CN114349854B - 针对甲型流感病毒n1亚型na蛋白的抗体及其应用 - Google Patents

Abstract

本发明公开了针对甲型流感病毒N1亚型NA蛋白的抗体及其应用。本发明的抗体是单克隆抗体，所述抗体具有SEQ ID NO.1所示的重链可变区CDR1、SEQ ID NO.2所示的重链可变区CDR2、SEQ ID NO.3所示的重链可变区CDR3、SEQ ID NO.5所示的轻链可变区CDR1、SEQ ID NO.6所示的轻链可变区CDR2、SEQ ID NO.7所示的轻链可变区CDR3。本发明的抗体可以用于制备检测试剂盒和预防或治疗药物，具有良好的应用前景。

Description

针对甲型流感病毒N1亚型NA蛋白的抗体及其应用

技术领域

本发明属于细胞免疫学、基因工程领域，涉及针对甲型流感病毒N1亚型NA蛋白的抗体及其应用。

背景技术

流感是由呼吸道感染的流感病毒引起的疾病，常常在冬季发生。已知流感具有非常高的传染性，会影响所有年龄组的人、尤其是老年人。流感病毒是负链且被包膜的RNA(核糖核酸) 病毒，属于正黏液病毒(Orthomyxoviridae)科。流感病毒具有单链RNA的8 个节段，且被分类为甲型(A)、乙型(B)和丙型(C)。甲型流感病毒根据它们主要的表面蛋白血凝素(HA)和神经氨酸酶(NA)进一步分成多种亚型。迄今为止，已鉴定出16种HA和9种NA(Cheung TK和Poon LL 2007，AnnNY Acad Sci.1102：1-25)。流感病毒根据它们的类型而具有广泛的感染范围(包括 鸟、猪和人)，且流感病毒具有由分段的RNA组成的基因组。因为这一原因， 流感病毒可持续地突变和重组，从而产生新的遗传变异体。因为这一原因，难以获得抗流感病毒的长期免疫。当前使用的最有效的预防方法是抗每次预期要流行的特定流感病毒的疫苗。

通常使用蛋生产流感疫苗，但这是需要很长时间的低效率的方法。因此， 该方法具有难以每年在有限的时间范围内生产足够量的疫苗的问题。为了解决这一问题，在多家制药公司(GSK、Baxter等)中正积极进行对通过细胞培养生产疫苗的方法的研究。此外，当出现大范围流行的传染时，很难迅速开发出抗该大范围流行的流感病毒的疫苗。另外由于与具有抗性的突变病毒的出现相关的问题，抗病毒药物并不是完全可靠的。

为了解决这一问题，最近已积极开发了抗流感病毒的抗体以用于治疗目的。

发明内容

本发明提供了一种抗甲型流感病毒N1亚型NA蛋白的抗体或其抗原结合部分，其包含：SEQ ID NO.1所示的重链可变区CDR1、SEQ ID NO.2所示的重链可变区CDR2、SEQ IDNO.3所示的重链可变区CDR3、SEQ ID NO.5所示的轻链可变区CDR1、SEQ ID NO.6所示的轻链可变区CDR2、SEQ ID NO.7所示的轻链可变区CDR3中的至少一个。

优选地，所述抗体或其抗原结合部分包含：SEQ ID NO.1所示的重链可变区CDR1、SEQ ID NO.2所示的重链可变区CDR2、SEQ ID NO.3所示的重链可变区CDR3、SEQ ID NO.5所示的轻链可变区CDR1、SEQ ID NO.6所示的轻链可变区CDR2、SEQ ID NO.7所示的轻链可变区CDR3。

进一步，所述重链可变区还包括重链可变区框架区FR1、FR2、FR3和FR4；轻链可变区还包括轻链可变区框架区FR1、FR2、FR3和FR4，其中，重链可变区框架区FR1、FR2、FR3和FR4的氨基酸序列如SEQ ID NO.9、10、11、12所示；轻链可变区框架区FR1、FR2、FR3和FR4的氨基酸序列如SEQ ID NO.13、14、15、16所示。

本发明的抗体或其抗原结合部分，其包含：

1）重链可变区，其氨基酸序列如SEQ ID NO.4所示；

2）轻链可变区，其氨基酸序列如SEQ ID NO.8所示。

包括优选抗体氨基酸序列的保守序列变体的抗体也包括在本发明的范围之内。保守氨基酸序列变体包括不显著改变本发明的抗H7N9的单克隆抗体结合性质和中和性质的氨基酸序列的修饰，如源于本领域熟知的相似氨基酸替代的变体，氨基酸的缺失、增加导致的变体。

本发明的抗体还包括人源与非人源抗体，以及具有与其前面所述抗体相同功能或改造及优化的一切抗体。

进一步，本发明的所述抗体是人源化抗体。

本发明的公开的抗体可以在重链和轻链可变区包含一个或多个糖基化位点，如本领域内熟知的，在可变区中存在的一个或多个糖基化位点可以导致增强的抗体免疫原性，或者由于改变了抗原结合而改变抗体的药物动力学。

本发明的抗体可以被设计为在Fc区域内包含修改，通常是改变抗体的1个或多个功能特性，如血清半衰期、补体结合、Fc受体结合、和/或抗原依赖的细胞毒性。此外，本发明的抗体可以被化学修饰( 如，可以将一个或多个化学基团连接于抗体)，或被修饰以改变其糖基化，从而再改变抗体的一个或多个功能特性。

本发明的抗体可以被设计的另一个修饰是聚乙二醇化。抗体可被聚乙二醇化从而，例如，增加抗体的生物( 如血清) 半衰期。为了使抗体聚乙二醇化，该抗体或其片段通常在适合于一个或多个聚乙二醇(PEG) 集团连接到该抗体或抗体片段的条件下，与PEG 反应，如聚乙二醇的活性酯或醛衍生物。优选地，该聚乙二醇化是通过与活性的PEG 分子( 或类似的活性水溶性聚合物) 进行酰化反应或烷基化反应而实现。

进一步，所述抗体的抗原结合片段包括Fab、Fab′、F(ab′)2、Fv或单链Fv。

本发明还提供了编码前面所述的抗体或其抗原结合部分的核酸分子。

优选地，所述编码重链可变区的核酸序列如SEQ ID NO.17所示；编码轻链可变区的核酸序列如SEQ ID NO.18所示。

本发明的编码前面所述的抗体或其抗原结合片段的核酸分子包括具有上述优选的核苷酸序列的保守核苷酸序列变体的核酸分子。所谓的保守核苷酸序列变体源于遗传密码简并和沉默的变体，核苷酸的替代、缺失和增加也包含在内。

本发明还提供了包含所述核酸分子的表达载体。

除了前面所述的核酸分子之外，表达载体还包括与所述核酸分子序列操作性相连的表达调控序列。

表达载体是指可将编码某蛋白的多聚核苷酸插入其中并使蛋白获得表达的一种核酸运载工具。载体可通过转化、转导或转染宿主细胞，使其携带的遗传物质元件在宿主细胞内得以表达。载体的种类包括本领域熟知的细菌质粒、噬菌体、酵母质粒、植物细胞病毒、哺乳动物细胞病毒如腺病毒、逆转录病毒或其他载体。总之，只要能在宿主体内复制和稳定，任何质粒和载体都可以用。在表达载体中，除了含有复制起点外，还可含有标记基因和其他翻译控制元件。

本发明还提供了包含所述核酸分子或所述表达载体的宿主细胞。

宿主细胞可以是原核细胞，如细菌细胞；或是低等真核细胞，如酵母细胞；或是高等真核细胞，如哺乳动物细胞。代表性例子有:大肠杆菌，链霉菌属；鼠伤寒沙门氏菌的细菌细胞：真菌细胞如酵母；植物细胞；果蝇S2或Sf9的昆虫细胞；CHO，COS，293细胞、或Bowes黑素瘤细胞的动物细胞等。

用重组DNA转化、转染宿主细胞可用本领域技术人员熟知的常规技术进行。一些采用的转化、转染方法包括但并不限于：磷酸钙共沉淀法，常规机械方法如显微注射、电穿孔、脂质体包装等。

本发明还提供给了一种利用前面所述的宿主细胞产生抗体或抗原结合片段的方法，所述方法包括在合适的条件下培养前面所述的宿主细胞并回收抗体或抗原结合片段。

本发明还提供了一种通过上述方法产生的抗体或抗原结合片段。

本发明还提供了产品，所述产品包括免疫缀合物，试剂盒、药物组合物。

在本发明的具体实施方案中，本发明还提供了免疫缀合物或免疫偶联物，所述免疫缀合物或免疫偶联物是由本发明的抗体或其抗原结合部分偶联到官能剂上形成的。

官能剂可以是细胞毒素剂如化学治疗剂、毒素( 例如，细菌、真菌、植物或动物来源的酶活性毒素或其片段)、或放射性同位素( 即放射性偶联物)、抗生素、溶核酶、或它们的任意组合。化学治疗剂可以用于产生免疫偶联物，例如，甲氨喋呤(methotrexate)、阿霉素(adriamicin)、长春花生物碱(vinca alkaloid)( 长春新碱(vincristine)，长春碱(vinblastine)，依托泊苷(etoposide))、阿霉素(doxorubicin)、美法仑(melphalan)、丝裂霉素C(mitomycin C)、苯丁酸氮芥(chlorambucil)、柔红霉素(daunorubicin) 或其它嵌入剂、酶、和/ 或它们的片段，如溶核酶、抗生素、和毒素如小分子毒素或细菌、真菌、植物或动物来源的酶活性毒素，包括其片段和/ 或变体，以及以下公开的各种抗肿瘤剂或抗癌剂。可使用的酶活性毒素及其片段包括：例如，白喉A 链(diphtheria A chain)、白喉毒素的非结合活性片段、外毒素A 链(exotoxin A chain)( 来自绿脓杆菌(Pseudomonasaeruginosa))、蓖麻毒素A 链(ricin A chain)、相思豆毒素A 链(abrin A chain)、蒴莲根毒素A 链(modeccin A chain)，α- 八叠球菌(alpha-sarcin)、油桐(Aleuritesfordii) 蛋白，石竹素蛋白(dianthin protein)，美洲商陆(Phytolacca americana) 蛋白(PAPI，PAPII 和PAP-S)、苦瓜(momordica charantia) 抑制剂、麻疯树毒素(curcin)、巴豆毒素(crotin)、石碱草(saponaria officinalis) 抑制剂、白树毒素(gelonin)、丝裂蛋白(mitogellin)、局限曲菌素(restrictocin)、酚霉素(phenomycin)、依诺霉素(enomycin)、和单端孢霉烯族毒素类(tricotheeenes)。本领域已知或可用的任何合适的放射性核苷酸或放射性试剂均可用于产生放射性偶联的抗体。

所述免疫缀合物还可以是本发明的抗体或其抗原结合部分直接或间接偶联至可检测的部分形成的复合物。

可检测的部分包括但不限于酶、辅基、荧光材料、发光材料，生物发光材料、放射性材料、正电子发射金属以及非放射性顺磁性金属离子。

为了检测和 /或分析和/ 或诊断目的标记依赖于使用的特定检测/分析/诊断技术和/或方法例如免疫组织化学染色( 组织) 样品、流式细胞计量术、激光扫描细胞计量术检测、荧光免疫测定、酶联免疫吸附测定(ELISA)、放射免疫测定(RIA)、生物测定( 例如吞噬作用测定)、蛋白质印迹应用等。对于本领域已知的检测/分析/诊断技术和/或方法合适的标记为本领域技术人员所熟知。

本发明还提供了一种非诊断目的的检测甲型流感病毒N1亚型NA蛋白水平的方法，所述方法包括如下步骤：

（1）提取含有甲型流感病毒N1亚型的样品；

（2）将步骤（1）获取的样品与前面所述的抗体或其抗原结合片段的接触；

（3）检测样品与抗体或其抗原结合片段的免疫反应。

本发明提供了一种预防或治疗甲型流感病毒感染的方法，包括：将有效治疗量的本发明的抗体或其抗原结合部分给药予受试者。该方法还包括：诊断感染甲型流感病毒的患者。可在诊断患者感染病毒之前、当中、和/ 或之后施用本发明的抗体或其抗原结合部分。

该方法还包括：监测至少一种甲型流感病毒感染症状的减轻。

本发明提供了一种检测甲型流感病毒的方法，包括：将来自受试者的样品与本发明的抗体或其抗原结合部分接触。该方法还可包括：根据抗体是否结合甲型流感病毒，检测受试者中存在或不存在甲型流感病毒。

本发明前面所述的产品可以是一种用于甲型流感病毒检测的试剂盒，所述试剂盒包含本发明前面所述的抗体或其抗原结合部分、前面所述的核酸分子、前面所述的表达载体、前面所述的宿主细胞。

本发明前面所述的产品可以是一种用于防治于甲型流感病毒感染的药物组合物，所述药物组合物包含本发明前面所述的抗体或其抗原结合部分。

进一步，所述药物组合物还包括药学可接受载体。

所述药物组合物还包括药学上可接受的载体，所述载体包括但不限于已经被美国食品与药品管理局认可的而可用于人类或动物的任何佐剂、载体、赋形剂、助流剂、甜味剂、稀释剂、防腐剂、染料/ 着色剂、香味增强剂、表面活性剂、润湿剂、分散剂、助悬剂、稳定剂、等渗压剂、溶剂或乳化剂等对组成药物组合物无副作用的各种形式的载体。

本发明还提供了前面所述的抗体或其抗原结合部分在制备甲型流感病毒检测产品或感染诊断产品中的应用。

本发明还提供了前面所述的抗体或其抗原结合部分在制备防治甲型流感病毒感染的药物组合物中的应用。

本发明还提供了前面所述的核酸分子在制备防治甲型流感病毒感染的药物组合物中的应用。

本发明还提供了前面所述的表达载体在制备防治甲型流感病毒感染的药物组合物中的应用。

本发明还提供了前面所述的宿主细胞在制备防治甲型流感病毒感染的药物组合物中的应用。

本发明还提供了前面所述的药物组合物在制备防治甲型流感病毒感染疾病的药物中的应用。

本发明还提供了前面所述的免疫缀合物在制备甲型流感病毒检测产品或感染诊断产品中的应用。

本发明的所述流感病毒为H1N1、H5N1。

本文所用的术语“抗体”包括单克隆抗体，所述单克隆抗体是指从一类基本均一的群体获得的抗体，除少数可能存在的天然发生的突变外，该群体中包含的单个抗体是相同的。修饰语“单克隆”仅表示抗体的特性，是从基本均一的抗体群中获得的，这不能解释成需要用任何特殊方法来生产抗体。

本文所用的术语“可变”表示抗体中可变区的某些部分在序列上有所不同，它形成了各种特定抗体对其特定抗原的结合和特异性。可变性集中于轻链和重链可变区中称为互补决定区(CDR) 或超变区中的三个片段中。天然重链和轻链的可变区中各自包含四个FR区（可变区中较保守的部分），它们大致上呈β-折叠构型，由形成连接环的三个CDR相连，可形成部分β折叠结构。每条链中的CDR通过FR区紧密地靠在一起并与另一链的CDR一起形成了抗体的抗原结合部位。恒定区不直接参与抗体与抗原的结合，但是它们表现出不同的效应功能，例如参与抗体的依赖于抗体的细胞毒性。

附图说明

图1是FNA2抗体的SDS-PAGE电泳图，A：非还原；B：还原；

图2是FNA2与H1N1 NA抗原结合的流式结果图，A：对照；B：FNA2；

图3是FNA2与H5N1 NA抗原结合的流式结果图，A：对照；B：FNA2；

图4是抑制假病毒释放实验的结果图。

具体实施方式

下面结合附图和实施例对本发明作进一步详细的说明。

以下实施例仅用于说明本发明而不用于限制本发明的范围。

实施例1 筛选针对甲型流感病毒N1亚型NA蛋白抗体

1、构建噬菌体抗体库

借助计算机辅助分子设计构建靶向甲型流感病毒N1亚型NA蛋白的抗体库，利用噬菌体展示技术筛选候选抗体。

（1）展示的噬菌体库黏附甲型流感病毒N1亚型NA蛋白；

（2）反复洗涤去除非特异性结合，洗脱并收集展示甲型流感病毒N1亚型NA蛋白的噬菌体；

（3）再次感染大肠杆菌，挑选单克隆展示于噬菌体表面，ELISA筛选识别甲型流感病毒N1亚型NA蛋白的阳性克隆。

2、抗体可变区基因序列的测定、分析

阳性克隆送到上海生工生物技术有限公司进行抗体可变区基因序列测定, 对测序结果用DNAMAN和数据库进行检索分析。

3、结果

通过上述步骤筛选出了能够同时识别结合H1N1以及H5N1 的N1亚型NA蛋白的人源化单克隆抗体FNA2，经序列比对，获得了编码FNA2单克隆抗体的轻链可变区的氨基酸序列和编码FNA2单克隆抗体的重链可变区的氨基酸序列，其中重链的CDR1-3序列如SEQ IDNO.1~3所示，重链可变区框架区FR1、FR2、FR3和FR4的氨基酸序列如SEQ ID NO.9~12所示，重链可变区序列如SEQ ID NO.4所示，轻链的CDR1-3序列如SEQ ID NO. 5~7所示，轻链可变区框架区FR1、FR2、FR3和FR4的氨基酸序列如SEQ ID NO.13~16所示，轻链可变区的氨基酸序列如SEQ ID NO.8所示。

重链可变区VH氨基酸序列：

QVKLQESGGGLVQPKGSLKLSCAASGFSFYTYAMNWVRQAPGKGLEWVARIRSKSNNWATFYADSVKDRFTISRDDSQSMLYLQMHNLKTDDTAMYYCVRPSIYSYASGYLDLWGAGTTVTVSS SEQ ID NO.4

表1 VH的CDR与FR区域序列

重链可变区VH核酸序列：

CAGGTGAAACTGCAGGAAAGCGGCAGCGGCCTGGTGCAGCCGAAAGGCAGCCTGAAACTGAGCTGCGCGGCGAGCGGCTTTAACTTTTACACCTATGCGATGAACTGGGTGCGCCAGGCGCCGGGCAAAGGCCTGGAATGGGTGGCGCGCATTCAGAGCAAAAGCAACAACTCCGCGACCTATTATGCGGATAGCGTGAAAGATCGCTTTACCATTAGCCGCGATGATAGCCAGAGCATGCTGTATCTGCAGATGCATAACCTGAAAACCGATGATACCGCGATGTATTATTGCGTGCGCCCGAGCACTTATTATTATGCGAGCGGCTATCTGGATTTCTGGGGCGCGGGCACCACCGTGACCGTGAGCAGCSEQ ID NO.17

轻链可变区VL氨基酸序列：

QIVLSQSPAILSASPGEKVTMTCRSSSSVSYVHWYQQKPGSSPKPWIYATSNLASGVPFRFSGSGSGTSYSLTISRVEAEDAATYYCQQWNSSPLTFGGGTKLEIK SEQ ID NO.8

表2 VL CDR与FR区域序列

轻链可变区VL核酸序列：

CAGATTGTGCTGAGCCAGAGCCCGGCGATTCTGAGCGCGAGCCCGGGCGAAAAAGTGACCATGACCTGCCGCGGCAGCAGCAGCGTGAACTATGTGCATTGGTATCAGCAGAAACCGGGCAGCAGCCCGAAACCGTGGATTTATGCGACCAGCAACCTGGCGAGCGGCGTGCCGTTTCGCTTTAGCGGCAGCGGCAGCGGCACCAGCTATAGCCTGACCATTAGCCGCGTGGAAGCGGAAGATGCGGCGACCTATTATTGCCAGCAGAGCAACAGCTACCCGCTGACCTTTGGCGGCGGCACCAAACTGGAAATTAAA SEQ ID NO.18

实施例2 单克隆抗体FNA2的制备

1、利用PCR方法扩增抗体FNA2重链可变区序列（氨基酸序列如SEQ ID NO.4所示，核苷酸序列如SEQ ID NO.17所示）轻链可变区序列（氨基酸序列如SEQ ID NO.8，核苷酸序列如SEQ ID NO.18所示），并将其利用分子克隆的方法将片段克隆入表达载体中。

2、将同时含有单克隆抗体轻链以及重链基因的载体转染进哺乳动物细胞中，进行表达。

3、收集表达上清，利用GE公司的Protein A FF蛋白柱进行纯化。

4、用pH3.0的柠檬酸缓冲液洗脱，收集流出液，并立即用1mol/L pH 8.5 TRIS-HCL缓冲液中和，用pH7.2，0.01mol/L的PBS透析72h，0.22μm滤膜过滤除菌。

5、利用SDS-PAGE和Western Blot实验检验抗体的表达及纯化情况，以及利用BCA方法检测纯化抗体浓度，4℃保存。

6、结果如图1所示，证实得到较纯蛋白，并可清察到解链后的抗体轻、重链。

实施例3 流式检测FNA2与H1N1 NA抗原以及H5N1 NA抗原的结合

1、步骤

按照Lipo3000转染试剂说明书，将H1N1 NA表达质粒以及H5N1 NA表达质粒分别转染进293T细胞，48hr后收集细胞加入抗体FNA2（5 μg/mL）孵育， 4℃ 避光30 min ，流式洗液清洗两遍后，加入二抗进行标记（anti-human IgG-HRP），4℃ 避光孵育30 min，流式洗液清洗两遍后，重悬于1% 的多聚甲醛，进行流式细胞检测。

2、结果

结果分别如图2和图3所示，抗体FNA2能有效地结合甲型流感病毒H1N1和H5N1的NA抗原。

实施例4 抑制假病毒释放实验

1、步骤

将24孔板中的293T细胞培养长至80%；将H5N1 HA以及NA表达质粒与pNL-4.3-luc以1：1:2的比例利用转染试剂lipoamine3000共转染进293T细胞中；转染6 h后，换用新鲜的完全DMEM培养基，在相应培养孔添加5 μg/mL或者50 μg/mL FNA2，同时设置未加抗体孔对照，继续培养48h后，分别收集不同处理孔的细胞培养上清，3000 rpm/min离心10 min，用0.45 μm的滤膜过滤后，感染24孔板中的293T细胞。48h后，裂解细胞测荧光素酶活性（RLU）。

2、结果

病毒的检测结果如图4所示，制备的含荧光素酶报告基因的H5N1假病毒颗粒上清感染293T细胞后，293T细胞产生荧光。FNA2在低浓度下（5 mg/L）即能有效阻断细胞膜表面NA活性，从而抑制包装的假病毒从细胞表面释放，继而抑制其进一步感染靶细胞, 显示为靶细胞胞内荧光值显著降低。

上述实施例的说明只是用于理解本发明的方法及其核心思想。应当指出，对于本领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明原理的前提下，还可以对本发明进行若干改进和修饰，这些改进和修饰也将落入本发明权利要求的保护范围内。

序列表

<110> 中国人民解放军军事科学院军事医学研究院

<120> 针对甲型流感病毒N1亚型NA蛋白的抗体及其应用

<141> 2022-03-10

<160> 18

<170> SIPOSequenceListing 1.0

<210> 1

<211> 5

<212> PRT

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 1

Thr Tyr Ala Met Asn

1 5

<210> 2

<211> 19

<212> PRT

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 2

Arg Ile Arg Ser Lys Ser Asn Asn Trp Ala Thr Phe Tyr Ala Asp Ser

1 5 10 15

Val Lys Asp

<210> 3

<211> 13

<212> PRT

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 3

Pro Ser Ile Tyr Ser Tyr Ala Ser Gly Tyr Leu Asp Leu

1 5 10

<210> 4

<211> 124

<212> PRT

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 4

Gln Val Lys Leu Gln Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Lys Gly

1 5 10 15

Ser Leu Lys Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Ser Phe Tyr Thr Tyr

20 25 30

Ala Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val

35 40 45

Ala Arg Ile Arg Ser Lys Ser Asn Asn Trp Ala Thr Phe Tyr Ala Asp

50 55 60

Ser Val Lys Asp Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asp Ser Gln Ser Met

65 70 75 80

Leu Tyr Leu Gln Met His Asn Leu Lys Thr Asp Asp Thr Ala Met Tyr

85 90 95

Tyr Cys Val Arg Pro Ser Ile Tyr Ser Tyr Ala Ser Gly Tyr Leu Asp

100 105 110

Leu Trp Gly Ala Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser

115 120

<210> 5

<211> 10

<212> PRT

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 5

Arg Ser Ser Ser Ser Val Ser Tyr Val His

1 5 10

<210> 6

<211> 7

<212> PRT

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 6

Ala Thr Ser Asn Leu Ala Ser

1 5

<210> 7

<211> 9

<212> PRT

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 7

Gln Gln Trp Asn Ser Ser Pro Leu Thr

1 5

<210> 8

<211> 106

<212> PRT

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 8

Gln Ile Val Leu Ser Gln Ser Pro Ala Ile Leu Ser Ala Ser Pro Gly

1 5 10 15

Glu Lys Val Thr Met Thr Cys Arg Ser Ser Ser Ser Val Ser Tyr Val

20 25 30

His Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Ser Ser Pro Lys Pro Trp Ile Tyr

35 40 45

Ala Thr Ser Asn Leu Ala Ser Gly Val Pro Phe Arg Phe Ser Gly Ser

50 55 60

Gly Ser Gly Thr Ser Tyr Ser Leu Thr Ile Ser Arg Val Glu Ala Glu

65 70 75 80

Asp Ala Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Trp Asn Ser Ser Pro Leu Thr

85 90 95

Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys

100 105

<210> 9

<211> 30

<212> PRT

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 9

Gln Val Lys Leu Gln Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Lys Gly

1 5 10 15

Ser Leu Lys Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Ser Phe Tyr

20 25 30

<210> 10

<211> 14

<212> PRT

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 10

Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val Ala

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<210> 11

<211> 32

<212> PRT

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 11

Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asp Ser Gln Ser Met Leu Tyr Leu Gln

1 5 10 15

Met His Asn Leu Lys Thr Asp Asp Thr Ala Met Tyr Tyr Cys Val Arg

20 25 30

<210> 12

<211> 11

<212> PRT

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 12

Trp Gly Ala Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser

1 5 10

<210> 13

<211> 23

<212> PRT

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 13

Gln Ile Val Leu Ser Gln Ser Pro Ala Ile Leu Ser Ala Ser Pro Gly

1 5 10 15

Glu Lys Val Thr Met Thr Cys

20

<210> 14

<211> 15

<212> PRT

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 14

Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Ser Ser Pro Lys Pro Trp Ile Tyr

1 5 10 15

<210> 15

<211> 32

<212> PRT

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 15

Gly Val Pro Phe Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Ser Tyr Ser

1 5 10 15

Leu Thr Ile Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Ala Ala Thr Tyr Tyr Cys

20 25 30

<210> 16

<211> 10

<212> PRT

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 16

Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys

1 5 10

<210> 17

<211> 372

<212> DNA

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 17

caggtgaaac tgcaggaaag cggcagcggc ctggtgcagc cgaaaggcag cctgaaactg 60

agctgcgcgg cgagcggctt taacttttac acctatgcga tgaactgggt gcgccaggcg 120

ccgggcaaag gcctggaatg ggtggcgcgc attcagagca aaagcaacaa ctccgcgacc 180

tattatgcgg atagcgtgaa agatcgcttt accattagcc gcgatgatag ccagagcatg 240

ctgtatctgc agatgcataa cctgaaaacc gatgataccg cgatgtatta ttgcgtgcgc 300

ccgagcactt attattatgc gagcggctat ctggatttct ggggcgcggg caccaccgtg 360

accgtgagca gc 372

<210> 18

<211> 318

<212> DNA

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 18

cagattgtgc tgagccagag cccggcgatt ctgagcgcga gcccgggcga aaaagtgacc 60

atgacctgcc gcggcagcag cagcgtgaac tatgtgcatt ggtatcagca gaaaccgggc 120

agcagcccga aaccgtggat ttatgcgacc agcaacctgg cgagcggcgt gccgtttcgc 180

tttagcggca gcggcagcgg caccagctat agcctgacca ttagccgcgt ggaagcggaa 240

gatgcggcga cctattattg ccagcagagc aacagctacc cgctgacctt tggcggcggc 300

accaaactgg aaattaaa 318

Claims (10)

1.一种靶向甲型流感病毒N1亚型NA蛋白的抗体或其抗原结合部分，其特征在于，其包含：SEQ ID NO.1所示的重链可变区CDR1、SEQ ID NO.2所示的重链可变区CDR2、SEQ IDNO.3所示的重链可变区CDR3、SEQ ID NO.5所示的轻链可变区CDR1、SEQ ID NO.6所示的轻链可变区CDR2、SEQ ID NO.7所示的轻链可变区CDR3。

2.根据权利要求1所述的抗体或其抗原结合部分，其特征在于，所述重链可变区还包括重链可变区框架区FR1、FR2、FR3和FR4；轻链可变区还包括轻链可变区框架区FR1、FR2、FR3和FR4，其中，重链可变区框架区FR1、FR2、FR3和FR4的氨基酸序列如SEQ ID NO.9、10、11、12所示；轻链可变区框架区FR1、FR2、FR3和FR4的氨基酸序列如SEQ ID NO.13、14、15、16所示。

3.根据权利要求1所述的抗体或其抗原结合部分，其特征在于，所述抗体或其抗原结合部分包含：

1）重链可变区，其氨基酸序列如SEQ ID NO.4所示；

2）轻链可变区，其氨基酸序列如SEQ ID NO.8所示。

4.根据权利要求1-3任一项所述的抗体或其抗原结合部分，其特征在于，所述抗体是人源化抗体。

5.一种核酸分子，其特征在于，所述核酸分子包含编码权利要求1-3中任一项所述的抗体或其抗原结合部分的核酸序列。

6.根据权利要求5所述的核酸分子，其特征在于，编码重链可变区的核酸序列如SEQ IDNO.17所示；编码轻链可变区的核酸序列如SEQ ID NO.18所示。

7.一种表达载体，其特征在于，其包含权利要求5或6所述的核酸分子。

8.一种宿主细胞，其特征在于，其包含权利要求5或6所述的核酸分子，或权利要求7所述的表达载体。

9.一种产品，所述产品包括以下任一项所述的产品：

1）所述产品是免疫缀合物，所述免疫缀合物包括权利要求1-3中任一项所述的抗体或其抗原结合部分；

2）所述产品是药物组合物，所述药物组合物包括权利要求1-3中任一项所述的抗体或其抗原结合部分、权利要求5或6所述的核酸分子或权利要求7所述的表达载体；

3）所述产品是试剂盒，所述试剂盒包括权利要求1-3中任一项所述的抗体或其抗原结合部分、权利要求5或6所述的核酸分子、权利要求7所述的表达载体或权利要求8所述的宿主细胞。

10.如下任一项所述的应用，其特征在于，包括：

1）权利要求1-3中任一项所述的抗体或其抗原结合部分在制备甲型流感病毒检测产品或感染诊断产品中的应用；

2）权利要求1-3中任一项所述的抗体或其抗原结合部分在制备防治甲型流感病毒感染的药物组合物中的应用；

3）权利要求5或6所述的核酸分子在制备防治甲型流感病毒感染的药物组合物中的应用；

4）权利要求7所述的表达载体在制备防治甲型流感病毒感染的药物组合物中的应用；

5）权利要求8所述的宿主细胞在制备防治甲型流感病毒感染的药物组合物中的应用；

6）权利要求9中所述的药物组合物在制备防治甲型流感病毒感染疾病的药物中的应用；

7）权利要求9中所述的免疫缀合物在制备甲型流感病毒检测产品或感染诊断产品中的应用；

所述甲型流感病毒为H1N1、H5N1。

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