CN114200066A

CN114200066A - 一种安立生坦有关物质分离检测方法

Info

Publication number: CN114200066A
Application number: CN202111546296.3A
Authority: CN
Inventors: 徐成; 贺涵; 邢珍珍; 赵亚男
Original assignee: NANJING ZEHENG PHARMACEUTICAL SCIENCE & TECHNOLOGY CO LTD
Current assignee: NANJING ZEHENG PHARMACEUTICAL SCIENCE & TECHNOLOGY CO LTD
Priority date: 2021-12-16
Filing date: 2021-12-16
Publication date: 2022-03-18

Abstract

本发明公开了一种HPLC法检测安立生坦原料有关物质的方法。其中，所述的杂质为安立生坦原料合成工艺中可能含有的中间体及降解杂质。所述检测方法包括以下步骤：（1）供试品溶液的制备；（2）对照溶液的制备；（3）色谱条件；其中色谱条件中流动相A为磷酸氢二钠缓冲溶液；流动相B为乙腈；检测波长220nm；柱温40℃；流速：0.9mL/min；色谱柱：C₁₈；本发明可以有效对降解杂质与已知杂质进行分离检测，且专属性强、灵敏度高，可以有效提高安立生坦原料质量标准体系。

Description

一种安立生坦有关物质分离检测方法

技术领域

本发明属于药物分析技术领域，具体而言，涉及一种安立生坦原料有关物质的检测方法。

背景技术

安立生坦(ambrisentan)，其分子式为C₂₂H₂₂N₂O₄，分子量为378.42。

安立生坦是一种选择性的内皮素ETA受体阻滞剂，可以强效抑制内皮抑制导致的血管收缩，口服用于治疗肺动脉高血压，改善运动能力，延迟恶化。因此目前市面上均以片剂形式出现，包括普通片剂和缓释片剂。

目前国内外尚无药典收载安立生坦原料及其制剂的相关标准，对安立生坦特有杂质也无报道。在安立生坦原料合成过程中可能生成的杂质并无方法记载。

除了原料合成过程中可能出现的杂质，安立生坦还有降解杂质生成，所述的降解反应可为本领域常规的降解反应，较佳的为酸和高温降解反应。

本发明所述安立生坦原料中的有关物质包括：起始物料4，6-2-甲基-二甲基-磺酰嘧啶、S-2(起始物料)：(s)-1-(4-硝基苯基)乙胺、S-3(中间体1)：3,3-二苯基-2,3-环氧丙酸甲酯、S-4(中间体2)：2-羧基-3-甲氧基-3,3-二苯基丙酸甲酯、S-苯乙胺盐(中间体3)、S-1(工艺杂质)：2-羧基-3-甲氧基-3,3-二苯基丙酸和杂质DP1(降解杂质)。

在现有的已公开的文献和专利中，中国专利申请CN104515846A和CN104359993A公开了一种安立生坦原料及制剂的有关物质检测方法，但都仅对其中部分杂质有方法记载，杂质研究尚不完全。安立生坦原料的中间体，S-苯乙胺并无检测方法。

有关物质研究是药品质量研究中关键性的项目之一，其不仅是反应药品纯度的直接指标，而且有重要的安全意义。

目前，对S-苯乙胺尚无有效的检测方法，因此，需要一个新的检测方法，以有效的分离和检测S-苯乙胺。本发明所提供的检测方法可对上述6种杂质中的一种或多种进行有效检测。

发明内容

本发明的目的在于提供了一种安立生坦原料有关物质检测方法，可以准确检测并分析安立生坦原料中的工艺杂质和降解杂质，为严格控制安立生坦的质量提供了研究基础。

本方法所述的色谱柱为十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，较佳的为Waters MSC18(4.6×150mm 5μm)；所述的洗脱的的流动相A为磷酸氢二钠缓冲液(取十二水合磷酸氢二钠7.1557g，加水溶解并稀释至1000ml，加入三乙胺0.1ml，摇匀用磷酸调PH至6.5±0.1。)，所述的洗脱的流动相B为乙腈，梯度洗脱。

所述的洗脱梯度的参数如下：0min→5min，A:B＝80:20，5min→13min，A:B＝(80:20)→(68:32)，13min→28min，A:B＝(68:32)→(35:65)，35min→36min，A:B＝(35:65)→(80:20)，36min→45min，A:B＝(80:20)→(80:20)；

在所述的检测方法中，所述的待测物可采用本领域常规的方法进样，较佳地以待测物的磷酸二氢钾缓冲液：乙腈溶液形式进样。

所述的磷酸二氢钾缓冲液：乙腈的体积比为2:8。

所述的磷酸二氢钾缓冲液：乙腈为空白溶剂。

在所述的检测方法中，所述的磷酸二氢钾缓冲液，配制方法为取无水磷酸二氢钾约2.72g，加水溶解并稀释至1000ml。

所述的待测物的磷酸二氢钾缓冲液：乙腈＝2:8溶液的进样量可为本领域常规的进样量，所述的进样量为20～50μl，更佳地为20μl。

在所述的检测方法中，所述的流动相A的pH值可为6.4～6.6，较佳的地为6.45～6.55。

所述的检测方法中，检测波长：220nm。

所述的检测方法中，流速0.9ml/min。

所述的检测方法中，供试品溶液的配制方法包括如下步骤。取样品12.5mg加乙腈10ml，超声溶解，再用磷酸缓冲盐溶液稀释至50ml，用0.45um滤膜过滤即得。

所述的检测方法中，对照溶液的配制方法包括如下步骤：从供试品溶液中精密量取1ml置100ml容量瓶中，加磷酸盐缓冲液：乙腈＝20：80的溶液稀释定容，作对照溶液。

所述的检测方法中，取对照溶液20μl，注入液相色谱仪，调节灵敏度，使主成分色谱峰的峰高约为满量程的20％。

附图说明

图1为安立生坦结构。

图2为安立生坦杂质S-1结构。

图3为安立生坦杂质S-2结构。

图4为安立生坦杂质S-3结构。

图5为安立生坦杂质S-4结构。

图6为安立生坦杂质DP1结构。

图7为安立生坦杂质S-苯乙胺结构。

图8为系统适用性溶液的色谱图。

具体实施方式

本发明公开了一种安立生坦原料有关物质的检测方法。本领域技术人员可以借鉴本文内容，适当改进工艺参数实现。特别需要指出的是，所有类似的替换和改动对本领城技术人员来说是显而易见的，它们都被视为包括在本发明。本发明所述检测方法已经通过较佳实施例进行了描述，相关人员明显能在不脱离本发明内容、精神和范围内对本文所述的方法和应用进行改动或适当变更与组合，来实现和应用本发明技术。

依照本发明所述检测方法，其主要针对已知的有关物质S-1、S-2、S-3、S-4、DP1、S-苯乙胺的检测，但对于未知的杂质，本发明所述检测方法也可先假设末知杂质与安立生坦的响应值一致，即相对校正因子为1.0，然后进行验证试验，由验证结果反推假设为真，从而检测出末知杂质的含量。

本发明所述检测方法在实施方式中采用的色谱仪为岛津高效液相色谱仪，色谱柱为Waters MS C18(4.6×150mm 5μm)。

下面结合实施例，进一步阐述本发明。

实施例1:本发明所述检测方法

仪器:岛津高效液相色谱仪

色谱柱:Waters MS C18(4.6×150mm 5μm)。

流动相A:磷酸氢二钠缓冲溶液

流动相B:乙腈

检测波长:220nm

流速:0.9ml/min

进样量:20μl

柱温:40℃

洗脱程序见表1:

表1洗脱程序

时间(分钟)	流动相A％	流动相B％
			0	80	20
5	80	20
			13	68	32
28	35	65
			35	35	65
36	80	20
			45	80	20

取本品适量精密称定，加磷酸二氢钾缓冲液(无水磷酸二氢钾约2.72g，加水溶解并稀释至1000ml)：乙腈＝2:8溶解并稀释制成每1ml约含0.25mg的溶液。

对照溶液：取供试品溶液1.0ml子100ml量瓶中，用稀释溶液稀释至刻度

按照上述色谱条件分别对供试品溶液和对照溶波进行HPLC检测，然后以加校正因子的主成分自身对照法计算公式有关物质的含量。

有关物质的含量＝F*(A_供/A_对)*1％。

其中，F为有关物质的相对校正因子。A_供为供试品溶液有关物质峰面积，A_对为对照溶液主峰峰面积，所述相对校正因子为主成份线性回归方程的斜率和有关物质的线性回归方程的斜率的比值。

各有关物质相对保留时间以及相对校正因子见表2

化合物	相对保留时间	相对校正因子	控制限度％
				S-苯乙胺	0.14	0.80	0.10

不同保留时间出峰位置对应的样品名称见表3

空白溶液/稀释溶液：磷酸二氢钾缓冲液：无水磷酸二氢钾约2.72g，加水溶解并稀释至1000ml)：乙腈＝2:8。

系统适用性溶液：取安立生坦对照品及S-苯乙胺适量，稀释液溶解并稀释制成每1ml中约含0.25mg的安立生坦和0.01mg的DP1的混合溶液。

系统适用性结果见表4

系统适用性	1	2	3	4	5	6	平均值	RSD(％)
									分离度	50.26	50.39	50.30	50.30	50.23	50.31	50.3	0.11

专属性试验结果见表5

本品在酸、碱条件下降解幅度较大，在氧化、加热和光照条件下基本稳定，未见明显降解。在上述降解条件下，主峰的峰纯度因子大于0.999，物料平衡在101.2％-107.7％之间，物料平衡。可见该色谱方法能检测本品的有关物质及降解产物。

杂质S-苯乙胺线性结果见表6

S-苯乙胺线性结果

安立生坦线性结果见表7

安立生坦线性结果

杂质S-苯乙胺回收率结果见表8

S-苯乙胺回收率结果(按外标法计算)

S-苯乙胺回收率结果(按自身对照法加校正因子计算)

以上结果表明外标法和自身对照加校正因子法计算回收率都在95％～105％的范围内，说明可采用主成分自身对照加校正因子法计算S-苯乙胺的含量。

Claims

1.一种安立生坦原料杂质的检测方法，该杂质为安立生坦原料合成过程中产生的中间体：(S)-(-)-1-苯乙胺，其特征在于，所述的检测方法是高效液相色谱的方法，检测待测物中的杂质，其中所述的杂质除了该中间体，还可检测其余工艺杂质及降解杂质。

2.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于，所述的色谱柱填料为十八烷基硅烷键合硅胶，流动相A为磷酸氢二钠缓冲溶液（取十二水合磷酸氢二钠7.1557g，加水溶解并稀释至1000ml，加入三乙胺0.1ml，摇匀用磷酸调pH至6.5±0.1），流动相B为乙腈，检测波长为220nm，梯度洗脱。

3.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于，所述的十八烷基硅烷键合硅胶填料为5μm，最佳为Waters MS C18。

4.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于，流动相A和流动相B的初始比例为80:20，梯度为：0min→5min，A:B=80:20，5min→13min，A:B=（80:20）→（68:32），13min→28min，A:B=（68:32）→（35:65），35min→36min ，A:B=（35:65）→（80:20），36min→45min，A:B=（80:20）→（80:20）。