CN114287629A

CN114287629A - 提高肠道免疫能力的组合物及产品

Info

Publication number: CN114287629A
Application number: CN202010994660.1A
Authority: CN
Inventors: 卡洛琳·安妮卡·凡·鲁·鲍曼; 盖瑞特·施密特; 吉塞拉·阿德里安娜·怀斯; 谷方婕; 司徒文佑; 王雯丹; 刘彪
Original assignee: Inner Mongolia Yili Industrial Group Co Ltd; Inner Mongolia Dairy Technology Research Institute Co Ltd
Current assignee: Inner Mongolia Yili Industrial Group Co Ltd; Inner Mongolia Dairy Technology Research Institute Co Ltd
Priority date: 2020-09-21
Filing date: 2020-09-21
Publication date: 2022-04-08

Abstract

本发明涉及食品技术领域，尤其涉及组合物及其在制备提高肠道免疫能力的产品中的应用。本发明提供了含有母乳低聚糖和动物双歧杆菌乳双歧亚种的组合物，该组合物中两种组分相互配合，产生增效协同作用，有效提高了肠道免疫能力。实验表明，本发明提供的组合物具有良好的抑制致病菌吸附能力、提高跨膜电阻水平和/或抑制炎症因子水平。

Description

提高肠道免疫能力的组合物及产品

技术领域

本发明涉及食品技术领域，尤其涉及提高肠道免疫力的组合物及产品。

背景技术

人体最庞大的正常菌群在肠道，它的构成相当复杂，人们发现，光细菌的种类就在1000种以上。这些肠道细菌及其代谢产物包含了大量免疫刺激物质，如抗原、毒素等，而肠道免疫屏障对来自粘膜表面的各种抗原作出正确反映，即对无害抗原如食物及正常菌群的抗原表现为免疫耐受以保证食物的吸收和微生态的稳定，不会因对无害抗原起反应而耗竭免疫排斥。近年来人研究发现，肠道菌群与肠道免疫之间的关系在炎症性肠炎、食物过敏、多器官功能衰竭、细胞移位等疾病的发生发展中起了重要作用。若肠道免疫系统失去对正常菌群某些抗原的耐受，在肠道局部可产生炎症反应，诱发炎症性肠炎。在全身，由于机体与细菌存在交叉抗原，可诱发全身性炎症反应，参与某些自身免疫性疾病的发病机制。现有很多临床资料表明，利用肠道正常菌群，如乳酸杆菌、双歧杆菌、非致病性大肠杆菌，治疗炎症性肠炎、婴幼儿湿疹、食物过敏取得了类似于糖皮质激素样的效果，而且无副作用，疗效更持久。

对于婴幼儿而言，在出生后婴儿肠道结构和消化功能还未发育成熟，肠道黏膜屏障功能和免疫功能都比较弱，容易发生肠道炎症性和感染性疾病。在出生后几周内，新生儿的肠道经历了一个迅速的成熟过程，肠道菌群迅速建立。通常认为，该过程受到暴露与母体的细菌和环境细菌的影响，进一步受到新生儿膳食的影响。研究表明，与配方乳喂养婴儿相比，人乳喂养婴儿肠道相关疾病的发病率明显偏低。

与其他大多数哺乳动物的乳汁不同，人乳含有非常高浓度的低聚糖。人乳低聚寡糖(human milk oligosaccharides,HMOs)是一种低度聚合糖，其作用被归为三大类：一是作为益生元，改变微生物的组成和功能以使宿主受益；二是作为抗黏附剂或受体诱饵，阻碍病原体在胃肠道内定殖；三是作为免疫调节剂，对胃肠道上皮直接作用，调节宿主对胃肠道微生物的免疫应答。大量研究表明，HMOs不仅能够满足新生儿在物质和能量上的需求，而且对于消化系统的早期发育、出生后免疫系统的完善记忆体内生态平衡的建立等比不可少，是母乳替代品所无法比拟的。但是，由于HMOs组成复杂，且随着人体状态的不同，HMOs的组成发生变化，目前对于HMOs的研究仍存在不足，如何使HMOs更好的与益生菌配合，提高肠道免疫能力仍是需要解决的问题。

发明内容

有鉴于此，本发明要解决的技术问题在于提供一种能够提高肠道免疫力的组合物及产品。

本发明提供的组合物包括母乳低聚糖和动物双歧杆菌乳双歧亚种。

本发明中，所述母乳低聚糖由2’-岩藻糖基乳糖、3-岩藻糖基乳糖、3’-唾液酸基乳糖、6’-唾液酸基乳糖或乳糖-N-四糖中至少一种组成。

本发明中，所述母乳低聚糖中，2’-岩藻糖基乳糖、3-岩藻糖基乳糖、乳糖-N-四糖、3’-唾液酸基乳糖与6’-唾液酸基乳糖的质量比为(0～10):(4～8):(3～6):(1～4):(0～1)。

本发明实施例中，所述母乳低聚糖中，2’-岩藻糖基乳糖、3-岩藻糖基乳糖、乳糖-N-四糖、3’-唾液酸基乳糖与6’-唾液酸基乳糖的质量比为10:4:3:(1～2):(0～1)。

一些实施例中，所述母乳低聚糖由如下质量份的组分组成：2’-岩藻糖基乳糖10份、3-岩藻糖基乳糖4份、乳糖-N-四糖3份、3’-唾液酸基乳糖1份和6’-唾液酸基乳糖1份；

或者由如下质量份的组分组成：2’-岩藻糖基乳糖10份、3-岩藻糖基乳糖4份、乳糖-N-四糖3份和3’-唾液酸基乳糖2份。

所述动物双歧杆菌乳双歧亚种为动物双歧杆菌乳双歧亚种BB-12。

其中，所述母乳低聚糖与动物双歧杆菌乳双歧亚种的比例为5mg：(1×10³CFU～1×10¹²CFU)；优选为5mg：(1×10⁶CFU～1×10¹⁰CFU)。一些具体实施例中，所述母乳低聚糖与动物双歧杆菌乳双歧亚种的比例为5mg：1×10⁸CFU。

一些具体实施例中，本发明所述组合物由动物双歧杆菌乳双歧亚种BB-12和母乳低聚糖组成；其中动物双歧杆菌乳双歧亚种BB-12和母乳低聚糖的比例为1×10¹¹CFU：5g；所述母乳低聚糖由2’-岩藻糖基乳糖10质量份、3-岩藻糖基乳糖4质量份、乳糖-N-四糖3质量份、3’-唾液酸基乳糖1质量份和6’-唾液酸基乳糖1质量份组成。

另一些具体实施例中，本发明所述组合物由动物双歧杆菌乳双歧亚种BB-12和母乳低聚糖组成；其中动物双歧杆菌乳双歧亚种BB-12和母乳低聚糖的比例为1×10¹¹CFU：5g；所述母乳低聚糖由2’-岩藻糖基乳糖10质量份、3-岩藻糖基乳糖4质量份、乳糖-N-四糖3质量份和3’-唾液酸基乳糖2质量份组成。

本发明所述的组合物在制备提高肠道免疫能力的产品中的应用。

所述提高肠道免疫能力包括：提高跨膜电阻水平和/或抑制炎症因子水平。

一些实施例中，所述提高肠道免疫能力包括：提升肠道细胞的屏障作用、降低肠道细胞释放炎症因子IL-8与IP-10。

具体的，所述提高跨膜电阻水平是指提高肠道细胞对致病菌ETEC的屏障作用。所述抑制炎症因子水平是指抑制致病菌ETEC作用下，肠道细胞分泌IL-8和IP-10的水平。

本发明所述提高肠道免疫能力包括提高婴幼儿的肠道免疫能力，也包括提高3岁以上儿童、青少年和/或成人的肠道免疫能力。因此，本发明所述的组合物能够应用于婴幼儿食品(例如，婴幼儿配方粉、辅食、营养补充剂)，以及3岁以上儿童、青少年和成人的营养补充剂或食品中。

本发明还提供了含有所述组合物的产品。所述产品为食品或保健品。所述食品包括液体饮料、固体饮料或其他奶制品；所述保健品的剂型为口服液、片剂或胶囊。

所述液态饮料包括液态乳制品或乳饮料，所述液态乳制品包括动物基乳制品和植物基乳制品，所述动物基乳制品包括：纯奶、发酵乳、乳酸菌饮料等，所述植物基乳制品包括：豆奶、花生奶、杏仁奶等。

所述固态饮料包括乳粉；所述乳粉包括：全脂乳粉、脱脂乳粉、部分脱脂乳粉、调制乳粉或牛初乳粉；所述其他奶制品包括：炼乳、奶油、乳酪或冰淇淋。

本发明所述的保健品的剂型为片剂、丸剂、口服液剂、胶囊剂、糖浆剂、滴丸剂或颗粒剂。其中，所述胶囊剂为硬胶囊剂或软胶囊剂。所述片剂为口服片剂或口腔片剂。所述口服片剂为普通压制片、分散片、泡腾片、咀嚼片、包衣片或缓控释片。所述保健品中可接受的辅料为水果粉、食用香精、甜味剂、酸味剂、填充剂、润滑剂、防腐剂、助悬剂、食用色素、稀释剂、乳化剂、崩解剂或增塑剂中的一种或两者以上的混合物。

本发明提供了含有母乳低聚糖和动物双歧杆菌乳双歧亚种BB-12的组合物，该组合物中两种组分相互配合，产生增效协同作用，有效提高了肠道免疫能力。实验表明，本发明提供的组合物能够良好的抑制致病菌吸附能力、提高跨膜电阻水平和/或抑制炎症因子水平。

附图说明

图1示各受试物对跨膜电阻(TEER)的影响；

图2示在加入大肠杆菌共培养时，各受试物对肠道细胞分泌炎症因子IL-8与IP-10的影响。

具体实施方式

本发明提供了能够提高肠道免疫力的组合物及产品，本领域技术人员可以借鉴本文内容，适当改进工艺参数实现。特别需要指出的是，所有类似的替换和改动对本领域技术人员来说是显而易见的，它们都被视为包括在本发明。本发明的方法及应用已经通过较佳实施例进行了描述，相关人员明显能在不脱离本发明内容、精神和范围内对本文的方法和应用进行改动或适当变更与组合，来实现和应用本发明技术。

2’-岩藻糖基乳糖(2’-fucosyllactose)，为岩藻糖与乳糖形成的三糖结构，该物质经微生物发酵法制备，与人乳中发现的寡糖具有相同结构。3-岩藻糖基乳糖(3-fucosyllactose)，为岩藻糖与乳糖形成的三糖结构，与2’-岩藻糖基乳糖互为同分异构体。该物质经微生物发酵法制备，与人乳中发现的寡糖具有相同结构。

3’-唾液酸基乳糖(3’-sialyllactose)，为唾液酸与乳糖形成的三糖结构，该物质经微生物发酵法制备，与人乳中发现的寡糖具有相同结构。6’-唾液酸基乳糖(6’-sialyllactose)，为唾液酸与乳糖形成的三糖结构，与3’-唾液酸基乳糖互为同分异构体。该物质经微生物发酵法制备，与人乳中发现的寡糖具有相同结构。

乳糖-N-四糖(lacto-N-tetraose)，为乳糖与四糖形成的六糖结构，该物质经微生物发酵法制备，与人乳中发现的寡糖具有相同结构。

本发明采用的试材皆为普通市售品，皆可于市场购得。其中，动物双歧杆菌乳双歧亚种(Bifidobacteria animalis subsp.lactis)BB-12菌株，由科汉森公司提供受试样品。

本发明的营养组合物可用于制备各种健康食品及保健食品等。具体地，所述食品可以为液体饮料、固体饮料、口服液、奶制品、片剂或胶囊等，例如可以是用于添加在婴幼儿食品(包括婴幼儿配方粉、辅食、营养补充剂)，以及3岁以上儿童、青少年和成人的营养补充剂或食品中，具有广阔的应用前景。优选地，所述动物双歧杆菌乳双歧亚种在食品中的添加量为1×10³CFU/天～1×10¹²CFU/天，进一步优选为1×10⁶CFU/天～1×10¹¹CFU/天。优选地，所述动物双歧杆菌乳双歧亚种在食品中的添加量为1×10³CFU/天～1×10¹²CFU/天，进一步优选为1×10⁶CFU/天～1×10¹¹CFU/天。母乳低聚糖在食品中的添加量可为1mg/天～15g/天。

下面结合实施例，进一步阐述本发明：

实施例1组合物制备

1.实验准备步骤

1.1培养基配置与受试益生元的储存和配置

含有益生元(益生元种类参见表1)和益生菌的培养基在每次实验当天于无菌环境中新鲜配置，并预热到37℃。受试的益生元/HMOs被储存在干燥避光的室温环境中。实验中使用的浓度为5g/L。

表1益生元种类

编号	英文名称	缩写	中文名称
				1	2’-fucosyllactose	2’-FL	2’-岩藻糖基乳糖
2	3-fucosyllactose	3-FL	3-岩藻糖基乳糖
				3	3’-sialyllactose	3’-SL	3’-唾液酸基乳糖
4	6’-sialyllactose	6’-SL	6’-唾液酸基乳糖
				5	Lacto-N-tetraose	LNT	乳糖-N-四糖

1.2益生菌培养、生长曲线绘制与活性鉴别

益生菌粉在实验前以冷冻干燥的状态送到实验室。益生菌被接种到MRS-琼脂平板上，取单独的菌株群落用于16SrDNA鉴定，且用来制备甘油原液(储存在-80℃)。在每次实验前，从甘油原液中取出益生菌并在MRS平板上于37℃接种，在静止态下收获，并在实验前用MEM培养基冲洗。在益生菌受试前，用荧光激活细胞分拣系统测量益生菌活性与细胞数。实验中使用的益生菌浓度为1×10⁸CFU/mL。在37℃厌氧条件下培养动物双歧杆菌乳双歧亚种BB-12，在实验前绘制生长曲线。在收到益生菌原料并在所有实验开始前，用流式细胞仪测试益生菌株的活性。16S测序被用来测定菌株身份。在益生菌具体各项实验的受试前，用荧光激活细胞分拣系统测量益生菌活性与细胞数。

1.3不同组合益生元和益生菌的配制

组合中包括益生元和益生菌，每5mg受试益生元与1×10⁸CFU的益生菌混合。其中益生菌为动物双歧杆菌乳双歧亚种BB-12。所述益生元设置如下组合，各组益生元中组分的质量比如表2：

表2母乳低聚糖中各组分质量比

比例	2’-FL	3-FL	LNT	3’-SL	6’-SL
						Mix A	10	4	3	1	1
Mix B	10	4	3	2	0

将益生菌菌粉与母乳低聚糖粉末按比例混合，制备获得各组组合物。或者，将益生菌与母乳低聚糖按比例以溶液重悬。

实施例2功效验证

1、实施例1各组合物对致病菌ETEC于肠道粘附实验结果

Caco-2细胞培养：从DSMZ(德国不伦瑞克)公司购得人结肠肿瘤细胞系(Caco-2)，并在有5％CO₂，37℃一定湿度条件下培养。第40-44代Caco-2细胞被用于实验。培养基为MEM培养基，其中添加20vol％胎牛血清(FBS)，1％的非必需氨基酸，1％的Glutamax，1％的丙酮酸钠，添加或未添加1％的青霉素-链霉素溶液，以及50μg/mL的庆大霉素(均从荷兰布雷达的Invitrogen公司购得)。细胞在T75培养瓶中长到80％融合，用胰蛋白酶消化后收集细胞。

致病菌ETEC的培养：用BHI-B培养基(美国纽约默克公司)培养ETEC细胞株H10407(ATCC35401)。在37℃厌氧条件下过夜培养后，致病菌在感染前被再次培养，以达到对数中期。离心收集细胞，冲洗并在实验前用PBS再悬浮。

检测组合物对于大肠杆菌的活性的影响：与抗粘附测试平行的，将大肠杆菌(终浓度为)10⁷CFU/mL添加到1mL受试的组合物中，并在37℃共培养1小时以测量活性。培养后，从每个样品离心收集大肠杆菌，再悬浮于PBS中，并在琼脂平板上接种。在37℃琼脂平板上培养过夜后，统计细菌的CFU菌落数以衡量致病菌吸附。统计生长中的大肠杆菌菌落数并记录为CFU/mL。结果表明，本发明提供的组合物对于大肠杆菌的活性并无抑制作用。

数据分析：用三次重复(有时候可用六次重复)来进行每个单独测试的统计分析。对肠道屏障测试，用two-way ANOVA并随后采用Dunnett’sposthoc测试进行多次比较来分析组间是否有显著性差异。对于炎症因子释放的测试，使用one-way ANOVA进行统计分析，并使用Sidak’sposthoc测试来计算空白组和ETEC对照组的统计学差异分析。p<0.05被认为有显著性差异，并用一个星号表示；两个星号表示p<0.01；三个星号表示p<0.001；四个星号表示p<0.0001。

2、肠道屏障完整性测试即组合物对跨膜电阻(TEER)影响的实验结果

理想的小肠上皮屏障功能是保护宿主免受致病菌侵入和/或致病菌来源毒素的先决条件。在此研究中，体外的屏障完整性通过测定肠道细胞层的跨表皮的电阻(TEER)体现。食物成分可能具有保护感染后肠道屏障功能下降的功能(减轻感染后TEER的下降)。为了研究益生元和益生菌对于感染的作用，测定了TEER在大肠杆菌感染前和感染后随时间变化的情况。

检测方法包括：Caco-2细胞被接种到Transwell聚碳酸酯细胞培养插入物中，平均孔径为0.4μm，面积为0.33cm²直至完全分化(±1000Ω)。用世界精准仪器购入的EVOM2表皮伏特测量器测量跨上皮细胞电阻(TEER)以衡量屏障完整性。

依据添加的受试物不同，细胞被分为如下几组：

Neg.control组：阴性对照组，Caco-2细胞在培养基中仅与致病菌ETEC一起培养。

Mix组：以MixA作为受试物。

Blank为不接触ETEC也不添加组合物的对照组。

BB12组：以动物双歧杆菌乳双歧亚种BB-12为受试物，密度为1×10⁸CFU/mL。

BB12+Mix组：受试物为动物双歧杆菌乳双歧亚种BB-12 1×10⁸CFU/mL+MixA 5g/L。

在测试当天，细胞被冲洗，并在37℃下用不含抗生素和血清，但含有受试物质的培养基中培养1小时。紧接着加入大肠杆菌到受试物质之上(感染倍数MOI为200:1)，并培养4小时。在实验开始前(t＝-1)，受试物质暴露1小时后及添加致病菌前(t＝0)，并在致病菌接触后1小时、2小时、3小时、4小时分别测定TEER。在与致病菌接触后单独条件下的TEER值与其各自在t＝0时的TEER值相关，且被表述成ΔTEER(Ω.cm²)。阴性对照(只加入大肠杆菌)与未接触致病菌或受试物质的阳性对照也在实验组别中。所有条件重复测定三次，一些对照组被重复测定6次。

受试动物双歧杆菌乳双歧亚种BB-12有正常的生长曲线。如图1所示，在不同的时间点测试了受试物质对于跨膜电阻的影响，单独的母乳低聚糖混合物(比例参见第一轮测试或mix A比例)或益生菌BB-12对于跨膜电阻TEER的下降基本无作用，与阴性对照组接近，而益生菌BB-12与母乳低聚糖mix A的组合，可在多个时间点，于一定程度上有提升跨膜电阻TEER值使其更接近空白组的趋势。

3、组合物对肠道细胞分泌炎症因子IL-8与IP-10的影响

益生元和益生菌能具有免疫调节(促进或者抗炎症)作用，能增加对于感染的抵抗力或者促进肠道健康。益生元益生菌的免疫调节作用可在存在或不存在促炎症刺激的情况下，测定小肠上皮细胞的细胞因子/趋化因子产生来衡量。用大肠杆菌菌株刺激Caco-2细胞并测定上清液中IL-8和IP-10的产生，可筛选益生元和益生菌对于趋化因子/细胞因子的产生的影响。IL-8对于紧急的自身免疫反应很重要，可以导致中性粒细胞的聚集。IP-10在免疫的二级应答中很重要。它可以吸引单核细胞和巨噬细胞，也包括Th1细胞，这些对于清除感染有重要作用。促炎症的益生元和益生菌可以增加IL-8和/或IP-10的生成，而抗炎症的益生元和益生菌可以减少IL-8和/或IP-10的生成。

如前所述，受试动物双歧杆菌乳双歧亚种BB-12有正常的生长曲线。且Caco-2细胞可以对炎症因子的刺激产生响应。

测试前，为了测试Caco-2细胞是否会对大肠杆菌的刺激有应答，用其他已知的炎症因子对于细胞的响应做了测试：用含有Rec TNFα(10ng/mL)以及Rec IFNγ(5ng/mL)(均从英国阿宾顿的R&D systems购入)的混合物培养液刺激细胞。刺激24小时候收集上清液并储存于-20℃。按照生产商的使用指导，用Bio-Plex试剂盒(美国加州BioRad公司)测试IL-8，IP-10。结果表明，Caco-2细胞可以对炎症因子的刺激产生响应。

接下来进行正式的检测，首先，依据添加的受试物不同，细胞被分为如下几组：

Blank组为不接触ETEC也不添加组合物的对照组。

MixB(noETEC)组为以MixB作为受试物，不接触ETEC。

MixB+BB12(noETEC)组，不接触ETEC，受试物为动物双歧杆菌乳双歧亚种BB-12 1×10⁸CFU/mL+MixB 5g/L。

ETEC组为仅接触ETEC的对照组。

MixB+ETEC组为以MixB作为受试物，接触ETEC。

MixB+BB12+ETEC组，接触ETEC，受试物为动物双歧杆菌乳双歧亚种BB-12 1×10⁸CFU/mL+MixB 5g/L。

实验方法包括：

将Caco-2细胞在96孔板养到适合的丰度。在实验最初，用不含抗生素的培养基冲洗细胞一次。根据如上分组方式，每组设三个平行。将单层细胞与各组受试物质在37℃下在不含抗生素的培养基中共培养1小时，然后加入大肠杆菌ETEC刺激细胞(MOI 200:1)。在这1小时的培养结束后，对单层细胞与致病菌共培养的物质做如下处理：用含有受试物质和50μg/mL庆大霉素的培养液冲洗和培养过夜。作为空白对照，只用了培养液而没用大肠杆菌刺激。用大肠杆菌刺激但没用受试物质的培养液被用作大肠杆菌应答的对照。数据统计分析方法同前，结果如表3和图2：

表3各组炎症因子水平

如图2所示，在未与致病菌ETEC共培养的情况下，母乳低聚糖组合物B，以及母乳低聚糖组合物B与动物双歧杆菌乳双歧亚种BB-12的组合物，几乎不会导致炎症因子IL-8或者IP-10的产生，与Blank相比，未产生显著性差异(p>0.05)。然而在与大肠杆菌ETEC共培养的情况下，母乳低聚糖组合物B有升高IL-8和IP-10的作用(p<0.001)；然而当体系中再加入动物双歧杆菌乳双歧亚种BB-12之后，母乳低聚糖混合物B与BB-12的组合物可显著降低炎症因子IL-8和IP-10的水平，不仅逆转了单独的母乳低聚糖组合物B导致炎症因子升高的趋势，且比未加入任何受试物质的阴性对照组ETEC还要低。说明BB-12+HMO混合物的营养组合物对于炎症因子的释放有一定调控作用。

以上仅是本发明的优选实施方式，应当指出，对于本技术领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明原理的前提下，还可以做出若干改进和润饰，这些改进和润饰也应视为本发明的保护范围。

Claims

1.组合物，其特征在于，包括母乳低聚糖和动物双歧杆菌乳双歧亚种。

2.根据权利要求1所述的组合物，其特征在于，所述母乳低聚糖由2’-岩藻糖基乳糖、3-岩藻糖基乳糖、3’-唾液酸基乳糖、6’-唾液酸基乳糖和乳糖-N-四糖中至少一种组成。

3.根据权利要求2所述的组合物，其特征在于，所述母乳低聚糖中，2’-岩藻糖基乳糖、3-岩藻糖基乳糖、乳糖-N-四糖、3’-唾液酸基乳糖与6’-唾液酸基乳糖的质量比为(0～10):(4～8):(3～6):(1～4):(0～1)。

4.根据权利要求3所述的组合物，其特征在于，

所述母乳低聚糖由如下质量份的组分组成：2’-岩藻糖基乳糖10份、3-岩藻糖基乳糖4份、乳糖-N-四糖3份、3’-唾液酸基乳糖1份和6’-唾液酸基乳糖1份；

5.根据权利要求1所述的组合物，其特征在于，所述动物双歧杆菌乳双歧亚种为动物双歧杆菌乳双歧亚种BB-12。

6.根据权利要求1～5任一项所述的组合物，其特征在于，所述母乳低聚糖与动物双歧杆菌乳双歧亚种的比例为5mg：(1×10³CFU～1×10¹²CFU)；优选为5mg：(1×10⁶CFU～1×10¹⁰CFU)。

7.权利要求1～6任一项所述的组合物在制备提高肠道免疫能力的产品中的应用。

8.根据权利要求7所述的应用，其特征在于，所述提高肠道免疫能力包括：提高跨膜电阻水平和/或抑制炎症因子水平。

9.含有权利要求1～6任一项所述组合物的产品。

10.根据权利要求9所述的产品，其特征在于，所述产品为食品或保健品；所述食品包括液体饮料、固体饮料或其他奶制品；所述保健品的剂型为口服液、片剂或胶囊。