CN114280299A - Ly6d在胰腺导管腺癌诊断、预后监测及治疗上的应用 - Google Patents

Abstract

本发明涉及LY6D在胰腺导管腺癌诊断、预后监测及治疗上的应用，属于生物医药技术领域。本发明提供LY6D在制备用于诊断胰腺癌的诊断试剂中的应用，LY6D在制备用于对胰腺癌的病情进展进行监测的诊断试剂中的应用，应用包括检测LY6D的血清浓度，组织学表达水平；以及LY6D在制备用于治疗胰腺癌的药物中的应用。

Description

Ly6d在胰腺导管腺癌诊断、预后监测及治疗上的应用

技术领域

本发明涉及Ly6d在胰腺导管腺癌诊断、预后监测及治疗上的应用，属于生物医药技术领域。

背景技术

胰腺导管腺癌(Pancreatic ductal adenocarcinoma，PDAC)是一种致命的恶性肿瘤，在西方国家中被列为癌症相关死亡的第三大原因，预计到2030年将成为仅次于肺癌的第二大癌症相关死亡原因。由于缺乏可靠的早期生物标记物，且化疗和靶向治疗效果较差，胰腺导管腺癌患者的5年生存率仍低于10％。胰腺癌早期缺乏特异性症状，其临床诊断主要依靠影像学检查(包括增强CT、核磁共振成像和内窥镜超声)结合组织活检病理学等。约70％发生在胰头，通常表现为胆道梗阻导致尿色深、黄疸、食欲减退、疲劳、体重减轻和外分泌胰腺功能不全。发生在胰体和胰尾的胰腺癌患者出现更多非特异性症状，包括腹痛、背痛和恶病质相关症状(食欲减退、体重减轻、疲劳)。大多数患者在诊断时表现为局部晚期(不可切除)或转移性疾病，仅有15％-20％的患者存在可切除的肿瘤分期，完全手术切除肿瘤是唯一的治愈机会。对于就诊时可切除的患者(10％-15％)，手术后辅以FOLFIRINOX(氟尿嘧啶、伊立替康、亚叶酸、奥沙利铂)辅助化疗是一种标准的治疗方法。对于可切除或可切除边缘疾病，新辅助全身治疗后进行手术评估是一种公认的治疗方法。对于因广泛血管受累而导致局部晚期和不可切除疾病的患者，全身治疗后放疗是确定局部疾病控制的一种选择。对于晚期(局部晚期和转移性)PDAC患者，多药化疗方案，包括FOLFIRINOX、吉西他滨/白蛋白结合型紫杉醇和纳米脂质体伊立替康/氟尿嘧啶，仅具有2-6个月的生存获益。因此，胰腺癌的早期诊断对病人的治疗和预后具有极为重要的意义。目前，临床上主要以血清碳水化合物抗原(CA19-9)和癌胚抗原(CEA)作为胰腺肿瘤初期的筛查指标。然而，CA19-9的升高在良性疾病和其他恶性肿瘤中也会出现，例如：急慢性胰腺炎、梗阻性黄疸、肝硬化以及胃肠道肿瘤的患者。因此，CA19-9作为胰腺癌早期诊断指标仍具有很多局限性。有研究发现基于血清和外分泌体生物标志物的液体活检可用于PDAC早期诊断，譬如在早期PDAC中升高的外泌体miR-21、miR-191和miR-451a等。其他血液生物标志物，包括无细胞DNA和循环肿瘤细胞，也有研究显示可用于监测治疗反应和评估治疗抵抗。虽然这些研究可能有助于在较早的阶段提高PDAC的诊断，但由于目前医疗技术的限制，目前仍然未有临床应用。因此，临床上需要更为准确、简易的指标来辅助胰腺癌的早期诊断。GPI(磷脂酰肌醇)锚定蛋白与肿瘤的发生发展密切相关，可以作为肿瘤标记物，既能定位在肿瘤细胞膜表面，又可以以游离形式在血液和其他生物流体中自由循环。这种特性使得GPI锚定蛋白有望成为肿瘤早期诊断标记物。经本发明的前期研究发现，1)通过单细胞测序分析，在胰腺癌早期病变组织中存在一群以LY6D为特异性标记物的肿瘤细胞亚群，并且通过拟时序分析发现这群细胞处于更加早期的状态，进一步通过实验证明LY6d阳性的导管状细胞具有较强的干性特征。Ly6D作为GPI锚定蛋白，检测其在血液及其他分泌物中的含量可能成为早期诊断胰腺癌的有效生物学指标。2)在荷瘤小鼠模型中，高表达Ly6D的胰腺肿瘤进展更快，转移能力更强。通过构建胰腺特异性敲除Ly6d小鼠，发现可以减缓Kras突变诱导的胰腺肿瘤进展，进一步说明LY6D本身具有促进胰腺肿瘤进展的功能。3)通过组织芯片染色，人胰腺肿瘤中高表达LY6D的病人预后更差。以上研究结果显示LY6D血清学ELISA检测或/和组织学染色水平可以用于胰腺癌的诊断和预后的监测，且靶向LY6D或其下游通路可能成为新型治疗胰腺癌的策略。

发明内容

本发明的目的是为解决LY6D在胰腺癌早期诊断、预后监测及治疗上的应用的技术问题。

为达到解决上述问题的目的，本发明所采取的技术方案是提供LY6D在制备用于诊断胰腺癌的诊断试剂中的应用，所述应用包括检测Ly6D的血清浓度。

本发明提供LY6D在制备用于对胰腺癌的病情进展进行监测的诊断试剂中的应用，所述应用包括检测LY6D的血清浓度。

本发明提供LY6D在制备用于对胰腺癌的预后进行评估的诊断试剂中的应用，所述应用包括检测LY6D的血清浓度和/或LY6D在胰腺肿瘤组织中(切除标本或穿刺标本)的表达水平。

本发明提供LY6D在制备用于治疗胰腺癌的药物中的应用。

优选地，上述应用包括制备直接靶向LY6D的中和抗体。

优选地，上述应用包括制备靶向LY6D下游信号通路的抑制剂。

相比现有技术，本发明具有如下有益效果：

1.血清LY6D含量检测可以作为一个血清学指标，辅助临床进行胰腺癌的早期筛选和诊断。

2.血清和组织LY6D水平与胰腺癌的不良预后密切相关，将其作为胰腺癌的诊断和病情监测指标，可以在病人入院后快速的对胰腺癌的预后进行预判。

3.由于目前并没有较好的非手术治疗胰腺癌的方法，将靶向LY6D或及其下游信号通路用于治疗胰腺癌(通常联合一线化疗药物)，有望成为治疗胰腺癌的新型的靶向治疗路径。

附图说明

图1为单细胞测序分析不同的肿瘤细胞亚群图和3D类器官培养分析图。

图2为TCGA数据库分析图和临床标本组织学染色结果与病人预后关系图。

图3为LY6D与胰腺癌细胞的生长，转移和抑制的关系图。

具体实施方式

为使本发明更明显易懂，兹以优选实施例，并配合附图作详细说明如下：

本发明提供了LY6D在制备用于诊断胰腺癌的诊断试剂中的应用，应用包括检测LY6D的血清浓度。

本发明提供LY6D在制备用于对胰腺癌的病情进展进行监测的诊断试剂中的应用，应用包括检测LY6D的血清浓度。

本发明提供LY6D在制备用于对胰腺癌的预后进行评估的诊断试剂中的应用，应用包括检测LY6D的血清浓度。

本发明提供LY6D在制备用于治疗胰腺癌的药物中的应用。

上述应用包括制备直接靶向LY6D的中和抗体。

上述应用包括制备靶向LY6D下游信号通路的抑制剂。

鉴于目前没有较好的血清学指标可以快速地、特异性地对胰腺癌进行早期诊断，LY6D作为GPI锚定蛋白，能够以可溶性的形式循环于血液、尿液和其他分泌物中，血清LY6D含量的检测可以作为一个很好的血清学指标，辅助临床进行胰腺癌的早期筛选和诊断。

鉴于目前没有较好的预测胰腺癌病人不良预后的指标，血清或者组织LY6D水平检测可以作为一个很好的监测胰腺癌病人预后不良的指标。

鉴于目前唯一有效治疗胰腺癌的手段是手术切除，而大部分病人发现时已是中晚期，手术的几率很小。中和抗体靶向LY6D或者抑制剂抑制其下游信号通路，可以作为一个很好的治疗胰腺肿瘤的生物靶向方法。

血清LY6D的应用场景包括：

1.血清LY6D用于胰腺癌的早期筛选和诊断：

1.1.无症状病人/腹痛/黄疸/消瘦病人入院时取病人血清，通过生化自动分析仪检测血清LY6D浓度。可以考虑加上胰腺肿瘤高风险人群，如慢性、复发性胰腺炎患者，不明原因的急性胰腺炎患者、具有胰腺肿瘤家族史的人群。

1.2.若血清LY6D浓度高于正常值，或者对于高风险人群进行动态监测。警惕是否患有胰腺疾病，可进一步结合胰腺CT或MRI的结果，若影像学结果提示有胰腺占位，可初步判定其可能为胰腺癌；再进一步结合病理活检做出明确的诊断。

2.血清/组织LY6D用于胰腺癌的预后不良监测：

对于已判定为胰腺癌的病人，可检测血清LY6D浓度以及组织LY6D表达，若LY6D表达升高则暗示病人可能易发生转移和复发，预后不良。

3.LY6D及其下游信号通路用于胰腺癌的治疗：

3.1.对于不能手术的胰腺癌病人，可以生物靶向LY6D或者下游信号分子，用于术前辅助治疗胰腺癌，提高病人的手术率。

对于不能手术的胰腺癌病人，可以生物靶向LY6D或者下游信号分子，并联合一线化疗药物，提高病人的预后/存活率。

3.2.对于可以手术的胰腺癌病人，可以生物靶向LY6D或者下游信号分子，用于术后辅助治疗胰腺癌，提高病人的预后。

如图1-3所示为LY6D在有关胰腺导管腺癌的早期诊断、预后监测及治疗上应用的相关实验结果。

1.血清LY6D用于胰腺癌的早期诊断的相关实验结果：

如图1中的A图、B图和C图中所示，单细胞测序分析发现3种不同的肿瘤细胞亚群，其中#1亚群处于更加原始的状态，并且GPI锚定蛋白LY6D可以作为#1肿瘤细胞亚群的特异性标记物。在图1的D图中，3D类器官培养显示Ly6d^hi的肿瘤细胞类器官形成能力更强。说明Ly6d^hi肿瘤细胞可能具有肿瘤起始细胞的潜能，血清LY6D检测有望用于胰腺癌的早期筛选和诊断。

2.血清/组织LY6D用于胰腺癌不良预后的监测：

如图2中的A图所示，TCGA数据库显示，相比于正常人，胰腺癌病人LY6D基因表达水平更高，并且高水平的LY6D与病人预后不良显著相关。在图2的B图中，临床标本组织学染色显示高表达LY6D蛋白水平与病人预后不良显著相关。说明高表达水平LY6D预示着胰腺癌病人的不良预后，因此血清/组织LY6D有望用于监测胰腺癌病人的预后情况。

3.LY6D用于胰腺癌的治疗：

如图3的A图所示，在胰腺肿瘤细胞中过表达LY6D后，胰腺肿瘤生长明显加快。在图3的B、C图中，原位接种过表达LY6D的胰腺肿瘤出现更多的横膈膜转移灶和更高的肝脏转移率。在图3的D图中，静脉注射过表达LY6D的胰腺肿瘤细胞，出现更多的肺部转移灶。说明高水平的LY6D预示着胰腺肿瘤更快的进展和更高的转移能力。

在图3的E图中，条件性杂合敲除Ly6d且Kras突变鼠给予2天的雨蛙素炎性诱导后，相较于Kras突变小鼠，其胰腺病变面积和级别有明显的减少。在图3的F图中，组织病理学显示条件性杂合敲除Ly6d的Kras突变鼠胰腺部位癌变面积明显减少，以早期的ADM和PanIN为主。说明LY6D本身具有促进胰腺肿瘤进展的功能，为靶向LY6D治疗胰腺癌提供了可能性。

以上所述，仅为本发明的较佳实施例，并非对本发明任何形式上和实质上的限制，应当指出，对于本技术领域的普通技术人员，在不脱离本发明的前提下，还将可以做出若干改进和补充，这些改进和补充也应视为本发明的保护范围。凡熟悉本专业的技术人员，在不脱离本发明的精神和范围的情况下，当可利用以上所揭示的技术内容而做出的些许更动、修饰与演变的等同变化，均为本发明的等效实施例；同时，凡依据本发明的实质技术对上述实施例所作的任何等同变化的更动、修饰与演变，均仍属于本发明的技术方案的范围内。

Claims (6)

1.LY6D在制备用于诊断胰腺癌的诊断试剂中的应用，其特征在于，所述应用包括检测LY6D的血清浓度。

2.LY6D在制备用于对胰腺癌的病情进展进行监测的诊断试剂中的应用，其特征在于，所述应用包括检测LY6D的血清浓度。

3.LY6D在制备用于对胰腺癌的预后进行评估的诊断试剂中的应用，其特征在于，所述应用包括检测LY6D的血清浓度或检测切除标本/穿刺标本中组织学LY6D表达水平。

4.LY6D在制备用于治疗胰腺癌的药物中的应用。

5.如权利要求4所述的LY6D在制备用于治疗胰腺癌的药物中的应用，其特征在于，所述应用包括制备直接靶向LY6D的中和抗体。

6.如权利要求4所述的LY6D在制备用于治疗胰腺癌的药物中的应用，其特征在于，所述应用包括制备靶向LY6D下游信号通路的抑制剂。

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