CN114350671A - Kif11基因突变体及应用 - Google Patents

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CN114350671A CN202111577424.0A CN202111577424A CN114350671A CN 114350671 A CN114350671 A CN 114350671A CN 202111577424 A CN202111577424 A CN 202111577424A CN 114350671 A CN114350671 A CN 114350671A
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李恒
涂丹娜
李红平
胡柯
姚丽丹
陈倩文
熊伶俐
从晶晶
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Abstract

本发明属于基因技术领域，尤其涉及KIF11基因突变体及应用。具体公开了核酸，包含下列目标片段，所述目标片段与野生型KIF11基因相比具有c.2680C>T突变。多肽，与野生型KIF11相比，所述多肽具有p.Gln894Ter突变。基因突变，与野生型KIF11基因相比，所述基因突变具有c.2680C>T突变。含有前述突变生物模型在制备小头畸形、不伴脉络膜视网膜病变、淋巴水肿、智力低下之一的筛查制剂中的应用。小头畸形、不伴脉络膜视网膜病变、淋巴水肿、智力低下之一的筛查试剂，含有能检测KIF11基因突变体的试剂。本发明提供了新的与小头畸形、不伴脉络膜视网膜病变、淋巴水肿、智力低下相关的突变位点，给该疾病的诊断治疗提供了新的方案，同时给出了相关能够防治该疾病的药物。

Description

KIF11基因突变体及应用
技术领域
本发明属于基因技术领域，尤其涉及KIF11基因突变体及应用。
背景技术
KIF11—驱动蛋白超家族成员11(kinesin family member 11,KIF11)即驱动蛋白Eg5(kinesin-5)基因编码的纺锤体运动蛋白,是细胞分裂驱动蛋白家族的成员之一,在细胞分裂过程中参与双极有丝分裂纺锤体的形成。研究发现这类运动蛋白广泛表达,在细胞分裂和细胞内运输发挥重要作用。KIF11在细胞内的定位因物种而异。人类KIF11基因(Chromosome 10:94,353,043-94,415,150)定位在10q24.1，基因组全长6216kb，包含22个外显子，编码由1057个氨基酸序列组成的KIF11蛋白质，其结构在多个物种之间是保守的，KIF11主要由运动结构域、内部茎结构域和尾部结构域组成。其单体N端320个氨基酸残基区是运力结构域，通过分解ATP获得能量，沿微管运动，ATP酶活性和微管结合特性都是由KIF11的运动结构域来实现的。二级结构由8个正面β片段、3个侧面β片段和6个α螺旋结构组成。细胞内KIF11蛋白通过茎段结构域之间的相互作用形成双极性同四聚体复合物，从而在四聚体的每一端定位两个运动结构域。四聚体可以同时向两个反平行微管的正末端移动，这种移动将反平行微管推向相反的方向，促进细胞分裂。然而，非运动的茎和尾结构域也是蛋白质交联微管和滑动分离反平行微管所必要的，此外，KIF11的尾部结构域有助于其在有丝分裂过程中的定位，并增强其与微管的结合。研究已证实，其生物学功能主要是参与细胞的有丝分裂，其机制为以四聚体为结构特性反向平行与微管中央区相连，由于其有ATP酶的特性，其分解ATP获得能量，沿微管向正极运动，运动产生的反方向作用力推动纺锤体向两极的分离，后通过动力微管牵拉染色单体向两极分离，最终完成细胞有丝分裂。
KIF11的生理功能之一是完成细胞的有丝分裂，研究已明确其参与到乳腺癌、肾透明细胞癌、肺癌、胃癌、肠癌、肝癌、子宫癌、卵巢癌等癌症的发生发展中。在过去的几年里，参与有丝分裂的动力蛋白(驱动蛋白Eg5和着丝粒相关蛋白CENPE)已经成为癌症药物开发的潜在靶点。
研究已表明，KIF11基因突变与MCLMR有关，目前已确定的突变形式包括无义、错义、移码和剪接位点突变。突变会使转录的RNA不稳定，直接影响基因的高度保守性，使编码蛋白提前终止，影响蛋白的正常翻译而致病。大多数与小头畸形有关的致病变异，均会导致蛋白质合成减少或产生部分或完全无功能的短蛋白。
小头畸形伴或不伴脉络膜视网膜病变、淋巴水肿或智力低下(Microcephaly withor without chorioretinopathy,lymphedema,or mental retardation，MCLMR,OMIM:152950)是一种以常染色体显性方式遗传的疾病。主要临床特征为小头畸形，明显的面部特征，包括组织肥厚、招风耳、眶上嵴过宽、双侧睑下垂并眼睑肥厚、睑裂上吊、内眦赘皮肥厚、宽鼻梁、鼻尖圆钝宽大并鼻孔前倾、圆脸、人中过长、厚唇前突、小颌畸形和尖下巴(Lim-wongse等，1999；Opitz，1986；Vasudevan等，2005)，眼球震颤，听力受损，视力下降，近视，远视，散光，角膜混浊，白内障，脉络膜视网膜病变，多动症，轻度至中度精神发育迟滞等。部分患者表现出下睑裂等。该病表型高度可变。不伴有淋巴水肿者诊断为CDMMR(脉络膜视网膜发育异常、小头畸形和智力低下)。研究发现，在两种疾病即MCLMR和CDMMR的患者中，均发现驱动蛋白家族成员11(KIF11)的杂合子基因突变(P Ostergaard等，2012；Hazan等，2012；Jones等，2013)，表明该基因突变与MCLMR有关。Gabriela E Jones等队列研究表明在MCLMR患者中，86％有小头畸形，78％有与诊断相符的眼部异常，46％有淋巴水肿，73％有轻度-中度学习困难，8％有癫痫，8％有心脏异常等。
小头畸形是指枕额头围(OFC)低于性别、年龄和种族平均值的2个标准差(SD),以及6月龄后低于性别、年龄和种族平均值的3个标准差以上。原发性小头畸形反映了祖细胞的产生和细胞死亡之间的不平衡。神经祖细胞增殖的中断(有丝分裂或祖细胞周期调节的缺陷)或DNA损伤反应，可导致大脑内神经元和神经胶质细胞数量的减少。原发性小头畸形发生率从每10万活产1.3至150例不等。小头畸形分为原发性、继发性、代谢性、综合征性小头畸形。主要与宫内感染、营养不良、辐射、药物/毒物、遗传/基因突变、代谢异常、环境、缺氧、外伤等因素有关。
迄今为止，已知有至少25个来自世界各地不同人群的原发性小头畸形的基因，包含:BRIT1、WDR62、CDK5RAP2、CASC5、ASPM、CENPJ、STIL、CEP135、CEP152、ZNF335、PHC1、CDK6、CENPE、SAS-6、MFSD2A、ANKLE2、CIT、WDFY3、COPB2、KIF14、NACAPD2、NACAPD3、NCAPH/BRRN、NUP37和MAP11，阐明了小头畸形遗传疾病的分子学基础。作为一类神经发育疾病相关蛋白，其机制大多数与细胞分裂相关，因此在细胞分裂活跃的组织表达较高。通过蛋白序列分析或结构预测发现，这些蛋白大部分定位在细胞骨架和细胞核中。中心体是微管组织的中心，大部分都定位在有丝分裂装置如中心体或纺锤体上。在脑发育过程中，中心体和纺锤体的正确组装对于产生和维持正常的神经细胞的功能和数量起着非常关键的作用。相关蛋白缺失或突变会干扰中心体或纺锤体的正常形成，影响细胞周期及DNA复制等过程，进而影响神经前体细胞的增殖、分化和凋亡等过程，最终导致神经元数量减少并形成偏小的大脑。
发明内容
针对上述问题，本发明提供KIF11基因突变体及应用，主要为了弥补KIF11基因新的的突变体，以及该突变体一些导致的疾病，也为这些疾病的治疗提供新的解决方案。
为了解决上述问题，本发明采用如下技术方案：
核酸，包含下列目标片段，所述目标片段与野生型KIF11基因相比具有c.2680C>T突变。
多肽，与野生型KIF11相比，所述多肽具有p.Gln894Ter突变。
基因突变，与野生型KIF11基因相比，
所述基因突变具有c.2680C>T突变。
生物模型在制备小头畸形、不伴脉络膜视网膜病变、淋巴水肿、智力低下之一的筛查制剂中的应用，所述生物模型至少携带下述之一
a.前述具有突变的核酸，
b.前述具有突变的多肽，
c.前述的基因突变。
检测试剂在制备小头畸形、不伴脉络膜视网膜病变、淋巴水肿、智力低下之一的筛查试剂中的应用，其中，所述检测试剂至少为下述之一
a.前述具有突变的核酸检测试剂；
b.前述具有突变的多肽检测试剂；
c.前述基因突变的检测试剂。
小头畸形、不伴脉络膜视网膜病变、淋巴水肿、智力低下之一的筛查试剂，含有能检测KIF11基因突变体的试剂，所述KIF11基因突变体至少包括下述之一
a.前述具有突变的核酸，
b.前述具有突变的多肽，
c.前述的基因突变。
在一些情况中，所述试剂包含核酸探针或引物；
优选的，所述引物的序列为
正向引物序列：GGTTGTAAGCCAATGTTGTG，
反向引物序列：TCAGGCAATGGCAGGAC。
构建体，包含有前述核酸或前述基因突变。
突变抑制剂在制备小头畸形、不伴脉络膜视网膜病变、淋巴水肿、智力低下之一的药物中的应用，所述突变抑制剂至少对下述中之一具有抑制作用：
a.前述基因突变，
b.KIF11多肽的p.Gln894Ter突变。
防治小头畸形、不伴脉络膜视网膜病变、淋巴水肿、智力低下之一的药物，至少含有下述之一
a.前述基因突变抑制剂，
b.KIF11多肽的p.Gln894Ter突变抑制剂，
c.基因载体，含有基因片段，所述基因片段能将KIF11基因第2680位替换为碱基C。
本发明的有益效果是：
提供了新的与小头畸形、不伴脉络膜视网膜病变、淋巴水肿、智力低下相关的突变位点，给该疾病的诊断治疗提供了新的方案，同时给出了相关能够防治该疾病的药物。
附图说明
图1为先证者及家系图；
图2为先证者突变位点Sanger测序图；
图3为先证者父亲在该位点的Sanger测序图；
图4为先证者母亲在该位点的Sanger测序图；
图5为PCR扩增程序图。
具体实施方式
下面对本发明做进一步说明：
本部分第一方面介绍：
其一：核酸，包含下列目标片段，所述目标片段与野生型KIF11基因(一种如SED IQNO：1)相比具有c.2680C>T突变。其中，核酸一种形式为DNA。前述具有若干种缺失突变的形式，当多个缺失突变共存时：在一些情况中，任意两个缺失突变位点不重叠，当然在另一些情况中，即便位点重叠，但只要也与本发明针对的相关疾病相关，则该种突变方式内容也应当在本发明范围内。
其二：多肽，与野生型KIF11(一种如SED IQ NO：2)相比，所述多肽具有p.Gln894Ter突变。并不局限于除p.Gln894Ter突变外，其他序列必须与基因NM_004523一致。
其三：基因突变，与野生型KIF11基因相比，所述基因突变具有c.2680C>T突变。
前述所述野生型包括其他形式的基因型，只要含有本发明突变位点，其他位点的突变、变化不影响落入本发明的范围内，前述的野生基因序列仅列举部分，不做特别限定。只要KIF11突变位点与本发明相同或等同均在本发明范围内。
本部分第二方面介绍相关突变的一些应用：
其一：生物模型在制备小头畸形、不伴脉络膜视网膜病变、淋巴水肿、智力低下之一的筛查制剂中的应用，所述生物模型至少携带下述之一
a.前述具有突变的核酸，
b.前述具有突变的多肽，
c.前述的基因突变。
其二：检测试剂在制备小头畸形、不伴脉络膜视网膜病变、淋巴水肿、智力低下之一的筛查试剂中的应用，其中，所述检测试剂至少为下述之一
a.前述具有突变的核酸检测试剂；
b.前述具有突变的多肽检测试剂；
c.前述基因突变的检测试剂。
本部分第三方面介绍根据突变产生的一些产品：
其中之一：小头畸形、不伴脉络膜视网膜病变、淋巴水肿、智力低下之一的筛查试剂，含有能检测KIF11基因突变体的试剂，所述KIF11基因突变体至少包括下述之一
a.前述具有突变的核酸，
b.前述具有突变的多肽，
c.前述的基因突变。
在一些情况中，所述试剂包含核酸探针或引物；
优选的，所述引物的序列为
正向引物序列：GGTTGTAAGCCAATGTTGTG，
反向引物序列：TCAGGCAATGGCAGGAC。
其中之二：构建体，包含有前述具有突变的核酸或前述的基因突变。构建体同样可以在制药过程中作为药物成效检验模型。
其中之三：突变抑制剂在制备防治小头畸形、不伴脉络膜视网膜病变、淋巴水肿、智力低下药物中的应用，所述突变抑制剂至少对下述中之一具有抑制作用：
a.前述基因突变，
b.KIF11多肽的p.Gln894Ter突变。
其中之四：防治小头畸形、不伴脉络膜视网膜病变、淋巴水肿、智力低下之一的药物，至少含有下述之一
a.前述基因突变抑制剂，
b.KIF11多肽的p.Gln894Ter突变抑制剂，
c.基因载体，含有基因片段，所述基因片段能将KIF11基因第2680位替换为碱基C。其中，本部分所述位点参考SDE IQ NO：1，其仅起到参考作用，主要为了表述与野生型相比的突变位点，并不因此限定必须为2680位，随着参考序列表改变，位点序号可能也会随之改变，但本质上都是相应位点的碱基C发生突变。
“小头畸形、不伴脉络膜视网膜病变、淋巴水肿、智力低下之一”表示至少为其中之一。不局限与一定仅为其中一种。
本部分的突变抑制剂针对上述突变，现有的或后续新研制的化合物或其他药物，凡是用在了与前述病症任一相关疾病药物，均应在本发明保护范围内。
在部分前述几个方面中所使用的术语“核酸”可以是任何包含脱氧核糖核苷酸或者核糖核苷酸的聚合物，包括但不限于经过修饰的或者未经修饰的DNA、RNA，其长度不受任何特别限制。对于用于构建重组细胞的构建体，优选所述核酸为DNA，因为DNA相对于RNA而言，其更稳定，并且易于操作。
需要说明的是，上述给出的突变位点以及序列等，均是以proteon测序平台内容作为参考，本领域技术人员应该理解的是，由于数据库的更新或者数据库的不同，所示出的突变位点以及序列可能会稍有不同或者变化，这些不同或者变化均可以给出的该数据库中的内容为标准找到，这些不同或者变化也均包含在本发明的保护范围之内。
本部分第四方面结合一具体研究项目介绍：
1.样本收集
发明人在武汉收集到一个小头畸形的家系，如图1所示，共采集该家系成员3人(图中黑框所示)。家系中患者1人(III-1)，健康者2人(II-1、II-2)。□表示健康男性，○表示健康女性，■表示患病男性，●表示患病女性，↗表示先证者。参与本发明研究的家系共3人(黑色方框所示)，所有参与本发明研究的家系成员均签署了知情同意书。发明人采集获得了先证者(III-1)、先证者父亲(II-1)、先证者母亲(II-2)的外周血样本。
人外周血基因组DNA提取及冻存：
(1)用EDTA抗凝的采血管收集研究对象2-5ml外周血或口腔唾液，编号，记录临床资料；
(2)将1.5ml、2mlEP管和收集管进行编号，并做好记录；
(3)将血液样本颠倒混匀，取1ml全血样本置于无菌2mlEP管中，余下血样分装在其他2mlEP管中，且每管1ml全血血样，并保留1ml全血于﹣80度冰箱；
(4)向EP管内加入1ml细胞裂解液CL，颠倒混匀数次，然后10,000rpm离心1分钟，弃上清，保留沉淀；
(5)再次向EP管中加入1Ml CL，震荡并放置5分钟，10,000rpm离心1分钟，弃上清，保留沉淀
(6)向沉淀中加入缓冲液GS 200μL，震荡至彻底混匀；
(7)加入Protease K溶液20μL，上下颠倒混匀；
(8)向EP管中加入缓冲液GB 200μL，颠倒混匀，剧烈震荡约1min；
(9)放入56℃烘箱约10分钟，其间颠倒混匀数次；
(10)向上述溶液加入无水乙醇200ml，充分混匀；
(11)将上一步所得溶液和絮状沉淀装入DNA吸附柱CB3中(吸附柱CB3放入到收集管中)。用12,000rpm速度离心30s，倒掉收集管中的废液，将吸附柱CB3放回收集管中；
(12)向吸附柱中加入500ml缓冲液GD(使用前确认已按比例加入无水乙醇)，12，000rpm速度离心30s，弃废液，并将吸附柱放回到收集管中；
(13)向吸附柱中加入600ml漂洗液PW(使用前确认已按比例加入无水乙醇)，12，000rpm速度离心30s，弃废液，并将吸附柱放回到收集管中；
(14)重复步骤(13)一次；
(15)用12，000rpm速度离心2min，弃收集管中液体。吸附柱室温放置数分钟，以彻底晾干吸附材料中残留的漂洗液；
(16)将吸附柱CB3转入1.5ml灭菌EP管中，向吸附膜中间部位悬空滴加60ul的洗脱缓冲液TB，室温放置5min，用12，000rpm速度离心2min；
(17)再次向吸附膜中间位置悬空滴加60ul洗脱液TB，重复上述步骤一次；
(18)经琼脂糖凝胶电泳、NanoDrop2000、Qubit3.0检测1.5mlEP中DNA的浓度和纯度，并将所得DNA溶液-20℃冻存。
2.全外显子测序及线粒体基因组检测
(1)发明人用Qiagen公司生产的血液基因组DNA提取试剂盒QIAamp DNA BloodMidi Kit(货号：51185)提取外周血样本中的基因组DNA，IDT公司生产的
Figure BDA0003425116660000101
ExomeResearch Panel v1.0试剂盒对扩增后的文库进行靶向捕获，经Qubit和Bioanalyzer 2100检测DNA的浓度和纯度,使用lllumina Novaseq 6000进行PE150测序，采用Sanger测序进行位点验证及分析，明确突变位点后，再对先证者的父亲及母亲进行了Sanger测序验证。结果如图2-4中所示(注：由于Sanger图采用正向5’翻转处理，所以峰图只显示正向链上序列变异)。
(2)变异检测、注释及数据库比较
对全外显子组测序原始下机数据进行数据拼接、比对、注释，并对结果中的变异位点进行分析，结果在这些突变中发现，先证者有8万8千余突变，其中同义突变12182个，内含子区域突变53120个，错义突变10887个，移码突变294个，其余为剪切区域或基因区间的突变。过滤掉在公共人群频率数据库(GnomAD、ExAc、千人基因组)中等位基因频率大于0.01的变异，筛选出与表型相关的致病变异。由此，发明人发现先证者的KIF11的19号外显子上存在一个无义突变，如图2所示，碱基突变后导致KIF11基因第2680位核苷酸C被替换为T(c.2680C>T)，导致第894号氨基酸由谷氨酰胺变成终止密码子(p.Gln894Ter)。该变异为终止密码子使转录提前终止。该位点在参考人群基因频率数据库GnomAD、ExAc、千人基因组数据库中均未见记录。该位点目前未见ClinVar数据库报道。
3.Sanger法测序验证
采集先证者父亲II-1、先证者母亲II-2的外周血进行KIF11基因突变位点的验证。测序结果显示，先证者父母在基因上无碱基突变，推测先证者的突变为新发突变。
(1)引物设计
根据基因突变在基因组中的位置，在Ensembl数据库查询突变所在的人基因组序列，在引物设计软件Primer Premier5进行引物设计。引物序列如下：正向引物序列：GGTTGTAAGCCAATGTTGTG；反向引物序列：TCAGGCAATGGCAGGAC。
(2)PCR扩增
按照以下配比配制各DNA样本的PCR反应体系以及进行PCR反应：反应体系(30ul)：
Figure BDA0003425116660000111
Figure BDA0003425116660000121
(3)扩增程序，如图5中所示。
(4)Sanger测序
将扩增所得PCR产物纯化后，使用ABI3730xl测序仪进行双向测序。
4.生物信息学预测
KIF11,chr10:94408101,基因NM_004523.4:c.2680C>T(p.Gln894Ter)，导致KIF11基因第2680位核苷酸C被替换为T(c.2680C>T)，导致第894号氨基酸由谷氨酰胺变成终止密码子(p.Gln894Ter)。该变异位于19号外显子，导致终止密码子提前出现，影响蛋白的正常翻译。根据NMD(无义介导的mRNA降解，一种存在于所有真核生物中的遗传纠错机制)机制，降解含有提前终止密码子的异常mRNA转录子以减少基因表达上的错误。根据理论推断KIF11:c.2680C>T会导致NMD的出现，导致错误编码蛋白的降解。KIF11基因与小头畸形、光感受器纤毛病、淋巴水肿和智力发育迟缓(MLCRD)发生有关。KIF11蛋白异常会导致中枢神经系统、眼部等异常。
5、临床分析
(1)ACMG标准评级
根据ACMG遗传变异分类标准与指南，该位点可以评为非常强的致病性。
PVS1:当一个疾病的致病机制为功能丧失(LOF)时，无功能变异(无义突变、移码突变、经典±1或2的剪接突变、起始密码子变异、单个或多个外显子缺失)
PS2：患者的新发变异，且无家族史。(经双亲验证)
PM2：ESP数据库、千人数据库、EXAC数据库中正常对照人群中未发现的变异(或隐性遗传病中极低频位点)。
(2)临床辅助检查及用药情况
先证者，男，3月3天，因“发热3小时”收入院。生后吞咽功极差，吃奶慢。查体：神志清楚，头围36厘米，前囟闭合，尖颅，前额窄，下颌小，追视红色物体90°，竖颈不稳，俯卧位抬头45°，四肢肌张力增高，原始反射存在。躯干部可见散在针尖样皮疹；压舌反射弱；双肺呼吸音粗，可闻及痰鸣音。辅助检查：脑平扫(MR)检查结果:1、脑外间隙增宽2胼胝体较薄。肺部CT检查结果：1.肺炎2.右下肺叶局限性气肿。诊断：1.肺炎2.小头畸形3、发育迟缓。临床诊断后予抗感染及电子纤维支气管镜灌洗治疗，肺炎临床痊愈出院；发育迟缓拟行康复治疗，定期随访。
基于对该疾病及KIF11基因背景的研究，发现了先证者导致其临床表型的基因突变，发现突变的基因与小头畸形伴或不伴脉络膜视网膜病变、淋巴水肿或智力低下明确相关。根据ACMG遗传变异分类标准与指南，该位点可以评为非常强的致病性。同时在国内外的数据库中暂无该突变位点的报道和收录，特此申请专利，希望为小头畸形伴或不伴脉络膜视网膜病变、淋巴水肿或智力低下的早期诊断提供更多的诊断依据及完善小头畸形伴或不伴脉络膜视网膜病变、淋巴水肿或智力低下致病突变的数据库。
本领域的技术人员可以明确，在不脱离本发明的总体精神以及构思的情形下，可以做出对于以上实施例的各种变型。其均落入本发明的保护范围之内。本发明的保护方案以本发明所附的权利要求书为准。
序列表
<110> 湖北省妇幼保健院
<120> KIF11基因突变体及应用
<160> 2
<170> SIPOSequenceListing 1.0
<210> 1
<211> 3171
<212> DNA
<213> 人(Huma)
<400> 1
atggcgtcgc agccaaattc gtctgcgaag aagaaagagg agaaggggaa gaacatccag 60
gtggtggtga gatgcagacc atttaatttg gcagagcgga aagctagcgc ccattcaata 120
gtagaatgtg atcctgtacg aaaagaagtt agtgtacgaa ctggaggatt ggctgacaag 180
agctcaagga aaacatacac ttttgatatg gtgtttggag catctactaa acagattgat 240
gtttaccgaa gtgttgtttg tccaattctg gatgaagtta ttatgggcta taattgcact 300
atctttgcgt atggccaaac tggcactgga aaaactttta caatggaagg tgaaaggtca 360
cctaatgaag agtatacctg ggaagaggat cccttggctg gtataattcc acgtaccctt 420
catcaaattt ttgagaaact tactgataat ggtactgaat tttcagtcaa agtgtctctg 480
ttggagatct ataatgaaga gctttttgat cttcttaatc catcatctga tgtttctgag 540
agactacaga tgtttgatga tccccgtaac aagagaggag tgataattaa aggtttagaa 600
gaaattacag tacacaacaa ggatgaagtc tatcaaattt tagaaaaggg ggcagcaaaa 660
aggacaactg cagctactct gatgaatgca tactctagtc gttcccactc agttttctct 720
gttacaatac atatgaaaga aactacgatt gatggagaag agcttgttaa aatcggaaag 780
ttgaacttgg ttgatcttgc aggaagtgaa aacattggcc gttctggagc tgttgataag 840
agagctcggg aagctggaaa tataaatcaa tccctgttga ctttgggaag ggtcattact 900
gcccttgtag aaagaacacc tcatgttcct tatcgagaat ctaaactaac tagaatcctc 960
caggattctc ttggagggcg tacaagaaca tctataattg caacaatttc tcctgcatct 1020
ctcaatcttg aggaaactct gagtacattg gaatatgctc atagagcaaa gaacatattg 1080
aataagcctg aagtgaatca gaaactcacc aaaaaagctc ttattaagga gtatacggag 1140
gagatagaac gtttaaaacg agatcttgct gcagcccgtg agaaaaatgg agtgtatatt 1200
tctgaagaaa attttagagt catgagtgga aaattaactg ttcaagaaga gcagattgta 1260
gaattgattg aaaaaattgg tgctgttgag gaggagctga atagggttac agagttgttt 1320
atggataata aaaatgaact tgaccagtgt aaatctgacc tgcaaaataa aacacaagaa 1380
cttgaaacca ctcaaaaaca tttgcaagaa actaaattac aacttgttaa agaagaatat 1440
atcacatcag ctttggaaag tactgaggag aaacttcatg atgctgccag caagctgctt 1500
aacacagttg aagaaactac aaaagatgta tctggtctcc attccaaact ggatcgtaag 1560
aaggcagttg accaacacaa tgcagaagct caggatattt ttggcaaaaa cctgaatagt 1620
ctgtttaata atatggaaga attaattaag gatggcagct caaagcaaaa ggccatgcta 1680
gaagtacata agaccttatt tggtaatctg ctgtcttcca gtgtctctgc attagatacc 1740
attactacag tagcacttgg atctctcaca tctattccag aaaatgtgtc tactcatgtt 1800
tctcagattt ttaatatgat actaaaagaa caatcattag cagcagaaag taaaactgta 1860
ctacaggaat tgattaatgt actcaagact gatcttctaa gttcactgga aatgatttta 1920
tccccaactg tggtgtctat actgaaaatc aatagtcaac taaagcatat tttcaagact 1980
tcattgacag tggccgataa gatagaagat caaaaaaagg aactagatgg ctttctcagt 2040
atactgtgta acaatctaca tgaactacaa gaaaatacca tttgttcctt ggttgagtca 2100
caaaagcaat gtggaaacct aactgaagac ctgaagacaa taaagcagac ccattcccag 2160
gaactttgca agttaatgaa tctttggaca gagagattct gtgctttgga ggaaaagtgt 2220
gaaaatatac agaaaccact tagtagtgtc caggaaaata tacagcagaa atctaaggat 2280
atagtcaaca aaatgacttt tcacagtcaa aaattttgtg ctgattctga tggcttctca 2340
caggaactca gaaattttaa ccaagaaggt acaaaattgg ttgaagaatc tgtgaaacac 2400
tctgataaac tcaatggcaa cctggaaaaa atatctcaag agactgaaca gagatgtgaa 2460
tctctgaaca caagaacagt ttatttttct gaacagtggg tatcttcctt aaatgaaagg 2520
gaacaggaac ttcacaactt attggaggtt gtaagccaat gttgtgaggc ttcaagttca 2580
gacatcactg agaaatcaga tggacgtaag gcagctcatg agaaacagca taacattttt 2640
cttgatcaga tgactattga tgaagataaa ttgatagcac aaaatctaga acttaatgaa 2700
accataaaaa ttggtttgac taagcttaat tgctttctgg aacaggatct gaaactggat 2760
atcccaacag gtacgacacc acagaggaaa agttatttat acccatcaac actggtaaga 2820
actgaaccac gtgaacatct ccttgatcag ctgaaaagga aacagcctga gctgttaatg 2880
atgctaaact gttcagaaaa caacaaagaa gagacaattc cggatgtgga tgtagaagag 2940
gcagttctgg ggcagtatac tgaagaacct ctaagtcaag agccatctgt agatgctggt 3000
gtggattgtt catcaattgg cggggttcca tttttccagc ataaaaaatc acatggaaaa 3060
gacaaagaaa acagaggcat taacacactg gagaggtcta aagtggaaga aactacagag 3120
cacttggtta caaagagcag attacctctg cgagcccaga tcaaccttta a 3171
<210> 2
<211> 1056
<212> PRT
<213> 人(Huma)
<400> 2
Met Ala Ser Gln Pro Asn Ser Ser Ala Lys Lys Lys Glu Glu Lys Gly
1 5 10 15
Lys Asn Ile Gln Val Val Val Arg Cys Arg Pro Phe Asn Leu Ala Glu
20 25 30
Arg Lys Ala Ser Ala His Ser Ile Val Glu Cys Asp Pro Val Arg Lys
35 40 45
Glu Val Ser Val Arg Thr Gly Gly Leu Ala Asp Lys Ser Ser Arg Lys
50 55 60
Thr Tyr Thr Phe Asp Met Val Phe Gly Ala Ser Thr Lys Gln Ile Asp
65 70 75 80
Val Tyr Arg Ser Val Val Cys Pro Ile Leu Asp Glu Val Ile Met Gly
85 90 95
Tyr Asn Cys Thr Ile Phe Ala Tyr Gly Gln Thr Gly Thr Gly Lys Thr
100 105 110
Phe Thr Met Glu Gly Glu Arg Ser Pro Asn Glu Glu Tyr Thr Trp Glu
115 120 125
Glu Asp Pro Leu Ala Gly Ile Ile Pro Arg Thr Leu His Gln Ile Phe
130 135 140
Glu Lys Leu Thr Asp Asn Gly Thr Glu Phe Ser Val Lys Val Ser Leu
145 150 155 160
Leu Glu Ile Tyr Asn Glu Glu Leu Phe Asp Leu Leu Asn Pro Ser Ser
165 170 175
Asp Val Ser Glu Arg Leu Gln Met Phe Asp Asp Pro Arg Asn Lys Arg
180 185 190
Gly Val Ile Ile Lys Gly Leu Glu Glu Ile Thr Val His Asn Lys Asp
195 200 205
Glu Val Tyr Gln Ile Leu Glu Lys Gly Ala Ala Lys Arg Thr Thr Ala
210 215 220
Ala Thr Leu Met Asn Ala Tyr Ser Ser Arg Ser His Ser Val Phe Ser
225 230 235 240
Val Thr Ile His Met Lys Glu Thr Thr Ile Asp Gly Glu Glu Leu Val
245 250 255
Lys Ile Gly Lys Leu Asn Leu Val Asp Leu Ala Gly Ser Glu Asn Ile
260 265 270
Gly Arg Ser Gly Ala Val Asp Lys Arg Ala Arg Glu Ala Gly Asn Ile
275 280 285
Asn Gln Ser Leu Leu Thr Leu Gly Arg Val Ile Thr Ala Leu Val Glu
290 295 300
Arg Thr Pro His Val Pro Tyr Arg Glu Ser Lys Leu Thr Arg Ile Leu
305 310 315 320
Gln Asp Ser Leu Gly Gly Arg Thr Arg Thr Ser Ile Ile Ala Thr Ile
325 330 335
Ser Pro Ala Ser Leu Asn Leu Glu Glu Thr Leu Ser Thr Leu Glu Tyr
340 345 350
Ala His Arg Ala Lys Asn Ile Leu Asn Lys Pro Glu Val Asn Gln Lys
355 360 365
Leu Thr Lys Lys Ala Leu Ile Lys Glu Tyr Thr Glu Glu Ile Glu Arg
370 375 380
Leu Lys Arg Asp Leu Ala Ala Ala Arg Glu Lys Asn Gly Val Tyr Ile
385 390 395 400
Ser Glu Glu Asn Phe Arg Val Met Ser Gly Lys Leu Thr Val Gln Glu
405 410 415
Glu Gln Ile Val Glu Leu Ile Glu Lys Ile Gly Ala Val Glu Glu Glu
420 425 430
Leu Asn Arg Val Thr Glu Leu Phe Met Asp Asn Lys Asn Glu Leu Asp
435 440 445
Gln Cys Lys Ser Asp Leu Gln Asn Lys Thr Gln Glu Leu Glu Thr Thr
450 455 460
Gln Lys His Leu Gln Glu Thr Lys Leu Gln Leu Val Lys Glu Glu Tyr
465 470 475 480
Ile Thr Ser Ala Leu Glu Ser Thr Glu Glu Lys Leu His Asp Ala Ala
485 490 495
Ser Lys Leu Leu Asn Thr Val Glu Glu Thr Thr Lys Asp Val Ser Gly
500 505 510
Leu His Ser Lys Leu Asp Arg Lys Lys Ala Val Asp Gln His Asn Ala
515 520 525
Glu Ala Gln Asp Ile Phe Gly Lys Asn Leu Asn Ser Leu Phe Asn Asn
530 535 540
Met Glu Glu Leu Ile Lys Asp Gly Ser Ser Lys Gln Lys Ala Met Leu
545 550 555 560
Glu Val His Lys Thr Leu Phe Gly Asn Leu Leu Ser Ser Ser Val Ser
565 570 575
Ala Leu Asp Thr Ile Thr Thr Val Ala Leu Gly Ser Leu Thr Ser Ile
580 585 590
Pro Glu Asn Val Ser Thr His Val Ser Gln Ile Phe Asn Met Ile Leu
595 600 605
Lys Glu Gln Ser Leu Ala Ala Glu Ser Lys Thr Val Leu Gln Glu Leu
610 615 620
Ile Asn Val Leu Lys Thr Asp Leu Leu Ser Ser Leu Glu Met Ile Leu
625 630 635 640
Ser Pro Thr Val Val Ser Ile Leu Lys Ile Asn Ser Gln Leu Lys His
645 650 655
Ile Phe Lys Thr Ser Leu Thr Val Ala Asp Lys Ile Glu Asp Gln Lys
660 665 670
Lys Glu Leu Asp Gly Phe Leu Ser Ile Leu Cys Asn Asn Leu His Glu
675 680 685
Leu Gln Glu Asn Thr Ile Cys Ser Leu Val Glu Ser Gln Lys Gln Cys
690 695 700
Gly Asn Leu Thr Glu Asp Leu Lys Thr Ile Lys Gln Thr His Ser Gln
705 710 715 720
Glu Leu Cys Lys Leu Met Asn Leu Trp Thr Glu Arg Phe Cys Ala Leu
725 730 735
Glu Glu Lys Cys Glu Asn Ile Gln Lys Pro Leu Ser Ser Val Gln Glu
740 745 750
Asn Ile Gln Gln Lys Ser Lys Asp Ile Val Asn Lys Met Thr Phe His
755 760 765
Ser Gln Lys Phe Cys Ala Asp Ser Asp Gly Phe Ser Gln Glu Leu Arg
770 775 780
Asn Phe Asn Gln Glu Gly Thr Lys Leu Val Glu Glu Ser Val Lys His
785 790 795 800
Ser Asp Lys Leu Asn Gly Asn Leu Glu Lys Ile Ser Gln Glu Thr Glu
805 810 815
Gln Arg Cys Glu Ser Leu Asn Thr Arg Thr Val Tyr Phe Ser Glu Gln
820 825 830
Trp Val Ser Ser Leu Asn Glu Arg Glu Gln Glu Leu His Asn Leu Leu
835 840 845
Glu Val Val Ser Gln Cys Cys Glu Ala Ser Ser Ser Asp Ile Thr Glu
850 855 860
Lys Ser Asp Gly Arg Lys Ala Ala His Glu Lys Gln His Asn Ile Phe
865 870 875 880
Leu Asp Gln Met Thr Ile Asp Glu Asp Lys Leu Ile Ala Gln Asn Leu
885 890 895
Glu Leu Asn Glu Thr Ile Lys Ile Gly Leu Thr Lys Leu Asn Cys Phe
900 905 910
Leu Glu Gln Asp Leu Lys Leu Asp Ile Pro Thr Gly Thr Thr Pro Gln
915 920 925
Arg Lys Ser Tyr Leu Tyr Pro Ser Thr Leu Val Arg Thr Glu Pro Arg
930 935 940
Glu His Leu Leu Asp Gln Leu Lys Arg Lys Gln Pro Glu Leu Leu Met
945 950 955 960
Met Leu Asn Cys Ser Glu Asn Asn Lys Glu Glu Thr Ile Pro Asp Val
965 970 975
Asp Val Glu Glu Ala Val Leu Gly Gln Tyr Thr Glu Glu Pro Leu Ser
980 985 990
Gln Glu Pro Ser Val Asp Ala Gly Val Asp Cys Ser Ser Ile Gly Gly
995 1000 1005
Val Pro Phe Phe Gln His Lys Lys Ser His Gly Lys Asp Lys Glu Asn
1010 1015 1020
Arg Gly Ile Asn Thr Leu Glu Arg Ser Lys Val Glu Glu Thr Thr Glu
1025 1030 1035 1040
His Leu Val Thr Lys Ser Arg Leu Pro Leu Arg Ala Gln Ile Asn Leu
1045 1050 1055

Claims (10)

1.核酸，其特征在于，包含下列目标片段，所述目标片段与野生型KIF11基因相比具有c.2680C>T突变。
2.多肽，其特征在于，
与野生型KIF11相比，所述多肽具有p.Gln894Ter突变。
3.基因突变，其特征在于，与野生型KIF11基因相比，
所述基因突变具有c.2680C>T突变。
4.生物模型在制备疾病筛查制剂中的应用，其特征在于，所述疾病至少为小头畸形、不伴脉络膜视网膜病变、淋巴水肿、智力低下中之一；
所述生物模型至少携带下述之一
a.权利要求1所述的核酸，
b.权利要求2所述的多肽，
c.权利要求3所述的基因突变。
5.检测试剂在制备疾病筛查试剂中的应用，其中，所述检测试剂至少为下述之一
a.权利要求1所述核酸的检测试剂；
b.权利要求2所述多肽的检测试剂；
c.权利要求3所述基因突变的检测试剂；
所述疾病至少为小头畸形、不伴脉络膜视网膜病变、淋巴水肿、智力低下中之一。
6.疾病筛查试剂，其特征在于，含有能检测KIF11基因突变体的试剂，所述KIF11基因突变体至少包括下述之一
a.权利要求1所述核酸，
b.权利要求2所述多肽，
c.权利要求3所述基因突变。
7.根据权利要求6所述的疾病筛查试剂，其特征在于，所述疾病至少为小头畸形、不伴脉络膜视网膜病变、淋巴水肿、智力低下中之一；
所述试剂包含核酸探针或引物；
优选的，所述引物的序列为
正向引物序列：GGTTGTAAGCCAATGTTGTG，
反向引物序列：TCAGGCAATGGCAGGAC。
8.构建体，其特征在于，包含有权利要求1所述的核酸或权利要求3所述的基因突变。
9.突变抑制剂在制备防治疾病药物中的应用，其特征在于，所述疾病至少为小头畸形、不伴脉络膜视网膜病变、淋巴水肿、智力低下中之一；
所述突变抑制剂至少对下述中之一具有抑制作用：
a.权利要求3中的基因突变，
b.KIF11多肽的p.Gln894Ter突变。
10.疾病治疗药物，其特征在于，至少含有下述之一
a.权利要求3中基因突变抑制剂，
b.KIF11多肽的p.Gln894Ter突变抑制剂，
c.基因载体，含有基因片段，所述基因片段能将KIF11基因第2680位替换为碱基C；
所述疾病至少为小头畸形、不伴脉络膜视网膜病变、淋巴水肿、智力低下中之一。
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