CN114306243B

CN114306243B - 一种靶向梭型柔性脂质体水凝胶及其制备方法和应用

Info

Publication number: CN114306243B
Application number: CN202210015233.3A
Authority: CN
Inventors: 叶威良; 骞爱荣; 周四元; 何光彬; 韩江帆; 张菲玥; 廖天添; 袁晓峰
Original assignee: Air Force Medical University of PLA
Current assignee: Air Force Medical University of PLA
Priority date: 2022-01-07
Filing date: 2022-01-07
Publication date: 2023-03-28
Anticipated expiration: 2042-01-07
Also published as: CN114306243A

Abstract

本发明公开了一种靶向梭型柔性脂质体水凝胶及其制备方法和应用，该梭型柔性脂质体以DOTAP，DSPE为脂质膜材，以去氧胆酸钠为脂质膜软化剂，以硫酸葡聚糖为巨噬细胞的靶向配体及梭型柔性脂质体的固定剂，以地塞米松为模型药物，制备出兼有主动靶向及对巨噬细胞有特异性响应的梭型柔性脂质体DS‑FLs/DEX，该DS‑FLs/DEX对DEX具有较高的载药量，能够主动识别激活的巨噬细胞，提高DEX的疗效，降低其毒副作用；将DS‑FLs/DEX制备成凝胶剂，可增强其在皮肤上的滞留时间，使用简单方便，降低毒性，能够在皮肤上形成药物储库，使药物持续释放，延长药物作用时间，该方法为类风湿性关节炎的治疗提供新思路。

Description

一种靶向梭型柔性脂质体水凝胶及其制备方法和应用

技术领域

本发明涉及生物医药技术领域，具体涉及一种靶向梭型柔性脂质体水凝胶及其制备方法和应用。

背景技术

类风湿关节炎(rheumatoid arthritis，RA)是一种常见的以对称性、多关节炎为主要表现的慢性、全身性自身免疫性疾病，给患者带来了极大的痛苦，严重降低了患者的生活质量。RA主要侵袭外周关节，滑膜病理为滑膜增生炎性细胞浸润血管翳、侵蚀性软骨及骨组织损伤，导致关节结构破坏畸形和功能丧失。在我国RA患者高达480万，每年新增约15-20万人，患病率呈现随年龄增长而增加的趋势。尽管临床上对RA的治疗手段在不断改进，但目前RA的致残率仍然居高不下。

地塞米松(Dexamethasone，DEX)是一类肾上腺糖皮质激素，已经广泛地运用于治疗各种炎症反应疾病，是一类经典的抗类风湿药物。DEX可以通过干扰巨噬细胞积累，减弱毛细血管通透性，进入细胞的DEX可以抑制炎症基因的转录从而减少促炎细胞因子和趋化因子的分泌以达到治疗RA的目的。然而，长期大剂量、频繁的使用DEX会带来大量的毒副作用，如伤口愈合受损、轻度多毛症、线性生长抑制、骨质疏松、肌病、骨坏死、消化性溃疡等。因此，如何将DEX选择的递送至发病部位进而发挥作用是治疗RA的关键。

透皮给药是一种很有前景的给药方式，它能够克服传统给药方式的缺陷；但皮肤(尤其是表皮层)的天然障碍作用阻碍了药物透皮的输运。目前，化学促透剂(如醇类、酰胺和酯类等)和物理方法(如微针法、超声和电穿孔等)常用于增加皮肤的药物渗透性，但这些方法可能会损伤皮肤且药物透皮效率依然较低。柔性纳米脂质体是一种多功能的靶向药物载体，与传统脂质体相比，其具有高度变形性，可促进药物进入皮肤表皮层和真皮层，将大部分的药物留在皮肤中，减少进入人体血液循环的药物量，在表皮和真皮形成药物库，形成缓释模型，使药物在局部持久治疗。此外，将靶向梭型柔性脂质体制备成凝胶剂，增强柔性脂质体在皮肤上的滞留时间，使用简单方便，成本低，并且提高使用者的顺应性，降低毒性，能够在皮肤上形成药物储库，使药物持续释放，延长药物作用时间。

发明内容

本发明的目的是提供一种经皮给药治疗类风湿性关节炎的新型靶向梭型柔性脂质体水凝胶递送系统的处方组成及应用方案，采用一种新方法将DEX装载进入梭型柔性脂质体内，并用于治疗类风湿性关节炎。DS-FLs/DEX能够通过梭型柔性脂质体的变形性可有效透过皮肤障碍并高效蓄积于关节炎部位，随后在靶向配体DS的驱动下，选择性的被激活的巨噬细胞所摄取，释放DEX，发挥抗炎作用，降低DEX的毒副作用，从而提高DEX治疗类风湿性关节炎的效果。

本发明采用的技术方案是：

一种靶向梭型柔性脂质体水凝胶的其制备方法，具体包括以下步骤：

步骤1，靶向梭型柔性脂质体的制备

步骤1.1，取(2,3-二油酰基-丙基)-三甲基氯化铵、二硬脂酰磷脂酰乙醇胺、胆固醇以及地塞米松于茄形瓶内，随后加入甲醇与三氯甲烷，按照体积比为3:1超声溶解，于40℃条件下旋蒸1h，去除有机溶剂，待瓶壁上形成均匀薄膜后，真空干燥1h，随后放至-20℃冰箱过夜；

步骤1.2，加磷酸缓冲盐溶液与膜软化剂去氧胆酸钠于步骤1.1的茄形瓶内，水化2h，得柔性脂质体初液FLs/DEX；

步骤1.3，取出柔性脂质体初液并置于烧杯内，随后加入含有硫酸葡聚糖水溶液，继续磁力搅拌1h；

步骤1.4，最后反复4次过0.22μm滤膜，即得靶向梭型柔性脂质体DS-FLs/DEX；

步骤2，靶向梭型柔性脂质体水凝胶的制备

步骤2.1，取卡波姆940、甘油、丙二醇于蒸馏水中，静置，然后置水浴温热，备用；

步骤2.2，称取步骤1.4制得的靶向梭型柔性脂质体水溶液，将其倒入步骤2.1制得的凝胶中，不断搅拌，使其溶解；

步骤2.3，最后往步骤2.2制得的凝胶中边滴加三乙醇胺边搅拌，使pH值控制在6.5～7.0，加蒸馏水至所需质量并不断搅拌，冷却至室温即得靶向梭型柔性脂质体水凝胶DS-FLs/DEX@GEL。

进一步地，步骤1.1所述(2,3-二油酰基-丙基)-三甲基氯化铵5-15mg、二硬脂酰磷脂酰乙醇胺1-9mg、胆固醇0.1-1mg、地塞米松1-6mg，甲醇与三氯甲烷3-15mL；

步骤1.2所述磷酸缓冲盐溶液2-25mL，pH7.4，膜软化剂去氧胆酸钠0.5-5mg；

步骤1.3所述硫酸葡聚糖0.5-5mg；

步骤2.1所述卡波姆940为100-500mg、1-5％甘油、1-5％丙二醇，蒸馏水2.5-10mL；

步骤2.2所述梭型柔性脂质体水溶液2.5-12.5mL；

步骤2.3所述加蒸馏水至5-20mL。

一种靶向梭型柔性脂质体水凝胶的其制备方法制备得到的靶向梭型柔性脂质体水凝胶。

一种靶向梭型柔性脂质体水凝胶在经皮给药治疗类风湿性关节炎的应用。

本发明的显著优势和有益效果是：

1、本发明利用薄膜分散法首先制备了阳离子柔性脂质体FLs/DEX，随后利用DS长链柔韧荷负电的特性，将其通过静电吸附的方式固定在普通柔性脂质体表面进而形成梭型靶向柔性脂质体DS-FLs/DEX，并可高效将药物装载于其空心结构中。该脂质体载药量大，变形性高，皮肤穿透能力强，适用于皮肤渗透给药。

2、本发明利用DS能与激活的巨噬细胞表面清道夫受体相结合的特点，构建了一种能够高效穿过皮肤屏障，将DEX选择性递送到炎症关节处激活的巨噬细胞内，用于精准治疗类风湿性关节炎，降低毒副作用，提高对类风湿性关节炎的治疗效果。DS-FLs/DEX的粒径为111.5nm，电位为4.66mV，DEX载药量为11.4％。

附图说明

图1为实施例1DS-FLs/DEX的粒径，(A)DS-FLs/DEX的粒径分布图；(B)DS-FLs/DEX的透射电镜图。

图2为实施例1DS-FLs/DEX在不同介质中的稳定性，(A)DS-FLs/DEX的粒径稳定性；(B)DS-FLs/DEX的zeta电位稳定性，其中n＝3。

图3为实施例1DS-FLs/DEX的变形性考察，其中n＝3。

图4为实施例1DS-FLs/DEX在不同pH的PBS缓冲液中累积释放DEX的动力学曲线，其中n＝3，*P<0.05，与pH7.4相比。

图5为实施例1DS-FLs/DEX在RAW264.7细胞内的摄取情况。

图6为实施例1DS-FLs/DEX对RAW264.7细胞相关炎性因子的抑制作用，n＝3，*P<0.05，与DEX相比；^#P<0.05，与Control相比。

图7为实施例1DS-FLs/DEX@GEL穿透皮肤的效率，n＝3，*P<0.05，与DEX@GEL相比。

图8为实施例1DS-FLs/DEX@GEL治疗后各组大鼠的足趾厚度，n＝5，*P<0.05，与DEX@GEL相比。

图9为实施例1DS-FLs/DEX@GEL治疗后各组大鼠的临床评分，n＝5，*P<0.05，与DEX@GEL相比。

图10为实施例1DS-FLs/DEX@GEL治疗后各组大鼠关节处炎性因子水平，n＝5，*P<0.05，与DEX@GEL相比。

具体实施方式

步骤1，靶向梭型柔性脂质体(DS-FLs/DEX)的制备

步骤1.1，取5-15mg的(2,3-二油酰基-丙基)-三甲基氯化铵(DOTAP)、1-9mg二硬脂酰磷脂酰乙醇胺(DSPE)、0.1-1mg胆固醇(CHOL)以及1-6mg地塞米松(DEX)于茄形瓶内，随后加入3-15mL甲醇与三氯甲烷，按照体积比为3:1超声溶解，于40℃条件下旋蒸1h，去除有机溶剂，待瓶壁上形成均匀薄膜后，真空干燥1h，随后放至-20℃冰箱过夜；

步骤1.2，加2-25mL的磷酸缓冲盐溶液(PBS，pH7.4)与0.5-5mg的膜软化剂去氧胆酸钠(NaDC)于步骤1.1的茄形瓶内，水化2h，得柔性脂质体初液FLs/DEX；

步骤1.3，取出柔性脂质体初液并置于烧杯内，随后加入含有0.5-5mg的硫酸葡聚糖(DS)水溶液，继续磁力搅拌1h；

步骤2，靶向梭型柔性脂质体水凝胶(DS-FLs/DEX@GEL)的制备

步骤2.1，取100-500mg的卡波姆940、1-5％甘油、1-5％丙二醇于2.5-10mL蒸馏水中，静置，然后置水浴温热，备用；

步骤2.2，称取步骤1.4制得的2.5-12.5mL的梭型柔性脂质体水溶液，将其倒入步骤2.1制得的凝胶中，不断搅拌，使其溶解；

步骤2.3，最后往步骤2.2制得的凝胶中边滴加三乙醇胺边搅拌，使pH值控制在6.5～7.0，加蒸馏水至5-20mL并不断搅拌，冷却至室温即得靶向梭型柔性脂质体水凝胶DS-FLs/DEX@GEL。

通过以上一种靶向梭型柔性脂质体水凝胶的其制备方法制备可制得靶向梭型柔性脂质体水凝胶。

通过以上一种靶向梭型柔性脂质体水凝胶的其制备方法制备制得的靶向梭型柔性脂质体水凝胶可经皮给药治疗类风湿性关节炎。

实施例1

步骤1，靶向梭型柔性脂质体(DS-FLs/DEX)的制备

步骤1.1，取5mg的(2,3-二油酰基-丙基)-三甲基氯化铵(DOTAP)、3mg二硬脂酰磷脂酰乙醇胺(DSPE)、0.5mg胆固醇(CHOL)以及3mg地塞米松(DEX)于茄形瓶内，随后加入6mL甲醇与三氯甲烷，按照体积比为3:1超声溶解，于40℃条件下旋蒸1h，去除有机溶剂，待瓶壁上形成均匀薄膜后，真空干燥1h，随后放至-20℃冰箱过夜；

步骤1.2，加5mL的磷酸缓冲盐溶液(PBS，pH7.4)与1.5mg的膜软化剂去氧胆酸钠(NaDC)于步骤1.1的茄形瓶内，水化2h，得柔性脂质体初液FLs/DEX；

步骤1.3，取出柔性脂质体初液并置于烧杯内，随后加入含有2mg的硫酸葡聚糖(DS)水溶液，继续磁力搅拌1h；

步骤2，靶向梭型柔性脂质体水凝胶(DS-FLs/DEX@GEL)的制备

步骤2.1，取250mg的卡波姆940、5％甘油、2％丙二醇于5mL蒸馏水中，静置，然后置水浴温热，备用；

步骤2.2，称取步骤1.4制得的4mL的梭型柔性脂质体水溶液，将其倒入步骤2.1制得的凝胶中，不断搅拌，使其溶解；

步骤2.3，最后往步骤2.2制得的凝胶中边滴加三乙醇胺边搅拌，使pH值控制在6.8，加蒸馏水至10mL并不断搅拌，冷却至室温即得靶向梭型柔性脂质体水凝胶DS-FLs/DEX@GEL。

1、DS-FLs/DEX的粒径和电位表征

称取一定量DS-FLs/DEX，加入1.5mL蒸馏水溶解，采用zeta电位及激光粒度测定仪测定称的粒径、zeta电位及多分散系数(PDI)。采用纳米粒度及zeta电位分析仪测定DS-FLs/DEX的粒径与电位，结果如图1(A)和表1所示。DS-FLs/DEX的粒径为111.5nm，电位为4.66mV，DEX载药量为11.4％。

表1 DS-FLs/DEX的表征

取DS-FLs/DEX，加蒸馏水溶解后，用2％磷钨酸溶液负染，滴于铜网上，自然晾干，在透射电镜下观察形态。DS-FLs/DEX的外观形态如图1(B)所示，TEM结果看出DS-FLs/DEX呈梭型，且能够均一分布。

2、DS-FLs/DEX稳定性考察

称取一定量DS-FLs/DEX，分别分散在蒸馏水、PBS(pH7.4)、10％FBS溶液中，通过zeta电位及激光粒度测定仪测定DS-FLs/DEX在上述介质中的稳定性。DS-FLs/DEX的稳定性实验结果如图2所示，图2(A)为DS-FLs/DEX的粒径稳定性；图2(B)为DS-FLs/DEX的zeta电位稳定性，其中n＝3。在蒸馏水、PBS缓冲液、10％FBS溶液中，DS-FLs/DEX的粒径和zeta电位在8天内均没有显著增加，提示在上述介质中，DS-FLs/DEX在8天内保持稳定。

3、DS-FLs/DEX变形性考察

称取一定量DS-FLs/DEX，加水稀释后，在一定压力和时间下挤压通过50nm的微孔滤膜，测定滤液体积评估柔性脂质体的变形性。柔性脂质体的变形性考察如图3所示，其中n＝3。粒径大小为100nm以上的FLs/DEX可以较好的通过50nm的滤膜，说明其具有较好的变形性；当在柔性脂质体FLs/DEX外围吸附DS制备成梭型柔性脂质体DS-FLs/DEX后，其仍能保持良好的变形性能，与FLs/DEX组的变形性能比较无明显差异。

4、DS-FLs/DEX载药量的测定

色谱柱为ExtendC18(5μm，4.6×250)，检测波长为240nm，流动相组成为乙腈/水＝50/50(v/v)，流速：1.0mL/min，进样量：20μl，柱温：50℃。称取DS-FLs/DEX冻干粉10mg，加入1mL甲醇，超声2min，0.22μm微孔滤膜过滤后，按照上述色谱条件，进样20μl，记录峰面积，根据工作曲线计算DEX的浓度，计算出DS-FLs/DEX中DEX的载药量。结果如表1所示，DS-FLs/DEX中DEX的载药量为11.4％。

5、DS-FLs/DEX在不同介质中的释药特性

称取一定量的DS-FLs/DEX，分散在不同pH(5.0、7.4)的PBS缓冲溶液中，移至截留分子量为5000Da的透析袋中，置于60mL相应pH的PBS缓冲溶液中，37℃恒温透析，转速100rpm。在固定的时间点，取出200μl释放介质，并补加新的释放介质。采用HPLC测定DEX的浓度，计算累积释药量，并绘制释药曲线，结果如图4所示，其中n＝3，*P<0.05，与pH7.4相比。DS-FLs/DEX在pH5.0的PBS缓冲溶液中，DEX的释放量显著增加，40h内，超过80％的DEX能够被释放出来。

6、DS-FLs/DEX的体外抗炎活性

(1)利用香豆素-6(C-6)替换DEX来标记DS-FLs/DEX。取洁净无菌的12孔板，铺上细胞培养盖玻片，使盖玻片完全与孔板底部贴合。将RAW264.7细胞接种于12孔板中，分为激活组与未激活组，接种密度为2×10⁵个/孔。5％CO₂的37℃培养箱中培养24h。加入RhoB标记DS-FLs/DEX，继续培养一定时间，用PBS洗涤3次，4％多聚甲醛固定20min，加入DAPI染色3-5min后洗去多余DAPI，用甘油封片后在荧光显微镜下观察。从图5可以看出，非激活的RAW264.7细胞在经过DS-FLs/DEX处理后没有明显的荧光摄取，而激活的RAW264.7细胞(LPS(+))对DS-FLs/DEX的摄取荧强度明显高于非激活RAW264.7细胞(LPS(-))。此外，当细胞培养液中加入DS后，激活的RAW264.7细胞对DS-FLs/DEX的摄取发生降低，该结果表明DS-FLs/DEX表面吸附的DS可以促进激活的巨噬细胞对DS-FLs/DEX的摄取。综合以上结果，本研究制备的经DS修饰的梭型柔性脂质体DS-FLs/DEX可以通过表面的DS配体靶向到激活的RAW264.7细胞，并通过受体介导的胞吞作用而进入到细胞，增加了激活巨噬细胞对DS-FLs/DEX的摄取效率。

(2)ELISA试剂盒检测DS-FLs/DEX的体外抗炎活性。将RAW264.7细胞培养在96孔板中，分为激活组与未激活组，接种密度为1×10⁴个/孔。待细胞贴壁后，弃去培养液，加入新鲜培养液(含有DS-FLs/DEX或DEX。DEX置换浓度相同)。随后采用ELISA试剂盒检测：DS-FLs/DEX对激活的与未激活的细胞TNF-α、IL-1β、IL-6分泌的影响。如图6结果显示，n＝3，*P<0.05，与DEX相比；^#P<0.05，与Control相比，相比于游离DEX，DS-FLs/DEX可以有效降低激活的RAW264.7细胞(LPS(+)炎性因子TNF-α、IL-1β、IL-6的分泌水平。

7、DS-FLs/DEX@GEL的透皮性能研究

(1)Franz扩散池法

将离体大鼠皮肤于室温下解冻，剪取适宜大小，固定于供给池与接受池之间，放入接受液(生理盐水-乙醇(4:1)混合液)，接受池保持(32±1)℃恒温水浴，池内磁力搅拌速度为400r/min，平衡15min后，更换新的接受液。随后取0.5g的DS-FLs/DEX@GEL涂布于皮肤表面，记录时间为0h，并于1h、4h、8h、12h、24h、36h时间点取样200μL，并及时补加等体积的新鲜接受液。以DEX@GEL作为参比制剂。按照公式计算体外皮肤累积渗透量。

(2)体外皮肤滞留量

经过36h体外透皮实验后的离体皮肤，用生理盐水冲净皮肤内外表面，并用滤纸将皮肤表面水分吸干，剪碎后置于研磨器中，加入200μL生理盐水，充分研磨，得皮肤匀浆；加入3mL提取溶剂(丙酮∶甲醇＝3∶1)，涡旋2min，于2000r/min离心15min后将上清液转移至具塞塑料离心管中；此提取过程重复2次，合并各次提取液，于60℃下氮气流吹干；残留物用甲醇溶解，涡旋1min，离心后吸取上清液，测定药物皮肤滞留量。

体外皮肤累积渗透量结果如图7所示，36h后，DS-FLs/DEX@GEL中DEX的皮肤累积渗透量为(341.12±22.36)μg/cm²，而DEX@GEL中DEX的皮肤累积渗透量为(95.63±9.29)μg/cm²。DS-FLs/DEX@GEL中DEX的36h皮肤累计渗透量约为DEX@GEL的3.5倍，二者具有显著性差异。上述结果表明，与DEX@GEL相比，DS-FLs/DEX@GEL可以有效提高DEX的皮肤渗透量。

DEX@GEL和DS-FLs/DEX@GEL中DEX的36h皮肤滞留量(μg/cm²，x±s，n＝3)见表2。36h后，DS-FLs/DEX@GEL中DEX的皮肤滞留量为(61.31±1.28)μg/cm²，而DEX@GEL中DEX的皮肤滞留量为(13.18±0.78)μg/cm²，DS-FLs/DEX@GEL中DEX的皮肤滞留量约为DEX@GEL的4.7倍，二者具有显著性差异。

表2 DEX的36h皮肤滞留量

8、DS-FLs/DEX@GEL对类风湿性关节炎大鼠的治疗作用研究

(1)动物分组：阴性对照、模型对照、DEX@GEL组、DS-FLs/DEX@GEL组。

(2)大鼠足趾关节炎评分的评价：在模型构建成功后，将药物按给药剂量均匀涂抹于患病处。给药周期为两天一次，一共给药七次，并在第一次给药后每天对大鼠的关节炎情况进行足趾评分。此外，对大鼠的足趾进行拍照记录。

(3)大鼠足趾厚度的测量：用电子游标卡尺测量大鼠足趾厚度，测量位置为后侧足趾中部，足趾两侧刚接触游标卡尺为测量标准。

(4)大鼠关节腔部位炎症因子的测定：大鼠关节腔部位炎症因子采用Elisa试剂盒方法检测。给药结束后取大鼠关节腔滑膜液，经处理后采用ELISA试剂盒进行检测相应炎症因子(TNF-α，IL-6，IL-1β)的浓度。

经皮给药后，通过照相机和卡尺测定大鼠脚掌的肿胀程度，结果如图8所示，DS-FLs/DEX@GEL治疗后的大鼠足爪厚度，肿胀程度显著降低；用DS-FLs/DEX@GEL治疗的大鼠，其足爪厚度从8.3±0.3mm下降到6.5±0.2mm，观察期结束后的其治疗大鼠脚掌的肿胀程度显著小于DEX@GEL治疗组。

同时采用关节炎评分法对AIA大鼠的足爪肿胀程度进行评分，如图9所示。观察期结束后，用DS-FLs/DEX@GEL治疗的大鼠足爪评分为3.82±0.32mm下降到1.1±0.25mm，DEX@GEL治疗的大鼠足爪评分为3.87±0.51mm下降到2.77±0.17mm，两组比较具有显著性差异。

治疗结束后，采用ELISA法测定不同组滑膜组织中TNF-α、IL-1β、IL-6的浓度，结果见图10所示。与正常组相比，造模后大鼠滑膜部位的TNF-α、IL-1β、IL-6的浓度均明显增加。经治疗后，大鼠滑膜组织分泌TNF-α、IL-1β、IL-6的能力均被不同程度地抑制。与DEX@GEL组相比，DS-FLs/DEX@GEL治疗组大鼠滑膜组织分泌TNF-α、IL-1β、IL-6的浓度下降更为明显，二者比较均有显著性差异。

采用薄膜分散法制备柔性脂质体，并利用DS对柔性脂质膜的固定性制备了梭型靶向柔性脂质体，且能有效装载DEX。DS-FLs/DEX可发挥强大的抗炎作用，降低激活的RAW264.7细胞炎性因子的分泌。DS-FLs/DEX@GEL能够高效透过皮肤，并在皮肤组织内可有效蓄积。相较于DEX@GEL，DS-FLs/DEX@GEL可有效抑制AIA大鼠炎性因子的分泌，并对大鼠的关节炎症状具有很好的缓解作用。总而言之，DS-FLs/DEX@GEL的设计制备具有一定的应用前景。

实施例2

步骤1，靶向梭型柔性脂质体(DS-FLs/DEX)的制备

步骤1.1，取7mg的(2,3-二油酰基-丙基)-三甲基氯化铵(DOTAP)、1mg二硬脂酰磷脂酰乙醇胺(DSPE)、0.1mg胆固醇(CHOL)以及1mg地塞米松(DEX)于茄形瓶内，随后加入3mL甲醇与三氯甲烷，按照体积比为3:1超声溶解，于40℃条件下旋蒸1h，去除有机溶剂，待瓶壁上形成均匀薄膜后，真空干燥1h，随后放至-20℃冰箱过夜；

步骤1.2，加2mL的磷酸缓冲盐溶液(PBS，pH7.4)与0.5mg的膜软化剂去氧胆酸钠(NaDC)于步骤1.1的茄形瓶内，水化2h，得柔性脂质体初液FLs/DEX；

步骤1.3，取出柔性脂质体初液并置于烧杯内，随后加入含有0.5mg的硫酸葡聚糖(DS)水溶液，继续磁力搅拌1h；

步骤2，靶向梭型柔性脂质体水凝胶(DS-FLs/DEX@GEL)的制备

步骤2.1，取100mg的卡波姆940、1％甘油、1％丙二醇于2.5mL蒸馏水中，静置，然后置水浴温热，备用；

步骤2.2，称取步骤1.4制得的2.5mL的梭型柔性脂质体水溶液，将其倒入步骤2.1制得的凝胶中，不断搅拌，使其溶解；

步骤2.3，最后往步骤2.2制得的凝胶中边滴加三乙醇胺边搅拌，使pH值控制在6.5，加蒸馏水至5mL并不断搅拌，冷却至室温即得靶向梭型柔性脂质体水凝胶DS-FLs/DEX@GEL。

实施例3

步骤1，靶向梭型柔性脂质体(DS-FLs/DEX)的制备

步骤1.1，取15mg的(2,3-二油酰基-丙基)-三甲基氯化铵(DOTAP)、9mg二硬脂酰磷脂酰乙醇胺(DSPE)、1mg胆固醇(CHOL)以及6mg地塞米松(DEX)于茄形瓶内，随后加入15mL甲醇与三氯甲烷，按照体积比为3:1超声溶解，于40℃条件下旋蒸1h，去除有机溶剂，待瓶壁上形成均匀薄膜后，真空干燥1h，随后放至-20℃冰箱过夜；

步骤1.2，加25mL的磷酸缓冲盐溶液(PBS，pH7.4)与5mg的膜软化剂去氧胆酸钠(NaDC)于步骤1.1的茄形瓶内，水化2h，得柔性脂质体初液FLs/DEX；

步骤1.3，取出柔性脂质体初液并置于烧杯内，随后加入含有5mg的硫酸葡聚糖(DS)水溶液，继续磁力搅拌1h；

步骤2，靶向梭型柔性脂质体水凝胶(DS-FLs/DEX@GEL)的制备

步骤2.1，取500mg的卡波姆940、3％甘油、5％丙二醇于10mL蒸馏水中，静置，然后置水浴温热，备用；

步骤2.2，称取步骤1.4制得的12.5mL的梭型柔性脂质体水溶液，将其倒入步骤2.1制得的凝胶中，不断搅拌，使其溶解；

步骤2.3，最后往步骤2.2制得的凝胶中边滴加三乙醇胺边搅拌，使pH值控制在7.0，加蒸馏水至20mL并不断搅拌，冷却至室温即得靶向梭型柔性脂质体水凝胶DS-FLs/DEX@GEL。

以上所述实施例仅表达了本发明的几种实施方式，其描述较为具体和详细，但并不能因此理解为对发明专利范围的限制。应当指出的是，对于本领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明构思的前提下，还可以做出若干变形和改进，这些都属于本发明的保护范围。因此，本发明专利的保护范围应以所附权利要求为准。

Claims

1.一种靶向梭型柔性脂质体水凝胶的制备方法，其特征在于，具体包括以下步骤：

步骤1，靶向梭型柔性脂质体的制备

步骤2，靶向梭型柔性脂质体水凝胶的制备

2.根据权利要求1所述的一种靶向梭型柔性脂质体水凝胶的制备方法，其特征在于，步骤1.1所述(2,3-二油酰基-丙基)-三甲基氯化铵5-15mg、二硬脂酰磷脂酰乙醇胺1-9mg、胆固醇0.1-1mg、地塞米松1-6mg，甲醇与三氯甲烷3-15mL；

步骤1.3所述硫酸葡聚糖0.5-5mg；

步骤2.2所述梭型柔性脂质体水溶液2.5-12.5mL；

步骤2.3所述加蒸馏水至5-20mL。

3.根据权利要求1所述的一种靶向梭型柔性脂质体水凝胶的制备方法制备得到的靶向梭型柔性脂质体水凝胶。

4.根据权利要求1-3任一项权利要求所述的一种靶向梭型柔性脂质体水凝胶在制备经皮给药治疗类风湿性关节炎药物中的应用。