CN114402105A - 纸浆的酶处理 - Google Patents

Abstract

GH8木聚糖酶在用于制备纸张材料，如打印纸和书写纸、薄页纸和毛巾纸、新闻纸、纸板、硬纸板和包装纸的纸浆的处理中的用途。

Description

纸浆的酶处理

序列表的引用

本申请含有计算机可读形式的序列表，将其通过引用并入本文。

技术领域

本发明涉及用GH8木聚糖酶处理纸浆。

背景技术

在纸张材料的制造中使用酶是众所周知的。用于此目的酶的实例是蛋白酶、脂肪酶、木聚糖酶、淀粉酶、纤维素酶以及不同的氧化酶(如漆酶和过氧化酶)。

这些酶的作用是广泛的，例如不同沉积物(如沥青)的控制、强度改进、脱墨、排水改进、薄页纸软化、漂白等。

发明内容

在一方面，本发明提供了用于处理纸浆的方法，该方法包括使纸浆与GH8木聚糖酶(X-阶段)接触。

在另一个方面，本发明涉及通过本发明的方法制备的纸浆。

在另一个方面，本发明涉及纸浆组合物，该纸浆组合物包含纸浆和GH8木聚糖酶。

本发明的另一方面涉及GH8木聚糖酶用于处理纸浆的用途。

具体实施方式

本发明人令人惊讶地发现可以通过使木质纤维素材料与GH8木聚糖酶接触用更可控(不太剧烈)的木聚糖水解来有效修饰木质纤维素材料(例如，纸浆和所得纸张材料)。

纸张和纸浆

术语“纸张材料”是指产品(可以由纤维素纸浆得到)，如打印纸和书写纸、薄页纸和毛巾纸、新闻纸、纸板、硬纸板和包装纸。

术语“纸浆”(“pulp”或“paper pulp”)意指可以用于生产“纸张材料”的任何纸浆。例如，纸浆可以作为原浆供应，或者可以源自再循环的来源。纸浆可以是木纸浆、非木纸浆或由废纸制成的纸浆。木纸浆可以由软木(如松树、红木、冷杉、云杉、雪松以及铁杉)或硬木(如枫树、桤木、桦树、山核桃木、山毛榉、白杨、相思树以及桉树)制成。非木纸浆可以由例如亚麻、大麻、小麦秸秆、甘蔗渣、竹子、棉或洋麻制成。废纸浆可以通过对废纸(如报纸、混合办公废纸、计算机用纸、白色帐簿纸、杂志、牛奶纸箱、纸杯、包装材料等)进行再浆化来制造。

在特定的实施例中，待处理的纸浆包含硬木纸浆和软木纸浆两者。

待处理的木浆可以是机械纸浆(如磨木浆，GP)、化学纸浆(如牛皮纸浆或亚硫酸盐纸浆)、半化学纸浆(SCP)、热磨机械纸浆(TMP)、化学热磨机械纸浆(CTMP)、或漂白化学热磨机械纸浆(BCTMP)。

机械纸浆通过研磨和精制方法来制造，其中原料经受周期性压力脉冲。TMP是热磨机械纸浆，GW是磨木浆，PGW是加压磨木浆，RMP是精制机械纸浆，PRMP是加压精制机械纸浆，并且CTMP是化学热磨机械纸浆。

通过碱性蒸煮(例如牛皮纸或苏打蒸煮)或通过酸性-中性蒸煮(例如亚硫酸盐蒸煮)，从而除去大部分木质素来制造化学纸浆。在牛皮纸制浆或硫酸盐蒸煮中，硫化钠或氢氧化钠用作主要蒸煮化学品。亚硫酸盐蒸煮工艺可以涵盖几乎所有pH的范围，例如二氧化硫水溶液的pH可以低于1，添加游离氢氧化钠的亚硫酸钠溶液的pH高于13，但该工艺更常在酸性-中性范围内使用。

待处理的牛皮纸浆可以是漂白牛皮纸浆，该漂白牛皮纸浆可以由以下组成：软木漂白牛皮纸(SWBK，也称为NBKP(针叶树漂白牛皮纸浆))、硬木漂白牛皮纸(HWBK，也称为LBKP(阔叶树漂白牛皮纸浆))或这些的混合物。

待用于本发明的工艺中的纸浆是机械或化学纸浆或其组合的悬浮液。例如，待用于本发明的工艺中的纸浆可以包含0％、10％-20％、20％-30％、30％-40％、40％-50％、50％-60％、60％-70％、70％-80％、80％-90％或90％-100％的化学纸浆。在特定的实施例中，化学纸浆形成用于制造纸张材料的纸浆的一部分。在本发明上下文中，表述“形成……的一部分”意指在待用于本发明的工艺中的纸浆中，化学纸浆的百分比处于1％-99％的范围内。在特定的实施例中，化学纸浆的百分比处于以下的范围内：2％-98％、3％-97％、4％-96％、5％-95％、6％-94％、7％-93％、8％-92％、9％-91％、10％-90％、15％-85％、20％-80％、25％-75％、30％-70％、40％-60％或45％-55％。

在本发明的用途和工艺的特定实施例中，化学纸浆是牛皮纸浆、亚硫酸盐纸浆、半化学纸浆(SCP)、热磨机械纸浆(TMP)、化学热磨机械纸浆(CTMP)、漂白化学热磨机械纸浆(BCTMP)。在特定的实施例中，牛皮纸浆是漂白牛皮纸浆，例如软木漂白牛皮纸(SWBK，也称为NBKP(针叶树漂白牛皮纸浆))、硬木漂白牛皮纸(HWBK，也称为LBKP(阔叶树漂白牛皮纸浆))或其混合物。

待用于本发明的工艺中的纸浆可以是未干燥过的纸浆或干燥的纸浆。

GH8木聚糖酶

糖苷水解酶E.C.3.2.1.是一组广泛的酶，这些酶水解两种或更多种碳水化合物之间或碳水化合物与非碳水化合物部分之间的糖苷键。基于序列相似性的糖苷水解酶分类系统已导致>100个不同的家族的定义。此分类可在CAZy(http://www.cazy.org/GH1.html)网站上找到，并且也在CAZypedia(碳水化合物活性酶的在线百科全书)上进行讨论。

CAZY中的糖苷水解酶家族8，即GH8包含具有几种已知活性的转化酶，包括壳聚糖酶(EC 3.2.1.132)；纤维素酶(EC 3.2.1.4)；地衣多糖酶(EC 3.2.1.73)；内切-1,4-β-木聚糖酶(EC 3.2.1.8)；释放还原端木糖的外切-寡木聚糖酶(EC 3.2.1.156)。

GH8中的多肽可以分成多个不同的子簇或进化枝，其中我们表示了下面列出的进化枝。下面详细描述每个进化枝的不同基序

(a)DPSY进化枝

(b)SMDY进化枝

(c)ALWNW进化枝

(d)WFAAAL进化枝。

DPSY进化枝

GH8木聚糖酶包含几个保守良好的基序，一个实例是位于SEQ ID NO:2和3所示的木聚糖酶氨基酸序列的位置203-207、SEQ ID NO:6的位置193-197、以及SEQ ID NO:7和8的位置202-206的基序“[TS]D[PA]SY”或“(Thr/Ser)Asp(Pro/Ala)Ser Tyr”(SEQ ID NO:15)。

SMDY进化枝

DPSY进化枝的多肽可以分成不同的子簇，并且这些子簇中的一个我们表示为“SMDY”。此亚组的特征基序是基序“MN[FYVILM][GS]MDY”或“Met Asn(Phe/Tyr/Val/Ile/Leu/Met)(Gly/Ser)Met Asp Tyr”(SEQ ID NO:16)。

ALWNW进化枝

DPSY进化枝的多肽可以分成不同的子簇，并且这些子簇中的一个我们表示为“ALWNW”。此亚组的特征基序是对应于SEQ ID NO:9和10所示的木聚糖酶氨基酸序列的位置100至104以及SEQ ID NO:4和5的位置101至105的基序“A[IL]WNW”或“Ala(Ile/Leu)TrpAsn Trp”(SEQ ID NO:17)。

WFAAAL进化枝

DPSY进化枝的多肽可以分成不同的子簇，并且这些子簇中的一个我们表示为“WFAAAL”。此亚组的特征基序是对应于SEQ ID NO:2和3所示的木聚糖酶氨基酸序列的位置134至139以及SEQ ID NO:7和8的位置133至138的基序“W[IF]AAAL”或“Trp(Ile/Phe)AlaAla Ala Leu”(SEQ ID NO:18)。

优选地，GH8木聚糖酶包含与SEQ ID NO:1-10中任一项的GH8木聚糖酶的成熟多肽有至少60％，优选至少65％，更优选至少70％，更优选至少75％，更优选至少80％，更优选至少85％，甚至更优选至少90％，最优选至少95％，并且甚至最优选至少96％、至少97％、至少98％、或至少99％或100％(下文为“同源多肽”)的序列同一性程度的氨基酸序列。

甚至更优选地，成熟多肽包含以下或由以下组成：SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:3、SEQID NO:5、SEQ ID NO:6、SEQ ID NO:8或SEQ ID NO:10的氨基酸29至433。

出于本发明的目的，使用如在EMBOSS包(EMBOSS:The European MolecularBiology Open Software Suite[EMBOSS：欧洲分子生物学开放软件套件],Rice等人,2000,Trends Genet.[遗传学趋势]16:276-277)(优选5.0.0版本或更新版本)的尼德尔(Needle)程序中所实施的尼德曼-翁施(Needleman-Wunsch)算法(Needleman和Wunsch,1970,J.Mol.Biol.[分子生物学杂志]48:443-453)来确定两个氨基酸序列之间的序列同一性。所使用的参数是空位开放罚分10、空位延伸罚分0.5、和EBLOSUM62(BLOSUM62的EMBOSS版)取代矩阵。将标记为“最长同一性”的尼德尔的输出(使用非简化选项获得)用作同一性百分比并且计算如下：

(相同的残基x 100)/(比对长度-比对中的空位总数)

在一个优选的方面，同源多肽包含与SEQ ID NO:1-10中任一项的成熟多肽相差十个氨基酸，优选九个氨基酸、八个氨基酸、七个氨基酸、六个氨基酸、五个氨基酸，更优选四个氨基酸，甚至更优选三个氨基酸，最优选两个氨基酸，并且甚至最优选一个氨基酸的氨基酸序列。GH8木聚糖酶包含SEQ ID NO:1-10中任一项的成熟多肽或其等位变体；或具有木聚糖酶活性的其片段。在一个优选的方面，GH8木聚糖酶包含SEQ ID NO:1-10中任一项的氨基酸序列或其成熟多肽。在另一个优选的方面，GH8木聚糖酶包含SEQ ID NO:1-10中任一项的成熟多肽。在另一个优选的方面，GH8木聚糖酶由SEQ ID NO:1-10中任一项的氨基酸序列组成。在另一个优选的方面，GH8木聚糖酶由SEQ ID NO:1-10中任一项的成熟多肽组成。

在优选的实施例中，GH8木聚糖酶选自由以下组成的组：

(a)一种多肽，该多肽与SEQ ID NO:1至SEQ ID NO:10中任一项的成熟多肽具有至少60％的序列同一性；优选地，该多肽与SEQ ID NO:1至SEQ ID NO:10中任一项的成熟多肽具有至少65％，更优选至少70％，更优选至少75％，更优选至少80％，更优选至少85％，甚至更优选至少90％，最优选至少95％，并且甚至最优选至少96％、至少97％、至少98％、至少99％、或100％的序列同一性；和

(b)一种源自(a)的多肽，其通过取代、缺失和/或插入一个或多个(几个)氨基酸；以及

(c)该(a)或(b)的多肽的片段，该片段具有GH8木聚糖酶活性。

根据本发明，GH8木聚糖酶是具有GH8木聚糖酶活性的多肽。

在优选的实施例中，GH8木聚糖酶包含人工变体，该人工变体包含SEQ ID NO:1-10中任一项的成熟多肽或其同源序列的一个或多个(几个)氨基酸的取代、缺失和/或插入。优选地，氨基酸改变的性质较小，即不会显著影响蛋白质折叠和/或活性的保守氨基酸取代或插入；典型地为1个至约30个氨基酸的小缺失；小的氨基末端或羧基末端延伸，如氨基末端的甲硫氨酸残基；多至约20-25个残基的小接头肽；或小的延伸(如聚组氨酸段、抗原表位或结合结构域)，该小的延伸通过改变净电荷或另一功能来促进纯化。

保守取代的实例在下组之内：碱性氨基酸(精氨酸、赖氨酸和组氨酸)、酸性氨基酸(谷氨酸和天冬氨酸)、极性氨基酸(谷氨酰胺和天冬酰胺)、疏水氨基酸(亮氨酸、异亮氨酸和缬氨酸)、芳族氨基酸(苯丙氨酸、色氨酸和酪氨酸)、以及小氨基酸(甘氨酸、丙氨酸、丝氨酸、苏氨酸和甲硫氨酸)。通常不会改变比活性的氨基酸取代是本领域已知的并且例如由H.Neurath和R.L.Hill,1979,于The Proteins[蛋白质],Academic Press[学术出版社],纽约中描述。最普遍发生的交换是Ala/Ser、Val/Ile、Asp/Glu、Thr/Ser、Ala/Gly、Ala/Thr、Ser/Asn、Ala/Val、Ser/Gly、Tyr/Phe、Ala/Pro、Lys/Arg、Asp/Asn、Leu/Ile、Leu/Val、Ala/Glu和Asp/Gly。

除了20个标准氨基酸，非标准氨基酸(例如4-羟脯氨酸、6-N-甲基赖氨酸、2-氨基异丁酸、异缬氨酸和α-甲基丝氨酸)可以取代野生型多肽的氨基酸残基。可以用有限数量的非保守氨基酸、不由遗传密码编码的氨基酸和非天然氨基酸来取代氨基酸残基。“非天然氨基酸”在蛋白质合成以后已被修饰，和/或在其一个或多个侧链中具有与标准氨基酸不同的化学结构。非天然氨基酸可以以化学方法合成，并且优选是可商购的，且包括哌啶酸(pipecolic acid)、噻唑烷羧酸(thiazolidine carboxylic acid)、脱氢脯氨酸、3-和4-甲基脯氨酸、以及3,3-二甲基脯氨酸。

可替代地，氨基酸改变具有使GH8木聚糖酶的物理化学性质改变的这样一种性质。例如，氨基酸改变可以提高GH8木聚糖酶的热稳定性、改变底物特异性、改变最适pH等。

亲本GH8木聚糖酶中的必需氨基酸可以根据本领域已知的程序来鉴定，如定点诱变或丙氨酸扫描诱变(Cunningham和Wells,1989,Science[科学]244:1081-1085)。在后一技术中，将单一丙氨酸突变引入到分子中的每个残基，并且测试所得突变分子的生物活性(即，木聚糖酶活性)以鉴定对于分子的活性至关重要的氨基酸残基。还参见，Hilton等人,1996,J.Biol.Chem.[生物化学杂志]271:4699-4708。酶或其他生物学相互作用的活性位点还可通过对结构的物理分析来确定，如由下述技术确定：核磁共振、晶体学(crystallography)、电子衍射、或光亲和标记，连同对推定的接触位点氨基酸进行突变。参见例如，de Vos等人,1992,Science[科学]255:306-312；Smith等人,1992,J.Mol.Biol.[分子生物学杂志]224:899-904；Wlodaver等人,1992,FEBS Lett.[欧洲生化学会联合会快报]309:59-64。必需氨基酸的同一性也可以从与GH8木聚糖酶(与根据本发明的GH8木聚糖酶相关)的同一性的分析来推断。

使用已知的诱变、重组和/或改组方法，随后进行相关的筛选程序可以做出单或多个氨基酸取代、缺失和/或插入并对其进行测试，该相关的筛选程序如由Reidhaar-Olson和Sauer,1988,Science[科学]241:53-57；Bowie和Sauer,1989,Proc.Natl.Acad.Sci.USA[美国国家科学院院刊]86:2152-2156；WO 95/17413；或WO 95/22625披露的那些。其他可以使用的方法包括易错PCR、噬菌体展示(例如Lowman等人,1991,Biochemistry[生物化学]30:10832-10837；美国专利号5,223,409；WO 92/06204)以及区域定向诱变(Derbyshire等人,1986,Gene[基因]46:145；Ner等人,1988,DNA 7:127)。

诱变/改组方法可以与高通量、自动化的筛选方法组合以检测由宿主细胞表达的克隆的、诱变的GH8木聚糖酶的活性(Ness等人,1999,Nature Biotechnology[自然生物技术]17:893-896)。可从宿主细胞回收编码活性GH8木聚糖酶的诱变的DNA分子，并使用本领域的标准方法快速测序。这些方法允许快速测定目的多肽GH8木聚糖酶中单个氨基酸残基的重要性，并且可以应用于未知结构的GH8木聚糖酶。

在实施例中，SEQ ID NO:1-10中任一项的成熟多肽中的氨基酸取代、缺失和/或插入的总数为30、20、15、10、9、8、7、6、5、4、3、2或1个。

漂白

纸浆漂白被定义为旨在去除源自残留木质素或其他有色杂质的纤维素纸浆中颜色的工艺。原生木材只有轻微的颜色，而化学纸浆的残留木质素在蒸煮后高度着色。纸浆漂白的传统概念包括选择性地去除纸浆中存在的发色团结构的氯基氧化剂和氧基氧化剂。漂白的实例是用氯(C-阶段)、二氧化氯(D-阶段)、过氧化氢(P-阶段)、臭氧(Z-阶段)和氧(O-阶段)的漂白阶段以及可以通过少量氧气和/或过氧化氢增强的碱性提取阶段(E-阶段)。漂白进程后测量亮度，将亮度定义为使用具有457nm有效波长的定义光谱带，来自浆板垫的可见蓝光反射率。官方ISO标准方法为ISO 2469或ISO 2470。漂白至全亮度(>88％ISO)需要多阶段应用漂白化学品。漂白系列中的第一阶段通常被认为是去木质素，其中去除了大部分残留的木质素。最后的阶段通常是指增亮阶段，其中消除纸浆中的发色团以达到高亮度水平。

根据本发明，使用根据ISO 3688制备的纸浆手抄纸、根据ISO 2470确定纸浆的ISO亮度。

工艺条件

本发明的工艺特别适用于木质纤维素材料的修饰，例如在制作纸张材料的工艺中改善纸浆的漂白和/或最终纸浆的质量。

在纸张和纸浆加工的情况下，根据本发明的工艺可以在任何纸浆和纸张制造阶段进行。可以将酶添加到任何储存罐中，例如纸浆储存容器(储存柜)、储存塔、混合柜或计量柜中。可以在纸浆漂白之前、结合纸浆漂白工艺或在漂白之后进行酶处理。当结合纸浆漂白进行时，该酶制剂可以与漂白化学品(如氯或二氧化氯)一起添加。应用氧气、过氧化氢或臭氧或其组合也可以进行纸浆漂白。酶制剂还可以与这些物质一起添加。优选地，在此类漂白步骤之前或之后添加酶制剂。还可以将酶添加到源自漂白的循环工艺水(白色水)和源自机械或化学机械制浆工艺的工艺水(褐色水)中。在牛皮纸制浆工艺的特定的实施例中，在粗浆洗涤期间添加酶。

在本发明上下文中，术语“工艺水”尤其包含1)作为原材料向造纸工艺中添加的水；2)来源于制造纸张材料的工艺的任何步骤的中间水产物；以及3)作为工艺排出物或副产物的废水。在特定的实施例中，工艺水被、已经被、正被或预期被循环(再循环)，即在工艺的另一个步骤中再使用。术语“水”反过来意指常用于造纸工艺中的不同添加剂和辅助剂的混合物中的任何水性介质、溶液、悬浮液，例如普通自来水以及自来水。在特定的实施例中，工艺水具有低含量的固体(干燥)物质，例如少于20％、18％、16％、14％、12％、10％、8％、7％、6％、5％、4％、3％、20％或少于1％的干燥物质。

本发明的工艺可以在纸张和纸浆加工中的常规条件下进行。工艺条件将是所应用的一种或多种酶、反应时间以及给定条件的函数。

本发明的酶应以有效量添加。术语“有效量”意指在纸浆改性中足以达到所期望和预期效果的量，如增加纸浆中醛基的量、或去除导致所期望的漂白和/或脱墨效果的有色化合物和污染物、和/或强化效果等。

在特定的实施例中，GH8木聚糖酶和另外的酶(如果有的话)的剂量是从(每种酶)约0.1mg酶蛋白至约100,000mg酶蛋白/吨纸浆。

在另外的特定实施例中，GH8木聚糖酶和另外的酶(如果有的话)的量在以下的范围内：0.00001-20；或0.0001-20mg酶(以纯酶蛋白计算)/克(干重)纸浆材料，如0.0001-10mg/g、0.0001-1mg/g、0.001-1mg/g、0.001-0.1、或0.01-0.1mg酶/克纸浆材料。同样，这些量是指每种酶的量。

酶处理可以在常规纸浆稠度(例如0.5％-15％干物质)下进行。在特定的实施例中，稠度在以下的范围内：0.5％-45％；0.5％-40％；0.5％-35％；0.5％-30％；0.5％-25％；0.5％-20％；0.5％-15％；0.5％-10％；0.5％-8％；0.5％-6％；或0.5％-5％干物质。

酶处理可以在从约10℃至约100℃的温度下进行。温度范围(均为“从约”和“至约”)的另外的实例如下：20℃-120℃、30℃-120℃、35℃-120℃、37℃-120℃、40℃-120℃、50℃-120℃、60℃-120℃、70℃-120℃、10℃-100℃、10℃-90℃、10℃-80℃、10℃-70℃、10℃-60℃、和30℃-60℃、以及此处说明的上限值和下限值的任意组合。典型的温度是从约20℃至90℃、或20℃至95℃，优选地从约40℃至70℃。通常，酶处理在大气压下进行。但当温度超过100℃时，该处理在1-2巴(高于大气压多达1巴)的压力下进行。

酶处理在从约2至约12的pH下、优选地在从约4至约9的pH下、更优选地在从约5至约8的pH下并且最优选地在从约5.5至约7的pH下进行。

酶处理的适合持续时间可以在从几秒至几小时的范围内，例如从约30秒至约48小时、或从约1分钟至约24小时、或从约1分钟至约18小时、或从约1分钟至约12小时、或从约1分钟至5小时、或从约1分钟至约2小时、或从约1分钟至约1小时、或从约1分钟至约30分钟的范围内。典型的反应时间是从约10分钟至3小时、10分钟至10小时，优选地15分钟至1小时、或15分钟至2小时。

除GH8木聚糖酶和另外的酶(如果存在的话)之外的不同的添加剂可以用于本发明的工艺或用途中。表面活性剂和/或分散剂通常存在于纸浆中，和/或被添加到纸浆中。因此，本发明的工艺和用途可以在常规地用于纸浆中的阴离子型、非离子型、阳离子型和/或两性离子型表面活性剂和/或分散剂存在下进行。阴离子型表面活性剂的实例是烷基、经取代的烷基或芳基的羧酸盐、硫酸盐、磺酸盐或磷酸盐。非离子型表面活性剂的实例是聚氧乙烯化合物，如醇乙氧基化物、丙氧基化物或混合乙氧基化物/丙氧基化物、聚甘油和其他多元醇，以及某些嵌段共聚物。阳离子型表面活性剂的实例是水溶性阳离子聚合物，如季铵硫酸盐和某些胺，例如表氯醇/二甲胺聚合物(EPI-DMA)和其交联溶液、聚二烯丙基二甲基氯化铵(DADMAC)、DADMAC/丙烯酰胺共聚物以及紫罗烯聚合物，如美国专利号5,681,862和5,575,993中披露的那些。两性离子型或两性表面活性剂的实例是甜菜碱、甘氨酸盐、氨基丙酸盐、亚氨基丙酸盐以及不同的咪唑啉衍生物。也可以使用美国专利号5,256,252中披露的聚合物。

同样根据本发明，如上述、包括其任何组合的表面活性剂可以与如本文所定义的GH8木聚糖酶一起用于造纸工艺中，并且与此酶一起包括在组合物中。此组合物中每种表面活性剂的量可以是组合物的从约1至约1000ppm的量。在特定的实施例中，每种表面活性剂的量是从约10至约1000ppm、或从约10至约500ppm、或从约50至约500ppm。

在另一个特定实施例中，上述范围中的每个均是指表面活性剂的总量。

在以上方法和本发明的工艺的另外的特定实施例中，GH8木聚糖酶以0.005-50ppm(mg/L)、或0.01-40、0.02-30、0.03-25、0.04-20、0.05-15、0.05-10、0.05-5、0.05-1、0.05-0.8、0.05-0.6、或0.1-0.5ppm的量使用。酶的量是指定义明确的酶制剂的mg。

在本发明的工艺中，GH8木聚糖酶可以单独或与另外的酶一起应用。术语“另外的酶”意指至少一种另外的酶，例如一种、两种、三种、四种、五种、六种、七种、八种、九种、十种或甚至更多种另外的酶。

术语“与……一起应用”(或“与……一起使用”)意指可以在本发明的工艺的同一个或另一个步骤中应用另外的酶。与用GH8木聚糖酶处理纸浆的步骤相比，其他工艺步骤可以在造纸工艺中的上游或下游。

在特定的实施例中，另外的酶(也见下文)是具有蛋白酶、脂肪酶、木聚糖酶、角质酶、氧化还原酶、纤维素酶、内切葡聚糖酶、淀粉酶、甘露聚糖酶、甾醇酯酶、溶解性多糖单加氧酶和/或胆固醇酯酶活性的酶。氧化还原酶的实例是具有漆酶和/或过氧化物酶活性的酶。在优选的实施例中，另外的酶是纤维素酶。

术语工艺的“步骤”意指至少一个步骤，并且它可以是一个、两个、三个、四个、五个或甚至更多个工艺步骤。换句话说，GH8木聚糖酶可以应用于至少一个工艺步骤中，并且一种或多种另外的酶也可以应用于至少一个工艺步骤中，与使用GH8木聚糖酶的步骤相比，该工艺步骤可以是同一个或不同的工艺步骤。

术语“酶制剂”意指包含至少一种GH8木聚糖酶的产品。酶制剂还可以包含具有其他酶活性的酶。除了酶活性外，此制剂优选地含有至少一种辅助剂。用于纸张和纸浆工业的酶制剂中所用的辅助剂的实例是缓冲液、聚合物、表面活性剂以及稳定剂。

另外的酶

具有蛋白酶、脂肪酶、木聚糖酶、角质酶、氧化还原酶、纤维素酶、内切葡聚糖酶、淀粉酶、甘露聚糖酶、甾醇酯酶、多糖单加氧酶(LPMO)和/或胆固醇酯酶活性的任何酶都可以用作本发明的用途和工艺中的另外的酶。以下列出了此类另外的酶的一些非限制性实例。以大写字母书写的酶是可获得自丹麦DK-2880巴格斯维尔德的克罗格休约尔36的诺维信公司(Novozymes A/S,Krogshoejvej 36,DK-2880Bagsvaerd,Denmark)的商业酶。那些另外的酶中的任一者的活性可以使用本领域已知的用于所讨论酶的任何方法来分析，该方法包括所引用的参考文献中提及的方法。

角质酶的实例是源自特异腐质霉(Humicola insolens)(US 5,827,719)；源自镰孢霉属(Fusarium的菌株例如大刀粉红镰孢(F.roseum culmorum)或特别是豌豆腐皮镰孢(F.solani pisi)(WO 90/09446、WO 94/14964、WO 94/03578)的那些。角质酶也可以源自丝核菌属(Rhizoctonia)，例如立枯丝核菌(R.solani)的菌株，或链格孢属(Alternaria)，例如甘蓝链格孢(A.brassicicola)的菌株(WO 94/03578)，或其变体，如WO 00/34450或WO01/92502中描述的那些。

蛋白酶的实例是ALCALASE、ESPERASE、SAVINASE、NEUTRASE以及DURAZYM蛋白酶。其他蛋白酶源自拟诺卡氏菌属(Nocardiopsis)、曲霉属(Aspergillus)、根霉属(Rhizopus)、嗜碱芽孢杆菌(Bacillus alcalophilus)、蜡状芽孢杆菌(B.cereus)、纳豆芽孢杆菌(B.natto)、普通芽孢杆菌(B.vulgatus)、蕈状芽孢杆菌(B.mycoide)，并且是来自芽孢杆菌属的枯草杆菌蛋白酶，特别是来自拟诺卡氏菌属物种和达松维尔拟诺卡氏菌(Nocardiopsis dassonvillei)的蛋白酶，如WO 88/03947中披露的那些，及其突变体，例如WO 91/00345和EP 415296中披露的那些。

淀粉酶的实例是BAN、AQUAZYM、TERMAMYL以及AQUAZYM超淀粉酶。脂肪酶的实例是RESINASE A2X脂肪酶。木聚糖酶的实例是PULPZYME HC半纤维素酶。内切葡聚糖酶的实例是NOVOZYM 613、342以及476酶产品。

甘露聚糖酶的实例是

等人,J.Biotechnol.[生物技术杂志]29(1993),229-242中所述的里氏木霉内切-β-甘露聚糖酶。

甾醇酯酶、过氧化酶、漆酶以及胆固醇酯酶的实例披露于此处背景技术部分中提及的参考文献中。氧化还原酶另外的实例是披露于以下中的过氧化酶和漆酶：EP 730641；WO 01/98469；EP 719337；EP 765394；EP 767836；EP 763115；和EP 788547中。在本发明上下文中，每当提及需要或受益于受体(例如氧气或过氧化氢)、增强剂、介质和/或活化剂的存在的氧化还原酶时，此类化合物应视为包含在内。增强剂和介质的实例披露于EP705327；WO 98/56899；EP 677102；EP 781328；和EP 707637中。如果希望的话，可以通过将氧化还原酶系统(例如漆酶，或过氧化酶系统)定义为所讨论酶与其受体，还以及任选地用于所讨论酶的增强剂和/或介质的组合来加以区别。

溶解性多糖单加氧酶(LPMO)的实例是源自土生梭孢壳霉(Thielaviaterrestres)(WO 2010/080532 A的SEQ ID NO:8的成熟多肽)；源自绒柄香菇(Lentinussimilis)(WO 2014/066141 A的SEQ ID NO:6的成熟多肽)；源自橙色嗜热子囊菌(Thermoascus aurantiacus)(WO 2005/074656 A的SEQ ID NO:2的成熟多肽)的那些。

组合物、方法以及用途

在第一方面，本发明提供了用于处理纸浆的方法，该方法包括使该纸浆与GH8木聚糖酶接触。

在实施例中，GH8木聚糖酶是内切-β-1,4-木聚糖酶。

在实施例中，GH8木聚糖酶是DPSY进化枝的成员；优选地GH8木聚糖酶是如本文所定义的以下进化枝中的至少一种的成员：SMDY进化枝、ALWNW进化枝、和WFAAAL进化枝。

在实施例中，GH8木聚糖酶选自由以下组成的组：

(a)一种多肽，该多肽与SEQ ID NO:1至SEQ ID NO:10中任一项的成熟多肽具有至少60％的序列同一性；优选地，该多肽与SEQ ID NO:1至SEQ ID NO:10中任一项的成熟多肽具有至少65％，更优选至少70％，更优选至少75％，更优选至少80％，更优选至少85％，甚至更优选至少90％，最优选至少95％，并且甚至最优选至少96％、至少97％、至少98％、至少99％、或100％的序列同一性；和

(b)一种源自(a)的多肽，其通过取代、缺失和/或插入一个或多个(几个)氨基酸；以及

(c)该(a)或(b)的多肽的片段，该片段具有GH8木聚糖酶活性。

GH8木聚糖酶的氨基酸序列与SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:2、SEQ ID NO:3、SEQ IDNO:4、SEQ ID NO:5、SEQ ID NO:6、SEQ ID NO:7、SEQ ID NO:8、SEQ ID NO:9、或SEQ ID NO:10的成熟多肽可以具有至少60％的序列同一性，优选至少65％的序列同一性，更优选至少70％的序列同一性，更优选至少75％的序列同一性，更优选至少80％的序列同一性，更优选至少85％的序列同一性，更优选至少90％的序列同一性，更优选至少95％、96％、97％、98％、99％并且最优选100％的序列同一性。

在实施例中，引入SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:2、SEQ ID NO:3、SEQ ID NO:4、SEQ IDNO:5、SEQ ID NO:6、SEQ ID NO:7、SEQ ID NO:8、SEQ ID NO:9、或SEQ ID NO:10的成熟多肽中的氨基酸取代、缺失和/或插入的数量多达10个，例如1个、2个、3个、4个、5个、6个、7个、8个、9个或10个；或多达5个，例如1个、2个、3个、4个、或5个。

在实施例中，GH8木聚糖酶是具有GH8聚木糖酶活性的GH8木聚糖酶片段。

在实施例中，GH8木聚糖酶源自芽孢杆菌属，如芽孢杆菌属物种KK-1，或地衣芽孢杆菌(Bacillus licheniformis)；来自环境样品的宏基因组；戴氏菌属(Dyella)，如戴氏菌属物种-62206。

在实施例中，纸浆是木纸浆。在实施例中，纸浆是非木纤维素纸浆。

在实施例中，纸浆是化学纸浆，如牛皮纸浆。

在实施例中，本发明的方法进一步包括漂白和/或碱性提取(E-阶段)步骤。

在实施例中，本发明的方法包括选自由以下组成的组的一系列处理：

a)X-B；

b)B-X；

c)XB；

其中，

X是GH8木聚糖酶处理阶段，

B是漂白阶段，优选二氧化氯漂白阶段，并且

XB是GH8木聚糖酶处理连同漂白阶段。

在实施例中，本发明的方法进一步包括使纸浆与一种或多种另外的酶接触，该一种或多种另外的酶具有蛋白酶、脂肪酶、木聚糖酶、角质酶、氧化还原酶、纤维素酶、内切葡聚糖酶、淀粉酶、甘露聚糖酶、甾醇酯酶、多糖单加氧酶(LPMO)和/或胆固醇酯酶活性，优选纤维素酶。

在实施例中，来自从本发明的方法中获得的纸浆的滤液中的木糖单糖(xylosaccharides)平均聚合度是3.5-8，优选4-7。

在实施例中，与典型地用于木质纤维素加工中的其他木聚糖酶家族(特别是GH10和GH11家族)相比，本发明的方法产生更可控(不剧烈)的木聚糖水解，从而具有更多纸浆木聚糖的木聚糖保留修饰，同时仍然可以改善纸浆特性，如亮度和强度。这具有重要意义，因为在纸浆生产中需要最小化木聚糖损失。

在实施例中，与用GH10木聚糖酶处理或GH11木聚糖酶处理替代GH8木聚糖酶处理的方法相比，本发明的方法在关于该纸浆强度和/或亮度改进和/或脱水的正面影响方面改善了收益/损害(harm)平衡，同时将对纸浆产量和/或所得滤液/污水的COD的负面影响最小化。

在实施例中，本发明的方法进一步包括制备来自纸浆的纸张材料的最终步骤。

在另一方面，本发明涉及通过本发明的方法制备的纸浆。

在另一方面，本发明提供了纸浆组合物，该纸浆组合物包含纸浆和GH8木聚糖酶。

在优选的实施例中，GH8木聚糖酶选自由以下组成的组：

(a)一种多肽，该多肽与GH8木聚糖酶(选自由SEQ ID NO:1至SEQ ID NO:10中任一项所示的GH8木聚糖酶组成的组)具有至少60％的序列同一性；优选地，该多肽与SEQ IDNO:1至SEQ ID NO:10中任一项所示的GH8木聚糖酶的成熟多肽具有至少65％，更优选至少70％，更优选至少75％，更优选至少80％，更优选至少85％，甚至更优选至少90％，最优选至少95％，并且甚至最优选至少96％、至少97％、至少98％、至少99％、或100％的同一性；和

(b)一种源自(a)的多肽，其通过取代、缺失和/或插入一个或多个(几个)氨基酸；以及

(c)该(a)或(b)的多肽的片段，该片段具有GH8木聚糖酶活性。

在实施例中，纸浆是木纸浆。

在实施例中，纸浆是化学纸浆，如牛皮纸浆。

在另一方面，本发明提供了纸张材料，该纸张材料由本发明的纸浆组合物制得，或由经过本发明的方法的纸浆制得。

本发明还提供了以上用于处理纸浆的方法和组合物的用途。

在实施例中，GH8木聚糖酶促进纸浆漂白和/或提高亮度和/或增加强度和/或改进脱水。

本文引用了多个参考，其披露内容通过引用以其全部内部并入本文。

在下文的一组项目中描述了本发明的一个特定的实施例。

项目：

1.一种用于处理纸浆的方法，该方法包括使纸浆与GH8木聚糖酶(X-阶段)接触。

2.如项目1所述的方法，其中该GH8木聚糖酶是内切-β-1,4-木聚糖酶。

3.如项目1或2所述的方法，其中该GH8木聚糖酶是DPSY进化枝的成员；优选地GH8木聚糖酶是如本文所定义的以下进化枝中的至少一种的成员：SMDY进化枝、ALWNW进化枝、和WFAAAL进化枝。

4.如项目1至3中任一项所述的方法，其中该GH8木聚糖酶选自由以下组成的组：

(a)一种多肽，该多肽与SEQ ID NO:1至SEQ ID NO:10中任一项的成熟多肽具有至少60％的序列同一性；优选地，该多肽与SEQ ID NO:1至SEQ ID NO:10中任一项的成熟多肽具有至少65％，更优选至少70％，更优选至少75％，更优选至少80％，更优选至少85％，甚至更优选至少90％，最优选至少95％，并且甚至最优选至少96％、至少97％、至少98％、至少99％、或100％的序列同一性；和

(b)一种源自(a)的多肽，其通过取代、缺失和/或插入一个或多个(几个)氨基酸；以及

(c)该(a)或(b)的多肽的片段，该片段具有GH8木聚糖酶活性。

5.如项目1至4中任一项所述的方法，其中该GH8木聚糖酶源自芽孢杆菌属，如芽孢杆菌属物种KK-1或地衣芽孢杆菌；来自环境样品的宏基因组；戴氏菌属，如戴氏菌属物种-62206。

6.如项目1至5中任一项所述的方法，其中该纸浆是木纸浆。

7.如权利要求1至6中任一项所述的方法，其中该纸浆是化学纸浆，如牛皮纸浆。

8.如权利要求1至7中任一项所述的方法，该方法进一步包括漂白和/或碱性提取步骤。

9.如项目1至8中任一项所述的方法，该方法包括选自由以下组成的组的一系列处理：

a)X-B；

b)B-X；

c)XB；

其中，

X是GH8木聚糖酶处理阶段，

B是漂白阶段，优选二氧化氯漂白阶段，并且

XB是GH8木聚糖酶处理连同漂白阶段。

10.如项目1至9中任一项所述的方法，该方法进一步包括使该纸浆与一种或多种另外的酶接触，该一种或多种另外的酶具有蛋白酶、脂肪酶、木聚糖酶、角质酶、氧化还原酶、纤维素酶、内切葡聚糖酶、淀粉酶、甘露聚糖酶、甾醇酯酶、多糖单加氧酶(LPMO)和/或胆固醇酯酶活性，优选纤维素酶。

11.如项目1-10中任一项所述的方法，其中来自从该方法中获得的该纸浆的滤液中木糖单糖的平均聚合度是3.5-8，优选4-7。

12.如项目1至11中任一项所述的方法，其中与用GH10木聚糖酶处理或GH11木聚糖酶处理替代GH8木聚糖酶处理的方法相比，该方法在关于该纸浆强度和/或亮度改进和/或脱水的正面影响方面改善了收益/损害平衡，同时将对纸浆产量和/或所得滤液/污水的COD的负面影响最小化。

13.一种通过如项目1至12中任一项所述的方法制备的纸浆。

14.一种纸浆组合物，该纸浆组合物包含纸浆和GH8木聚糖酶。

15.如项目14所述的纸浆组合物，其中该GH8木聚糖酶是内切-β-1,4-木聚糖酶。

16.如项目14或15所述的纸浆组合物，其中该GH8木聚糖酶是DPSY进化枝的成员；优选地GH8木聚糖酶是如本文所定义的以下进化枝中的至少一种的成员：SMDY进化枝、ALWNW进化枝、和WFAAAL进化枝。

17.如项目14至16中任一项所述的纸浆组合物，其中该GH8木聚糖酶选自由以下组成的组：

(a)一种多肽，该多肽与SEQ ID NO:1至SEQ ID NO:10中任一项的成熟多肽具有至少60％的序列同一性；优选地，该多肽与SEQ ID NO:1至SEQ ID NO:10中任一项的成熟多肽具有至少65％，更优选至少70％，更优选至少75％，更优选至少80％，更优选至少85％，甚至更优选至少90％，最优选至少95％，并且甚至最优选至少96％、至少97％、至少98％、至少99％、或100％的序列同一性；和

(b)一种源自(a)的多肽，其通过取代、缺失和/或插入一个或多个(几个)氨基酸；以及

(c)该(a)或(b)的多肽的片段，该片段具有GH8木聚糖酶活性。

18.如项目14至17中任一项所述的纸浆组合物，其中该纸浆是木纸浆。

19.如权利要求14至18中任一项所述的纸浆组合物，其中该纸浆是化学纸浆，如牛皮纸浆。

20.如项目14至19中任一项所述的纸浆组合物，其中来自该纸浆的滤液中的木糖单糖的平均聚合度是3.5-8，优选4-7。

21.GH8木聚糖酶用于处理纸浆的用途。

22.如项目21所述的用途，其中GH8木聚糖酶改善了纸浆的亮度和/或强度和/或脱水。

进一步通过以下实例来描述本发明，这些实例不应理解为限制本发明的范围。

实例

纸浆手抄纸的制备

对于“ISO亮度”(蓝色漫反射系数；ISO 2470-1)的测量，根据ISO 3688并使用Technidyne公司的Color Touch PC分光光度计制备纸浆手抄纸。

对于物理测试(例如拉伸和破裂强度)，根据TAPPI标准T205制备纸浆手抄纸。在同一房间内进行测量前，将手抄纸在控制湿度(50.0％±2.0％RH)和温度(23.0±1.0℃)环境下适应至少24小时。如TAPPI标准T220中描述的进行手抄纸的物理测试。拉伸测试程序基于使用Instron 5564测试仪的Tappi标准T。破裂测试程序基于使用L&W Burst-O-Matic测试仪的Tappi标准T 403。

纸浆中的醛基测量

根据由Obolenskaya等人,“Determination of aldehyde groups in oxidizedpulps[氧化纸浆中醛基的测定]”,Laboratory Manipulations in Wood and CelluloseChemistry[木材和纤维素化学的实验室操作],Ecologia[生态学],莫斯科,211-212,1991中描述的程序来采用分光光度法(UV-Vis分光光度计HP 8453A，G1103A型号)测量纸浆中醛基的量，其基于2,3,5-氯化三苯基四氮唑(TTC)与醛基反应，从而导致甲臜(红色着色剂)的形成。

化学需氧量(COD)确定

使用来自默克公司(Merck)的COD池测试(COD Cell Test)进行纸浆滤液中的COD确定。将具有稀释滤液的反应池置于148℃的热反应器TR620中持续2小时，并且然后允许在反应后60min内在光度计

NOVA60中测量之前冷却。用UV-Vis分光光度计HP8453A G1103A型号测量纸浆滤液的吸光度。

滤液中还原糖的测量

对于纸浆滤液中还原糖(CHO基团)的测量，利用基于对羟基苯甲酸酰肼(PHBAH)的微量滴定板法，因为还原糖与苯甲酸的酰肼在碱性介质中反应，以产生乙二醛和甲基乙二醛的双苯甲酰基腙，两者均为深黄色。通过铋离子的催化作用加速反应速率，并且乙二醛和甲基乙二醛衍生物的生成在405nm处进行监测并与由木糖校准标准品构建的标准曲线计算的还原糖浓度的量成正比。纸浆滤液的测量与RS的测量一样，并且也在用β-木糖苷酶次级酶水解(将200μL具有0,002mg EP/mL的缓冲pH 3.5的纸浆滤液在50℃下持续60min)以将滤液中存在的少量木糖单糖(XOS)转化为木糖从而增加还原糖测定的响应后。具有β-木糖苷酶的RS值与不具有β-木糖苷酶的RS值的比率是纸浆滤液中存在的XOS的平均聚合度的指标。

用作缓冲液和底物的化学品是至少试剂级的商业产品。

在实例中使用的酶

实例1市售硬木漂白纸浆的木聚糖酶处理对纸浆和滤液性质的影响

将片状的漂白北方混合硬木牛皮纸浆(干燥lap商品纸级纸浆)用手撕碎，在蒸馏水中浸泡过夜，并且然后在纸浆分解仪中以10000rpm分解。分解后，将纸浆过滤并粉碎后用于实验。典型地，使用10mg酶蛋白(EP)/kg odp(烘干纸浆；基于干物质)，在10％稠度，45℃和pH 4.5(乙酸盐缓冲液)下用木聚糖酶处理20g odp(烘干纸浆；基于干物质)4小时。在浸入控温水浴的密封聚乙烯塑料袋中孵育纸浆悬浮液。孵育后，过滤纸浆并收集滤液。然后将纸浆用1L温自来水在三个连续步骤中进行洗涤并过滤。在相同条件(除了使用酶之外)下平行进行对照实验。

在表1中，观察到与两种测试的GH8内切-木聚糖酶相比，GH10内切-木聚糖酶和GH11内切-木聚糖酶处理使得滤液中的还原糖(醛基，CHO)释放更高。如所预期的，用β-木糖苷酶处理纸浆滤液时，由于XOS的酶水解，可以测量到更大量的还原糖。然而，如通过CHO比率估计的，与两种测试的GH10(DP＝2.6)和GH11(DP＝3.3)木聚糖酶相比，来自用两种GH8木聚糖酶(DP约为6)处理的纸浆的滤液中获得令人惊讶地更高的XOS平均聚合度(DP)。

关于纸浆中还原端基团的量(CHO含量)，木聚糖酶处理增加了其的量(由于纸浆木聚糖的酶水解)。然而，用GH8木聚糖酶(约34mmol/kg odp)获得了令人惊讶地高量(与用GH11木聚糖酶(约35mmol/kg odp)达到的量相当)的CHO基团。这是重要的发现，因为GH8木聚糖酶导致滤液中非常低量的溶解木聚糖，如通过滤液中的RS(CHO)测量结果所测量的。这进一步得到了木聚糖酶产生的COD量的支持(表2)，因为与GH8木聚糖酶相比，GH10木聚糖酶和GH11木聚糖酶产生非常高的量的COD。在280nm处的吸光度中也看到相同的趋势，因此这表明通过GH8木聚糖酶，与木聚糖相关的芳香结构的释放量较低。然而，就亮度增益而言，所有经试验的木聚糖酶均可以将纸浆的亮度提高至相似程度(表3)。因此，使用GH8木聚糖酶的主要优点是，与其他木聚糖酶家族相比，它们产生更可控(不剧烈)的木聚糖水解，从而具有更多纸浆木聚糖的木聚糖保留修饰，同时仍然可以改善纸浆特性，如亮度。这具有重要意义，因为在纸浆生产中需要避免木聚糖损失。

就强度特性而言，表3中可以看出，木聚糖酶增加了拉伸和破裂指数，GH11最高，其次是GH8，然后是GH10木聚糖酶。因此，与GH10和GH11木聚糖酶相反，GH8木聚糖酶对强度改善具有正面影响，同时保持了纸浆产量并将COD影响最小化。这再次突出了使用GH8木聚糖酶的优势，因为GH10和GH11木聚糖酶可能导致木聚糖水解过于激烈并且因此在纸浆和纸张生产过程中产生的损害大于收益。

表1.评估用属于GH8、GH10和GH11家族的木聚糖酶处理的纸浆以及所得纸浆滤液中的还原端基团：经过和不经过用β-木糖苷酶(BX)的次级水解的纸浆滤液中还原糖的量。经过和不经过BX处理的测量之间的CHO比率是滤液中XOS平均聚合度的估计值；以mmol/kgodp给予的经处理纸浆中还原端基团(醛)的量。

表2.来自经处理的纸浆的滤液的吸光度和COD

酶	在280nm处的吸光度	COD(mg/L)
			对照	0.05	4671±8
GH8木聚糖酶A	0.15	4968±32(+6.4％)
			GH8木聚糖酶B	0.15	4503±18(-3.6％)
GH10木聚糖酶A	0.34	5925±2(+26.8％)
			GH11木聚糖酶A	0.36	6201±20(+32.8％)

表3.经处理的纸浆的亮度和强度特性

实例2未漂白浆料的预漂白中木聚糖酶处理对增强漂白性能的影响

将未漂白的桉树牛皮纸浆按以下顺序进行一系列处理：木聚糖酶(X-阶段)、随后二氧化氯漂白(D-阶段)、然后过氧化氢强化的碱性提取(Ep-阶段)，在各阶段之间进行纸浆洗涤。以10mg EP/kg odp的木聚糖酶剂量，在50℃、pH 6(磷酸盐缓冲液)下将30克纸浆(如烘干纸浆)处理120min。使用1.12％odp ClO₂(100％剂量)或0.95％odp ClO₂(85％剂量)，在70℃，初始pH为3,0(用硫酸调节)下进行二氧化氯处理(D-阶段)60min。使用1.35％odpNaOH和0.20％odp H₂O₂，在75℃下进行Ep-阶段60min。在浸入温控水浴中的密封聚乙烯塑料袋中，在10％稠度下进行所有纸浆处理。

在每个阶段后，如实例1中所述的将纸浆过滤并洗涤。收集纸浆滤液以测量COD。

在桉树牛皮纸浆的预漂白中使用GH8和GH10木聚糖酶使得节约了约15％的ClO₂，而GH11木聚糖酶能够实现更高的节约(表4)。然而，如通过GH11处理的浆料滤液的更高的COD增加所表明的，更高的二氧化氯节约是以纸浆产量严重损失为代价(表5)。从选择性的角度来看，GH8木聚糖酶展现非常低的COD影响并且因此在纸浆中保留了更多的木聚糖并且保持了产量，同时仍有约15％的ClO₂节约。

表4.X-D-Ep漂白纸浆的亮度。用100％或85％ClO₂的D阶段。

表5.来自经处理的纸浆滤液的COD

实例3木聚糖酶处理对漂白后未干燥过的已漂白桉树牛皮纸浆的影响

用GH8和GH11木聚糖酶处理漂白的从干燥的桉树牛皮纸浆，作为漂白后步骤。使用1.5、4.0和10mg酶蛋白(EP)/kg odp(烘干纸浆；基于干物质)，在10％稠度，55℃和pH 6.0(磷酸缓冲液)下用木聚糖酶处理20g odp(烘干纸浆；基于干物质)2小时。如实例1中所述的处理并操作纸浆。在相同条件(除了使用酶之外)下平行进行对照实验。

表6中显示的结果表明，所有酶处理均能达到约91％的ISO亮度，并且因此增加约1.0亮度点。再次强调，与GH11木聚糖酶相比，用所有剂量水平的GH8木聚糖酶获得的，相当低的有机负荷释放到了纸浆滤液中(如通过滤液中的COD和CHO两者含量所指示的)。通过GH8木聚糖酶处理再次证实了纸浆中的此木聚糖保持效果，同时在亮度增益方面仍然获得与GH11木聚糖酶相同水平的益处。

表6.经处理的纸浆的亮度和纸浆滤液中的COD和还原糖

实例4木聚糖酶处理对漂白后未干燥过的已漂白硬木牛皮纸浆的影响

用GH8、GH10和GH11木聚糖酶处理已漂白的从干燥的硬木牛皮纸浆，作为漂白后步骤。使用2.0mg酶蛋白(EP)/kg odp(烘干纸浆；基于干物质)，在10％稠度，45℃和pH 6.0(磷酸缓冲液)下用木聚糖酶处理10g odp(烘干纸浆；基于干物质)3小时和20小时。如实例1中所述的处理并操作纸浆。在相同条件(除了使用酶之外)下平行进行对照实验。

表7中所示结果表明，3小时后，所有酶处理均能使GH8木聚糖酶的ISO亮度增益至少0.6-0.8个亮度点，而GH10和G11木聚糖酶则达到分别增益0.7和1.2。与前述实例类似，GH8木聚糖酶的亮度增益是在较少的COD释放到滤液中情况下实现的，因此保留了更多的产量。在延长的20小时时间内，如通过COD和还原糖测量的，GH8木聚糖酶再次证实相当低的有机负荷释放了到滤液中。这很重要，因为在全规模环境下，如果在纸浆生产和/或造纸工艺中停止，纸浆可能与木聚糖酶长期接触。与GH10和GH11木聚糖酶相比，经20h的长时间孵育后，GH8木聚糖酶再次显示出令人惊讶地更高的释放XOS的平均聚合度。

表7.在两个不同的处理时间，经处理的纸浆的亮度和纸浆滤液中的COD和还原糖

实例5木聚糖酶处理对漂白后从干燥过的已漂白桉树牛皮纸浆的影响

用GH8、GH10和GH11木聚糖酶处理已漂白的从干燥的硬木牛皮纸浆，作为漂白后步骤。使用1.0mg酶蛋白(EP)/kg odp(烘干纸浆；基于干物质)，在10％稠度，65℃和pH 6.0(磷酸缓冲液)下用木聚糖酶处理5g odp(烘干纸浆；基于干物质)20小时。如实例1中所述的处理并操作纸浆。在相同条件(除了使用酶之外)下平行进行对照实验。

如表8所示所有经试验的酶提高了亮度。与测试的GH10和GH11木聚糖酶相比，所有GH8木聚糖酶均释放的更少的COD。在相同ISO亮度水平下(例如89.5±0.1％)，通过GH8木聚糖酶的作用释放了非常低量的COD。

表8.经处理的纸浆的亮度和所得纸浆滤液中的COD

实例6使用经漂白的桉树牛皮市售纸级纸浆的木聚糖酶处理的影响

用GH8、GH10和GH11木聚糖酶处理经漂白非桉树牛皮市售纸级纸浆(干纸浆)。使用1.0mg酶蛋白(EP)/kg odp(烘干纸浆；基于干物质)，在10％稠度，65℃和pH 6.0(磷酸缓冲液)下用木聚糖酶处理5g odp(烘干纸浆；基于干物质)23小时。如实例1中所述的处理并操作纸浆。在相同条件(除了使用酶之外)下平行进行对照实验。

在表9中可以看出，GH8木聚糖酶在较低的COD释放下实现了较高的亮度，这再次证实与GH10和GH11木聚糖酶(导致木聚糖损失更高并且因此滤液中COD含量更高)相比，纸浆的木聚糖保留修饰更多。

表9.经处理的纸浆的亮度和所得纸浆滤液中的COD

序列表

<110> 诺维信公司（Novozymes A/S）

<120> 纸浆的酶处理

<130> 15020-WO-PCT

<160> 18

<170> PatentIn 3.5版

<210> 1

<211> 433

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成的构建体

<220>

<221> 成熟肽

<222> (28)..(433)

<400> 1

Met Lys Lys Pro Leu Gly Lys Ile Val Ala Ser Thr Ala Leu Leu Ile

-25 -20 -15

Ser Val Ala Phe Ser Ser Ser Ile Ala Ser Ala Ala Val His Ser Lys

-10 -5 -1 1 5

Thr Pro Asp Ile Leu Gly Thr Thr Gly Lys Asn Asn Leu Asn Gln Ala

10 15 20

Tyr Lys Lys Tyr Phe Asp Thr Lys Gly Asp Gly Lys Gly Gly Ser Leu

25 30 35

Phe His Tyr Met Lys Asp Gly Ser Ala Tyr Ile Ala Ser Thr Thr Asp

40 45 50

Asp Asn Leu Gly Asn Gly Tyr Tyr Ser Val Lys Thr Glu Gly Met Ser

55 60 65

Tyr Gly Met Met Ile Thr Leu Gln Met Asn Asp Glu Tyr Lys Phe Gln

70 75 80 85

Lys Leu Trp Asp Phe Val Arg Lys Tyr Met Arg His Ser Asp Arg Asn

90 95 100

Asp Ser Leu Tyr Gly Tyr His Ser Trp His Met Lys Thr Asn Gly Ser

105 110 115

Asp Val Gln Thr Ile Asp Gln Asn Val Ala Ser Asp Gly Glu Val Trp

120 125 130

Phe Ala Ala Ala Leu Met Met Ala Ser Gly Arg Trp Gly Asp Lys Lys

135 140 145

Tyr Pro Tyr Asp Tyr Lys Ala Arg Ala Gln Asp Met Leu Asp Ala Leu

150 155 160 165

Ala Gly Asp Gly Glu Tyr Ala Asn Thr Gly Lys Glu Ser Arg Val Phe

170 175 180

Ile Lys Asn Ser Lys Asp Gln Arg Tyr Ala Met Val Arg Phe Gly Pro

185 190 195

Tyr Val Asn Trp Thr Asp Pro Ser Tyr His Val Pro Ala Phe Phe Glu

200 205 210

Leu Phe Ala Lys Ser Ala Lys Ser Ser Gln Gln Tyr Phe Trp Lys Asp

215 220 225

Ala Ala Asn Lys Ser Arg Thr Tyr Leu Ser Glu Thr Thr Phe Lys Ser

230 235 240 245

Val Leu Asn Asn Gly Ser Thr Val Thr Asn Ala Ala Thr Gly Leu Phe

250 255 260

Pro Asp Glu Ala Gly Phe Asp Gly Val Ser Asp Ala Ala His Ser Ser

265 270 275

Thr Glu Thr Asp Arg Asn Phe Ser Tyr Asp Ala Trp Arg Thr Val Ser

280 285 290

His Ile Ala Met Asp His Thr Leu Trp Ser Ser Ala Asp Asn Ala Tyr

295 300 305

Arg Ala Ser Glu Gln Lys Ala Val Asn Lys Phe Leu Thr Phe Met Lys

310 315 320 325

Arg Glu Asn Tyr Gly Arg Thr Ala His Glu Tyr Thr Leu Asn Gly Thr

330 335 340

Ala Val Lys Lys Gly Ser Pro Val Gly Leu Ile Ala Ala Asn Ala Gly

345 350 355

Gly Ala Thr Ala Ala Ser Asp Ala Ser Leu Arg Thr Gly Phe Ala Asn

360 365 370

Ala Phe Asn Ser Thr Tyr Ile Pro Glu Asp Tyr Tyr Gly Ser Cys Leu

375 380 385

Tyr Met Leu Asn Ser Leu Val Ala Asn Gly Lys Phe Ala Met Tyr Leu

390 395 400 405

Pro

<210> 2

<211> 434

<212> PRT

<213> 芽孢杆菌属物种KK-1

<220>

<221> 信号

<222> (1)..(27)

<220>

<221> 成熟肽

<222> (28)..(434)

<400> 2

Met Lys Lys Pro Leu Gly Lys Ile Val Ala Ser Thr Ala Leu Leu Ile

-25 -20 -15

Ser Val Ala Phe Ser Ser Ser Ile Ala Ser Ala Ala Val His Ser Lys

-10 -5 -1 1 5

Thr Pro Asp Ile Leu Gly Thr Thr Gly Lys Asn Asn Leu Asn Gln Ala

10 15 20

Tyr Lys Lys Tyr Phe Asp Thr Lys Gly Asp Gly Lys Gly Gly Ser Leu

25 30 35

Phe His Tyr Met Lys Asp Gly Ser Ala Tyr Ile Ala Ser Thr Thr Asp

40 45 50

Asp Asn Leu Leu Gly Asn Gly Tyr Tyr Ser Val Lys Thr Glu Gly Met

55 60 65

Ser Tyr Gly Met Met Ile Thr Leu Gln Met Asn Asp Glu Tyr Lys Phe

70 75 80 85

Gln Lys Leu Trp Asp Phe Val Arg Lys Tyr Met Arg His Ser Asp Arg

90 95 100

Asn Asp Ser Leu Tyr Gly Tyr His Ser Trp His Met Lys Thr Asn Gly

105 110 115

Ser Asp Val Gln Thr Ile Asp Gln Asn Val Ala Ser Asp Gly Glu Val

120 125 130

Trp Phe Ala Ala Ala Leu Met Met Ala Ser Gly Arg Trp Gly Asp Lys

135 140 145

Lys Tyr Pro Tyr Asp Tyr Lys Ala Arg Ala Gln Asp Met Leu Asp Ala

150 155 160 165

Leu Ala Gly Asp Gly Glu Tyr Ala Asn Thr Gly Lys Glu Ser Arg Val

170 175 180

Phe Ile Lys Asn Ser Lys Asp Gln Arg Tyr Ala Met Val Arg Phe Gly

185 190 195

Pro Tyr Val Asn Trp Thr Asp Pro Ser Tyr His Val Pro Ala Phe Phe

200 205 210

Glu Leu Phe Ala Lys Ser Ala Lys Ser Ser Gln Gln Tyr Phe Trp Lys

215 220 225

Asp Ala Ala Asn Lys Ser Arg Thr Tyr Leu Ser Glu Thr Thr Phe Lys

230 235 240 245

Ser Val Leu Asn Asn Gly Ser Thr Val Thr Asn Ala Ala Thr Gly Leu

250 255 260

Phe Pro Asp Glu Ala Gly Phe Asp Gly Val Ser Asp Ala Ala His Ser

265 270 275

Ser Thr Glu Thr Asp Arg Asn Phe Ser Tyr Asp Ala Trp Arg Thr Val

280 285 290

Ser His Ile Ala Met Asp His Thr Leu Trp Ser Ser Ala Asp Asn Ala

295 300 305

Tyr Arg Ala Ser Glu Gln Lys Ala Val Asn Lys Phe Leu Thr Phe Met

310 315 320 325

Lys Arg Glu Asn Tyr Gly Arg Thr Ala His Glu Tyr Thr Leu Asn Gly

330 335 340

Thr Ala Val Lys Lys Gly Ser Pro Val Gly Leu Ile Ala Ala Asn Ala

345 350 355

Gly Gly Ala Thr Ala Ala Ser Asp Ala Ser Leu Arg Thr Gly Phe Ala

360 365 370

Asn Ala Phe Asn Ser Thr Tyr Ile Pro Glu Asp Tyr Tyr Gly Ser Cys

375 380 385

Leu Tyr Met Leu Asn Ser Leu Val Ala Asn Gly Lys Phe Ala Met Tyr

390 395 400 405

Leu Pro

<210> 3

<211> 407

<212> PRT

<213> 芽孢杆菌属物种KK-1

<400> 3

Ala Val His Ser Lys Thr Pro Asp Ile Leu Gly Thr Thr Gly Lys Asn

1 5 10 15

Asn Leu Asn Gln Ala Tyr Lys Lys Tyr Phe Asp Thr Lys Gly Asp Gly

20 25 30

Lys Gly Gly Ser Leu Phe His Tyr Met Lys Asp Gly Ser Ala Tyr Ile

35 40 45

Ala Ser Thr Thr Asp Asp Asn Leu Leu Gly Asn Gly Tyr Tyr Ser Val

50 55 60

Lys Thr Glu Gly Met Ser Tyr Gly Met Met Ile Thr Leu Gln Met Asn

65 70 75 80

Asp Glu Tyr Lys Phe Gln Lys Leu Trp Asp Phe Val Arg Lys Tyr Met

85 90 95

Arg His Ser Asp Arg Asn Asp Ser Leu Tyr Gly Tyr His Ser Trp His

100 105 110

Met Lys Thr Asn Gly Ser Asp Val Gln Thr Ile Asp Gln Asn Val Ala

115 120 125

Ser Asp Gly Glu Val Trp Phe Ala Ala Ala Leu Met Met Ala Ser Gly

130 135 140

Arg Trp Gly Asp Lys Lys Tyr Pro Tyr Asp Tyr Lys Ala Arg Ala Gln

145 150 155 160

Asp Met Leu Asp Ala Leu Ala Gly Asp Gly Glu Tyr Ala Asn Thr Gly

165 170 175

Lys Glu Ser Arg Val Phe Ile Lys Asn Ser Lys Asp Gln Arg Tyr Ala

180 185 190

Met Val Arg Phe Gly Pro Tyr Val Asn Trp Thr Asp Pro Ser Tyr His

195 200 205

Val Pro Ala Phe Phe Glu Leu Phe Ala Lys Ser Ala Lys Ser Ser Gln

210 215 220

Gln Tyr Phe Trp Lys Asp Ala Ala Asn Lys Ser Arg Thr Tyr Leu Ser

225 230 235 240

Glu Thr Thr Phe Lys Ser Val Leu Asn Asn Gly Ser Thr Val Thr Asn

245 250 255

Ala Ala Thr Gly Leu Phe Pro Asp Glu Ala Gly Phe Asp Gly Val Ser

260 265 270

Asp Ala Ala His Ser Ser Thr Glu Thr Asp Arg Asn Phe Ser Tyr Asp

275 280 285

Ala Trp Arg Thr Val Ser His Ile Ala Met Asp His Thr Leu Trp Ser

290 295 300

Ser Ala Asp Asn Ala Tyr Arg Ala Ser Glu Gln Lys Ala Val Asn Lys

305 310 315 320

Phe Leu Thr Phe Met Lys Arg Glu Asn Tyr Gly Arg Thr Ala His Glu

325 330 335

Tyr Thr Leu Asn Gly Thr Ala Val Lys Lys Gly Ser Pro Val Gly Leu

340 345 350

Ile Ala Ala Asn Ala Gly Gly Ala Thr Ala Ala Ser Asp Ala Ser Leu

355 360 365

Arg Thr Gly Phe Ala Asn Ala Phe Asn Ser Thr Tyr Ile Pro Glu Asp

370 375 380

Tyr Tyr Gly Ser Cys Leu Tyr Met Leu Asn Ser Leu Val Ala Asn Gly

385 390 395 400

Lys Phe Ala Met Tyr Leu Pro

405

<210> 4

<211> 443

<212> PRT

<213> 来自环境样品K的宏基因组

<220>

<221> 信号

<222> (1)..(32)

<220>

<221> 成熟肽

<222> (33)..(443)

<400> 4

Met Ser Ala Pro Lys Phe Leu Leu Leu Tyr Lys Pro Ala Leu Leu Val

-30 -25 -20

Cys Ser Leu Cys Leu Ile Ala Leu Leu Ala Ala Cys Thr Ala Asn Arg

-15 -10 -5 -1

Gln Thr Ala Thr Ile Val Pro Gly Gln Ala Glu Leu Gly Ser Ala Phe

1 5 10 15

Ser Gly Arg Tyr Ala Asn Leu Phe Ala Gln Gln Gly Tyr Ser Gln Gln

20 25 30

Ala Ile Asn Ala Lys Ile Ser Gln Ala Phe Asn Gln Leu Phe Tyr Gly

35 40 45

Ala Pro Asp Ser Gln Ala Val Tyr Phe Ala Asp Gly Ser Asn Gly Tyr

50 55 60

Gly Thr Lys Ala Tyr Ile Ala Asp Ile Asn Asn Asn Asp Val Arg Ser

65 70 75 80

Glu Gly Met Ser Tyr Gly Met Met Ile Ala Val Gln Leu Asn Lys Gln

85 90 95

Ala Glu Phe Asn Ala Leu Trp Asn Trp Ala Ala Ser His Met Tyr His

100 105 110

Ser Asp Pro Ala His Pro Ala Tyr Gly Tyr Phe Ala Trp Ser Val Gly

115 120 125

Thr Asn Gly Val Ala Leu Asp Glu Met Pro Ala Pro Asp Gly Glu Glu

130 135 140

Tyr Phe Ala Thr Ala Leu Tyr Phe Ala Ser Val Arg Trp Gly Asp Gly

145 150 155 160

Ala Gly Ile Tyr Gln Tyr Lys Ala Lys Ala Asp Glu Leu Leu Gln His

165 170 175

Met Arg His Arg Asn Ile Ile Thr Gly Gln Thr Leu Arg Gly Ser Gln

180 185 190

Thr Gly Thr Asn Leu Phe His Pro Glu Tyr Ala Met Val Arg Phe Thr

195 200 205

Pro Asp Leu Ala Asn Ala Asp His Thr Asp Ala Ser Tyr His Leu Pro

210 215 220

Ala Phe Tyr Glu Val Trp Ala Arg Met Gly Pro Ala Ala Asp Arg Ala

225 230 235 240

Phe Trp Gln Gln Ala Thr Arg Val Ser Arg Asp Tyr Phe Ser Lys Ala

245 250 255

Ala His Pro Gln Thr Gly Leu Thr Pro Asp Tyr Gly Asn Phe Asp Gly

260 265 270

Ser Pro Trp Ala Ala Pro Trp Arg Pro Glu Ser Ala Asp Phe Arg Phe

275 280 285

Asp Ala Trp Arg Thr Ala Met Asn Trp Ser Phe Asp Trp Ser Trp Trp

290 295 300

Arg Lys Asp Ala Arg Ala Val Glu Leu Ser Asn Arg Leu Gln Ala Phe

305 310 315 320

Phe Ile Ser Glu Gly Leu Ser Asn Tyr Ser Ser Gln Tyr Ser Leu Asp

325 330 335

Gly Lys Lys Leu Asp His Thr Gln Gln Ser Gly Leu Val Ala Met Asn

340 345 350

Ala Val Ala Ser Leu Ala Ala Thr Gly Pro Asp Ala Gly Lys Phe Val

355 360 365

Gln Ala Leu Trp Gln Leu Pro Val Pro Glu Gly His Tyr Arg Tyr Tyr

370 375 380

Asp Gly Met Leu Tyr Met Leu Ala Leu Leu His Val Ser Gly Gln Phe

385 390 395 400

Gln Ala Trp Leu Pro Ala Ala Asp Lys Thr Glu

405 410

<210> 5

<211> 411

<212> PRT

<213> 来自环境样品K的宏基因组

<400> 5

Gln Thr Ala Thr Ile Val Pro Gly Gln Ala Glu Leu Gly Ser Ala Phe

1 5 10 15

Ser Gly Arg Tyr Ala Asn Leu Phe Ala Gln Gln Gly Tyr Ser Gln Gln

20 25 30

Ala Ile Asn Ala Lys Ile Ser Gln Ala Phe Asn Gln Leu Phe Tyr Gly

35 40 45

Ala Pro Asp Ser Gln Ala Val Tyr Phe Ala Asp Gly Ser Asn Gly Tyr

50 55 60

Gly Thr Lys Ala Tyr Ile Ala Asp Ile Asn Asn Asn Asp Val Arg Ser

65 70 75 80

Glu Gly Met Ser Tyr Gly Met Met Ile Ala Val Gln Leu Asn Lys Gln

85 90 95

Ala Glu Phe Asn Ala Leu Trp Asn Trp Ala Ala Ser His Met Tyr His

100 105 110

Ser Asp Pro Ala His Pro Ala Tyr Gly Tyr Phe Ala Trp Ser Val Gly

115 120 125

Thr Asn Gly Val Ala Leu Asp Glu Met Pro Ala Pro Asp Gly Glu Glu

130 135 140

Tyr Phe Ala Thr Ala Leu Tyr Phe Ala Ser Val Arg Trp Gly Asp Gly

145 150 155 160

Ala Gly Ile Tyr Gln Tyr Lys Ala Lys Ala Asp Glu Leu Leu Gln His

165 170 175

Met Arg His Arg Asn Ile Ile Thr Gly Gln Thr Leu Arg Gly Ser Gln

180 185 190

Thr Gly Thr Asn Leu Phe His Pro Glu Tyr Ala Met Val Arg Phe Thr

195 200 205

Pro Asp Leu Ala Asn Ala Asp His Thr Asp Ala Ser Tyr His Leu Pro

210 215 220

Ala Phe Tyr Glu Val Trp Ala Arg Met Gly Pro Ala Ala Asp Arg Ala

225 230 235 240

Phe Trp Gln Gln Ala Thr Arg Val Ser Arg Asp Tyr Phe Ser Lys Ala

245 250 255

Ala His Pro Gln Thr Gly Leu Thr Pro Asp Tyr Gly Asn Phe Asp Gly

260 265 270

Ser Pro Trp Ala Ala Pro Trp Arg Pro Glu Ser Ala Asp Phe Arg Phe

275 280 285

Asp Ala Trp Arg Thr Ala Met Asn Trp Ser Phe Asp Trp Ser Trp Trp

290 295 300

Arg Lys Asp Ala Arg Ala Val Glu Leu Ser Asn Arg Leu Gln Ala Phe

305 310 315 320

Phe Ile Ser Glu Gly Leu Ser Asn Tyr Ser Ser Gln Tyr Ser Leu Asp

325 330 335

Gly Lys Lys Leu Asp His Thr Gln Gln Ser Gly Leu Val Ala Met Asn

340 345 350

Ala Val Ala Ser Leu Ala Ala Thr Gly Pro Asp Ala Gly Lys Phe Val

355 360 365

Gln Ala Leu Trp Gln Leu Pro Val Pro Glu Gly His Tyr Arg Tyr Tyr

370 375 380

Asp Gly Met Leu Tyr Met Leu Ala Leu Leu His Val Ser Gly Gln Phe

385 390 395 400

Gln Ala Trp Leu Pro Ala Ala Asp Lys Thr Glu

405 410

<210> 6

<211> 383

<212> PRT

<213> 来自环境样品C的宏基因组

<400> 6

Glu Gly Ala Tyr Tyr Thr Gly Ile Tyr Arg Asn Met Phe Lys Glu Leu

1 5 10 15

Leu Asn Lys Ser Asp Ala Glu Ile Asn Thr Lys Ile Asn Asn Ala Phe

20 25 30

Gln Gln Ile Phe His Gly Ser Ser Asn Glu Lys Leu Tyr Tyr Glu Val

35 40 45

Gly Asn Asp Met Ala Tyr Ile Leu Asp Val Asn Asn Asn Asp Val Arg

50 55 60

Ser Glu Gly Met Ser Tyr Gly Met Met Ile Cys Ala Gln Leu Asp Lys

65 70 75 80

Gln Val Glu Phe Asn Lys Ile Trp Lys Trp Ala Lys Thr Tyr Met Gln

85 90 95

Tyr Gly Thr Asn Asn Asn Phe Asn Gly Tyr Phe Ala Trp Gln Met Asn

100 105 110

Thr Asn Gly Thr Ile Lys Gly Asn Ser Pro Ala Ser Asp Gly Glu Ala

115 120 125

Tyr Phe Ile Thr Ala Leu Phe Phe Ala Ala Asn Arg Trp Gly Asn Gly

130 135 140

Asp Gly Ile Phe Asn Tyr Glu Ala Glu Ala Gln Asp Ile Leu Asn Lys

145 150 155 160

Val Met Ser Lys Thr Gly Ala Gly Ser Val Tyr Asn Leu Phe Asn Thr

165 170 175

Asn Ser Lys Leu Ile Thr Phe Val Pro Tyr Gly Asp Ser Tyr Asn Phe

180 185 190

Thr Asp Pro Ser Tyr Asn Leu Pro Gly Phe Trp Glu Leu Trp Ser Arg

195 200 205

Trp Ser Lys Thr Asn Gln Ser Phe Trp Ala Gln Thr Pro Ala Ala Ser

210 215 220

Arg Lys Leu Leu Arg Asp Ala Ser His Ser Ser Ser Gly Leu Thr Thr

225 230 235 240

Asp Tyr Ser Asn Phe Asp Gly Thr Pro Lys Glu Val Ser Tyr Asn Thr

245 250 255

Asp Ala Asp Arg Phe Met Tyr Asp Ala Trp Arg Ser Ile Met Asn Leu

260 265 270

Ser Val Asp Tyr His Trp Phe Lys Ala Asp Ala Gln Gln Pro Val Ile

275 280 285

Ala Glu Arg Tyr Leu Thr Phe Phe Lys Asn Gln Gly Ser Gly Tyr Lys

290 295 300

Asn His Tyr Asp Trp Asn Gly Ala Asn Gly Gly Gly Asp His Ser Thr

305 310 315 320

Gly Leu Val Ala Cys Asn Ala Val Ala Ser Leu Ala Val Asn Asn Thr

325 330 335

Ser Leu Thr Thr Pro Phe Val Gln Glu Leu Trp Asn Thr Ala Ile Pro

340 345 350

Thr Gly Thr Tyr Arg Tyr Tyr Asp Gly Met Leu Tyr Met Leu Gly Leu

355 360 365

Leu Asn Val Ser Gly Asn Phe Lys Val Trp Lys Pro Ala Cys Pro

370 375 380

<210> 7

<211> 434

<212> PRT

<213> 地衣芽孢杆菌

<220>

<221> 信号

<222> (1)..(28)

<220>

<221> 成熟肽

<222> (29)..(434)

<400> 7

Met Arg Lys Ser Leu Lys Trp Ile Met Ala Val Phe Ile Gly Leu Thr

-25 -20 -15

Cys Phe Cys Ala Ala Tyr Ser Gln Thr Ala Met Ala Ala Val His Ser

-10 -5 -1 1

Lys Thr Pro Asp Ile Leu Gly Thr Thr Gly Lys Asn Asn Leu Asn Gln

5 10 15 20

Ala Tyr Lys Lys Tyr Phe Asp Thr Lys Gly Asp Gly Lys Gly Gly Ser

25 30 35

Leu Phe His Tyr Met Lys Asp Gly Ser Ala Tyr Ile Ala Ser Thr Thr

40 45 50

Asp Asp Asn Leu Gly Asn Gly Tyr Tyr Ser Val Lys Thr Glu Gly Met

55 60 65

Ser Tyr Gly Met Met Ile Thr Leu Gln Met Asn Asp Glu Tyr Lys Phe

70 75 80

Gln Lys Leu Trp Asp Phe Val Arg Lys Tyr Met Arg His Ser Asp Arg

85 90 95 100

Asn Asp Ser Leu Tyr Gly Tyr His Ser Trp His Met Lys Thr Asn Gly

105 110 115

Ser Asp Val Gln Thr Ile Asp Gln Asn Val Ala Ser Asp Gly Glu Val

120 125 130

Trp Phe Ala Ala Ala Leu Met Met Ala Ser Gly Arg Trp Gly Asp Lys

135 140 145

Lys Tyr Pro Tyr Asp Tyr Lys Glu Arg Ala Gln Asp Met Leu Asp Ala

150 155 160

Leu Ala Gly Asp Gly Glu Tyr Ala Asn Thr Gly Lys Glu Ser Arg Val

165 170 175 180

Phe Ile Lys Asn Ser Lys Asp Gln Arg Tyr Ala Met Val Arg Phe Gly

185 190 195

Pro Tyr Val Asn Trp Thr Asp Pro Ser Tyr His Val Pro Ala Phe Phe

200 205 210

Glu Leu Phe Ala Lys Ser Ala Arg Ser Ser Gln Gln Tyr Phe Trp Lys

215 220 225

Asp Ala Ala Asn Lys Ser Arg Thr Tyr Leu Ser Glu Thr Thr Phe Lys

230 235 240

Ser Val Leu Asn Asn Gly Ser Thr Val Thr Asn Ala Ala Thr Gly Leu

245 250 255 260

Phe Pro Asp Glu Ala Gly Phe Asp Gly Val Ser Asp Ala Ala His Ser

265 270 275

Ser Thr Glu Thr Asp Arg Asn Phe Ser Tyr Asp Ala Trp Arg Thr Val

280 285 290

Ser His Ile Ala Met Asp His Thr Leu Trp Ser Ser Ala Asp Asn Ala

295 300 305

Tyr Arg Ala Ser Glu Gln Lys Ala Val Asn Lys Phe Leu Thr Phe Met

310 315 320

Lys Arg Glu Asn Tyr Gly Arg Thr Ala His Glu Tyr Thr Leu Asn Gly

325 330 335 340

Thr Ala Val Lys Lys Gly Ser Pro Val Gly Leu Ile Ala Ala Asn Ala

345 350 355

Gly Gly Ala Thr Ala Ala Ser Asp Ala Ser Leu Arg Thr Gly Phe Ala

360 365 370

Asn Ala Phe Asn Ser Thr Tyr Ile Pro Glu Asp Tyr Tyr Gly Ser Cys

375 380 385

Leu Tyr Met Leu Asn Ser Leu Val Ala Asn Gly Lys Phe Ala Met Tyr

390 395 400

Leu Pro

405

<210> 8

<211> 406

<212> PRT

<213> 地衣芽孢杆菌

<400> 8

Ala Val His Ser Lys Thr Pro Asp Ile Leu Gly Thr Thr Gly Lys Asn

1 5 10 15

Asn Leu Asn Gln Ala Tyr Lys Lys Tyr Phe Asp Thr Lys Gly Asp Gly

20 25 30

Lys Gly Gly Ser Leu Phe His Tyr Met Lys Asp Gly Ser Ala Tyr Ile

35 40 45

Ala Ser Thr Thr Asp Asp Asn Leu Gly Asn Gly Tyr Tyr Ser Val Lys

50 55 60

Thr Glu Gly Met Ser Tyr Gly Met Met Ile Thr Leu Gln Met Asn Asp

65 70 75 80

Glu Tyr Lys Phe Gln Lys Leu Trp Asp Phe Val Arg Lys Tyr Met Arg

85 90 95

His Ser Asp Arg Asn Asp Ser Leu Tyr Gly Tyr His Ser Trp His Met

100 105 110

Lys Thr Asn Gly Ser Asp Val Gln Thr Ile Asp Gln Asn Val Ala Ser

115 120 125

Asp Gly Glu Val Trp Phe Ala Ala Ala Leu Met Met Ala Ser Gly Arg

130 135 140

Trp Gly Asp Lys Lys Tyr Pro Tyr Asp Tyr Lys Glu Arg Ala Gln Asp

145 150 155 160

Met Leu Asp Ala Leu Ala Gly Asp Gly Glu Tyr Ala Asn Thr Gly Lys

165 170 175

Glu Ser Arg Val Phe Ile Lys Asn Ser Lys Asp Gln Arg Tyr Ala Met

180 185 190

Val Arg Phe Gly Pro Tyr Val Asn Trp Thr Asp Pro Ser Tyr His Val

195 200 205

Pro Ala Phe Phe Glu Leu Phe Ala Lys Ser Ala Arg Ser Ser Gln Gln

210 215 220

Tyr Phe Trp Lys Asp Ala Ala Asn Lys Ser Arg Thr Tyr Leu Ser Glu

225 230 235 240

Thr Thr Phe Lys Ser Val Leu Asn Asn Gly Ser Thr Val Thr Asn Ala

245 250 255

Ala Thr Gly Leu Phe Pro Asp Glu Ala Gly Phe Asp Gly Val Ser Asp

260 265 270

Ala Ala His Ser Ser Thr Glu Thr Asp Arg Asn Phe Ser Tyr Asp Ala

275 280 285

Trp Arg Thr Val Ser His Ile Ala Met Asp His Thr Leu Trp Ser Ser

290 295 300

Ala Asp Asn Ala Tyr Arg Ala Ser Glu Gln Lys Ala Val Asn Lys Phe

305 310 315 320

Leu Thr Phe Met Lys Arg Glu Asn Tyr Gly Arg Thr Ala His Glu Tyr

325 330 335

Thr Leu Asn Gly Thr Ala Val Lys Lys Gly Ser Pro Val Gly Leu Ile

340 345 350

Ala Ala Asn Ala Gly Gly Ala Thr Ala Ala Ser Asp Ala Ser Leu Arg

355 360 365

Thr Gly Phe Ala Asn Ala Phe Asn Ser Thr Tyr Ile Pro Glu Asp Tyr

370 375 380

Tyr Gly Ser Cys Leu Tyr Met Leu Asn Ser Leu Val Ala Asn Gly Lys

385 390 395 400

Phe Ala Met Tyr Leu Pro

405

<210> 9

<211> 429

<212> PRT

<213> 戴氏菌属物种-62206

<220>

<221> 信号

<222> (1)..(21)

<220>

<221> 成熟肽

<222> (22)..(429)

<400> 9

Met Arg Lys Ser Ala Pro Ile Phe Cys Leu Leu Leu Leu Ala Thr Ser

-20 -15 -10

Leu Gly Ser Leu Ala Gln Asp Ser Pro Glu Gln Asp Ala Arg Ala Val

-5 -1 1 5 10

Gly Ala Val Ala Thr Gly His Tyr Pro Asp Leu Phe Ala Glu Ala Gly

15 20 25

His Thr Arg Ser Asp Val Asp Lys Lys Ile Gln Ala Ala Phe Gln Gln

30 35 40

Leu Phe His Gly Asp Pro Ala Thr Gln Ala Val Tyr His Glu Ala Gly

45 50 55

Ser Asn Ala Asp Gly Pro Leu Ala Tyr Ile His Asp Val Asn Asn Asp

60 65 70 75

Asp Val Arg Ser Glu Gly Ile Ser Tyr Gly Met Met Ile Ala Val Gln

80 85 90

Leu Asp Arg Lys Arg Glu Phe Asp Ala Leu Trp Asn Trp Ala Met Thr

95 100 105

His Met Tyr Gln Arg Asp Pro Ser His Pro Ser Tyr Gly Tyr Phe Ala

110 115 120

Trp Ser Val Arg Thr Asp Gly Met Val Asn Asp Pro Met Pro Ala Pro

125 130 135

Asp Gly Glu Glu Tyr Leu Ile Thr Ala Leu Tyr Phe Ala Ala Ala Arg

140 145 150 155

Trp Gly Asn Gly His Asp Leu Tyr Asp Tyr Arg Ala Gln Ala Asp Arg

160 165 170

Leu Leu Arg Asn Val Leu His Arg Glu Ala Ile Thr Gly Gln Thr Ile

175 180 185

His Gly Gln Met Thr Ala Leu Ser Leu Phe Asp Pro Lys Thr Lys Met

190 195 200

Val Arg Phe Thr Pro Asp Leu Ala Asn Ala Ala His Thr Asp Ala Ser

205 210 215

Tyr His Leu Pro Ala Phe Tyr Glu Val Trp Ala Arg Val Gly Pro Gln

220 225 230 235

Ser Asp Arg Val Phe Trp His Gln Ala Ala Gln Val Ser Arg Asp Tyr

240 245 250

Leu Ala Thr Thr Ala His Pro Lys Thr Ala Leu Thr Pro Asp Tyr Gly

255 260 265

Asn Val Asp Gly Thr Pro Trp Ala Ala Pro Trp Arg Pro Asp Ser Ala

270 275 280

Asp Phe Arg Tyr Asp Ala Trp Arg Ser Ala Met Asn Trp Ser Val Asp

285 290 295

Gly Ser Trp Trp Ala Gln Asp His Arg Glu Val Glu Met Ser Asn Arg

300 305 310 315

Leu Gln Ala Phe Phe Asp Ala Gln Gly Met Asp Ala Tyr Gln Ser Leu

320 325 330

Tyr Lys Leu Asp Gly Thr Leu Leu Gly Gly Gly His Val Thr Gly Leu

335 340 345

Ile Ala Thr Asn Ala Val Ala Ser Leu Thr Ala Thr Asp Pro Arg Arg

350 355 360

Leu Ala Phe Val Gln Thr Leu Trp Glu Gln Pro Val Pro Ser Gly Pro

365 370 375

Gln Arg Tyr Tyr Asn Gly Met Leu Tyr Leu Met Ala Leu Leu His Cys

380 385 390 395

Ser Gly Asp Phe Arg Ala Trp Leu Pro His Pro Ser Ala

400 405

<210> 10

<211> 408

<212> PRT

<213> 戴氏菌属物种-62206

<400> 10

Gln Asp Ser Pro Glu Gln Asp Ala Arg Ala Val Gly Ala Val Ala Thr

1 5 10 15

Gly His Tyr Pro Asp Leu Phe Ala Glu Ala Gly His Thr Arg Ser Asp

20 25 30

Val Asp Lys Lys Ile Gln Ala Ala Phe Gln Gln Leu Phe His Gly Asp

35 40 45

Pro Ala Thr Gln Ala Val Tyr His Glu Ala Gly Ser Asn Ala Asp Gly

50 55 60

Pro Leu Ala Tyr Ile His Asp Val Asn Asn Asp Asp Val Arg Ser Glu

65 70 75 80

Gly Ile Ser Tyr Gly Met Met Ile Ala Val Gln Leu Asp Arg Lys Arg

85 90 95

Glu Phe Asp Ala Leu Trp Asn Trp Ala Met Thr His Met Tyr Gln Arg

100 105 110

Asp Pro Ser His Pro Ser Tyr Gly Tyr Phe Ala Trp Ser Val Arg Thr

115 120 125

Asp Gly Met Val Asn Asp Pro Met Pro Ala Pro Asp Gly Glu Glu Tyr

130 135 140

Leu Ile Thr Ala Leu Tyr Phe Ala Ala Ala Arg Trp Gly Asn Gly His

145 150 155 160

Asp Leu Tyr Asp Tyr Arg Ala Gln Ala Asp Arg Leu Leu Arg Asn Val

165 170 175

Leu His Arg Glu Ala Ile Thr Gly Gln Thr Ile His Gly Gln Met Thr

180 185 190

Ala Leu Ser Leu Phe Asp Pro Lys Thr Lys Met Val Arg Phe Thr Pro

195 200 205

Asp Leu Ala Asn Ala Ala His Thr Asp Ala Ser Tyr His Leu Pro Ala

210 215 220

Phe Tyr Glu Val Trp Ala Arg Val Gly Pro Gln Ser Asp Arg Val Phe

225 230 235 240

Trp His Gln Ala Ala Gln Val Ser Arg Asp Tyr Leu Ala Thr Thr Ala

245 250 255

His Pro Lys Thr Ala Leu Thr Pro Asp Tyr Gly Asn Val Asp Gly Thr

260 265 270

Pro Trp Ala Ala Pro Trp Arg Pro Asp Ser Ala Asp Phe Arg Tyr Asp

275 280 285

Ala Trp Arg Ser Ala Met Asn Trp Ser Val Asp Gly Ser Trp Trp Ala

290 295 300

Gln Asp His Arg Glu Val Glu Met Ser Asn Arg Leu Gln Ala Phe Phe

305 310 315 320

Asp Ala Gln Gly Met Asp Ala Tyr Gln Ser Leu Tyr Lys Leu Asp Gly

325 330 335

Thr Leu Leu Gly Gly Gly His Val Thr Gly Leu Ile Ala Thr Asn Ala

340 345 350

Val Ala Ser Leu Thr Ala Thr Asp Pro Arg Arg Leu Ala Phe Val Gln

355 360 365

Thr Leu Trp Glu Gln Pro Val Pro Ser Gly Pro Gln Arg Tyr Tyr Asn

370 375 380

Gly Met Leu Tyr Leu Met Ala Leu Leu His Cys Ser Gly Asp Phe Arg

385 390 395 400

Ala Trp Leu Pro His Pro Ser Ala

405

<210> 11

<211> 405

<212> PRT

<213> 雷塞氏篮状菌

<400> 11

Met Val His Leu Ser Ser Leu Ala Leu Ala Leu Ala Ala Gly Ser Gln

1 5 10 15

Leu Ala Gln Ala Ala Gly Leu Asn Thr Ala Ala Lys Ala Ile Gly Lys

20 25 30

Leu Tyr Phe Gly Thr Ala Thr Asp Asn Pro Glu Leu Ser Asp Ser Thr

35 40 45

Tyr Met Gln Glu Thr Asp Asn Thr Asp Asp Phe Gly Gln Leu Thr Pro

50 55 60

Ala Asn Ser Met Lys Trp Asp Ala Thr Glu Pro Ser Gln Asn Thr Phe

65 70 75 80

Thr Phe Thr Asn Gly Asp Gln Ile Ala Asn Leu Ala Lys Ser Asn Gly

85 90 95

Gln Met Leu Arg Cys His Asn Leu Val Trp Tyr Asn Gln Leu Pro Ser

100 105 110

Trp Val Thr Ser Gly Ser Trp Thr Asn Ala Thr Leu Leu Ala Ala Met

115 120 125

Lys Asn His Ile Thr Asn Val Val Thr His Tyr Lys Gly Gln Cys Tyr

130 135 140

Ala Trp Asp Val Val Asn Glu Ala Leu Asn Asp Asp Gly Thr Tyr Arg

145 150 155 160

Ser Asn Val Phe Tyr Gln Tyr Ile Gly Glu Ala Tyr Ile Pro Ile Ala

165 170 175

Phe Ala Thr Ala Ala Ala Ala Asp Pro Asn Ala Lys Leu Tyr Tyr Asn

180 185 190

Asp Tyr Asn Ile Glu Tyr Pro Gly Ala Lys Ala Thr Ala Ala Gln Asn

195 200 205

Ile Val Lys Met Val Lys Ala Tyr Gly Ala Lys Ile Asp Gly Val Gly

210 215 220

Leu Gln Ser His Phe Ile Val Gly Ser Thr Pro Ser Gln Ser Ser Gln

225 230 235 240

Gln Ser Asn Met Ala Ala Phe Thr Ala Leu Gly Val Glu Val Ala Ile

245 250 255

Thr Glu Leu Asp Ile Arg Met Thr Leu Pro Ser Thr Ser Ala Leu Leu

260 265 270

Ala Gln Gln Ser Thr Asp Tyr Gln Ser Thr Val Ser Ala Cys Val Asn

275 280 285

Thr Pro Lys Cys Ile Gly Ile Thr Leu Trp Asp Trp Thr Asp Lys Tyr

290 295 300

Ser Trp Val Pro Asn Thr Phe Ser Gly Gln Gly Asp Ala Cys Pro Trp

305 310 315 320

Asp Ser Asn Tyr Gln Lys Lys Pro Ala Tyr Tyr Gly Ile Leu Thr Ala

325 330 335

Leu Gly Gly Ser Ala Ser Thr Ser Thr Thr Thr Thr Leu Val Thr Ser

340 345 350

Thr Arg Thr Ser Thr Thr Thr Ser Thr Ser Ala Thr Ser Thr Ser Thr

355 360 365

Gly Val Ala Gln His Trp Gly Gln Cys Gly Gly Ile Gly Trp Thr Gly

370 375 380

Pro Thr Thr Cys Ala Ser Pro Tyr Thr Cys Gln Glu Leu Asn Pro Tyr

385 390 395 400

Tyr Tyr Gln Cys Leu

405

<210> 12

<211> 406

<212> PRT

<213> 棘孢曲霉

<400> 12

Met Val Gly Leu Leu Ser Ile Thr Ala Ala Leu Ala Ala Thr Val Leu

1 5 10 15

Pro Asn Ile Val Ser Ala Val Gly Leu Asp Gln Ala Ala Val Ala Lys

20 25 30

Gly Leu Gln Tyr Phe Gly Thr Ala Thr Asp Asn Pro Glu Leu Thr Asp

35 40 45

Ile Pro Tyr Val Thr Gln Leu Asn Asn Thr Ala Asp Phe Gly Gln Ile

50 55 60

Thr Pro Gly Asn Ser Met Lys Trp Asp Ala Thr Glu Pro Ser Gln Gly

65 70 75 80

Thr Phe Thr Phe Thr Lys Gly Asp Val Ile Ala Asp Leu Ala Glu Gly

85 90 95

Asn Gly Gln Tyr Leu Arg Cys His Thr Leu Val Trp Tyr Asn Gln Leu

100 105 110

Pro Ser Trp Val Thr Ser Gly Thr Trp Thr Asn Ala Thr Leu Thr Ala

115 120 125

Ala Leu Lys Asn His Ile Thr Asn Val Val Ser His Tyr Lys Gly Lys

130 135 140

Cys Leu His Trp Asp Val Val Asn Glu Ala Leu Asn Asp Asp Gly Thr

145 150 155 160

Tyr Arg Thr Asn Ile Phe Tyr Thr Thr Ile Gly Glu Ala Tyr Ile Pro

165 170 175

Ile Ala Phe Ala Ala Ala Ala Ala Ala Asp Pro Asp Ala Lys Leu Phe

180 185 190

Tyr Asn Asp Tyr Asn Leu Glu Tyr Gly Gly Ala Lys Ala Ala Ser Ala

195 200 205

Arg Ala Ile Val Gln Leu Val Lys Asn Ala Gly Ala Lys Ile Asp Gly

210 215 220

Val Gly Leu Gln Ala His Phe Ser Val Gly Thr Val Pro Ser Thr Ser

225 230 235 240

Ser Leu Val Ser Val Leu Gln Ser Phe Thr Ala Leu Gly Val Glu Val

245 250 255

Ala Tyr Thr Glu Ala Asp Val Arg Ile Leu Leu Pro Thr Thr Ala Thr

260 265 270

Thr Leu Ala Gln Gln Ser Ser Asp Phe Gln Ala Leu Val Gln Ser Cys

275 280 285

Val Gln Thr Thr Gly Cys Val Gly Phe Thr Ile Trp Asp Trp Thr Asp

290 295 300

Lys Tyr Ser Trp Val Pro Ser Thr Phe Ser Gly Tyr Gly Ala Ala Leu

305 310 315 320

Pro Trp Asp Glu Asn Leu Val Lys Lys Pro Ala Tyr Asn Gly Leu Leu

325 330 335

Ala Gly Met Gly Val Thr Val Thr Thr Thr Thr Thr Thr Thr Thr Ala

340 345 350

Thr Ala Thr Gly Lys Thr Thr Thr Thr Thr Thr Gly Ala Thr Ser Thr

355 360 365

Gly Thr Thr Ala Ala His Trp Gly Gln Cys Gly Gly Leu Asn Trp Ser

370 375 380

Gly Pro Thr Ala Cys Ala Thr Gly Tyr Thr Cys Thr Tyr Val Asn Asp

385 390 395 400

Tyr Tyr Ser Gln Cys Leu

405

<210> 13

<211> 203

<212> PRT

<213> 嗜热网团菌

<400> 13

Gln Thr Ser Ile Thr Leu Thr Ser Asn Ala Ser Gly Thr Phe Asp Gly

1 5 10 15

Tyr Tyr Tyr Glu Leu Trp Lys Asp Thr Gly Asn Thr Thr Met Thr Val

20 25 30

Tyr Thr Gln Gly Arg Phe Ser Cys Gln Trp Ser Asn Ile Asn Asn Ala

35 40 45

Leu Phe Arg Thr Gly Lys Lys Tyr Asn Gln Asn Trp Gln Ser Leu Gly

50 55 60

Thr Ile Arg Ile Thr Tyr Ser Ala Thr Tyr Asn Pro Asn Gly Asn Ser

65 70 75 80

Tyr Leu Cys Ile Tyr Gly Trp Ser Thr Asn Pro Leu Val Glu Phe Tyr

85 90 95

Ile Val Glu Ser Trp Gly Asn Trp Arg Pro Pro Gly Ala Thr Ser Leu

100 105 110

Gly Gln Val Thr Ile Asp Gly Gly Thr Tyr Asp Ile Tyr Arg Thr Thr

115 120 125

Arg Val Asn Gln Pro Ser Ile Val Gly Thr Ala Thr Phe Asp Gln Tyr

130 135 140

Trp Ser Val Arg Thr Ser Lys Arg Thr Ser Gly Thr Val Thr Val Thr

145 150 155 160

Asp His Phe Arg Ala Trp Ala Asn Arg Gly Leu Asn Leu Gly Thr Ile

165 170 175

Asp Gln Ile Thr Leu Cys Val Glu Gly Tyr Gln Ser Ser Gly Ser Ala

180 185 190

Asn Ile Thr Gln Asn Thr Phe Ser Gln Gly Ser

195 200

<210> 14

<211> 248

<212> PRT

<213> 芽孢杆菌属物种

<400> 14

Met Arg Gln Lys Lys Leu Thr Phe Ile Leu Ala Phe Leu Val Cys Phe

1 5 10 15

Ala Leu Thr Leu Pro Ala Glu Ile Ile Gln Ala Gln Ile Val Thr Asp

20 25 30

Asn Ser Ile Gly Asn His Asp Gly Tyr Asp Tyr Glu Phe Trp Lys Asp

35 40 45

Ser Gly Gly Ser Gly Thr Met Ile Leu Asn His Gly Gly Thr Phe Ser

50 55 60

Ala Gln Trp Asn Asn Val Asn Asn Ile Leu Phe Arg Lys Gly Lys Lys

65 70 75 80

Phe Asn Glu Thr Gln Thr His Gln Gln Val Gly Asn Met Ser Ile Asn

85 90 95

Tyr Gly Ala Asn Phe Gln Pro Asn Gly Asn Ala Tyr Leu Cys Val Tyr

100 105 110

Gly Trp Thr Val Asp Pro Leu Val Glu Tyr Tyr Ile Val Asp Ser Trp

115 120 125

Gly Asn Trp Arg Pro Pro Gly Ala Thr Pro Lys Gly Thr Ile Thr Val

130 135 140

Asp Gly Gly Thr Tyr Asp Ile Tyr Glu Thr Leu Arg Val Asn Gln Pro

145 150 155 160

Ser Ile Lys Gly Ile Ala Thr Phe Lys Gln Tyr Trp Ser Val Arg Arg

165 170 175

Ser Lys Arg Thr Ser Gly Thr Ile Ser Val Ser Asn His Phe Arg Ala

180 185 190

Trp Glu Asn Leu Gly Met Asn Met Gly Lys Met Tyr Glu Val Ala Leu

195 200 205

Thr Val Glu Gly Tyr Gln Ser Ser Gly Ser Ala Asn Val Tyr Ser Asn

210 215 220

Thr Leu Arg Ile Asn Gly Asn Pro Leu Ser Thr Ile Ser Asn Asp Lys

225 230 235 240

Ser Ile Thr Leu Asp Lys Asn Asn

245

<210> 15

<211> 5

<212> PRT

<213> 基序

<220>

<221> 尚未归类的特征

<222> (1)..(1)

<223> X是位置1中的T或S。

<220>

<221> 尚未归类的特征

<222> (3)..(3)

<223> X是位置3中的P或A。

<400> 15

Xaa Asp Xaa Ser Tyr

1 5

<210> 16

<211> 7

<212> PRT

<213> 基序

<220>

<221> 尚未归类的特征

<222> (3)..(3)

<223> X是位置3中的F、Y、V、I、L或M。

<220>

<221> 尚未归类的特征

<222> (4)..(4)

<223> X是位置4中的G或S。

<400> 16

Met Asn Xaa Xaa Met Asp Tyr

1 5

<210> 17

<211> 5

<212> PRT

<213> 基序

<220>

<221> 尚未归类的特征

<222> (2)..(2)

<223> X是位置2中的I或L。

<400> 17

Ala Xaa Trp Asn Trp

1 5

<210> 18

<211> 6

<212> PRT

<213> 基序

<220>

<221> 尚未归类的特征

<222> (2)..(2)

<223> X是位置2中的I或F。

<400> 18

Trp Xaa Ala Ala Ala Leu

1 5

Claims (15)

1.一种用于处理纸浆的方法，该方法包括使该纸浆与GH8木聚糖酶接触。

2.如权利要求1所述的方法，其中该GH8木聚糖酶是内切-β-1,4-木聚糖酶。

3.如权利要求1或2所述的方法，其中该GH8木聚糖酶是DPSY进化枝的成员；优选地GH8木聚糖酶是如本文所定义的以下进化枝中的至少一种的成员：SMDY进化枝、ALWNW进化枝、和WFAAAL进化枝。

4.如权利要求1至3中任一项所述的方法，其中该GH8木聚糖酶选自由以下组成的组：

(a)一种多肽，该多肽与SEQ ID NO:1至SEQ ID NO:10中任一项的成熟多肽具有至少60％的序列同一性；优选地，该多肽与SEQ ID NO:1至SEQ ID NO:10中任一项的成熟多肽具有至少65％，更优选至少70％，更优选至少75％，更优选至少80％，更优选至少85％，甚至更优选至少90％，最优选至少95％，并且甚至最优选至少96％、至少97％、至少98％、至少99％、或100％的序列同一性；和

(b)一种源自(a)的多肽，其通过取代、缺失和/或插入一个或多个(几个)氨基酸；以及

(c)该(a)或(b)的多肽的片段，该片段具有GH8木聚糖酶活性。

5.如权利要求1至4中任一项所述的方法，其中该纸浆是木纸浆。

6.如权利要求1至5中任一项所述的方法，该方法包括选自由以下组成的组的一系列处理：

a)X-B；

b)B-X；

c)XB；

其中，

X是GH8木聚糖酶处理阶段，

B是漂白阶段，优选二氧化氯漂白阶段，并且

XB是GH8木聚糖酶处理连同漂白阶段。

7.如权利要求1至6中任一项所述的方法，该方法进一步包括使该纸浆与一种或多种另外的酶接触，该一种或多种另外的酶具有蛋白酶、脂肪酶、木聚糖酶、角质酶、氧化还原酶、纤维素酶、内切葡聚糖酶、淀粉酶、甘露聚糖酶、甾醇酯酶、多糖单加氧酶(LPMO)和/或胆固醇酯酶活性，优选纤维素酶。

8.如权利要求1至7中任一项所述的方法，其中来自从该方法中获得的该纸浆的滤液中的木糖单糖平均聚合度是3.5-8，优选4-7。

9.如权利要求1至8中任一项所述的方法，其中与用GH10木聚糖酶处理或GH11木聚糖酶处理替代该GH8木聚糖酶处理的方法相比，该方法在关于该纸浆强度和/或亮度改进和/或脱水的正面影响方面改善了收益/损害平衡，同时将对纸浆产量和/或所得滤液/污水的COD的负面影响最小化。

10.一种通过如权利要求1至9中任一项所述的方法制备的纸浆。

11.一种纸浆组合物，该纸浆组合物包含纸浆和GH8木聚糖酶。

12.如权利要求10或11所述的纸浆组合物，其中该GH8木聚糖酶是内切-β-1,4-木聚糖酶；或其中该GH8木聚糖酶是DPSY进化枝的成员；优选地GH8木聚糖酶是如本文所定义的以下进化枝中的至少一种的成员：SMDY进化枝、ALWNW进化枝、和WFAAAL进化枝。

13.如权利要求10至12中任一项所述的纸浆组合物，其中该GH8木聚糖酶选自由以下组成的组：

(a)一种多肽，该多肽与SEQ ID NO:1至SEQ ID NO:10中任一项的成熟多肽具有至少60％的序列同一性；优选地，该多肽与SEQ ID NO:1至SEQ ID NO:10中任一项的成熟多肽具有至少65％，更优选至少70％，更优选至少75％，更优选至少80％，更优选至少85％，甚至更优选至少90％，最优选至少95％，并且甚至最优选至少96％、至少97％、至少98％、至少99％、或100％的序列同一性；和

(b)一种源自(a)的多肽，其通过取代、缺失和/或插入一个或多个(几个)氨基酸；以及

(c)该(a)或(b)的多肽的片段，该片段具有GH8木聚糖酶活性。

14.GH8木聚糖酶用于处理纸浆的用途。

15.如权利要求14所述的用途，其中GH8木聚糖酶改善了该纸浆的亮度和/或强度和/或脱水。