CN114222582A - 肽及其用途 - Google Patents

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Abstract

本文公开了用于治疗或预防受试者的神经性疼痛的方法和组合物，该方法包括向受试者施用治疗有效量的催乳素或其功能变体，其中该功能变体包含式(I)的肽或其药学上可接受的盐：R1‑C‑R‑I‑X1‑X2‑X3‑X4‑N‑C‑R2(I)(SEQ ID NO:1)其中X1是选自异亮氨酸(I)和缬氨酸(V)的氨基酸残基；X2是选自组氨酸(H)和酪氨酸(Y)的氨基酸残基；X3是选自天冬氨酸(D)和天冬酰胺(N)的氨基酸残基；X4是选自天冬酰胺(N)和丝氨酸(S)的氨基酸残基；R1选自由以下组成的组：YLKLLK、LKLLK、KLLK、LLK、LL、K，或者R1不存在；并且R2是G(甘氨酸)，或者R2不存在。

Description

肽及其用途
发明领域
本发明总体上涉及可用于治疗或预防神经性疼痛的肽和组合物及其使用方法。
背景
所有参考文献，包括在本说明书中引用的任何专利或专利申请，都据此通过引用并入，以便能够充分理解本发明。然而，这样的参考文献不应被理解为在澳大利亚或在任何其他国家构成对任何这些文献形成本领域公知常识的一部分的承认。
疼痛可以是一种使人衰弱的感觉经验，通常与组织损伤和/或潜在的神经紊乱相关。疼痛，无论是急性的还是慢性的，都可能在不存在任何可察觉的刺激、损伤或潜在疾病的情况下出现。急性疼痛通常持续短的时间段(例如，几个小时或几天)，并且通常将在潜在刺激停止后消失。相比之下，慢性疼痛持续较长的时间段(例如，几周或几个月)，并且甚至可能在不存在潜在刺激的情况下持续。
存在两种广泛认可的疼痛类型—伤害性疼痛和神经性疼痛。伤害性疼痛是对感觉神经纤维的潜在有害刺激的结果，由身体上对机械或物理损伤做出反应的伤害感受器检测。伤害性疼痛是一种保护性生物功能，通过警告组织损伤，来引起对有害刺激的回避。伤害性疼痛可能由热损伤(thermal damage)诸如烧伤或冻伤引起，或由机械创伤诸如撕裂或压力引起。
与伤害性疼痛相比，神经性疼痛由外周神经系统或中枢神经系统中的原发性损害、功能失常或功能障碍引起。神经性疼痛不具有保护作用，并且可以在损伤之后或疾病状态消退之后数天或数月发展，并且经常是长期的和慢性的。
神经性疼痛可以由通过创伤造成的神经损伤引起，所述创伤诸如运动损伤、事故、跌倒或贯穿伤(penetrating injury)，或者神经损伤可以由疾病过程引起，所述疾病过程诸如中风、病毒感染、暴露于毒素、退行性疾病和糖尿病。可以导致发展神经性疼痛状况诸如糖尿病性神经病和疱疹后神经痛(post-herpetic neuralgia)的疾病状态的患病率正在增加，并且因此越来越多的人罹患慢性神经性疼痛症状。
虽然存在用于治疗伤害性疼痛的有效疗法，但是神经性疼痛对于可用的镇痛药物经常是耐药的。此外，目前的疗法诸如三环抗抑郁药、抗惊厥药、阿片样物质和非阿片样物质镇痛药具有显著的副作用，诸如镇静和嗜睡，并且在阿片样物质镇痛药的情况下，具有耐药性和药物依赖或成瘾的风险。此外，目前很少有可用于在不存在对伤害性疼痛的镇痛作用的情况下治疗神经性疼痛的有用的选择。因此，对于有效用于选择性治疗神经性疼痛、具有有限的副作用或没有副作用的新的且替代的选择仍然存在迫切需求。本发明通过提供有效减轻神经性疼痛而对伤害性疼痛具有最小镇痛作用或不具有镇痛作用的化合物来解决或部分地缓和该问题。
发明概述
在本文公开的方面中，提供了一种治疗或预防受试者的神经性疼痛的方法，该方法包括向受试者施用治疗有效量的催乳素或其功能变体，其中该功能变体包含式(I)的肽：
R1-C-R-I-X1-X2-X3-X4-N-C-R2(I)(SEQ ID NO:1)
其中
X1是选自异亮氨酸(I)和缬氨酸(V)的氨基酸残基；
X2是选自组氨酸(H)和酪氨酸(Y)的氨基酸残基；
X3是选自天冬氨酸(D)和天冬酰胺(N)的氨基酸残基；
X4是选自天冬酰胺(N)和丝氨酸(S)的氨基酸残基；
R1选自由以下组成的组：YLKLLK、LKLLK、KLLK、LLK、LL、K，或者R1不存在；并且
R2是G(甘氨酸)，或者R2不存在，或者R2是药学上可接受的载体。
在一种实施方案中，式(I)的肽选自由以下组成的组：氨基酸序列CRIIHNNNC(SEQID NO:2)、CRIIHNNNCG(SEQ ID NO:3)、CRIVYDSNC(SEQ ID NO:4)和CRIVYDSNCG(SEQ IDNO:5)。
在一种实施方案中，所述治疗有效量在不存在对伤害性疼痛的治疗有效的镇痛作用的情况下减轻受试者的神经性疼痛。
在一种实施方案中，受试者是人类。
在一种实施方案中，受试者选自由猫科动物、犬科动物和马科动物组成的组。
在一种实施方案中，神经性疼痛与选自由以下组成的组的状况相关：糖尿病性神经病；带状疱疹(Herpes Zoster)(带状疱疹(shingles))相关神经病；纤维肌痛；多发性硬化、中风、脊髓损伤；慢性手术后疼痛、幻肢痛、帕金森病；尿毒症相关神经病；淀粉样变性神经病；HIV感觉神经病；遗传性运动和感觉神经病(HMSN)；遗传性感觉神经病(HSN)；遗传性感觉和自主神经病；伴有溃疡残毁(ulcero-mutilation)的遗传性神经病；呋喃妥因神经病(nitrofurantoin neuropathy)；腊肠样肿胀神经病(tomaculous neuropathy)；营养缺乏引起的神经病、肾衰竭引起的神经病、三叉神经神经性疼痛、非典型牙痛(幻牙痛)、灼口综合征、复杂的区域性疼痛综合征、重复性劳损(repetitive strain injury)、药物诱发的外周神经病以及与感染相关的外周神经病。
在一种实施方案中，该方法还包括向受试者施用治疗有效量的能够减轻受试者的疼痛的第二剂，其中该第二剂不是如本文描述的催乳素或其功能变体。
在本文公开的另一个方面中，提供了包含催乳素或其功能变体的药物组合物，用于治疗和预防受试者的神经性疼痛，其中该功能变体包含式(I)的肽：
R1-C-R-I-X1-X2-X3-X4-N-C-R2(I)(SEQ ID NO:1)
其中
X1是选自异亮氨酸(I)和缬氨酸(V)的氨基酸残基；
X2是选自组氨酸(H)和酪氨酸(Y)的氨基酸残基；
X3是选自天冬氨酸(D)和天冬酰胺(N)的氨基酸残基；
X4是选自天冬酰胺(N)和丝氨酸(S)的氨基酸残基；
R1选自由以下组成的组：YLKLLK、LKLLK、KLLK、LLK、LL、K，或者R1不存在；并且
R2是G(甘氨酸)，或者R2不存在，或者R2是药学上可接受的载体。
在本文公开的另一个方面中，提供了催乳素或其功能变体在制造用于治疗和预防受试者的神经性疼痛的药物中的用途，其中该功能变体包含式(I)的肽：
R1-C-R-I-X1-X2-X3-X4-N-C-R2(I)(SEQ ID NO:1)
其中
X1是选自异亮氨酸(I)和缬氨酸(V)的氨基酸残基；
X2是选自组氨酸(H)和酪氨酸(Y)的氨基酸残基；
X3是选自天冬氨酸(D)和天冬酰胺(N)的氨基酸残基；
X4是选自天冬酰胺(N)和丝氨酸(S)的氨基酸残基；
R1选自由以下组成的组：YLKLLK、LKLLK、KLLK、LLK、LL、K，或者R1不存在；并且
R2是G(甘氨酸)，或者R2不存在。
在本文公开的另一个方面中，提供了包含以下的药物组合物的用途：(i)催乳素或其功能变体，其中该功能变体包含式(I)的肽，
R1-C-R-I-X1-X2-X3-X4-N-C-R2(I)(SEQ ID NO:1)
其中
X1是选自异亮氨酸(I)和缬氨酸(V)的氨基酸残基；
X2是选自组氨酸(H)和酪氨酸(Y)的氨基酸残基；
X3是选自天冬氨酸(D)和天冬酰胺(N)的氨基酸残基；
X4是选自天冬酰胺(N)和丝氨酸(S)的氨基酸残基；
R1选自由以下组成的组：YLKLLK、LKLLK、KLLK、LLK、LL、K，或者R1不存在；并且
R2是G(甘氨酸)，或者R2不存在；以及
(ii)能够减轻受试者的疼痛的第二剂，其中该第二剂不是如本文描述的催乳素或其功能变体。
在本文公开的另一个方面中，提供了包含催乳素或其功能变体的镇痛组合物，其中该功能变体包含式(I)的肽：
R1-C-R-I-X1-X2-X3-X4-N-C-R2(I)(SEQ ID NO:1)
其中
X1是选自异亮氨酸(I)和缬氨酸(V)的氨基酸残基；
X2是选自组氨酸(H)和酪氨酸(Y)的氨基酸残基；
X3是选自天冬氨酸(D)和天冬酰胺(N)的氨基酸残基；
X4是选自天冬酰胺(N)和丝氨酸(S)的氨基酸残基；
R1选自由以下组成的组：YLKLLK、LKLLK、KLLK、LLK、LL、K，或者R1不存在；并且
R2是G(甘氨酸)，或者R2不存在。
在本文公开的另一个方面中，提供了包含治疗有效量的肽或其药学上可接受的盐的镇痛组合物，其中肽由以下组成：氨基酸序列CRIIHNNNC(SEQ ID NO:2)、CRIIHNNNCG(SEQID NO:3)、CRIVYDSNC(SEQ ID NO:4)和CRIVYDSNCG(SEQ ID NO:5)。
在本文公开的另一个方面中，提供了包含催乳素或其功能变体的药物组合物，其中该功能变体包含式(I)的肽：
R1-C-R-I-X1-X2-X3-X4-N-C-R2(I)(SEQ ID NO:1)
其中
X1是选自异亮氨酸(I)和缬氨酸(V)的氨基酸残基；
X2是选自组氨酸(H)和酪氨酸(Y)的氨基酸残基；
X3是选自天冬氨酸(D)和天冬酰胺(N)的氨基酸残基；
X4是选自天冬酰胺(N)和丝氨酸(S)的氨基酸残基；
R1选自由以下组成的组：YLKLLK、LKLLK、KLLK、LLK、LL、K，或者R1不存在；并且
R2是G(甘氨酸)，或者R2不存在，或者R2是药学上可接受的载体。
在一种实施方案中，肽选自由以下组成的组：YLKLLKCRIIHNNNC(SEQ ID NO:6)、LKLLKCRIIHNNNC(SEQ ID NO:7)、KLLKCRIIHNNNC(SEQ ID NO:8)、LLKCRIIHNNNC(SEQ IDNO:9)、LKCRIIHNNNC(SEQ ID NO:10)、KCRIIHNNNC(SEQ ID NO:11)、YLKLLKCRIIHNNNCG(SEQID NO:12)、LKLLKCRIIHNNNCG(SEQ ID NO:13)、KLLKCRIIHNNNCG(SEQ ID NO:14)、LLKCRIIHNNNCG(SEQ ID NO:15)、LKCRIIHNNNCG(SEQ ID NO:16)和KCRIIHNNNCG(SEQ IDNO:17)。
在本文公开的另一个方面中，提供了包含治疗有效量的肽或其药学上可接受的盐的组合物，其中肽由以下组成：氨基酸序列CRIIHNNNC(SEQ ID NO:2)、CRIIHNNNCG(SEQ IDNO:3)、CRIVYDSNC(SEQ ID NO:4)和CRIVYDSNCG(SEQ ID NO:5)。
附图简述
图1是示出在神经性疼痛的Chung模型中脊髓切片的制备和全细胞记录部位的示意图。
图2示出了来自神经性疼痛的Chung模型的与对照静息状态相比，与肽SEQ ID NO:2(本文中也称为“LAT7771”)诱导的背角神经元反应相关的膜电位和神经元输入电阻的变化的汇总数据。(N＝11，*P<0.05，学生配对t检验)
图3示出了来自神经性疼痛的Chung模型的与对照静息状态相比，与LAT7771诱导的背角神经元反应相关的膜电位和神经元输入电阻的变化的汇总数据。(N＝11)
图4示出了LAT7771诱导的膜去极化和自发放电的增加。A和B示出了在不存在LAT7771(A)和存在LAT7771(B)的情况下自发活性细胞的连续记录的样品。C：与A和B中示出的相同细胞的电压-电流(VI)关系。电流注入的电压响应被示出为叠加的。D和E示出了C中示出的数据的图，包括在响应的峰值(D)和稳态(E；响应结束)处测量的电压响应的振幅。注意到斜率几乎平行移动，指示电导几乎不变化。
图5示出了来自神经性疼痛的Chung模型的背角神经元中LAT7771诱导的膜去极化和增强的内向整流(inward rectification)。A和B：在不存在LAT7771(A)和存在LAT7771(B)的情况下细胞的电压-电流(VI)关系。电流注入的电压响应被示出为叠加的。C和D示出了A和B中示出的数据的图。注意到斜率几乎平行移动，指示去极化电位处电导几乎不变化，但比约-70mV更负的膜电位处斜率减小，后者指示增强的内向整流。
图6示出LAT7771增强了来自神经性疼痛的Chung模型的背角神经元的抑制性突触传递，对突触后膜性质几乎没有影响。A.示出LAT7771在该细胞中诱导最小膜去极化的连续记录的样品。B和C：在不存在LAT7771(B)和存在LAT7771(C)的情况下A中示出的细胞的电压-电流(VI)关系。电流注入的电压响应被示出为叠加的。注意到在VI关系中几乎未观察到变化。D.与A、B和C相同的神经元，示出在不存在LAT7771(黑色)和存在LAT7771(红色)的情况下，通过电刺激背根传入(0.1Hz)诱发的叠加的抑制性突触后电位(IPSP)。E示出了D中示出的数据的叠加的平均值。注意到在存在LAT7771的情况下IPSP的峰值振幅的增加。
图7示出了LAT7771和LAT8881(具有氨基酸序列YLRIVQCRSVEGSCGF的人类生长激素衍生的镇痛化合物)增强了来自神经性疼痛的Chung模型的背角神经元中的抑制性突触传递，而对突触后膜性质几乎没有影响。A.连续记录的样品，示出对照(黑色)、LAT7771(红色)、洗涤后(蓝色)和随后的LAT8881(绿色)中的VI关系。LAT7771(红色)和LAT8881(绿色)对该细胞的突触后性质几乎没有影响或没有影响。B.与A相同的神经元，示出通过电刺激背根(0.1Hz)诱发的叠加的突触后电位。在对照(黑色)中，通过刺激背根主要诱发兴奋性突触后电位(EPSP)。在存在LAT7771的情况下，EPSP被抑制，并且抑制性突触后电位显现(红色)，这种效应在LAT7771的冲洗(washout)后部分可逆(蓝色)。与LAT7771类似，LAT8881的随后应用再次增强了抑制性突触传递，同时抑制了EPSP。C.B中示出的响应的叠加的平均值。注意到，与对照(黑色)和LAT7771洗涤后相比，在存在LAT7771(红色)和LAT8881(绿色)的情况下存在显著的IPSP。
图8示出LAT7771增强了来自神经性疼痛的Chung模型的在背角神经元中的抑制性突触传递。A.连续记录的样品，示出了对背根的电刺激的响应诱发的叠加的突触后电位。在不存在LAT7771的情况下，兴奋性突触后电位(EPSP)占优势(对照1和对照2)。随后在存在LAT7771的情况下，EPSP降低，并且抑制性突触后电位(IPSP)主导响应。B示出了A中示出的响应的叠加的平均值。注意到在存在LAT7771的情况下，EPSP的逐渐抑制和IPSP的出现。C.与A和B相同的神经元，示出在对照中以及随后在存在LAT7771的情况下突触后响应的时间进程图。注意到在存在LAT7771的情况下，EPSP的抑制和IPSP的主导。
图9示出了显示来自神经性疼痛的Chung模型的与肽SEQ ID NO:3(本文中也称为“LAT7772”)诱导的背角神经元反应相关的膜电位和神经元输入电阻的变化的汇总数据。(n＝5，*P<0.05相对于静息，学生配对t检验)。
图10显示来自神经性疼痛的Chung模型的与LAT7772诱导的背角神经元反应相关的膜电位和神经元输入电阻的变化的汇总数据，(n＝5)。
图11示出A：LAT7772诱导的超极化，其与神经元输入电阻的降低相关。B：与A中示出的相同细胞的电压-电流(VI)关系。电流注入的电压响应被示出为叠加的。C示出了在存在LAT7772的情况下，来自与B相同的细胞的数据的图。注意到斜率的降低，指示神经元输入电阻的降低，指示离子通道开放。曲线在约-60mV(在我们的记录条件下接近氯离子的逆转电位)相交。D.LAT7772还抑制背根传入介导的兴奋性突触传递。连续记录的样品，示出在不存在LAT7772(1，黑色)和存在LAT7772(2，红色)的情况下叠加的电诱发(0.1Hz)EPSP，这些记录的平均值在下方示出为叠加的。注意到在LAT7772中对背根刺激诱发的EPSP的抑制。
图12示出了LAT7772诱导的超极化，其与神经元输入电阻的降低相关。B：与A中示出的相同细胞的电压-电流(VI)关系。电流注入的电压响应被示出为叠加的。C示出了在存在LAT7772的情况下，来自与B相同的细胞的数据的图。注意到斜率的降低，指示神经元输入电阻的降低，指示离子通道开放。曲线在约-78mV(在我们的记录条件下在氯离子和钾离子的逆转电位中间)相交。D.LAT7772还抑制背根传入介导的兴奋性突触传递。连续记录的样品，示出在不存在LAT7772(1，黑色)和存在LAT7772(2，红色)的情况下叠加的电诱发(0.1Hz)EPSP，这些记录的平均值在下方示出为叠加的。注意到在LAT7772中对背根刺激诱发的EPSP的抑制。
图13示出了LAT7772诱导的去极化，其与神经元输入电阻的降低相关。A：电压-电流(VI)关系以叠加的电流注入的电压响应示出。B：A中示出的数据的图。注意到斜率的降低，指示神经元输入电阻的降低，指示离子通道开放。曲线在约-60mV(在我们的记录条件下接近氯离子的逆转电位)相交。C.LAT7772还抑制背根传入介导的兴奋性突触传递。连续记录的样品，示出在不存在LAT7772(1，黑色)和存在LAT7772(2，红色)的情况下叠加的电诱发(0.1Hz)EPSP，这些记录的平均值在下方D中示出为叠加的。注意到LAT7772中对背根刺激诱发的迟发性组分EPSP的抑制。
图14示出了显示来自神经性疼痛的Chung模型的与肽SEQ ID NO:4(本文中也称为“LAT7773”)诱导的背角神经元反应相关的膜电位和神经元输入电阻的变化的汇总数据。(n＝9，*P<0.05相对于静息，学生配对t检验)。
图15示出显示来自神经性疼痛的Chung模型的与LAT7773诱导的背角神经元反应相关的膜电位和神经元输入电阻的变化的汇总数据，(n＝9)。
图16示出LAT7773在该神经元中几乎不诱导膜电位的变化，同时增强内向整流和减少背根传入介导的突触输入。A：电压-电流(VI)关系，其示出叠加的电流注入的电压响应。B示出了在存在LAT7773的情况下，来自与A相同的细胞的数据的图。注意到-60mV的静息电位附近的电导没有变化，但在LAT7773中更负的膜电处曲线斜率减小，指示在存在化合物的情况下增强的内向整流。C和D.与A和B相同的神经元，示出通过刺激背根诱发的叠加的EPSP。注意到与对照(黑色，C)相比，在存在LAT7773(红色，D)的情况下，刺激失败的次数增加。E示出了C和D中示出的数据的叠加的平均值。
图17示出了LAT7773诱导的去极化，其与神经元输入电阻的增加相关。A：电压-电流(VI)关系以叠加的电流注入的电压响应示出。B：A中示出的数据的图。注意到斜率的增加，指示神经元输入电阻的增加，这与离子通道关闭一致。曲线在约-92mV(在我们的记录条件下接近钾离子的逆转电位)相交。C.LAT7773对背根传入介导的兴奋性突触传递几乎没有影响。连续记录的样品，示出在不存在LAT7773(1，黑色)和存在LAT7773(2，红色)的情况下叠加的电诱发(0.1Hz)EPSP。
图18示出LAT7773诱导背根传入介导的突触传递的增加，对突触后膜性质几乎没有影响。A：电压-电流(VI)关系以叠加的电流注入的电压响应示出。B：A中示出的数据的图。注意到在LAT7773中负膜电位处斜率的降低，表明增强的向内整流，对静息电位附近的输入电阻几乎没有影响。C、D和E：连续记录的样品，示出背根传入介导的EPSP和IPSP在存在LAT7773的情况下增强。D和E示出了从C中示出的连续记录中分离的EPSP(D)和IPSP(E)。注意到EPSP和IPSP两者在LAT7773中都有所增强。
图19示出了显示来自神经性疼痛的Chung模型的与肽SEQ ID NO:5(本文中也称为“LAT7774”)诱导的背角神经元反应相关的膜电位和神经元输入电阻的变化的汇总数据。(n＝7)。
图20示出显示来自神经性疼痛的Chung模型的与LAT7774诱导的背角神经元反应相关的膜电位和神经元输入电阻的变化的汇总数据，(n＝7)。
图21示出了LAT7774诱导的超极化，其与神经元输入电阻的降低和钾电导的激活相关。A：在不存在LAT7774(对照，黑色)和存在LAT7774(红色)的情况下的电压-电流(VI)关系，示出叠加的电流注入的电压响应。B示出了在不存在LAT7774和存在LAT7774的情况下，来自与A相同的细胞的数据的图。注意到斜率的降低，指示神经元输入电阻的降低，指示离子通道开放。曲线预计在约-95mV(在我们的记录条件下接近钾离子的逆转电位)相交。C.相同的神经元，其示出LAT7774对背根传入介导的突触输入的影响。连续记录的样品，示出刺激背根诱发的叠加的EPSP。底部轨迹示出叠加的1和2的平均值。注意到在存在LAT7774的情况下，EPSP的略微下降。
图22示出了LAT7774诱导的超极化，其与神经元输入电阻的降低和氯化物电导的激活相关。A：在不存在LAT7774(对照，黑色)和存在LAT7774(红色)的情况下的电压-电流(VI)关系，示出叠加的电流注入的电压响应。B示出了在不存在LAT7774和存在LAT7774的情况下，来自与A相同的细胞的数据的图。注意到斜率的降低，指示神经元输入电阻的降低以及离子通道开放。曲线预计在约-55mV(在我们的记录条件下接近氯离子的逆转电位)相交。C.相同的神经元，其示出LAT7774对背根传入介导的突触输入的影响。连续记录的样品，示出刺激背根诱发的叠加的EPSP。底部轨迹示出叠加的1和2的平均值。注意到LAT7774对这些电位没有影响。
图23示出了LAT7774诱导的去极化，其与神经元输入电阻的增加和钾电导的阻断(最可能是内向整流钾电导)相关。A：在不存在LAT7774(对照，黑色)和存在LAT7774(红色)的情况下的电压-电流(VI)关系，示出叠加的电流注入的电压响应。B示出了在不存在LAT7774和存在LAT7774的情况下，来自与A相同的细胞的数据的图。注意到斜率的增加，指示神经元输入电阻的增加以及离子通道关闭。曲线预计在约-80mV(在我们的记录条件下接近钾离子的逆转电位)相交。还注意到，在比约-80mV更负的电位的斜率的变化，表明内向整流钾电导的电压依赖性降低或变化。C.相同的神经元，其示出LAT7774对背根传入介导的突触输入的影响。连续记录的样品，示出刺激背根诱发的叠加的EPSP。底部轨迹示出叠加的1和2的平均值。注意到LAT7774对这些电位没有影响。
图24示出了LAT7774诱导的去极化，其与神经元输入电阻的增加和钾电导的阻断相关。A：在不存在LAT7774的情况下(对照，黑色)、存在LAT7774的情况下(红色)和化合物洗涤后(蓝色)的电压-电流(VI)关系。电流注入的电压响应被示出为叠加的。B示出了在不存在LAT7774和存在LAT7774的情况下以及化合物冲洗后，来自与A相同的细胞的数据的图。注意到斜率的增加，指示神经元输入电阻的增加以及离子通道关闭。曲线预计在约-85mV(在我们的记录条件下接近钾离子的逆转电位)相交。还注意到，在比约-80mV更负的电位的斜率的变化，表明内向整流钾电导的电压依赖性降低或变化。C.相同的神经元，其示出LAT7774对背根传入介导的突触输入的影响。连续记录的样品，示出刺激背根诱发的叠加的EPSP。注意到在存在LAT7774的情况下，EPSP增加，并且达到放电阈值的趋势增加。LAT7774的这些影响在药物冲洗时是至少部分可逆的。
图25示出显示来自神经性疼痛的Chung模型的与催乳素诱导的背角神经元反应相关的膜电位和神经元输入电阻的变化的汇总数据。(n＝3)。
图26示出显示来自神经性疼痛的Chung模型的与催乳素诱导的背角神经元反应相关的膜电位和神经元输入电阻的变化的汇总数据，(n＝3)。
图27示出了催乳素诱导的小的膜去极化，其与神经元输入电阻的增加相关。A.在不存在催乳素(对照，黑色)和存在催乳素(红色)的情况下，叠加示出的膜对去极化电流脉冲的反应。B：与A中示出的相同细胞的电压-电流(VI)关系。电流注入的电压响应被示出为叠加的。C和D示出了在不存在催乳素和存在催乳素的情况下，B中示出的数据(在响应的峰值和稳态测量)的图。注意到斜率的增加，指示神经元输入电阻的增加，这与离子通道关闭一致。曲线在约-90mV(在我们的记录条件下接近钾离子的逆转电位)相交。
图28示出催乳素对背根刺激的抑制性突触后电位(IPSP)几乎没有影响。连续记录的样品，示出在不存在催乳素(对照；黑色)和存在催乳素(红色)的情况下，通过以0.1Hz(A)和5Hz(B)的频率电刺激背根诱发的叠加的IPSP。这些响应的叠加的平均值在最右侧示出。注意到LAT7771对这些IPSP没有影响。
图29示出显示来自神经性疼痛的Chung模型的与LAT7771、LAT7772、LAT7773、LAT7774和催乳素诱导的背角神经元反应相关的归一化膜电位的变化的汇总数据。
图30示出显示来自神经性疼痛的Chung模型的与LAT7771、LAT7772、LAT7773、LAT7774和催乳素诱导的背角神经元反应相关的归一化膜电位的变化的汇总数据。
图31示出LAT7771和LAT8881(氨基酸序列YLRIVQCRSVEGSCGF)改善了神经性疼痛的结果，如神经性疼痛的Chung模型中机械性异常性疼痛的逆转指示的。缩足阈值(PWT)的测量结果在手术之前三天(D-2、D-1和D0)内每天评估一次，并且在手术之后每周评估一次，以监测机械性异常性疼痛的发展(D7)。PWT在药物或媒介物施用之前(BL)以及药物或媒介物施用后2小时(2hr)进行评估。A.经由两种施用途径(口服(PO)或肌内(IM))比较LAT8881和LAT7771对损伤同侧的Chung模型大鼠的PWT的影响。经由口服或肌内途径施用的LAT8881和LAT7771两者均显著增加Chung模型大鼠的PWT。B.比较经由两种施用途径(口服(PO)或肌内(IM))的LAT8881和LAT7771对损伤对侧的Chung模型大鼠的PWT的影响。
发明详述
除非另外定义，否则本文使用的所有技术和科学术语具有与本发明所属领域的普通技术人员通常理解的相同含义。尽管与本文描述的那些类似或等效的任何方法和材料都可以用于实践或测试本发明，但描述了优选的方法和材料。为了本发明的目的，在下文中定义了以下术语。
冠词“一(a)”和“一(an)”在本文中用于指一个/种或多于一个/种(即至少一个/种)的该冠词的语法对象。作为实例，“肽(a peptide)”意指一种肽或多于一种肽。
在整个本说明书中，除非上下文另外要求，否则词语“包括(comprise)”、“包括(comprises)”和“包括(comprising)”将被理解为意味着包括陈述的步骤或要素或步骤或要素的组，但不排除任何其他步骤或要素或步骤或要素的组。
治疗方法
本发明至少部分地基于本发明人的令人惊讶的发现，即式(I)的催乳素衍生肽(SEQ ID NO:1)具有有利的镇痛性质，因为它们能够减轻神经性疼痛。因此，在本文公开的方面中，提供了一种治疗和预防受试者的神经性疼痛的方法，该方法包括向受试者施用治疗有效量的催乳素或其功能变体，其中该功能变体包含式(I)的肽或其药学上可接受的盐：
R1-C-R-I-X1-X2-X3-X4-N-C-R2(I)(SEQ ID NO:1)
其中
X1是选自异亮氨酸(I)和缬氨酸(V)的氨基酸残基；
X2是选自组氨酸(H)和酪氨酸(Y)的氨基酸残基；
X3是选自天冬氨酸(D)和天冬酰胺(N)的氨基酸残基；
X4是选自天冬酰胺(N)和丝氨酸(S)的氨基酸残基；
R1选自由以下组成的组：YLKLLK、LKLLK、KLLK、LLK、LL、K，或者R1不存在；并且
R2是G(甘氨酸)，或者R2不存在。
在优选的实施方案中，式(I)的肽是CRIIHNNNC(SEQ ID NO:2)。SEQ ID NO:2(在本文中可互换地称为LAT7771)是人类催乳素(PRL)的C末端片段，跨越人类催乳素前体(hPRL)的氨基酸残基219-227(参见，例如，NCBI参考序列NP_000939.1和NP_001157030)。
术语“功能变体”在本文中用于表示在结构上不同于天然催乳素肽(例如，如本文描述的SEQ ID NO:30的人类催乳素)但在治疗或预防神经性疼痛方面保留天然催乳素的至少一些或全部生物活性的肽。术语“功能变体”包括保守或非保守的插入、缺失和/或取代，其中当施用至有相应需要的受试者时，这样的变化大体上不改变变体治疗或预防神经性疼痛的能力，如本文描述的。用于确定变体是否是催乳素的功能变体的合适方法对于本领域技术人员而言将是熟悉的，其说明性实例在本文的别处描述(例如，功能变体离体改变神经元信号传导的能力)。功能变体还延伸至催乳素的非人类同种型，包括其功能片段。催乳素的非人类同种型对于本领域技术人员而言将是已知的，其说明性实例在Hashimoto等人(2010，Exp Anim；59(5)643-6)和Miller等人(1981，DNA；1(1)37-50)中描述，这些文献的内容通过引用以其整体并入本文。
在本文公开的一种实施方案中，催乳素的功能变体是天然催乳素(SEQ ID NO:30)的功能片段。天然催乳素的功能片段可以是任何合适的长度，只要该片段至少保留一些镇痛性质。在一种实施方案中，功能片段在长度上多达50个氨基酸残基，优选地在长度上多达45个氨基酸残基，优选地在长度上多达40个氨基酸残基，优选地在长度上多达35个氨基酸残基，优选地在长度上多达30个氨基酸残基，优选地在长度上多达25个氨基酸残基，优选地在长度上多达20个氨基酸残基，优选地在长度上多达15个氨基酸残基，或更优选地在长度上多达10个氨基酸残基。
功能变体可以包括具有与天然催乳素的氨基酸序列相差一个或更多个(例如，1个、2个、3个、4个、5个、6个、7个、8个、9个或更多个)氨基酸取代的氨基酸序列的分子，其中所述差异不消除或不完全消除当施用至有相应需要的受试者时变体减轻神经性疼痛的能力。在一些实施方案中，功能变体包含氨基酸取代，所述氨基酸取代增强了当施用至有相应需要的受试者时变体减轻神经性疼痛的能力。在一种实施方案中，功能变体具有与天然催乳素的氨基酸序列相差一个或更多个保守的氨基酸取代的氨基酸序列。如本文使用的，术语“保守的氨基酸取代”指的是在给定位置处改变氨基酸身份，以便用尺寸、电荷和/或极性近似相等的氨基酸替代它。氨基酸的天然保守取代的实例包括以下8个取代组(通过常规的单字母代码指定)：(1)M、I、L、V；(2)F、Y、W；(3)K、R，(4)A、G；(5)S、T；(6)Q、N；(7)E、D；和(8)C、S。
在一种实施方案中，功能变体与天然催乳素的氨基酸序列具有至少85％的序列同一性。提及“至少85％”包括85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％的序列同一性或相似性，例如，在最佳比对或最佳拟合分析之后。因此，在一种实施方案中，序列与本文鉴定的序列具有至少85％、优选地至少86％、优选地至少87％、优选地至少88％、优选地至少89％、优选地至少90％、优选地至少91％、优选地至少92％、优选地至少93％、优选地至少94％、优选地至少95％、优选地至少96％、优选地至少97％、优选地至少98％、优选地至少99％或优选地100％的序列同一性或序列同源性，例如，在最佳比对或最佳拟合分析之后。
如本文使用的术语“同一性”、“相似性”、“序列同一性”、“序列相似性”、“同源性”、“序列同源性”以及类似术语意指在比对序列中的任何特定氨基酸残基位置处，比对序列之间的氨基酸残基是相同的。如本文使用的术语“相似性”或“序列相似性”指示，在比对序列中的任何特定位置处，序列之间的氨基酸残基具有相似的类型。例如，亮氨酸可以取代异亮氨酸或缬氨酸残基。如本文别处所述，这可以被称为保守取代。在一种实施方案中，氨基酸序列可以通过保守取代其中包含的任何氨基酸残基来修饰，使得与未修饰的(天然的)催乳素肽/蛋白质相比，当施用至有相应需要的受试者时，该修饰对功能变体减轻疼痛的能力没有影响。
在一些实施方案中，关于肽序列的序列同一性涉及，在对齐候选序列和对应肽序列并且引入空位(如果必要)以实现最大同源性百分比，并且不考虑任何保守取代作为序列同一性的一部分之后，候选序列中与对应肽序列的残基相同的氨基酸残基的百分比。无论是N-末端延伸或C-末端延伸，还是插入都不应被解释为降低序列同一性或同源性。用于对两个或更多个氨基酸序列进行比对并确定它们的序列同一性或同源性的方法和计算机程序是本领域技术人员熟知的。例如，两个氨基酸序列的同一性或相似性的百分比可以容易地使用算法来计算，所述算法例如BLAST、FASTA或Smith-Waterman算法。
用于确定氨基酸序列“相似性”的技术是本领域技术人员熟知的。一般来说，“相似性”意指两个或更多个肽序列或在适当位置的精确的氨基酸与氨基酸的比较，其中氨基酸是相同的或具有相似的化学和/或物理性质，诸如电荷或疏水性。然后可以在比较的肽序列之间确定所谓的“相似性百分比”。一般来说，“同一性”指的是两个肽序列的精确的氨基酸与氨基酸的对应。
两个或更多个肽序列也可以通过确定它们的“同一性百分比”来比较。两个序列的同一性百分比可以被描述为两个比对序列之间的精确匹配数除以较短序列的长度，再乘以100。通过Smith和Waterman，Advances in Applied Mathematics 2:482-489(1981)的局部同源性算法提供了核酸序列的近似比对。该算法可以扩展到使用由Dayhoff(Atlas ofProtein Sequences and Structure,M.O.Dayhoff编辑,增刊5 3:353-358,NationalBiomedical Research Foundation,Washington,D.C.,USA)开发并且由Gribskov(Nucl.Acids Res.14(6):6745-6763,1986)标准化的评分矩阵与肽序列一起使用。用于计算序列之间的同一性或相似性百分比的合适程序在本领域中是众所周知的。
用于对齐比较窗口的序列的最佳比对可以通过算法的计算机化工具(WisconsinGenetics Software Package发布7.0中的GAP、BESTFIT、FASTA和TFASTA，GeneticsComputer Group,575Science Drive Madison,WI,USA)或通过检查来进行，并且选择多种方法的任一种产生的最佳比对(即，得到比较窗口的最高同源性百分比)。还可以参考如例如由Altschul等人(1997，Nucl.Acids Res.25:3389)公开的BLAST程序家族。序列分析的详细讨论可以在Ausubel等人，(“Current Protocols in Molecular Biology”,John Wiley&Sons Inc,1994-1998,Chapter 15)的Unit 19.3中找到。
在一种实施方案中，功能变体包括相对于天然催乳素的氨基酸取代和/或其他修饰，以便增加变体的稳定性或增加变体的溶解度。
功能变体可以是天然存在的肽，或者它可以使用本领域技术人员已知的方法通过化学合成来合成产生。
在一种实施方案中，功能变体包含与SEQ ID NO:30具有至少80％的序列同一性的氨基酸序列。在另一种实施方案中，功能变体是天然催乳素的功能片段。在本文公开的一种实施方案中，R1不存在。在另一种实施方案中，R2不存在。在又一种实施方案中，R1和R2不存在。
本发明人还已经惊奇地发现，当式(I)的肽被C-末端延伸修饰时，本文描述的肽的镇痛性质得以保留。例如，发明人已经惊奇地发现，SEQ ID NO:3(CRIIHNNNCG；本文中也称为7772)对神经性疼痛具有治疗上有效的镇痛作用。因此，在一种实施方案中，功能变体包含C-末端氨基酸残基。在一种实施方案中，C-末端氨基酸残基是甘氨酸(G)。
在本文公开的一种实施方案中，功能变体在长度上为从9个至165个氨基酸残基，优选地在长度上为至少9个氨基酸残基，优选地在长度上为至少10个氨基酸残基，优选地在长度上为至少11个氨基酸残基，优选地在长度上为至少12个氨基酸残基，优选地在长度上为至少13个氨基酸残基，优选地在长度上为至少14个氨基酸残基，优选地在长度上为至少15个氨基酸残基，或更优选地在长度上为至少16个氨基酸残基。催乳素或其功能变体在式(I)的2位和10位处的两个半胱氨酸(C)残基之间包含二硫键，从而在两个半胱氨酸残基之间形成环肽。
在一种实施方案中，功能变体选自由以下组成的组：CRIIHNNNC(SEQ ID NO:2)、CRIIHNNNCG(SEQ ID NO:3)、CRIVYDSNC(SEQ ID NO:4)和CRIVYDSNCG(SEQ ID NO:5)。
在另一种实施方案中，功能变体选自由以下组成的组：YLKLLKCRIIHNNNC(SEQ IDNO:6)、LKLLKCRIIHNNNC(SEQ ID NO:7)、KLLKCRIIHNNNC(SEQ ID NO:8)、LLKCRIIHNNNC(SEQID NO:9)、LKCRIIHNNNC(SEQ ID NO:10)、KCRIIHNNNC(SEQ ID NO:11)、YLKLLKCRIIHNNNCG(SEQ ID NO:12)、LKLLKCRIIHNNNCG(SEQ ID NO:13)、KLLKCRIIHNNNCG(SEQ ID NO:14)、LLKCRIIHNNNCG(SEQ ID NO:15)、LKCRIIHNNNCG(SEQ ID NO:16)和KCRIIHNNNCG(SEQ IDNO:17)。
在一种实施方案中，功能变体是CRIIHNNNC(SEQ ID NO:2)。在另一种实施方案中，功能变体是CRIIHNNNCG(SEQ ID NO:3)。
本发明人还已经惊奇地发现，包含式(I)的肽的催乳素衍生肽的非人类变体具有与其人类对应物相似的镇痛性质。合适的非人类变体对于本领域技术人员而言将是熟悉的，其说明性实例包括SEQ ID NO:4和5。
在本文公开的方面中，提供了一种治疗和预防受试者的神经性疼痛的方法，该方法包括向受试者施用治疗有效量的SEQ ID NO:4(CRIVYDSNC)或SEQ ID NO:5(CRIVYDSNCG)的肽。SEQ ID NO:4是犬催乳素的C-末端片段的说明性实例，其跨越狼家犬亚种(canislupus familiaris)催乳素前体的氨基酸残基221-229(参见，例如，GenBank登记号ADK11290)。
在一种实施方案中，功能变体选自由以下组成的组：CRIVYDSNCG(SEQ ID NO:5)、YLKLLKCRIVYDSNC(SEQ ID NO:18)、LKLLKCRIVYDSNC(SEQ ID NO:19)、KLLKCRIVYDSNC(SEQID NO:20)、LLKCRIVYDSNC(SEQ ID NO:21)、LKCRIVYDSNC(SEQ ID NO:22)、KCRIVYDSNC(SEQID NO:23)、YLKLLKCRIVYDSNCG(SEQ ID NO:24)、LKLLKCRIVYDSNCG(SEQ ID NO:25)、KLLKCRIVYDSNCG(SEQ ID NO:26)、LLKCRIVYDSNCG(SEQ ID NO:27)、LKCRIVYDSNCG(SEQ IDNO:28)和KCRIVYDSNCG(SEQ ID NO:29)。
在一种实施方案中，功能变体是CRIVYDSNC(SEQ ID NO:4)。在另一种优选的实施方案中，功能变体是CRIVYDSNCG(SEQ ID NO:5)。
式(I)的肽可以由蛋白原性或非蛋白原性的天然存在的氨基酸残基制成。这些氨基酸具有L-立体化学。下表中列出了天然存在的氨基酸。
Figure BDA0003431943610000191
Figure BDA0003431943610000192
Figure BDA0003431943610000201
如本文使用的，术语“烷基”指的是具有1个至10个碳原子的直链的或支链的饱和烃基团。在适当的情况下，烷基基团可以具有指定数目的碳原子，例如C1-6烷基，所述C1-6烷基包括具有1个、2个、3个、4个、5个或6个处于直链布置或支链布置的碳原子的烷基基团。合适的烷基基团的实例包括但不限于甲基、乙基、正丙基、异丙基、正丁基、异丁基、叔丁基、正戊基、2-甲基丁基、3-甲基丁基、4-甲基丁基、正己基、2-甲基戊基、3-甲基戊基、4-甲基戊基、5-甲基戊基、2-乙基丁基、3-乙基丁基、庚基、辛基、壬基以及癸基。
如本文使用的，术语“烯基”指的是在碳原子之间具有一个或更多个双键并且具有2个至10个碳原子的直链的或支链的烃基团。在适当的情况下，烯基基团可以具有指定数目的碳原子。例如，如在“C2-C6烯基”中的C2-C6包括具有2个、3个、4个、5个或6个处于直链布置或支链布置的碳原子的基团。合适的烯基基团的实例包括但不限于乙烯基、丙烯基、异丙烯基、丁烯基、丁二烯基、戊烯基、戊二烯基、己烯基、己二烯基、庚烯基、辛烯基、壬烯基以及癸烯基。
如本文使用的，术语“炔基”指的是具有一个或更多个三键并且具有2个至10个碳原子的直链的或支链的烃基团。在适当的情况下，炔基基团可以具有指定数目的碳原子。例如，如在“C2-C6炔基”中的C2-C6包括具有2个、3个、4个、5个或6个处于直链布置或支链布置的碳原子的基团。合适的炔基基团的实例包括但不限于乙炔基、丙炔基、丁炔基、戊炔基以及己炔基。
如本文使用的，术语“环烃基(cycloalkyl)”指的是饱和的和不饱和的(但不是芳香族的)环状烃。环烃基环可以包括指定数目的碳原子。例如，3元至8元环烃基基团包括3个、4个、5个、6个、7个或8个碳原子。合适的环烃基基团的实例包括但不限于环丙基、环丁基、环戊基、环戊烯基、环己基、环己烯基、环己二烯基、环庚基以及环辛基。
如本文使用的，术语“芳基”意图意指在每个环中最多7个原子的任何稳定的、单环的、双环的或三环的碳环体系，其中至少一个环是芳香族的。这样的芳基基团的实例包括但不限于苯基、萘基、四氢萘基、茚满基、芴基、菲基、联苯基以及联萘基。
在一种实施方案中，二硫键在式(I)的两个半胱氨酸残基(C)之间形成。
在一种实施方案中，催乳素或其功能变体形成为药学上可接受的盐。应理解，也设想了非药学上可接受的盐，因为它们可以用作制备药学上可接受的盐的中间体，或在储存或运输期间可以是有用的。合适的药学上可接受的盐对于本领域技术人员将是熟悉的，合适的药学上可接受的盐的说明性实例包括药学上可接受的无机酸的盐或药学上可接受的有机酸的盐，所述无机酸诸如盐酸、硫酸、磷酸、硝酸、碳酸、硼酸、氨基磺酸和氢溴酸，所述有机酸诸如乙酸、丙酸、丁酸、酒石酸、马来酸、羟基马来酸、富马酸、苹果酸、柠檬酸、乳酸、粘酸、葡糖酸、苯甲酸、琥珀酸、草酸、苯乙酸、甲磺酸、甲苯磺酸、苯磺酸、水杨酸、磺胺酸、天冬氨酸、谷氨酸、依地酸(edetic acid)、硬脂酸、棕榈酸、油酸、月桂酸、泛酸、丹宁酸、抗坏血酸和戊酸。合适的碱盐的说明性实例包括那些与药学上可接受的阳离子形成的碱盐，所述药学上可接受的阳离子诸如钠、钾、锂、钙、镁、铵和烷基铵。碱性含氮基团可以用诸如以下的剂来季铵化：低级烷基卤化物诸如甲基、乙基、丙基和丁基的氯化物、溴化物和碘化物；硫酸二烷基酯如硫酸二甲酯和硫酸二乙酯；以及其他的剂。
本文还公开了包含催乳素或其功能变体的前药，如本文描述的。如本文使用的，“前药”通常指的是可以在体内代谢以提供式(I)的活性肽的化合物或其药学上可接受的盐。在一些实施方案中，前药本身也与催乳素或功能变体共享相同或大体上相同的镇痛活性，如本文别处描述的。
在一些实施方案中，催乳素或其功能变体还可以包含C-末端加帽基团。如本文使用的术语“C-末端加帽基团”指的是阻断C-末端羧酸的反应性的基团。合适的C-末端加帽基团与C-末端羧酸形成酰胺基团或酯，例如，C-末端加帽基团形成-C(O)NHRa或-C(O)ORb，其中C(O)来自C-末端羧酸基团，并且Ra是氢、烷基、烯基、炔基、环烃基或芳基，并且Rb是烷基、烯基、炔基、环烃基或芳基。在特定的实施方案中，C-末端加帽基团是-NH2，形成-C(O)NH2。在一些实施方案中，式(I)的肽或其药学上可接受的盐包含C-末端聚乙二醇(PEG)。在一种实施方案中，PEG具有在220Da至5500Da，优选地220Da至2500Da，更优选地570Da至1100Da的范围内的分子量。
在一些实施方案中，催乳素或其功能变体还可以包含N-末端加帽基团。如本文使用的术语“N-末端加帽基团”指的是阻断N-末端氨基基团的反应性的基团。合适的N-末端加帽基团是与N-末端氨基基团形成酰胺基团的酰基基团，例如，N-末端加帽基团形成-NHC(O)Ra，其中NH来自N-末端氨基基团，并且Ra是烷基、烯基、炔基、环烃基或芳基。在特定的实施方案中，N-末端加帽基团是-C(O)CH3(酰基)，形成-NHC(O)CH3。
在一些实施方案中，催乳素或其功能变体可以包含C-末端加帽基团和N-末端加帽基团，如本文描述的。
如本文描述的催乳素或其功能变体可以通过本领域技术人员已知的任何方法制备。合适的方法的说明性实例包括使用Fmoc或Boc保护的氨基酸残基的溶液或固相合成，使用微生物培养的重组技术，遗传工程化的微生物、植物和重组DNA技术(参见，例如，Sambrook和Russell，Molecular Cloning:A Laboratory Manual(第3版),2001,CSHLPress)。
如本文别处描述的，本发明人惊奇地首次发现，包含式(I)的肽(SEQ ID NO:1)的催乳素衍生肽具有镇痛性质，程度是它们能够减轻神经性疼痛。因此，如本文描述的催乳素或其功能变体可以适用于治疗、预防、减轻或以其他方式延迟受试者的神经性疼痛的发作，包括神经性疼痛的一种或更多种症状的发作。本发明人还已经惊奇地发现，包含式(I)的肽的非人类催乳素衍生肽具有与其人类对应物相似的镇痛性质。
因此，催乳素或其功能变体可以适用于治疗、预防、减轻或以其他方式延迟受试者的神经性疼痛的发作，包括神经性疼痛的一种或更多种症状的发作。
术语“治疗(treating)”、“治疗(treatment)”以及类似术语在本文中可互换地使用，以意指缓解、减少、减轻、改善或以其他方式抑制神经性疼痛，包括神经性疼痛的一种或更多种症状，诸如异常性疼痛或痛觉过敏。术语“预防(prevent)”、“预防(preventing)”、“预防(prophylaxis)”、“预防性(prophylactic)”、“预防性(preventative)”以及类似术语在本文中可互换地使用，以意指预防或延迟神经性疼痛的发作，或发展神经性疼痛的风险。
术语“治疗(treating)”、“治疗(treatment)”以及类似术语还包括缓解、减少、减轻、改善或以其他方式抑制神经性疼痛的影响持续至少一段时间。还应理解，术语“治疗(treating)”、“治疗(treatment)”以及类似术语并不意味着神经性疼痛或其症状被永久地缓解、减少、减轻、改善或以其他方式抑制，并且因此还涵盖神经性疼痛或其症状的暂时的缓解、减少、减轻、改善或以其他方式抑制。
不受理论或特定的应用模式所束缚，神经性疼痛通常被表征为由神经组织或神经元本身的受伤或疾病而造成的损伤引起的疼痛，或者神经组织内的功能障碍引起的疼痛。神经性疼痛可以是外周的神经性疼痛、中枢的神经性疼痛或其组合；换句话说，术语“神经性疼痛”通常指的是由外周神经系统或中枢神经系统的原发性损伤或功能障碍引发或引起的任何疼痛综合征。神经性疼痛基于以下也是可区分的：其通常不有效地响应于通过普通疼痛药物诸如阿片样物质的治疗。相比之下，伤害性疼痛被表征为由可能对组织造成损伤或受伤的有毒的或可能有害的刺激产生的伤害感受器的刺激而引起的疼痛。伤害性疼痛通常响应于普通疼痛药物，诸如阿片样物质。
术语“镇痛”在本文中用于描述疼痛感觉减小的状态，包括不存在疼痛感觉的状态，以及对于有毒刺激的敏感性减小或不存在对于有毒刺激的敏感性的状态。如本领域通常理解的，这样的疼痛感觉减小或不存在疼痛感觉的状态通常通过施用一种或更多种疼痛控制剂来诱导，并且在不存在意识丧失的情况下发生。用于确定化合物是否能够提供镇痛作用的合适的方法对于本领域技术人员而言将是熟悉的，所述方法的说明性实例包括使用神经性疼痛的动物模型，诸如慢性压迫性损伤(chronic constriction injury)、脊神经结扎(spinal nerve ligation)和部分坐骨神经结扎(参见Bennett等人(2003)；Curr.Protoc.Neurosci.，第9章，第9.14单元)以及伤害性疼痛的动物模型，诸如福尔马林、角叉菜胶或完全弗氏佐剂(complete Freund’sadjuvant)(CFA)诱导的炎性疼痛。其他合适的神经性疼痛的模型在Gregory等人(2013,J.Pain.；14(11)；“:An overview of animalmodels of pain:disease models and outcome measures”)中讨论。
如本领域技术人员将知晓的，存在许多可能的神经病和神经性疼痛的病因。因此，应理解，本文所预期的是无论病因如何的神经性疼痛的治疗或预防。在一些实施方案中，疼痛是组织的损伤或创伤、影响神经的疾病或状况(例如，原发性神经病)和/或由全身性疾病引起的疼痛(继发性神经病)的结果，所述组织的损伤或创伤、影响神经的疾病或状况(例如，原发性神经病)和/或由全身性疾病引起的疼痛(继发性神经病)的说明性实例包括糖尿病性神经病；带状疱疹(Herpes Zoster)(带状疱疹(shingles))相关神经病；纤维肌痛；多发性硬化、中风、脊髓损伤；慢性手术后疼痛、幻肢痛、帕金森病；尿毒症相关神经病；淀粉样变性神经病；HIV感觉神经病；遗传性运动和感觉神经病(HMSN)；遗传性感觉神经病(HSN)；遗传性感觉和自主神经病；伴有溃疡残毁的遗传性神经病；呋喃妥因神经病；腊肠样肿胀神经病；营养缺乏引起的神经病、肾衰竭引起的神经病以及复杂的区域性疼痛综合征。可以引起神经性疼痛的状况的其他说明性实例包括重复性活动诸如打字或在装配线上工作，已知引起外周神经病的药物诸如若干种抗逆转录病毒药物ddC(扎西他滨(zalcitabine))和ddI(地达诺新(didanosine))、抗生素(甲硝唑、用于克罗恩病的抗生素、用于结核病的异烟肼)、金化合物(用于类风湿性关节炎)、一些化疗药物(诸如长春新碱以及其他)以及许多其他药物。还已知化学化合物引起外周神经病，化学化合物包括酒精(alcohol)、铅、砷、汞和有机磷杀虫剂。一些外周神经病与感染过程相关(诸如吉兰-巴雷综合征(Guillain-Barrésyndrome))。神经性疼痛的其他说明性实例包括热性或机械性痛觉过敏、热性或机械性异常性疼痛、糖尿病性疼痛、影响口腔的神经性疼痛(例如，三叉神经神经性疼痛、非典型牙痛(幻牙痛)、灼口综合征)、纤维肌痛以及卡压疼痛(entrapment pain)。
在本文公开的一种实施方案中，神经性疼痛与选自由以下组成的组的状况相关：糖尿病性神经病；带状疱疹(Herpes Zoster)(带状疱疹(shingles))相关神经病；纤维肌痛；多发性硬化、中风、脊髓损伤；慢性手术后疼痛、幻肢痛、帕金森病；尿毒症相关神经病；淀粉样变性神经病；HIV感觉神经病；遗传性运动和感觉神经病(HMSN)；遗传性感觉神经病(HSN)；遗传性感觉和自主神经病；伴有溃疡残毁的遗传性神经病；呋喃妥因神经病；腊肠样肿胀神经病；营养缺乏引起的神经病、肾衰竭引起的神经病、三叉神经神经性疼痛、非典型牙痛(幻牙痛)、灼口综合征、复杂的区域性疼痛综合征、重复性劳损、药物诱发的外周神经病、与感染相关的外周神经病、异常性疼痛、感觉过敏(hyperesthesia)以及痛觉过敏。在另一种实施方案中，神经性疼痛是灼痛或射痛。
在一些实施方案中，神经性疼痛可以伴随有麻木、无力和反射丧失。神经性疼痛可以是严重的和致残的。“痛觉过敏”意指对通常疼痛的刺激的增加的响应。痛觉过敏状况是与由通常不疼痛的刺激引起的疼痛相关的状况。术语“感觉过敏”指的是过度的身体敏感性，特别是皮肤的敏感性。如本文使用的术语“异常性疼痛”指的是由非有毒的刺激引起的疼痛；即，由于通常不引起疼痛的刺激产生的疼痛。异常性疼痛的说明性实例包括热性异常性疼痛(由于冷刺激或热刺激而产生的疼痛)、触觉异常性疼痛(由于轻压力或触摸而产生的疼痛)、机械性异常性疼痛(由于重压力或针刺而产生的疼痛)及类似疼痛。
神经性疼痛可以是急性的或慢性的，并且在这种情况下，应理解疼痛的时间过程可以基于其潜在的病因而变化。例如，在创伤的情况下，神经性疼痛的症状的发作可以是急性的或突然的；然而，最严重的症状可以随着时间发展并且持续数年。经数周至数月的慢性时间过程通常指示中毒性疼痛综合征或代谢性疼痛综合征。诸如与疼痛性糖尿病性神经病一起发生，或与大多数遗传性神经病一起发生，或与被称为慢性炎性脱髓鞘性多发性神经根病(CIDP)的状况一起发生的慢性、缓慢进展性疼痛综合征，可以具有多年的时间过程。具有复发缓解型症状的神经状况包括吉兰-巴雷综合征。
在一些实施方案中，神经性疼痛由特征为神经元超敏反应的状况引起，所述状况诸如纤维肌痛或肠易激综合征。
在其他实施方案中，神经性疼痛由与导致神经元超敏反应的异常神经再生相关的紊乱引起。这样的紊乱包括乳房疼痛、间质性膀胱炎、外阴痛以及癌症化疗诱导的神经病。
在一些实施方案中，神经性疼痛与手术、手术前疼痛和手术后疼痛相关，特别地与手术后疼痛相关。
如本文使用的，术语“受试者”指的是期望治疗或预防神经性疼痛的哺乳动物受试者。合适的受试者的说明性实例包括灵长类动物，特别是人类，伴侣动物诸如猫和狗以及类似动物，工作动物诸如马、驴以及类似动物，牲畜动物诸如绵羊、牛、山羊、猪以及类似动物，实验室测试动物诸如兔、小鼠、大鼠、豚鼠、仓鼠以及类似动物，以及圈养野生动物诸如动物园和野生动物园中的圈养野生动物、鹿、澳洲野狗(dingo)以及类似动物。在一种实施方案中，受试者是人类。在另一种实施方案中，受试者选自由犬科动物、猫科动物和马科动物组成的组。
应理解，本文提及受试者并不意味着受试者具有神经性疼痛或其症状，而是还包括具有发展神经性疼痛或其症状的风险的受试者。在一种实施方案中，受试者具有(即，正在经历)神经性疼痛或其症状。在另一种实施方案中，受试者在治疗时不经历神经性疼痛或其症状，但具有发展神经性疼痛或其症状的风险。在说明性实例中，受试者具有将受试者置于发展神经性疼痛的风险中的疾病或状况，例如，控制不当的糖尿病，其可以导致糖尿病性神经病。在另一种实施方案中，受试者已经具有可能导致神经性疼痛的疾病或状况，诸如带状疱疹(herpes zoster)(带状疱疹(shingles))，其可以导致疱疹后神经痛。
在一些实施方案中，本文公开的方法包括向非人类受试者施用催乳素或其功能变体，该功能变体与SEQ ID NO:30具有至少80％的序列同一性，其中该功能变体包含式(I)的肽或其药学上可接受的盐。在优选的实施方案中，非人类受试者选自由犬科动物、猫科动物或马科动物组成的组。在其他实施方案中，本文公开的方法包括向人类受试者施用催乳素或其功能变体，该功能变体与SEQ ID NO:30具有至少80％的序列同一性，其中该功能变体包含式(I)的肽或其药学上可接受的盐。在其他实施方案中，向非人类受试者诸如犬科动物、猫科动物或马科动物施用催乳素或其功能变体，该功能变体与SEQ ID NO:30具有至少80％的序列同一性，其中该功能变体包含式(I)的肽或其药学上可接受的盐。
待以治疗有效量施用催乳素或其功能变体，该功能变体与SEQ ID NO:30具有至少80％的序列同一性，其中该功能变体包含式(I)的肽或其药学上可接受的盐。措辞“治疗有效量”通常意指获得期望的响应，或延迟被治疗的神经性疼痛的发作或抑制被治疗的神经性疼痛的进展或完全停止被治疗的神经性疼痛的发作或进展所必要的量。本领域技术人员将理解，肽的治疗有效量将取决于若干因素而变化，所述因素的说明性实例包括待治疗的受试者的健康和身体状况、待治疗的受试者的分类群、待治疗的神经性疼痛的严重程度、包含式(I)的肽或其药学上可接受的盐的组合物的制剂、施用途径以及前述中的任何的组合。
治疗有效量通常将落在本领域技术人员可以通过常规试验确定的相对宽的范围内。用于施用至人类受试者的催乳素或其功能变体的合适的治疗有效量的说明性实例包括从约0.001mg/kg的体重至约1g/kg的体重，优选地从约0.001mg/kg的体重至约50g/kg的体重，更优选地从约0.01mg/kg的体重至约1.0mg/kg的体重。在本文公开的一种实施方案中，式(I)的肽或其药学上可接受的盐的治疗有效量是每剂量从约0.001mg/kg的体重至约1g/kg的体重(例如，0.001mg/kg的体重、0.005mg/kg的体重、0.01mg/kg的体重、0.05mg/kg的体重、0.1mg/kg的体重、0.15mg/kg的体重、0.2mg/kg的体重、0.25mg/kg的体重、0.3mg/kg的体重、0.35mg/kg的体重、0.4mg/kg的体重、0.45mg/kg的体重、0.5mg/kg的体重、0.5mg/kg的体重、0.55mg/kg的体重、0.6mg/kg的体重、0.65mg/kg的体重、0.7mg/kg的体重、0.75mg/kg的体重、0.8mg/kg的体重、0.85mg/kg的体重、0.9mg/kg的体重、0.95mg/kg的体重、1mg/kg的体重、1.5mg/kg的体重、2mg/kg的体重、2.5mg/kg的体重、3mg/kg的体重、3.5mg/kg的体重、4mg/kg的体重、4.5mg/kg的体重、5mg/kg的体重、5.5mg/kg的体重、6mg/kg的体重、6.5mg/kg的体重、7mg/kg的体重、7.5mg/kg的体重、8mg/kg的体重、8.5mg/kg的体重、9mg/kg的体重、9.5mg/kg的体重、10mg/kg的体重、10.5mg/kg的体重、11mg/kg的体重、11.5mg/kg的体重、12mg/kg的体重、12.5mg/kg的体重、13mg/kg的体重、13.5mg/kg的体重、14mg/kg的体重、14.5mg/kg的体重、15mg/kg的体重、15.5mg/kg的体重、16mg/kg的体重、16.5mg/kg的体重、17mg/kg的体重、17.5mg/kg的体重、18mg/kg的体重、18.5mg/kg的体重、19mg/kg的体重、19.5mg/kg的体重、20mg/kg的体重、20.5mg/kg的体重、21mg/kg的体重、21.5mg/kg的体重、22mg/kg的体重、22.5mg/kg的体重、23mg/kg的体重、23.5mg/kg的体重、24mg/kg的体重、24.5mg/kg的体重、25mg/kg的体重、25.5mg/kg的体重、26mg/kg的体重、26.5mg/kg的体重、27mg/kg的体重、27.5mg/kg的体重、28mg/kg的体重、28.5mg/kg的体重、29mg/kg的体重、29.5mg/kg的体重、30mg/kg的体重、35mg/kg的体重、40mg/kg的体重、45mg/kg的体重、50mg/kg的体重、55mg/kg的体重、60mg/kg的体重、65mg/kg的体重、70mg/kg的体重、75mg/kg的体重、80mg/kg的体重、85mg/kg的体重、90mg/kg的体重、95mg/kg的体重、100mg/kg的体重、105mg/kg的体重、110mg/kg的体重等)。在一种实施方案中，式(I)的肽或其药学上可接受的盐的治疗有效量是从约0.001mg/kg的体重至约50mg/kg的体重。在一种实施方案中，式(I)的肽或其药学上可接受的盐的治疗有效量是从约0.01mg/kg的体重至约1.0mg/kg的体重。剂量方案可以被调整以提供最佳的治疗响应。例如，若干分开的剂量可以每天、每周、每月或以其他合适的时间间隔被施用，或剂量可以如由情况的紧迫性指示的按比例减少。
在本文公开的一种实施方案中，式(I)的肽或其药学上可接受的盐以治疗有效量被施用至受试者，该治疗有效量在对伤害性疼痛具有最小镇痛作用或不具有镇痛作用的情况下减轻受试者的神经性疼痛。本发明人还已经惊奇地发现，催乳素的非人类变体或其功能变体具有与其人类对应物相似的镇痛性质。
根据从神经性疼痛的神经收缩模型获得的数据，镇痛性质是明显的(参见图2-图30)。从该数据中可以看出，催乳素的C-末端片段(SEQ ID NO:2-5)在神经性镇痛的幅度和持续时间两方面都示出与母体催乳素蛋白相当的活性(图29-图30)。因此，在本文公开的另一个方面中，提供了一种治疗受试者的神经性疼痛的方法，该方法包括向受试者施用治疗有效量的肽或其药学上可接受的盐，其中该肽包含以下、由以下组成或基本上由以下组成：氨基酸序列CRIIHNNNC(SEQ ID NO:2)、CRIIHNNNCG(SEQ ID NO:3)、CRIVYDSNC(SEQ ID NO:4)和CRIVYDSNCG(SEQ ID NO:5)。
施用途径
本文公开的肽可以通过任何合适的途径被施用至受试者，所述合适的途径允许将肽以如本文描述的治疗有效量递送至受试者。合适的施用途径将是本领域技术人员已知的，所述合适的施用途径的说明性实例包括肠内施用途径(例如，口服和直肠)、肠胃外施用途径，通常通过注射或微注射(microinjection)(例如，肌内、皮下、静脉内、硬膜外、关节内、腹膜内、脑池内(intracisternal)或鞘内)和表面(topical)(经皮或经粘膜)施用途径(例如，含服、舌下、阴道、鼻内或通过吸入)。本文公开的肽还可以作为控制释放剂型合适地施用至受试者，以在延长的时间段内提供活性剂的控制释放。术语“控制释放”通常意指释放活性剂以在一段时间内(例如，约8小时至多达约12小时、多达约14小时、多达约16小时、多达约18小时、多达约20小时、多达一天、多达一周、多达一个月或多于一个月)在受试者中提供恒定的或大体上恒定的活性剂浓度。根据可能的需要，活性剂的控制释放可以在施用之后几分钟内开始，或在施用之后的延迟时间段(滞后时间(lag time))期满之后开始。合适的控制释放剂型对于本领域技术人员而言将是已知的，其说明性实例在Anal,A.K.(2010；Controlled-Release Dosage Forms.Pharmaceutical SciencesEncyclopedia.11:1–46)中描述。
不受理论或特定的应用模式所束缚，可以合意的是基于神经性疼痛是局部的还是广泛的(generalised)来选择施用途径。例如，在神经性疼痛是局部的情况下，可以合意的是将肽施用至受影响的区域或与受影响的区域紧邻的区域。例如，在神经性疼痛在关节(例如，颈、膝、肘、肩、髋等)中的情况下，肽可以被关节内地施用至受试者，进入受影响的关节中。可选择地或此外，肽可以在受影响的关节处或大体上邻近受影响的关节处被施用。作为另一个说明性实例，当神经性疼痛在口腔中时(例如，三叉神经神经性疼痛、非典型牙痛(幻牙痛)或灼口综合征)，肽可以被配制用于经由口腔粘膜施用(例如，通过含服施用和/或舌下施用)。相反地，在神经性疼痛在受试者的多个解剖部位广泛或散播的情况下，为了将活性肽分布在受神经性疼痛影响的多个解剖部位，肽可以在任何部位被表面地、肠内地和/或肠胃外地施用。在本文公开的一种实施方案中，本文公开的肽被肠内地施用至受试者。在本文公开的一种实施方案中，本文公开的肽被口服施用至受试者。在本文公开的一种实施方案中，本文公开的肽被肠胃外地施用至受试者。在本文公开的另一种实施方案中，本文公开的肽被表面地施用至受试者。如本文别处描述的，“表面”施用通常意指将合适地呈乳膏、洗剂、泡沫、凝胶、软膏、滴鼻剂、滴眼剂、滴耳剂、经皮贴剂、经皮膜(例如，舌下膜)等形式的活性剂施加至身体的表面，诸如皮肤或粘膜。表面施用还涵盖通过吸入或吹入经由呼吸道的粘膜的施用。在本文公开的一种实施方案中，表面施用选自由经皮施用和经粘膜施用组成的组。在一种实施方案中，本文公开的肽被经皮地施用至受试者。
在一种实施方案中，方法包括将本文公开的肽口服施用至人类。在另一种实施方案中，方法包括将本文公开的肽口服施用至非人类受试者。在又一种实施方案中，方法包括将本文公开的肽口服施用至选自由猫科动物、犬科动物和马科动物组成的组的非人类受试者。
在一种实施方案中，方法包括将本文公开的肽表面地施用至人类。在另一种实施方案中，方法包括将本文公开的肽表面地施用至非人类受试者。在又一种实施方案中，方法包括将本文公开的肽表面地施用至选自由猫科动物、犬科动物和马科动物组成的组的非人类受试者。
在另一种实施方案中，方法包括向人类口服施用SEQ ID NO:2的肽或其药学上可接受的盐。在另一种实施方案中，方法包括向非人类受试者口服施用SEQ ID NO:2的肽或其药学上可接受的盐。在又一种实施方案中，方法包括向选自由猫科动物、犬科动物和马科动物组成的组的非人类受试者口服施用SEQ ID NO:2的肽或其药学上可接受的盐。
在另一种实施方案中，方法包括向人类表面地施用SEQ ID NO:2的肽或其药学上可接受的盐。在另一种实施方案中，方法包括向非人类受试者表面地施用SEQ ID NO:2的肽或其药学上可接受的盐。在又一种实施方案中，方法包括向选自由猫科动物、犬科动物和马科动物组成的组的非人类受试者表面地施用SEQ ID NO:2的肽或其药学上可接受的盐。
在另一种实施方案中，方法包括向非人类受试者口服施用SEQ ID NO:3的肽或其药学上可接受的盐。在又一种实施方案中，方法包括向选自由猫科动物、犬科动物和马科动物组成的组的非人类受试者口服施用SEQ ID NO:3的肽或其药学上可接受的盐。
在另一种实施方案中，方法包括向非人类受试者表面地施用SEQ ID NO:3的肽或其药学上可接受的盐。在又一种实施方案中，方法包括向选自由猫科动物、犬科动物和马科动物组成的组的非人类受试者表面地施用SEQ ID NO:3的肽或其药学上可接受的盐。
在另一种实施方案中，方法包括向非人类受试者口服施用SEQ ID NO:4的肽或其药学上可接受的盐。在又一种实施方案中，方法包括向选自由猫科动物、犬科动物和马科动物组成的组的非人类受试者口服施用SEQ ID NO:4的肽或其药学上可接受的盐。
在另一种实施方案中，方法包括向非人类受试者表面地施用SEQ ID NO:4的肽或其药学上可接受的盐。在又一种实施方案中，方法包括向选自由猫科动物、犬科动物和马科动物组成的组的非人类受试者表面地施用SEQ ID NO:4的肽或其药学上可接受的盐。
在另一种实施方案中，方法包括向非人类受试者口服施用SEQ ID NO:5的肽或其药学上可接受的盐。在又一种实施方案中，方法包括向选自由猫科动物、犬科动物和马科动物组成的组的非人类受试者口服施用SEQ ID NO:5的肽或其药学上可接受的盐。
在另一种实施方案中，方法包括向非人类受试者表面地施用SEQ ID NO:5的肽或其药学上可接受的盐。在又一种实施方案中，方法包括向选自由猫科动物、犬科动物和马科动物组成的组的非人类受试者表面地施用SEQ ID NO:5的肽或其药学上可接受的盐。
表面施用的说明性实例在本文别处描述。在一种实施方案中，表面施用是经皮的。
在本文公开的一种实施方案中，本文公开的肽作为控制释放剂型被施用至受试者，所述控制释放剂型的说明性实例在本文别处描述。在一种实施方案中，方法包括将本文公开的肽作为控制释放剂型施用至人类。在另一种实施方案中，方法包括将本文公开的肽作为控制释放剂型施用至非人类受试者。在又一种实施方案中，方法包括将本文公开的肽作为控制释放剂型施用至选自由猫科动物、犬科动物和马科动物组成的组的非人类受试者。
在另一种实施方案中，方法包括向人类施用作为控制释放剂型的SEQ ID NO:2的肽或其药学上可接受的盐。在另一种实施方案中，方法包括向非人类受试者施用作为控制释放剂型的SEQ ID NO:2的肽或其药学上可接受的盐。在又一种实施方案中，方法包括向选自由猫科动物、犬科动物和马科动物组成的组的非人类受试者施用作为控制释放剂型的SEQ ID NO:2的肽或其药学上可接受的盐。
在另一种实施方案中，方法包括向非人类受试者施用作为控制释放剂型的SEQ IDNO:3的肽或其药学上可接受的盐。在又一种实施方案中，方法包括向选自由猫科动物、犬科动物和马科动物组成的组的非人类受试者施用作为控制释放剂型的SEQ ID NO:3的肽或其药学上可接受的盐。在一种实施方案中，控制释放剂型被肠胃外地施用至受试者，该控制释放剂型的合适的实例在本文别处描述。
在另一种实施方案中，方法包括向非人类受试者施用作为控制释放剂型的SEQ IDNO:4的肽或其药学上可接受的盐。在又一种实施方案中，方法包括向选自由猫科动物、犬科动物和马科动物组成的组的非人类受试者施用作为控制释放剂型的SEQ ID NO:4的肽或其药学上可接受的盐。在一种实施方案中，控制释放剂型被肠胃外地施用至受试者，该控制释放剂型的合适的实例在本文别处描述。
在另一种实施方案中，方法包括向非人类受试者施用作为控制释放剂型的SEQ IDNO:5的肽或其药学上可接受的盐。在又一种实施方案中，方法包括向选自由猫科动物、犬科动物和马科动物组成的组的非人类受试者施用作为控制释放剂型的SEQ ID NO:5的肽或其药学上可接受的盐。在一种实施方案中，控制释放剂型被肠胃外地施用至受试者，该控制释放剂型的合适的实例在本文别处描述。
如本文别处所述，若干(即，多个)分开的剂量可以每天、每周、每月或以其他合适的时间间隔被施用，或剂量可以如由情况的紧迫性指示的按比例减少。在需要或另外期望多个剂量的过程的情况下，经由多于一种途径施用如本文公开的肽可以是有益的。例如，可以合意的是，肠胃外地施用第一剂量(例如，经由肌内施用途径、静脉内施用途径；皮下施用途径、硬膜外施用途径、关节内施用途径、腹膜内施用途径、脑池内施用途径或鞘内施用途径)，以在受试者中诱导迅速的镇痛作用或急性镇痛作用，随后是肠内地(例如，口服地或直肠地)和/或表面地(例如，经由经皮施用途径或经粘膜施用途径)施用的随后的(例如，第二、第三、第四、第五等)剂量，以在治疗的急性阶段后的延长时间段内提供活性剂的继续的可用性。可选择地，可以合意的是肠内地(例如，口服地或直肠地)施用剂量，随后是肠胃外地(例如，经由肌内施用途径、静脉内施用途径；皮下施用途径、硬膜外施用途径、关节内施用途径、腹膜内施用途径、脑池内施用途径或鞘内施用途径)和/或表面地(例如，经由经皮施用途径或经粘膜施用途径)施用的随后的(例如，第二、第三、第四、第五等)剂量。可选择地，可以合意的是表面地(例如，经由经皮施用途径或经粘膜施用途径)施用剂量，随后是肠胃外地(例如，经由肌内施用途径、静脉内施用途径；皮下施用途径、硬膜外施用途径、关节内施用途径、腹膜内施用途径、脑池内施用途径或鞘内施用途径)和/或肠内地(例如，口服地或直肠地)施用的随后的(例如，第二、第三、第四、第五等)剂量。
施用途径可以基于神经性疼痛是局部的还是广泛的来合适地选择，如本文别处讨论的。可选择地或此外，可以考虑诸如受试者的总体健康、年龄、体重以及给定施用途径的耐受性(或缺乏耐受性)的因素来合适地选择施用途径(例如，在存在恐针症(phobia ofneedle)的情况下，可以选择替代的施用途径，诸如肠内的和/或表面的)。
还应理解，在期望多于一种施用途径的情况下，可以根据本文公开的方法使用两种或更多种施用途径的任何组合。合适的组合的说明性实例包括但不限于，(按施用顺序)，(a)肠胃外-肠内；(b)肠胃外-表面；(c)肠胃外-肠内-表面；(d)肠胃外-表面-肠内；(e)肠内-肠胃外；(f)肠内-表面；(g)肠内-表面-肠胃外；(h)肠内-肠胃外-表面；(i)表面-肠胃外；(j)表面-肠内；(k)表面-肠胃外-肠内；(l)表面-肠内-肠胃外；(m)肠胃外-肠内-表面-肠胃外；(n)肠胃外-肠内-表面-肠内；等。
在一种实施方案中，方法包括(i)向受试者肠胃外地施用本文公开的肽，和(ii)向受试者非肠胃外地(即，肠内地或表面地)施用本文公开的肽，其中非肠胃外的(肠内的或表面的)施用在肠胃外施用之后。在一种实施方案中，肠胃外施用选自由肌内施用、皮下施用和静脉内施用组成的组。在另外的实施方案中，肠胃外施用是皮下的。在一种实施方案中，非肠胃外施用是口服的。
在一种实施方案中，本文公开的方法包括(i)向人类受试者肠胃外地施用本文公开的肽，和(ii)向人类受试者口服施用本文公开的肽，其中口服施用在肠胃外施用之后。
在另一种实施方案中，本文公开的方法包括(i)向人类受试者肠胃外地施用SEQID NO:2的肽或其药学上可接受的盐，和(ii)向人类受试者口服施用SEQ ID NO:2的肽或其药学上可接受的盐，其中口服施用在肠胃外施用之后。在一种实施方案中，肠胃外施用是皮下的。在另一种实施方案中，肠胃外施用是鞘内的。
在另一种实施方案中，本文公开的方法包括(i)向人类受试者肠胃外地施用SEQID NO:2的肽或其药学上可接受的盐，和(ii)向人类受试者口服施用SEQ ID NO:2的肽或其药学上可接受的盐，其中口服施用在肠胃外施用之后。在一种实施方案中，肠胃外施用是皮下的。在另一种实施方案中，肠胃外施用是鞘内的。
在一种实施方案中，本文公开的方法包括(i)向非人类受试者肠胃外地施用本文公开的肽，和(ii)向非人类受试者口服施用本文公开的肽，其中口服施用在肠胃外施用之后。在另外的实施方案中，本文公开的方法包括(i)向非人类受试者肠胃外地施用SEQ IDNO:4的肽或其药学上可接受的盐，和(ii)向非人类受试者口服施用SEQ ID NO:4的肽或其药学上可接受的盐，其中口服施用在肠胃外施用之后。
在一种实施方案中，非人类受试者选自由猫科动物、犬科动物和马科动物组成的组。在一种实施方案中，肠胃外施用是皮下的。在另一种实施方案中，肠胃外施用是鞘内的。
在另外的实施方案中，本文公开的方法包括(i)向非人类受试者肠胃外地施用SEQID NO:5的肽或其药学上可接受的盐，和(ii)向非人类受试者口服施用SEQ ID NO:5的肽或其药学上可接受的盐，其中口服施用在肠胃外施用之后。在一种实施方案中，非人类受试者选自由猫科动物、犬科动物和马科动物组成的组。在一种实施方案中，肠胃外施用是皮下的。在另一种实施方案中，肠胃外施用是鞘内的。
在另外的实施方案中，本文公开的方法包括(i)向人类受试者肠胃外地施用本文公开的肽，和(ii)向人类受试者表面地施用本文公开的肽，其中表面施用在肠胃外施用之后。
在另外的实施方案中，本文公开的方法包括(i)向人类受试者肠胃外地施用SEQID NO:2的肽或其药学上可接受的盐，和(ii)向人类受试者表面地施用SEQ ID NO:2的肽或其药学上可接受的盐，其中表面施用在肠胃外施用之后。
在另外的实施方案中，本文公开的方法包括(i)向人类受试者肠胃外地施用SEQID NO:3的肽或其药学上可接受的盐，和(ii)向人类受试者表面地施用SEQ ID NO:3的肽或其药学上可接受的盐，其中表面施用在肠胃外施用之后。
在另外的实施方案中，本文公开的方法包括(i)向非人类受试者肠胃外地施用本文公开的肽，和(ii)向非人类受试者表面地施用本文公开的肽，其中表面施用在肠胃外施用之后。
在另外的实施方案中，本文公开的方法包括(i)向非人类受试者肠胃外地施用SEQID NO:4的肽或其药学上可接受的盐，和(ii)向非人类受试者表面地施用SEQ ID NO:4的肽或其药学上可接受的盐，其中表面施用在肠胃外施用之后。
在另外的实施方案中，本文公开的方法包括(i)向非人类受试者肠胃外地施用SEQID NO:5的肽或其药学上可接受的盐，和(ii)向非人类受试者表面地施用SEQ ID NO:5的肽或其药学上可接受的盐，其中表面施用在肠胃外施用之后。
在一种实施方案中，非人类受试者选自由猫科动物、犬科动物和马科动物组成的组。在一种实施方案中，肠胃外施用途径是皮下的。在另一种实施方案中，表面施用途径是经皮的。在另一种实施方案中，肠胃外施用是皮下的，并且表面施用是经皮的。
可选择地或此外，本文公开的肽可以合适地作为控制释放剂型被施用。因此，在一种实施方案中，方法包括(i)向受试者肠胃外地施用本文公开的肽，和(ii)向受试者施用作为控制释放剂型的本文公开的肽，其中控制释放剂型在肠胃外施用之后被施用。在另一种实施方案中，方法包括(i)向受试者非肠胃外地(肠内地或表面地)施用本文公开的肽，和(ii)向受试者施用作为控制释放剂型的本文公开的肽，其中控制释放剂型在非肠胃外施用之后被施用至受试者。在又一种实施方案中，方法包括(i)向受试者肠内地施用本文公开的肽，和(ii)向受试者施用作为控制释放剂型的本文公开的肽，其中控制释放剂型在肠内施用之后被施用至受试者。在又一种实施方案中，方法包括(i)向受试者表面地施用本文公开的肽，和(ii)向受试者施用作为控制释放剂型的本文公开的肽，其中控制释放剂型在表面施用之后被施用至受试者。在优选的实施方案中，控制释放剂型被配制用于肠胃外施用。
辅助疗法
本文公开的肽可以合适地与一种或更多种另外的活性剂一起顺序地或组合地(例如，作为共混物)施用。本领域技术人员将理解，其他活性剂的性质将取决于待治疗或待预防的状况。例如，在受试者具有癌症的情况下，本文公开的肽可以与一种或更多种化疗剂一起顺序地或组合地(例如，作为共混物)施用至受试者，化疗剂的说明性实例对于本领域技术人员而言将是熟悉的。该性质的组合治疗通过减轻通常与一些化疗剂相关的神经性疼痛可以是有利的，所述化疗剂的说明性实例包括顺铂、卡铂、奥沙利铂(oxaliplatin)、长春新碱、多西他赛(docetaxel)、紫杉醇、izbepilone、硼替佐米(bortezomib)、沙利度胺(thalidomide)以及来那度胺。因此，在一种实施方案中，本文公开的方法还包括向受试者施用治疗有效量的化疗剂。
本文公开的肽还可以合适地与一种或更多种能够减轻受试者的疼痛的其他镇痛剂(即，除了如本文描述的催乳素或其功能变体之外)一起顺序地或组合地(例如，作为共混物)施用至受试者。合适的镇痛剂对于本领域技术人员而言将是熟悉的，其说明性实例包括能够减轻伤害性疼痛的镇痛剂、能够减轻神经性疼痛的剂或其任何组合。因此，在一种实施方案中，本文公开的方法还包括向受试者施用治疗有效量的能够减轻受试者的疼痛的第二剂，其中该第二剂不是如本文描述的催乳素或其功能变体。
在另一种实施方案中，本文公开的方法还包括向受试者施用治疗有效量的能够减轻受试者的疼痛的第二剂，其中该第二剂不是如本文描述的催乳素或其功能变体。
在一种实施方案中，第二剂能够减轻受试者的伤害性疼痛。在另一种实施方案中，第二剂能够减轻受试者的神经性疼痛。
能够减轻伤害性疼痛的合适的剂对于本领域技术人员而言将是熟悉的，其说明性实例包括阿片剂诸如吗啡、可待因、二氢可待因、氢可酮、乙酰基二氢可待因、羟考酮、羟吗啡酮以及丁丙诺啡；以及非甾体抗炎药物(NSAID)，诸如阿司匹林、布洛芬、萘普生、对乙酰氨基酚、二氟尼柳、双水杨酸酯(salsalate)、非那西丁、非诺洛芬、酮洛芬、氟比洛芬、奥沙普秦、洛索洛芬、吲哚美辛、舒林酸、依托度酸、酮咯酸、双氯芬酸、萘丁美酮、甲芬那酸、甲氯芬那酸、氟芬那酸、托芬那酸、塞来昔布、帕瑞昔布、罗美昔布、依托昔布、非罗考昔、尼美舒利以及利克飞龙。在一种实施方案中，能够减轻伤害性疼痛的第二剂是阿片样物质。
在本文公开的其他实施方案中，本文公开的肽与另一种治疗或减轻神经性疼痛或引起神经性疼痛的潜在状况的疗法一起顺序地或组合地(例如，作为共混物)施用。在一些情况下，当施用是与本文公开的肽一起时，第二神经性镇痛剂的量可以减小。能够治疗神经性疼痛的合适的剂的说明性实例包括度洛西汀、普瑞巴林、加巴喷丁、苯妥英、褪黑激素(melatonin)、卡马西平(carbamazepine)、左卡尼汀、辣椒碱(capsaicin)、三环抗抑郁药诸如阿米替林以及钠通道阻断剂诸如利多卡因。
药物组合物
本文公开的肽可以被配制用于作为纯化学品(neat chemical)施用至受试者。然而，在某些实施方案中，可以优选的是将本文公开的肽配制为药物组合物，包括兽医组合物。因此，在本文公开的另一个方面中，提供了包含催乳素或其功能变体的药物组合物，用于在治疗和预防受试者的神经性疼痛中使用，其中该功能变体包含式(I)的肽：
R1-C-R-I-X1-X2-X3-X4-N-C-R2(I)(SEQ ID NO:1)
其中
X1是选自异亮氨酸(I)和缬氨酸(V)的氨基酸残基；
X2是选自组氨酸(H)和酪氨酸(Y)的氨基酸残基；
X3是选自天冬氨酸(D)和天冬酰胺(N)的氨基酸残基；
X4是选自天冬酰胺(N)和丝氨酸(S)的氨基酸残基；
R1选自由以下组成的组：YLKLLK、LKLLK、KLLK、LLK、LL、K，或者R1不存在；并且
R2是G(甘氨酸)，或者R2不存在。
在一种实施方案中，肽选自由以下组成的组：CRIIHNNNC(SEQ ID NO:2)、CRIIHNNNCG(SEQ ID NO:3)、CRIVYDSNC(SEQ ID NO:4)和CRIVYDSNCG(SEQ ID NO:5)。
在一种实施方案中，肽是CRIIHNNNC(SEQ ID NO:2)。在一种实施方案中，肽是CRIIHNNNCG(SEQ ID NO:3)。在一种实施方案中，肽是CRIVYDSNC(SEQ ID NO:4)。在一种实施方案中，肽是CRIVYDSNCG(SEQ ID NO:5)。
在一种实施方案中，本文公开的肽以治疗有效量存在，该治疗有效量当被施用至受试者时，减轻受试者的神经性疼痛，如本文别处描述的。
在一种实施方案中，组合物还包含能够减轻受试者的疼痛的第二剂，其中该第二剂不是如本文公开的催乳素或其功能变体。在一种实施方案中，第二剂能够减轻受试者的伤害性疼痛，所述伤害性疼痛的说明性实例在本文别处描述。在另一种实施方案中，第二剂能够减轻受试者的神经性疼痛，所述神经性疼痛的说明性实例也在本文别处描述。在一种实施方案中，第二剂是阿片样物质。
在本文公开的另一个方面中，提供了催乳素或其功能变体在制造用于治疗和预防受试者的神经性疼痛的药物中的用途，其中该功能变体包含式(I)的肽：
R1-C-R-I-X1-X2-X3-X4-N-C-R2(I)(SEQ ID NO:1)
其中
X1是选自异亮氨酸(I)和缬氨酸(V)的氨基酸残基；
X2是选自组氨酸(H)和酪氨酸(Y)的氨基酸残基；
X3是选自天冬氨酸(D)和天冬酰胺(N)的氨基酸残基；
X4是选自天冬酰胺(N)和丝氨酸(S)的氨基酸残基；
R1选自由以下组成的组：YLKLLK、LKLLK、KLLK、LLK、LL、K，或者R1不存在；并且
R2是G(甘氨酸)，或者R2不存在。
在一种实施方案中，肽选自由以下组成的组：CRIIHNNNC(SEQ ID NO:2)、CRIIHNNNCG(SEQ ID NO:3)、CRIVYDSNC(SEQ ID NO:4)和CRIVYDSNCG(SEQ ID NO:5)。在一种实施方案中，肽是CRIIHNNNC(SEQ ID NO:2)。在一种实施方案中，肽是CRIIHNNNCG(SEQID NO:3)。在一种实施方案中，肽是CRIVYDSNC(SEQ ID NO:4)。在一种实施方案中，肽是CRIVYDSNCG(SEQ ID NO:5)。
在一种实施方案中，本文公开的肽被配制用于以治疗有效量施用至受试者，该治疗有效量减轻受试者的神经性疼痛，如本文别处描述的。
在一种实施方案中，肽被配制用于与能够减轻受试者的疼痛的第二剂一起顺序地或组合地施用，其中该第二剂不是如本文描述的催乳素或其功能变体。在一种实施方案中，第二剂能够减轻受试者的伤害性疼痛，所述伤害性疼痛的说明性实例在本文别处描述。在另一种实施方案中，第二剂能够减轻受试者的神经性疼痛，所述神经性疼痛的说明性实例也在本文别处描述。在一种实施方案中，第二剂是阿片样物质。
如本文别处所述，本文公开的肽可以与一种或更多种其他活性剂一起顺序地或组合地(例如，作为共混物)施用，所述其他活性剂将可能取决于待治疗的状况。例如，在受试者具有癌症的情况下，本文公开的组合物可以被配制用于与一种或更多种化疗剂一起顺序地或组合地(例如，作为共混物)施用，所述化疗剂的说明性实例对于本领域技术人员而言将是熟悉的。这种性质的组合治疗通过减轻通常与一些化疗剂相关的神经性疼痛可以是有利的，所述化疗剂的说明性实例包括顺铂、卡铂、奥沙利铂、长春新碱、多西他赛、紫杉醇、izbepilone、硼替佐米、沙利度胺以及来那度胺。
本文公开的组合物还可以被合适地配制用于与本文别处描述的一种或更多种能够减轻受试者的疼痛的其他镇痛剂(即，除了如本文公开的催乳素或其功能变体之外)一起顺序地或组合地(例如，作为共混物)施用至受试者。在一种实施方案中，本文公开的组合物还包含能够减轻受试者的疼痛的第二剂，其中该第二剂不是如本文描述的催乳素或其功能变体。
在一种实施方案中，第二剂能够减轻受试者的伤害性疼痛。在另一种实施方案中，第二剂能够减轻受试者的神经性疼痛。
能够减轻伤害性疼痛的合适的剂对于本领域技术人员而言将是熟悉的，其说明性实例包括阿片剂诸如吗啡、可待因、二氢可待因、氢可酮、乙酰基二氢可待因、羟考酮、羟吗啡酮以及丁丙诺啡；以及非甾体抗炎药物(NSAID)，诸如阿司匹林、布洛芬、萘普生、对乙酰氨基酚、二氟尼柳、双水杨酸酯、非那西丁、非诺洛芬、酮洛芬、氟比洛芬、奥沙普秦、洛索洛芬、吲哚美辛、舒林酸、依托度酸、酮咯酸、双氯芬酸、萘丁美酮、甲芬那酸、甲氯芬那酸、氟芬那酸、托芬那酸、塞来昔布、帕瑞昔布、罗美昔布、依托昔布、非罗考昔、尼美舒利以及利克飞龙。在一种实施方案中，能够减轻伤害性疼痛的第二剂是阿片样物质。
在本文公开的其他实施方案中，本文公开的组合物被配制用于与另一种治疗或减轻神经性疼痛或引起疼痛的潜在状况的疗法一起顺序地或组合地(例如，作为共混物)施用。在一些情况下，当施用是与本文公开的肽一起时，第二镇痛剂的量可以减小。能够治疗神经性疼痛的合适的剂的说明性实例包括度洛西汀、普瑞巴林、加巴喷丁、苯妥英、褪黑激素、卡马西平、左卡尼汀、辣椒碱、三环抗抑郁药诸如阿米替林以及钠通道阻断剂诸如利多卡因。
在本文公开的另一个方面中，提供了一种药物组合物，该药物组合物包含：
(i)如本文描述的催乳素或其功能变体，其中该功能变体包含式(I)的肽：
R1-C-R-I-X1-X2-X3-X4-N-C-R2(I)(SEQ ID NO:1)
其中
X1是选自异亮氨酸(I)和缬氨酸(V)的氨基酸残基；
X2是选自组氨酸(H)和酪氨酸(Y)的氨基酸残基；
X3是选自天冬氨酸(D)和天冬酰胺(N)的氨基酸残基；
X4是选自天冬酰胺(N)和丝氨酸(S)的氨基酸残基；
R1选自由以下组成的组：YLKLLK、LKLLK、KLLK、LLK、LL、K，或者R1不存在；并且
R2是G(甘氨酸)，或者R2不存在；以及
(ii)能够减轻受试者的疼痛的第二剂，其中该第二剂不是如本文描述的催乳素或其功能变体。在一种实施方案中，第二剂能够减轻受试者的伤害性疼痛，所述伤害性疼痛的说明性实例在本文别处描述。在另一种实施方案中，第二剂能够减轻受试者的神经性疼痛，所述神经性疼痛的说明性实例也在本文别处描述。在一种实施方案中，第二剂是阿片样物质。
在本文公开的一种实施方案中，本文公开的肽被配制为包含药学上可接受的载体、赋形剂或稀释剂的组合物。载体、赋形剂或稀释剂通常被认为是“可接受的”，其中它们与组合物的其他成分相容，并且在接受者中几乎不产生有害作用或不产生有害作用。
在本文公开的另一个方面中，提供了包含催乳素或其功能变体的镇痛组合物，其中该功能变体包含式(I)的肽：
R1-C-R-I-X1-X2-X3-X4-N-C-R2(I)(SEQ ID NO:1)
其中
X1是选自异亮氨酸(I)和缬氨酸(V)的氨基酸残基；
X2是选自组氨酸(H)和酪氨酸(Y)的氨基酸残基；
X3是选自天冬氨酸(D)和天冬酰胺(N)的氨基酸残基；
X4是选自天冬酰胺(N)和丝氨酸(S)的氨基酸残基；
R1选自由以下组成的组：YLKLLK、LKLLK、KLLK、LLK、LL、K，或者R1不存在；并且
R2是G(甘氨酸)，或者R2不存在。
在一种实施方案中，肽选自由以下组成的组：CRIIHNNNC(SEQ ID NO:2)、CRIIHNNNCG(SEQ ID NO:3)、CRIVYDSNC(SEQ ID NO:4)和CRIVYDSNCG(SEQ ID NO:5)。
在一种实施方案中，肽是CRIIHNNNC(SEQ ID NO:2)。在一种实施方案中，肽是CRIIHNNNCG(SEQ ID NO:3)。在一种实施方案中，肽是CRIVYDSNC(SEQ ID NO:4)。在一种实施方案中，肽是CRIVYDSNCG(SEQ ID NO:5)。在一种实施方案中，镇痛组合物还包含能够减轻受试者的疼痛的第二剂，如本文别处描述的，其中该第二剂不是如本文描述的催乳素或其功能变体。在一种实施方案中，第二剂能够减轻受试者的伤害性疼痛，所述伤害性疼痛的说明性实例在本文别处描述。在另一种实施方案中，第二剂能够减轻受试者的神经性疼痛，所述神经性疼痛的说明性实例也在本文别处描述。在一种实施方案中，第二剂是阿片样物质。
在本文公开的另一个方面中，提供了包含治疗有效量的肽或其药学上可接受的盐的组合物，其中肽由以下组成或基本上由以下组成：氨基酸序列CRIIHNNNC(SEQ ID NO:2)或氨基酸序列CRIIHNNNCG(SEQ ID NO:3)。
在本文公开的另一个方面中，提供了包含治疗有效量的肽或其药学上可接受的盐的组合物，其中肽由以下组成或基本上由以下组成：氨基酸序列CRIVYDSNC(SEQ ID NO:4)或CRIVYDSNCG(SEQ ID NO:5)。
在一种实施方案中，组合物还包含药学上可接受的载体、赋形剂或稀释剂，如本文别处描述的。在一种实施方案中，组合物被配制用于口服施用。
合适的药物制剂的说明性实例包括适合于肠内施用或肠胃外施用的药物制剂，肠内施用或肠胃外施用的说明性实例在本文别处描述，包括口服、直肠、含服、舌下、阴道、鼻、表面(例如，经皮)、肌内、皮下、静脉内、硬膜外、关节内以及鞘内。
本文描述的肽可以合适地被置于药物组合物的形式和其单位剂量中，以作为以下使用：用于口服使用的固体(例如，片剂或填充胶囊)或液体(例如，溶液、悬浮液、乳液、酏剂或用其填充的胶囊)，用于直肠施用的软膏、栓剂或灌肠剂的形式，用于肠胃外使用(例如，肌内施用、皮下施用、静脉内施用、硬膜外施用、关节内施用和鞘内施用)的无菌可注射溶液的形式；或用于局部(local)(例如，表面、含服、舌下、阴道)施用的软膏、洗剂、乳膏、凝胶、贴剂、舌下条(sublingual strip)或膜等形式。在一种实施方案中，式(I)的肽或其药学上可接受的盐被配制用于表面(例如，经皮)递送。合适的经皮递送系统对于本领域技术人员而言将是熟悉的，其说明性实例由Prausnitz和Langer(2008；Nature Biotechnol.26(11):1261-1268)描述，该文献的内容通过引用并入本文。在另一种实施方案中，式(I)的肽或其药学上可接受的盐被配制用于舌下递送或含服递送。合适的舌下递送系统和含服递送系统对于本领域技术人员而言将是熟悉的，其说明性实例包括可溶解的条或膜，如由Bala等人(2013；Int.J.Pharm.Investig.3(2):67-76)描述的，该文献的内容通过引用并入本文。
合适的药物组合物及其单位剂型可以包含常规比例的常规成分，具有或不具有另外的活性化合物或要素，并且这样的单位剂型可以包含与待采用的预期的每日剂量范围相称的任何合适的有效量的活性成分。本文公开的肽可以被配制用于以多种肠内剂型、表面剂型和/或肠胃外剂型施用。合适的剂型可以包含本文公开的肽作为活性组分，如本文描述的。
如本文别处所述，可以合意的是，基于神经性疼痛是局部的还是广泛的来选择施用途径。例如，在神经性疼痛是局部的情况下，可以合意的是将本文公开的组合物配制用于施用至受影响的区域或与受影响的区域紧邻的区域。例如，在神经性疼痛在关节(例如，颈、膝、肘、肩或髋)中的情况下，组合物可以被配制用于关节内施用到受影响的关节中。可选择地或此外，组合物可以被配制用于在受影响的关节处或大体上邻近受影响的关节处施用。作为另一个说明性实例，当神经性疼痛在口腔中时(例如，三叉神经神经性疼痛、非典型牙痛(幻牙痛)或灼口综合征)，组合物可以被配制用于经由口腔粘膜施用(例如，通过含服施用和/或舌下施用)。
相反地，在神经性疼痛在受试者的多个解剖部位广泛或散播的情况下，为了将活性剂分布在受疼痛影响的多个解剖部位，可以方便的是将组合物配制成用于肠内施用途径、表面施用途径和/或肠胃外施用途径，如本文别处描述的。
在一种实施方案中，组合物被配制用于口服施用至人类。在另一种实施方案中，组合物被配制用于口服施用至非人类受试者。在又一种实施方案中，组合物被配制用于口服施用至选自由猫科动物、犬科动物和马科动物组成的组的非人类受试者。
在另一种实施方案中，组合物被配制用于肠胃外施用至人类。在另一种实施方案中，组合物被配制用于肠胃外施用至非人类受试者。在又一种实施方案中，组合物被配制用于肠胃外施用至选自由猫科动物、犬科动物和马科动物组成的组的非人类受试者。在一种实施方案中，肠胃外施用是皮下施用。
在另一种实施方案中，组合物被配制用于表面施用至人类。在另一种实施方案中，组合物被配制用于表面施用至非人类受试者。在又一种实施方案中，组合物被配制用于表面施用至选自由猫科动物、犬科动物和马科动物组成的组的非人类受试者。在一种实施方案中，表面施用是经皮的。
在另一种实施方案中，组合物被配制为待施用至人类的控制释放剂型。在另一种实施方案中，组合物被配制为待施用至非人类受试者的控制释放剂型。在又一种实施方案中，组合物被配制为待施用至非人类受试者的控制释放剂型，所述非人类受试者选自由猫科动物、犬科动物和马科动物组成的组。合适的控制释放剂型的说明性实例在本文别处描述。
为了制备如本文描述的催乳素或其功能变体的药物组合物，药学上可接受的载体可以是固体或液体。固体形式制品(preparation)的说明性实例包括粉剂、片剂、丸剂、胶囊、扁囊剂、栓剂以及可分散颗粒剂。固体载体可以是一种或更多种物质，所述一种或更多种物质还可以充当稀释剂、调味剂、增溶剂、润滑剂、悬浮剂、粘合剂、防腐剂、片剂崩解剂或包封材料。在粉剂中，载体可以是与细分的(finely divided)活性组分混合的细分的固体。在片剂中，活性组分可以与处于适合的比例的具有必需的结合能力的载体混合并且以期望的形状和尺寸被压实。
在一些实施方案中，粉剂和片剂包含从5％或10％至约70％的活性化合物。合适的载体的说明性实例包括碳酸镁、硬脂酸镁、滑石粉、糖、乳糖、果胶、糊精、淀粉、明胶、黄芪胶、甲基纤维素、羧甲基纤维素钠、低熔点蜡、可可脂及类似物。术语“制品”意图包括活性化合物与包封材料的制剂，提供其中活性组分(存在或不存在载体)被载体包围的胶囊。类似地，本文还设想了扁囊剂和锭剂。片剂、粉剂、胶囊、丸剂、扁囊剂和锭剂可以用作适合于口服施用的固体形式。
为了制备栓剂，首先将低熔点蜡诸如脂肪酸甘油酯或可可脂的共混物熔融，并且将活性组分如通过搅拌均匀地分散于其中。然后将熔融的均匀混合物倾入方便尺寸的模具中，允许冷却并且从而固化。
适合于阴道施用的制剂可以作为阴道栓、止血栓、乳膏、凝胶、糊剂、泡沫或喷雾剂(除了活性成分之外还包含诸如本领域已知的适当的载体)被呈现。
液体形式制品包括溶液、悬浮液和乳液，例如水或水-丙二醇溶液。例如，肠胃外注射液体制品可以被配制为在聚乙二醇水溶液中的溶液。
本文公开的肽可以被配制用于肠胃外施用(例如，通过注射，例如弹丸式注射(bolus injection)或连续输注)，并且可以以具有添加的防腐剂的安瓿、预填充注射器、小体积输注容器或多剂量容器的单位剂型呈现。组合物可以采取在油性或水性媒介物中的诸如悬浮液、溶液或乳液的形式，并且可以包含配制剂诸如悬浮剂、稳定剂和/或分散剂。可选择地，活性化合物可以呈粉剂形式，所述粉剂形式通过无菌固体的无菌分离(asepticisolation)或通过从溶液冻干获得，用于在使用之前用合适的媒介物例如无菌、无热原水构制。
适合于口服使用的水溶液可以通过将活性组分溶解在水中并且根据需要添加合适的着色剂、调味剂、稳定剂和增稠剂来制备。
适合于口服使用的水性悬浮液可以通过将细分的活性组分与粘性材料分散在水中来制备，所述粘性材料诸如天然或合成的树胶、树脂、甲基纤维素、羧甲基纤维素钠或其他熟知的悬浮剂。
本文还预期意图在使用之前不久转化为用于口服施用的液体形式制品的固体形式制品。这样的液体形式包括溶液、悬浮液和乳液。除了活性组分之外，这些制品还可以包含着色剂、调味剂、稳定剂、缓冲剂、人工甜味剂和天然甜味剂、分散剂、增稠剂、增溶剂以及类似物。
对于向表皮的表面施用，如本文描述的式(I)的肽或其药学上可接受的盐可以被配制为软膏、乳膏或洗剂，或配制为经皮贴剂。软膏和乳膏可以例如用水性或油性基质，添加合适的增稠剂和/或胶凝剂来配制。洗剂可以用水性或油性基质配制并且通常还将包含一种或更多种乳化剂、稳定剂、分散剂、悬浮剂、增稠剂或着色剂。
适合于在口中表面施用的制剂包括包含在调味基质(通常为蔗糖和阿拉伯树胶或黄芪胶)中的活性剂的锭剂；包含在惰性基质诸如明胶和甘油或蔗糖和阿拉伯树胶中的活性成分的软锭剂(pastille)；以及包含在合适的液体载体中的活性成分的漱口水(mouthwash)。
溶液或悬浮液通过常规手段例如用滴管、移液器或喷雾器直接施加至鼻腔。制剂可以以单剂量或多剂量形式提供。在滴管或移液器的后一种情况下，这可以通过患者施用适当的预先确定体积的溶液或悬浮液来实现。在喷雾器的情况下，这可以例如借助于计量雾化喷雾泵(metering atomising spray pump)来实现。为了改善鼻递送和保留，本发明中使用的肽可以用环糊精包封，或者用预计增强鼻粘膜中的递送和保留的剂配制。
向呼吸道的施用还可以借助于气雾剂制剂来实现，其中活性成分以具有合适的推进剂的加压包装提供，所述推进剂诸如氯氟烃(CFC)，例如二氯二氟甲烷、三氯氟甲烷或二氯四氟乙烷、二氧化碳或其他合适的气体。气雾剂还可以方便地包含表面活性剂诸如卵磷脂。药物的剂量可以通过提供计量阀来控制。
可选择地或此外，活性成分可以以干燥粉剂的形式提供，所述干燥粉剂例如化合物在合适的粉剂基质诸如乳糖、淀粉、淀粉衍生物(诸如羟丙基甲基纤维素和聚乙烯吡咯烷酮(PVP))中的粉剂混合物。方便地，粉剂载体将在鼻腔中形成凝胶。粉剂组合物可以以例如明胶的胶囊或药筒(cartridge)或粉剂可以借助于吸入器从其中被施用的泡罩包装的单位剂型呈现。
在意图用于向呼吸道施用的制剂(包括鼻内制剂)中，肽通常将具有例如1微米至10微米或更小量级的小粒度。这样的粒度可以通过本领域已知的手段，例如通过微粉化来获得。
当需要时，可以采用适于给予活性成分的控制释放或持续释放的制剂，如本文别处描述的。
在一种实施方案中，如本文描述的药物制品优选地呈单位剂型。以这样的形式，制品被再分(subdivide)为包含适当量的活性组分的单位剂量。单位剂型可以是包装的制品，包装包含离散的量的制品，诸如包装于小瓶或安瓿中的片剂、胶囊和粉剂。此外，单位剂型本身可以是胶囊、片剂、扁囊剂或锭剂，或者其可以是呈包装形式的适当数目的这些中的任何单位剂型。
在本文公开的另一个方面中，提供了一种组合物，该组合物包含如本文描述的SEQID NO:2或SEQ ID NO:3的肽，或其药学上可接受的盐，用作药物。
在本文公开的另一个方面中，提供了一种组合物，该组合物包含如本文描述的SEQID NO:4或SEQ ID NO:5的肽，或其药学上可接受的盐，用作药物。
在一种实施方案中，本文公开的组合物被配制用于口服施用至人类。在又一种实施方案中，本文公开的组合物被配制用于口服施用至非人类。在另外的实施方案中，本文公开的组合物被配制用于口服施用至选自由猫科动物、犬科动物和马科动物组成的组的非人类。
在另一种实施方案中，本文公开的肽被配制用于口服施用至人类受试者。在另一种实施方案中，本文公开的肽被配制用于口服施用至非人类受试者。在又一种实施方案中，本文公开的肽被配制用于口服施用至选自由猫科动物、犬科动物和马科动物组成的组的非人类受试者。
在另一种实施方案中，本文公开的肽被配制用于表面施用至人类受试者。在又一种实施方案中，本文公开的肽被配制用于表面施用至非人类受试者。在另一种实施方案中，本文公开的肽被配制用于表面施用至选自由猫科动物、犬科动物和马科动物组成的组的非人类受试者。在一种实施方案中，表面施用是经皮的。
在另一种实施方案中，本文公开的肽被配制用于作为控制释放剂型施用至人类受试者。在又一种实施方案中，本文公开的肽被配制用于作为控制释放剂型施用至非人类受试者。在另一种实施方案中，本文公开的肽被配制用于作为控制释放剂型施用至非人类受试者，其中该非人类受试者选自由猫科动物、犬科动物和马科动物组成的组。在一种实施方案中，控制释放剂型被配制用于肠胃外施用。
在另一种实施方案中，SEQ ID NO:2的肽或其药学上可接受的盐被配制用于口服施用至人类。在另一种实施方案中，SEQ ID NO:2的肽或其药学上可接受的盐被配制用于口服施用至非人类受试者。在又一种实施方案中，SEQ ID NO:2的肽或其药学上可接受的盐被配制用于口服施用至选自由猫科动物、犬科动物和马科动物组成的组的非人类受试者。
在另一种实施方案中，如本文公开的SEQ ID NO:2的肽或其药学上可接受的盐被配制用于表面施用至人类受试者。在又一种实施方案中，如本文公开的SEQ ID NO:2的肽或其药学上可接受的盐被配制用于表面施用至非人类受试者。在另一种实施方案中，如本文公开的SEQ ID NO:2的肽或其药学上可接受的盐被配制用于表面施用至选自由猫科动物、犬科动物和马科动物组成的组的非人类受试者。在一种实施方案中，表面施用是经皮的。
在另一种实施方案中，如本文公开的SEQ ID NO:2的肽或其药学上可接受的盐被配制用于作为控制释放剂型施用至人类受试者。在又一种实施方案中，如本文公开的SEQID NO:2的肽或其药学上可接受的盐被配制用于作为控制释放剂型施用至非人类受试者。在另一种实施方案中，如本文公开的SEQ ID NO:2的肽或其药学上可接受的盐被配制用于作为控制释放剂型施用至非人类受试者，其中该非人类受试者选自由猫科动物、犬科动物和马科动物组成的组。在一种实施方案中，控制释放剂型被配制用于肠胃外施用。
在另一种实施方案中，SEQ ID NO:3的肽或其药学上可接受的盐被配制用于口服施用至非人类受试者。在又一种实施方案中，SEQ ID NO:3的肽或其药学上可接受的盐被配制用于口服施用至选自由猫科动物、犬科动物和马科动物组成的组的非人类受试者。
在另一种实施方案中，SEQ ID NO:3的肽或其药学上可接受的盐被配制用于表面施用至非人类受试者。在又一种实施方案中，SEQ ID NO:3的肽或其药学上可接受的盐被配制用于表面施用至选自由猫科动物、犬科动物和马科动物组成的组的非人类受试者。在一种实施方案中，表面施用是经皮的。
在另一种实施方案中，如本文公开的SEQ ID NO:3的肽或其药学上可接受的盐被配制用于作为控制释放剂型施用至人类受试者。在又一种实施方案中，如本文公开的SEQID NO:3的肽或其药学上可接受的盐被配制用于作为控制释放剂型施用至非人类受试者。在另一种实施方案中，如本文公开的SEQ ID NO:3的肽或其药学上可接受的盐被配制用于作为控制释放剂型施用至非人类受试者，其中该非人类受试者选自由猫科动物、犬科动物和马科动物组成的组。在一种实施方案中，控制释放剂型被配制用于肠胃外施用。
在另一种实施方案中，SEQ ID NO:3的肽或其药学上可接受的盐被配制用于口服施用至非人类受试者。在又一种实施方案中，SEQ ID NO:3的肽或其药学上可接受的盐被配制用于口服施用至选自由猫科动物、犬科动物和马科动物组成的组的非人类受试者。
在另一种实施方案中，SEQ ID NO:3的肽或其药学上可接受的盐被配制用于表面施用至非人类受试者。在又一种实施方案中，SEQ ID NO:3的肽或其药学上可接受的盐被配制用于表面施用至选自由猫科动物、犬科动物和马科动物组成的组的非人类受试者。在一种实施方案中，表面施用是经皮的。
在另一种实施方案中，如本文公开的SEQ ID NO:3的肽或其药学上可接受的盐被配制用于作为控制释放剂型施用至人类受试者。在又一种实施方案中，如本文公开的SEQID NO:3的肽或其药学上可接受的盐被配制用于作为控制释放剂型施用至非人类受试者。在另一种实施方案中，如本文公开的SEQ ID NO:3的肽或其药学上可接受的盐被配制用于作为控制释放剂型施用至非人类受试者，其中该非人类受试者选自由猫科动物、犬科动物和马科动物组成的组。在一种实施方案中，控制释放剂型被配制用于肠胃外施用。
在另一种实施方案中，SEQ ID NO:4的肽或其药学上可接受的盐被配制用于口服施用至非人类受试者。在又一种实施方案中，SEQ ID NO:4的肽或其药学上可接受的盐被配制用于口服施用至选自由猫科动物、犬科动物和马科动物组成的组的非人类受试者。
在另一种实施方案中，SEQ ID NO:4的肽或其药学上可接受的盐被配制用于表面施用至非人类受试者。在又一种实施方案中，SEQ ID NO:4的肽或其药学上可接受的盐被配制用于表面施用至选自由猫科动物、犬科动物和马科动物组成的组的非人类受试者。在一种实施方案中，表面施用是经皮的。
在另一种实施方案中，如本文公开的SEQ ID NO:4的肽或其药学上可接受的盐被配制用于作为控制释放剂型施用至人类受试者。在又一种实施方案中，如本文公开的SEQID NO:4的肽或其药学上可接受的盐被配制用于作为控制释放剂型施用至非人类受试者。在另一种实施方案中，如本文公开的SEQ ID NO:4的肽或其药学上可接受的盐被配制用于作为控制释放剂型施用至非人类受试者，其中该非人类受试者选自由猫科动物、犬科动物和马科动物组成的组。在一种实施方案中，控制释放剂型被配制用于肠胃外施用。
在另一种实施方案中，SEQ ID NO:5的肽或其药学上可接受的盐被配制用于口服施用至非人类受试者。在又一种实施方案中，SEQ ID NO:5的肽或其药学上可接受的盐被配制用于口服施用至选自由猫科动物、犬科动物和马科动物组成的组的非人类受试者。
在另一种实施方案中，SEQ ID NO:5的肽或其药学上可接受的盐被配制用于表面施用至非人类受试者。在又一种实施方案中，SEQ ID NO:5的肽或其药学上可接受的盐被配制用于表面施用至选自由猫科动物、犬科动物和马科动物组成的组的非人类受试者。在一种实施方案中，表面施用是经皮的。
在另一种实施方案中，如本文公开的SEQ ID NO:5的肽或其药学上可接受的盐被配制用于作为控制释放剂型施用至人类受试者。在又一种实施方案中，如本文公开的SEQID NO:5的肽或其药学上可接受的盐被配制用于作为控制释放剂型施用至非人类受试者。在另一种实施方案中，如本文公开的SEQ ID NO:5的肽或其药学上可接受的盐被配制用于作为控制释放剂型施用至非人类受试者，其中该非人类受试者选自由猫科动物、犬科动物和马科动物组成的组。在一种实施方案中，控制释放剂型被配制用于肠胃外施用。
如本文别处所述，若干(即，多个)分开的剂量可以每天、每周、每月或以其他合适的时间间隔被施用，或剂量可以如由情况的紧迫性指示的按比例减少。在需要或另外期望多个剂量的过程的情况下，本文公开的组合物可以合适地被配制用于经由所述多种途径施用。例如，可以合意的是，肠胃外地施用第一剂量(例如，肌内、静脉内地；皮下地等)，以在受试者中诱导迅速的镇痛作用或急性镇痛作用，随后是非肠胃外地(例如，肠内地和/或表面地)施用的随后的(例如，第二、第三、第四、第五等)剂量，以在治疗的急性阶段后的延长时间段内提供活性剂的继续的可用性。因此，在一种实施方案中，如本文公开的肽和组合物被配制用于作为第一剂量肠胃外施用至受试者(即，作为肠胃外剂型)，并且被配制用于在第一剂量之后非肠胃外施用至受试者(例如，作为肠内剂型和/或表面剂型)。在一种实施方案中，肠胃外施用选自由肌内施用、皮下施用和静脉内施用组成的组。在另外的实施方案中，肠胃外施用是皮下的。
在另一种实施方案中，肠内施用是口服施用。因此，在一种实施方案中，如本文公开的肽和组合物被配制用于作为第一剂量肠胃外施用至受试者，并且被配制用于在第一剂量之后口服施用至受试者(例如，作为口服剂型)。
在另一种实施方案中，肠内施用是表面施用。因此，在一种实施方案中，如本文公开的肽和组合物被配制用于作为第一剂量肠胃外施用至受试者，并且被配制用于在第一剂量之后表面施用至受试者(例如，作为口服剂型)。在一种实施方案中，表面施用是经皮施用。
在另一种实施方案中，可以合意的是，肠胃外地施用第一剂量(例如，肌内、静脉内地；皮下地等)，以在受试者中诱导迅速的镇痛作用或急性镇痛作用，随后是如本文别处描述的控制释放剂型的随后的(例如，第二、第三、第四、第五等)施用，以在治疗的急性阶段后的延长时间段内提供活性剂的控制释放。因此，在另一种实施方案中，如本文公开的肽和组合物被配制用于作为第一剂量肠胃外施用至受试者，并且被配制为控制释放剂型以在第一剂量之后被施用至受试者。在一种实施方案中，控制释放剂型被配制用于肠胃外施用。
还可以合意的是肠内地(例如，口服地或直肠地)施用第一剂量，随后是表面地(例如，经皮地)施用的随后的(例如，第二、第三、第四、第五等)剂量。因此，在一种实施方案中，如本文公开的肽和组合物被配制用于作为第一剂量肠内施用至受试者(即，作为肠内剂型；口服的或直肠的)，并且被配制用于在第一剂量之后表面施用至受试者(例如，作为经皮剂型或经粘膜剂型)。在另一种实施方案中，如本文公开的肽和组合物被配制用于表面施用，所述表面施用选自由经皮施用和经粘膜施用组成的组。在另外的实施方案中，如本文公开的肽和组合物被配制用于经皮施用。
在又一种实施方案中，可以合意的是将如本文公开的肽或组合物作为第一剂量肠内地(例如，口服地或直肠地)施用，随后是作为如本文别处描述的控制释放剂型的随后的(例如，第二、第三、第四、第五等)剂量。因此，在一种实施方案中，如本文公开的肽和组合物被配制用于作为第一剂量肠内地施用，并且被配制用于作为控制释放剂型施用，其中控制释放剂型被配制用于在第一剂量后施用。在一种实施方案中，肠内剂量被配制用于口服施用。在另一种实施方案中，控制释放剂型被配制用于肠胃外施用。
在一种实施方案中，可以合意的是将如本文公开的肽或组合物作为第一剂量表面地(例如，口服地或直肠地)施用，随后是作为如本文别处描述的控制释放剂型的随后的(例如，第二、第三、第四、第五等)剂量。因此，在一种实施方案中，如本文公开的肽和组合物被配制用于作为第一剂量表面施用，并且被配制用于作为控制释放剂型施用，其中控制释放剂型被配制用于在第一表面剂量后施用。在一种实施方案中，表面剂量被配制用于经皮施用。在另一种实施方案中，控制释放剂型被配制用于肠胃外施用。
现在将参考以下实施例来描述本发明，实施例说明了本发明的一些优选的方面。然而，应理解本发明的以下描述的特殊性不取代本发明的先前描述的一般性。
实施例
包含SEQ ID NO:2、3、4和5的氨基酸序列的肽(分别是LAT7771、LAT7772、LAT7773和LAT7774)由Auspep(Victoria,Australia)使用固相合成和Fmoc保护策略合成。LAT7771、LAT7772、LAT7773和LAT7774可溶于蒸馏水，并且作为浓缩储备溶液配制，并且冷冻储存直到实验当天，在实验当天将它们在人工脑脊液(aCSF)中稀释至所需要的测试浓度。
使用具有完整的背根传入的体外脊髓切片结合单细胞全细胞膜片钳电生理学记录技术来评估具有SEQ ID NO:2、3、4和5的氨基酸序列的肽的电生理学性质。图1中示出了实验准备的示意图。
脊神经结扎模型(Chung模型)由Kim和Chung(1992；Pain,50(3):355-63)首次报告，并且涉及L5脊神经的单次紧结扎。该模型示出了神经性疼痛症状/体征的独特特征，诸如：模拟临床患者中观察到的症状/体征的机械性异常性疼痛、机械性和热性痛觉过敏以及自发性疼痛。该模型已经被用作评估靶向神经性疼痛的新颖化合物的效力的“金标准”模型。
在手术时称重为220-250g的8-9周龄成年雄性Sprague-Dawley大鼠购自CharlesRiver UK Ltd。将这些动物以4只的组圈养在以12小时光/暗循环的空调室中。食物和水随意可用。通过将它们留在升高的金属网上持续至少40min来允许它们适应于实验环境，持续三天。在手术前的3个连续日使用一系列分级的von Frey纤毛(von Frey hairs)检查基线缩足阈值(PWT)，并且在给药前，在手术后第6天至第8天和手术后第12天至第14天再次评估。每只大鼠用混合有氧气的5％异氟烷麻醉(2L/min)，随后肌内(i.m.)注射氯胺酮90mg/kg加赛拉嗪(xylazine)10mg/kg。将背部剃毛，并且用聚维酮-碘灭菌。将动物以俯卧位放置，并且在覆盖L4-L6水平的皮肤上制作旁内侧切口(para-medial incision)。小心地分离L5脊神经，并且用6/0丝缝合线紧结扎。然后，在完全止血后，将伤口逐层闭合。常规地给予单剂量的抗生素(阿莫西林，15mg/大鼠，i.p.)，以预防术后感染。将动物放置在温度控制的恢复室中直到完全清醒，然后返回至其居住笼。
将8周至12周龄的Chung模型大鼠圈养在具有随意可用的食物和水的以12小时光/暗循环的空调室中。使用异氟烷将大鼠致命地麻醉并且去头。将脊柱、胸腔和周围组织迅速地取出并且在冰冷(<4℃)含高蔗糖的人工脑脊液(aCSF)下用针别住，该含高蔗糖的人工脑脊液(aCSF)包含：127mM蔗糖、1.9mM KCl、1.2mM KH2PO4、0.24mM CaCl2、3.9mM MgCl2、26mMNaHCO3、10mM D-葡萄糖和0.5mM抗坏血酸。进行椎板切除术(laminectomy)，并且将脊髓和相关的根轻轻地解剖并且从脊柱和周围组织中梳理出。硬膜、软膜和前根随后用细镊子取出，并且将脊髓切成对半。小心确保脊髓的背根输入被保持。将切成对半的脊髓背根制品固定至组织切片器上，并且使用Leica VT1000s切片机在冷的(<4℃)高蔗糖aCSF中切割具有所附接的背根的脊髓切片(400μm至450μm厚)。
将切片转移至包含冰冷的aCSF的小烧杯中，该aCSF含有：127mM NaCl、1.9mM KCl、1.2mM KH2PO4、1.3mM MgCl2、2.4mM CaCl2、26mM NaHCO3和10mM D-葡萄糖，并且在温度控制的水浴中在20分钟时间段内迅速地升温至35℃±1℃，然后随后取出并且在电生理学记录之前保持在室温(22℃±2℃)。在aCSF中进行电生理学记录，该aCSF包含：127mM NaCl、1.9mM KCl、1.2mM KH2PO4、1.3mM MgCl2、2.4mM CaCl2、26mM NaHCO3和10mM D-葡萄糖。
使用Axopatch 1D和/或Multiclamp 700B放大器并且使用膜片钳技术的“盲(blind)”版本在34℃-35℃在脊髓切片的背角中从板层(Lamina)I或板层II神经元进行全细胞记录。
将膜片电极(Patch pipette)从在填充有细胞内溶液(140mM葡糖酸钾、10mM KCl、1mM EGTA-Na、10mM HEPES、4mM Na2ATP、0.3mM Na-GTP)时具有在3MΩ和8MΩ之间的电阻的薄壁硼硅酸盐玻璃中拉出。SEQ ID NO:2、3、4或5的肽(LAT7771、LAT7772、LAT7773或LAT7774)在组织浴中以5μM的浓度稀释。
在背根或背根进入区适当地放置同心双极刺激电极，以在记录的细胞中诱发突触后电位/电流(参见图1)。低频单次电击分别在电压钳和电流钳中输送(0.1ms-0.8ms脉冲宽度，2V-35V，0.16Hz-0.33Hz)以诱发兴奋性突触后电流(EPSC)和兴奋性突触后电位(EPSP)。基于恒定的延迟和几乎没有故障的上升时间的特征，EPSP/EPSC被确认为单突触的。
记录在示波器上监测，并且存储在数字音频带上，用于之后离线分析。此外，数据在运行pCLAMP 10数据采集软件(Axon Instruments)的PC上在2kHz-5kHz被低通滤波(1kHz针对电压钳数据)，在2kHz-10kHz被数字化并且存储。电生理学数据的分析使用Clampfit10软件进行。
进行本研究以评估SEQ ID NO:2、3、4或5的肽(LAT7771、LAT7772、LAT7773或LAT7774)对如上文概述制备的使用CCI大鼠的慢性神经收缩模型中脊髓背角神经元的影响。
实施例1：LAT7771对背角神经元的影响
(i)LAT7771对背角神经元的膜性质的影响
研究LAT7771(5μM)对脊髓切片中的11个背角神经元的影响，所述脊髓切片从神经性疼痛的Chung模型制备，在损伤部位的同侧记录。在这些神经元中，LAT7771在8个神经元中诱导小的膜去极化，范围在1.7mV和10mV之间，并且对另外3个背角神经元几乎没有影响。
所有细胞(n＝11)的数据示出，LAT7771诱导从-56.8±2.6mV的平均静息膜电位至-53.8±2.8mV的新的稳态静息电位的膜去极化，相当于2.9±1.2mV的膜电位的变化(n＝11，P<0.05，表1，图2，图3)。LAT7771诱导的响应总体上与神经元输入电阻的小变化相关。在存在LAT7771的情况下，神经元输入电阻从431.8±91.8MΩ的平均对照静息水平增加至447.6±119.4MΩ(n＝11，P＝0.671)，相当于15.8±36.1MΩ的神经元输入电阻的增加。图2和图3总结了LAT7771对背角神经元的膜性质的影响(也参见表1)。
进一步研究LAT7771对突触后膜性质的影响。虽然观察到膜电位的移动，但这些效果通常与神经元输入电阻的显著变化无关，VI关系最常见地揭示平行移动，没有明显的逆转电位(参见图4和图5)。这可能反映了产生电的离子交换器或泵的活性或者被激活的离子通道的组合，以有效地抵消电导的变化，例如同时激活和抑制两种离子电导。然而，在两个神经元中，在静息电位几乎不变化的情况下，观察到内向整流的强度的增强或增加(参见图5)。在另外四个神经元中，膜电位的变化与-55mV、-55mV、-45mV和-40mV的逆转电位相关，分别反映了氯化物电导或非选择性阳离子通道的激活。
(ii)LAT7771对背根传入介导的突触输入的影响
还测试了LAT7771对背根传入介导的突触输入的影响。在这里，LAT7771示出了对兴奋性突触后电位(EPSP)和抑制性突触后电位(IPSP)的一些显著影响。在四个神经元中，在存在LAT7771的情况下，以0.1Hz的频率背根诱发的EPSP降低。在这些神经元中的两个中，EPSP的抑制揭示或激活了IPSP，从而促进了对背角的抑制性突触传递，并且取代了兴奋性输入(参见图7和图8)。在一个神经元中，LAT7771的这种影响被LAT8881部分地模拟，LAT8881是PCT/AU2019/050020的人类生长激素衍生化合物，其已经被证明具有镇痛性质(参见图7)。在另外的神经元中，在不存在兴奋性输入的情况下，通过刺激背根诱发的IPSP在LAT7771中也被增强(参见图6)。这些对背根传入介导的输入的影响是在不存在对突触后细胞的显著影响的情况下观察到的，表明突触前的作用部位(参见图6和图7)。
表1.来自神经性疼痛的Chung模型的与LAT7771诱导的背角神经元响应相关的膜电位和输入电阻的变化的汇总数据。
Figure BDA0003431943610000571
Figure BDA0003431943610000572
Figure BDA0003431943610000573
Figure BDA0003431943610000574
实施例2：LAT7772对背角神经元的影响
(i)LAT7772对背角神经元的膜性质的影响
研究LAT7772(5μM)对脊髓切片中的5个背角神经元的影响，所述脊髓切片从神经性疼痛的Chung模型制备，在损伤部位的同侧记录。在这些神经元中，LAT7772总体上对膜电位几乎没有影响，在2个神经元中诱导小的膜去极化，在一个神经元中诱导相当大的膜去极化，相当于12.7mV，并且在剩余两个神经元中诱导膜超极化以及相关的输入电阻下降，相当于3.5mV和9.9mV。LAT7772诱导所有5个神经元的神经元输入电阻的降低。
所有细胞(n＝5)的数据示出，LAT7772诱导膜的小的变化，诱导从-59.5±2.7mV的平均静息膜电位至-58.7±4.8mV的新的稳态静息电位的去极化，相当于0.8±3.7mV的膜电位的变化(n＝5，P＝0.849，表2，图9，图10)。在存在LAT7772的情况下，LAT7772诱导的响应总体上与神经元输入电阻从321.4±100.1MΩ的平均对照静息水平至172.3±33.2MΩ的显著降低(n＝5，P＝0.142)相关，相当于149.1±81.7MΩ(对照的60.1±12.3％)的神经元输入电阻的下降。图9和图10总结了LAT7772对背角神经元的膜性质的影响(也参见表2)。
LAT7772在两个细胞中诱导了清楚的膜超极化和活性的抑制(参见图11和图12)。与LAT7772诱导的抑制相关的逆转电位在约-78mV和-55mV，分别是在钾离子和氯离子逆转电位之间和单独的氯离子处。LAT7772诱导的去极化在三个细胞中分别与-100mV、-60mV和-60mV的逆转电位相关。这些数据表明，LAT7772经由钾电导的阻断诱导去极化(在逆转电位预测为约-100mV的情况下)，而在约-60mV处逆转的那些表明氯化物选择性电导的参与。
(ii)LAT7772对背根传入介导的突触输入的影响
还测试了LAT7772对背根传入介导的突触输入的影响。LAT7772抑制所有测试神经元的背根诱发的兴奋性突触后电位(EPSP)(图11、图12和图13)。因为LAT7772效果通常与突触后输入电阻的降低相关；目前不能确定这些对背根传入介导的EPSP的影响是直接作用于突触前末梢还是反映突触后细胞变化的间接结果。
表2.来自神经性疼痛的Chung模型的与LAT7772诱导的背角神经元响应相关的膜电位和输入电阻的变化的汇总数据。
Figure BDA0003431943610000591
Figure BDA0003431943610000592
Figure BDA0003431943610000593
Figure BDA0003431943610000594
实施例3：LAT7773对背角神经元的影响
(i)LAT7773对背角神经元的膜性质的影响
研究LAT7773(5μM)对脊髓切片中的9个背角神经元的影响，所述脊髓切片从神经性疼痛的Chung模型制备，在损伤部位的同侧记录。在这些神经元中，LAT7773诱导除了1个神经元之外的所有神经元的膜去极化，范围在1.5mV和25.6mV之间，并在剩余的神经元中诱导7.6mV的膜超极化。LAT7773对输入电阻具有不同的影响，在4个神经元中诱导减小，并且在5个神经元中诱导增加。
所有细胞(n＝9)的数据示出，LAT7773诱导从-57.2±2.3mV的平均静息膜电位至-50.3±3.0mV的新的稳态静息电位的膜去极化，相当于6.9±3.0mV的膜电位的变化(n＝9，P<0.05，表3)。虽然化合物的影响是可变的，但LAT7773诱导的响应总体上与神经元输入电阻的小的增加相关。在存在LAT7773的情况下，神经元输入电阻从350.6±68.1MΩ的平均对照静息水平增加至373.5±103.6MΩ(n＝9，P＝0.625)，相当于22.9±45.1MΩ的神经元输入电阻的增加。图14和图15总结了LAT7773对背角神经元的膜性质的影响(也参见表3)。
我们仔细检查了那些观察到清楚的响应的细胞。LAT7773诱导的响应在7个神经元中与没有清楚的逆转电位相关，指示没有影响、电导的同时的抑制和激活或者离子交换器或泵的参与。在一个神经元中，LAT7773诱导兴奋，连同神经元输入电阻的增加和约-93mV的逆转电位，接近钾离子的逆转电位(图17)。这表明LAT7773在该细胞中诱导的兴奋是经由阻断一种或更多种钾离子电导来介导的。在另一个细胞中，在静息电位附近在LAT7773中几乎没有观察到输入电阻的变化，但观察到内向整流，因为超过比约-75mV更负的电位的IV关系斜率的降低被增强(图16)。通常，除了两个细胞之外，LAT7773诱导的突触后效应的离子机制尚不清楚。
(ii)LAT7773对背根传入介导的突触输入的影响
还测试了LAT7773对背根传入介导的突触输入的影响。LAT7773对突触输入具有类似的不同的影响。在三个神经元中，背根的电刺激(0.1Hz)诱发了在LAT7773中被抑制的EPSP(参见图16)。在两个另外的神经元中的EPSP和其中一个的IPSP在LAT7773中增强，而剩余两个神经元在存在化合物的情况下未示出变化(参见图17和图18)。
表3.来自神经性疼痛的Chung模型的与LAT7773诱导的背角神经元响应相关的膜电位和输入电阻的变化的汇总数据。
Figure BDA0003431943610000611
Figure BDA0003431943610000612
Figure BDA0003431943610000613
Figure BDA0003431943610000614
实施例4：LAT7774对背角神经元的影响
(i)LAT7774对背角神经元的膜性质的影响
研究LAT7774(5μM)对脊髓切片中的7个背角神经元的影响，所述脊髓切片从神经性疼痛的Chung模型制备，在损伤部位的同侧记录。在这些神经元中，LAT7774在2个神经元中诱导显著的膜超极化和活性的抑制，范围在9.0mV和25.2mV之间，在3个神经元中诱导显著的膜去极化，范围在5.4mV和25.1mV之间，并且对另外2个背角神经元几乎没有影响。
所有细胞(n＝9)的数据示出，LAT7774诱导从-61.0±3.1mV的平均静息膜电位至-59.8±3.6mV的新的稳态静息电位的中度膜去极化，相当于1.2±6.0mV的膜电位的变化(n＝7，P＝0.848，表4)。在存在LAT7774的情况下，LAT7774诱导的响应总体上与神经元输入电阻从283.2±36.6MΩ的平均对照静息水平至294.0±62.2MΩ的增加(n＝7，P＝0.907)相关，相当于10.8±88.1MΩ的神经元输入电阻的增加。图19和图20总结了LAT7774对背角神经元的膜性质的影响(也参见表4)。
我们仔细检查了那些观察到清楚的响应的细胞。在两个神经元中，LAT7774诱导了与神经元输入电阻的降低相关的清楚的膜超极化，在一个细胞中具有约-100mV的逆转电位，并且在另一个细胞中具有约-65mV的逆转电位，表明钾电导和氯化物电导分别被激活(参见图21和图22)。在另外三个神经元中，LAT7774诱导与神经元输入电阻的增加相关的膜去极化，并且逆转电位分别为约-80mV、-80mV和-85mV，在我们的记录条件下都接近钾离子的逆转电位(参见图23和图24)。这些数据表明LAT7774经由阻断一种或更多种静息钾电导来诱导去极化。此外，在一个细胞中，膜去极化也与内向整流的变化相关，这表明该化合物的部分作用可能是阻断或改变内向整流钾电导的电压敏感性(参见图23)。
(ii)LAT7774对背根传入介导的突触输入的影响
还测试了LAT7774对背根传入介导的突触输入的影响。LAT7774在4个神经元中对背根诱发的(0.1Hz)EPSP不具有影响，在2个神经元中诱导EPSP的轻微降低，并且在1个神经元中诱导增加的EPSP，驱动一些EPSP达到放电阈值(参见图22至图25)。
表4.来自神经性疼痛的Chung模型的与LAT7774诱导的背角神经元响应相关的膜电位和输入电阻的变化的汇总数据。
Figure BDA0003431943610000631
Figure BDA0003431943610000632
Figure BDA0003431943610000633
Figure BDA0003431943610000634
实施例5：催乳素对背角神经元的影响
(i)催乳素对背角神经元的膜性质的影响
研究催乳素(500nM)对脊髓切片中的3个背角神经元的影响，所述脊髓切片从神经性疼痛的Chung模型制备，在损伤部位的同侧记录。在这些神经元中，催乳素在2个神经元中诱导小的膜去极化，并且对另一个背角神经元几乎没有影响。
所有细胞(n＝3)的数据示出，催乳素诱导从-54.9±10.0mV的平均静息膜电位至-52.0±8.4mV的新的稳态静息电位的小的膜去极化，相当于2.8±2.0mV的膜电位的变化(n＝3，P＝0.291，表5)。在存在催乳素的情况下，催乳素诱导的响应总体上与神经元输入电阻从558.3±252.9MΩ的平均对照静息水平至637.3±301.1MΩ的增加(n＝3，P＝0.322)相关，相当于79.0±60.5MΩ的神经元输入电阻的增加。图25和图26总结了迄今为止催乳素对背角神经元的膜性质的影响(也参见表5)。
我们仔细检查了催乳素对这些细胞的影响。在两个神经元中，催乳素几乎没有影响。然而，在一个细胞中，注意到清楚的膜去极化，与神经元输入电阻的增加相关。根据VI关系，该催乳素诱导的去极化的逆转电位为约-90mV，在我们的记录条件下接近钾离子的逆转电位(参见图27)。这些数据表明催乳素通过抑制一种或更多种静息钾电导来诱导去极化。
(ii)催乳素对背根传入介导的突触输入的影响
只要有可能，还测试了催乳素对背根传入介导的突触输入的影响。催乳素在一个细胞中对通过背根刺激诱发的IPSP不具有影响(图28)。
表5.来自神经性疼痛的Chung模型的与催乳素诱导的背角神经元响应相关的膜电位和输入电阻的变化的汇总数据。
Figure BDA0003431943610000651
Figure BDA0003431943610000652
Figure BDA0003431943610000653
Figure BDA0003431943610000654
实施例6：比较口服施用和肌内施用LAT8881和LAT7771对神经性疼痛大鼠模型的缩足阈值的效力的体内研究
神经性疼痛的Chung模型被用于比较口服施用或肌内施用的LAT8881和LAT7771的体内效力。
脊神经结扎模型(Chung模型)由Kim和Chung(1992；Pain,50(3):355-63)首次报告，并且涉及L5脊神经的单次紧结扎。该模型示出了神经性疼痛症状/体征的独特特征，诸如：模拟临床患者中观察到的症状/体征的机械性异常性疼痛、机械性和热性痛觉过敏以及自发性疼痛。该模型已经被用作评估靶向神经性疼痛的新颖化合物的效力的“金标准”模型。
在手术时称重为220-250g的8-9周龄的成年雄性Sprague-Dawley大鼠用混合有氧气的3％异氟烷麻醉，随后肌内注射氯胺酮和赛拉嗪的混合物。将背部剃毛，并且用聚维酮-碘浸泡过的棉球灭菌。小心地分离L5脊神经，并且用6/0丝缝合线紧结扎，并且将伤口逐层闭合。常规地给予单剂量的抗生素(阿莫西林，100mg/kg，i.p.)，以预防术后感染。
将动物放置在升高的金属网上的单独的Perspex盒中持续至少40分钟。从力最小的细丝(1g)开始，将每根细丝垂直施加到爪子腹侧表面的中心，直到稍微弯曲持续6秒。如果动物在刺激时缩回或抬起其足，则随后使用具有紧接地低于所测试的力的von Frey纤毛。如果没有观察到响应，则测试具有紧接地更高的力的纤毛。诱导可靠响应(3次试验中2次为阳性)所需的最小量的力被记录为疼痛缩退阈值(PWT)的值。
PWT在手术之前三天每天评估一次，并且手术之后每周一次以便监测机械性异常性疼痛的发展。
所有药物测试均在手术之后第13天至第17天进行。所有药物给药都是由第二实验者“盲法地”进行。施用测试化合物，并且在药物或媒介物(5％DMSO)施用之前和施用后2小时评估PWT。
LAT7771和LAT8881改善了神经性疼痛的结果，如神经性疼痛的Chung模型中机械性异常性疼痛的逆转指示的。PWT在手术之前三天每天评估，并且在手术之后每周评估一次以便监测机械性异常性疼痛的发展。在药物或媒介物施用之前和施用后2小时评估PWT。LAT8881，以10mg/kg，通过口服或肌内途径施用，在药物施用之后两小时迅速地逆转机械性异常性疼痛。类似地，LAT7771，以10mg/kg，通过口服或肌内途径施用，显著增加Chung模型大鼠的PWT。比较经由两种施用途径(口服(PO)或肌内(IM))的LAT8881和LAT7771对损伤同侧和对侧的Chung模型大鼠的PWT的影响在图31中表示。
讨论
上文实施例示出，LAT7771、LAT7772、LAT7773和LAT7774(SEQ ID NO:2、3、4和5)能够治疗和预防疼痛。与催乳素相比的LAT7771、LAT7772、LAT7773和LAT7774对背角神经元的影响的总结在图29和图30中示出。
LAT7771主要诱导背角神经元的膜去极化，以及相关的神经元输入电阻的小的增加。LAT7771的最有趣的特征中的一个涉及其对背根传入介导的突触输入的影响。LAT7771始终降低背根诱发的EPSP，并且在两个神经元中促进抑制性突触传递。这种化合物的性质的特征类似于PCT/AU2019/050020的人类生长激素衍生的化合物LAT8881，LAT8881已经被证明具有镇痛性质，LAT7771对突触传递的影响表明产生镇痛的显著潜力。
LAT7772诱导膜去极化和超极化两者，大多数的响应与神经元输入电阻的降低相关。该化合物对背根诱发的突触输入的主要影响也是对EPSP的抑制作用。然而，鉴于该化合物对神经元输入电阻的显著影响，尚不清楚这些对背根传入介导的兴奋性输入的影响是由突触后细胞变化直接还是间接引起的。
LAT7773主要诱导背角神经元的膜去极化，以及相关的神经元输入电阻的增加。类似地，背根传入介导的兴奋性突触输入在一些神经元中被抑制，而在另一些神经元中它们被清楚地增强，后者表明有促镇痛的趋势。
LAT7774的影响在诱导两种膜去极化方面是可变的。该化合物对背根传入介导的突触输入的影响更为多变，既促进也抑制这些输入。
催乳素主要诱导背角神经元的膜去极化，以及相关的神经元输入电阻的增加，这与钾电导的阻断一致。
LAT7771在体内示出了与LAT8881相当的镇痛性质。
表6：SEQ ID NO和对应的氨基酸序列
Figure BDA0003431943610000681
Figure BDA0003431943610000691

Claims (62)

1.一种治疗或预防受试者的神经性疼痛的方法，所述方法包括向受试者施用治疗有效量的催乳素或其功能变体，其中所述功能变体包含式(I)的肽或其药学上可接受的盐：
R1-C-R-I-X1-X2-X3-X4-N-C-R2(I)(SEQ ID NO:1)
其中
X1是选自异亮氨酸(I)和缬氨酸(V)的氨基酸残基；
X2是选自组氨酸(H)和酪氨酸(Y)的氨基酸残基；
X3是选自天冬氨酸(D)和天冬酰胺(N)的氨基酸残基；
X4是选自天冬酰胺(N)和丝氨酸(S)的氨基酸残基；
R1选自由以下组成的组：YLKLLK、LKLLK、KLLK、LLK、LL、K，或者R1不存在；并且
R2是G(甘氨酸)，或者R2不存在。
2.根据权利要求1所述的方法，其中所述功能变体选自由以下组成的组：CRIIHNNNC(SEQ ID NO:2)、CRIIHNNNCG(SEQ ID NO:3)、CRIVYDSNC(SEQ ID NO:4)和CRIVYDSNCG(SEQID NO:5)。
3.根据权利要求2所述的方法，其中所述功能变体是CRIIHNNNC(SEQ ID NO:2)。
4.根据权利要求2所述的方法，其中所述功能变体是CRIIHNNNCG(SEQ ID NO:3)。
5.根据权利要求2所述的方法，其中所述功能变体是CRIVYDSNC(SEQ ID NO:4)。
6.根据权利要求2所述的方法，其中所述功能变体是CRIVYDSNCG(SEQ ID NO:5)。
7.根据权利要求1至6中任一项所述的方法，其中所述治疗有效量减轻所述受试者的神经性疼痛。
8.根据权利要求1至7中任一项所述的方法，其中所述受试者是人类。
9.根据权利要求1至8中任一项所述的方法，其中所述神经性疼痛与选自由以下组成的组的状况相关：糖尿病性神经病；带状疱疹(Herpes Zoster)(带状疱疹(shingles))相关神经病；纤维肌痛；多发性硬化、中风、脊髓损伤；慢性手术后疼痛、幻肢痛、帕金森病；尿毒症相关神经病；淀粉样变性神经病；HIV感觉神经病；遗传性运动和感觉神经病(HMSN)；遗传性感觉神经病(HSN)；遗传性感觉和自主神经病；伴有溃疡残毁的遗传性神经病；呋喃妥因神经病；腊肠样肿胀神经病；营养缺乏引起的神经病、肾衰竭引起的神经病、三叉神经神经性疼痛、非典型牙痛(幻牙痛)、灼口综合征、复杂的区域性疼痛综合征、重复性劳损、药物诱发的外周神经病以及与感染相关的外周神经病。
10.根据权利要求1至9中任一项所述的方法，所述方法还包括向所述受试者施用治疗有效量的能够减轻所述受试者的疼痛的第二剂，其中所述第二剂不是根据权利要求1至10中任一项所述的催乳素或其功能变体。
11.根据权利要求10所述的方法，其中所述第二剂能够减轻所述受试者的神经性疼痛。
12.根据权利要求10所述的方法，其中所述第二剂能够减轻所述受试者的伤害性疼痛。
13.一种药物组合物，所述药物组合物包含催乳素或其功能变体，用于在治疗或预防受试者的神经性疼痛中使用，其中所述功能变体包含式(I)的肽：
R1-C-R-I-X1-X2-X3-X4-N-C-R2(I)(SEQ ID NO:1)
其中
X1是选自异亮氨酸(I)和缬氨酸(V)的氨基酸残基；
X2是选自组氨酸(H)和酪氨酸(Y)的氨基酸残基；
X3是选自天冬氨酸(D)和天冬酰胺(N)的氨基酸残基；
X4是选自天冬酰胺(N)和丝氨酸(S)的氨基酸残基；
R1选自由以下组成的组：YLKLLK、LKLLK、KLLK、LLK、LL、K，或者R1不存在；并且
R2是G(甘氨酸)，或者R2不存在。
14.根据权利要求13所述的用于使用的组合物，其中所述功能变体选自由以下组成的组：CRIIHNNNC(SEQ ID NO:2)、CRIIHNNNCG(SEQ ID NO:3)、CRIVYDSNC(SEQ ID NO:4)和CRIVYDSNCG(SEQ ID NO:5)。
15.根据权利要求14所述的用于使用的组合物，其中所述功能变体是CRIIHNNNC(SEQID NO:2)。
16.根据权利要求14所述的用于使用的组合物，其中所述功能变体是CRIIHNNNCG(SEQID NO:3)。
17.根据权利要求14所述的用于使用的组合物，其中所述功能变体是CRIVYDSNC(SEQID NO:4)。
18.根据权利要求14所述的用于使用的组合物，其中所述功能变体是CRIVYDSNCG(SEQID NO:5)。
19.根据权利要求13至18中任一项所述的用于使用的组合物，其中所述催乳素或其功能变体以治疗有效量存在，当施用至受试者时，所述治疗有效量在不存在对伤害性疼痛的治疗有效镇痛作用的情况下减轻所述受试者的神经性疼痛。
20.根据权利要求13至19中任一项所述的用于使用的组合物，其中所述受试者是人类。
21.根据权利要求13至19中任一项所述的用于使用的组合物，其中所述神经性疼痛与选自由以下组成的组的状况相关：糖尿病性神经病；带状疱疹(Herpes Zoster)(带状疱疹(shingles))相关神经病；纤维肌痛；多发性硬化、中风、脊髓损伤；慢性手术后疼痛、幻肢痛、帕金森病；尿毒症相关神经病；淀粉样变性神经病；HIV感觉神经病；遗传性运动和感觉神经病(HMSN)；遗传性感觉神经病(HSN)；遗传性感觉和自主神经病；伴有溃疡残毁的遗传性神经病；呋喃妥因神经病；腊肠样肿胀神经病；营养缺乏引起的神经病、肾衰竭引起的神经病、三叉神经神经性疼痛、非典型牙痛(幻牙痛)、灼口综合征、复杂的区域性疼痛综合征、重复性劳损、药物诱发的外周神经病以及与感染相关的外周神经病。
22.根据权利要求13至21中任一项所述的用于使用的组合物，所述组合物还包含能够减轻所述受试者的疼痛的第二剂，其中所述第二剂不是催乳素或其功能变体。
23.根据权利要求22所述的用于使用的组合物，其中所述第二剂能够减轻所述受试者的神经性疼痛。
24.根据权利要求22所述的用于使用的组合物，其中所述第二剂能够减轻所述受试者的伤害性疼痛。
25.催乳素或其功能变体在制造用于治疗或预防受试者的神经性疼痛的药物中的用途，其中所述功能变体包含式(I)的肽：
R1-C-R-I-X1-X2-X3-X4-N-C-R2(I)(SEQ ID NO:1)
其中
X1是选自异亮氨酸(I)和缬氨酸(V)的氨基酸残基；
X2是选自组氨酸(H)和酪氨酸(Y)的氨基酸残基；
X3是选自天冬氨酸(D)和天冬酰胺(N)的氨基酸残基；
X4是选自天冬酰胺(N)和丝氨酸(S)的氨基酸残基；
R1选自由以下组成的组：YLKLLK、LKLLK、KLLK、LLK、LL、K，或者R1不存在；并且
R2是G(甘氨酸)，或者R2不存在。
26.根据权利要求25所述的用途，其中所述功能变体选自由以下组成的组：CRIIHNNNC(SEQ ID NO:2)、CRIIHNNNCG(SEQ ID NO:3)、CRIVYDSNC(SEQ ID NO:4)和CRIVYDSNCG(SEQID NO:5)。
27.根据权利要求26所述的用途，其中所述功能变体是CRIIHNNNC(SEQ ID NO:2)。
28.根据权利要求26所述的用途，其中所述功能变体是CRIIHNNNCG(SEQ ID NO:3)。
29.根据权利要求26所述的用途，其中所述功能变体是CRIVYDSNC(SEQ ID NO:4)。
30.根据权利要求26所述的用途，其中所述功能变体是CRIVYDSNCG(SEQ ID NO:5)。
31.根据权利要求25至30中任一项所述的用途，其中所述催乳素或其功能变体被配制用于以治疗有效量施用至所述受试者，所述治疗有效量在不存在对伤害性疼痛的治疗有效镇痛作用的情况下减轻所述受试者的神经性疼痛。
32.根据权利要求25至31中任一项所述的用途，其中所述受试者是人类。
33.根据权利要求25至32中任一项所述的用途，其中所述神经性疼痛与选自由以下组成的组的状况相关：糖尿病性神经病；带状疱疹(Herpes Zoster)(带状疱疹(shingles))相关神经病；纤维肌痛；多发性硬化、中风、脊髓损伤；慢性手术后疼痛、幻肢痛、帕金森病；尿毒症相关神经病；淀粉样变性神经病；HIV感觉神经病；遗传性运动和感觉神经病(HMSN)；遗传性感觉神经病(HSN)；遗传性感觉和自主神经病；伴有溃疡残毁的遗传性神经病；呋喃妥因神经病；腊肠样肿胀神经病；营养缺乏引起的神经病、肾衰竭引起的神经病、三叉神经神经性疼痛、非典型牙痛(幻牙痛)、灼口综合征、复杂的区域性疼痛综合征、重复性劳损、药物诱发的外周神经病以及与感染相关的外周神经病。
34.根据权利要求25至33中任一项所述的用途，其中所述催乳素或其功能变体被配制用于与能够减轻所述受试者的疼痛的第二剂一起顺序地或组合地施用，其中所述第二剂不是催乳素或其功能变体。
35.根据权利要求34所述的用途，其中所述第二剂能够减轻所述受试者的神经性疼痛。
36.根据权利要求35所述的用途，其中所述第二剂能够减轻所述受试者的伤害性疼痛。
37.一种组合物，所述组合物包含治疗有效量的催乳素衍生肽，所述催乳素衍生肽由以下组成：氨基酸序列CRIIHNNNC(SEQ ID NO:2)或氨基酸序列CRIIHNNNCG(SEQ ID NO:3)或氨基酸序列CRIVYDSNC(SEQ ID NO:4)或氨基酸序列CRIVYDSNCG(SEQ ID NO:5)。
38.根据权利要求37所述的组合物，所述组合物还包含药学上可接受的载体、赋形剂或稀释剂。
39.根据权利要求37或权利要求38所述的组合物，所述组合物被配制用于口服施用。
40.一种组合物，所述组合物包含SEQ ID NO:2或SEQ ID NO:3或SEQ ID NO:4或SEQ IDNO:5的肽，或前述任何一种的药学上可接受的盐，用作药物。
41.一种药物组合物，所述药物组合物包含：(i)催乳素或其功能片段，其中所述功能片段包含式(I)的肽：
R1-C-R-I-X1-X2-X3-X4-N-C-R2(I)(SEQ ID NO:1)
其中
X1是选自异亮氨酸(I)和缬氨酸(V)的氨基酸残基；
X2是选自组氨酸(H)和酪氨酸(Y)的氨基酸残基；
X3是选自天冬氨酸(D)和天冬酰胺(N)的氨基酸残基；
X4是选自天冬酰胺(N)和丝氨酸(S)的氨基酸残基；
R1选自由以下组成的组：YLKLLK、LKLLK、KLLK、LLK、LL、K，或者R1不存在；并且
R2是G(甘氨酸)，或者R2不存在，以及
(ii)能够减轻受试者的疼痛的第二剂，其中所述第二剂不是催乳素或其功能变体。
42.根据权利要求41所述的组合物，其中所述功能变体选自由以下组成的组：CRIIHNNNC(SEQ ID NO:2)、CRIIHNNNCG(SEQ ID NO:3)、CRIVYDSNC(SEQ ID NO:4)和CRIVYDSNCG(SEQ ID NO:5)。
43.根据权利要求42所述的组合物，其中所述功能变体是CRIIHNNNC(SEQ ID NO:2)。
44.根据权利要求42所述的组合物，其中所述功能变体是CRIIHNNNCG(SEQ ID NO:3)。
45.根据权利要求42所述的组合物，其中所述功能变体是CRIVYDSNC(SEQ ID NO:4)。
46.根据权利要求42所述的组合物，其中所述功能变体是CRIVYDSNCG(SEQ ID NO:5)。
47.根据权利要求41至46中任一项所述的组合物，其中所述第二剂能够减轻所述受试者的神经性疼痛。
48.根据权利要求41至46中任一项所述的组合物，其中所述第二剂能够减轻所述受试者的伤害性疼痛。
49.一种镇痛组合物，所述镇痛组合物包含催乳素或其功能变体，其中所述功能变体包含式(I)的肽：
R1-C-R-I-X1-X2-X3-X4-N-C-R2(I)(SEQ ID NO:1)
其中
X1是选自异亮氨酸(I)和缬氨酸(V)的氨基酸残基；
X2是选自组氨酸(H)和酪氨酸(Y)的氨基酸残基；
X3是选自天冬氨酸(D)和天冬酰胺(N)的氨基酸残基；
X4是选自天冬酰胺(N)和丝氨酸(S)的氨基酸残基；
R1选自由以下组成的组：YLKLLK、LKLLK、KLLK、LLK、LL、K，或者R1不存在；并且
R2是G(甘氨酸)，或者R2不存在。
50.根据权利要求49所述的组合物，其中所述功能变体选自由以下组成的组：CRIIHNNNC(SEQ ID NO:2)、CRIIHNNNCG(SEQ ID NO:3)、CRIVYDSNC(SEQ ID NO:4)和CRIVYDSNCG(SEQ ID NO:5)。
51.根据权利要求50所述的组合物，其中所述功能变体是CRIIHNNNC(SEQ ID NO:2)。
52.根据权利要求50所述的组合物，其中所述功能变体是CRIIHNNNCG(SEQ ID NO:3)。
53.根据权利要求50所述的组合物，其中所述功能变体是CRIVYDSNC(SEQ ID NO:4)。
54.根据权利要求50所述的组合物，其中所述功能变体是CRIVYDSNCG(SEQ ID NO:5)。
55.根据权利要求49至54中任一项所述的组合物，所述组合物还包含能够减轻所述受试者的疼痛的第二剂，其中所述第二剂不是根据权利要求1至54中任一项所述的催乳素或其功能变体。
56.根据权利要求55所述的组合物，其中所述第二剂能够减轻所述受试者的神经性疼痛。
57.根据权利要求55所述的组合物，其中所述第二剂能够减轻所述受试者的伤害性疼痛。
58.一种镇痛组合物，所述镇痛组合物包含治疗有效量的催乳素或其功能变体，其中所述功能变体由以下组成：氨基酸序列CRIIHNNNC(SEQ ID NO:2)或氨基酸序列CRIIHNNNCG(SEQ ID NO:3)或氨基酸序列CRIVYDSNC(SEQ ID NO:4)或氨基酸序列CRIVYDSNCG(SEQ IDNO:5)。
59.根据权利要求58所述的组合物，所述组合物还包含药学上可接受的载体、赋形剂或稀释剂。
60.根据权利要求58或权利要求59所述的组合物，所述组合物被配制用于口服施用。
61.一种镇痛组合物，所述镇痛组合物包含选自由SEQ ID NO:2至5中任一项组成的组的肽或其药学上可接受的盐，用作药物。
62.一种药物组合物，所述药物组合物包含催乳素或其功能变体，其中所述功能变体包含式(I)的肽：
R1-C-R-I-X1-X2-X3-X4-N-C-R2(I)(SEQ ID NO:1)
其中
X1是选自异亮氨酸(I)和缬氨酸(V)的氨基酸残基；
X2是选自组氨酸(H)和酪氨酸(Y)的氨基酸残基；
X3是选自天冬氨酸(D)和天冬酰胺(N)的氨基酸残基；
X4是选自天冬酰胺(N)和丝氨酸(S)的氨基酸残基；
R1选自由以下组成的组：YLKLLK、LKLLK、KLLK、LLK、LL、K，或者R1不存在；并且
R2是G(甘氨酸)，或者R2不存在。
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