CN114292859B - 黄瓜MYB111MULE-InDel基因及其应用 - Google Patents

Abstract

本发明公开了黄瓜MYB111^MULE‑InDel基因及其应用。本发明可根据黄瓜的MYB111^MULE‑InDel基因存在与否，鉴别出黄瓜果皮类型(果皮不变黄或者果皮变黄)，该基因还可应用在黄瓜育种中的应用，根据黄瓜MYB111^MULE‑InDel基因中缺失的MULE序列开发分子标记，可以简便、快速、高通量的应用于黄瓜苗期单株的辅助筛选，定向选育出果皮不变黄的优质黄瓜，大幅提高了果皮不变黄黄瓜的育种效率。

Description

黄瓜MYB111MULE-InDel基因及其应用

技术领域

本发明涉及一种控制黄瓜果皮颜色的MYB111^MULE-InDel基因及其应用，属于植物基因与遗传改良技术领域。

背景技术

黄瓜(Cucumis sativus L.)属于葫芦科甜瓜属一年生草本植物，是一种重要的经济园艺作物，也是我国主栽蔬菜作物之一。黄瓜原产于印度，对温暖潮湿的环境有着特殊的偏好，现广泛种植于全世界温带和热带地区，具有重要的经济价值。

果皮颜色是黄瓜品质性状的重要标准，具有重要的商品价值。黄瓜果皮颜色的商品价值存在较强的地域特性，不同地区的消费者对果皮颜色的喜爱不同。因此，结合不同地区的市场需求来改善果实外观特性，尤其果皮颜色，是提高黄瓜经济价值的重要育种目标。

在实际生产过程中发现，黄瓜果皮黄色严重影响果实外观品质，特别在浅色果皮类的华南生态型黄瓜品种中表现尤为突出。要解决该问题就必须克隆得到黄瓜果皮黄色基因，分析其功能。多年来由于黄瓜果皮黄色及其相应突变株材料难以获得，或是收集的材料受环境影响比较大，不能保证其稳定，对果皮黄色基因的研究更是进展缓慢。因此，黄瓜果皮黄色颜色基因的研究具有重要的理论和实践意义，将为提高黄瓜外观商品性及创制符合市场需求的黄瓜新品种奠定基础。

发明内容

本发明旨在克服现有技术的不足，提供一种黄瓜MYB111^MULE-InDel基因及其应用。

为了达到上述目的，本发明提供的技术方案为：

所述黄瓜MYB111^MULE-InDel基因的核苷酸序列为与SEQ ID No.1所示序列相同或同源性大于80％且对黄瓜果皮具有同等功能的核苷酸序列。

本发明还提供了由上述黄瓜MYB111^MULE-InDel基因编码的蛋白。

优选地，所述蛋白的氨基酸序列为与SEQ ID No.2所示序列相同或经替换、缺失或添加一个或几个氨基酸形成的具有同等功能的氨基酸序列。

基于上述黄瓜MYB111^MULE-InDel基因鉴别黄瓜果皮种类的方法是根据黄瓜果皮中的MYB111^MULE-InDel基因存在与否，鉴别出黄瓜果皮类型(果皮不变黄或者果皮变黄)；若黄瓜果皮中存在MYB111^MULE-InDel基因，则为突变型果皮不变黄黄瓜，若黄瓜果皮中不存在MYB111^MULE-InDel基因，则为正常型果皮变黄黄瓜。

基于上述黄瓜MYB111^MULE-InDel基因的黄瓜育种方法根据黄瓜中MYB111^MULE-InDel基因中缺失的MULE序列开发分子标记，若黄瓜中存在该分子标记，则为果皮变黄黄瓜，否则为果皮不变黄黄瓜，果皮不变黄黄瓜即为性状优良品种；所述MULE序列如SEQ ID No.3所示。该分子标记可简便、快速、高通量地应用于育种实践。

与现有技术相比，本发明的有益效果为：

传统育种费时费力，需要通过多代回交和杂交的过程。本发明公开的黄瓜MYB111^MULE-InDel基因为今后果皮不变黄黄瓜品种选育提供了分子标记基础，这不仅解决了常规杂交方法育种周期长难度大的问题，而且有助于创建满足市场需求的黄瓜新种质资源，根据黄瓜中MYB111^MULE-InDel基因中缺失的MULE序列开发的分子标记，能应用于黄瓜苗期单株的辅助筛选，显著提高黄瓜的育种效率，定向选育出性状优良的果皮不变黄黄瓜。

附图说明

图1为实例1中黄瓜亲本材料野生型L14和突变体L19果皮颜色变化过程；

图2为实例1中黄瓜果实成熟期类黄酮含量和类胡萝卜素含量；

图3为实例1中黄瓜黄色果皮颜色候选基因CsaV3_4G001130精细定位；

图4为实例2中L14和L19中CsMYB111克隆电泳图；

图5为实例2中L14和L19中CsMYB111的启动子和基因结构；

图6为实例3中CsMYB111在L14和L19中的表达量；

图7为实例3中CsMYB111在L14果皮不同时期以及不同器官中的表达量；

图8为实例4中CRISPR/Cas9系统敲除CsMYB111的转基因植株鉴定；

图9为实例5中不同颜色黄瓜品种L14-CsMYB111-P2-2引物扩增插入片段实验结果。

具体实施方式

以下实施例用于说明本发明，但不用来限制本发明的范围。在阅读了本发明之后，本领域技术人员对本发明的各种等价形式的修改均落于本申请所附权利要求所限定的范围。下面结合附图和具体实施例对本发明进行详细说明。

实施例1：CsMYB111的精细定位

2013年在长沙市湖南省蔬菜研究所的温室进行11代自交系亲本Han203(果皮黄色)扩繁时，从3500植株中发现1株果皮不变黄的自然突变株L，突变株L自交后代经3年春秋两代系统选育，于2016年秋季获得了5代自交纯合突变株L19(果皮白色)和5代自交纯合近等基因系野生型L14(果皮黄色)(图1)。此外，获得L14和L19的杂交F₁代，F₁代全部老瓜表现为果皮黄色。海南冬季F₁代自交得到F₂代群体。在F₂群体中，果皮黄色植株有150株，果皮白色植株有41株，果皮黄色和果皮白色分离比经卡方检测符合3:1。因此，黄瓜果皮黄色由显性单基因控制。

随后分别检测了黄瓜成熟期L14和L19干果皮中类胡萝卜素和总类黄酮化合物的平均含量。结果表明总类黄酮化合物的平均含量远高于类胡萝卜素。L14中类黄酮的总含量约为L19的2.22倍(图2A)，而L14和L19干果皮中类胡萝卜素的平均含量无明显差别(图2B)。

通过对两个亲本(L14和L19)和两个DNA池(L14quan和L19quan)进行了全基因组重测序，挑选出两个亲本中相异且纯合的SNP位点并过滤掉子代SNP-index缺失的位点，发现4号染色体上包含1200个差异SNP与目标性状相关。因此，初步确定目的基因定位区间为Chr4：0.30～9.61Mb。

2017年双亲、F₁代和F₂代群体种植在湖南春季大棚，F₂代中选择重组单株自交得到F₃代杂合家系。利用候选SNP信息设计分子标记，采用KASP技术对305个F₂分离群体进行基因分型，挑选重组单株，将目的基因缩小在Chr4：0.37～0.89Mb区间内。2019年秋季在湖南种植F₃代杂合家系。在F₃群体中(包括F₂代中147号重组单株F₃代家系124株，101号重组单株F₃代家系234株，共计358株)针对上述区间设计了9个SNP分子标记进行基因分型验证，再次将目的基因缩小在Chr4：0.63～0.65Mb区间内。该区间只有一个基因CsaV3_4G001130与类黄酮合成相关，该基因包含的突变SNP位点基因型与单株表型共分离(图3)，推测CsaV3_4G001130可能为控制黄瓜黄色果皮颜色的候选基因。CsaV3_4G001130编码MYB转录因子，与拟南芥MYB111转录因子编码基因AtMYB111同源，因此将黄瓜黄色果皮突变体候选基因命名为CsMYB111。

实施例2：CsMYB111基因克隆

分别对L14和L19的CsMYB111基因启动子及全长进行扩增、测序。取CsMYB111的转录起始位点上游2,020bp作为启动子区域，并将它的启动子及全长分为6个片段克隆(图4A,B)。结果显示L14的CsMYB111第2个片段没有扩增成功(图4A)，之后补充设计了4个引物再次扩增，图4C可以看出L14补充扩增的CsMYB111第2个片段大于L19扩增的片段。

序列经测序后比对结果发现，L19中等位基因的第二个内含子中缺失了2,458bp的片段，NCBI数据库比对该片段可能为MULE转座子(图5)。L19突变体的形成可能是由于CsMYB111第二个内含子中缺失了MULE转座子。

实施例3：CsMYB111的表达特性分析

为了解CsMYB111在L14和L19果皮中的表达差异，我们分别以转色期和老瓜期的果皮进行检测。结果发现，L14中CsMYB111在转色期和老瓜期的表达量均高于L19，其中转色期的表达量与L19有显著性差异，比L19高4.6倍(图6)。L14转色期的果皮表型为黄色，而L19为白色果皮，CsMYB111表达造成了L14和L19的果皮颜色差异。

随着果实的发育，在授粉后18～20天左右L14果皮颜色开始从浅绿色转变为黄色，随着果实逐渐衰老，在授粉后28～40天果皮颜色全部变黄。qRT-PCR结果显示，CsMYB111在转色期时表达量达到最高，与成熟期和老瓜期都有显著性差异。随着果实全部变黄(成熟期和老瓜期)，CsMYB111表达量逐渐下降(图7A)。CsMYB111在转色期的高表达影响着果皮颜色的转变。

选取L14的不同器官(果皮、顶芽、花、叶、根、茎和卷须)分析CsMYB111的表达量。结果发现，CsMYB111在果皮里面表达量最高，均高于其他器官，其次卷须中表达较高，而顶芽、花、叶、根和茎中表达量无明显差异(图7B)。

实施例4：CsMYB111的转基因验证

为了确认CsMYB111在黄瓜中的功能，我们利用CRISPR/Cas9技术，构建得到敲除载体pKSE402-CsMYB111。然后用热激法将该敲除载体转入农杆菌EHA105，通过菌落PCR鉴定阳性克隆。用转入pKSE402-CsMYB111质粒的农杆菌转化果皮黄色材料L14。利用荧光体式显微镜对黄瓜外植体进行筛选，获得1个转基因株系。测序结果分析发现，转基因植株的第一个外显子存在一个碱基的插入，命名为CR-Csmyb111(图8A)。CR-Csmyb111果皮颜色未形成黄色(白色)，与L14果皮黄色表型不一致，确证了CsMYB111是黄瓜果皮黄色的候选基因(图8B)。

实施例5：L14-CsMYB111-P2-2引物在不同颜色黄瓜品种中的扩增

我们将实施例2图4C中L14补充扩增的CsMYB111第2个片段作为分子标记，命名为L14-CsMYB111-P2-2。该分子标记序列中包含MYB111^MULE-InDel基因中缺失的MULE序列。利用上述分子标记设计引物分别对黄瓜果皮不变黄材料(W6和W14)和果皮变黄材料(YH6和YZJ)进行扩增，结果表明果皮不变黄材料对应扩增片段明显小于果皮变黄材料，而组内的扩增片段大小一致，说明该分子标记对果皮不变黄/变黄黄瓜的辅助筛选是有效的(图9)。

实施例6：鉴定或辅助鉴定黄瓜黄色果皮性状的成套试剂在培育高品质黄瓜父本自交系中的应用

本实施例利用系统选育方法，选用雌雄同株、果皮不变黄的优良雌雄同株L19作为父本，雌雄同株生长势旺盛马-2为母本，定向改良雌雄同株优良父本自交系马-2的果皮颜色性状，具体操作步骤如下：

将雌雄同株L19作为父本与雌雄同株自交系马-2雌花杂交，得到雌雄同株杂交一代F₁，将雌雄同株杂交一代F₁为父本与雌雄同株自交系L19雌花进行回交得到回交一代BC₁F₁，利用本发明的鉴定果皮黄色基因型的成套试剂从回交一代BC₁F₁中选择Yy基因型的黄瓜株为父本与雌雄同株自交系马-2进行回交得到回交二代BC₂F₁，利用本发明的苗期黄色果皮基因型的成套试剂从回交二代BC₂F₁中选择Yy基因型的黄瓜植株为父本与雌雄同株自交系马-2进行回交得到回交三代BC₃F₁，利用本发明的苗期鉴定全雄基因型的成套试剂从回交三代BC₃F₁中选择Yy基因型的黄瓜植株自交，利用本发明的苗期鉴定全雄基因型的成套试剂从BC₃F₂中选择yy基因型的黄瓜株，种植田间，雌雄花开花前1天扎花，第二天开花后自交，当瓜成熟后，选生长势旺盛、抗病强、瓜色不变黄的的植株收种，自交后将其命名为改良后的自交系Y马-2。根据自交结果，鉴定果皮性状是否与自交系L19基本一致。瓜色不变黄Y马-2株系采用系统选育法继续自交2-3代后，选育新的生长势旺盛、抗病性强的果皮不变黄的新父本材料，说明利用本发明的果皮不变黄性状分子标记，能够对果皮不变黄基因的基因型进行选择，进而实现对果皮不变黄性状的快速准确改良。

在果皮不变黄父本育种中，可以利用本发明的鉴定或辅助鉴定果皮不变黄性状的成套试剂选择目的果皮不变黄性状，从而应用于果皮不变黄父本的分子标记辅助育种，为果皮不变黄父本性状的改良提供有力的技术支持，进而实现对果皮不变黄性状的快速准确改良，提高父本果实品质性状。

实施例7：鉴定或辅助鉴定黄瓜果皮不变黄性状的成套试剂在培育果皮不变黄母本中的应用

本实施例利用回交转育的方法，选用果皮不变黄L19作为非轮回亲本(果皮不变黄性状供体)，雌性系生长势旺盛、配合力强自交系BL为轮回亲本，定向改良雌性系优良自交系BL的性别，具体操作步骤如下：

将果皮不变黄自交系L19作为父本与雌性系自交系BL雌花杂交，得到强雌杂交一代F₁，两叶一心时，将强雌杂交一代F₁喷施300ppm硝酸银两次，间隙2-3天，产生雄花后为父本与雌性系自交系BL雌花进行回交得到回交一代BC₁F₁，利用本发明的鉴定果皮不变黄基因型的成套试剂从回交一代BC₁F₁中选择Yy基因型的黄瓜株，采用上述方法诱雄后为父本与雌性系自交系BL进行回交得到回交二代BC₂F₁，利用本发明的苗期鉴定果皮不变黄基因型的成套试剂从回交二代BC₂F₁中选择Yy基因型的黄瓜植株诱雄后为父本与雌性系自交系BL进行回交得到回交三代BC₃F₁，利用本发明的苗期鉴定果皮不变黄基因型的成套试剂从回交三代BC₃F₁中选择Yy基因型的黄瓜植株诱雄后为父本与雌性系自交系BL进行回交得到回交四代BC₄F₁，利用本发明的苗期鉴定果皮不变黄基因型的成套试剂从回交四代BC₄F₁中选择Yy基因型的黄瓜植株进行自交得到BC₄F₂，利用本发明的苗期鉴定果皮不变黄基因型的成套试剂从BC₄F₂中选择yy基因型的黄瓜株，采用上述方法诱雄后，然后取本株诱导雄花同诱导雌花自交，自交后将其命名为改良后的自交系YBL。改良后的自交系在苗期两叶一心时分成两部分，一部分植株不处理，鉴定其是否全部表现为果皮不变黄性状，另一部分植株，在苗期二叶一心时叶面喷施300ppm硝酸银，处理2次，间隔2-3天，诱导雄花可以自交扩繁亲本。说明利用本发明的果皮不变黄性状分子标记，能够对果皮不变黄基因的基因型进行选择，进而实现对果皮不变黄性状的雌性系母本快速准确改良。

在果皮不变黄母本育种中，可以利用本发明的鉴定或辅助鉴定果皮不变黄性状的成套试剂选择目的果皮不变黄性状，从而应用于果皮不变黄雌性系母本的分子标记辅助育种，为果皮不变黄母本性状的改良提供有力的技术支持，进而实现对果皮不变黄性状的快速准确改良。

尽管上文中已经用一般性说明及具体实施方案对本发明作了详尽的描述，但在本发明基础上，可以对之作一些修改或改进，这对本领域技术人员而言是显而易见的。因此，在不偏离本发明精神的基础上所做的这些修改或改进，均属于本发明要求保护的范围。

序列表

<110> 湖南农业大学

<120> 黄瓜MYB111MULE-InDel基因及其应用

<160> 3

<170> SIPOSequenceListing 1.0

<210> 1

<211> 9139

<212> DNA

<213> 黄瓜(Cucumis sativus L.)

<400> 1

atggggagaa ggccgtgctg tgataaagtt ggtctgaaaa aggggcggtg gacggaggag 60

gaagatgacc ggttgaaaaa atatatactt gccaatggtg aaggctcctg gagatctctc 120

cccaaaaatg caggttcgtt acatacctct cccattaaaa aaaataaaaa atactttact 180

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ttaactattt gagagctgat ttgaaacgag ggaacatcac atctgaagaa gaagatgtca 360

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tgagtcaagt gttggacaca aagtccatgg aatgcggagg gaaaaaccga tgcaatacac 5760

ttagaaaaac atgtttttcg atctgtcacg aagcctagat taggcacctc tcctattgca 5820

cctttcaatt tctctaagaa ccactgtatt gaagcatctg tttctctgtc caccactcca 5880

aaggcaagag gataaatttg attgttacca tccaagcaaa cagcaactat caactgaccc 5940

cgatatttgt tcttaaggaa tgttccatcc atgactataa ccggtctaat gcagtttaag 6000

aatcctcgaa cacatggacc aacagccata aaaagatatt tgaagaaacg attatcttca 6060

agttccatgt gaaatattgt acctacattt gcaagtttga gagcttcacc atatctaagc 6120

aatagattat atgactcttc aggacacccg cgcactcgtt catacgcatt ttctctagcg 6180

cgccatgctt tttcataact catatttatg ccatagtctt gcctcatgtc ttctatgata 6240

tcacgcggtt tgtatagacg accgactccc ttgaactttg actttattaa ttctccaaca 6300

acccaagatt ttgcttgcct atggtcacga ttcaaaacgt caagagaaca cgaatgaact 6360

ttgacatact ttttaatctt aaatatattt gaatccttca atctcatcgc tcgcagtctc 6420

caaccacact tgttgtcaat gcatctaaca aagagaacct cttttgtaga cttttttact 6480

acaaactgaa aatttttttt cattgccaag acacttaatc tcattgacaa atcttttttg 6540

gaaaaaaata tttgtcctac atcaaactcc tcacttgtag agctttcttc ggaccaatca 6600

ttcatgtctg tcttcaactt ttggctagaa gagctgtaac gaactttaga ttttcctttg 6660

caatcttttg taggaccatc tctatgttgt gggatgtcaa atgattcact attcatctct 6720

actggctccc atgtaaaagt ctcatctttc gaatcatatg actcatatga ttcccatata 6780

gccgaagtgg tccctatcac gttatcacac aagccaactt caacttcacg aacatggact 6840

tcattctcat ttaatgtatc cattacaatt ggaggatgag ggtttaagtt atgagcttgg 6900

ttgctgccag atactgaatt gtaatctttg cttaacactt ttttgctttg attactttta 6960

ggctcaaatg agacgtataa agggaccttt aatggatttt cactaagaag ataaaacttc 7020

aaatcacggt cattgcttaa ctcaaatgta ggagcttcgt gttccacttt tatctcatat 7080

atgcatctta tcattacgtc gaactttgaa gggtcaactt ctgcaaggtc atataattct 7140

gcctgtaaat ctttatgtgt tatttcttta ctgacaacga tgccttttaa catgcctcct 7200

tcgtattttc ttcgcctctc atcccacata ccaccgtaac gcactaacat gggaatatgt 7260

gacatcctta aaccacctta tacttttcaa ttgctgcaaa aaatgatttg aagttagcat 7320

ttgacatatc acataaacaa agtttattaa aaaacagtag gtaaatacta aataaaacgt 7380

gcatagtcac accctacatg tttacgatct tgacagctac aaaatgttta ggatattgcg 7440

agatacaaaa aacaatagct aaaagtcacc ctaaatcaat tcatttcaga ttaaacattt 7500

caatttaaga acctgcaaga tgtctgcgag atgtttgcga gatgtctacc agatgtttgc 7560

gagataaaat aataataatg ataaattgct aacatcattt gaaacatcta taaagcaacc 7620

ttaaatcaac cctaaatcaa cttgaaacaa taaaaaataa tatttgattt atacatttaa 7680

gatgcaaaaa tatatataca tataacacaa cacaattcag attcggattt aaaaattaaa 7740

acaaaccaca atgcgtgaga tgttcgccgg agtagatgat gaacgacacc ggagtaaagc 7800

ggaaagttga caaacttttg agagaggaga agaatcgcaa atgagttttt cttttttctt 7860

tttcctttac ataatctatg agaaggagga gaaatgcttc ttttttcttt acgtaatcta 7920

tgagactgca agagaaggat tcttcttttt ttttcccttt acgtaatcta tgaggagagg 7980

agaagaaggc tgcgttcgca attctgtttt ttttcttcac gtgaatgaca ttgaagagag 8040

agagagaggg gttggaaaag aagagaagag caaatgtgaa ttaaaattaa aagagggtat 8100

tttcgtcatt tcacctccaa tttatcctaa atctcaactt ttctacaatc aatcctaaaa 8160

ctctatttat accccatttt tggcctattt ttgtcaattt cccaagtttc ttgtttcttt 8220

tcataaaatg gaaaatggaa tcattttttg gagcattgct taccattttc ttctctccac 8280

tttcggaata catatgtcac gtgattatta ttattttttt aaaattttgt tcttaccaaa 8340

tcgagaacag cgtaaagcac aggaggaaaa aaccaagatg atcattttaa ataatccatt 8400

agcttgtagt ttgttttaat caattaattg atttgttttt tctttttgga aattttatag 8460

gtggtctttg atcgcaagcc acttgccagg cagaacagac aacgagatta aaaattattg 8520

gaattcgcat ttaagtcgac aaatccaaac gttccggcgt cggaacgatg atggggactc 8580

ggtaattgtg gacgtggcca ggatcaacct cccgccgcgg cggaaggggg gacgtgggcg 8640

gaggaggaag gaagagtcgg agattccgtc gccgctgacg tcggagatgg agagagagag 8700

tggtgggtgt gggggatgtg tggatgaggt aagggaagag gaaattatta agaagacgcc 8760

agaaggacga catgacgttg gtgggtctgt tacagtgaat ttgaataatg atgtttggga 8820

agaagacgag atgtcgttgg acttggatga gttgttgaca agcgtggaag actacgagga 8880

tgaaattcat aagttcatca caactggcac gtgcaaaagc aacaccgatc atgtctccat 8940

tgctccggca gagatggagg tgggcggtga gtgtagttcc ataagcagct catccttgat 9000

gagtcttgac agtccatgga actgggaaag cttcgcgggg gacatagaat gggatgccgg 9060

agaagatttc ggaggtgggg ttgggattgc ggttgcggaa tcggaatcgg aggcggtgat 9120

ttcttggctt ttgtcatga 9139

<210> 2

<211> 313

<212> PRT

<213> 黄瓜(Cucumis sativus L.)

<400> 2

Met Gly Arg Arg Pro Cys Cys Asp Lys Val Gly Leu Lys Lys Gly Arg

1 5 10 15

Trp Thr Glu Glu Glu Asp Asp Arg Leu Lys Lys Tyr Ile Leu Ala Asn

20 25 30

Gly Glu Gly Ser Trp Arg Ser Leu Pro Lys Asn Ala Gly Leu Leu Arg

35 40 45

Cys Gly Lys Ser Cys Arg Leu Arg Trp Ile Asn Tyr Leu Arg Ala Asp

50 55 60

Leu Lys Arg Gly Asn Ile Thr Ser Glu Glu Glu Asp Val Ile Ile Lys

65 70 75 80

Leu His Ala Ser Leu Gly Asn Arg Trp Ser Leu Ile Ala Ser His Leu

85 90 95

Pro Gly Arg Thr Asp Asn Glu Ile Lys Asn Tyr Trp Asn Ser His Leu

100 105 110

Ser Arg Gln Ile Gln Thr Phe Arg Arg Arg Asn Asp Asp Gly Asp Ser

115 120 125

Val Ile Val Asp Val Ala Arg Ile Asn Leu Pro Pro Arg Arg Lys Gly

130 135 140

Gly Arg Gly Arg Arg Arg Lys Glu Glu Ser Glu Ile Pro Ser Pro Leu

145 150 155 160

Thr Ser Glu Met Glu Arg Glu Ser Gly Gly Cys Gly Gly Cys Val Asp

165 170 175

Glu Val Arg Glu Glu Glu Ile Ile Lys Lys Thr Pro Glu Gly Arg His

180 185 190

Asp Val Gly Gly Ser Val Thr Val Asn Leu Asn Asn Asp Val Trp Glu

195 200 205

Glu Asp Glu Met Ser Leu Asp Leu Asp Glu Leu Leu Thr Ser Val Glu

210 215 220

Asp Tyr Glu Asp Glu Ile His Lys Phe Ile Thr Thr Gly Thr Cys Lys

225 230 235 240

Ser Asn Thr Asp His Val Ser Ile Ala Pro Ala Glu Met Glu Val Gly

245 250 255

Gly Glu Cys Ser Ser Ile Ser Ser Ser Ser Leu Met Ser Leu Asp Ser

260 265 270

Pro Trp Asn Trp Glu Ser Phe Ala Gly Asp Ile Glu Trp Asp Ala Gly

275 280 285

Glu Asp Phe Gly Gly Gly Val Gly Ile Ala Val Ala Glu Ser Glu Ser

290 295 300

Glu Ala Val Ile Ser Trp Leu Leu Ser

305 310

<210> 3

<211> 2456

<212> DNA

<213> 黄瓜(Cucumis sativus L.)

<400> 3

ggaattatca aaaataggat aatttggaag gatgtaaaga gttttgagat gaattttaaa 60

aaagatgact tttaggacaa attagttgga aaaagtctat attaccctca agttaaaaaa 120

tatcctaaaa tcaatttatg aatcctctct tctccttctc cttctccctc cgttttttca 180

ctttctaaaa atgtttcatt tttctctcat ccctcgctct ggtgttccat tttccctcat 240

tttcacgaaa tttccttttt cttcattttc cattctttaa ttcgttttct tgaaatttct 300

ttttgaagct cttcccatgg tctcccaccg gcctttgaaa accattttct ccattttctc 360

acttccaaaa agaatatttc atttttctct catctctctc cattttcata cattgtggga 420

taaattggcc ttcctaattc taagagcatg aaaatgttgc tctcacctgc attgttgtac 480

attatataaa agttctgcac actttacaat tttccaagat aatgaaataa aaattgcata 540

ccaaaaaaaa aaaatggtat tcattccatt atataaaact atttatgtac atagtttgga 600

acatatacaa ttccttcaaa agttggaact aaaagtcaat acatgggatt gttggtccat 660

aattgaaatg ccaattgttt tctaaaatat gacatgtttt cttgacataa tgtagctaca 720

tctaaaccag aagcttcata tttgaaatac ttaattgtaa atacaccaca atcactattg 780

ttgcgttgaa gtggaatgga gtcgacaatg acaagtggcc aaggttcctt gtgtgttgat 840

gatccgcctc tcctaacaaa gaatccagta gcatcgagca aatttggcac catctcttga 900

attggctcta atatgcttct catatcttcg gcactcgtca gcgacggaag cgaatcccat 960

accttaactt gacaacgtac caagtccaag cataatagaa tccaatgatt gccatggata 1020

ttgaatggag agtaaatgta atcaacattc acccaaggat cttgacagtc ttgttttgat 1080

ccgacaacat agtcaacctg cttactaaat gtgataaact acttactata gactgaaaat 1140

gatgagcagg gtcaatcttg tacatgggac cgttagttga tgtcgaagcc atactgaaat 1200

ctgcataaaa aaaactaatt aaatataatt gcataagaga cttactaaac atggatgcac 1260

tagcatcttg ggacttctac tcaaaatttt ggaaggtgag agataggtgc tgataggtga 1320

gagatgatgg aaacttcaag gcaaagttgc taagtctaat acaattgcta accctatagc 1380

cttaacacct agtagactag ctaaacatgc attctaaacg gtttaggaag ttaacactct 1440

tatattggga cttctactca aaattttgga aggtgagaga taggtgctga taggtgcgag 1500

atgatggaaa aattcaaggc aaaggaaatg gtctttcaac aatgcagctt atgataatgt 1560

ctttagaata caatctttag aatgcatgtt tagcacatat ctattatact ggtaactttg 1620

cagagtttat atgggatacc aaatatatgt tcgaattcaa gttctaaact ccaaggtatg 1680

gtttttctat tattacagta cattgcaaag gaaatggttt ttcttcctaa aaacagaatg 1740

gctcccacgg ttctctatgt ctgtgtgcat atgacatgca tttcttctct aaaatgtgcc 1800

aaaaacaaaa aactcacatc tcaacagaca acttaaacaa acaagatgga atactgtaat 1860

aataaataag ctacaacaga ctaactctaa aaaaaaactg agattttatt actcacttga 1920

cttcaaagat gatgtatacg gcactgccaa tgtagaggag tggataagaa atggagaggt 1980

ccggtgaaaa caaacctgaa atcgaaatgg atggaagtgg agaagcgtcc gccggagatg 2040

aagtcgaaag taaaacagaa acccgtgcag aagaaatgga gacgttccgt gaacaagttg 2100

aaatcggaaa atatagcgga gagtcgtgga gaagaaatgg atggaagtgg agaagaaatg 2160

gacggaagag aaaaacgttc accggaggcg ggagagagtt gaagggggta actgcagacg 2220

cgggagagtt caaatgctct ggtttatgtt tttcttttga acggccttct gtcttcgggt 2280

tgaagaaaag gaaaaagaag aaaaggaaaa agaagaaaag aggaaggaaa ataaaagagg 2340

gtattttcgt catttcacct ccaatttatc ctaaatctca acttttttac aatcaatcct 2400

aaaactctat ttctacccca tttttggcct atttttgtca attccccgaa aatatt 2456

Claims (2)

1.基于黄瓜MYB111 MULE-InDel 基因鉴别黄瓜果皮种类的方法，其特征在于，所述方法是根据黄瓜果皮中的MYB111 MULE-InDel 基因存在与否，鉴别出黄瓜果皮类型；若黄瓜果皮中存在MYB111 MULE-InDel 基因，则为突变型果皮不变黄黄瓜，若黄瓜果皮中不存在MYB111 MULE-InDel 基因，则为正常型果皮变黄黄瓜；所述MYB111 MULE-InDel 基因的核苷酸序列如SEQ ID No.1所示。

2.基于黄瓜MYB111 MULE-InDel 基因的黄瓜育种方法，其特征在于，所述方法是根据黄瓜中MYB111 MULE-InDel 基因中缺失的MULE序列开发分子标记，若黄瓜中存在该分子标记，则为果皮变黄黄瓜，否则为果皮不变黄黄瓜，果皮不变黄黄瓜即为性状优良品种；所述MULE序列如SEQ ID No.3所示；所述MYB111 MULE-InDel 基因的核苷酸序列如SEQ ID No.1所示。