CN114106105A - 分离的多肽及其合成方法和应用 - Google Patents

Abstract

本发明提供了一种分离的多肽，该多肽具有SEQ ID NO:1所示的氨基酸序列，该多肽的第14位氨基酸和第33位氨基酸通过C‑S键相连和/或第8位氨基酸和第28位氨基酸通过S‑S键相连和/或第18位氨基酸和第35位氨基酸通过S‑S键相连。本发明的多肽具有高效获取、二硫键错配风险低、生产简便、靶标选择性高、对靶标作用效果强的优点。

Description

分离的多肽及其合成方法和应用

技术领域

本发明涉及生物技术领域，具体地，涉及一种分离的多肽、多肽的合成方法、提高多肽功能有效性的方法、Kv1.3通道抑制剂、多肽在制备药物中的用途、药物及药物组合物。

背景技术

自身免疫疾病是困扰全球的重大健康难题，该类疾病的发病机理不清，药物开发空间大。据估计，全球大约有5～8％的人口受到自身免疫疾病的威胁，逐年上升的致残率与死亡率亦提示自身免疫疾病的诊断与治疗正面临着巨大挑战。

近些年来，钾离子通道作为新的免疫抑制的药物靶点，越来越受人关注，成为自免疾病药物开发热点。

在免疫系统中，Kv1.3通道主要表达在T淋巴细胞上，参与调控T淋巴细胞的激活，而阻断Kv1.3通道会减少促炎症细胞因子的产生和扩散，起到抑制免疫激活的作用。钾离子通道Kv1.3作为新的免疫抑制的药物靶点备受关注的另一个重要原因在于Kv1.3的分布具有T细胞亚型的特异性。不同活化状态的免疫细胞膜上Kv1.3钾离子通道的表达水平是不同的，从而使得通道对胞内钙离子浓度增加的贡献产生差异。在自身免疫疾病中，Kv1.3的选择性抑制剂会选择性影响TEM细胞的功能。

因此制备一种高效的Kv1.3通道阻断剂以及研究一种高效简单的生产Kv1.3通道阻断剂的方法显得很有必要。

发明内容

为此，在本发明的第一方面，本发明提出了一种分离的多肽。根据本发明的实施例，所述多肽具有SEQ ID NO:1所示的氨基酸序列，所述多肽的第14位氨基酸和第33位氨基酸通过C-S键相连和/或第8位氨基酸和第28位氨基酸通过S-S键相连和/或第18位氨基酸和第35位氨基酸通过S-S键相连。根据本发明实施例的多肽对Kv1.3通道靶标具有高选择性，对Kv1.3通道具有较高的抑制特性，可以快速高效地靶向Kv1.3通道并抑制其活性，进而减少促炎症细胞因子的产生和扩散，降低自身免疫反应。

GVPTDVKCRGSQPCIQPCKDAGMRFGKCMNGKCHCTPK(SEQ ID NO:1)

在本发明的第二方面，本发明提出了一种多肽的合成方法。根据本发明的实施例，使具有SEQ ID NO:1所示氨基酸序列的多肽的至少下面两个氨基酸之间相连：第14位氨基酸和第33位氨基酸通过C-S键相连；第8位氨基酸和第28位氨基酸通过S-S键相连；第18位氨基酸和第35位氨基酸通过S-S键相连。根据本发明实施例的方法可以使多肽的第14位氨基酸和第33位氨基酸之间的S-S键替换为C-S键，可以使第8位氨基酸和第28位氨基酸以及第18位氨基酸和第35位氨基酸通过S-S键准确相连，并且不会发生错配。本发明的方法操作简单、成本低廉、适合大规模生产。

根据本发明的实施例，上述方法还可进一步包括如下附加技术特征至少之一：

根据本发明的实施例，所述方法包括：(1)利用Fmoc固相合成法，根据SEQ ID NO:1所示的序列将氨基酸由C端向N端依次偶联至树脂上，以便获得第一氨基酸序列；(2)利用替换构件对所述第一氨基酸序列的第33位氨基酸进行替换，以便形成Cys14-Cys33的C-S键；(3)利用保护基对所述第一氨基酸序列的下列两组氨基酸位点之一进行保护：第8位氨基酸和第28位氨基酸，第18位氨基酸和第35位氨基酸，以便获得第二氨基酸序列；(4)基于第二氨基酸序列，根据SEQ ID NO:1所示的序列将氨基酸由C端向N端依次偶联至树脂上，将树脂上的氨基酸之间进行缩合连接，以便获得第三氨基酸序列；(5)对所述第三氨基酸序列进行第一二硫键氧化，使未受保护基保护的氨基酸位点之间形成二硫键，以便获得第四氨基酸序列；(6)针对所述第四氨基酸序列，对所述保护基进行去除，以便获得第五氨基酸序列；(7)对所述第五氨基酸序列进行第二二硫键氧化，使去除保护基的氨基酸位点之间形成二硫键，以便获得多肽。根据本发明实施例的方法，游离氨基酸以树脂为固相载体，按照SEQID NO:1所示的序列由C端向N端依次偶联至树脂上。对于第33位的半胱氨酸，选择可以与半胱氨酸形成C-S键的替换构件将第33位的半胱氨酸替换，以便使其后续与第14位的半胱氨酸形成C-S键；对于第14位的半胱氨酸，采用四(三苯基膦)钯与苯硅烷的混合物(摩尔比1:5)作为脱除试剂脱除其Alloc和Allyl保护基团，使用PyAOP/DIEA环化缩合体系使氨基酸序列反应4h，将第33位二氨基二酸与第14位氨基酸进行缩合成环；对于第15位的氨基酸，采用含有20％哌啶的DMF溶液作为脱除试剂脱除其Fmoc保护基，以便使其与第14位的半胱氨酸相连；对于第35位和第18位或者第8位和第28位的半胱氨酸选用侧链为Mmt(对甲氧基苯基-二苯基甲基)的保护基进行选择性保护，保护其中一组，以便氨基酸序列连接完成后进行二硫键氧化时，可以使二硫键精准形成不产生错配，不会产生例如第35位与第8位或者第28位的半胱氨酸形成二硫键的情况。在所有氨基酸均偶联到树脂上之后，去除所有氨基酸上的Fmoc，以便氨基酸之间进行缩合反应，按照氨基酸序列顺序相互连接。在氨基酸序列连接完成后，进行二硫键氧化，首先将未进行保护基保护的半胱氨酸进行二硫键氧化，随后去除保护基，再进行一次二硫键氧化，此时刚刚去除保护基的半胱氨酸之间则形成二硫键，使用此种方法可以有效避免二硫键的错配。同时，本发明实施例的方法不需要复性，即可完成二硫键氧化，形成二硫键，减少操作步骤，操作简便，利于大规模生产。

根据本发明的具体实施例，本发明的方法包括：(1)利用Fmoc固相合成法，根据SEQID NO:1所示的序列将氨基酸由C端向N端依次偶联至树脂上，以便获得第38到第35位氨基酸序列；(2)利用侧链为对甲氧基苯基-二苯基甲基保护基保护所述第35位氨基酸，继续进行氨基酸连接，以便获得第38位到33位氨基酸序列；(3)利用二氨基二酸对所述第33位氨基酸进行替换，继续进行氨基酸连接，以便获得第38位到第15位氨基酸序列；(4)利用含有20％哌啶的DMF溶液脱除所述第15位氨基酸的保护基，利用四(三苯基膦)钯与苯硅烷的混合物脱除第14位氨基酸的保护基，以便获得第38位到第14位氨基酸序列；(5)对第33位到第14位氨基酸序列进行环化缩合，使第33位二氨基二酸与第14位氨基酸形成缩合环，继续进行氨基酸与树脂的偶联，将树脂上的氨基酸之间进行缩合连接，以便获得第38位到第1位氨基酸序列；(6)对所述第38位到第1位氨基酸序列进行第一二硫键氧化，使第8位氨基酸和第28位氨基酸之间形成二硫键，以便获得具有Cys8-Cys28的氨基酸序列；(7)对所述具有Cys8-Cys28的氨基酸序列进行第二二硫键氧化，使第18位氨基酸和第35位氨基酸之间形成二硫键，以便获得所述多肽化合物。

根据本发明的实施例，所述替换构件为二氨基二酸；优选地，所述替换构件包括如式(1)所示的结构：

根据本发明的实施例，替换构件可以替换氨基酸序列中的半胱氨酸，进而与氨基酸序列中其他的半胱氨酸形成C-S键。根据本发明实施例的方法，利用二氨基二酸对所述第33位的半胱氨酸进行替换，以便第33位的二氨基二酸与第14位的半胱氨酸之间形成C-S键。

根据本发明的实施例，所述保护基选自侧链为对甲氧基苯基-二苯基甲基的化合物，优选地，所述保护基包括如式(2)所示的结构：

根据本发明的实施例，侧链为对甲氧基苯基-二苯基甲基的化合物可以保护氨基酸在后续二硫键氧化过程中不形成稳定二硫键，从而达到避免二硫键错配的目的，待其他二硫键氧化过后，可以去除保护基，进而对所保护的氨基酸进行二硫键氧化过程，形成稳定二硫键。根据本发明实施例的方法，采用保护基可以避免错配，减少操作步骤，不需要复性等操作。

在本发明的第三方面，本发明提出了一种提高多肽功能有效性的方法。根据本发明的实施例，使具有SEQ ID NO:1所示氨基酸序列的多肽的至少下面两个氨基酸之间相连：第14位氨基酸和第33位氨基酸通过C-S键相连；第8位氨基酸和第28位氨基酸通过S-S键相连；第18位氨基酸和第35位氨基酸通过S-S键相连。需要说明的是，本申请所述的“多肽功能有效性”是指多肽识别Kv1.3受体的能力、抑制Kv1.3通道的能力。发明人发现，将第14位氨基酸和第33位氨基酸之间的S-S键替换为C-S键可以提高多肽识别Kv1.3受体的能力，并且可以显著提高其抑制Kv1.3通道的能力，进而有效抑制自身免疫反应。

在本发明的第四方面，本发明提出了一种Kv1.3通道抑制剂。根据本发明的实施例，所述抑制剂包括在本发明的第一方面所提出的多肽。发明人经过反复试验，发现将具有SEQ ID NO:1所示氨基酸序列的多肽的第14位氨基酸和第33位氨基酸之间的S-S键替换为C-S键可以提高多肽识别Kv1.3受体的能力，并且可以显著提高其抑制Kv1.3通道的能力，进而有效抑制自身免疫反应。

在本发明的第五方面，本发明提出了一种在本发明第一方面提出的多肽在制备药物中的用途，所述药物用于降低自身免疫反应。

在本发明的第六方面，本发明提出了一种药物，所述药物用于降低自身免疫反应。根据本发明的实施例，所述药物包括在本发明的第一方面所提出的多肽。发明人经过反复试验，发现将具有SEQ ID NO:1所示氨基酸序列的多肽的第14位氨基酸和第33位氨基酸之间的S-S键替换为C-S键可以提高多肽识别Kv1.3受体的能力，并且可以显著提高其抑制Kv1.3通道的能力，进而有效抑制自身免疫反应。

根据本发明的实施例，上述药物还可进一步包括如下附加技术特征至少之一：

根据本发明的实施例，所述药物呈胶囊、片剂、颗粒制剂、粉剂、针剂、喷雾的形式。

在本发明的第七方面，本发明提出了一种药物组合物，所述药物组合物用于降低自身免疫反应。根据本发明的实施例，所述药物组合物包括在本发明第一方面所提出的多肽。发明人发现，将第14位氨基酸和第33位氨基酸之间的S-S键替换为C-S键可以提高多肽识别Kv1.3受体的能力，并且可以显著提高其抑制Kv1.3通道的能力，进而有效抑制自身免疫反应。

根据本发明的实施例，上述药物组合物还可进一步包括如下附加技术特征至少之一：

根据本发明的实施例，上述药物组合物进一步包括：其他与降低自身免疫反应有关的药物，任选地，所述其他与降低自身免疫反应有关的药物选自新山地明、山地明、环孢霉素和他克莫司至少之一。发明人发现，本发明的多肽与其他降低自身免疫反应有关的药物一起作用具有明显的降低自身免疫反应的效果。

附图说明

图1为根据本发明实施例的多肽合成流程示意图；

图2为根据本发明实施例的多肽的色谱分析鉴定图；

图3为根据本发明实施例的多肽的质谱鉴定结果图；

图4为根据本发明实施例的多肽对Kv1.X家族电流的作用；

图5为根据本发明实施例的对Kv1.3钾离子通道抑制效果。

具体实施方式

下面详细描述本发明的实施例，所述实施例的示例在附图中示出。下面通过参考附图描述的实施例是示例性的，旨在用于解释本发明，而不能理解为对本发明的限制。

下面将结合具体实施例对本发明进行进一步解释说明。下述实施例中所使用的实验方法如无特殊说明，均为常规方法。下述实施例中所用的材料、试剂等，如无特殊说明，均可从商业途径得到。

需要说明的是，本发明中所使用的Cys14-Cys33的C-S键指第14位半胱氨酸与第33位半胱氨酸之间的碳-硫键

实施例1:多肽的制备

所述多肽的氨基酸序列如SEQ ID No.1所示，将第14位和第33位之间的S-S键替换为C-S键，合成路径为参考附图1。

具体步骤：称取Rink AM amide Resin(0.1mmol)于固相合成管中，使用N,N-二甲基甲酰胺(DMF)/二氯甲烷(DCM)混合溶剂(二者体积比为1:1)溶胀15min后，抽干，然后按照高温辅助的Fmoc固相合成法进行合成：0.4mmol氨基酸，0.4mmolOxyma，0.4mmol DIC；反应时间为20-30min，反应温度为75℃，其中精氨酸(Arg)采用HCTU(6-氯苯并三氮唑-1,1,3,3-四甲基脲六氟磷酸酯)作为缩合剂，室温反应40min 2次；组氨酸(His)采用DIC作为缩合剂，室温反应40min；半胱氨酸(Cys)采用DIC作为缩合剂，50℃反应40min；其中第35位和第18位的半胱氨酸选用侧链为Mmt(对甲氧基苯基-二苯基甲基)的保护基进行选择性保护；第33位Cys由化合物1，也即二氨基二酸构件单元所替换。第33位二氨基二酸构件单元耦合完后，由C端向N端继续耦合直至第15位，待第15位耦合完后，采用含有20％哌啶的DMF溶液作为脱除试剂脱除其Fmoc保护基；采用四(三苯基膦)钯与苯硅烷的混合物(摩尔比1:5)作为脱除试剂脱除第14位氨基酸的Alloc及Allyl保护基团，使用PyAOP/DIEA环化缩合体系反应4h时，将第33位二氨基二酸构件单元与第14位氨基酸进行缩合成环，最后继续耦合第13位以及余下的氨基酸。待所有的氨基酸耦合完后，用DMF，DCM，DMF各洗5次，加入含有哌啶(体积分数20％)的DMF溶液反应2次(2min，10min各一次)，脱除Fmoc保护基。多肽合成完成后，在树脂上实现二硫键选择性氧化，过程如下：加入2倍当量，0.2mmol的NCS(N-氯代琥珀酰亚胺)，再补加5mL的DMF作为溶剂，30℃摇床反应15min后，即可将Cys8-Cys28的一对半胱氨酸氧化成二硫键。随后，使用含有1％三氟乙酸的DCM溶液10mL，加入到树脂中，脱除Mmt保护基。再使用DCM/DMF依次各清洗5遍。再加入含有0.2mmol的NCS的DMF溶液，继续氧化Cys18-Cys35形成新的一对二硫键。这样，在树脂上就完成了两对二硫键的选择性氧化。氧化完成后，加入8mL切割试剂[V(TFA):V(苯酚):V(水):V(三异丙基硅烷,TIPS)＝88:5:5:2]于多肽合成管内，反应2h，将多肽从树脂上切下，并脱除侧链保护基团。将切割液滤除树脂后收集到离心管中，用氮气鼓泡，浓缩溶液，最后用冰乙醚沉淀，离心，得到粗肽，使用半制备型HPLC分离得到纯肽，经分析型HPLC分析和质谱鉴定得到所述Kv1.3抑制剂及其类似物，多肽的色谱分析鉴定参考附图2，其中18min处为最终产物，产物为单峰，说明多肽的纯度高，质谱鉴定结果参考附图3，图中所示均为其多电荷峰，结果表明多肽合成正确，多肽纯度高。

实施例2:电生理实验

具体步骤：

1)细胞培养基：培养细胞使用的DMEM/F12培养基(Gibco公司)。使用时前加入10％的胎牛血清(FBS)(Gibco公司)以及100U/mL的青霉素和链霉素(Gibco公司)。

2)细胞复苏：打开37℃的水浴锅。配制含有血清FBS和双抗青霉素与链霉素的DMEM/F12培养基，并置于37摄氏度水浴锅，预热至37摄氏度。将细胞从液氮灌中取出，迅速放入37摄氏度的水浴锅，待其融化后，放入离心机中，1000rpm离心5min，弃去上清。用1mL预热好的DMEM/F12培养基将细胞重悬，加入60mm培养皿中，补加2mL培养基，混合均匀后放入37摄氏度，5％CO₂培养箱中培养。24h后在显微镜下观察细胞状态，此时贴壁细胞为存活的细胞，死亡的细胞则漂浮在培养基中。

3)细胞传代：待细胞汇合度大约在90％左右，即可进行细胞传代。在超净台中将60mm细胞培养皿中的上清完全吸走，加入1mL PBS清洗贴壁的细胞一次，吸走PBS。然后加入1mL 0.125％的胰酶(含0.01％的EDTA)消化1min 30s吸走胰酶。加入3mL DMEM/F12培养基终止消化，轻轻吹打重悬培养皿底部的细胞，按照5:1的比例进行传代，吸取0.6mL细胞悬液到新的60mL培养皿中，补加3mL新鲜的培养基，混匀后放入37摄氏度，5％CO₂培养箱中进行培养，待长满后再次进行传代。

4)细胞铺空以及转染：细胞传代时多余的细胞悬液取200μL加入24孔板的一个小孔中，补加300μL DMEM/F12培养基，在37摄氏度，5％CO₂培养箱中培养24h，即可用于质粒转染。采用脂质体转染的方式。转染时取出24孔板，将原来的0.5mL培养基吸走，用0.2mL的PBS清洗一遍，洗去残留的血清和抗生素，然后加入0.4mL Opti-MEM培养基(无抗生素，无血清)。取两个无菌的EP管，分别加入2μL阳离子脂质Lipofectamine2000(Invitrogen)以及0.6μg的pcDNA3.1-EGFP质粒，1.0μg的pcDNA3.1-Kv1.3质粒，然后用50μL的Opti-MEM培养基稀释。稀释好后在超净台中室温静置5min，使质粒和脂质体在培养基中混合均匀。然后将质粒和脂质体混合到一起，静置20min，使阳离子脂质体将质粒包裹起来形成转染复合物。然后将这100μL的混合物滴加到24孔板中，放入37摄氏度5％CO₂培养箱中培养4-6h。转染完成后，需要将细胞转移到玻璃片上进行后续的膜片钳电生理实验。玻璃片大小约为0.8cm×0.8cm，用洗洁精、稀盐酸、ddH₂O清洗后，浸泡在酒精中。使用时用镊子夹出一片，在酒精灯上灼烧之后，放入35mm的小皿中。然后在玻片上滴加Poly-L-Lysine(用ddH₂O配制成0.05mg/mL的溶液)，由于Poly-L-Lysine对细胞有一定的毒性，因此过3min吸去它之后可以再在玻片上滴加ddH2O进行清洗，晾干备用。然后将24孔板从培养箱中取出，吸去含有脂质体和质粒的Opti-MEM培养基，加入200μL，0.125％的胰酶(含0.01％EDTA)消化20s，迅速吸走胰酶，加入600μL DMEM/F12培养基终止消化，吹打孔底部，重悬细胞。重悬后将细胞悬液滴加到玻璃片上。将35mm的培养皿放入培养箱中，1h后等到玻片上的细胞贴壁后，补加2mLDMEM/F12培养基。继续放入培养箱中培养，培养24h-48h之间即可用于膜片钳电。

5)电极拉制：我们使用的电极拉制仪是美国Sutter公司的P-1000水平拉制仪，玻璃电极是Sutter公司的硼硅酸盐玻璃毛细管，外径1.50mm，内径0.86mm。使用电极拉制仪上预设程序，使电极分四步拉制，电极的电阻维持在3-5MΩ。

6)电生理溶液：CHO细胞电生理的细胞外液，它包含150mMNaCl，4mMKCl，2mMCaCl₂，1mM MgCl₂，10mM HEPES。称取粉末溶于一定体积的ddH₂O后，用pH计调节pH至7.4，用容量瓶定容，测定渗透压，一般为300mOsm-310mOsm。用于局部给药的蝎毒素多肽也用这种细胞外液配制。而电极内液包含140mMKCl，10mMNaCl，5mM EGTA，10mM HEPES同样调节pH至7.4后定容，测定渗透压，一般为290mOsm-300mOsm左右。细胞外液和电极内液在使用前都需要用0.22μm的滤膜过滤。

7)Kv1.3电流刺激：我们记录在CHO细胞中表达的人源Kv1.3野生型全细胞电流时，将电压hold在-80mV，然后给予去极化电压刺激，从-80mV～+60mV，每次增加20mV，维持200ms，引出Kv1.3钾离子电流，再回到-80mV，每个刺激之间间隔30s，以避免Kv1.3发生积累失活效应。给药时，则每隔30s的时间间隔，重复从-80mV到+40mV的去极化电压刺激，观察Kv1.3钾离子电流大小的变化。

8)电生理记录操作过程：天转染滴片后的玻璃片从培养基中取出，用细胞外液清洗一遍，然后放入一个装有2mL细胞外液的35mm培养皿底部，放到显微镜载物台的中央。用左手手动微操控制给药管，使它的尖端靠近细胞。电极尖端灌入电极内液后，固定在电极夹持器上。电极入水前，给予一个正压，主要为了防止外液中杂质进入电极内液，影响封接。然后通过右手微操下降电极，进入液面以下，调节液接电位。在显微镜中找到电极，然后将其靠近细胞，电极接触细胞时可以观察到电阻增加，此时释放正压，轻轻给予负压，即可形成GΩ封接，然后补偿快电容。将细胞吸破，补偿慢电容和串联电阻。待细胞稳定一段时间后，即可进行电生理记录。所使用的放大器为HEKA公司的EPC10放大器，采集软PatchMaster，电流记录频率为10kHz，所有实验都在室温进行。测试所述目标多肽活性，记录Kv1.X家族电流，当电流稳定时，细胞外给所述多肽，观察其对Kv1.X家族电流的作用，结果参考附图4。使用不同浓度的多肽，观察不同多肽对Kv1.3影响，收取多肽对Kv1.3药效曲线，对Kv1.3钾离子通道抑制效果及IC₅₀曲线如附图5所示。结果显示，本发明的多肽对Kv1.3有专一性选择性抑制效果。

在本说明书的描述中，参考术语“一个实施例”、“一些实施例”、“示例”、“具体示例”、或“一些示例”等的描述意指结合该实施例或示例描述的具体特征、结构、材料或者特点包含于本发明的至少一个实施例或示例中。在本说明书中，对上述术语的示意性表述不必须针对的是相同的实施例或示例。而且，描述的具体特征、结构、材料或者特点可以在任一个或多个实施例或示例中以合适的方式结合。此外，在不相互矛盾的情况下，本领域的技术人员可以将本说明书中描述的不同实施例或示例以及不同实施例或示例的特征进行结合和组合。

尽管上面已经示出和描述了本发明的实施例，可以理解的是，上述实施例是示例性的，不能理解为对本发明的限制，本领域的普通技术人员在本发明的范围内可以对上述实施例进行变化、修改、替换和变型。

SEQUENCE LISTING

<110> 苏州星洲生物科技有限公司

<120> 分离的多肽及其合成方法和应用

<130> PIDC3204482

<160> 1

<170> PatentIn version 3.5

<210> 1

<211> 38

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> 分离的多肽序列

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (8)..(28)

<223> 8位和28位氨基酸之间有S-S键

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (14)..(33)

<223> 14位和33位氨基酸之间有C-S键

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (18)..(35)

<223> 18位和35位氨基酸之间有S-S键

<400> 1

Gly Val Pro Thr Asp Val Lys Cys Arg Gly Ser Gln Pro Cys Ile Gln

1 5 10 15

Pro Cys Lys Asp Ala Gly Met Arg Phe Gly Lys Cys Met Asn Gly Lys

20 25 30

Cys His Cys Thr Pro Lys

35

Claims (12)

1.一种分离的多肽，其特征在于，所述多肽具有SEQ ID NO:1所示的氨基酸序列，所述多肽的第14位氨基酸和第33位氨基酸通过C-S键相连和/或第8位氨基酸和第28位氨基酸通过S-S键相连和/或第18位氨基酸和第35位氨基酸通过S-S键相连。

2.一种多肽的合成方法，其特征在于，使具有SEQ ID NO:1所示氨基酸序列的多肽的至少下面两个氨基酸相连：

第14位氨基酸和第33位氨基酸通过C-S键相连；

第8位氨基酸和第28位氨基酸通过S-S键相连；

第18位氨基酸和第35位氨基酸通过S-S键相连。

3.根据权利要求2所述的合成方法，其特征在于，包括：

(1)利用Fmoc固相合成法，根据SEQ ID NO:1所示的序列将氨基酸由C端向N端依次偶联至树脂上，以便获得第一氨基酸序列；

(2)利用替换构件对所述第一氨基酸序列的第33位氨基酸进行替换，以便形成Cys14-Cys33的C-S键；

(3)利用保护基对所述第一氨基酸序列的下列两组氨基酸位点之一进行保护：第8位氨基酸和第28位氨基酸，第18位氨基酸和第35位氨基酸，以便获得第二氨基酸序列；

(4)基于第二氨基酸序列，根据SEQ ID NO:1所示的序列将氨基酸由C端向N端依次偶联至树脂上，将树脂上的氨基酸进行缩合连接，以便获得第三氨基酸序列；

(5)对所述第三氨基酸序列进行第一二硫键氧化，使未受保护基保护的氨基酸位点之间形成二硫键，以便获得第四氨基酸序列；

(6)针对所述第四氨基酸序列，对所述保护基进行去除，以便获得第五氨基酸序列；

(7)对所述第五氨基酸序列进行第二二硫键氧化，使去除保护基的氨基酸位点之间形成二硫键，以便获得多肽。

4.根据权利要求3所述的合成方法，其特征在于，所述替换构件为二氨基二酸；

优选地，所述替换构件包括如式(1)所示的结构：

5.根据权利要求3所述的合成方法，其特征在于，所述保护基选自侧链为对甲氧基苯基-二苯基甲基的化合物，优选地，所述保护基包括如式(2)所示的结构：

6.一种提高多肽功能有效性的方法，其特征在于，使具有SEQ ID NO:1所示氨基酸序列的多肽的至少下面两个氨基酸之间相连：

第14位氨基酸和第33位氨基酸通过C-S键相连；

第8位氨基酸和第28位氨基酸通过S-S键相连；

第18位氨基酸和第35位氨基酸通过S-S键相连。

7.一种Kv1.3通道抑制剂，其特征在于，所述抑制剂包括权利要求1所述的多肽。

8.权利要求1所述的多肽在制备药物中的用途，所述药物用于降低自身免疫反应。

9.一种药物，所述药物用于降低自身免疫反应，其特征在于，包括权利要求1所述的多肽。

10.根据权利要求9所述的药物，其特征在于，所述药物呈胶囊、片剂、颗粒制剂、粉剂、针剂、喷雾的形式。

11.一种药物组合物，所述药物组合物用于降低自身免疫反应，其特征在于，包括权利要求1所述的多肽。

12.根据权利要求11所述的药物组合物，其特征在于，进一步包括：其他降低自身免疫反应有关的药物，

任选地，所述其他降低自身免疫反应有关的药物选自新山地明、山地明、环孢霉素和他克莫司至少之一。

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