CN114395629A - 一种ythdf1抑制剂和检测试剂及其应用 - Google Patents

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Abstract

本申请公开了一种YTHDF1抑制剂和检测试剂及其应用。YTHDF1抑制剂包括下调前列腺癌中YTHDF1表达的干扰RNA，干扰RNA的序列包括如SEQ ID NO.1或SEQ ID NO.2所示的任一序列，检测试剂包括特异性扩增YTHDF1基因的引物，引物的序列如SEQ ID NO.4和SEQ ID NO.5所示。将上述YTHDF1抑制剂和YTHDF1检测试剂应用于制备前列腺癌治疗药物和前列腺癌辅助诊断试剂，由于YTHDF1在前列腺癌中表达显著升高，这使得YTHDF1可能成为前列腺癌药物的潜在靶点，同时可以应用于独立预测患者的生存结局。

Description

一种YTHDF1抑制剂和检测试剂及其应用
技术领域
本申请涉及生物医药技术领域，具体涉及一种YTHDF1抑制剂和检测试剂及其应用。
背景技术
在世界范围内，每年有近130万的患者被诊断为前列腺癌(Prostate Cancer，PC)，作为最为常见的男性恶性肿瘤之一(位列第二，占13.5％)，其年死亡人数也居于前列(位列第五，占6.7％)。与发达国家相比较，尽管我国的前列腺癌发病率较低，但随着近年来社会人口老龄化，我国前列腺癌发病率和死亡率呈逐年升高趋势(发病和死亡增长率均位列男性恶性肿瘤第一位)，已严重威胁着我国中老年男性的健康。
远处转移(主要为骨转移)是前列腺癌最常见最严重的并发症之一，大约30％-50％的患者在初诊时即有骨转移发生，而晚期骨转移率＞80％。前列腺癌骨转移导致的骨代谢紊乱，可引发骨相关事件，如顽固性骨痛、病理性骨折、脊髓压迫、高钙血症和骨肿瘤相关的外科手术干预及外放射治疗等，不仅降低了患者总生存期和生活质量，还极大地加重了患者的治疗负担。前列腺癌细胞侵袭转移能力强的生物学特性已成为提高患者远期生存率的主要瓶颈。因此，阐明前列腺癌侵袭转移的分子机制，寻找侵袭转移相关分子标志及有效治疗靶点，有助于前列腺癌侵袭转移的预判及靶向用药，提高前列腺癌患者的远期生存率。
m6A甲基化修饰是RNA生物学调控机制研究的一个新兴领域，也是目前表观遗传学研究的热点。m6A甲基化修饰主要发生在RNA特定序列中的腺嘌呤(A)碱基上，在时间和空间上受m6A甲基转移酶、m6A去甲基酶和m6A阅读蛋白的共同调控。通过对目标RNA的m6A甲基化修饰，可在转录后水平上调控目标RNA的稳定性、定位、运输、剪切和翻译等过程，从而行使相应的生物学功能。已有大量研究报道，m6A修饰紊乱参与了肿瘤的各种生物学功能，包括肿瘤发生，转移，细胞命运决定，化疗药物耐药，放疗敏感性等。
YTH结构域蛋白家族作为m6A修饰发现最早、最主要的阅读蛋白，主要包括YTHDF和YTHDC两个亚型，该蛋白家族均有保守的m6A结合结构域。YTHDF主要包括YTHDF1、YTHDF2、YTHDF3，主要定位在细胞质。不同的阅读蛋白选择性地识别m6A修饰的RNA，在调节靶基因表达中发挥重要作用。YTHDF1通过与终止密码子周围的m6A位点结合，增加mRNA转录复合体的传递，联合翻译启动机制，从而促进翻译起始和蛋白质合成。
发明内容
本申请提供一种YTHDF1抑制剂和检测试剂及其应用，可以抑制前列腺癌的进展并评估前列腺癌的预后。
本申请提供一种YTHDF1抑制剂，YTHDF1抑制剂包括下调前列腺癌中YTHDF1(YT521-B homology domain family protein 1)表达的干扰RNA。
可选的，在本申请的一些实施例中，干扰RNA为siRNA，干扰RNA的序列包括如SEQID NO.1或SEQ ID NO.2所示的任一序列。优选的，干扰RNA的序列包括如SEQ ID NO.1和SEQID NO.2所示的序列，两个siRNA的存在可以更好的防止脱靶效应。
可选的，在本申请的一些实施例中，YTHDF1基因序列如SEQ ID NO.3所示。
相应的，本申请还提供一种上述的YTHDF1抑制剂在制备前列腺癌治疗药物中的应用。YTHDF1在前列腺癌中表达显著升高，可以作为前列腺癌的药物治疗靶标。
可选的，在本申请的一些实施例中，前列腺癌治疗药物还可以包括载体，载体可以是病毒载体或非病毒载体。病毒载体包括慢病毒载体、假病毒载体、腺病毒载体、腺相关病毒载体、单纯疱疹病毒载体或巨细胞病毒载体；非病毒载体包括能与基因编辑片段形成复合物并促进细胞内基因的人工合成或天然化合物，载体材料可选自例如脂类、聚合物、蛋白质和多肽，在一些实施例中，可以采用外泌体运载干扰RNA序列或含有干扰RNA序列的重组基因片段。
可选的，在本申请的一些实施例中，干扰RNA序列在制备前列腺癌药物的应用中，还可以采用包括针注射(例如瘤内注射、动脉内注射、静脉内注射、肌内注射、皮下注射等)，基因枪，电穿孔，超声波处理等形式进行基因传递。
可选的，在本申请的一些实施例中，前列腺癌治疗药物包括抑制前列腺癌细胞增殖的药物、抑制前列腺癌细胞迁移的药物或抑制前列腺癌侵袭的药物。
此外，本申请还提供一种YTHDF1的检测试剂，检测试剂包括特异性扩增YTHDF1基因的引物，引物的序列如SEQ ID NO.4和SEQ ID NO.5所示。
可选的，在本申请的一些实施例中，YTHDF1基因序列如SEQ ID NO.3所示。
可选的，在本申请的一些实施例中，检测试剂还包括检测试剂还包括特异性扩增管家基因GADPH的管家基因引物。
可选的，在本申请的一些实施例中，管家基因引物的序列如SEQ ID NO.6和SEQ IDNO.7所示。
相应的，本申请还提供一种上述的检测试剂在制备前列腺癌辅助诊断试剂中的应用。YTHDF1作为生物标志物。
可选的，在本申请的一些实施例中，利用特异性扩增YTHDF1基因的引物通过实时定量PCR法检测YTHDF1的mRNA的水平。
可选的，在本申请的一些实施例中，前列腺癌辅助诊断试剂还包括实时定量PCR所需的试剂。
可选的，在本申请的一些实施例中，YTHDF1的相对表达量为YTHDF1基因相对于GADPH管家基因的表达量。
针对鉴定或辅助鉴定肿瘤组织时，检测来自待鉴定组织的YTHDF1基因的表达量或相对表达量；待鉴定组织的YTHDF1基因的表达量或相对表达量越高，待鉴定组织候选为肿瘤组织的风险越大；待鉴定组织的YTHDF1基因的表达量或相对表达量越低，待鉴定组织候选为肿瘤组织的风险越小。
本申请具有如下有益效果：
YTHDF1在前列腺癌中表达显著升高，并且在前列腺癌中表达与肿瘤患者T分期(肿瘤的进展程度)，N分期(癌细胞转移到淋巴结的情况)，格里森评分(癌组织分化程度)显著相关。细胞实验表明，过表达YTHDF1可以促进前列腺癌的进展，敲低YTHDF1可以显著抑制前列腺癌的进展。因此，YTHDF1可以作为前列腺癌的药物靶标以及前列腺癌诊断和预后评估中的生物标志物。
附图说明
为了更清楚地说明本申请实施例中的技术方案，下面将对实施例描述中所需要使用的附图作简单地介绍，显而易见地，下面描述中的附图仅仅是本申请的一些实施例，对于本领域技术人员来讲，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据这些附图获得其他的附图。
图1为100例前列腺癌组织和50例癌旁正常组织的YTHDF1免疫组化评分结果；
图2为4例前列腺癌患者的前列腺癌组织及其癌旁组织的YTHDF1免疫组化结果；
图3为50对配对前列腺癌及其癌旁组织的免疫组化评分结果；
图4为TCGA数据库中前列腺癌及癌旁组织的YTHDF1表达量；
图5为TCGA数据库中前列腺癌配对其癌旁组织YTHDF1表达量；
图6为T2分期及T3&4分期前列腺癌组织的YTHDF1免疫组化评分结果；
图7为N0分期及N1分期前列腺癌组织的YTHDF1免疫组化评分结果；
图8为Gleason评分6-7分及8-10分的前列腺癌组织的YTHDF1免疫组化评分结果；
图9为TCGA数据库中T2分期，T3分期及T4分期的前列腺癌组织的YTHDF1表达量；
图10为TCGA数据库中N0分期，及N1分期的前列腺癌组织的YTHDF1表达量；
图11为TCGA数据库中Gleason评分为6分，7分，8分及9&10分的前列腺癌组织的YTHDF1表达量；
图12为TCGA数据库中生存结局为生存及死亡前列腺癌患者的前列腺癌组织的YTHDF1表达量；
图13为前列腺癌中YTHDF1表达量与总生存率的关系。
图14为敲减YTHDF1后，PC-3及DU145中YTHDF1的RNA表达量；
图15为敲减YTHDF1后，PC-3及DU145中YTHDF1的蛋白表达量；
图16为敲减YTHDF1后，CCK8试剂盒测定PC-3细胞生长曲线；
图17为敲减YTHDF1后，CCK8试剂盒测定DU145细胞生长曲线；
图18为敲减YTHDF1后，克隆形成实验测定PC-3及DU145细胞的克隆形成能力，图18A为细胞显微镜下图，图18B为克隆形成率柱状图；
图19为敲减YTHDF1后，划痕愈合实验测定PC-3及DU145细胞的迁移能力，图19A为PC-3细胞迁移能力图，图19B为DU145细胞迁移能力图，图19C为相对伤口率柱状图；
图20为敲减YTHDF1后，transwell小室迁移实验测定PC-3及DU145细胞的迁移能力，图20A为细胞显微镜下图，图20B为迁移率柱状图；
图21为敲减YTHDF1后，transwell小室侵袭实验测定PC-3及DU145细胞的侵袭能力，图21A为细胞显微镜下图，图21B为侵袭率柱状图；
图22为过表达YTHDF1后，PC-3及DU145中YTHDF1的蛋白表达量；
图23为过表达YTHDF1后，CCK8试剂盒测定PC-3及DU145细胞生长曲线，图23A为PC-3细胞生长曲线，图23B为DU145细胞生长曲线；
图24为过表达YTHDF1后，克隆形成实验测定PC-3及DU145细胞的克隆形成能力，图24A为细胞显微镜下图，图24B为克隆形成率柱状图；
图25为过表达YTHDF1后，划痕愈合实验测定PC-3及DU145细胞的迁移能力，图25A为PC-3细胞迁移能力图，图25B为DU145细胞迁移能力图，图25C为相对伤口率柱状图；
图26为过表达YTHDF1后，transwell小室迁移实验测定PC-3及DU145细胞的迁移能力，图26A为细胞显微镜下图，图26B为相对迁移率柱状图；
图27为过表达YTHDF1后，transwell小室侵袭实验测定PC-3及DU145细胞的侵袭能力，图27A为细胞显微镜下图，图27B为相对侵袭率柱状图。
具体实施方式
下面将对本申请实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本申请一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本申请中的实施例，本领域技术人员在没有作出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本申请保护的范围。
本申请提供一种YTHDF1抑制剂和检测试剂及其应用。以下分别进行详细说明。需说明的是，以下实施例的描述顺序不作为对实施例优选顺序的限定。
实验材料：PC-3和DU145细胞，购自中国科学院(中国上海)的国家认证细胞培养库，并通过Short Tandem Repeat(STR)分析进行验证。
本申请人在上海交通大学医学院附属第九人民医院接受前列腺癌根治术患者中收集了总共100例前列腺癌组织组织及其中的50例前列腺癌癌旁组织。
所有纳入研究的患者术前均未接受化疗或者放疗。研究前，患者均签署书面知情同意书，本申请是基于赫尔辛基宣言进行的，获得上海第九人民医院伦理委员会的批准同意。
实施例中用到的实验方法如下：
1、Trizol法RNA抽提
吸尽培养液，PBS洗涤两次，加适量的Trizol。室温放置5分钟，是样本充分裂解，然后吹打吸至1.5ml无酶EP管中。按照Trizol：氯仿＝5：1，加适量氯仿，vortex混匀15秒，室温放置5min。离心(13000rpm 4℃，15min)，然后吸取含有总RNA的上层无色水相至一新的离心管中，每毫升Trizol约可吸取0.5-0.55ml上层液体，注意不要吸到白色物质。按照每毫升最初的Trizol加入0.5ml异丙醇，颠倒数次混匀，试问沉淀10min。离心(13000rpm 4℃，15min)，在管底可见RNA沉淀，弃上清。加入1ml 75％乙醇(DEPC水配置，现配现用)，轻轻颠倒混匀，确保RNA白色沉淀漂浮起来。离心(13000rpm 4℃，5min)，弃上清。再加1ml75％乙醇重复洗涤一遍，弃上清。空离(13000rpm 4℃，5min)，小心吸尽液体。防止通风橱晾干约15min，待乙醇蒸发完全，RNA沉淀变透明。根据沉淀大小加入10-30ul的DEPC水4℃溶解过夜。第二天直接测RNA浓度或-80℃冻存备用，测定样品再260nm和280nm的吸收值确定RNA的质量。OD260/280在1.8-2.0之间视为RNA的纯度很高。
2、逆转录及荧光定量实时PCR(Real-Time PCR)
10ul的去除gDNA反应，冰上配置和加样，体系如下
Figure BDA0003485368680000071
反应条件：42℃，2min，4℃保存。
反转录反应，冰上加mix，体系如下：
Figure BDA0003485368680000072
Figure BDA0003485368680000081
反应条件，37℃，15min，85℃，5min，4℃保存。
Real-Time PCR
引物序列如下：
Figure BDA0003485368680000082
10ulPCR反应体系如下：
Figure BDA0003485368680000083
PCR反应条件：95℃预变性30s，PCR反应：95℃变性5s，60℃退火延伸34s，一共40个循环，反应结束Dissociation Stage。结果采用2-ΔΔCt相对定量及算法。两组数据比较采用Student’s t检验，数据结果均以mean±SD表示，P<0.05为有统计学差异。
3、Western blot
RIPA提取蛋白：提前将离心机预冷至4℃，使用预冷的PBS洗涤细胞2次，然后在没孔中加入适量的RIPA，冰上裂解10min，用细胞刮将细胞从培养皿底刮下，将细胞碎片和裂解液移至1.5ml的EP管中(冰上操作)，超声震荡，将超声波细胞破碎仪的Amp1调整为26％，每管蛋白样品震荡10s，暂停10s，重复三次，每管之间用PBS清洗震荡头并用吸水纸擦干，分别将每管蛋白进行超声破碎，离心(4℃13000rpm，30min)。每个蛋白样品按照5：1的比例加入适量的5×loading buffer。恒温金属浴95℃10min使蛋白变性，于-20℃保存备用。
聚丙烯凝胶电泳(SDS-PAGE)：根据蛋白大小，配置合适浓度的SDS聚丙烯酰胺凝胶。上样，将蛋白样品和预染marker分别上样，根据BCA测定的蛋白浓度，调整上样量统一为20ug，空白空用1×loading补齐。
电泳：刚开始先80V恒压电泳，待溴酚蓝指示剂到达分离胶界面时(约30min)，将电压调整为100V恒压电泳分离约60-120min，根据目的蛋白分子量大小判断分离时间。
转膜：将剪好大小的PVDF膜用甲醇浸泡15s以上，然后浸泡在预冷的转膜液中，转墨夹的黑色一面在最下面一层，上面一次放上海绵，2层滤纸、胶、PVDF膜，2层海绵滤纸，避免在任何两层之间出现气泡，转膜条件为恒流235mA，根据蛋白大小不同适当调整时间，一般<70KDA 1h,70-150KDA转2h。
封闭：将PVDF膜放入含有5％BSA的封闭液中，在室温条件下在摇床上低俗摇动封闭1-2h。
一抗孵育：按照说明书用一抗稀释液稀释抗体，分别加至剪好的膜中，4℃低俗平摇孵育过夜(约16h)，然后TBST洗膜10min三次。
二抗孵育：按照说明书稀释二抗，试问低速平摇2h，然后TBST洗膜10min三次。
ECL化学发光：化学发光显影液solution A与B等量混合，滴加适量显影液于膜的正面，铺均匀后置于超敏化学发光成像系统中曝光。
4、CCK-8法测细胞生长曲线
通过CCK-8试剂盒测量细胞增殖速度。对于CCK-8测定，将细胞以每孔3000个细胞的密度接种到96孔板中，并在0小时、24小时、48小时、72小时在10％CCK-8培养基中孵育1小时。用分光光度计在450nm OD值处检测吸光度。
5、克隆形成实验
将处理过的细胞以每孔200个细胞的密度在6孔板中37℃条件下培养2周。每3天更换一半培养基。然后用4％PFA固定细胞，随后用结晶紫染色检查。
6、transwell小室实验
对于transwell迁移测定，总共计数20000个细胞并悬浮于200μl不含FBS的MEM培养基中，并接种在transwell的上层小室。下室装有含20％FBS的MEM培养基。对于transwell侵袭试验，将总共30000个处理过的细胞悬浮在200μl不含FBS的MEM培养基中，并接种在涂有Matrigel(BD Biosciences，USA)的transwell上层小室。将细胞孵育18小时用于迁移测定或24小时用于侵袭测定。然后，将下表面的细胞固定并用结晶紫染色液染色。用显微镜捕获图像，并使用ImageJ计算细胞数。
下面结合具体实施例进行说明。
实施例一、前列腺癌组织中YTHDF1表达量升高
本实施例检测了前列腺癌组织中YTHDF1的表达量，YTHDF1在前列腺癌组织中表达量显著升高。
对100例前列腺癌组织和50例癌旁正常组织的YTHDF1进行免疫组化评分，结果如图1所示，与前列腺癌癌旁组织相比，前列腺癌组织YTHDF1蛋白表达量显著升高；4例前列腺癌患者的前列腺癌组织及其癌旁组织的YTHDF1免疫组化结果如图2所示，通过前列腺癌与其配对癌旁组织比较，YTHDF1蛋白表达量在前列腺癌肿瘤组织中显著升高；50对配对前列腺癌及其癌旁组织的免疫组化评分结果如图3所示，通过前列腺癌与其配对癌旁组织比较，YTHDF1蛋白表达量在前列腺癌肿瘤组织中显著升高；图4结果显示，在TCGA数据库中，与前列腺癌癌旁组织相比，前列腺癌组织YTHDF1的RNA水平表达量显著升高；图5结果显示，TCGA数据库中，前列腺癌与其配对癌旁组织比较，YTHDF1表达量在前列腺癌肿瘤组织中显著升高。
图6～8结果显示，在前列腺癌组织中，YTHDF1蛋白表达量与更高T分期，更高N分期，更高Gleason评分显著相关。图9～12结果显示，在TCGA数据库中YTHDF1表达量与更高T分期，更高N分期，更高Gleason评分，和生存状态显著相关；图13结果显示，YTHDF1高低表达量与患者总生存期显著相关，高表达YTHDF1的患者的预后更差。
实施例二、使用干扰RNA下调YTHDF1表达量
为了探究YTHDF1在前列腺癌中发挥的生物学功能，申请人通过siRNA技术在前列腺癌细胞系PC-3和DU145中敲低了YTHDF1表达量。
YTHDF1小干扰RNA转染前列腺癌细胞系具体步骤如下：将PC-3和DU145细胞种到6孔板上，过夜，待密度达到80％时，利用Lipofectamine2000(Invitrogen公司)转染试剂按照标准步骤将对照组和敲低YTHDF1的siRNA分别转染到前列腺癌细胞中：首先使用opti-MEM培养基250ul/孔稀释10ul/孔的Lipo2000转染试剂，200pmol/孔siRNA使用opti-MEM培养基稀释，将lipo2000转染试剂稀释液和siRNA稀释液充分混合(可用振荡器振荡或用加样器吹吸10次以上)混合，然后室温静置20分钟，转染复合物即制备完成。将转染复合物滴加至细胞培养液中，6小时后换成新鲜的含5％血清的完全培养基，转染24小时后获得转染YTHDF1小干扰RNA的前列腺癌细胞，提取RNA和蛋白验证干扰效率。
图14～15结果显示，shY1-1和shY1-2分别指采用SEQ ID NO.1或SEQ ID NO.2所示的干扰RNA进行敲减，在转染了siRNA后，PC-3和DU145细胞中YTHDF1的RNA和蛋白表达量显著降低；敲减YTHDF1后，采用CCK8试剂盒测定PC-3和DU145细胞生长曲线，结果如图16～17所示，在PC-3和DU145细胞中敲低YTHDF1显著抑制了细胞的增殖能力。
敲减YTHDF1后，克隆形成实验测定PC-3及DU145细胞的克隆形成能力，结果如图18所示，PC-3和DU145细胞中敲低YTHDF1显著抑制了细胞的克隆形成能力；敲减YTHDF1后，划痕愈合实验测定PC-3及DU145细胞的迁移能力，结果如图19所示，PC-3和DU145细胞中敲低YTHDF1显著抑制了细胞的迁移能力；敲减YTHDF1后，transwell小室迁移实验测定PC-3及DU145细胞的迁移能力，结果如图20所示，PC-3和DU145细胞中敲低YTHDF1显著抑制了细胞的迁移能力；敲减YTHDF1后，transwell小室侵袭实验测定PC-3及DU145细胞的侵袭能力，结果如图21所示，PC-3和DU145细胞中敲低YTHDF1显著抑制了细胞的侵袭能力。
实施例三、过表达YTHDF1
为了进一步探究YTHDF1在前列腺癌中发挥的功能，申请人通过感染YTHDF1过表达病毒构建了前列腺癌细胞系YTHDF1过表达稳转株。
构建前列腺癌细胞系YTHDF1过表达稳转株具体步骤如下：将前列腺癌细胞以1×105/孔铺到24孔板中。使细胞在慢病毒转染时的数量为2×105/孔左右。次日，用浓度为5μg/ml polybrene的1ml新鲜培养基替换原培养基，加入适量YTHDF1过表达病毒悬液，37℃孵育。继续培养24小时后，用新鲜培养基替换含有病毒的培养基。48小时后，用含有浓度为2μg/ml筛选抗生素puromycin替换原培养基，继续培养数天直至所有未感染细胞全部死亡，获得前列腺癌细胞系YTHDF1过表达稳转株。
图22结果显示，Y1OE为过表达稳转株，在感染了YTHDF1过表达病毒后，PC-3和DU145细胞中YTHDF1的蛋白表达量显著升高；过表达YTHDF1后，采用CCK8试剂盒测定PC-3和DU145细胞生长曲线，结果如图23所示，在PC-3和DU145细胞中过表达YTHDF1显著增强了细胞的增殖能力。
过表达YTHDF1后，克隆形成实验测定PC-3及DU145细胞的克隆形成能力，结果如图24所示，PC-3和DU145细胞中过表达YTHDF1显著增强了细胞的克隆形成能力；过表达YTHDF1后，划痕愈合实验测定PC-3及DU145细胞的迁移能力，结果如图25所示，PC-3和DU145细胞中过表达YTHDF1显著增强了细胞的迁移能力；过表达YTHDF1后，transwell小室迁移实验测定PC-3及DU145细胞的迁移能力，结果如图26所示，PC-3和DU145细胞中过表达YTHDF1显著增强了细胞的迁移能力；过表达YTHDF1后，transwell小室侵袭实验测定PC-3及DU145细胞的侵袭能力，结果如图27所示，PC-3和DU145细胞中过表达YTHDF1显著增强了细胞的侵袭能力。
本申请证明了在前列腺癌组织中YTHDF1表达量显著升高，并且在前列腺癌中YTHDF1表达与肿瘤患者T分期，N分期，格里森评分显著相关。细胞实验表明，敲低YTHDF1可以显著抑制前列腺癌的进展，过表达YTHDF1可以促进前列腺癌的进展。本申请提供了YTHDF1的抑制剂和检测试剂，YTHDF1抑制剂能够有效抑制YTHDF1表达，降低前列腺癌细胞增殖能力，可用于制备前列腺癌治疗药物；YTHDF1检测试剂能够特异性识别YTHDF1并检测YTHDF1表达量，可用作前列腺癌辅助诊断试剂。
以上对本申请实施例所提供的一种YTHDF1抑制剂和检测试剂及其应用进行了详细介绍，本文中应用了具体个例对本申请的原理及实施方式进行了阐述，以上实施例的说明只是用于帮助理解本申请的方法及其核心思想；同时，对于本领域的技术人员，依据本申请的思想，在具体实施方式及应用范围上均会有改变之处，综上所述，本说明书内容不应理解为对本申请的限制。
序列表
<110> 上海交通大学医学院附属第九人民医院
<120> 一种YTHDF1抑制剂和检测试剂及其应用
<141> 2022-01-07
<160> 7
<170> SIPOSequenceListing 1.0
<210> 1
<211> 21
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<400> 1
gttcgttaca tcagaaggat a 21
<210> 2
<211> 21
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<400> 2
cccgaaagag tttgagtgga a 21
<210> 3
<211> 1680
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<400> 3
atgtcggcca ccagcgtgga cacccagaga acaaaaggac aagataataa agtacaaaat 60
ggttcgttac atcagaagga tacagttcat gacaatgact ttgagcccta ccttactgga 120
cagtcaaatc agagtaacag ttacccctca atgagcgacc cctacctgtc cagctattac 180
ccgccgtcca ttggatttcc ttactccctc aatgaggctc cgtggtctac tgcaggggac 240
cctccgattc catacctcac cacctacgga cagctcagta acggagacca tcattttatg 300
cacgatgctg tttttgggca gcctgggggc ctggggaaca acatctatca gcacaggttc 360
aattttttcc ctgaaaaccc tgcgttctca gcatggggga caagtgggtc tcaaggtcag 420
cagacccaga gctccgcgta tgggagcagc tacacctacc ccccgagctc cctgggtggc 480
acggtggttg atgggcagcc aggctttcac agcgacaccc tcagcaaggc ccccgggatg 540
aacagcctgg agcagggcat ggttggcctg aagattgggg acgtcagctc ctccgccgtc 600
aagacggtgg gctctgtcgt cagcagcgtg gcactgactg gtgtcctttc tggcaacggt 660
gggacaaatg tgaacatgcc agtttcaaag ccgacctcgt gggctgccat tgccagcaag 720
cctgcaaaac cacagcctaa aatgaaaaca aagagcgggc ctgtcatggg gggtgggctg 780
ccccctccac ccataaagca taacatggac attggcacct gggataacaa ggggcctgtg 840
ccgaaggccc cagtccccca gcaggcaccc tctccacagg ctgccccaca gccccagcag 900
gtggctcagc ctctcccagc acagccccca gctttggctc aaccgcagta tcagagccct 960
cagcagccac cccagacccg ctgggttgcc ccacgcaaca gaaacgcggc gtttgggcag 1020
agcggagggg ctggcagcga tagcaactct cctggaaacg tccagcctaa ttctgccccc 1080
agcgtcgaat cccaccccgt ccttgaaaaa ctgaaggctg ctcacagcta caacccgaaa 1140
gagtttgagt ggaatctgaa aagcgggcgt gtgttcatca tcaagagcta ctctgaggac 1200
gacatccacc gctccattaa gtactccatc tggtgtagca cagagcacgg caacaagcgc 1260
ctggacagcg ccttccgctg catgagcagc aaggggcccg tctacctgct cttcagcgtc 1320
aatgggagtg ggcatttttg tggggtggcc gagatgaagt cccccgtgga ctacggcacc 1380
agtgccgggg tctggtctca ggacaagtgg aaggggaagt ttgatgtcca gtggattttt 1440
gttaaggatg tacccaataa ccagctccgg cacatcaggc tggagaataa cgacaacaaa 1500
ccggtcacaa actcccggga cacccaggag gtgcccttag aaaaagccaa gcaagtgctg 1560
aaaattatca gttcctacaa gcacacaacc tccatcttcg acgactttgc tcactacgag 1620
aagcgccagg aggaggagga ggtggtgcgc aaggaacggc agagtcgaaa caaacaatga 1680
<210> 4
<211> 20
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<400> 4
ggggacaagt gggtctcaag 20
<210> 5
<211> 19
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<400> 5
agggtgtcgc tgtgaaagc 19
<210> 6
<211> 19
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<400> 6
ctgggctaca ctgagcacc 19
<210> 7
<211> 21
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<400> 7
aagtggtcgt tgagggcaat g 21

Claims (11)

1.一种YTHDF1抑制剂，其特征在于，所述YTHDF1抑制剂包括下调前列腺癌中YTHDF1表达的干扰RNA。
2.根据权利要求1所述的YTHDF1抑制剂，其特征在于，所述干扰RNA为siRNA，所述干扰RNA的序列包括如SEQ ID NO.1或SEQ ID NO.2所示的任一序列。
3.根据权利要求1所述的YTHDF1抑制剂，其特征在于，所述YTHDF1基因序列如SEQ IDNO.3所示。
4.如权利要求1～3中任一项所述的YTHDF1抑制剂在制备前列腺癌治疗药物中的应用。
5.根据权利要求4所述的应用，其特征在于，所述前列腺癌治疗药物包括抑制前列腺癌细胞增殖的药物、抑制前列腺癌细胞迁移的药物或抑制前列腺癌侵袭的药物。
6.一种YTHDF1的检测试剂，其特征在于，所述检测试剂包括特异性扩增YTHDF1基因的引物，所述引物的序列如SEQ ID NO.4和SEQ ID NO.5所示。
7.根据权利要求6所述的检测试剂，其特征在于，所述YTHDF1基因序列如SEQ ID NO.3所示。
8.根据权利要求6所述的检测试剂，其特征在于，所述检测试剂还包括特异性扩增管家基因GADPH的管家基因引物。
9.根据权利要求8所述的检测试剂，其特征在于，所述管家基因引物的序列如SEQ IDNO.6和SEQ ID NO.7所示。
10.如权利要求6～9中任一项所述的检测试剂在制备前列腺癌辅助诊断试剂中的应用。
11.根据权利要求10所述的应用，其特征在于，利用特异性扩增YTHDF1基因的引物通过实时定量PCR法检测YTHDF1的表达量或相对表达量。
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