CN114369050A

CN114369050A - 一种由万寿菊油树脂分离纯化叶黄素的方法

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Publication number: CN114369050A
Application number: CN202210071233.5A
Authority: CN
Inventors: 刘温来; 李勇
Original assignee: Shandong Tianyin Biotechnology Co ltd
Current assignee: Shandong Tianyin Biotechnology Co ltd
Priority date: 2022-01-21
Filing date: 2022-01-21
Publication date: 2022-04-19
Anticipated expiration: 2042-01-21
Also published as: CN114369050B

Abstract

一种由万寿菊油树脂分离纯化叶黄素的方法，属于天然有效成分提取技术领域。其特征在于，制备步骤为：1)向万寿菊油树脂中加入氢氧化钠水溶液和活性炭，2)加入弱氧化剂，然后在离心机中离心后分液得上层液b；上层液b进行洗脱得到上层液d；3)上层液d转入到解析柱内，利用异丙醇‑乙酸乙酯混合液作为解析液进行解析得到叶黄素酯解析溶液；浓缩得到叶黄素酯浓缩物；加入到结晶液中，固液分离得到精制的叶黄素酯晶体；真空干燥后可得到叶黄素酯。本发明提高了叶黄素酯的得率并降低成本。

Description

一种由万寿菊油树脂分离纯化叶黄素的方法

技术领域

一种由万寿菊油树脂分离纯化叶黄素的方法，属于天然有效成分提取技术领域。

背景技术

叶黄素酯是类胡萝卜素酯类物质，叶黄素酯及叶黄素都具有良好的抗氧化性，缓解视疲劳、预防老年性黄斑退化、保护皮肤、增强免疫和减少心血管疾病发病率等方面具有独特的功能，具有保健及着色功能。叶黄素酯的主要制备步骤为从万寿菊花浸出再经干燥、制粒、提取及纯化得到。万寿菊油树脂中含有叶黄素酯、玉米黄质酯、隐黄质酯等混合物组成，目前方法是对万寿菊油树脂通过溶剂纯化去掉果胶、磷脂等杂质，得到纯化叶黄素酯，同时纯化后的叶黄素酯内含有较高其它类胡萝卜素酯。叶黄素酯是叶黄素与长链不饱和脂肪酸所形成的酯，是叶黄素在植物中存在的主要形式，在自然界中分布广泛，万寿菊中叶黄素酯的含量最为丰富，高达30％～40％，它是叶黄素酯的重要工业来源。叶黄素酯是多种酯的混合物，包括单酯、双酯和混合双酯，其中双棕榈酸酯含量最多，叶黄素酯是一种脂溶性的天然色素，由于两侧没有活泼的羟基，化学性质比叶黄素稳定，不易受到光、热、空气的影响。色泽为橙棕色，不溶于水，难溶于乙醇、甲醇，可溶于油脂、脂肪、乙醚、丙酮、石油醚、正己烷，易溶于乙酸乙酯等有机溶剂。天然叶黄素酯是一种重要的类胡萝卜素脂肪酸酯，主要的构型为全反式，具有C＝C长链的发色集团，表现出艳丽的金黄。两侧没有活泼的羟基，因此也就决定叶黄素酯是一种十分稳定的食品着色剂。玉米黄质是晶状体中仅有的2种类胡萝卜素之一，它的分子中有11个共轭双键，并且尾端集团上带有羟基，此结构使它具有较强的抗氧化能力。

现有的技术当中，美国专利US2007179306报道了混合低级烷醇溶剂提取法从金盏花油树脂中回收叶黄素酯，从中可分离得到含量为60％左右的叶黄素酯。世界专利WO2006019483公布了一种高纯度叶黄素酯的制备方法，在叶黄素油树脂中加入正己烷搅拌洗涤油树脂，上层弃去，继续加入正己烷洗涤4～6次，得到含量大于90％的全反式叶黄素酯。中国专利CN200610026618公布了一种从万寿菊油树脂中分离提纯高含量叶黄素酯的方法，将油树脂溶解于食用级醇和正己烷的混合溶剂中进行结晶和重结晶，得到含量在90％以上的叶黄素酯产品。这些提取过程一般要求多次纯化重复操作，耗时耗力，同时这些工艺均属于溶媒提取结晶工艺，未经过除杂步骤，收率较低，同时使用的溶剂量大且损耗大，得到造成叶黄素酯的生产成本较高。

中国专利CN200810184477公开了一种超临界提取金盏花黄色素的方法，乙醇提取得到金盏花浸膏，浸膏用超临界二氧化碳萃取器以硅藻土为分散剂提取金盏花黄色素。该提取方法存在一定的缺陷：超临界萃取对设备要求高，处理量小，生产成本高。

中国专利CN200810184478公布了一种从万寿菊中提取叶黄素酯类化合物的方法。用乙醇超声提取后得到提取物，然后用硅胶柱层析，石油醚-乙酸乙酯(3：1)等度洗脱，得到叶黄素酯类化合物。该方法具有以下缺点：(1)受超声波衰减因素的制约，超声有效作用区域为一环形，如果提取罐的直径太大，在罐的周壁就会形成超声空白区；(2)功率难以和罐的容积(一般为3000升～6000升)相匹配，6000升的罐需要120kw～180kw超声输出功率，如此大的功率，使超声波设备制造难度增大，同时成本也无法使用户接受。

我国的万寿菊资源丰富，万寿菊浸膏占全球市场份额的25％，所以充分利用我国的万寿菊资源，制备和直接利用高纯度的叶黄素酯具有较大的工业价值。

发明内容

本发明要解决的技术问题是：克服现有技术的不足，提供一种生产成本低、得率高的由万寿菊油树脂分离纯化叶黄素的方法。

本发明解决其技术问题所采用的技术方案是：一种由万寿菊油树脂分离纯化叶黄素的方法，其特征在于，制备步骤为：

1)向万寿菊油树脂中加入氢氧化钠水溶液和活性炭，在28℃～34℃搅拌12h～14h；固液分离后的液体在离心机中离心后取上层液a；

2)步骤1)的上层液a中加入弱氧化剂，在20℃～30℃搅拌1h～2h，然后在离心机中离心后分液得上层液b和下层液c；上层液b利用过量50℃～60℃的水进行洗脱；洗脱完成后在离心机中离心后再次分液得到上层液d和下层液e；

3)步骤2)的上层液d转入到装填有100～600目硅胶的解析柱内，利用异丙醇-乙酸乙酯混合液作为解析液进行解析，异丙醇-乙酸乙酯混合液中异丙醇与乙酸乙酯的体积比为(3～7)：(7～10)，解析得到叶黄素酯解析溶液；

4)将叶黄素酯解析溶液进行浓缩得到叶黄素酯浓缩物；叶黄素酯浓缩物中的挥发物控制在5％～10％；

5)将叶黄素酯浓缩物加入到结晶液中，结晶液为乙醇与乙酸乙酯按体积比1:(0.7～1.4)的混合溶液，结晶液的质量为叶黄素酯浓缩物质量的2～6倍，在10℃～20℃静置20h～25h结晶后固液分离得到精制的叶黄素酯晶体；

6)精制的叶黄素酯晶体通入氮气进行真空干燥后可得到纯度98％以上的叶黄素酯。

本发明为了提高叶黄素酯的得率并降低成本，打破叶黄素酯制备的常规思路，不再将原料直接进行解析。而是先利用氢氧化钠和活性炭将万寿菊油树脂进行解离和除杂；然后利用弱氧化剂直接将最难分离的玉米黄质反应为下游产品，并仅用水进行洗脱即可较彻底分离出来。又因为本发明的解析过程中无需再考虑叶黄素酯和玉米黄质的分离，考虑重点从两者的解析速率差改为仅需考虑叶黄素酯的解析速率，将解析液选用了特定配比的异丙醇-乙酸乙酯混合液，在此种解析腋下叶黄素酯的解析速率明显加快，远高于其它的解析液，使叶黄素酯能够快速的解析分离。最后利用特定的结晶液进行水解、结晶，从而能够得到纯度更高的叶黄素酯。

优选的，上述的一种由万寿菊油树脂分离纯化叶黄素的方法的步骤2)中所述的弱氧化剂为Br₂；所述的Br₂为质量浓度3％～8％的Br₂的水溶液；Br₂与所述上层液a的质量比为1:(1.1～1.3)。本发明选择的弱氧化剂为Br₂，质量浓度3％～8％的Br₂的水溶液能够高选择性的与解离和除杂后的万寿菊油中的玉米黄质反应，从方便叶黄素酯的分离，选择性高，而叶黄素酯基本不会被破坏。

优选的，上述的一种由万寿菊油树脂分离纯化叶黄素的方法中所述的下层液c收集后鼓入过量的空气后在步骤2)中重复使用。本发明选择Br₂不但选择性高，而且能够方便的重复使用，大大降低生产成本。

优选的，上述的一种由万寿菊油树脂分离纯化叶黄素的方法的步骤2)中所述的洗脱过程的下层液e收集后降温至3℃～7℃后固液分离；固液分离的固体为副产品。原料中的玉米黄质被特定浓度的Br₂的水溶液氧化后产生在水中有一定的溶解度的紫罗酮，从而能够用水方便的洗脱；在本发明的洗脱温度下能够利用最少量的水将紫罗酮洗的较彻底。并且洗脱液降温后紫罗酮会结晶析出，方便的得到副产品。

优选的，上述的一种由万寿菊油树脂分离纯化叶黄素的方法的步骤3)中所述的上层液d与解析液的质量比为(1.5～4.5)：(2～8)。优选的上层液d与解析液的质量比能够在保证解析速率的同时提高产品的纯度。

优选的，上述的一种由万寿菊油树脂分离纯化叶黄素的方法的步骤3)中所述的异丙醇-乙酸乙酯混合液中异丙醇与乙酸乙酯的体积比为(4～5)：8。本发明选用的特定配比的异丙醇-乙酸乙酯溶液能够将解离、除杂并脱出玉米黄质的万寿菊油树脂快速的溶解，无需额外的使用溶解液，在溶剂后能够快速的解析；而且优选的配比能够加快叶黄素酯与杂质的分离趋势，叶黄素酯与其它成分的解析界限更加明确，产品的纯度更高。

优选的，上述的一种由万寿菊油树脂分离纯化叶黄素的方法的步骤4)中所述的叶黄素酯浓缩物中的挥发物控制在6％～7％。控制挥发物的含量，能够增强结晶效果。

优选的，上述的一种由万寿菊油树脂分离纯化叶黄素的方法的步骤5)中所述的结晶液为乙醇与乙酸乙酯按体积比1:(0.8～1.1)的混合溶液。优选的结晶液水解效果更好，叶黄素酯更容易析出结晶，减少杂质析出，产品纯度更高。

优选的，上述的一种由万寿菊油树脂分离纯化叶黄素的方法的步骤5)中所述的结晶液的质量为叶黄素酯浓缩物质量的3～4倍。所述的结晶为在10℃～13℃静置24h～25h。优选的结晶条件下叶黄素酯更容易析出结晶，减少杂质析出，产品纯度更高。

优选的，优选的混合溶液与现有技术相比，本发明的所具有的有益效果是：本方法先对万寿菊油树脂内各类杂质及玉米黄质酯进行分离，再直接由硅胶将万寿菊油树脂内部的叶黄素酯成分进行吸附、解析分离步骤，得叶黄素酯和紫罗酮，叶黄素酯进行冷却结晶得到纯度98％以上的叶黄素晶体，是纯天然产物，同时便于规模化生产。

具体实施方式

需要注意的是，这里所使用的术语仅是为了描述具体实施方式，而非意图限制根据本申请的示例性实施方式。如在这里所使用的，除非上下文另外明确指出，否则单数形式也意图包括复数形式，此外，术语“包括”和“具有”以及他们的任何变形，意图在于覆盖不排他的包含，例如，包含了一系列步骤或单元的过程、方法、系统、产品或设备不必限于清楚地列出的那些步骤或单元，而是可包括没有清楚地列出的或对于这些过程、方法、产品或设备固有的其它步骤或单元。

需要说明的是，在不冲突的情况下，本申请中的实施例及实施例中的特征可以相互组合。

下面结合具体实施例对本发明做进一步说明，其中实施例1为最佳实施方式。

实施例1

1)向万寿菊油树脂(紫外分光度计检测类胡萝卜素酯含量35％，高效液相色谱检测叶黄素酯比例占85％)中加入氢氧化钠水溶液和活性炭，在28℃～34℃搅拌13h；固液分离后的液体在离心机中离心后取上层液a；

2)步骤1)的上层液a中加入质量浓度5.6％的Br₂的水溶液；Br₂与所述上层液a的质量比为1:1.2，在25℃～26℃搅拌1.5h，然后在离心机中离心后分液得上层液b和下层液c；下层液c收集后鼓入过量的空气后在本步骤中重复使用；上层液b利用过量55℃～58℃的水进行洗脱；洗脱完成后在离心机中离心后再次分液得到上层液d和下层液e；下层液e收集后降温至3℃～4℃后固液分离；固液分离的固体为副产品；

3)步骤2)的上层液d转入到装填有100～600目硅胶的解析柱内，利用异丙醇-乙酸乙酯混合液作为解析液进行解析，上层液d与解析液的质量比为3：5.5；异丙醇-乙酸乙酯混合液中异丙醇与乙酸乙酯的体积比为4.5：8，解析得到叶黄素酯解析溶液，解析速率能满足进出口恒流泵的流速均为0.016m³/h；

4)将叶黄素酯解析溶液进行浓缩得到叶黄素酯浓缩物；叶黄素酯浓缩物中的挥发物控制在6.5％；

5)将叶黄素酯浓缩物加入到结晶液中，结晶液为乙醇与乙酸乙酯按体积比1:0.95的混合溶液，结晶液的质量为叶黄素酯浓缩物质量的3.5倍，在10℃～11℃静置25h结晶后固液分离得到精制的叶黄素酯晶体；

6)精制的叶黄素酯晶体通入氮气进行真空干燥后可得；本例中以万寿菊油树脂制备叶黄素酯晶体的得率为83.9％；高效液相色谱仪检测产品中叶黄素比例达到98.77％。

实施例2

1)向万寿菊油树脂(紫外分光度计检测类胡萝卜素酯含量35％，高效液相色谱检测叶黄素酯比例占85％)中加入氢氧化钠水溶液和活性炭，在28℃～34℃搅拌13.5h；固液分离后的液体在离心机中离心后取上层液a；

2)步骤1)的上层液a中加入质量浓度6.2％的Br₂的水溶液；Br₂与所述上层液a的质量比为1:1.2，在25℃～27℃搅拌1.3h，然后在离心机中离心后分液得上层液b和下层液c；下层液c收集后鼓入过量的空气后在本步骤中重复使用；上层液b利用过量55℃～57℃的水进行洗脱；洗脱完成后在离心机中离心后再次分液得到上层液d和下层液e；下层液e收集后降温至3.7℃～4.5℃后固液分离；固液分离的固体为副产品；

3)步骤2)的上层液d转入到装填有100～600目硅胶的解析柱内，利用异丙醇-乙酸乙酯混合液作为解析液进行解析，上层液d与解析液的质量比为3：4；异丙醇-乙酸乙酯混合液中异丙醇与乙酸乙酯的体积比为4：8，解析得到叶黄素酯解析溶液，解析速率能满足进出口恒流泵的流速均为0.016m³/h；

4)将叶黄素酯解析溶液进行浓缩得到叶黄素酯浓缩物；叶黄素酯浓缩物中的挥发物控制在7％；

5)将叶黄素酯浓缩物加入到结晶液中，结晶液为乙醇与乙酸乙酯按体积比1:1.1的混合溶液，结晶液的质量为叶黄素酯浓缩物质量的3倍，在13℃静置25h结晶后固液分离得到精制的叶黄素酯晶体；

6)精制的叶黄素酯晶体通入氮气进行真空干燥后可得；本例中以万寿菊油树脂制备叶黄素酯晶体的得率为83.7％；高效液相色谱仪检测产品中叶黄素比例达到98.64％。

实施例3

1)向万寿菊油树脂(紫外分光度计检测类胡萝卜素酯含量35％，高效液相色谱检测叶黄素酯比例占85％)中加入氢氧化钠水溶液和活性炭，在28℃～34℃搅拌12.5h；固液分离后的液体在离心机中离心后取上层液a；

2)步骤1)的上层液a中加入质量浓度4.3％的Br₂的水溶液；Br₂与所述上层液a的质量比为1:1.13，在22～23℃搅拌1.8h，然后在离心机中离心后分液得上层液b和下层液c；下层液c收集后鼓入过量的空气后在本步骤中重复使用；上层液b利用过量53℃～54℃的水进行洗脱；洗脱完成后在离心机中离心后再次分液得到上层液d和下层液e；下层液e收集后降温至3.2℃～3.7℃后固液分离；固液分离的固体为副产品；

3)步骤2)的上层液d转入到装填有100～600目硅胶的解析柱内，利用异丙醇-乙酸乙酯混合液作为解析液进行解析，上层液d与解析液的质量比为2：5.7；异丙醇-乙酸乙酯混合液中异丙醇与乙酸乙酯的体积比为5：8，解析得到叶黄素酯解析溶液，解析速率能满足进出口恒流泵的流速均为0.015m³/h；

4)将叶黄素酯解析溶液进行浓缩得到叶黄素酯浓缩物；叶黄素酯浓缩物中的挥发物控制在6％；

5)将叶黄素酯浓缩物加入到结晶液中，结晶液为乙醇与乙酸乙酯按体积比1:0.8的混合溶液，结晶液的质量为叶黄素酯浓缩物质量的4倍，在11℃静置24h结晶后固液分离得到精制的叶黄素酯晶体；

6)精制的叶黄素酯晶体通入氮气进行真空干燥后可得；本例中以万寿菊油树脂制备叶黄素酯晶体的得率为83.4％；高效液相色谱仪检测产品中叶黄素比例达到98.72％。

实施例4

1)向万寿菊油树脂(紫外分光度计检测类胡萝卜素酯含量35％，高效液相色谱检测叶黄素酯比例占85％)中加入氢氧化钠水溶液和活性炭，在28℃～34℃搅拌12h；固液分离后的液体在离心机中离心后取上层液a；

2)步骤1)的上层液a中加入质量浓度3％的Br2的水溶液；Br₂与所述上层液a的质量比为1:1.3，在20℃～23℃搅拌2h，然后在离心机中离心后分液得上层液b和下层液c；下层液c收集后鼓入过量的空气后在本步骤中重复使用；上层液b利用过量50℃～53℃的水进行洗脱；洗脱完成后在离心机中离心后再次分液得到上层液d和下层液e；下层液e收集后降温至3℃～4℃后固液分离；固液分离的固体为副产品；

3)步骤2)的上层液d转入到装填有100～600目硅胶的解析柱内，利用异丙醇-乙酸乙酯混合液作为解析液进行解析，上层液d与解析液的质量比为1.5：8；异丙醇-乙酸乙酯混合液中异丙醇与乙酸乙酯的体积比为7：7，解析得到叶黄素酯解析溶液，解析速率能满足进出口恒流泵的流速均为0.014m³/h；

4)将叶黄素酯解析溶液进行浓缩得到叶黄素酯浓缩物；叶黄素酯浓缩物中的挥发物控制在5％；

5)将叶黄素酯浓缩物加入到结晶液中，结晶液为乙醇与乙酸乙酯按体积比1:1.4的混合溶液，结晶液的质量为叶黄素酯浓缩物质量的2倍，在10℃～14℃静置20h结晶后固液分离得到精制的叶黄素酯晶体；

6)精制的叶黄素酯晶体通入氮气进行真空干燥后可得；本例中以万寿菊油树脂制备叶黄素酯晶体的得率为82.7％；高效液相色谱仪检测产品中叶黄素比例达到98.37％。

实施例5

1)向万寿菊油树脂(紫外分光度计检测类胡萝卜素酯含量35％，高效液相色谱检测叶黄素酯比例占85％)中加入氢氧化钠水溶液和活性炭，在28℃～34℃搅拌14h；固液分离后的液体在离心机中离心后取上层液a；

2)步骤1)的上层液a中加入质量浓度8％的Br2的水溶液；Br₂与所述上层液a的质量比为1:1.1，在28℃～30℃搅拌1h，然后在离心机中离心后分液得上层液b和下层液c；下层液c收集后鼓入过量的空气后在本步骤中重复使用；上层液b利用过量59℃～60℃的水进行洗脱；洗脱完成后在离心机中离心后再次分液得到上层液d和下层液e；下层液e收集后降温至6℃～7℃后固液分离；固液分离的固体为副产品；

3)步骤2)的上层液d转入到装填有100～600目硅胶的解析柱内，利用异丙醇-乙酸乙酯混合液作为解析液进行解析，上层液d与解析液的质量比为4.5：2；异丙醇-乙酸乙酯混合液中异丙醇与乙酸乙酯的体积比为3：10，解析得到叶黄素酯解析溶液，解析速率能满足进出口恒流泵的流速均为0.013m³/h；

4)将叶黄素酯解析溶液进行浓缩得到叶黄素酯浓缩物；叶黄素酯浓缩物中的挥发物控制在10％；

5)将叶黄素酯浓缩物加入到结晶液中，结晶液为乙醇与乙酸乙酯按体积比1:0.7的混合溶液，结晶液的质量为叶黄素酯浓缩物质量的6倍，在18℃～20℃静置25h结晶后固液分离得到精制的叶黄素酯晶体；

6)精制的叶黄素酯晶体通入氮气进行真空干燥后可得；本例中以万寿菊油树脂制备叶黄素酯晶体的得率为82.5％；高效液相色谱仪检测产品中叶黄素比例达到98.35％。

实施例6

2)步骤1)的上层液a中加入质量浓度12％的Br2的水溶液；Br₂与所述上层液a的质量比为1:2，在24℃～26℃搅拌1.5h，然后在离心机中离心后分液得上层液b和下层液c；下层液c收集后鼓入过量的空气后在本步骤中重复使用；上层液b利用过量54℃～57℃的水进行洗脱；洗脱完成后在离心机中离心后再次分液得到上层液d和下层液e；下层液e收集后降温至3℃～3.7℃后固液分离；固液分离的固体为副产品；

3)步骤2)的上层液d转入到装填有100～600目硅胶的解析柱内，利用异丙醇-乙酸乙酯混合液作为解析液进行解析，上层液d与解析液的质量比为3.5：6；异丙醇-乙酸乙酯混合液中异丙醇与乙酸乙酯的体积比为4.2：8，解析得到叶黄素酯解析溶液，解析速率能满足进出口恒流泵的流速均为0.015m³/h；

4)将叶黄素酯解析溶液进行浓缩得到叶黄素酯浓缩物；叶黄素酯浓缩物中的挥发物控制在6.7％；

5)将叶黄素酯浓缩物加入到结晶液中，结晶液为乙醇与乙酸乙酯按体积比1:1的混合溶液，结晶液的质量为叶黄素酯浓缩物质量的2.6倍，在10℃～13℃静置24h～25h结晶后固液分离得到精制的叶黄素酯晶体；

6)精制的叶黄素酯晶体通入氮气进行真空干燥后可得；本例中以万寿菊油树脂制备叶黄素酯晶体的得率为80.4％；高效液相色谱仪检测产品中叶黄素比例达到98.07％。

实施例7

1)向万寿菊油树脂(紫外分光度计检测类胡萝卜素酯含量35％，高效液相色谱检测叶黄素酯比例占85％)中加入氢氧化钠水溶液和活性炭，在28℃～34℃搅拌12h～14h；固液分离后的液体在离心机中离心后取上层液a；

2)步骤1)的上层液a中加入质量浓度1％的Br2的水溶液；Br₂与所述上层液a的质量比为1:0.4，在20℃～30℃搅拌1h～2h，然后在离心机中离心后分液得上层液b和下层液c；下层液c收集后鼓入过量的空气后在本步骤中重复使用；上层液b利用过量50℃～60℃的水进行洗脱；洗脱完成后在离心机中离心后再次分液得到上层液d和下层液e；下层液e收集后降温至3℃～7℃后固液分离；固液分离的固体为副产品；

3)步骤2)的上层液d转入到装填有100～600目硅胶的解析柱内，利用异丙醇-乙酸乙酯混合液作为解析液进行解析，上层液d与解析液的质量比为1.5：4；异丙醇-乙酸乙酯混合液中异丙醇与乙酸乙酯的体积比为3.5：9，解析得到叶黄素酯解析溶液，解析速率能满足进出口恒流泵的流速均为0.015m³/h；

4)将叶黄素酯解析溶液进行浓缩得到叶黄素酯浓缩物；叶黄素酯浓缩物中的挥发物控制在6.2％；

5)将叶黄素酯浓缩物加入到结晶液中，结晶液为乙醇与乙酸乙酯按体积比1:0.9的混合溶液，结晶液的质量为叶黄素酯浓缩物质量的5倍，在10℃～13℃静置24h～25h结晶后固液分离得到精制的叶黄素酯晶体；

6)精制的叶黄素酯晶体通入氮气进行真空干燥后可得；本例中以万寿菊油树脂制备叶黄素酯晶体的得率为81.1％；高效液相色谱仪检测产品中叶黄素比例达到98.04％。

对比例1

1)将万寿菊油树脂(紫外分光度计检测类胡萝卜素酯含量35％，高效液相色谱检测叶黄素酯比例占85％)溶解于乙酸乙酯，万寿菊油树脂与乙酸乙酯的质量比为1：3；然后转入到装填有6公斤400目硅胶的解析柱内，利用正己烷-乙酸乙酯混合液(V/V，4：1)作为解析液进行解析，万寿菊油树脂与正己烷-乙酸乙酯混合液的质量比为1：10；收集叶黄素酯解析溶液、玉米黄质解析溶液、两者的混合溶液；玉米黄质解析溶液和两者的混合溶液在本例中不再处理；

2)将叶黄素酯解析溶液浓缩并回收溶剂得到叶黄素酯浓缩液，叶黄素酯浓缩液中挥发物控制在4％；

3)叶黄素酯浓缩液加入质量分数为7倍的80％乙醇与乙酸乙酯混合溶液，20℃静置22小时，过滤得到叶黄素酯晶体；

4)叶黄素酯晶体再用75％乙醇洗涤、真空干燥得到叶黄素酯晶体；本例中以万寿菊油树脂制备叶黄素酯晶体的得率为71.2％；紫外分光度计检测类胡萝卜素酯含量78.48％；高效液相色谱仪检测产品中叶黄素比例达到90.19％。

对比例2

1)将万寿菊油树脂(紫外分光度计检测类胡萝卜素酯含量35％，高效液相色谱检测叶黄素酯比例占85％)溶解于乙酸乙酯，万寿菊油树脂与乙酸乙酯的质量比为1：7；然后转入到装填有6公斤400目硅胶的解析柱内，利用正己烷-乙酸乙酯混合液(V/V，9：1)作为解析液进行解析，万寿菊油树脂与正己烷-乙酸乙酯混合液的质量比为1：1.8；收集叶黄素酯解析溶液、玉米黄质解析溶液、两者的混合溶液；玉米黄质解析溶液和两者的混合溶液在本例中不再处理；

2)将叶黄素酯解析溶液浓缩并回收溶剂得到叶黄素酯浓缩液，叶黄素酯浓缩液中挥发物控制在2％；

3)叶黄素酯浓缩液加入质量分数为7倍的80％乙醇与乙酸乙酯混合溶液，16℃静置22小时，过滤得到叶黄素酯晶体；

4)叶黄素酯晶体再用95％乙醇洗涤、真空干燥得到叶黄素酯晶体；本例中以万寿菊油树脂制备叶黄素酯晶体的得率为68.4％；紫外分光度计检测类胡萝卜素酯含量80.39％；高效液相色谱仪检测产品中叶黄素比例达到92.48％。

对比例3

1)将万寿菊油树脂(紫外分光度计检测类胡萝卜素酯含量35％，高效液相色谱检测叶黄素酯比例占85％)溶解于乙酸乙酯，万寿菊油树脂与乙酸乙酯的质量比为1：7；然后转入到装填有6公斤400目硅胶的解析柱内，利用正己烷-乙酸乙酯混合液(V/V，9：1)作为解析液进行解析，万寿菊油树脂与正己烷-乙酸乙酯混合液的质量比为1：8；收集叶黄素酯解析溶液、玉米黄质解析溶液、两者的混合溶液；玉米黄质解析溶液和两者的混合溶液在本例中不再处理；

2)将叶黄素酯解析溶液浓缩并回收溶剂得到叶黄素酯浓缩液，叶黄素酯浓缩液中挥发物控制在8％；

3)叶黄素酯浓缩液加入质量分数为2倍的80％乙醇与乙酸乙酯混合溶液，20℃静置22小时，过滤得到叶黄素酯晶体；

4)叶黄素酯晶体再用95％乙醇洗涤、真空干燥得到叶黄素酯晶体；本例中以万寿菊油树脂制备叶黄素酯晶体的得率为67.2％；紫外分光度计检测类胡萝卜素酯含量96.48％；高效液相色谱仪检测产品中叶黄素比例达到97.19％。

对比例4

1)万寿菊油树脂中加入质量浓度5.6％的Br₂的水溶液；Br₂与所述上层液a的质量比为1:1.2，在25℃～26℃搅拌1.5h，然后在离心机中离心后分液得上层液b和下层液c；下层液c收集后鼓入过量的空气后在本步骤中重复使用；上层液b利用过量55℃～58℃的水进行洗脱；洗脱完成后在离心机中离心后再次分液得到上层液d和下层液e；下层液e收集后降温至3℃～4℃后固液分离；固液分离的固体为副产品；

2)步骤1)的上层液d转入到装填有100～600目硅胶的解析柱内，利用异丙醇-乙酸乙酯混合液作为解析液进行解析，上层液d与解析液的质量比为3：5.5；异丙醇-乙酸乙酯混合液中异丙醇与乙酸乙酯的体积比为4.5：8，解析得到叶黄素酯解析溶液，解析速率能满足进出口恒流泵的流速均为0.016m³/h；

3)将叶黄素酯解析溶液进行浓缩得到叶黄素酯浓缩物；叶黄素酯浓缩物中的挥发物控制在6.5％；

4)将叶黄素酯浓缩物加入到结晶液中，结晶液为乙醇与乙酸乙酯按体积比1:0.95的混合溶液，结晶液的质量为叶黄素酯浓缩物质量的3.5倍，在10℃～11℃静置25h结晶后固液分离得到精制的叶黄素酯晶体；

5)精制的叶黄素酯晶体通入氮气进行真空干燥后可得；本例中以万寿菊油树脂制备叶黄素酯晶体的得率为78.2％；紫外分光度计检测类胡萝卜素酯含量94.33％；高效液相色谱仪检测产品中叶黄素比例达到94.98％。

对比例5

1)向万寿菊油树脂中加入氢氧化钠水溶液和活性炭，在28℃～34℃搅拌13h；固液分离后的液体在离心机中离心后取上层液a；

2)将上层液a(紫外分光度计检测类胡萝卜素酯含量35.4％，高效液相色谱检测叶黄素酯比例占85.32％)溶解于乙酸乙酯，万寿菊油树脂与乙酸乙酯的质量比为1：7；然后转入到装填有6公斤400目硅胶的解析柱内，利用正己烷-乙酸乙酯混合液(V/V，9：1)作为解析液进行解析，万寿菊油树脂与正己烷-乙酸乙酯混合液的质量比为1：8；收集叶黄素酯解析溶液、玉米黄质解析溶液、两者的混合溶液；玉米黄质解析溶液和两者的混合溶液在本例中不再处理；

3)将叶黄素酯解析溶液浓缩并回收溶剂得到叶黄素酯浓缩液，叶黄素酯浓缩液中挥发物控制在8％；

4)叶黄素酯浓缩液加入质量分数为2倍的80％乙醇与乙酸乙酯混合溶液，20℃静置22小时，过滤得到叶黄素酯晶体；

5)叶黄素酯晶体再用95％乙醇洗涤、真空干燥得到叶黄素酯晶体；本例中以万寿菊油树脂制备叶黄素酯晶体的得率为75.8％；紫外分光度计检测类胡萝卜素酯含量96.51％；高效液相色谱仪检测产品中叶黄素比例达到97.23％。

以上所述，仅是本发明的较佳实施例而已，并非是对本发明作其它形式的限制，任何熟悉本专业的技术人员可能利用上述揭示的技术内容加以变更或改型为等同变化的等效实施例。但是凡是未脱离本发明技术方案内容，依据本发明的技术实质对以上实施例所作的任何简单修改、等同变化与改型，仍属于本发明技术方案的保护范围。

Claims

1.一种由万寿菊油树脂分离纯化叶黄素的方法，其特征在于，制备步骤为：

2.根据权利要求1所述的一种由万寿菊油树脂分离纯化叶黄素的方法，其特征在于：步骤2)中所述的弱氧化剂为Br₂；所述的Br₂为质量浓度3％～8％的Br₂的水溶液；Br₂与所述上层液a的质量比为1:(1.1～1.3)。

3.根据权利要求1所述的一种由万寿菊油树脂分离纯化叶黄素的方法，其特征在于：所述的下层液c收集后鼓入过量的空气后在步骤2)中重复使用。

4.根据权利要求1所述的一种由万寿菊油树脂分离纯化叶黄素的方法，其特征在于：步骤2)中所述的洗脱过程的下层液e收集后降温至3℃～7℃后固液分离；固液分离的固体为副产品。

5.根据权利要求1所述的一种由万寿菊油树脂分离纯化叶黄素的方法，其特征在于：步骤3)中所述的上层液d与解析液的质量比为(1.5～4.5)：(2～8)。

6.根据权利要求1所述的一种由万寿菊油树脂分离纯化叶黄素的方法，其特征在于：步骤3)中所述的异丙醇-乙酸乙酯混合液中异丙醇与乙酸乙酯的体积比为(4～5)：8。

7.根据权利要求1所述的一种由万寿菊油树脂分离纯化叶黄素的方法，其特征在于：步骤4)中所述的叶黄素酯浓缩物中的挥发物控制在6％～7％。

8.根据权利要求1所述的一种由万寿菊油树脂分离纯化叶黄素的方法，其特征在于：步骤5)中所述的结晶液为乙醇与乙酸乙酯按体积比1:(0.8～1.1)的混合溶液。

9.根据权利要求1所述的一种由万寿菊油树脂分离纯化叶黄素的方法，其特征在于：步骤5)中所述的结晶液的质量为叶黄素酯浓缩物质量的3～4倍。

10.根据权利要求1所述的一种由万寿菊油树脂分离纯化叶黄素的方法，其特征在于：步骤5)中所述的结晶为在10℃～13℃静置24h～25h。