本发明的第六个实施方案中，提取物是通过在亚临界条件下、在水作为唯一溶剂的水中提取获得的，相对于材料和溶剂的总重量计，碎叶的量为4％(w/w)，在5mL/min的流速和120℃的温度及在足够的压力下使水呈液态。然后在实施例1f)中描述的条件下，将提取物干燥并研磨，获得细粉末。
-在本发明的第七个实施方案中，提取物是通过在亚临界条件下、在水作为唯一溶剂的水中提取获得的，相对于材料和溶剂的总重量计，碎叶的量为的4％(w/w)，以5mL/min的流速和120℃的温度及足够的压力使水处于液态。然后在实施例1g)中所述的条件下，将提取物浓缩并过滤(0.45μm)，然后用甘油配制，相对于最终提取物的总重量计，甘油的最终量为80％(w/w)。
-在本发明的第八个实施方案中，所述提取物是通过在亚临界条件下、在水作为唯一溶剂的水中提取获得的，相对于所述材料和溶剂的总重量计，碎叶的量为4％(w/w)，在实施例1h)所述的条件下，在5mL/min的流速和140℃的温度及足够的压力使水处于液态。
根据一个优选的方案，根据本发明的提取物不是通过超临界二氧化碳提取(也称为超临界CO2提取)获得的。
根据本发明，本发明的榄仁提取物可以以活性成分的形式单独使用，和/或用于化妆品和/或保健品组合物中，优选局部应用和/或通过口服途径应用，更优选通过局部途径应用。
当其以活性成分的形式单独使用时，根据本发明的提取物优选溶于溶剂中和/或在溶剂中稀释，特别是极性溶剂，例如水、醇、多元醇、二醇，例如戊二醇和/或丁二醇和/或己二醇和/或辛二醇，或它们的混合物，优选水二醇或水醇混合物，更优选包含选自己二醇、辛二醇及其混合物的二醇。
优选，根据本发明的提取物可溶解和/或溶解在包含甘油的水溶液中，优选，相对于水溶液的总重量计，所述溶液为包含按重量计至少10％(w/w)、优选至少15％(w/w)、更优选17.5％(w/w)甘油的溶液。
或者，获得的提取物可溶解和/或稀释在包含辛二醇的水溶液中，相对于水溶液的总重量计，特别是包含0.01至5％(w/w)的辛二醇、优选0.1至1％(w/w)的辛二醇的水溶液。
在另一个实施方案中，可以将根据本发明的提取物掺入化妆品和/或保健品组合物中，该组合物包含至少一种化妆品可接受的和/或保健品可接受的赋形剂。优选，将其掺入包含至少一种化妆品可接受赋形剂的化妆品组合物中。
在本发明的含义内，术语“化妆品可接受的”赋形剂是指局部可接受的化合物和/或溶剂，或它们的等价物，也就是说，在与包括人头皮的皮肤和/或粘膜接触时不诱发不适当的过敏反应、无毒、稳定。
在本发明的一个优选实施方案中，相对于组合物的总体积计，根据本发明的提取物在化妆品组合物中的体积含量为1×10-4％至10％(v/v)，优选为1×10-4％至5％(v/v)，更优选在1×10-3％和3％(v/v)之间，还更优选在0.1％和1％(v/v)之间。
根据本发明的化妆品组合物可以是常规用于局部施用于包括头皮的皮肤和/或健康的角蛋白纤维、优选健康的头发的任何盖仑制剂形式，例如液体形式或固体形式或甚至在压力下呈液体的形式。它们尤其可以配制成水性或油性溶液、乳膏或水性凝胶或油性凝胶的形式，特别是在罐或管中，特别是沐浴露、洗发水、护发素、洗面奶、卸妆油、乳液、水凝胶、微乳剂或纳米乳剂(特别是水包油或油包水型或多重型或基于硅氧烷型)、精华素、乳剂，特别是在玻璃瓶或塑料瓶中或在定量瓶中或是气雾剂或喷雾剂、安瓿、液体或固体肥皂、糊剂、软膏、摩丝、头皮护理膜、发胶、贴剂、无水产品，优选液体、糊剂或固体，例如棒状，特别是棒状或粉末状。也可以是彩妆产品或卸妆产品。优选，化妆品组合物选自精华素、乳剂、霜剂、洗发剂、调理剂、卸妆油、洗面奶、软膏、糊剂、摩丝、乳液、水凝胶、沐浴露、头皮护理膜、发胶、喷雾剂、发蜡，甚至更优选它是霜剂、精华素、洗发水、护发素或乳液，甚至更优选霜剂、精华素或乳液。
因此，优选，该化妆品组合物旨在局部施用于健康皮肤，优选健康头皮，和/或健康角蛋白纤维，优选健康头发。
优选，根据本发明的提取物特别适用于配制所谓的中性和温和的组合物以保护皮脂腺，特别是包括头皮的皮肤和/或粘膜。
或者，根据本发明的提取物可以是常规用于口服应用的任何盖仑制剂形式，特别是保健品活性成分和/或保健品组合物的形式。
如前所述，根据本发明的榄仁提取物优选以化妆品和/或保健品，或药物(优选皮肤病学组合物)的形式使用。
根据本发明的组合物可以包含任何合适的溶剂和/或任何合适的载体和/或任何合适的赋形剂，任选与其他感兴趣的化合物组合。
因此，对于这些组合物而言，赋形剂包含例如至少一种选自下列的物质：防腐剂、润肤剂、乳化剂、表面活性剂、保湿剂、增稠剂、调理剂、消光剂、稳定剂、抗氧化剂、质地剂、光泽剂、成膜剂、增溶剂、颜料、染料、香水和滤光剂。这些赋形剂优选选自下列物质：氨基酸及其衍生物、聚甘油、酯、聚合物和纤维素衍生物、羊毛脂衍生物、磷脂、乳铁蛋白、乳过氧化物酶、基于蔗糖的稳定剂、维生素E及其衍生物、天然和合成蜡、植物油、甘油三酯、不皂化物、植物甾醇、植物酯、硅酮及其衍生物、蛋白质水解物、荷荷巴油及其衍生物、脂溶性/水溶性酯、甜菜碱、氨基氧化物、植物提取物、蔗糖酯、二氧化钛、甘氨酸和对羟基苯甲酸酯，更优选选自丁二醇、硬脂醇聚醚-2、硬脂醇聚醚-21、丙二醇-15硬脂醇醚、鲸蜡硬脂醇、苯氧乙醇、对羟基苯甲酸甲酯、对羟基苯甲酸乙酯、对羟基苯甲酸丙酯、对羟基苯甲酸丁酯、丁二醇、天然生育酚、甘油、二羟基十六烷基磷酸钠、异丙基羟基十六烷基醚、乙二醇硬脂酸酯、三异壬精、椰油酸辛基酯、聚丙烯酰胺、异链烷烃、月桂醇聚醚-7、卡波姆、丙二醇、甘油、红没药醇、聚二甲基硅氧烷、氢氧化钠、PEG 30-二聚羟基硬脂酸酯、癸酸/辛酸甘油三酯、辛酸鲸蜡硬脂基酯、己二酸二丁酯、葡萄籽油、荷荷巴油、硫酸镁、EDTA、环甲硅油、黄原胶、柠檬酸、十二烷基硫酸钠、矿物蜡和矿物油、异硬脂酸异硬脂基酯、丙二醇二壬酸酯、丙二醇异硬脂酸酯、PEG 8、蜂蜡、氢化棕榈仁油甘油酯、氢化棕榈油甘油酯、羊毛脂油、芝麻油、乳酸鲸蜡酯、羊毛脂醇、蓖麻油、二氧化钛、乳糖、蔗糖、低密度聚乙烯、等渗盐水溶液。
本领域技术人员已知许多美容活性成分可改善皮肤(包括头皮)和/或角蛋白纤维、特别是头发的健康和/或物理外观。本领域技术人员知道如何配制化妆品、保健品或皮肤病学组合物以获得最佳效果。另一方面，本发明中描述的化合物当它们彼此组合时可能具有协同作用。本发明也涵盖这些组合。CTFA化妆品成分手册(CTFA Cosmetic IngredientHandbook),第2版(1992)描述了化妆品和制药行业常用的各种化妆品和药物成分，特别适合局部使用。这些成分类别的例子包括但不限于以下化合物：研磨剂、吸收剂、用于美学目的的化合物，例如香水、颜料、染料、精油、收敛剂等(例如：丁香油、薄荷醇、樟脑、桉树油、丁香酚、乳酸薄荷酯、金缕梅馏出物)、抗粉刺剂、抗絮凝剂、消泡剂、抗菌剂(例如：氨基甲酸碘丙基丁酯)、抗氧化剂、粘合剂、生物添加剂、缓冲剂、溶胀剂、螯合剂、添加剂、杀生物剂、变性剂、增稠剂和维生素及其衍生物或等价物、成膜材料、聚合物、遮光剂、pH调节剂、还原剂、脱色剂或美白剂(例如：对苯二酚、曲酸、抗坏血酸、抗坏血酸磷酸镁、抗坏血酸葡糖胺)、调理剂(例如保湿剂)。
化妆品组合物还可以包含具有相同性质并且与根据本发明的提取物诱导或不诱导协同作用的其他化妆品成分和/或保健品成分，或具有互补作用的化妆品成分。
作为抗脱发活性成分，可以提及硫肽、氨基酸、氨基糖、B族维生素、锌和/或申请人以名称TrichogenTMLS 8960销售的人参(Panax ginseng)和蒿(Artium majus)提取物，和/或毛发保护剂，例如申请人以LitchidermTM销售的荔枝(Litchi chinensis)果皮提取物，和/或舒缓和止痒活性成分，例如申请人以名称PhytosootheTM LS9766销售的菜籽植物甾醇，和/或用于强化毛囊的活性成分，例如红毛丹(Nephelium lappaceum)提取物和/或米诺地尔(minodoxil)、丙戊酸，由Amorepacific销售，和/或stemoxidine和/或aminoxil和/或Hairgenyl，由Silab销售，和/或Rednensyl，由Givaudan-Induchem销售，和/或Anagain，由Mibelle销售，和/或
由Provital销售，去头屑活性成分，例如吡啶硫酮锌和/或吡啶酮乙醇胺盐(octopirox)和/或酮康酮。
组合物中也可以存在其他类型的活性成分，例如以名称DN-AgeTM销售的决明子(Cassia alata)叶提取物作为头发护理的抗氧化活性成分，特别是丹参(Salviamiltiorhizza)提取物和烟酰胺的组合，以CollRepairTM名义作为去糖化剂销售，或促进皮肤紧致的活性成分，例如以名称DermicanTM销售的合成四肽，以名称LinefactorTM销售的芙蓉(Hibiscus abelmoschus)提取物，以名称ProteasylTM销售的纯化豌豆提取物，以ElestanTM的名称销售的Manilkara multinervis提取物，以名称CollaliftTM18销售的非洲楝(Khaya senegalensis)提取物，以ArgassentialTM名称销售的摩洛哥坚果浆提取物，以SqisandrylTM为名销售的五味子(Schizandra chinensis)提取物，申请人以MAT-XSTMBright的名称销售的肾茶(Orthosiphon stamineus)提取物。这些活性成分的组合可能会增强毛囊并减少角蛋白纤维、尤其是头发的脱落。
化妆品或保健品组合物还可以包含一种或多种对皮肤和/或粘膜微生物菌群具有活性，和/或对皮肤屏障功能具有活性的其他成分，特别是保湿和/或舒缓活性成分，包括由Solabia公司以名称BioEcoliaTM销售的通过酶合成法获得的寡糖，或由同一公司以名称EcoskinTM销售的α-葡糖寡糖复合物，泽泻(Alisma plantago-aquatica)提取物，刺阿干树(Argania spinosa)提取物(LipofructylTMArgan)、神经酰胺(SphingocerylTMVEG)的混合物、波尔多树(Boldo)的纯化提取物(BetapurTM)、基于菊粉或低聚果糖的产品、双歧杆菌提取物，或用于对抗油性皮肤的肾茶(Orthosiphon stamineus)提取物(MAT-XSTMBright)，具有保湿性能的天然蜂蜜提取物，申请人以MelhydranTM名义销售，由申请人以名称OligolinTM销售的亚麻提取物，申请人以名称RelipidiumTM销售的生物技术改性的酵母提取物，由申请人以名称InhipaseTM销售的葛根(Pueraria lobata)提取物，由Mibelle以名称CM-Glucan ForteTM销售的来自面包酵母的β-葡聚糖衍生物,和/或由Sederma以名称PacifeelTM销售的紫茉莉(Mirabilis jalapa)提取物。
本发明还涉及美容护理方法，包括将根据本发明的榄仁提取物局部施用至健康角蛋白纤维、特别是健康头发的至少一个区域，以对抗和/或预防和/或治疗和/或减缓健康角蛋白纤维、优选健康头发的老化，以维持和/或增加健康角蛋白纤维、优选健康头发的生物力学性质，优选维持和/或增加新形成的健康角蛋白纤维、优选新形成的健康头发的生物力学性质，和/或维持和/或改善角质层健康角蛋白纤维，优选健康头发的质量，优选维持和/或改善新生健康角蛋白纤维、优选新生健康头发的角质层质量，和/或用于维持增强和/或增加健康角蛋白纤维、优选健康头发的生长，和/或预防和/或减少健康角蛋白纤维、优选健康头发、甚至更优选维持和/或降低健康毛囊、特别是健康头发的毛囊中TRPV1的活性，和/或维持和/或降低健康毛囊、特别是健康毛发的毛囊中TRPV1的表达，生物力学特性选自柔顺性、强度、弹性和/或塑性。
优选，根据本发明的榄仁提取物，优选以根据本发明的化妆品组合物的形式使用，在至少10天内，优选20天，甚至更优选至少28天，优选每天至少一次，优选每天两次用于常规局部应用。
优选，本发明还涉及美容护理方法，用于对抗和/或预防和/或治疗和/或减缓健康角蛋白纤维、优选健康头发的老化，维持和/或增加健康角蛋白纤维、优选健康头发的生物力学性质，优选用于维持和/或增加新形成的健康角蛋白纤维、优选新形成的健康头发的生物力学性质，和/或用于维持和/或改善角质层健康角蛋白纤维、优选健康头发的质量，优选维持和/或改善新形成的健康角蛋白纤维、优选新形成的健康头发的角质层的质量，和/或维持和/或增加健康角蛋白纤维、优选健康头发的生长，和/或预防和/或减少健康角蛋白纤维、优选健康头发脱落，生物力学特性选自柔顺性、抗性、弹性和/或塑性，所述方法包括以下步骤：
-健康角蛋白纤维、特别是健康头发区域的个体识别，希望对抗和/或预防和/或治疗和/或减缓健康角蛋白纤维、优选健康头发的老化，维持和/或增加健康角蛋白纤维、优选健康头发的生物力学性质，优选维持和/或增加新形成的健康角蛋白纤维、优选新形成的健康头发的生物力学性质，和/或维持和/或改善健康角蛋白纤维、优选健康头发的角质层质量，优选维持和/或改善新形成的健康角蛋白纤维、优选新形成的健康头发的角质层质量，和/或维持和/或增加健康角蛋白纤维、优选健康头发的生长，和/或预防和/或减少健康角蛋白纤维、优选健康头发脱落，生物力学特性选自柔顺性、抗性、弹性和/或可塑性，和
-将包含有效量的根据本发明的榄仁提取物的化妆品组合物局部应用于健康角蛋白纤维、特别是健康头发的区域，用于对抗和/或预防和/或治疗和/或减缓健康角蛋白纤维、优选健康头发老化，用于维持和/或增加健康角蛋白纤维、优选健康头发的生物力学性质，优选维持和/或增加新形成的健康角蛋白纤维、优选新形成的健康头发的生物力学性质，和/或维持和/或改善健康角蛋白纤维、优选健康头发的角质层质量，优选维持和/或改善健康新生角蛋白纤维、优选新形成的健康头发的角质层质量，和/或维持和/或增加健康角蛋白纤维，优选健康头发的生长，和/或用于预防和/或减少健康角蛋白纤维、优选健康头发的脱落，生物力学性质选自柔顺性、抗性、弹性和/或可塑性，在健康角蛋白纤维、特别是健康头发的区域，相对于组合物的总体积计，提取物的含量在1×10-4％和20％(v/v)体积之间，优选在1×10-4％和5％(v/v)体积之间，优选在1×10-3％和3％(v/v)体积之间，更优选在0.1％和1％(v/v)体积之间。
在本发明的含义内，术语“局部途径”是指，将根据本发明的提取物在健康角蛋白纤维、特别是健康头发区域的表面和/或在健康皮肤、特别是健康头皮的表面直接局部应用和/或喷雾。
在本发明的含义内，术语“局部和/或口服可接受的”是指分别适合通过局部和/或口服途径施用、对包括头皮在内的皮肤无毒、无刺激性且不会引起过敏反应，并且在化学上不是不稳定的物质。
此外，本发明还涉及一种美容护理方法，该方法包括将本发明的榄仁提取物局部应用到健康皮肤、优选健康头皮的至少一个区域，以维持和/或增加健康皮肤、优选健康头皮的皮肤内稳态，优选维持和/或降低健康皮肤、优选健康头皮中TRPV1的活性，和/或维持和/或降低健康皮肤、优选健康头皮中TRPV1的表达。
优选，根据本发明的榄仁提取物，优选为根据本发明的化妆品组合物的形式，用于常规局部应用，并选每天至少一次，还优选每天两次，持续至少10天，优选20天，更优选至少28天。
优选，本发明还涉及美容治疗方法，用于维持和/或增加健康皮肤、优选健康头皮的皮肤稳态，优选维持和/或降低健康皮肤、优选健康头皮中的TRPV1活性，和/或维持和/或降低健康皮肤、优选健康头皮中TRPV1的表达，所述方法包括以下步骤：
-对个体健康皮肤、优选健康头皮区域的识别，希望维持和/或增加健康皮肤、优选健康头皮的皮肤稳态，优选维持和/或减少健康皮肤、优选在健康头皮中TRPV1的活性，和/或维持和/或降低健康皮肤、优选在健康头皮中TRPV1的表达，和
-将包含有效量的根据本发明的榄仁提取物的化妆品组合物局部应用到上述健康皮肤、优选健康头皮的区域，以维持和/或增加健康皮肤、优选健康头皮的皮肤稳态，优选维持和/或降低健康皮肤、优选在健康头皮TRPV1中的活性，和/或维持和/或降低健康皮肤中、优选在健康头皮中TRPV1的表达，在所述皮肤区域，相对于组合物的总体积计，提取物含量在1×10-4％和10％(v/v)体积之间，优选在1×10-4％和5％(v/v)体积之间，还优选在1×10-3％和3％(v/v)体积之间，更优选在0.1％至1％(v/v)体积之间。
此外，本发明还涉及一种美容护理方法，包括将根据本发明的榄仁提取物局部应用到健康皮肤、优选健康头皮的至少一个区域，以预防和/或减少和/或消除由皮肤菌群的一种或多种共生微生物菌株引起的健康皮肤、优选健康头皮的难看和/或不愉快和/或不舒服的表现，优选预防和/或减少健康皮肤、优选健康头皮中热和/或过热的感觉，优选维持和/或减少皮肤菌群的一种或多种共生微生物菌株诱导的TRPV1的活化，特别是维持和/或降低皮肤菌群的一种或多种共生菌株的脂肪酶活性，和/或维持和/或减少健康皮肤、优选健康头皮上表皮葡萄球菌生物膜的形成，和/或预防和/或减少健康皮肤上头皮屑的出现，优选维持和/或降低健康头皮上表皮葡萄球菌与痤疮丙酸杆菌的比率。
优选，根据本发明的榄仁提取物，优选为根据本发明的化妆品组合物的形式，用于常规局部应用，优选每天至少一次，还优选每天两次，持续至少10天，优选20天，更优选至少28天。
优选，本发明还涉及美容处理方法，用于预防和/或减少和/或消除由皮肤菌群的一种或多种共生微生物菌株引起的健康皮肤、优选健康头皮的难看和/或不愉快和/或不舒服表现，优选预防和/或减少健康皮肤、优选健康头皮中的热和/或过热感觉，优选维持和/或减少皮肤菌群的一种或多种共生微生物菌株对TRPV1的活化，特别是用于维持和/或降低皮肤菌群的一种或多种共生细菌菌株的脂肪酶活性，和/或用于维持和/或减少在健康皮肤、优选健康头皮上表皮葡萄球菌生物膜的形成，和/或预防和/或减少健康头皮上头皮屑的出现，优选维持和/或降低健康头皮上表皮葡萄球菌与痤疮丙酸杆菌的比率，所述方法包括以下步骤：
-对个体健康皮肤、优选健康头皮区域的识别，希望预防和/或减少和/或消除由皮肤菌群的一种或多种共生微生物菌株诱导健康皮肤、优选健康头皮的难看和/或不愉快和/或不舒服的表现，优选预防和/或减少健康皮肤、优选健康头皮中的热和/或过热感觉，优选维持和/或减少皮肤菌群的一种或多种共生微生物菌株诱导的TRPV1的活化，特别是维持和/或降低皮肤菌群的一种或多种共生菌株的脂肪酶活性，和/或维持和/或减少健康皮肤、优选健康头皮上表皮葡萄球菌生物膜的形成，和/或预防和/或减少健康头皮头皮屑的出现，优选维持和/或降低健康头皮上表皮葡萄球菌与痤疮丙酸杆菌的比率，和
-将包含有效量的根据本发明的榄仁提取物的化妆品组合物局部应用到健康皮肤、优选健康头皮的上述区域，以预防和/或减少和/或消除由皮肤菌群的一种或多种共生微生物菌株引起的健康皮肤、优选健康头皮的难看和/或不愉快的和/或不舒服的表现，优选预防和/或减少健康皮肤、优选健康头皮的热和/或过热感觉，优选维持和/或减少皮肤菌群的一种或多种共生微生物菌株对TRPV1的活化，特别是维持和/或降低皮肤菌群的一种或多种共生菌株的脂肪酶活性，和/或维持和/或减少健康皮肤、优选健康头皮中表皮葡萄球菌生物膜的形成，和/或预防和/或减少健康头皮头皮屑的出现，优选用于维持和/或降低健康头皮上表皮葡萄球菌与痤疮丙酸杆菌的比率，在该皮肤区域，相对于组合物的总体积计，提取物含量在1×10-4％和10％(v/v)之间，优选在1×10-4％和5％(v/v)之间，还优选在1×10-3％和3％(v/v)之间，更优选在0.1％和1％(v/v)之间。
本发明的最后一个目的涉及根据本发明的榄仁提取物，其用于治疗和/或预防角蛋白纤维、优选毛发生长的减少，和/或角蛋白纤维、优选毛发脱落的增加，这些现象与病理相关，特别是脱发，优选老年性或雄激素性脱发、休止期脱发或斑秃。
优选，将根据本发明的榄仁提取物、优选为根据本发明的药物组合物形式(该药物组合物特别是包含药学上可接受的赋形剂)施用于身体的至少一个区域，在所述区域观察到角蛋白纤维、优选头发的生长的减少，和/或角蛋白纤维、优选头发的脱落增加，这些现象与病理相关，特别是脱发，优选老年性或雄激素性脱发、休止期脱发或斑秃，该区域或这些区域优选为选自面部皮肤的身体表面，包括下巴、嘴唇上方的区域、脸颊和/或头皮，或睫毛和/或眉毛。
在本发明的一个优选实施方案中，相对于组合物的总体积计，根据本发明的提取物在药物组合物中的体积含量在1×10-4％和10％(v/v)之间，优选在1×10-4％和5％(v/v)之间，还优选在1×10-3％和3％(v/v)之间，更优选在0.001％和0.1％(v/v)之间。
参照实施例，本领域技术人员在阅读了对本发明进行的说明性描述后，能够清楚地看出本发明的其他目的、特征和优点，给出这些实施例仅是为了说明的目的，它们不以任何方式限制本发明的范围。
实施例构成本发明的组成部分，并且从整体描述(包括实施例)来看，相对于现有技术出现的任何新特征，就其功能和概括性而言构成本发明的组成部分。因此，每个实施例的范围都是宽泛性的。
另一方面，在实施例中，除非另有说明，否则所有百分比均以重量计，除非另有说明，否则温度以摄氏度表示，且除非另有说明，压力为大气压。
实施例
实施例1：制备提取物的不同方法
实施例1a)：将相对于溶剂和叶子的总混合物重量为10％(w/w)的干燥和磨碎的榄仁叶子(原产马达加斯加)在作为唯一溶剂的水中提取一小时，同时在80℃温度下搅拌。将粗提取物离心、过滤(0.45μm)，然后用甘油配制，相对于最终提取物的总重量计，甘油的最终量为80％(v/v)。由此获得液体形式的提取物。
实施例1b)：将相对于水和叶子的总混合物重量为5％(w/w)的干燥和磨碎的榄仁叶子(原产马达加斯加)在作为唯一溶剂的水中在20℃的温度下浸渍2小时。将粗提取物离心、倾析、过滤(0.45μm)，然后在麦芽糖糊精存在下雾化，麦芽糖糊精的最终量为最终提取物总重量的70％(w/w)。由此获得粉末形式的提取物。
实施例1c)：将相对于水和叶子的总混合物重量为10％(w/w)的干燥和磨碎的榄仁叶子(原产马达加斯加)在由乙醇和水组成的混合溶剂(80:20；v/v)中浸渍，在80℃的温度下持续一小时。然后将提取物离心、倾析、过滤(0.45μm)，然后在麦芽糖糊精存在下雾化，麦芽糖糊精的最终量为最终提取物总重量的80％(w/w)。由此获得粉末形式的提取物。
实施例1d)：将相对于水和叶子的总混合物重量为20％(w/w)的干燥和磨碎的榄仁叶子(原产马达加斯加)在作为唯一溶剂的水中在80℃下浸渍一小时。将粗提取物离心、倾析、过滤(0.45μm)，然后在麦芽糖糊精存在下雾化，麦芽糖糊精的最终量为最终提取物总重量的60％(w/w)。由此获得粉末形式的提取物。
实施例1e)：在亚临界条件下在作为唯一溶剂的水中提取相对于叶子和水的总量(重量)为4％(w/w)的干燥和磨碎的榄仁叶子(原产马达加斯加)，以5mL/min的流速和120℃的温度及足够的压力使水在提取柱中处于液态。
实施例1f)：将根据实施例1e)的提取物干燥并研磨以获得细粉末。
实施例g)：将根据实施例1e)的提取物浓缩并过滤(0.45μm)，然后用甘油配制，相对于最终提取物的总重量，甘油的最终量为80％(w/w)。由此获得液体形式的提取物。
实施例1h)：在亚临界条件下，将相对于叶子和溶剂的总量(重量)为4％(w/w)的干燥和研磨的榄仁叶子(原产马达加斯加)在作为唯一溶剂的水中提取，以5mL/min的流速和140℃的温度和足够的压力使水在提取柱中呈液态。
实施例2：本发明的榄仁提取物对TRPV1受体活性的影响
用TRPV1受体转染的CHO细胞在补充有相对于培养基总体积0.3％(v/v)胎牛血清的DMEM培养基(Invitrogen)中培养，并以3.5×104个细胞/孔的密度分布在微孔板中。在添加20mM Hepes(Invitrogen)的HBSS缓冲液(Invitrogen)中，将荧光探针(Fluo4 Direct，Invitrogen)与丙磺舒混合，然后加至细胞中并在37℃下孵育60分钟，然后在22℃下孵育15分钟。将根据实施例1a)、1e)或1h)之一的提取物以相对于培养基总体积计0.002至1.4(v/v)之间的浓度添加到细胞中，以测量产物的剂量响应，并计算IC50。5分钟后，向细胞中加入30nM辣椒素(TRPV1激活剂或激动剂)。对照条件(对照响应)为用蒸馏水处理(没有提取物)并用辣椒素处理。将板置于读板器(CellLux，PerkinElmer)，用于读取和量化探针发射的荧光。荧光强度与Ca2+离子进入成正比，其本身又与TRPV1受体的活化程度成正比。
根据以下方程式，结果表示为相对于辣椒素的对照响应的抑制百分比：100－(测量的响应/对照响应×100)。
TRPV1受体的拮抗作用大于50％的活性抑制值被认为是显著的。计算榄仁提取物显示50％受体活性抑制的剂量(IC50)。结果整理于下表1(根据本发明的榄仁提取物的IC50值(％v/v))。
表1
| 提取物 | IC<sub>50</sub>(％提取物)v/v |
| 根据实施例1a)的提取物 | 0.62 |
| 根据实施例1e)的提取物 | 0.18 |
| 根据实施例1f)的提取物 | 0.18 |
结论：
三种榄仁提取物对TRPV1受体活性显示出显著的抑制作用(大于50％的抑制)。
这证明了根据本发明的提取物对抗和/或预防和/或治疗和/或减缓健康角蛋白纤维、优选健康头发的老化，和/或维持和/或增加健康皮肤、优选健康头皮的皮肤稳态的作用。
实施例3：根据本发明的榄仁提取物对角质形成细胞中TRPV1蛋白表达的作用
从皮肤活检(腹部，37岁男性)中分离出的所谓“正常”人角质形成细胞，即没有病理表现，经过培养达到70％的汇合度。
用根据实施例1e)的榄仁提取物或用作为对照的DMSO处理细胞48小时。然后用特定的裂解缓冲液裂解细胞。
将所有样品调整含有相同量的蛋白质用于蛋白质印迹分析。
使用基于电泳的分析系统(Sally
)分析目标蛋白TRPV1的表达，该系统使用针对目标蛋白的一级抗体(抗TRPV1抗体，TRPV1
ab111973)和与过氧化物酶偶联的二级抗体，并通过化学发光显示。使用软件(
软件版本2.7.1，
)检测和量化信号。
结果以相对于用DMSO(对照条件)处理的细胞的表达水平的相对百分比表示。
在证实数据遵循正态规律(Shapiro-Wilk检验)后，根据软件(
Systat Software Inv.
)的建议，使用Student t检验进行统计学分析。结果整理于下表2(在培养的人角质形成细胞中TRPV1通道的蛋白质表达)。
表2
结论：
根据本发明的榄仁提取物显示出对健康人角质形成细胞中TRPV1蛋白表达的强烈抑制。
这证明了根据本发明的提取物对抗和/或预防和/或治疗和/或减缓健康角蛋白纤维、优选健康头发的老化，和/或维持和/或增加健康皮肤、优选健康头皮皮肤稳态的作用。
实施例4：本发明的榄仁提取物对皮肤菌群微生物的作用
表皮葡萄球菌菌株(ATCC 12228)在TSB培养基(Tryptic Soy Broth，BiomérieuxFrance)中、在存在或不存在根据实施例1a)的榄仁提取物下、在37℃搅拌下有氧培养24小时。
痤疮丙酸杆菌菌株(ATCC 11828)在Schaedler培养基(Biomerieux France)中、在存在或不存在根据实施例1a)的榄仁提取物下、在不搅拌的情况下、在37℃厌氧培养72小时。
根据本发明的榄仁提取物对皮肤菌群微生物的影响通过在600nm处测量光密度来测定细菌细胞的存活力来评估。
该比率是根据在成分存在下简单培养中菌株的存活力结果来计算的。结果整理于以下的表3(本发明的榄仁提取物对表皮葡萄球菌生长的影响)、表4(本发明的榄仁提取物对痤疮丙酸杆菌生长的影响)和表5(榄仁提取物对表皮葡萄球菌/痤疮丙酸杆菌比率的影响)。
表3
表4
表5
| 提取物 | 测试浓度 | 表皮葡萄球菌/痤疮丙酸杆菌的比率 |
| 对照(水) | - | 1 |
| 根据实施例1a)的提取物 | 0.14％(v/v) | 0.53 |
| 根据实施例1a)的提取物 | 0.68％(v/v) | 0.42 |
结论：
根据实施例1a)的榄仁提取物以剂量依赖性方式抑制表皮葡萄球菌的生长并刺激痤疮丙酸杆菌的生长。
根据本发明的提取物使得表皮葡萄球菌/痤疮丙酸杆菌比率的剂量依赖性降低。
榄仁提取物能够调节共生细菌表皮葡萄球菌和痤疮丙酸杆菌的生长，特别是降低表皮葡萄球菌/痤疮丙酸杆菌的比率。
这证明了根据本发明的提取物在预防和/或减少健康头皮上头皮屑出现方面的效果。
实施例5：根据本发明的榄仁提取物对痤疮丙酸杆菌TRPV1表达的活化和调节作用
将痤疮丙酸杆菌菌株(ATCC 11828)在Schaedler培养基(Biomérieux France)中、在37℃、不搅拌下厌氧培养72小时。将细菌培养物离心，然后以0.2μm过滤。回收细菌调节的培养基。不含细菌的培养基作为对照。培养从皮肤活检中分离的人角质形成细胞，达到70％的汇合。用在角质形成细胞培养基中稀释至1/10的细菌调节的培养基处理或不处理细胞(对照)。然后在处理48小时后裂解细胞。
为了测量TRPV1表达，将所有样品调整为含有相同量的蛋白质，用于蛋白质印迹(western blot)分析。目标蛋白TRPV1的表达使用基于电泳的分析系统(ProteinSimpleSally Sue Instrument，ProteinSimple USA)使用针对目标蛋白的一级抗体(TRPV1 abcamab111973)和与过氧化物酶偶联的二级抗体进行分析，并通过化学发光显示。使用合适的软件(Compass Software 2.7.1版，ProteinSimple)检测和量化信号。以μg/ml表示的结果相对于对照进行归一化并以平均值表示((％)+/-标准偏差)。在证实数据遵循正态规律(Shapiro-Wilk检验)后，根据软件建议(
Systat Software Inv.USA)后，使用Student t检验进行统计学分析。
TRPV1受体活性的测量是使用在DMEM培养基(Invitrogen)中培养的TRPV1受体转染的CHO细胞进行的，该培养基添加了相对于培养基总体积为0.3％(v/v)的胎牛血清，并以3.5×104细胞/孔的密度分布在微孔板中。荧光探针(Fluo4 Direct，Invitrogen)在添加20mM Hepes(Invitrogen)的HBSS缓冲液(Invitrogen)中与丙磺舒混合，将其添加到细胞中并在37℃下孵育60分钟，然后在22℃下孵育15分钟。
将由痤疮丙酸杆菌调节的培养基以10％(v/v)的浓度添加到CHO细胞中。用蒸馏水(没有提取物)处理作为对照条件(对照响应)。将板置于读板器(CellLux，PerkinElmer)下，用于读取和量化探针发射的荧光。荧光强度与Ca2+离子的进入成正比，其本身又与TRPV1受体的活化程度成正比。根据以下方程式，将结果表示为对照激动剂对辣椒素响应的百分比：测量的响应/对照响应×100，然后相对于使用不含提取物的条件培养基(对照)的处理条件进行归一化。结果整理于表6(痤疮丙酸杆菌对TRPV1表达的影响(免疫印迹))、表7(实施例1a的榄仁提取物对不存在辣椒素时痤疮丙酸杆菌激活TRPV1的影响)的影响(荧光法))和下表8(根据实施例1a的榄仁提取物对在辣椒素存在下痤疮丙酸杆菌激活TRPV1的影响(荧光法))。
表6
表7
表8
结论：
来自共生细菌痤疮丙酸杆菌培养物的培养基增加了TRPV1受体的表达并刺激了其活性。在辣椒素(TRPV1激动剂)存在的情况下，TRPV1活性的刺激增强。用根据实施例1a)的榄仁提取物处理细菌显示了在有或没有辣椒素的情况下抑制这种TRPV1活性增强。
这证明了根据本发明的提取物对于预防和/或减少和/或消除由皮肤菌群的一种或多种共生微生物菌株引起的健康皮肤、优选健康头皮的难看和/或不愉快和/或不舒服表现的作用。
实施例6：根据本发明的榄仁提取物对细菌脂肪酶活性的影响
评价了根据实施例1a)的榄仁水提取物对表皮葡萄球菌和痤疮丙酸杆菌的脂肪酶活性的影响。
将表皮葡萄球菌在TSB-F培养基(Biomérieux)中培养24小时。痤疮丙酸杆菌细菌在TSB-F培养基(Biomérieux)中培养72小时。在培养期间用根据实施例1a)的提取物处理或不处理细菌。将细菌以1000g离心5分钟。在加入以0.1mM溶解在pH 8的磷酸盐缓冲液中的试剂(Sigma 30058)并在40℃下孵育1小时后，通过520nm/600nm的荧光测量脂肪酶活性。结果整理于下表9(本发明的榄仁提取物对表皮葡萄球菌脂肪酶活性的影响)和下表10(本发明的榄仁提取物对痤疮丙酸杆菌脂肪酶活性的影响)。
表9
表10
结论：
根据实施例1a)的榄仁提取物强烈抑制表皮葡萄球菌(高达70％)和痤疮丙酸杆菌(高达87％)的脂肪酶活性。
这证明了根据本发明的提取物在预防和/或减少健康皮肤、优选健康头皮中的热和/或过热感觉中的作用。
实施例7：根据本发明的榄仁提取物对细菌生物膜的影响
使用表皮葡萄球菌培养物评价了根据实施例1a)的榄水提取物抑制生物膜形成的作用。为此，将提取物加入到96孔平底微孔板(Dutscher 353 072)中的TSB肉汤培养基(Tryptic Soy Broth，Biomérieux 42614)中，该肉汤培养基含有2％(g/v)葡萄糖(SigmaG7021)，每毫升含有1000万个表皮葡萄球菌
14990TM。在37℃、5％CO2和大于95％的相对湿度下孵育2天后，去除上清培养基，并在环境温度下用99％(v/v)甲醇将生物膜固定20分钟。然后将生物膜在室温下用1％(w/v)的结晶紫(Sigma V5265)溶液染色15分钟。用纯水冲洗生物膜以去除多余的结晶紫。然后用33％(v/v)乙酸溶液提取由生物膜固定的结晶紫，随后通过测量620nm处的光密度来量化溶解的结晶紫的量。表没食子儿茶素没食子酸酯(EGCG Sigma93894)用作阳性对照，浓度为50μM。结果表示为相对于没有榄仁提取物或表没食子儿茶素没食子酸酯的阴性对照的百分比，并使用SigmaPlotTM软件评估统计学显著性。
表11
在37℃培养48小时的表皮葡萄球菌形成了可通过结晶紫染色量化的生物膜。50μM的没食子儿茶素没食子酸酯(阳性对照)显著地(p<0.05)使表皮葡萄球菌产生的生物膜减少了28％。根据实施例1a)的0.1％和0.3％(v/v)的榄仁提取物显著地(p<0.05)将由表皮葡萄球菌产生的生物膜分别减少了22％和66％。
这证明了根据本发明的提取物在预防和/或减少由皮肤菌群的一种或多种共生微生物菌株引起的健康皮肤、优选健康头皮的难看和/或不愉快和/或不舒服表现的效果，特别是预防和/或减少头皮屑。
实施例8：根据本发明的化妆品组合物
实施例8a：洗发水
表12
通过本领域技术人员熟知的本领域常用方法制备洗发剂，通过混合4相并将组合物调节至pH 5.2和2200mPa.s的粘度(用Brookfield装置测量(RVT；23℃，主轴5；每分钟50转)。
实施例8b：用于头皮的水醇溶液
表13
| 相 | 成分 | 量(相对于总重量的百分比) |
| A | 水 | 84.35 |
| A | 氯苯那辛和对羟基苯甲酸甲酯 | 0.30 |
| A | 黄原胶 | 0.10 |
| B | 96％乙醇 | 10.00 |
| C | 水 | 5.00 |
| C | 实施例1a)的榄仁提取物 | 0.25 |
水醇溶液通过本领域技术人员熟知的本领域常用方法通过混合3相并将组合物的pH调节至6.2来制备。
实施例8c：头皮护理膜
表14
头皮护理膜通过本领域技术人员熟知的本领域常用方法制备，通过混合4相并将组合物调节至pH为4.1和粘度为26,000mPa.s(用Brookfield装置测量(RVT；23℃，主轴5；每分钟50转)。
实施例8d：身体和/或面部乳剂
表15
该乳剂通过本领域技术人员熟知的本领域常用方法通过混合6相制备。
实施例9：皮肤病学组合物的实例
以下组合物根据本领域技术人员已知的方法制备，具体而言将不同相混合在一起。
所示量是相对于组合物总重量的重量百分比。
表16
| 成分* | 3.00 |
| 溶媒： | |
| 低密度聚乙烯 | 5.50 |
| 液体石蜡 | Qsp 100 |
*该成分是根据上述实施例1a)制备的。将根据本发明的成分灭菌并干燥，然后加至软膏形式的组合物中。
Claims (20)
1.榄仁提取物的化妆品和/或保健品用途，用于对抗和/或预防和/或治疗和/或减缓健康角蛋白纤维、优选健康头发的老化。
2.根据权利要求1的用途，用于维持和/或增加健康角蛋白纤维、优选健康头发的生物力学性质，优选用于维持和/或增加新形成的健康角蛋白纤维、优选新形成的健康头发的生物力学性质，和/或维持和/或改善健康角蛋白纤维、优选健康头发的角质层质量，优选维持和/或改善新形成的健康角蛋白纤维、优选新形成的健康头发的角质层质量，和/或维持和/或增加健康角蛋白纤维、优选健康头发的生长，和/或预防和/或减少健康角蛋白纤维、优选健康头发脱落，生物力学特性选自柔顺性、强度、弹性和/或可塑性。
3.根据权利要求1或2中任一项的用途，用于维持和/或降低TRPV1在健康毛囊、特别是在健康头发的毛囊中的活性，和/或维持和/或降低TRPV1在健康的毛囊、尤其是健康头发的毛囊中的表达。
4.根据权利要求1的用途，用于维持和/或增加健康皮肤、优选健康头皮的皮肤稳态，优选用于维持和/或降低健康皮肤、优选健康头皮中的TRPV1活性，和/或维持和/或降低健康皮肤、优选健康头皮中TRPV1的表达。
5.根据权利要求1的用途，用于预防和/或减少和/或消除由皮肤菌群的一种或多种共生微生物菌株引起的健康皮肤、优选健康头皮的难看和/或不愉快和/或不舒服的表现。
6.根据权利要求5的用途，用于预防和/或减少健康皮肤、优选健康头皮中的热和/或过热感觉，优选维持和/或减少皮肤菌群的一种或多种共生微生物菌株对TRPV1的活化，特别是用于维持和/或降低皮肤菌群的一种或多种共生菌株的脂肪酶活性。
7.根据权利要求5的用途，用于维持和/或减少健康皮肤、优选健康头皮上表皮葡萄球菌生物膜的形成，和/或预防和/或减少健康头皮头皮屑的出现，优选维持和/或减少健康头皮上表皮葡萄球菌与痤疮丙酸杆菌的比率。
8.根据前述权利要求中任一项的用途，其特征在于所述提取物通过在溶剂或溶剂混合物中提取而获得，优选质子极性溶剂，优选水、醇、二醇、多元醇，或者99/1至1/99w/w的水/醇、水/二醇或水/多元醇的混合物，优选水作为唯一溶剂。
9.根据前述权利要求中任一项的用途，其特征在于所述提取物是地上部分的提取物，优选叶子。
10.根据前述权利要求中任一项的用途，其特征在于将所述榄仁提取物加入化妆品和/或保健品组合物中，所述组合物还包含化妆品可接受的和/或保健品可接受的赋形剂。
11.根据前述权利要求中任一项的用途，其特征在于，相对于组合物的总体积计，所述榄仁提取物在化妆品和/或保健品组合物中的含量为1×10-4％至10％(v/v)之间，优选为1×10-4％至5％(v/v)之间，还优选在1×10-3％至3％(v/v)之间，更优选0.1％至1％(v/v)之间。
12.根据权利要求10或11中任一项所述的用途，其特征在于，所述化妆品组合物旨在局部应用于健康皮肤、优选健康头皮，和/或应用于健康角蛋白纤维、优选健康头发。
13.根据权利要求10至12中任一项的用途，其特征在于所述化妆品组合物选自精华素、乳剂、霜剂、洗发剂、调理剂、卸妆油、洗面奶、软膏、糊剂、摩丝、乳液、水凝胶、沐浴露、头发护理膜、发胶、喷雾剂、发蜡，更优选自霜剂、精华素或乳剂。
14.美容护理方法，其特征在于，将榄仁提取物局部应用于健康角蛋白纤维、特别是健康头发的至少一个区域，以对抗和/或预防和/或治疗和/或减缓健康角蛋白纤维、优选健康头发的老化，特别是维持和/或增加健康角蛋白纤维、优选健康头发的生物力学性能，优选维持和/或增加新形成的健康角蛋白纤维、优选新形成的健康头发的生物力学性能，和/或维持和/或改善健康角蛋白纤维、优选健康头发角质层的质量，优选维持和/或改善新形成的健康头发、优选新形成的健康头发的角蛋白纤维角质层的质量，和/或维持和/或增加健康角蛋白纤维、优选健康头发的生长，和/或预防和/或减少健康角蛋白纤维、优选健康头发脱落，甚至更优选维持和/或降低TRPV1在健康毛囊、特别是健康毛发的毛囊中的活性，和/或维持和/或降低TRPV1在健康毛囊、特别是健康头发的毛囊中的表达，生物力学特性选自柔顺性、抗性、弹性和/或可塑性。
15.根据权利要求14的美容护理方法，其特征在于其进一步包括将榄仁提取物局部应用到健康皮肤、优选健康头皮的至少一个区域，以维持和/或增加健康皮肤、优选健康头皮的皮肤稳态，优选维持和/或降低TRPV1在健康皮肤、优选健康头皮中的活性，和/或维持和/或降低TRPV1在健康皮肤、优选健康头皮中的表达。
16.根据权利要求15的美容护理方法，其特征在于其进一步包括将榄仁提取物局部应用到健康皮肤、优选健康头皮的至少一个区域，以预防和/或减少和/或消除健康皮肤、优选健康头皮由皮肤菌群的一种或多种共生微生物菌株诱导的难看的和/或不愉快和/或不舒服的表现，优选预防和/或减少健康皮肤、优选健康头皮中的热和/或过热感觉，优选维持和/或减少由皮肤菌群的一种或多种共生微生物菌株引起的TRPV1活化，特别是维持和/或降低皮肤菌群的一种或多种共生菌株的脂肪酶活性，和/或维持和/或减少表皮葡萄球菌在健康皮肤、优选健康头皮上形成生物膜，和/或用于预防和/或减少健康头皮上头皮屑的出现，优选维持和/或降低健康头皮上表皮葡萄球菌与痤疮丙酸杆菌的比率。
17.根据权利要求14至16中任一项所述的美容护理方法，其特征在于榄仁提取物如权利要求8至13中任一项所定义。
18.榄仁提取物，其用于治疗和/或预防角蛋白纤维、优选毛发的生长减少，和/或角蛋白纤维、优选毛发脱落的增加，这些现象与病理学相关，特别是脱发，优选老年脱发或雄激素性脱发、休止期脱发或斑秃。
19.根据权利要求18使用的榄仁提取物，其特征在于所述提取物如权利要求8或9中任一项所定义。
20.根据权利要求18或19中任一项使用的榄仁提取物，其特征在于将所述提取物加入包含药学上可接受的赋形剂的药物组合物中，以相对于组合物的总体积计，所述提取物优选以如下含量存在于所述药物组合物中：1×10-4％至10％(v/v)，优选1×10-4％至5％(v/v)，更优选1×10-3％至3％(v/v)，还更优选0.001％至0.1％(v/v)。
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