CN114376113A - 贝莱斯芽孢杆菌制备的原料生产的水蛛专用饵料及应用 - Google Patents

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Abstract

本发明公开了贝莱斯芽孢杆菌制备的原料生产的水蛛专用饵料，包括有机原料部分和无机原料部分，所述有机原料部分由贝莱斯芽孢杆菌发酵剂发酵含蛋白下脚料和含糖下脚料构成的发酵底物而得；所述贝莱斯芽孢杆菌发酵剂为贝莱斯芽孢杆菌XDY021发酵液。本发明还公开了水蛛专用饵料的使用方法。本发明提供的水蛛专用饵料，其中的有机原料部分由贝莱斯芽孢杆菌发酵剂发酵含蛋白下脚料和含糖下脚料构成的发酵底物而得，发酵物的粒径大小、水不溶物含量等恰好符合培养水蛛的要求，特别适合作为水蛛饵料培养水蛛。而且，水蛛专用饵料是根据水蛛的营养需要进行配制，大大提高水蛛的生长性能和产量，实现活水蛛连续的生产供应。

Description

贝莱斯芽孢杆菌制备的原料生产的水蛛专用饵料及应用
技术领域
本发明涉及了水蛛饵料及其应用，尤其涉及贝莱斯芽孢杆菌制备的原料生 产的水蛛专用饵料及应用。
背景技术
腐竹厂、酱油厂利用大豆来生产腐竹和酱油的过程会产生大量的废腐竹渣 和废酱油渣(以下统称含蛋白下脚料)，这些含蛋白下脚料一直都是用来供给养 鱼塘作为养鱼的辅助饵料，由于这些下脚料没有经过腐熟只能少量使用，其营 养利用率很低，附加值很低；另一方面，由于这些下脚料在加工、运输和储存 的过程中容易污染杂菌，没有经过灭菌和发酵腐熟处理直接用作饲料，很容易 导致于鱼类发病；这类含蛋白下脚料还有很多，如各类榨油厂的饼泊、麸泊等。
陈皮厂利用柑橘生产陈皮过程中，只利用果皮，果肉直接丢弃，近广东新 会市每年就有30-50万吨的果肉产生，一直以来，这些陈皮渣基本没有得到应 用，大部分被直接倾倒如河流，污染地表和地下水体，近年来由于发现陈皮果 肉里面的果核有利用价值，有厂家开始回收陈皮果肉，提取里面的果核进行销 售，但果肉和果汁(以下统称含糖下脚料)依然是没有得到较好的利用，这类 含糖下脚料还有很多，如药厂的药渣，茶饮料厂的茶叶渣等等。
在珠江三角洲等地区，农民们称鱼苗开口诱饵为“水蛛”，“水蛛”主要是轮 虫和枝角类的统称。“水蛛”分为“细水蛛”和“大水蛛”，“细水蛛”主要是指大小在 0.2mm-0.5mm之间的轮虫和小分枝角，它们能通过60目筛网，是刚孵化的小 鱼苗(前5天)的主食。“大水蛛”主要是指枝角类，大小为0.5-1.0mm，是苗 期食物转化前的主要食物，根据鱼类种类，以大水蛛为主要食物的时间约为 6～15天。水产养殖特别是鱼苗养殖过程中，水蛛的需求量很大，但一直以来水 蛛主要还是天然生长，人工养殖水蛛是近几年才开始有人开始尝试。
据了解当前水蛛需求量最大的是培养加州鲈鱼、桂花鱼、南美白对虾等高 价值水产动物苗种，以及其他鱼类如四大家鱼鱼苗的鱼苗场，这些鱼苗场需要 外购水蛛来给喂养鱼苗，这些水蛛，大部分是天然池塘里或者大海里捕捞的， 捕捞后它们需要冰冻起来保藏，因此都是死水蛛，它们往往携带有多种病原微 生物或其他环境中残留的杂质，因此这些鱼苗场的鱼苗养殖的成活率大部分都 不高，一直都在20-50％，甚至更低。因此人工培养活水蛛来喂养鱼苗是提高鱼 苗场养殖成功率的重要出路之一。
要把含蛋白类下脚料和含糖下脚料发酵转化成培养水蛛的专用饵料，必须 筛选出适合发酵腐熟这些下脚料的专用菌株，目前常用的发酵饲料的菌株如枯 草芽孢杆菌、酿酒酵母等，用这些菌种用来发酵这些下脚料，往往发酵过头， 把大部分粗蛋白发酵成为水溶性的氨基酸或小肽，不适合用来喂养水蛛，因此 必须筛选一种发酵程度恰到好处的菌株，来发酵上述下脚料，使其转化为水蛛 的饵料原料。
目前，人工培养活水蛛需要专用饵料，目前培养水蛛主要采用普通的鸡粪 等粪便类肥料，也有采用饲料原料来配制的例如水蛛乐等，这些饵料要么对水 体污染较大，残留毒素多，要么原料成本较高，因此开发水蛛专用饵料是当前 提高鱼苗养殖成活率，促进整个养殖业发展迫在眉睫的工作。
发明内容
本发明的目的是提供了贝莱斯芽孢杆菌制备的原料生产的水蛛专用饵料。
本发明的目的通过以下技术方案来实现：贝莱斯芽孢杆菌制备的原料生产 的水蛛专用饵料，包括有机原料部分和无机原料部分，其中，有机原料部分由 贝莱斯芽孢杆菌发酵剂发酵含蛋白下脚料和含糖下脚料构成的发酵底物而得； 所述贝莱斯芽孢杆菌发酵剂为贝莱斯芽孢杆菌(Bacillus velezensis)XDY021发酵 液。
作为本发明的一个实施例，按质量比计算，有机原料部分60％-90％、无机 原料部分10％-40％。其中，无机原料部分的有效成分(元素离子含量)比为： 氮1-60、磷1-50、钾0.5-40、钙1-40、镁1-25、铜0.1-3、铁1-8、锰0.1-8、 锌0.1-10、硼0.1-8、钼0-2。
所述无机原料部分为饵料提供多种大、中和/或微量元素，大量元素如氮、 磷、钾，中量元素如钙、镁，微量元素如铜、铁、锰、锌、硼、钼等。具体地， 所述无机原料部分包括磷酸二氢钾、磷酸二氢铵、三聚磷酸钾、氯化钾、以及 钙、镁、铜、铁、锰、锌、硼、钼等微量元素的盐，包括乙二胺四乙酸 (EDTA)螯合盐、氨基酸螯合盐、硝酸盐、硫酸盐、磷酸盐等。无机原料部 分可视实际情况选择单独添加大、中或微量元素，或者选择大、中和微量元素。
作为本发明的一个实施例，有机原料部分由以下方法制备而得，包括以下 步骤：
(1)取贝莱斯芽孢杆菌(Bacillus velezensis)XDY021菌液接种至经过已灭菌 的培养基中，摇瓶培养后转入种子罐培养，得贝莱斯芽孢杆菌发酵剂，备用；
(2)取含蛋白下脚料和含糖下脚料构成的发酵底物，加水研磨成浆状；
(3)将浆状发酵底物置入发酵罐中，调整pH至4-8，加入贝莱斯芽孢杆菌 发酵剂，发酵24-120小时，即得。
本发明步骤(1)中的培养基包含：蛋白胨1％-4％、酵母膏1％-4％、葡萄糖 0.5％-3％、KH2PO4 0.1％-2％、氯化钠0.1％-1.5％、硫酸锰0.01％-0.2％、加纯净 水至100％。
本发明步骤(1)中的摇瓶培养1-5天，种子罐培养1-5天，可为厌氧或低氧 发酵。
本发明步骤(2)的含蛋白下脚料和含糖下脚料按照碳氮比10-35:1的比例换 算后称重混合(本发明的碳氮比按有机质:粗蛋白计，下同)。当然，在选择原 料的过程中，还需要根据原料性质进行选配和调整用量，例如酱油渣含盐量高， 用量就不能太大，而且须和腐竹配合使用。
本发明中，含蛋白下脚料为腐竹厂的腐竹渣、酱油厂的酱油渣、各类榨油 厂的饼泊等；含糖下脚料为陈皮厂的陈皮渣、淀粉厂的废淀粉渣、制药厂的药 渣、茶叶饮料厂的茶叶渣、酵母厂的酵母渣等。
本发明步骤(2)中，发酵底物和水按质量比1:0.2-1.5。
本发明步骤(3)中的贝莱斯芽孢杆菌(Bacillus velezensis)XDY021按照常规 的从0.1-50立方的发酵罐的发酵工艺及接种量培养，就可以实现本发明的目的。 但是作为本发明优选的贝莱斯芽孢杆菌发酵剂在发酵罐的接种量占发酵底物总 质量的0.1～10％范围内。
本发明步骤(3)中，发酵为低氧发酵或厌氧发酵，发酵温度为30-45度，通 气量0-5m3/H。
本发明的水蛛专用饵料可以是液体剂型，也可以是固体剂型。
贝莱斯芽孢杆菌的新菌株(Bacillus velezensis)XDY021，其保藏号为 CDMCCNo：62146，该菌株在发酵中产生多种抑菌蛋白和抗菌肽等物质，能 够抑制其他杂菌的生长，达到抑制或杀灭其他杂菌效果，适合用于有杂菌污染 的发酵底物。在应用中，该菌株发酵的发酵底物的发酵程度，包括底物粒径和 水不溶物含量等恰好符合培养水蛛的要求，而且不会出现发酵过度或发酵不足 的现象。
本发明提供的贝莱斯芽孢杆菌(Bacillus velezensis)XDY021，已经于2021 年12月20日送广东省微生物菌种保藏中心保藏，保藏号为CDMCC No： 62146，保藏地址：广州市先烈中路100号大院59号楼5楼。
本发明另一个目的是提供贝莱斯芽孢杆菌制备的原料生产的水蛛专用饵料 的应用。具体地，涉及贝莱斯芽孢杆菌制备的原料生产的水蛛专用饵料的使用 方法。
贝莱斯芽孢杆菌制备的原料生产的水蛛专用饵料的使用方法，在养殖水体 投放水蛛种源，然后往养殖水体中泼洒水蛛专用饵料。泼洒后1-3天内即可见 到水蛛开始繁殖，3-5天内即可逐步达到捕捞的丰度，可开始捕捞水蛛用于喂养 鱼苗。
对于水蛛专用饵料的使用剂量，液体剂型的水蛛专用饵料，每667立方米 水体使用量5-40公斤；固体剂型的水蛛专用饵料，每667立方米水体使用量1- 10公斤。使用前，液体剂型先用10-50倍的塘水稀释；固体剂型先用50-100塘 水稀释，搅拌均匀后全塘均匀泼洒。
进一步地，在投放水蛛种源前，先恢复重启养殖水体的生态系统，具体地， 往养殖水体中泼洒高浓度高铁酸钾等氧化剂或消毒剂，每天开启增氧机增氧3-6 小时，持续2-6天，杀灭水体中的杂菌以及各种浮游动植物，然后再投放水蛛 种源。
本发明的优点：
1.本发明提供的水蛛专用饵料，由有机原料部分和无机原料部分构成，其 中有机原料部分由贝莱斯芽孢杆菌(Bacillus velezensis)XDY021发酵剂发酵含蛋 白下脚料和含糖下脚料构成的发酵底物而得，发酵物的粒径大小、水不溶物含 量等恰好符合培养水蛛的要求，有利于水蛛摄食，特别适合作为水蛛饵料培养 水蛛。而且，水蛛专用饵料是根据水蛛的营养需要进行配制，大大提高水蛛的 生长性能和产量，实现活水蛛连续的生产供应。
2.本发明使用的贝莱斯芽孢杆菌XDY021在发酵中产生多种抑菌蛋白和抗 菌肽等物质，能够抑制其他杂菌的生长，达到抑制或杀灭其他杂菌效果，能在 发酵的过程中同步实现杀菌灭菌和发酵腐熟。而且水蛛专用饵料中依然存在贝 莱斯芽孢杆菌XDY021，耐储藏，储藏过程中不会滋生其他杂菌，不会出现胀 气、膨胀等现象。
3.本发明使用的含蛋白下脚料和含糖下脚料其生物友好性不同，发酵程度 略有差异，发酵产物的粒径有一定的差异，适合于培养不同大小的水蛛，用于 喂养不同养殖阶段的鱼苗，提高鱼苗的整体成活率。
4.本发明以含蛋白下脚料和含糖下脚料为发酵底物，变废为宝，将腐竹厂、 酱油厂和药厂等的含蛋白下脚料和含糖下脚料进行资源化、高值化利用，实现 更高的经济价值。
5.使用本发明的方法生产的活水蛛，能部分替代甚至完全替代传统鱼苗场 使用的丰年虫，大大降低鱼苗的饵料养殖成本。
6.液体剂型的水蛛专用饵料，制造费用较低但包装成本较高，适用于短途 运输，固体剂型的水蛛专用饵料，制造费用较高但包装成本较低，适合长途运 输，两种剂型产品的使用效果相同，客户可根据使用的具体情况自行选择。
附图说明
图1是贝莱斯芽孢杆菌(Bacillus velezensis)XDY021的测序结果。
图2是试验一中未经贝莱斯芽孢杆菌(Bacillus velezensis)XDY021发酵前的 发酵底物的显微图。
图3是试验一中经贝莱斯芽孢杆菌(Bacillus velezensis)XDY021发酵后的发 酵底物的显微图。
具体实施方式
实施例一菌株的筛选
实施例一
贝莱斯芽孢杆菌XDY021的筛选：从广东省微生物研究所菌种保藏中心购 买了4株芽孢杆菌(XD05B-XD08B)，1株酵母(XD05J)，从广州百佳超市购 买了2株酵母(XD06J-XD07J)，再从自然界分离筛选了4株芽孢杆菌 (XDY020-XDY023)，3株酵母(XD05J-XD07J)，然后将它们分别经3代含蛋 白下脚料和含糖下脚料构成的发酵底物的培养筛选，最后挑选出能将上述发酵 底物发酵成符合培养水蛛原料的菌株。
上述含蛋白下脚料包括：来自广东江门鹤山市鹤城镇南腐竹厂的腐竹渣， 来自广东江门鹤山市东古酱油厂的酱油渣，来自广东江门鹤山桃源花生油厂的 花生麸等；含糖下脚料包括：来自广东江门新会浩田陈皮厂的陈皮渣，来自广 东广州市东鹏食品饮料有限公司的茶叶渣，广西柳州安琪酵母厂的酵母渣等， 将这些原料按碳氮比10-35:1的比例配制，作为本发明用于筛选菌种的发酵底物， 具体配方见表一、表四、表八、表十二。
表一：发酵底物配方
Figure BDA0003446669720000071
上述贝莱斯芽孢杆菌(Bacillus velezensis)的筛选方法：第一阶段：按表一配制发酵底物加水研磨后分别装入112个500ml的三角瓶中，每瓶装入300g，分 别接种上述的14种菌，每种菌接种8瓶，在35度的培养箱培养36小时后，分 别进行细菌总数的计数，挑选出总菌数≥107的4个菌株，它们是XDY020、 XDY021、XDY022、XDY023，证明这些菌株适合在这种底物上生长，继续做 进一步的筛选。第二阶段：将按表一配制的发酵底物加水研磨后分别装入32个 500ml的三角瓶中，每瓶装入300g，分别接种挑选出来的4种菌，每种菌接种8瓶，在35度的培养箱培养36小时后，将发酵产物用于水蛛的培养实验。
表二：不同菌株第七天的发酵产物检测结果记录
Figure BDA0003446669720000072
从表二可以看出，XDY021菌株发酵产物中，1500-2200目粒径的发酵物数 量最多，菌量适中。
培养试验：
将XDY020-023菌株发酵腐竹渣+酱油渣+陈皮渣的发酵产物用于培养水蛛 实验：在鹤山市新的生物制品有限公司的水蛛养殖试验场，设12个100L的水 蛛培养缸，分别加入80L水，并接种1L含有水蛛种源的水，分别将上述菌种 筛选方法第二阶段筛选出来的4种菌种发酵腐竹渣+酱油渣+陈皮渣(表一)的发 酵产物，添加时间为每天上午8：30，添加量为每个培养缸10ml，每个菌种的 培养物添加3个培养缸，每天观察水蛛的丰度，观察方法是在160倍显微镜下 计算每个视野水蛛的数量(每天的数量是三个培养缸的平均数取整数)，第七天 收集水蛛，用100目筛网滤干水后称重，结果见表三所示。
表三：不同菌种发酵产物培养水蛛的效果记录表
组别 第一天 第二天 第三天 第四天 第五天 第六天 第七天 重量
XDY020 5 8 18 38 67 88 107 221g
XDY021 5 8 20 48 90 124 179 323g
XDY022 5 7 16 36 83 113 146 240g
XDY023 5 6 17 37 78 111 155 284g
从表二和表三可以看出XDY021菌株培养的水蛛从丰度，到产量都是最高的。
经连续5次的重复实验，最终选择水蛛丰度最高，水蛛产量最高的菌株为 XDY021，将该菌株送华南农业大学分子遗传实验室进行DNA测序(见图1)， 结果证明该菌株是一株贝莱斯芽孢杆菌(Bacillus velezensis)的菌株。
试验例一
所筛选出来的贝莱斯芽孢杆菌(Bacillus velezensis)XDY021菌株(简称 XDY021菌株)制成的贝莱斯芽孢杆菌发酵剂：
(1)制备XDY021菌液：接种贝莱斯芽孢杆菌(Bacillus velezensis)XDY021 的新鲜培养物至装有培养基的16个500ml三角瓶中，在35℃的水浴摇床中培 养48h，搅拌转速为20-50rpm。
(2)培养基的制作：以葡萄糖、蛋白胨、酵母膏、KH2PO4、氯化钠、硫酸 锰和水为主要原料配制培养基，它们的质量百分比为：
蛋白胨2％、酵母膏3％、葡萄糖2％、KH2PO4 0.6％、氯化钠0.6％、硫酸 锰0.02％，水余量。
将贝莱斯芽孢杆菌(Bacillus velezensis)XDY021菌株制成贝莱斯芽孢杆菌发酵剂，在鹤山市新的生物制品有限公司位于鹤山市桃源镇中心村交通石场的实 验基地进行发酵物的处理实验。按表一的比例配制500g腐竹渣+酱油渣+陈皮渣 的混合料，加入400ml纯净水，充分混合均匀后，经过胶体磨研磨成浆料后， 检测其菌群情况，发现有酵母、不同类型的芽孢杆菌、大肠杆菌、霉菌等15种 菌种左右，没有一种菌处于优势菌种(图2)。
各取300g置入三个500ml的三角瓶中，分别加入XDY021菌株制成的贝莱 斯芽孢杆菌发酵剂30ml，在恒温摇床培养72小时后，搅拌转速为20-50rpm， 再次检测菌群情况，发现三个三角瓶的发酵产物中95％以上的菌都是贝莱斯芽 孢杆菌，其他杂菌不到5％(见表四)，基本看不到大肠杆菌，霉菌等存在，该 实验证明，贝莱斯芽孢杆菌发酵剂能有效抑制其他杂菌的生长(图3)；经查证 贝莱斯芽孢杆菌(Bacillus velezensis)XDY021在生长过程中会产生抗菌肽和抑菌 蛋白等物质来抑制其他杂菌生长。
表四：下脚料发酵前后不同菌类比例检测结果
Figure BDA0003446669720000091
实施例二液态水蛛专用饵料的制备
1.有机原料部分的制备
(1)贝莱斯芽孢杆菌发酵剂的制备：
接种贝莱斯芽孢杆菌(Bacillus velezensis)XDY021的新鲜培养物至装有培养基的16个500ml三角瓶中，在38℃的生化培养箱培养48h。培养基包含以下质 量分数的组分：蛋白胨3％、酵母膏2.5％、葡萄糖2％、KH2PO4 0.5％、氯化钠 0.4％、硫酸锰0.04％、加纯净水至100％。取上述XDY021菌液接种至经过高 温灭菌的上述培养基中，调整起始pH至6，在100L种子罐中进行低氧发酵5 天，通气量为0.3m3/h，至终点pH为4.5，即得贝莱斯芽孢杆菌发酵剂。
(2)发酵底物的制备
取广东江门鹤山市鹤城镇南腐竹厂的腐竹渣和广东江门鹤山市东古酱油厂 的酱油渣作为含蛋白下脚料；取广东江门新会浩田陈皮厂的陈皮渣作为含糖下 脚料。将这些原料按碳氮比26:1的比例换算称取后混合，具体物料配方见表四。
表四：发酵底物配方
Figure BDA0003446669720000101
将上述原料混合均匀，按混合料:水的重量比1:1比例加水后，经过胶体磨 研磨成浆状，即制成发酵底物。
(3)将70L上述发酵底物至于100L发酵罐中，调整pH至6.5，加入贝莱 斯芽孢杆菌发酵剂5L，发酵7天后至pH为5.1达发酵终点即制成有机原料部 分，备用。发酵过程中控制通气量为0.5m3/H，保持低氧发酵状态，取300克发 酵物进行检测，结果如表五。
表五：发酵产物检测结果记录
发酵物(g) 发酵物水不溶物(g) 1500-2200目水不溶物占比(％) 发酵物种菌数
300 26.22 70.56 7.1×10<sup>7</sup>
2.无机原料部分制备
表六：无机原料部分配方表
Figure BDA0003446669720000102
Figure BDA0003446669720000111
按表六的比例制备1000g的无机原料部分，备用。
3.水蛛专用饵料制备
将有机原料部分与无机原料部分按重量比0.8:0.2的比例，取4000g有机原 料+1000g无机原料充分搅拌均匀，即可制成液态水蛛专用饵料。
试验例二水蛛培育试验
在鹤山市新的生物制品有限公司的水蛛养殖试验场，设4个100升的水蛛 培养缸，分别加入80升水，并接种1升含有水蛛种源的水，分别添加实施例二 的水蛛专用饵料，添加时间为每天上午8:30，添加量为每个培养缸每天10毫升， 连续培养7天，每天观察水蛛的丰度，观察方法是在160倍显微镜下计算每个 视野水蛛的数量(每天的个数是四个培养缸的平均数取整数)，第七天收集水 蛛，用100目筛网滤干水后称重，在对水蛛用0.2mm、0.5mm、1.0mm不同规 格的筛网进行筛分，对不同规格的水蛛分别进行称重并计算出不同规格水蛛占 水蛛总重的比例，统计结果见表七所示。
表七：四个培养缸水蛛生长情况表
Figure BDA0003446669720000112
表七的结果说明陈皮渣、腐竹渣、酱油渣的有机原料组合，配合略高的氮， 略低的磷钾钙镁，微量元素用硫酸盐的无机原料配方，培养出的小水蛛比例较 高，适合于喂养前5天的鱼苗。
实施例三液态水蛛专用饵料的制备
1.有机原料部分的制备
(1)贝莱斯芽孢杆菌发酵剂的制备：方法与实施例二同
(2)发酵底物的制备
取广东江门鹤山桃源花生油厂的花生麸作为含蛋白下脚料和广东广州市东 鹏食品饮料有限公司的茶叶渣作为含糖下脚料。将这些原料按碳氮比15:1的比 例换算称取后混合，具体物料配方见表八。
表八：发酵底物配方
Figure BDA0003446669720000121
将上述原料混合均匀，按混合料:水的重量比1:1.2比例加水后，经过胶体 磨研磨成浆状，即制成发酵底物。
(3)将70L上述发酵底物至于100L发酵罐中，调整pH至6.5，加入贝莱 斯芽孢杆菌发酵剂5L，发酵7天后至pH为4.8即达发酵终点，发酵过程为厌 氧发酵，取300克发酵物进行检测，结果如表九。
表九：发酵产物检测结果记录
发酵物(g) 发酵物水不溶物(g) 1500-2200目水不溶物占比(％) 发酵物种菌数
300 26.32 67.36 5.2×10<sup>7</sup>
2.无机原料部分制备
表十：无机原料部分配方表
Figure BDA0003446669720000122
Figure BDA0003446669720000131
按表十的比例制备1000g的无机原料部分备用。
3.水蛛专用饵料制备
将有机原料部分与无机原料部分按重量比0.8:0.2的比例，取4000g有机原 料+1000g无机原料充分搅拌均匀，即可制成液态水蛛专用饵料。
试验例三水蛛培育试验
在鹤山市新的生物制品有限公司的水蛛养殖试验场，设4个100升的水蛛 培养缸，分别加入80升水，并接种1升含有水蛛种源的水，分别添加实施例三 的水蛛专用饵料，添加时间为每天上午8:30，添加量为每个培养缸每天10毫升， 连续培养7天，每天观察水蛛的丰度，观察方法是在160倍显微镜下计算每个 视野水蛛的数量(每天的个数是四个培养缸的平均数取整数)，第七天收集水 蛛，用100目筛网滤干水后称重，在对水蛛用0.2mm、0.5mm、1.0mm不同规 格的筛网进行筛分，对不同规格的水蛛分别进行称重并计算出不同规格水蛛占 水蛛总重的比例，统计结果见表十一所示。
表十一：四个培养缸水蛛生长情况表
Figure BDA0003446669720000132
表十一的结果说明茶叶渣、花生麸的有机原料组合，配合略高的氮磷钾、 略低的钙镁，微量元素用氨基酸螯合盐的无机原料配方，培养出的大小水蛛比 例接近，小水蛛略多一点。
实施例四液态水蛛专用饵料的制备
1.有机原料部分的制备
(1)水蛛饵料原料发酵液的制备：方法与实施例二同
(2)发酵底物的制备
取广东江门鹤山桃源花生油厂的花生麸作为含蛋白下脚料；取广西柳州安 琪酵母厂的酵母渣作为含糖下脚料。将这些原料按碳氮比14:1的比例换算称取 后混合，具体物料配方见表十二。
表十二：发酵底物配方
Figure BDA0003446669720000141
将上述原料混合均匀，按混合料:水的重量比1:0.7比例加水后，经过胶体 磨研磨成浆状，即制成发酵底物。
(3)将70L上述发酵底物至于100L发酵罐中，调整pH至6.5，加入贝莱 斯芽孢杆菌发酵剂5L，发酵7天后至pH为5.3即达发酵终点，发酵过程中控 制通气量为0.8m3/H，保持低氧发酵状态，取300克发酵物进行检测，结果如表 十三。
表十三：发酵产物检测结果记录
发酵物(g) 发酵物水不溶物(g) 1500-2200目水不溶物占比(％) 发酵物种菌数
300 28.25 66.57 2.4×10<sup>7</sup>
2.无机原料部分制备
表十四：无机原料部分配方表
Figure BDA0003446669720000151
按表十四的比例制备1000g的无机原料部分备用。
3.水蛛专用饵料制备
将有机原料部分与无机原料部分按重量比0.8:0.2的比例，取4000g有机原 料+1000g无机原料充分搅拌均匀，即可制成液态水蛛专用饵料。
试验例四水蛛培育试验
在鹤山市新的生物制品有限公司的水蛛养殖试验场，设4个100升的水蛛 培养缸，分别加入80升水，并接种1升含有水蛛种源的水，分别添加实施例四 的水蛛专用饵料，添加时间为每天上午8:30，添加量为每个培养缸每天10毫升， 连续培养7天，每天观察水蛛的丰度，观察方法是在160倍显微镜下计算每个 视野水蛛的数量(每天的个数是四个培养缸的平均数取整数)，第七天收集水 蛛，用100目筛网滤干水后称重，在对水蛛用0.2mm、0.5mm、1.0mm不同规 格的筛网进行筛分，对不同规格的水蛛分别进行称重并计算出不同规格水蛛占 水蛛总重的比例，统计结果见表十五所示。
表十五：四个培养缸水蛛生长情况表
Figure BDA0003446669720000152
表十五的结果说明酵母渣、花生麸的有机原料组合，配合略高的氮磷钾钙 镁，微量元素为EDTA螯合盐的无机原料配方，培养出的大水蛛比例偏多，适 合于喂养5天后的鱼苗。
实施例五固体剂型水蛛专用饵料
与实施例二不同的是:液态水蛛专用饵料经喷雾干燥成粉状水蛛专用饵料, 得固态水蛛专用饵料。
实施例六固体剂型水蛛专用饵料
与实施例三不同的是:液态水蛛专用饵料经喷雾干燥成粉状水蛛专用饵料, 得固态水蛛专用饵料。
实施例七固体剂型水蛛专用饵料
与实施例四不同的是:液态水蛛专用饵料经喷雾干燥成粉状水蛛专用饵料, 得固态水蛛专用饵料。
试验例五水蛛大塘培育试验
按实施例二的水蛛专用饵料1000kg，于2021年5月8日开始在广东省江 门鹤山市共和镇阿杰加州鲈鱼鱼苗场进行为期一个月的水蛛大塘培育试验，试 验塘5亩，1.5米水深，试验后该鱼苗场正式引入该产品进行常规的生产应用。
使用水蛛专用饵料前，需要重启池塘养殖水体的生态系统，以高浓度的高 铁酸钾对处理养殖水体，按每亩2.5公斤的用量，用水稀释30倍后全塘均匀泼 洒，用于杀灭池塘中的杂菌以及各种浮游动植物，泼洒高铁酸钾后每天开启增 氧机4小时，3天后从周边鱼塘引入含有丰富水蛛种源的水100立方。
引入水蛛种源后，按每667立方米水体每天使用上述水蛛专用饵料10公斤， 用30倍的塘水稀释，搅拌均匀后全塘均匀泼洒，泼洒后第二天即可见到水蛛开 始繁殖，第三天即可逐步达到捕捞的丰度，可开始捕捞水蛛用于喂养鱼苗，具 体数据见表十七。
表十七：共和镇阿杰加州鲈鱼鱼苗场进行水蛛培育试验记录
Figure BDA0003446669720000171
所捕捞的水蛛用于喂养前5天的小鱼苗。
试验例六不同水蛛专用饵料所培养的水蛛喂养鱼苗的效果试验
按实施例二至七的水蛛专用饵料各300kg，于2021年8月8日开始在广东 省江门鹤山市共和镇阿杰加州鲈鱼鱼苗场进行为期15天的水蛛培育连带鱼苗喂 养试验，水蛛培育池六个，试验育苗池七个，每个水蛛培育池对应一个试验育 苗池共六个，再设一个投喂冰水蛛的对照池，每个水蛛培育池面积3亩，水深 1.5米，实施例二、三、四试验组每天投入液态水蛛专用饵料30公斤，用水稀 释30倍后全塘均匀泼洒，实施例五、六、七试验组每天投入固态水蛛专用饵料 7.5公斤，用水稀释60倍后全塘均匀泼洒；每个试验育苗池长4米、宽5米、 深1.5米，放水深度1.2米，每个放养10万加州鲈鱼苗，根据常规喂养经验每 天投喂从对应水蛛培育池抓捕的水蛛，至鱼苗吃饱为准，前五天先将抓捕出来 的水蛛用60目筛网过筛后，取小水蛛投喂对应育苗池，五天后无须过筛直接投 喂。水蛛培养试验结果见表十八，鱼苗喂养试验结果见表十九。
表十八：水蛛培养试验记录
Figure BDA0003446669720000172
表十九：鱼苗喂养试验记录
Figure BDA0003446669720000181
从表十九可以看出，本发明的贝莱斯芽孢杆菌，用于发酵含蛋白下脚料和 含糖下脚料，再经配制所制成的水蛛专用饵料喂养的水珠，用于喂养鱼苗，其 成活率及鱼苗大小虽然不同实施例之间稍有差异，但整体均明显优于普通冰水 蛛的喂养效果。
实施例八
与实施例二不同的是：贝莱斯芽孢杆菌发酵剂的制备中，培养基包含以下 质量分数的组分：蛋白胨2％、酵母膏3％、葡萄糖2％、KH2PO4 0.6％、氯化钠 0.6％、硫酸锰0.02％，水余量。
取XDY021菌液接种至经过高温灭菌的上述培养基中，调整起始pH至6， 在100L种子罐中进行厌氧发酵5天，至终点pH为4.5，即得贝莱斯芽孢杆菌 发酵剂。
实施例九
与实施例二不同的是：贝莱斯芽孢杆菌发酵剂的制备中，培养基包含以下 质量分数的组分：蛋白胨3.5％、酵母膏2.5％、葡萄糖3％、KH2PO4 0.5％、氯 化钠0.1％、硫酸锰0.01％，水余量。
试验例七
取实施例二至九的水蛛专用饵料各10公斤，用真空袋抽真空后封口包装， 放置到40度的恒温烘箱中进行耐储存实验，储存15天后未见产品有胀气或膨 胀现象，证明发酵产物中的XDY021菌种继续抑制其他产气杂菌的生长，发酵 产物具有良好的耐储性和商品属性。

Claims (10)

1.贝莱斯芽孢杆菌制备的原料生产的水蛛专用饵料，包括有机原料部分和无机原料部分，其特征是，所述有机原料部分由贝莱斯芽孢杆菌发酵剂发酵含蛋白下脚料和含糖下脚料构成的发酵底物而得；所述贝莱斯芽孢杆菌发酵剂为贝莱斯芽孢杆菌(Bacillusvelezensis)XDY021发酵液。
2.根据权利要求1所述的贝莱斯芽孢杆菌制备的原料生产的水蛛专用饵料，其特征是，按质量比计算，有机原料部分60％-90％、无机原料部分10％-40％。其中，无机原料部分的元素离子含量比为：氮1-60、磷1-50、钾0.5-40、钙1-40、镁1-25、铜0.1-3、铁1-8、锰0.1-8、锌0.1-10、硼0.1-8、钼0-2。
3.根据权利要求1所述的贝莱斯芽孢杆菌制备的原料生产的水蛛专用饵料，其特征是，所述有机原料部分由以下方法制备而得，包括以下步骤：
(1)取贝莱斯芽孢杆菌Bacillus velezensis XDY021菌液接种至经过已灭菌的培养基中，摇瓶培养后转入种子罐培养，得贝莱斯芽孢杆菌发酵剂，备用；
(2)取含蛋白下脚料和含糖下脚料构成的发酵底物，加水研磨成浆状；
(3)将浆状发酵底物至于发酵罐中，调整pH至4-8，加入贝莱斯芽孢杆菌发酵剂，发酵24-120小时，即得。
4.根据权利要求3所述的贝莱斯芽孢杆菌制备的原料生产的水蛛专用饵料，其特征是，所述步骤(1)中的培养基包含：蛋白胨1％-4％、酵母膏1％-4％、葡萄糖0.5％-3％、KH2PO40.1％-2％、氯化钠0.1％-1.5％、硫酸锰0.01％-0.2％、加纯净水至100％。
5.根据权利要求3所述的贝莱斯芽孢杆菌制备的原料生产的水蛛专用饵料，其特征是，所述步骤(1)中的摇瓶培养1-5天，种子罐培养1-5天，可为厌氧或低氧发酵；所述步骤(2)的含蛋白下脚料和含糖下脚料按照碳氮比10-35:1的比例换算后称重混合。
6.根据权利要求1-5任一项所述的贝莱斯芽孢杆菌制备的原料生产的水蛛专用饵料，其特征是，所述含蛋白下脚料为腐竹厂的腐竹渣、酱油厂的酱油渣、和\或榨油厂的饼泊；所述含糖下脚料为陈皮厂的陈皮渣、淀粉厂的废淀粉渣、制药厂的药渣、茶叶饮料厂的茶叶渣和\或酵母厂的酵母渣。
7.根据权利要求6所述的贝莱斯芽孢杆菌制备的原料生产的水蛛专用饵料，其特征是，所述步骤(2)中，发酵底物和水按质量比1:0.2-1.5；所述贝莱斯芽孢杆菌发酵剂在发酵罐的接种量占发酵底物总质量的0.1～10％范围内；所述步骤(3)中，发酵为低氧发酵或厌氧发酵，发酵温度为30-45度，通气量0-5m3/H。
8.权利要求1-7所述的贝莱斯芽孢杆菌制备的原料生产的水蛛专用饵料的使用方法，其特征是，在养殖水体投放水蛛种源，然后往养殖水体中泼洒水蛛专用饵料。
9.根据权利要求8所述的贝莱斯芽孢杆菌制备的原料生产的水蛛专用饵料的使用方法，其特征是，对于水蛛专用饵料的剂量，液体剂型的水蛛专用饵料，每667立方米水体使用量5-40公斤；固体剂型的水蛛专用饵料，每667立方米水体使用量1-10公斤；使用前，液体剂型先用10-50倍的塘水稀释；固体剂型先用50-100塘水稀释，搅拌均匀后全塘均匀泼洒。
10.根据权利要求8或9所述的贝莱斯芽孢杆菌制备的原料生产的水蛛专用饵料的使用方法，其特征是，在投放水蛛种源前，先恢复重启养殖水体的生态系统，具体地，往养殖水体中泼洒氧化剂或消毒剂，每天开启增氧机增氧3-6小时，持续2-6天，杀灭水体中的杂菌以及各种浮游动植物，然后再投放水蛛种源。
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