CN114250238B - 基因编码的神经元发育调控多肽及其应用 - Google Patents

基因编码的神经元发育调控多肽及其应用 Download PDF

Info

Publication number
CN114250238B
CN114250238B CN202111421193.4A CN202111421193A CN114250238B CN 114250238 B CN114250238 B CN 114250238B CN 202111421193 A CN202111421193 A CN 202111421193A CN 114250238 B CN114250238 B CN 114250238B
Authority
CN
China
Prior art keywords
cct
acid sequence
nucleic acid
ser
sequence
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Active
Application number
CN202111421193.4A
Other languages
English (en)
Other versions
CN114250238A (zh
Inventor
刘晓冬
杨亚雄
高蕴溟
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Beihang University
Original Assignee
Beihang University
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Beihang University filed Critical Beihang University
Priority to CN202111421193.4A priority Critical patent/CN114250238B/zh
Publication of CN114250238A publication Critical patent/CN114250238A/zh
Application granted granted Critical
Publication of CN114250238B publication Critical patent/CN114250238B/zh
Active legal-status Critical Current
Anticipated expiration legal-status Critical

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
    • C07K14/46—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans from vertebrates
    • C07K14/47—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans from vertebrates from mammals
    • C07K14/4701—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans from vertebrates from mammals not used
    • C07K14/4702—Regulators; Modulating activity
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
    • C12N15/09—Recombinant DNA-technology
    • C12N15/63—Introduction of foreign genetic material using vectors; Vectors; Use of hosts therefor; Regulation of expression
    • C12N15/79—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts
    • C12N15/85—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts for animal cells
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2319/00—Fusion polypeptide
    • C07K2319/01—Fusion polypeptide containing a localisation/targetting motif
    • C07K2319/09—Fusion polypeptide containing a localisation/targetting motif containing a nuclear localisation signal
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2319/00—Fusion polypeptide
    • C07K2319/01—Fusion polypeptide containing a localisation/targetting motif
    • C07K2319/095—Fusion polypeptide containing a localisation/targetting motif containing a nuclear export signal
    • Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y02—TECHNOLOGIES OR APPLICATIONS FOR MITIGATION OR ADAPTATION AGAINST CLIMATE CHANGE
    • Y02A—TECHNOLOGIES FOR ADAPTATION TO CLIMATE CHANGE
    • Y02A50/00—TECHNOLOGIES FOR ADAPTATION TO CLIMATE CHANGE in human health protection, e.g. against extreme weather
    • Y02A50/30—Against vector-borne diseases, e.g. mosquito-borne, fly-borne, tick-borne or waterborne diseases whose impact is exacerbated by climate change

Abstract

本发明公开了一种基因编码的神经元发育调控多肽及其应用，该基因编码的神经元发育调控多肽的组成包括：第一核酸序列以及第二核酸序列；其中，第一核酸序列为L型电压门控钙通道碳末端片段，第二核酸序列为核输出序列或核定位序列。第一核酸序列包含两种不同的碳末端片段，分别为CCTD及CCTC；第二核酸序列为核输出或核定位序列时，神经元突起发育调控分别为负向或正向调控。该基因编码的神经元发育调控多肽具有同一多肽不同细胞定位引起不同神经元发育方向的效果。

Description

基因编码的神经元发育调控多肽及其应用
技术领域
本发明涉及生物技术领域，具体地涉及一种神经元发育调控多肽及其应用。
背景技术
L型电压门控钙通道又称为CaV1通道，共有CaV1.1至CaV1.4四种亚型。其中CaV1.2和CaV1.3在神经系统广泛表达，介导神经元兴奋-转录耦联过程，进而调控神经元发育。CaV1通道碳末端(Distal C-Terminus，DCT)被报道具有抑制自身钙内流水平的作用，称为碳末端介导的抑制作用(C-terminus Mediated Inhibition，CMI)。与此同时，CaV1.2的一种DCT片段CCATC(Calcium Channel Associated Transcriptional regulator)被报道可由独立于通道的外显子表达，并作为转录因子进核，进而促进神经元发育过程。除CCATC外，神经元中还存在水解酶直接截切通道而产生的DCT片段，分别为CaV1.3通道的DCT剪切片段CCTD及CaV1.2的DCT剪切片段CCTC。这两种剪切片段一方面可能具有通道抑制作用进而抑制神经元发育，另一方面可能具有转录因子作用促进神经元发育，合理优化通道剪切片段可实现同一基因编码多肽基于不同条件对神经元发育进行双向调控。
发明内容
本发明旨在设计一类基因编码的神经元发育调控多肽，该多肽具有同一核心片段基于不同细胞定位序列引起不同神经元发育方向的效果。
为达上述目的，本发明提供一种基因编码的神经元发育调控多肽，该基因编码的神经元发育调控多肽组成包括：
第一核酸序列以及第二核酸序列。
其中，所述第一核酸序列为L型电压门控钙通道碳末端片段，所述第二核酸序列为核输出序列或核定位序列。
本发明的第一核酸序列为CCTD或CCTC。
本发明的CCTD的氨基酸序列如下所示：
NMSKAAHGKRPSIGNLEHVSENGHHSSHKHDREPQRRSSVKRSDSGDEQLPTICREDPEIHGYFRDPHCLGEQEYFSSEECYEDDSSPTWSRQNYGYYSRYPGRNIDSERPRGYHHPQGFLEDDDSPVCYDSRRSPRRRLLPPTPASHRRSSFNFECLRRQSSQEEVPSSPIFPHRTALPLHLMQQQIMAVAGLDSSKAQKYSPSHSTRSWATPPATPPYRDWTPCYTPLIQVEQSEALDQVNGSLPSLHRSSWYTDEPDISYRTFTPASLTVPSSFRNKNSDKQRSADSLVEAVLISEGLGRYARDPKFVSATKHEIADACDLTIDEMESAASTLLNGNVRPRANGDVGPLSHRQDYELQDFGPGYSDEEPDPGRDEEDLADEMICITTL(SEQ ID NO：1)；
本发明的CCTC的氨基酸序列如下所示：
EGHGPPLSPAIRVQEVAWKLSSNRCHSRESQAAMAGQEETSQDETYEVKMNHDTEACSEPSLLSTEMLSYQDDENRQLTLPEEDKRDIRQSPKRGFLRSASLGRRASFHLECLKRQKDRGGDISQKTVLPLHLVHHQALAVAGLSPLLQRSHSPASFPRPFATPPATPGSRGWPPQPVPTLRLEGVESSEKLNSSFPSIHCGSWAETTPGGGGSSAARRVRPVSLMVPSQAGAPGRQFHGSASSLVEAVLISEGLGQFAQDPKFIEVTTQELADACDMTIEEMESAADNILSGGAPQSPNGALLPFVNCRDAGQDRAGGEEDAGCVRARGRPSEEELQDSRVYVSSL(SEQ ID NO：2)。
本发明的核输出序列为NES(Nuclear Export Signal)，其氨基酸序列为LALKLAGLDIGS(SEQ ID NO：3)。第一核酸序列和第二核酸序列构成的细胞质定位调控多肽NES-CCTC或NES-CCTD能够用于神经元发育负向调控。
本发明的核定位序列为NLS(Nuclear LocalizationSignal)，其氨基酸序列为PPKKKRKV(SEQ ID NO：4)。第一核酸序列和第二核酸序列构成的细胞核调控多肽NLS-CCTC或NLS-CCTD能够用于神经元发育正向调控。
本发明还提供一种神经元发育负向调控的方法，使用上述基因编码的神经元发育调控多肽，且该第二核酸序列为核输出序列。
本发明的核输出序列为NES。
本发明又提供一种神经元发育正向调控的方法，使用上述基因编码的神经元发育调控多肽，且该第二核酸序列为核定位序列。
本发明的核定位序列为NLS。
表1氨基酸序列
本发明的基因编码的神经元发育调控多肽具有至少以下优点之一：
(1)发明人首次发现并验证了CCTD和CCTC对于CaV1通道的抑制能力。
(2)本发明的第一核酸序列L型电压门控钙通道碳末端片段具有基于不同细胞定位进而双向调控神经元发育的能力。
附图说明
图1为实施例1的CCTC和CCTD对CaV1通道作用的研究实验结果。
图2为实施例2的CCTC和CCTD在离体培养皮层神经元中对突起发育水平的影响的实验结果。
图3为实施例3的利用NES和NLS改造后的CCTD对神经元突起发育的双向调控的研究的实验结果。
图4为实施例4的利用NES和NLS定位序列改造后的CCTC对神经元突起发育的双向调控的研究的实验结果。
具体实施方式
下面将结合实施例对本发明的方案进行解释。本领域技术人员将会理解，下面的实施例仅用于说明本发明，而不应视为限定本发明的范围。实施例中未注明具体技术或条件的，按照本领域内的文献所描述的技术或条件或者按照产品说明书进行。所用试剂或仪器未注明生产厂商者，均为可以通过市购获得的常规产品。
实施例1：CCTD和CCTC对于CaV1通道作用的研究
在该实施例中，验证了CCTD和CCTC对于CaV1通道的抑制能力。在人配肾细胞HEK293中表达CaV1.3通道，并同时表达CCTD或CCTC片段，利用膜片钳全细胞记录方法检测CaV1.3通道钙电流，结果见图1。
膜片钳全细胞记录方法具体包括以下步骤：在HEK293细胞系中利用磷酸钙转染方法过表达CaV1.3通道所需的几个亚基，包括成孔亚基α1DL(区别不同通道的主要亚基)，辅助亚基α2δ和β2a。在此基础上，共表达CCTC或CCTD以验证其对通道的作用。利用膜片钳全细胞记录方法，将细胞钳制在-70mV，并给予不同电压刺激，在电压钳模式下记录细胞电流大小。
如图1所示，A为：通道电流示意图，以-10mV激活电压作为代表，其中红色代表钙离子电流，左侧红色指示柱指示钙电流大小，灰色为钡离子电流，细胞浴液为10mM钡离子，钡离子电流峰值归一化到钙离子峰值大小，以表针通道钙依然失活水平大小。从左至右依次为，CaV1.3通道对照组，通道与CCTC共表达组，通道与CCTD共表达组。B为：通道钙依赖失活曲线，其中钙依然失活以SCa表征，SCa＝1-r50，而r50＝I50/Ipeak，其中I50和Ipeak分别为通道在刺激50ms电流大小以及电流峰值大小，r50越大，SCa越小，钙依赖失活越强；以-10mV的SCa作为通道失活特征指标，图中红色和灰色分别为钙电流和钡电流随着激活电压变化的失活统计曲线。绿色区域指代由CCTC或CCTD造成的钙依赖失活曲线减小范围。C为：通道峰值钙电流曲线(激活曲线)，ICa等于峰值电流pA与细胞电容pF的比值，单位为pA/pF，以-10mV峰值电流作为通道特征钙电流大小，记为ICa。绿色区域指代由CCTC或CCTD造成的激活曲线减少范围。
由图1可知，在表达CCTD或CCTC之后，CaV1.3通道钙依赖失活水平(SCa)和峰值电流(ICa)均有显著下降，呈现出典型的碳末端介导的抑制作用(CMI)，CaV1通道整体钙电流呈现抑制状态，说明CCTD和CCTC具有抑制CaV1通道进而抑制神经元发育的潜力。
实施例2：CCTC和CCTD在离体培养皮层神经元中对突起发育水平影响的研究
将黄色荧光蛋白YFP标记于CCTD及CCTC以便于观察在细胞中的表达情况。将黄色荧光蛋白YFP标记后的CCTD及CCTC离体培养五天的小鼠皮层神经元中过表达2天时间，同时过表达青色荧光蛋白CFP用于追踪神经元突起，以CFP+YFP作为对照组，结果见图2。
如图2所示，A为：新生ICR小鼠皮层神经元在体外培养5天，转染质粒两天后在共聚焦显微镜下观察神经元形态，上图为CFP通道与YFP通道混合后的示意图，下图为追踪的神经元凸起示意图。B为：神经元凸起总长度总结图。C为：CCTC或CCTD核质比与神经元凸起总长度关系，灰色指示线提示正相关关系。
由图2的结果可知，综合统计所有神经元突起总长度后，发现CCTD及CCTC与对照组无区别(如图2中A、B)，间接提示CCTD及CCTC可能具有转录因子作用促进神经元发育进而平衡通道抑制带来的负面作用。考虑到转录因子作用在细胞核中起效而通道抑制作用在细胞质中起效，进一步刻画了两种片段核浆比(细胞核荧光值与细胞质荧光值的比值，Nucleus/Cytosol ratio，N/Cratio)与突起总长度的关系，其结果如图2中C所示。图2中C的结果显示，转染了两种碳末端片段的神经元突起总长度均与片段核浆比正相关，即碳末端片段越趋近于细胞质(核浆比越低)时，神经元发育越呈现受损状态，碳末端片段越趋近于细胞核(核浆比越高)时，神经元发育越呈现促进状态。
实施例3：利用NES和NLS改造后的CCTD对神经元突起发育的双向调控的研究
在该实施例中，以CCTD为例进一步分析核质分布对神经元发育的影响。在CCTD片段中分别嵌合核输出序列NES和核定位序列NLS能高效的将CCTD片段定位于细胞质或细胞核中，并同时融合YFP作为荧光标签，分别得到NES-YFP-CCTD和NLS-YFP-CCTD。以体外培养了15-18天的新生小鼠皮层神经元为考察对象，将YFP作为对照组，NES-YFP-CCTD和NLS-YFP-CCTD转染其中并观察其神经元发育情况，结果见图3。
如图3所示，A为：新生ICR小鼠皮层神经元体外培养15-18天，转染NES-YFP-CCTD或NLS-YFP-CCTD。左一YFP通道指示CCT片段或YFP对照组细胞分别位置，左二CFP通道指示神经元胞体轮廓，左三混合通道指示神经元整体轮廓，最右为神经元凸起追踪图。B为：神经元受到两种不同细胞分布CCT片段影响下的凸起总长度变化，及复杂度变化，后者利用Shollanalysis统计，其意义为以胞体为中心画10微米同心圆，计算凸起与同心圆相交个数。
由图3的结果可知，转染了核输出序列的NES-YFP-CCTD的神经元突起总长度显著性低于YFP对照组，而具有核定位序列的NLS-YFP-CCTD的神经元突起总长度显著性高于YFP对照组。由此可以证明，CCTD片段具有基于不同细胞定位进而双向调控神经元发育的能力。
实施例4：利用NES和NLS改造后的CCTC对神经元突起发育的双向调控的研究
在该实施例中，以CCTC为例进一步分析核质分布对神经元发育的影响。在CCTC片段中分别嵌合核输出序列NES和核定位序列NLS能高效的将CCTC片段定位于细胞质或细胞核中，并同时融合YFP作为荧光标签，分别得到NES-YFP-CCTC和NLS-YFP-CCTC。以体外培养了7天的初生小鼠皮层神经元为考察对象，将YFP作为对照组，NES-YFP-CCTC和NLS-YFP-CCTC转染其中并观察其神经元发育情况，结果见图4。
如图4所示，A为：新生ICR小鼠皮层神经元在体外培养5天，转染NES-YFP-CCTC和NLS-YFP-CCTC两天后在共聚焦显微镜下观察神经元形态，图中依次为融合通道图、凸起追踪图、胞体放大混合通道图、YFP通道图、以及CFP通道图。B为：神经元凸起总长度总结图。C为：神经元凸起复杂度总结图。
由图4的结果可知，细胞质定位片段NES-YFP-CCTC显著性抑制了神经元的发育，而细胞核定位片段NLS-YFP-CCTC显著性促进了神经元的发育。由此可以证明，CCTC片段具有基于不同细胞定位进而双向调控神经元发育的能力。
虽然本发明内容已以实施方式揭露如上，然其并非用以限定本发明内容，任何熟悉本领域的相关技术人员，在不脱离本发明内容的精神和范围内，当可作各种更动与润饰，因此本发明内容的保护范围当视所附权利要求的保护范围所界定者为准。
序列表
<110> 北京航空航天大学
<120> 基因编码的神经元发育调控多肽及其应用
<130> BJ2504-21P126102
<160> 4
<170> PatentIn version 3.5
<210> 1
<211> 391
<212> PRT
<213> 人工序列
<400> 1
Asn Met Ser Lys Ala Ala His Gly Lys Arg Pro Ser Ile Gly Asn Leu
1 5 10 15
Glu His Val Ser Glu Asn Gly His His Ser Ser His Lys His Asp Arg
20 25 30
Glu Pro Gln Arg Arg Ser Ser Val Lys Arg Ser Asp Ser Gly Asp Glu
35 40 45
Gln Leu Pro Thr Ile Cys Arg Glu Asp Pro Glu Ile His Gly Tyr Phe
50 55 60
Arg Asp Pro His Cys Leu Gly Glu Gln Glu Tyr Phe Ser Ser Glu Glu
65 70 75 80
Cys Tyr Glu Asp Asp Ser Ser Pro Thr Trp Ser Arg Gln Asn Tyr Gly
85 90 95
Tyr Tyr Ser Arg Tyr Pro Gly Arg Asn Ile Asp Ser Glu Arg Pro Arg
100 105 110
Gly Tyr His His Pro Gln Gly Phe Leu Glu Asp Asp Asp Ser Pro Val
115 120 125
Cys Tyr Asp Ser Arg Arg Ser Pro Arg Arg Arg Leu Leu Pro Pro Thr
130 135 140
Pro Ala Ser His Arg Arg Ser Ser Phe Asn Phe Glu Cys Leu Arg Arg
145 150 155 160
Gln Ser Ser Gln Glu Glu Val Pro Ser Ser Pro Ile Phe Pro His Arg
165 170 175
Thr Ala Leu Pro Leu His Leu Met Gln Gln Gln Ile Met Ala Val Ala
180 185 190
Gly Leu Asp Ser Ser Lys Ala Gln Lys Tyr Ser Pro Ser His Ser Thr
195 200 205
Arg Ser Trp Ala Thr Pro Pro Ala Thr Pro Pro Tyr Arg Asp Trp Thr
210 215 220
Pro Cys Tyr Thr Pro Leu Ile Gln Val Glu Gln Ser Glu Ala Leu Asp
225 230 235 240
Gln Val Asn Gly Ser Leu Pro Ser Leu His Arg Ser Ser Trp Tyr Thr
245 250 255
Asp Glu Pro Asp Ile Ser Tyr Arg Thr Phe Thr Pro Ala Ser Leu Thr
260 265 270
Val Pro Ser Ser Phe Arg Asn Lys Asn Ser Asp Lys Gln Arg Ser Ala
275 280 285
Asp Ser Leu Val Glu Ala Val Leu Ile Ser Glu Gly Leu Gly Arg Tyr
290 295 300
Ala Arg Asp Pro Lys Phe Val Ser Ala Thr Lys His Glu Ile Ala Asp
305 310 315 320
Ala Cys Asp Leu Thr Ile Asp Glu Met Glu Ser Ala Ala Ser Thr Leu
325 330 335
Leu Asn Gly Asn Val Arg Pro Arg Ala Asn Gly Asp Val Gly Pro Leu
340 345 350
Ser His Arg Gln Asp Tyr Glu Leu Gln Asp Phe Gly Pro Gly Tyr Ser
355 360 365
Asp Glu Glu Pro Asp Pro Gly Arg Asp Glu Glu Asp Leu Ala Asp Glu
370 375 380
Met Ile Cys Ile Thr Thr Leu
385 390
<210> 2
<211> 347
<212> PRT
<213> 人工序列
<400> 2
Glu Gly His Gly Pro Pro Leu Ser Pro Ala Ile Arg Val Gln Glu Val
1 5 10 15
Ala Trp Lys Leu Ser Ser Asn Arg Cys His Ser Arg Glu Ser Gln Ala
20 25 30
Ala Met Ala Gly Gln Glu Glu Thr Ser Gln Asp Glu Thr Tyr Glu Val
35 40 45
Lys Met Asn His Asp Thr Glu Ala Cys Ser Glu Pro Ser Leu Leu Ser
50 55 60
Thr Glu Met Leu Ser Tyr Gln Asp Asp Glu Asn Arg Gln Leu Thr Leu
65 70 75 80
Pro Glu Glu Asp Lys Arg Asp Ile Arg Gln Ser Pro Lys Arg Gly Phe
85 90 95
Leu Arg Ser Ala Ser Leu Gly Arg Arg Ala Ser Phe His Leu Glu Cys
100 105 110
Leu Lys Arg Gln Lys Asp Arg Gly Gly Asp Ile Ser Gln Lys Thr Val
115 120 125
Leu Pro Leu His Leu Val His His Gln Ala Leu Ala Val Ala Gly Leu
130 135 140
Ser Pro Leu Leu Gln Arg Ser His Ser Pro Ala Ser Phe Pro Arg Pro
145 150 155 160
Phe Ala Thr Pro Pro Ala Thr Pro Gly Ser Arg Gly Trp Pro Pro Gln
165 170 175
Pro Val Pro Thr Leu Arg Leu Glu Gly Val Glu Ser Ser Glu Lys Leu
180 185 190
Asn Ser Ser Phe Pro Ser Ile His Cys Gly Ser Trp Ala Glu Thr Thr
195 200 205
Pro Gly Gly Gly Gly Ser Ser Ala Ala Arg Arg Val Arg Pro Val Ser
210 215 220
Leu Met Val Pro Ser Gln Ala Gly Ala Pro Gly Arg Gln Phe His Gly
225 230 235 240
Ser Ala Ser Ser Leu Val Glu Ala Val Leu Ile Ser Glu Gly Leu Gly
245 250 255
Gln Phe Ala Gln Asp Pro Lys Phe Ile Glu Val Thr Thr Gln Glu Leu
260 265 270
Ala Asp Ala Cys Asp Met Thr Ile Glu Glu Met Glu Ser Ala Ala Asp
275 280 285
Asn Ile Leu Ser Gly Gly Ala Pro Gln Ser Pro Asn Gly Ala Leu Leu
290 295 300
Pro Phe Val Asn Cys Arg Asp Ala Gly Gln Asp Arg Ala Gly Gly Glu
305 310 315 320
Glu Asp Ala Gly Cys Val Arg Ala Arg Gly Arg Pro Ser Glu Glu Glu
325 330 335
Leu Gln Asp Ser Arg Val Tyr Val Ser Ser Leu
340 345
<210> 3
<211> 12
<212> PRT
<213> 人工序列
<400> 3
Leu Ala Leu Lys Leu Ala Gly Leu Asp Ile Gly Ser
1 5 10
<210> 4
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列
<400> 4
Pro Pro Lys Lys Lys Arg Lys Val
1 5

Claims (3)

1.一种基因编码的神经元发育调控多肽，其特征在于，其组成包括：
第一核酸序列；以及
第二核酸序列，
其中，所述第一核酸序列为L型电压门控钙通道碳末端片段，所述第二核酸序列为核输出序列或核定位序列；
所述第一核酸序列为CCTD或CCTC，
所述CCTD的氨基酸序列如下所示：NMSKAAHGKRPSIGNLEHVSENGHHSSHKHDREPQRRSSVKRSDSGDEQLPTICREDPEIHGYFRDPHCLGEQEYFSSEECYEDDSSPTWSRQNYGYYSRYPGRNIDSERPRGYHHPQGFLEDDDSPVCYDSRRSPRRRLLPPTPASHRRSSFNFECLRRQSSQEEVPSSPIFPHRTALPLHLMQQQIMAVAGLDSSKAQKYSPSHSTRSWATPPATPPYRDWTPCYTPLIQVEQSEALDQVNGSLPSLHRSSWYTDEPDISYRTFTPASLTVPSSFRNKNSDKQRSADSLVEAVLISEGLGRYARDPKFVSATKHEIADACDLTIDEMESAASTLLNGNVRPRANGDVGPLSHRQDYELQDFGPGYSDEEPDPGRDEEDLADEMICITTL；
所述CCTC的氨基酸序列如下所示：EGHGPPLSPAIRVQEVAWKLSSNRCHSRESQAAMAGQEETSQDETYEVKMNHDTEACSEPSLLSTEMLSYQDDENRQLTLPEEDKRDIRQSPKRGFLRSASLGRRASFHLECLKRQKDRGGDISQKTVLPLHLVHHQALAVAGLSPLLQRSHSPASFPRPFATPPATPGSRGWPPQPVPTLRLEGVESSEKLNSSFPSIHCGSWAETTPGGGGSSAARRVRPVSLMVPSQAGAPGRQFHGSASSLVEAVLISEGLGQFAQDPKFIEVTTQELADACDMTIEEMESAADNILSGGAPQSPNGALLPFVNCRDAGQDRAGGEEDAGCVRARGRPSEEELQDSRVYVSSL；
所述核输出序列为NES，其氨基酸序列为LALKLAGLDIGS；
所述核定位序列为 NLS，其氨基酸序列为PPKKKRKV。
2.一种多肽在制备药物中的用途，其特征在于，所述药物用于神经元发育负向调控，使用权利要求1所述的基因编码的神经元发育调控多肽，且所述第二核酸序列为核输出序列NES。
3.一种多肽在制备药物中的用途，其特征在于，所述药物用于神经元发育正向调控，使用权利要求1所述的基因编码的神经元发育调控多肽，且所述第二核酸序列为核定位序列NLS。
CN202111421193.4A 2021-11-26 2021-11-26 基因编码的神经元发育调控多肽及其应用 Active CN114250238B (zh)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN202111421193.4A CN114250238B (zh) 2021-11-26 2021-11-26 基因编码的神经元发育调控多肽及其应用

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN202111421193.4A CN114250238B (zh) 2021-11-26 2021-11-26 基因编码的神经元发育调控多肽及其应用

Publications (2)

Publication Number Publication Date
CN114250238A CN114250238A (zh) 2022-03-29
CN114250238B true CN114250238B (zh) 2023-08-25

Family

ID=80791231

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN202111421193.4A Active CN114250238B (zh) 2021-11-26 2021-11-26 基因编码的神经元发育调控多肽及其应用

Country Status (1)

Country Link
CN (1) CN114250238B (zh)

Citations (7)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN1436234A (zh) * 2000-01-14 2003-08-13 科里克萨有限公司 用于前列腺癌治疗和诊断的组合物及方法
CN1618805A (zh) * 2003-11-21 2005-05-25 上海人类基因组研究中心 神经系统发育相关蛋白及其编码序列和用途
CN1723284A (zh) * 2002-12-09 2006-01-18 图尔金株式会社 调节性锌指蛋白
CN107596341A (zh) * 2017-08-23 2018-01-19 清华大学 L型电压门控钙通道特异性多肽类激动剂和抑制剂
CN107987171A (zh) * 2017-11-24 2018-05-04 清华大学 基因编码钙探针GCaMP-X的设计与应用
CN111133110A (zh) * 2017-06-15 2020-05-08 株式会社图尔金 用于重复扩增突变的基因组编辑系统
CN112513270A (zh) * 2018-07-13 2021-03-16 加利福尼亚大学董事会 基于逆转录转座子的递送媒介物及其使用方法

Patent Citations (7)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN1436234A (zh) * 2000-01-14 2003-08-13 科里克萨有限公司 用于前列腺癌治疗和诊断的组合物及方法
CN1723284A (zh) * 2002-12-09 2006-01-18 图尔金株式会社 调节性锌指蛋白
CN1618805A (zh) * 2003-11-21 2005-05-25 上海人类基因组研究中心 神经系统发育相关蛋白及其编码序列和用途
CN111133110A (zh) * 2017-06-15 2020-05-08 株式会社图尔金 用于重复扩增突变的基因组编辑系统
CN107596341A (zh) * 2017-08-23 2018-01-19 清华大学 L型电压门控钙通道特异性多肽类激动剂和抑制剂
CN107987171A (zh) * 2017-11-24 2018-05-04 清华大学 基因编码钙探针GCaMP-X的设计与应用
CN112513270A (zh) * 2018-07-13 2021-03-16 加利福尼亚大学董事会 基于逆转录转座子的递送媒介物及其使用方法

Non-Patent Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
Cytosolic peptides encoding CaV1 C-termini downregulate the calcium channel activity-neuritogenesis coupling;Yaxiong Yang等;COMMUNICATIONS BIOLOGY(第5期);1-18 *

Also Published As

Publication number Publication date
CN114250238A (zh) 2022-03-29

Similar Documents

Publication Publication Date Title
CN108715850B (zh) 表皮干细胞中采用CRISPR-Cas系统进行GING2基因敲除
Singh et al. Astrocytes assemble thalamocortical synapses by bridging NRX1α and NL1 via hevin
Cronin et al. Efficient transduction and optogenetic stimulation of retinal bipolar cells by a synthetic adeno‐associated virus capsid and promoter
Albertinazzi et al. Overexpression of a neural-specific rho family GTPase, cRac1B, selectively induces enhanced neuritogenesis and neurite branching in primary neurons
Qiang et al. Basic fibroblast growth factor elicits formation of interstitial axonal branches via enhanced severing of microtubules
JP2022513426A (ja) 皮質興奮性ニューロンにおける遺伝子発現を選択的に調節するための人工発現構築物
CN110072559A (zh) 用于使基因在中间神经元中特异性表达的启动子SynP107
SA94150015B1 (ar) إنتاج وتنقية الليمفوكين lymphokine
Aubusson-Fleury et al. The conserved centrosomal protein FOR20 is required for assembly of the transition zone and basal body docking at the cell surface
CN110072558A (zh) 用于使基因在中间神经元中特异性表达的启动子SynPI
CN103173447B (zh) 新的β-肌动蛋白和RPS21 启动子及其应用
CN108430519A (zh) SynP159，用于基因在视杆光感受器中特异性表达的启动子
CN109575116B (zh) 一种线粒体定位导肽及其发现方法与应用
Zhang et al. The SUN domain proteins OsSUN1 and OsSUN2 play critical but partially redundant roles in meiosis
CN107922981A (zh) 用于增强在痘病毒中的表达的启动子
CN114250238B (zh) 基因编码的神经元发育调控多肽及其应用
Hino et al. Nuclear translocation of TSC-22 (TGF-β-stimulated clone-22) concomitant with apoptosis: TSC-22 as a putative transcriptional regulator
Honda et al. In vitro assembly properties of human type I and II hair keratins
CN110225761A (zh) 用于治疗胎儿酒精综合征障碍(fasd)的胎盘生长因子
CN109970861B (zh) 一种靶向线粒体的nd4融合蛋白及其制备方法和应用
Hjelm et al. Mifepristone-inducible transgene expression in neural progenitor cells in vitro and in vivo
US10702589B2 (en) Compositions and methods of treating neurological disorder and stress-induced conditions
EP4119666A1 (en) Light-responsive protein for color recognition and use thereof
CN108893473B (zh) 表皮干细胞中采用CRISPR-Cas系统进行Rab23基因敲除
CN107596341B (zh) L型电压门控钙通道特异性多肽类激动剂和抑制剂

Legal Events

Date Code Title Description
PB01 Publication
PB01 Publication
SE01 Entry into force of request for substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination
GR01 Patent grant
GR01 Patent grant