CN114279989A - 一种低分子量肝素钙注射液抗Xa因子效价测定方法及其系统 - Google Patents
一种低分子量肝素钙注射液抗Xa因子效价测定方法及其系统 Download PDFInfo
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Abstract
本发明涉及化学测量领域，具体涉及一种低分子量肝素钙注射液抗Xa因子效价测定方法及其系统，包括：取低分子量肝素钙溶液100ul加抗凝血酶溶液100ul混匀，在37℃的温度条件下平衡1分钟，得到第一混合液；在第一混合液中加FXa溶液200ul,混匀，在37℃的温度条件下平衡1分钟，得到第二混合液；在第二混合液中加发色底物溶液500ul，混合，37℃平衡4分钟，得到测试液；用紫外分光光度计，以水为空白，在405nm的波长处，连续测定测试液的吸光度，每隔1分钟记录当前吸光度，共5分钟，计算吸光度变化率；取三羟甲基氨基甲烷‑氯化钠缓冲液与供试品溶液各100ul,代替低分子量肝素钙溶液按上述步骤操作，分别求出吸光度变化率，使得操作更加方便提高工作效率。
Description
技术领域
本发明涉及化学测量领域，尤其涉及一种低分子量肝素钙注射液抗Xa因子效价测定方法及其系统。
背景技术
低分子量肝素钙是一种新型的抗凝血酶Ⅲ(ATⅢ)依赖性抗血栓形成药，主要用于预防和治疗深部静脉血栓形成，也可用于血液透析时预防血凝块形成。
低分子量肝素钙注射液是低分子量肝素钙的灭菌水溶液，在临床上用于血液透析时预防血凝块形成，预防深部静脉血栓，疗效确切，应用广泛。虽然低分子量肝素钙注射液具有很好的临床疗效，但由于本品的药代动力学由其血浆抗Xa因子活性确定，注射剂中抗Xa因子效价测定偏差，极大影响了制剂的安全性，影响了疗效。
英国药典和我国国家药品标准收载的方法均为半微量测定法，反应在16支EP小管中完成，按生物检定统计法中的量反应平行线原理4×4法实验设计，计算效价及试验误差。
发明人发现，在实际检验过程中存在如下不足：反应在16支试管中进行，操作繁琐，很难保证各小管的反应时间一致，容易造成实验误差较大，且操作繁琐。
发明内容
本发明的目的在于提供一种低分子量肝素钙注射液抗Xa因子效价测定方法及其系统，旨在运用动态生色底物法，配制1份标准溶液和样品溶液，采用酶动力软件自动测定吸光度，大大降低了检验人员繁琐的加样操作，提高了实验的效率。
为实现上述目的，第一方面，本发明提供了一种低分子量肝素钙注射液抗Xa因子效价测定方法，包括：
S101取低分子量肝素钙溶液100ul加抗凝血酶溶液100ul混匀，在37℃的温度条件下平衡1分钟，得到第一混合液；
S102在第一混合液中加FXa溶液200ul,混匀，在37℃的温度条件下平衡1分钟，得到第二混合液；
S103在第二混合液中加发色底物溶液500ul，混合，37℃平衡4分钟，得到测试液；
S104用紫外分光光度计，以水为空白，在405nm的波长处，连续测定测试液的吸光度，每隔1分钟记录当前吸光度，共5分钟，计算吸光度变化率；
S105取三羟甲基氨基甲烷-氯化钠缓冲液与供试品溶液各100ul,代替低分子量肝素钙溶液按步骤S101～S104操作，分别求出吸光度变化率。
其中，所述取低分子量肝素钙溶液100ul加抗凝血酶溶液100ul混匀的过程中不能产生气泡。
其中，所述发色底物为S-2765。
其中，所述计算吸光度变化率的具体方式是以反应时间为横坐标，吸光度为纵坐标作图，求出每1分钟的吸光度变化率。
第二方面，本发明还提供一种低分子量肝素钙注射液抗Xa因子效价测定系统，包括：支撑组件、上料组件、温控组件、移动器和紫外分光光度计，所述支撑组件包括底座、转动台和驱动器，所述转动台具有多个放置槽，多个所述放置槽分布在所述转动台四周，所述转动台与所述底座转动连接，并位于所述底座的一侧，所述驱动器设置在所述转动台的一侧，所述上料组件包括支架和多个移液枪，所述支架与所述底座固定连接，并位于所述转动台的一侧，多个所述移液枪滑动设置在所述支架上，并对应多个所述放置槽设置，所述温控组件设置在所述转动台的一侧，所述紫外分光光度计设置在所述底座上，所述移动器设置在所述紫外分光光度计和所述转动台之间。
其中，所述底座包括底座本体、多个滑块和多个支撑弹簧，多个所述滑块与所述底座本体滑动连接，并分布在所述底座本体四周，多个所述支撑弹簧分别设置在所述底座本体和所述滑块之间，所述转动台具有多个斜块，多个所述斜块分别对应多个所述滑块设置。
其中，所述驱动器包括驱动电机和驱动轮，所述驱动轮与所述转动台接触，并位于所述转动台的一侧，所述驱动电机的输出端与所述驱动轮固定连接。
本发明的一种低分子量肝素钙注射液抗Xa因子效价测定方法及其系统，包括：取低分子量肝素钙溶液100ul加抗凝血酶溶液100ul混匀，在37℃的温度条件下平衡1分钟，得到第一混合液；在第一混合液中加FXa溶液200ul,混匀，在37℃的温度条件下平衡1分钟，得到第二混合液；在第二混合液中加发色底物溶液500ul，混合，37℃平衡4分钟，得到测试液；用紫外分光光度计，以水为空白，在405nm的波长处，连续测定测试液的吸光度，每隔1分钟记录当前吸光度，共5分钟，计算吸光度变化率；取三羟甲基氨基甲烷-氯化钠缓冲液与供试品溶液各100ul,代替低分子量肝素钙溶液按上述步骤操作，分别求出吸光度变化率，使得操作更加方便提高工作效率。
附图说明
为了更清楚地说明本发明实施例或现有技术中的技术方案，下面将对实施例或现有技术描述中所需要使用的附图作简单地介绍，显而易见地，下面描述中的附图仅仅是本发明的一些实施例，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据这些附图获得其他的附图。
图1是本发明的一种低分子量肝素钙注射液抗Xa因子效价测定系统的结构图。
图2是本发明的一种低分子量肝素钙注射液抗Xa因子效价测定系统的左侧结构图。
图3是本发明的一种低分子量肝素钙注射液抗Xa因子效价测定系统的剖面示意图。
图4是图3细节A的局部放大图。
图5是本发明的移液枪和搅拌器的局部结构图。
图6是本发明的一种低分子量肝素钙注射液抗Xa因子效价测定方法的结构图。
1-支撑组件、2-上料组件、3-温控组件、4-移动器、5-紫外分光光度计、11-底座、12-转动台、13-驱动器、14-计时器、21-支架、22-移液枪、23-搅拌器、24-导风管、25-气泵、31-移动气缸、32-安装板、33-加热板、34-温度传感器、41-支撑架、42-升降气缸、43-水平气缸、44-抓块、45-夹块、46-第二弹簧、111-底座本体、112-滑块、113-支撑弹簧、121-放置槽、122-斜块、131-驱动电机、132-驱动轮、231-搅拌叶片、232-延长杆、233-第二叶片。
具体实施方式
下面详细描述本发明的实施例，所述实施例的示例在附图中示出，其中自始至终相同或类似的标号表示相同或类似的元件或具有相同或类似功能的元件。下面通过参考附图描述的实施例是示例性的，旨在用于解释本发明，而不能理解为对本发明的限制。
在本发明的描述中，需要理解的是，术语“长度”、“宽度”、“上”、“下”、“前”、“后”、“左”、“右”、“竖直”、“水平”、“顶”、“底”“内”、“外”等指示的方位或位置关系为基于附图所示的方位或位置关系，仅是为了便于描述本发明和简化描述，而不是指示或暗示所指的装置或元件必须具有特定的方位、以特定的方位构造和操作，因此不能理解为对本发明的限制。此外，在本发明的描述中，“多个”的含义是两个或两个以上，除非另有明确具体的限定。
请参阅图6，第一方面，本发明提供一种低分子量肝素钙注射液抗Xa因子效价测定方法，包括：
S101取低分子量肝素钙溶液100ul加抗凝血酶溶液100ul混匀，在37℃的温度条件下平衡1分钟，得到第一混合液；
所述取低分子量肝素钙溶液100ul加抗凝血酶溶液100ul混匀的过程中不能产生气泡。
S102在第一混合液中加FXa溶液200ul,混匀，在37℃的温度条件下平衡1分钟，得到第二混合液；
S103在第二混合液中加发色底物溶液500ul，混合，37℃平衡4分钟，得到测试液；
所述发色底物为S-2765。
S104用紫外分光光度计，以水为空白，在405nm的波长处，连续测定测试液的吸光度，每隔1分钟记录当前吸光度，共5分钟，计算吸光度变化率。
所述计算吸光度变化率的具体方式是以反应时间为横坐标，吸光度为纵坐标作图，求出每1分钟的吸光度变化率。
S105取三羟甲基氨基甲烷-氯化钠缓冲液(pH7.4)与供试品溶液各100ul,代替低分子量肝素钙溶液按步骤S101～S104操作，分别求出吸光度变化率。
采用上述方式通过运用动态生色底物法，采用酶动力软件自动测定吸光度，降低了繁琐的操作，大大提高检测效率，并减少了依赖进口的试剂使用量，可以为企业降低成本。
第二方面，请参阅图1～图5，本发明还提供一种低分子量肝素钙注射液抗Xa因子效价测定系统，包括支撑组件1、上料组件2、温控组件3、移动器4和紫外分光光度计5，所述支撑组件1包括底座11、转动台12和驱动器13，所述转动台12具有多个放置槽121，多个所述放置槽121分布在所述转动台12四周，所述转动台12与所述底座11转动连接，并位于所述底座11的一侧，所述驱动器13设置在所述转动台12的一侧，所述上料组件2包括支架21和多个移液枪22，所述支架21与所述底座11固定连接，并位于所述转动台12的一侧，多个所述移液枪22滑动设置在所述支架21上，并对应多个所述放置槽121设置，所述温控组件3设置在所述转动台12的一侧，所述紫外分光光度计5设置在所述底座11上，所述移动器4设置在所述紫外分光光度计5和所述转动台12之间。
在本实施方式中，所述转动台12具有多个放置槽121，所述放置槽121中用于放置反应容器，多个所述放置槽121分布在所述转动台12四周，可以用于容纳多个容器，所述转动台12与所述底座11转动连接，并位于所述底座11的一侧，使得所述转动台12可以相对所述底座11转动，所述驱动器13设置在所述转动台12的一侧，所述驱动器13可以带动所述转动台12转动，所述上料组件2包括支架21和多个移液枪22，所述支架21与所述底座11固定连接，并位于所述转动台12的一侧，多个所述移液枪22滑动设置在所述支架21上，并对应多个所述放置槽121设置，通过所述支架21对多个所述移液枪22进行支撑，所述移液枪22中可以根据需要按照药剂的加载顺序放置不同的药剂，所述温控组件3设置在所述转动台12的一侧，所述温控组件3可以移动对所述转动台12上的容易进行保温，所述紫外分光光度计5设置在所述底座11上，所述移动器4设置在所述紫外分光光度计5和所述转动台12之间，移动器4可以将处理完成的容器移动到是殴紫外分光光度计5中进行检测。使用时将多个容器分别添加低分子量肝素钙溶液、三羟甲基氨基甲烷-氯化钠缓冲液(pH7.4)与供试品溶液，然后放置到所述转动台12上，所述移液枪22中依次放置有抗凝血酶溶液、FXa溶液和发色底物溶液，然后转动所述转动台12到相应的所述移液枪22下滴加相应的药剂，通过所述温控组件3可以在添加完成后对药剂进行保温平衡，从而可以使得多个测定试剂按顺序同时进行处理，从而可以提高处理效率，使得测定更加便捷。
进一步的，所述底座11包括底座本体111、多个滑块112和多个支撑弹簧113，多个所述滑块112与所述底座本体111滑动连接，并分布在所述底座本体111四周，多个所述支撑弹簧113分别设置在所述底座本体111和所述滑块112之间，所述转动台12具有多个斜块122，多个所述斜块122分别对应多个所述滑块112设置。
在本实施方式中，为了使得所述转动台12可以更加准确地对准温控组件3或者移液枪22，在所述底座本体111上滑动设置有滑块112，使得所述转动台12在转动时，可以通过所述斜块122下压所述滑块112而进行转动，在移动到位之后，所述支撑弹簧113带动多个所述滑块112上移，从而可以推动所述斜块122转动而对位置进行微调，使得更加方便对准。
进一步的，所述驱动器13包括驱动电机131和驱动轮132，所述驱动轮132与所述转动台12接触，并位于所述转动台12的一侧，所述驱动电机131的输出端与所述驱动轮132固定连接。
在本实施方式中，通过所述驱动电机131可以方便地带动所述驱动轮132转动，从而可以更加方便地带动所述转动台12转动。
进一步的，所述支撑组件1还包括计时器14，所述计时器14设置在所述底座11的一侧。
在本实施方式中，通过所述计时器14可以对反应进行计时，使得操作更加准确，也可以和各种驱动件连接以自动进行控制。
进一步的，所述上料组件2还包括多个搅拌器23、多个导风管24和气泵25，所述气泵25设置在所述底座11的一侧，多个所述搅拌器23分别与多个所述移液枪22连接，并位于所述移液枪22的一侧，所多个所述导风管24分别与所述气泵25和所述搅拌器23连通。
在本实施方式中，为了避免在搅拌时产生气泡，需要采用低速搅拌，因此而选择采用气泵25产生气体通过所述导风管24，使得气体吹动所述搅拌器23转动而进行搅拌，使得使用更加方便。
进一步的，所述搅拌器23包括搅拌叶片231、延长杆232和第二叶片233，所述延长杆232与所述移液枪22转动连接，并位于所述移液枪22的一侧，所述搅拌叶片231和所述第二叶片233与所述延长杆232固定连接，并位于所述延长杆232的两端。
在本实施方式中，气体可以吹动所述第二叶片233，使得所述第二叶片233转动，所述第二叶片233通过所述延长杆232带动所述搅拌叶片231转动，从而可以对容器中的液体进行搅拌。
进一步的，所述温控组件3包括移动气缸31、安装板32、加热板33和温度传感器34，所述安装板32与所述底座11滑动连接，并位于所述转动台12的一侧，所述加热板33固定设置在所述安装板32上，所述移动气缸31的输出端与所述安装板32固定连接，所述温度传感器34设置在所述安装板32的一侧。
在本实施方式中，在需要保温进行平衡时，可以通过所述移动气缸31带动所述安装板32滑动靠近容器，然后启动所述加热板33进行加热，通过所述温度传感器34可以对加热温度进行检测，使得使用更加方便。
进一步的，所述移动器4包括支撑架41、升降气缸42、水平气缸43、抓块44、两个夹块45和第二弹簧46，所述支撑架41与所述底座11固定连接，并位于所述紫外分光光度计5和所述转动台12之间，所述水平气缸43固定设置在所述支撑架41上，所述升降气缸42与所述水平气缸43的伸缩杆连接，所述抓块44与所述升降气缸42的伸缩杆连接，两个所述夹块45与所述抓块44转动连接，并位于所述抓块44的两侧，所述第二弹簧46设置在两个所述抓块44之间。
在本实施方式中，为了更加方便地将反应完成的容器放置到紫外分光光度计5中进行检测，设置两个所述夹块45靠近所述容器，张开，然后通过所述第二弹簧46的弹力将容器夹紧，然后通过所述升降气缸42带带动容器上移，通过所述水平气缸43带动容器水平移动，从而可以再次通过所述升降气缸42带动容易下移放入到紫外分光光度计5中，使得操作更加方便。为了在下放容器后容器脱落，可以在紫外分光光度计5中放入凸块撑开所述夹块45。
以上所揭露的仅为本发明一种较佳实施例而已，当然不能以此来限定本发明之权利范围，本领域普通技术人员可以理解实现上述实施例的全部或部分流程，并依本发明权利要求所作的等同变化，仍属于发明所涵盖的范围。
Claims (7)
1.一种低分子量肝素钙注射液抗Xa因子效价测定方法，其特征在于，
包括：S101取低分子量肝素钙溶液100ul加抗凝血酶溶液100ul混匀，在37℃的温度条件下平衡1分钟，得到第一混合液；
S102在第一混合液中加FXa溶液200ul,混匀，在37℃的温度条件下平衡1分钟，得到第二混合液；
S103在第二混合液中加发色底物溶液500ul，混合，37℃平衡4分钟，得到测试液；
S104用紫外分光光度计，以水为空白，在405nm的波长处，连续测定测试液的吸光度，每隔1分钟记录当前吸光度，共5分钟，计算吸光度变化率；
S105取三羟甲基氨基甲烷-氯化钠缓冲液与供试品溶液各100ul,代替低分子量肝素钙溶液按步骤S101～S104操作，分别求出吸光度变化率。
2.如权利要求1所述的一种低分子量肝素钙注射液抗Xa因子效价测定方法，其特征在于，
所述取低分子量肝素钙溶液100ul加抗凝血酶溶液100ul混匀的过程中不能产生气泡。
3.如权利要求2所述的一种低分子量肝素钙注射液抗Xa因子效价测定方法，其特征在于，
所述发色底物为S-2765。
4.如权利要求3所述的一种低分子量肝素钙注射液抗Xa因子效价测定方法，其特征在于，
所述计算吸光度变化率的具体方式是以反应时间为横坐标，吸光度为纵坐标作图，求出每1分钟的吸光度变化率。
5.一种低分子量肝素钙注射液抗Xa因子效价测定系统，其特征在于，
包括：支撑组件、上料组件、温控组件、移动器和紫外分光光度计，所述支撑组件包括底座、转动台和驱动器，所述转动台具有多个放置槽，多个所述放置槽分布在所述转动台四周，所述转动台与所述底座转动连接，并位于所述底座的一侧，所述驱动器设置在所述转动台的一侧，所述上料组件包括支架和多个移液枪，所述支架与所述底座固定连接，并位于所述转动台的一侧，多个所述移液枪滑动设置在所述支架上，并对应多个所述放置槽设置，所述温控组件设置在所述转动台的一侧，所述紫外分光光度计设置在所述底座上，所述移动器设置在所述紫外分光光度计和所述转动台之间。
6.如权利要求5所述的一种低分子量肝素钙注射液抗Xa因子效价测定系统，其特征在于，
所述底座包括底座本体、多个滑块和多个支撑弹簧，多个所述滑块与所述底座本体滑动连接，并分布在所述底座本体四周，多个所述支撑弹簧分别设置在所述底座本体和所述滑块之间，所述转动台具有多个斜块，多个所述斜块分别对应多个所述滑块设置。
7.如权利要求6所述的一种低分子量肝素钙注射液抗Xa因子效价测定系统，其特征在于，
所述驱动器包括驱动电机和驱动轮，所述驱动轮与所述转动台接触，并位于所述转动台的一侧，所述驱动电机的输出端与所述驱动轮固定连接。
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| PB01 | Publication | ||
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| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
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