CN114349732B - 石蒜碱衍生物中间体及其应用、石蒜碱衍生物hyl78的制备方法 - Google Patents

Abstract

本发明涉及一种石蒜碱衍生物中间体及其应用、石蒜碱衍生物HYL78的制备方法。该石蒜碱衍生物中间体，可应用于制备石蒜碱衍生物HYL78，石蒜碱衍生物中间体(4)通过闭环反应得到石蒜碱衍生物中间体(5)，石蒜碱衍生物中间体(5)与乙烯基试剂进行交叉偶联反应后，进一步通过加氢还原反应就得到石蒜碱衍生物HYL78，原料易得、制备过程工艺条件易控，有利于石蒜碱衍生物HYL78的大规模生产。

Description

石蒜碱衍生物中间体及其应用、石蒜碱衍生物HYL78的制备 方法

技术领域

本发明涉及化合物合成技术领域，特别涉及一种石蒜碱衍生物中间体及其应用、石蒜碱衍生物HYL78的制备方法。

背景技术

Wnt信号转导途径是一类在生物体进化过程中高度保守的信号转导途径，调节控制着众多生命活动过程。在动物体早期发育中，Wnt信号决定背腹轴的形成、胚层建立、体节分化、组织或器官形成等一系列重要事件，并直接控制着增殖、分化、极化、凋亡与抗凋亡等细胞的命运。Wnt蛋白的十几个成员通过与细胞膜上不同的受体作用参与了不同的信号转导途径，其中β-catenin/TCF转录复合物的经典Wnt信号转导途径(Wnt/β-catenin途径)与众多的癌症和疾病有关系，例如骨质疏松、神经退化和糖尿病等。因此，调节失控的Wnt/β-catenin信号转导途径可以作为治疗与Wnt/β-catenin信号途径相关疾病的一个有效方法。

石蒜碱衍生物HYL78可作为Wnt/β-catenin转导途径的小分子激活剂，化学名称为N-甲基-4-乙基-5,6-二氢-8,9-二氧亚甲基-菲啶。有研究表明：石蒜碱衍生物HYL78通过作用于Axin的DIX域，增强了Axin和LRP6的协同作用，从而促进LRP6磷酸化和Wnt信号转导，并揭示了其在造血干细胞移植中应用的潜力。

然而，技术人员聚焦于研究HYL78的具体作用机理，对其合成制备涉及甚少，传统的制备方法需要从先从石蒜碱植物中提取石蒜碱(Lycorine)，再进一步通过化学反应制备HYL78，整个过程工艺复杂，成本较高，不利于大规模生产。

发明内容

基于此，有必要提供一种石蒜碱衍生物中间体及其应用、石蒜碱衍生物HYL78的制备方法。该石蒜碱衍生物HYL78的制备方法直接以简单易得的原料通过化学合成就制得石蒜碱衍生物HYL78。

本发明的一方面，提供一种石蒜碱衍生物中间体，所述石蒜碱衍生物中间体如式(4)～(5)任一所示：

其中，R₁选自卤素。

本发明的另一方面，提供如上所述的石蒜碱衍生物中间体的制备方法，包括如下步骤：

将化合物(1)进行N-甲基化反应，制备化合物(2)；

将所述化合物(2)与化合物(3)进行Suzuki偶联反应，制备化合物(4)；

将所述化合物(4)与闭环试剂进行闭环反应，制备化合物(5)；

所述化合物(1)～(5)的结构如下所示：

其中，R₁分别独立地选自卤素；R₂选自硼酸基或硼酸酯基。

在其中一些实施例中，R₁分别独立地选自Cl或Br；和/或

所述R₂选自硼酸基或硼酸频哪醇酯基。

在其中一些实施例中，所述N-甲基化反应在碱性条件下进行，采用的N-甲基化试剂选自碘甲烷、硫酸二甲酯和碳酸二甲酯中的一种或多种，所述N-甲基化反应的温度为0～20℃，时间为0.5h～2h。

在其中一些实施例中，所述Suzuki偶联反应在钯催化剂和碱的作用下进行，所述化合物(2)与所述化合物(3)的物质的量之比为(1～2):1。

在其中一些实施例中，所述闭环反应在路易斯酸的作用下进行，所述化合物(4)与所述闭环试剂的物质的量之比为1:(1～10)，所述闭环试剂选自甲醛或聚甲醛中的一种或多种。

在其中一些实施例中，制备所述化合物(2)的过程中，还包括如下步骤：

采用乙酸乙酯对所述N-甲基化反应的产物进行萃取，然后取有机相浓缩，得到所述化合物(2)；和/或

制备所述化合物(4)的过程中，还包括如下步骤：

将所述Suzuki偶联反应的产物过滤，取滤液浓缩并进行色谱分离，得到所述化合物(4)，所述色谱分离采用的淋洗剂选自石油醚和乙酸乙酯中的一种或多种；和/或

制备所述化合物(5)的过程中，还包括如下步骤：

将所述闭环反应的产物进行反向液相色谱分离，得到所述化合物(5)；所述反向液相色谱分离的流动相为乙腈、水和甲酸的混合液，所述乙腈和所述水的体积比为(15～70):(30～85)，所述甲酸的质量浓度为0.1％。

本发明的又一方面，提供如上所述的石蒜碱衍生物中间体在制备石蒜碱衍生物HYL78中的应用。

本发明的又一方面，提供一种石蒜碱衍生物HYL78的制备方法，包括如下步骤：

采用如权利要求2～7任一项所述的石蒜碱衍生物中间体的制备方法制备化合物5；

将所述化合物(5)与乙烯基试剂进行交叉偶联反应，制备化合物(6)；

将所述化合物(6)进行加氢还原反应，制备石蒜碱衍生物HYL78；

所述化合物(5)和所述石蒜碱衍生物HYL78的结构如下所示：

在其中一些实施例中，所述交叉偶联反应在钯催化剂、磷配体和碱的作用下进行，所述乙烯基试剂选自乙烯三氟硼酸钾、乙烯基硼酸频哪醇酯和乙烯基三丁基锡中的一种或多种，所述化合物(5)与所述乙烯基试剂的物质的量之比为1:(1～10)。

在其中一些实施例中，制备所述化合物(6)的过程中，还包括如下步骤：

采用乙酸乙酯萃取所述交叉偶联反应的产物，取有机相浓缩并进行色谱分离，得到所述化合物(6)；所述色谱分离采用的淋洗剂选自石油醚和乙酸乙酯中的一种或多种。

与现有技术相比较，本发明具有如下有益效果：

上述石蒜碱衍生物HYL78的制备方法中，直接以简单易得的原料通过化学合成就制得石蒜碱衍生物HYL78，原料简单、便宜、易得，制备过程工艺条件易控，有利于石蒜碱衍生物HYL78的大规模生产。

上述石蒜碱衍生物中间体，可应用于制备石蒜碱衍生物HYL78，石蒜碱衍生物中间体(4)通过闭环反应得到石蒜碱衍生物中间体(5)，石蒜碱衍生物中间体(5)与乙烯基试剂进行交叉偶联反应后，进一步通过加氢还原反应就得到石蒜碱衍生物HYL78，制备过程工艺条件易控，有利于石蒜碱衍生物HYL78的大规模生产。

附图说明

图1为实施例1制得的2,6-二溴-N-甲基苯胺的核磁氢谱图；

图2为实施例1制得的化合物4的核磁氢谱图；

图3为实施例1制得的化合物5的核磁氢谱图；

图4为实施例1制得的化合物6的核磁氢谱图；

图5为实施例1制得的HYL78的核磁氢谱图；

图6为实施例2制得的化合物4的质谱图；

图7为实施例3制得的化合物4的质谱图；

图8为实施例4制得的化合物5的质谱图；

图9为实施例5制得的化合物6的质谱图。

具体实施方式

以下结合具体实施例对本发明作进一步详细的说明。本发明可以以许多不同的形式来实现，并不限于本文所描述的实施方式。相反地，提供这些实施方式的目的是使对本发明公开内容理解更加透彻全面。

除非另有定义，本文所使用的所有的技术和科学术语与属于本发明的技术领域的技术人员通常理解的含义相同。本文中在本发明的说明书中所使用的术语只是为了描述具体的实施例的目的，不是旨在于限制本发明。本文所使用的术语“和/或”包括一个或多个相关的所列项目的任意的和所有的组合。

石蒜碱衍生物HYL78，又称N-甲基-4-乙基-5,6-二氢-8,9-二氧亚甲基-菲啶，结构如下所示：

传统的制备HYL78的方法中，一般需要从先从石蒜碱植物中提取石蒜碱(Lycorine)，再进一步通过化学反应制备HYL78，从石蒜碱植物中提取石蒜碱需经过酸解或酶解，然后再经复杂的提纯得到石蒜碱(Lycorine)，石蒜碱(Lycorine)还需要经过一系列复杂的化学反应，才能得到石蒜碱衍生物HYL78，整个过程工艺复杂，成本较高，不利于大规模生产。

本发明的技术人员打破现有技术的禁锢，创造性地提出以简单易得的原料直接通过化学合成制备石蒜碱衍生物HYL78，在经过大量的创造性实验探究后，获得了本发明中的石蒜碱衍生物中间体及其应用、石蒜碱衍生物HYL78的制备方法。

本发明的一实施方式提供一种石蒜碱衍生物HYL78的制备方法，具体包括如下步骤S10～S50。

步骤S10、将化合物(1)进行N-甲基化反应，制备化合物(2)。

步骤S10、将上述化合物(2)与化合物(3)进行Suzuki偶联反应，制备化合物(4)。

步骤S10、将上述化合物(4)与闭环试剂进行闭环反应，制备化合物(5)。

步骤S10、将上述化合物(5)与乙烯基试剂进行交叉偶联反应，制备化合物(6)。

步骤S10、将上述化合物(6)进行加氢还原反应，制备石蒜碱衍生物HYL78。

上述化合物(1)～(6)及石蒜碱衍生物HYL78的结构如下所示：

其中，R₁分别独立地选自卤素；R₂选自硼酸基或硼酸酯基。

上述石蒜碱衍生物HYL78的制备方法中，直接以简单易得的原料通过化学合成就制得石蒜碱衍生物HYL78，原料简单、便宜、易得，制备过程工艺条件易控，有利于石蒜碱衍生物HYL78的大规模生产。

需要说明的是，上述R₁每次出现时，分别独立地选自卤素原子，是指在同一分子中，具有两个R₁时，可以分别独立地选自卤素原子。具体在上述制备方法中，是指在化合物(1)中，R₁每次出现时，分别独立地选自卤素原子。

可理解，上述化合物(3)中，R₂与其他部分是通过R₂中的硼原子连接，换言之，硼酸基或硼酸酯基中的硼原子与化合物(3)中的苯环连接。

在其中一些实施例中，R₁每次出现，分别独立地选自Cl或Br。

在其中一些实施例中，R₁每次出现，相同地选自Cl或Br。

在一具体示例中，R₁每次出现，均选自Br。此时，化合物(1)为2,6-二溴苯胺。

在其中一些实施例中，上述R₂选自硼酸基或硼酸频哪醇酯基。进一步地，结构如下任一所示：

*为连接位点。

在其中一些实施例中，上述步骤S10中，N-甲基化反应在碱性条件下进行，采用的N-甲基化试剂选自碘甲烷，硫酸二甲酯和碳酸二甲酯中的一种或多种，N-甲基化反应的温度为0～20℃时间为0.5h～2h。

在其中一些实施例中，化合物(1)与N-甲基化试剂的物质的量之比为1:(1～1.5)；进一步地，化合物(1)与N-甲基化试剂的物质的量之比为1:1。

在其中一些实施例中，通过在上述N-甲基化反应的体系中加入碱以形成碱性条件；进一步地，碱为无机碱。

在其中一些实施例中，上述碱选自碳酸钾、碳酸钠、钠氢、氢氧化钾、氢氧化钠和1.8-二氮杂二环[5.4.0]十一烷-7-烯中的一种或多种；进一步地，化合物(1)与碱的物质的量之比为1:(1～1.5)，优选1:1。

在其中一些实施例中，溶剂选自四氢呋喃，N,N-二甲基甲酰胺，二甲基亚砜，甲苯，正己烷，乙腈，1,4-二氧六环，水的一种或多种，优选为四氢呋喃

在其中一些实施例中，上述N-甲基化反应的溶剂选自四氢呋喃、N,N-二甲基甲酰胺、二甲基亚砜、甲苯、正己烷、乙腈、1,4-二氧六环和水的一种或多种，优选为四氢呋喃。

进一步地，化合物(1)与溶剂的体积比为1:(2～20)；在一具体示例中，化合物(1)与溶剂的体积比为1:10。

在其中一些实施例中，上述步骤S20中，Suzuki偶联反应在钯催化剂和碱的作用下进行，化合物(2)与化合物(3)的物质的量之比为(1～2):1。

在一优选的实施例中，化合物(2)与化合物(3)的物质的量之比为1.05:1。

上述步骤S20中，钯催化剂选自四三苯基膦钯、醋酸钯和1,1'-双二苯基膦二茂铁二氯化钯中的一种或多种，优选为1,1'-双二苯基膦二茂铁二氯化钯。

进一步地，化合物(3)与钯催化剂的物质的量之比为1:(0.01～0.2)，优选为1:0.1。

上述步骤S20中，碱选自碳酸钾、碳酸钠、磷酸钾和碳酸铯中的一种或多种；具体为碳酸钠。

在其中一些实施例中，化合物(3)与碱的物质的量之比为1:(1～3)。

在其中一些实施例中，上述步骤S20中，Suzuki偶联反应的溶剂选自四氢呋喃、N,N-二甲基甲酰胺、二甲基亚砜、甲苯、正己烷、乙腈、1,4-二氧六环和水中的一种或多种。

进一步地，溶剂采用有机溶剂与水的混合液，有机溶剂和水的体积比为(3～10):1，优选为5:1；优选为1,4-二氧六环和水的环合物液。

进一步地，化合物(3)与溶剂的体积比为1:(3～10)，优选为1:5。

在其中一些实施例中，上述步骤S20中，Suzuki偶联反应在回流条件下进行。

在一具体的示例中，上述步骤S20中，Suzuki偶联反应的时间为4h，温度为90℃。

在其中一个实施例中，上述步骤S30中，闭环反应在路易斯酸的作用下进行，化合物(4)与闭环试剂的物质的量之比为1:(1～10)，闭环试剂选自甲醛或聚甲醛中的一种或多种。

在一优选的实施例中，化合物(4)与闭环试剂的物质的量之比为1:6。

化合物(4)与路易斯酸的物质的量之比选自1:(1～5)，优选1:1.5。

在其中一些实施例中，路易斯酸选自三氟化硼乙醚、三氯化铝和三氯氧磷中的一种或多种，优选为三氟化硼乙醚。

在其中一个实施例中，上述步骤S30中，闭环反应的溶剂选自四氢呋喃，N,N-二甲基甲酰胺、二甲基亚砜、甲苯、正己烷、乙腈、1,4-二氧六环中的一种或多种。

在一优选的实施例中，溶剂为乙腈。

在其中一些实施例中，上述闭环反应的时间为0.5h～10h，温度为55℃～100℃。

进一步地，化合物(4)和溶剂的体积比为1:(20～100)，优选为1:50。

在其中一些实施例中，上述步骤S40中，交叉偶联反应在钯催化剂、磷配体和碱的作用下进行，乙烯基试剂选自乙烯三氟硼酸钾、乙烯基硼酸频哪醇酯和乙烯基三丁基锡中的一种或多种，化合物(5)与乙烯基试剂的物质的量之比为1:(1～10)。

在一具体的示例中，乙烯基试剂为乙烯三氟硼酸钾；进一步地，化合物(5)与乙烯基试剂的物质的量之比为1:5。

进一步地，上述化合物(5)与上述钯催化剂的物质的量为1:(0.01～0.2)，上述化合物(5)与上述磷配体的物质的量为1:(0.01～0.2)。

在一具体的示例中，化合物(5)与上述钯催化剂的物质的量为1:0.1，上述化合物(5)与上述磷配体的物质的量为1:0.1。

在其中一些实施例中，钯催化剂选自三苯基膦钯、醋酸钯和1,1'-双二苯基膦二茂铁二氯化钯中的一种或多种，优选为醋酸钯。

在其中一些实施例中，磷配体选自三苯基膦、叔丁基膦、2-二叔丁基膦-2,4,6-三异丙基联苯和正丁基-二(1-金刚烷基)膦中的一种或多种。

在一具体示例中，上述钯催化剂为醋酸钯，磷配体为正丁基-二(1-金刚烷基)膦。

在其中一些实施例中，上述步骤S40中，碱选自碳酸钾、碳酸钠、磷酸钾和碳酸铯中的一种或多种，优选为碳酸铯。

进一步地，化合物(5)与碱的物质的量之比为1:(1～5)，优选1:3。

在其中一些实施例中，上述步骤S40中，交叉偶联反应采用的溶剂选自四氢呋喃、N,N-二甲基甲酰胺、二甲基亚砜、甲苯、正己烷、乙二醇二甲醚、1,4-二氧六环和水中的一种或多种。

进一步地，溶剂采用有机溶剂与水的混合液，有机溶剂和水的体积比为(3～10):1，优选为5:1；优选为1,4-二氧六环和水的环合物液。

进一步地，化合物(5)与溶剂的体积比为1:(3～10)，优选为1:5。

在其中一些实施例中，交叉偶联反应的时间为3h～12h，温度为50℃～80℃。

在其中一些实施例中，上述N-甲基化反应、Suzuki偶联反应、闭环反应及交叉偶联反应均在保护性气体下进行。

保护性气体可以是氮气或惰性气体。

在其中一些实施例中，步骤S50中，加氢还原反应在加氢催化剂的作用下进行，加氢催化剂可以是本领域常用的加氢催化剂，包括但不限于：铂、钯、镍载体催化剂及骨架镍等。

在其中一些实施例中，加氢还原反应的温度为20℃～40℃。

在其中一些实施例中，在制备化合物(2)的过程中，还包括如下步骤S11。

步骤S11、采用乙酸乙酯对N-甲基化反应的产物进行萃取，然后取有机相浓缩，得到化合物(2)。

进一步通过选择合适的溶剂对N-甲基化反应的产物进行萃取，提高得到的化合物(2)的纯度。

在一具体的示例中，步骤S11中，重复进行萃取步骤3次。

进一步地，步骤S11中，将N-甲基化反应的产物用水稀释，再用乙酸乙酯萃取并重复进行3次，然后合并有机相，用饱和食盐水洗涤有机相后再用无水硫酸钠干燥、过滤，最后将有机相浓缩。

在其中一些实施例中，在制备化合物(4)的过程中，还包括如下步骤S21。

步骤S21、将Suzuki偶联反应的产物过滤，取滤液浓缩并进行色谱分离，得到化合物(4)，色谱分离采用的淋洗剂选自石油醚和乙酸乙酯中的一种或多种。

进一步地，石油醚和乙酸乙酯的体积比为1：(0～0.02)。

在其中一些实施例中，在制备化合物(5)的过程中，还包括如下步骤S31。

步骤S31、将闭环反应的产物进行反向液相色谱分离，得到化合物(5)；反向液相色谱分离的流动相为乙腈、水和甲酸的混合液，乙腈和水的体积比为(15～70):(30～85)，甲酸的质量浓度为0.1％。

需要说明的是，乙腈和水的体积比是以乙腈和水的体积总和为100体积份数为基准计算，即乙腈和水的体积总和：乙腈的体积＝100：(15～70)。甲酸的质量浓度是以混合液的总质量为基准计算。

进一步地，在上述反向液相色谱分离的步骤之前，还包括采用甲醇将闭环反应淬灭，然后浓缩的步骤。

在其中一些实施例中，在制备化合物(6)的过程中，还包括如下步骤S41。

步骤S41、采用乙酸乙酯萃取交叉偶联反应的产物，取有机相浓缩并进行色谱分离，得到化合物(6)；色谱分离采用的淋洗剂选自石油醚和乙酸乙酯中的一种或多种。

进一步通过选择合适的溶剂对交叉偶联反应的产物进行萃取，提高得到的化合物(6)的纯度。

在一具体的示例中，步骤S41中，重复进行萃取步骤3次。

进一步地，步骤S11中，将N-甲基化反应的产物过滤去滤液，再用乙酸乙酯萃取滤液并重复进行3次，然后合并有机相，用饱和食盐水洗涤有机相后再用无水硫酸钠干燥、过滤，最后将有机相浓缩。

进一步地，石油醚和乙酸乙酯的体积比为1：(0～0.02)。

在其中一些实施例中，在制备石蒜碱衍生物HYL78的过程中，还包括如下步骤S51。

步骤S51、将加氢还原反应的产物过滤，取滤液浓缩得到粗品，最后将粗品进行液相色谱分离处理，得到石蒜碱衍生物HYL78。

进一步地，上述液相色谱分离处理中，流动相中乙腈与水的体积比为(52～82):(18～48)，含0.05wt％NH₄HCO₃。

需要说明的是，乙腈和水的体积比是以乙腈和水的体积总和为100体积份数为基准计算，即乙腈与水的体积总和：乙腈的体积＝100：(52～82)。NH₄HCO₃的质量浓度是以流动相的总质量为基准计算。

进一步地，出峰时间为8分钟。

本发明一实施方式还提供一种石蒜碱衍生物中间体，该石蒜碱衍生物中间体如式(4)～(5)任一所示：

其中，R₁选自卤素。

进一步地，本发明一实施方式还提供上石蒜碱衍生物中间体的制备方法，包括上述步骤S10～S30。

本发明一实施方式进一步提供如上石蒜碱衍生物中间体在制备石蒜碱衍生物HYL78中的应用。

上述式(4)～(5)所示石蒜碱衍生物中间体，可应用于制备石蒜碱衍生物HYL78，通过式(4)通过闭环反应得到石蒜碱衍生物中间体(5)，石蒜碱衍生物中间体(5)与乙烯基试剂进行交叉偶联反应后，进一步通过加氢还原反应就得到石蒜碱衍生物HYL78，制备过程工艺条件易控，有利于石蒜碱衍生物HYL78的大规模生产。

下面将结合具体的实施例对本发明进行了说明，但本发明并不局限于下述实施例，应当理解，所附权利要求概括了本发明的范围，在本发明构思的引导下本领域的技术人员应意识到，对本发明的各实施例所进行的一定的改变，都将被本发明的权利要求书的精神和范围所覆盖。

具体实施例

实施例1

(1)化合物(2)的合成，反应过程如下所示：

具体步骤如下：

将2,6-二溴苯胺(10.0g,39.9mmol,1.00eq)、四氢呋喃(100mL)及钠氢(1.67g,41.6mmol,60％purity,1.05eq)于反应器中混合，并于0℃下搅拌反应0.5个小时后，加入碘甲烷(5.66g,39.9mmol,2.48mL,1.00eq)，升温至20℃继续搅拌反应，反应过程中取样进行LCMS监测反应，反应1.5个小时达到终点，反应结束后用水(100mL)淬灭反应液，然后乙酸乙酯萃取(150mL×3次)，然后合并有机相，并用饱和食盐水洗涤后，用无水硫酸钠干燥有机相，最后过滤浓缩得到黄色油状物化合物2，即2,6-二溴-N-甲基苯胺10.6g。

对制得的2,6-二溴-N-甲基苯胺进行核磁氢谱测试，核磁数据如下：

HNMR:(400MHz,CDCl₃)：7.46(d,J＝8.0Hz,2H),6.68(t,J＝8.0Hz,1H),2.97(s,3H)。

2,6-二溴-N-甲基苯胺的核磁谱图如图1所示，需要说的是，在CDCl₃试剂中，2,6-二溴-N-甲基苯胺中氨基上的游离H无法在核磁谱图中显现。

进一步对制得的2,6-二溴-N-甲基苯胺进行质谱测试，结果表明LC-MS:(M+H)+:265.7。

综上测试数据证明：步骤(1)成功制得2,6-二溴-N-甲基苯胺。

对得到的2,6-二溴-N-甲基苯胺进行HPLC测试，结果表明：2,6-二溴-N-甲基苯胺的纯度为91.7％，即得到的2,6-二溴-N-甲基苯胺10.6g中含有36.7mmol2,6-二溴-N-甲基苯胺。进一步按照如下公式计算2,6-二溴-N-甲基苯胺的收率：

收率＝得到的2,6-二溴-N-甲基苯胺的摩尔量/理论应得产物的摩尔量*100％。

结果表明：2,6-二溴-N-甲基苯胺的收率达到91.9％。

(2)化合物4的合成，反应过程如下所示：

具体步骤如下：

在氮气保护下，将3,4-二亚甲二氧苯基硼酸频哪醇酯(4.10g,16.5mmol,1.00eq)、2,6-二溴-N-甲基苯胺(5.01g,17.4mmol,91.7％purity,1.05eq)、1,1'-双二苯基膦二茂铁二氯化钯(1.21g,1.65mmol,0.100eq)、碳酸钠(3.50g,33.1mmol,2.00eq)、1,4-二氧六环(50.0mL)和水(10.0mL)于反应器中混合，然后于90℃下搅拌反应，反应过程中取样进行LCMS监测反应，持续反应4个小时，反应达到终点结束，再将反应混合物过滤，将滤液浓缩得到粗品。最后将粗品过柱(100～200目硅胶,石油醚/乙酸乙酯的体积比＝1/0→100/1→80/1→50/1)，得到2.50g黄色油状物化合物4。

对制得的化合物4进行核磁氢谱测试，核磁数据如下：

HNMR:(400MHz,CDCl₃)δ:7.45(dd,J＝8.0Hz,1.6Hz,1H),7.09(dd,J＝7.6Hz,1.2Hz,1H),6.97(d,J＝1.6Hz,1H),6.92-6.85(m,2H),6.76(t,J＝8.0Hz,1H),6.01(s,2H),2.51(s,3H)。

化合物4的核磁谱图如图2所示，需要说的是，在CDCl₃试剂中，化合物4中氨基上的游离H无法在核磁谱图中显现。

进一步对制得的化合物4进行质谱测试，结果表明LC-MS:(M+H)+:306.0。

综上测试数据证明：步骤(2)成功制得化合物4。

对得到的化合物4进行HPLC测试，结果表明：化合物4的纯度为99.2％，即得到的2.50g化合物4中含有8.10mmol化合物4。进一步按照如下公式计算化合物4的收率：

收率＝制得的化合物4的摩尔量/理论应得产物的摩尔量*100％。

结果表明：化合物4的收率为49.0％。

(3)化合物5的合成，反应过程如下所示：

具体步骤如下：

在氮气保护下，将化合物(4)(500mg,1.63mmol,1.00eq)，多聚甲醛(294mg,9.80mmol,270μL,6.00eq)，三氟化硼乙醚(348mg,2.45mmol,302μL,1.50eq)及乙腈(50.0mL)于反应器中混合物，于55℃下搅拌反应，反应过程中取样进行LCMS监测反应，持续反应10个小时达到反应终点，然后用甲醇(10.0mL)淬灭反应混合物，再浓缩得粗品。最后该粗品用反相制备HPLC(乙腈:水体积＝70:30,含0.1wt％甲酸)得到分离提纯，得到400mg类白色固体的化合物5。

对制得的化合物5进行核磁氢谱测试，核磁数据如下：

HNMR:(400MHz,CDCl₃)δ:7.59(dd,J＝7.6Hz,0.8Hz,1H),7.50(dd,J＝8.0Hz,1.2Hz,1H),7.21(s,1H),7.07(t,J＝8.0Hz,1H),6.74(s,1H),6.01(s,2H),4.11(s,2H),2.66(s,3H)。

化合物5的核磁氢谱图如图3所示。

进一步对制得的化合物5进行质谱测试，结果表明LC-MS:(M+H)+:318.1。

综上测试数据证明：步骤(3)成功制得化合物5。

对得到的化合物5进行HPLC测试，结果表明：化合物5的纯度为98％，即得到的400mg化合物5中含有1.23mmol化合物5。进一步按照如下公式计算化合物5的收率：

收率＝制得的化合物5的摩尔量/理论应得产物的摩尔量*100％

结果表明：化合物5的收率为75.4％。

(4)化合物6的合成，反应过程如下所示：

具体步骤如下：

在氮气保护下，将化合物5(350mg,1.10mmol,1.00eq)，乙烯三氟硼酸钾(737mg,5.50mmol,5.00eq)，碳酸铯(1.08g，3.30mmol,3.00eq)，醋酸钯(24.7mg,110umol,0.100eq)，正丁基-二(1-金刚烷基)膦(39.4mg,110umol,0.100eq)的1,4-二氧六环(5.00mL)和水(1.00mL)的于反应器中混合，再于80℃下搅拌反应，反应过程中取样进行LCMS监测反应，持续反应3个小时达到反应终点，然后将反应混合物过滤，滤液用乙酸乙酯萃取(20mL×3次)，合并有机相并用20mL饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤后将滤液浓缩得到粗品。最后将粗品过柱(100-200目硅胶，石油醚/乙酸乙酯＝1/0→20/1→10/1→5/1)得到290mg黄色油状物，即化合物6。

对制得的化合物6进行核磁氢谱测试，核磁数据如下：

HNMR:(400MHz,DMSO-d6,δ:7.73(dd,J＝8.0Hz,1.2Hz,1H),7.49(dd,J＝7.6Hz,0.8Hz,2H),7.19-7.12(m,2H),6.91(s,1H),6.04(s,2H),5.80(dd,J＝19.2Hz,1.2Hz,1H),5.31(dd,J＝10.8Hz,1.2Hz,1H),3.99(s,2H),2.39(s,3H)。

化合物6的核磁氢谱图如图4所示。

进一步对制得的化合物6进行质谱测试，结果表明LC-MS:(M+H)+:266.1。

综上测试数据证明：步骤(4)成功制得化合物6。

对得到的化合物5进行HPLC测试，结果表明：化合物5的纯度为96.6％，即得到的290mg化合物6中含有1.06mmol化合物6。进一步按照如下公式计算化合物6的收率：

收率＝制得的化合物6的摩尔量/理论应得产物的摩尔量*100％。

结果表明：化合物6的收率为96.0％。

(5)HYL78的合成，反应过程如下所示：

具体步骤如下：

氢气(15psi)氛围下，将化合物6(50.0mg,188μmol,1.00eq),钯碳(25.0mg,10％purity)及二氯甲烷(10.0mL)混合，于20℃下搅拌反应，反应过程中取样进行LCMS监测反应，持续反应3个小时达到反应终点。然后将反应混合物过滤，并将滤液浓缩得到粗品。粗品经HPLC(乙腈:水的体积＝52:48，含0.05wt％NH₄HCO₃，出峰时间8分钟)，得到30.0mg无色油状物，即HYL78。

对制得的HYL78进行核磁氢谱测试，核磁数据如下：

HNMR:(400MHz,CDCl₃)δ:7.50(d,J＝6.0Hz,1H),7.24(s,1H),7.17(t,J＝8.0Hz,2H),6.72(s,1H),5.99(s,2H),3.99(s,2H),2.80(q,J＝7.6Hz,2H),2.47(s,3H),1.31(t,J＝7.6Hz,3H).

HYL78的核磁氢谱图如图5所示

进一步对制得的HYL78进行质谱测试，结果表明LC-MS:(M+H)+:268.1。

综上测试数据证明：步骤(5)成功制得HYL78。

对得到的HYL78进行HPLC测试(254nm,Rt＝2.073min)，结果表明：HYL78的纯度为99.3％，即得到30.0mg HYL78中含有111μmol HYL78。进一步按照如下公式计算HYL78的收率：

收率＝制得的化合物6的摩尔量/理论应得产物的摩尔量*100％

结果表明：HYL78的收率为59.1％。

实施例2

实施例2与实施例1基本相同，不同之处仅在于：实施例2步骤(2)如下：

具体步骤如下：

在氮气保护下，将3,4-二亚甲二氧苯基硼酸频哪醇酯(50.0mg,202umol,1.00eq)、2,6-二溴-N-甲基苯胺(58.2mg,202umol,91.7％purity,1.00eq)、四三苯基膦钯(23.3mg,20.2umol,0.100eq)、碳酸钠(42.7mg,403umol,2.00eq)、1,4-二氧六环(1.0mL)和水(0.2mL)于反应器中混合，然后于90℃下搅拌反应，反应过程中取样进行LCMS监测反应，持续反应10个小时，对反应物进行LCMS检测，结果如下表1所示。

表1

并进一步对各个保留时间的物质做质谱检测，结果表明：保留时间为0.593时的物质为化合物4，具体质谱图如图6所示，LC-MS:(M+H)+:308.0。

结合上述检测结果可知：上述步骤化合物4的产率为33％。

实施例3

实施例3与实施例1基本相同，不同之处仅在于：实施例3步骤(2)如下：

具体步骤如下：

在氮气保护下，将3,4-二亚甲二氧苯基硼酸频哪醇酯(50.0mg,202umol,1.00eq)、2,6-二溴-N-甲基苯胺(58.2mg,202umol,91.7％purity,1.00eq)、醋酸钯(4.52mg,20.2umol,0.100eq)、磷酸钾(85.6mg,403umol,2.00eq)、1,4-二氧六环(1.0mL)和水(0.2mL)于反应器中混合，然后于90℃下搅拌反应，反应过程中取样进行LCMS监测反应，持续反应10个小时，对反应物进行LCMS检测，结果如下表2所示。

表2

并进一步对各个保留时间的物质做质谱检测，结果表明：保留时间为0.599时的物质为化合物4，具体质谱图如图7所示，LC-MS:(M+H)+:306.1

结合上述检测结果可知：上述步骤化合物4的产率为11％。

实施例4

实施例4与实施例1基本相同，不同之处仅在于：实施例4步骤(3)如下：

具体步骤如下：

在氮气保护下，将化合物(4)(100mg,327umol,1.00eq)，多聚甲醛(29.4mg,980umol,27.0uL,3.00eq)，三氟化硼乙醚(69.5mg,490umol,60.5uL,1.50eq)及甲苯(2.0mL)于反应器中混合物，于60℃下搅拌反应，反应过程中取样进行LCMS监测反应，持续反应3个小时，对反应物进行LCMS检测，结果如下表3所示。

表3

并进一步对各个保留时间的物质做质谱检测，结果表明：保留时间为0.583时的物质为化合物5，具体质谱图如图8所示，LC-MS:(M+H)+:319.8。

结合上述检测结果可知：上述步骤化合物5的产率为2.7％。

实施例5

实施例5与实施例1基本相同，不同之处仅在于：实施例5步骤(4)如下：

具体步骤如下：

在氮气保护下，将化合物5(20.0mg,62.9umol,1.00eq)，乙烯三氟硼酸钾(42.1mg,314umol,5.00eq)，碳酸钠(33.3mg,314umol,5.00eq)，1,1'-双二苯基膦二茂铁二氯化钯(4.60mg,6.29umol,0.100eq)的乙二醇二甲醚(0.60mL)和水(0.40mL)的于反应器中混合，再于80℃下搅拌反应，反应过程中取样进行LCMS监测反应，持续反应3个小时，对反应物进行LCMS检测，结果如下表4所示。

表4

并进一步对各个保留时间的物质做质谱检测，结果表明：保留时间为0.308时的物质为化合物6，具体质谱图如图9所示，LC-MS:(M+H)+:266.2。

结合上述检测结果可知：上述步骤化合物6的产率为46％。

以上所述实施例的各技术特征可以进行任意的组合，为使描述简洁，未对上述实施例中的各个技术特征所有可能的组合都进行描述，然而，只要这些技术特征的组合不存在矛盾，都应当认为是本说明书记载的范围。

以上所述实施例仅表达了本发明的几种实施方式，其描述较为具体和详细，但并不能因此而理解为对发明范围的限制。应当指出的是，对于本领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明构思的前提下，还可以做出若干变形和改进，这些都属于本发明的保护范围。因此，本发明的保护范围应以所附权利要求为准，说明书及附图可以用于解释权利要求的内容。

Claims (11)

1.一种石蒜碱衍生物中间体，其特征在于，所述石蒜碱衍生物中间体如式(4)～(5)任一所示：

其中，R₁选自卤素。

2.如权利要求1所述的石蒜碱衍生物中间体的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：

将化合物(1)进行N-甲基化反应，制备化合物(2)；

将所述化合物(2)与化合物(3)进行Suzuki偶联反应，制备化合物(4)；

将所述化合物(4)与闭环试剂进行闭环反应，制备化合物(5)；

所述化合物(1)～(5)的结构如下所示：

其中，R₁分别独立地选自卤素；R₂选自硼酸基或硼酸酯基。

3.根据权利要求2所述的石蒜碱衍生物中间体的制备方法，其特征在于，R₁分别独立地选自Cl或Br；和/或

所述R₂选自硼酸基或硼酸频哪醇酯基。

4.根据权利要求2～3任一项所述的石蒜碱衍生物中间体的制备方法，其特征在于，所述N-甲基化反应在碱性条件下进行，采用的N-甲基化试剂选自碘甲烷、硫酸二甲酯和碳酸二甲酯中的一种或多种，所述N-甲基化反应的温度为0～20℃，时间为0.5h～2h。

5.根据权利要求2～3任一项所述的石蒜碱衍生物中间体的制备方法，其特征在于，所述Suzuki偶联反应在钯催化剂和碱的作用下进行，所述化合物(2)与所述化合物(3)的物质的量之比为(1～2):1。

6.根据权利要求2～3任一项所述的石蒜碱衍生物中间体的制备方法，其特征在于，所述闭环反应在路易斯酸的作用下进行，所述化合物(4)与所述闭环试剂的物质的量之比为1:(1～10)，所述闭环试剂选自甲醛或聚甲醛中的一种或多种。

7.根据权利要求2～3任一项所述的石蒜碱衍生物中间体的制备方法，其特征在于，制备所述化合物(2)的过程中，还包括如下步骤：

采用乙酸乙酯对所述N-甲基化反应的产物进行萃取，然后取有机相浓缩，得到所述化合物(2)；和/或

制备所述化合物(4)的过程中，还包括如下步骤：

将所述Suzuki偶联反应的产物过滤，取滤液浓缩并进行色谱分离，得到所述化合物(4)，所述色谱分离采用的淋洗剂选自石油醚和乙酸乙酯中的一种或多种；和/或

制备所述化合物(5)的过程中，还包括如下步骤：

将所述闭环反应的产物进行反向液相色谱分离，得到所述化合物(5)；所述反向液相色谱分离的流动相为乙腈、水和甲酸的混合液，所述乙腈和所述水的体积比为(15～70):(30～85)，所述甲酸的质量浓度为0.1％。

8.如权利要求1所述的石蒜碱衍生物中间体在制备石蒜碱衍生物HYL78中的应用。

9.一种石蒜碱衍生物HYL78的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：

采用如权利要求2～7任一项所述的石蒜碱衍生物中间体的制备方法制备化合物5；

将所述化合物(5)与乙烯基试剂进行交叉偶联反应，制备化合物(6)；

将所述化合物(6)进行加氢还原反应，制备石蒜碱衍生物HYL78；

所述化合物(5)和所述石蒜碱衍生物HYL78的结构如下所示：

10.根据权利要求9所述的石蒜碱衍生物HYL78的制备方法，其特征在于，所述交叉偶联反应在钯催化剂、磷配体和碱的作用下进行，所述乙烯基试剂选自乙烯三氟硼酸钾、乙烯基硼酸频哪醇酯和乙烯基三丁基锡中的一种或多种，所述化合物(5)与所述乙烯基试剂的物质的量之比为1:(1～10)。

11.根据权利要求9～10任一项所述的石蒜碱衍生物HYL78的制备方法，其特征在于，制备所述化合物(6)的过程中，还包括如下步骤：

采用乙酸乙酯萃取所述交叉偶联反应的产物，取有机相浓缩并进行色谱分离，得到所述化合物(6)；所述色谱分离采用的淋洗剂选自石油醚和乙酸乙酯中的一种或多种。