CN114146095A - 用于组织损伤修复的组合物及其制备方法和用途 - Google Patents

Abstract

本申请提供了用于组织损伤修复的组合物，它包含富含血小板的血浆以及降低转化生长因子β(TGFβ)活性的物质。本申请还提供了上述组合物的制备方法以及其在制备用于促进组织修复和/或再生、或者用于减少损伤组织纤维化的药物中的用途。

Description

用于组织损伤修复的组合物及其制备方法和用途

技术领域

本申请属于生物医药技术领域，具体地，本申请涉及一种用于组织损伤修复的组合物、其制备方法以及所述组合物在促进组织修复和/或再生、或者用于减少损伤组织纤维化中的用途。

背景技术

组织损伤、特别是肌肉损伤在运动医学中非常普遍，但目前缺乏有效的改善组织愈合的手段，主要原因之一在于损伤部位的纤维化。组织损伤修复、特别是肌肉损伤修复无论对于临床工作者还是基础研究工作者来说，都是长期面临的一项挑战。

含血小板血浆(platelet rich plasma,PRP)是一种正在研究用于软组织愈合的自体全血来源的生物制剂/生物材料，其中含有大量的血小板，一般为外周血的3倍以上。含血小板血浆被活化后能释放多种细胞因子，如血管内皮生长因子(VEGF)、胰岛素样生长因子(IGF)、成纤维细胞生长因子(FGF)等，可以促进细胞增殖、分化、组织修复等。然而，PRP中包含的转化生长因子TGFβ1能够促进组织纤维化，同时还可以抑制肌源性分化、成肌细胞融合和多种肌肉特异性蛋白表达，不利于骨骼肌损伤修复。

发明内容

第一方面，本申请提供了一种用于组织损伤修复的组合物，其包含富含血小板的血浆以及降低转化生长因子β(TGFβ)活性的物质。

在一些实施方案中，上述降低TGFβ活性的物质能够阻断或中和TGFβ的作用，在优选的实施方案中，所述TGFβ为TGFβ1。

在优选的实施方案中，上述所述降低TGFβ活性的物质是TGFβ中和抗体。在具体的实施方案中，所述TGFβ中和抗体是TGFβ1中和抗体。

在一些实施方案中，上述富含血小板的血浆是通过分离全血得到的血小板浓缩物。

在一些实施方案中，第一方面所述的组合物还包含药学上可接受的载体。

在一些实施方案中，上述富含血小板的血浆以及降低转化生长因子β活性的物质与药学上可接受的载体一起被配制成药学上可接受的剂型。在优选的实施方案中，所述剂型为注射剂或灌注剂。

第二方面，本申请提供了制备用于组织损伤修复的组合物的方法，其包括：

(1)分离静脉全血，得到富含血小板的血浆；

(2)在步骤(1)的富含血小板的血浆中加入降低TGFβ活性的物质得到混合物；以及任选地，

(3)在步骤(2)得到的混合物中加入药学上可接受的载体，配制成药学上可接受的剂型，例如注射剂或灌注剂等。

第三方面，本申请提供了第一方面所述的组合物在制备用于促进组织修复和/或再生、或者用于减少损伤组织纤维化的药物中的用途。

在一些实施方案中，所述组织选自肌肉、肌腱、韧带、关节囊、滑膜囊、神经、血管、皮肤和皮下组织。在优选的实施方案中，所述组织为肌肉。在更选优的实施方案中，所述组织为骨骼肌。

在一些实施方案中，所述药物经局部给药，例如通过注射或灌注施用于损伤部位。

在其他方面，本申请提供了一种促进组织修复和/或再生、或者减少损伤组织纤维化的方法，该方法通过给予个体治疗有效量的第一方面所述的组合物来促进组织修复和/或再生、或者减少损伤组织的纤维化。

附图说明

图1显示了在肌肉损伤模型中，不同的处理对损伤部位的修复结果，其中图1的左列为给予PBS的对照组；中间列为单独给予PRP组；以及右列为同时给予PRP和TGFβ1中和抗体组。

图2显示了对伤口面积进行统计分析的结果。

具体实施方式

本申请提供了一种组合物，其包含富含血小板的血浆以及降低转化生长因子β(TGFβ)活性的物质。发明人通过体内实验发现上述组合物给药后可显著促进损伤组织例如损伤的骨骼肌的修复或再生，有效地降低损伤部位的纤维化，对组织损伤特别是骨骼肌损伤具有良好的治疗效果。

在一些实施方案中，富含血小板的血浆获自欲使用本申请的组合物来治疗组织损伤的个体的血液。也就是说，富含血小板的血浆是自体来源的。

在一些实施方案中，降低TGFβ活性的物质为TGFβ1中和抗体，能够抑制骨骼肌损伤修复过程中的纤维化。

在一些实施方案中，本申请的组合物还包含药学上可接受的载体。本申请所述的“药学上可接受的载体”指不干扰活性成分的生物活性有效性的载体。本申请的药学上可接受的载体可以为固体或液体，包括药学上可接受的赋形剂、缓冲剂、乳化剂、稳定剂、防腐剂、稀释剂、封装剂、填充剂等。例如，药学上可接受的缓冲剂进一步包括磷酸盐、醋酸盐、柠檬酸盐、硼酸盐以及碳酸盐等。

本申请的药物组合物可以呈现为单位剂量形式，并且可以通过任一制药领域公知的方法制备。所有方法都包括将本申请的活性成分与一种或几种药学上可接受的载体结合的步骤。通常，通过将活性成分与液体载体、固体载体或二者结合来制备组合物，随后根据需要来定型制备的产物。例如，适于胃肠外给药的组合物可以是包含活性组分的无菌水性或非水性制剂。可以根据已知的方法，使用合适的分散剂或湿润剂以及悬浮剂制备上述制剂。在可接受的载体或溶剂中，可以使用磷酸缓冲液、林格氏液以及等渗的氯化钠溶液等。

在某些实施方案中，本发明所述的组合物被配制成药学上或临床上可接受的任一剂型。在优选的实施方案中，所述剂型为注射剂或灌注剂。

在一些实施方案中，制备本申请的组合物的方法包括以下步骤：

(1)采集静脉全血，离心两次，分离得到血小板浓缩物；

(2)将血小板浓缩物与降低TGFβ活性的物质例如TGFβ中和抗体混合。

在某些实施方案中，本申请的药物组合物以注射、灌注或植入的方式给药，优选地，所述药物经局部给药。局部给药包括将药物应用于损伤组织内或其附近。局部给药还包括用药物包围损伤部位或将药物应用于损伤部位表面。在一实施方案中，将药物通过直接的注射或灌注施用于损伤部位。

在一些实施方案中，本申请的药物组合物能够修复组织损伤，促进损伤部位的再生。在具体的实施方案中，本文的药物组合物能够促进受损的骨骼肌修复和再生。

在一些实施方案中，本申请的药物组合物能够降低损伤组织的纤维化程度。在具体的实施方案中，本申请的药物组合物有效地减少了骨骼肌损伤部位的纤维化。

本说明书和权利要求书中，词语“包括”、“包含”和“含有”等词意指“包括但不限于”，且并非意图排除其他部分、添加物、组分或步骤。

应该理解，在本发明的特定方面、实施方案或实施例中描述的特征、特性、组分或步骤，可适用于本文所描述的任何其他的方面、实施方案或实施例，除非与之矛盾。

上述公开内容总体上描述了本申请，通过下面的实施例进一步示例本申请。描述这些实施例仅为说明本申请，而不是限制本申请的范围。尽管本文中使用了特殊的术语和值，这些术语和值同样被理解为示例性的，并不限定本申请的范围。除非特别指明，本说明书中的实验方法和技术为本领域技术人员所公知的方法和技术。

实施例

提供以下实施例仅是对本申请的一些实施方案进行举例说明，没有任何限制的目的。

下述实施例中所使用的方法如无特殊说明，均为常规方法。下述实施例中所用的材料、试剂等，如无特殊说明，均可从商业途径得到。

实施例1：本申请的组合物的制备

首先制备富含血小板的血浆，其制备方法包括如下步骤：

1)预先用50ml注射器吸取4ml枸橼酸钠注射液。取预用本产品的使用者的静脉全血36ml，轻柔混匀抗凝；

2)将步骤1)中的混合物分装到15ml离心管中，每管5ml；

3)将步骤2)中的离心管以200g离心10min；

4)吸取每支离心管上层血浆及血小板层约2ml，尽量不要吸取到红细胞层，吸取之后转移至另一个新的15ml离心管中，两支合并到一支内，约4ml；

5)将步骤4)中的离心管以800g离心6min；以及

6)吸取步骤5)中约3/4上清液弃掉，混合剩余液体，即为富含血小板的血浆。

然后用Human TGF-βQuantikine ELISA Kit,DB100B试剂盒对富含血小板的血浆中的TGFβ1进行定量。

最后根据富含血小板的血浆中的TGFβ1定量结果，加入含有合适量的TGFβ1中和抗体(购自Santa-Cruz公司)冻干粉的西林瓶中，充分混合以备用。

实施例2：本申请的组合物对骨骼肌损伤的治疗作用

将200g左右的Sprague-Dawley(SD)大鼠(购自北京维通利华实验动物技术有限公司)用异氟醚麻醉后，沿胫骨前肌肌注心毒素(CTX,0.15mg/ml,50μl，Sigmae-Aldrich)致伤。CTX注射后1天，切口重新打开，CTX损伤区域肉眼可见，见附图1。

将造模动物随机分为3组，每组10只。第1组为对照组，给予PBS。第2组给予按照实施例1制备的富含血小板的血浆(PRP)，第3组给予按照实施例1制备的PRP和TGFβ1中和抗体的混合物。

将50ml PBS(对照)、PRP、或PRP及TGFβ1中和抗体混合物注入CTX损伤区。切口用皮下缝线缝合。第1组(PBS组，即对照组)的结果见图1的左列；第2组(PRP组)的结果见图1的中间列；第3组(PRP与TGFβ1中和抗体混合物组)的结果见图1的右列。图2显示了对伤口面积进行统计学分析的结果。

从图1和图2的结果可见，与对照组相比，PRP与TGFβ1中和抗体的混合物以及单独的PRP都能够促进损伤部位的再生，但PRP与TGFβ1中和抗体的混合物具有更为显著的效果。与PRP组相比，PRP与TGFβ1中和抗体的混合物不仅能够显著促进损伤组织的修复和再生，而且可以有效地减少损伤部位的纤维化。

可以理解，尽管本申请以某种形式被说明，但本申请并不局限于本说明书中所显示和描述的内容。对本领域的技术人员显而易见的是，在不偏离本申请的范围的前提下还可做出各种变化。这些变化都在本申请要求保护的范围内。

Claims (10)

1.用于组织损伤修复的组合物，其包含富含血小板的血浆以及降低转化生长因子β(TGFβ)活性的物质。

2.如权利要求1所述的组合物，其中所述降低TGFβ活性的物质能够阻断或中和TGFβ的作用，优选地，所述TGFβ为TGFβ1。

3.如权利要求1或2所述的组合物，其中所述降低TGFβ活性的物质是TGFβ中和抗体，优选为TGFβ1中和抗体。

4.如权利要求1-3中任一项所述的组合物，其中所述富含血小板的血浆是通过分离全血得到的血小板浓缩物。

5.如权利要求1-4中任一项所述的组合物，其还包含药学上可接受的载体，其中所述载体与富含血小板的血浆以及降低TGFβ活性的物质一起被配制成药学上可接受的剂型，优选地，所述剂型为注射剂或灌注剂。

6.制备用于组织损伤修复的组合物的方法，其包括：

(1)分离静脉全血，得到富含血小板的血浆；

(2)在步骤(1)的富含血小板的血浆中加入降低TGFβ活性的物质得到混合物，所述降低TGFβ活性的物质优选为TGFβ中和抗体；以及任选地，

(3)在步骤(2)得到的混合物中加入药学上可接受的载体，配制成药学上可接受的剂型，优选地，所述剂型为注射剂或灌注剂。

7.权利要求1-5任一项所述的组合物在制备用于促进组织修复和/或再生、或者用于减少损伤组织纤维化的药物中的用途。

8.如权利要求7所述的用途，其中所述组织选自肌肉、肌腱、韧带、关节囊、滑膜囊、神经、血管、皮肤和皮下组织。

9.如权利要求7或8所述的用途，其中所述组织为肌肉，优选地，所述肌肉为骨骼肌。

10.如权利要求7-9任一项所述的用途，其中所述药物经局部给药，优选地，所述药物通过注射或灌注施用于损伤部位。

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