CN114105958B - 一组含羟肟酸的2-苯氨基嘧啶类衍生物及其应用 - Google Patents

一组含羟肟酸的2-苯氨基嘧啶类衍生物及其应用 Download PDF

Info

Publication number
CN114105958B
CN114105958B CN202111464576.XA CN202111464576A CN114105958B CN 114105958 B CN114105958 B CN 114105958B CN 202111464576 A CN202111464576 A CN 202111464576A CN 114105958 B CN114105958 B CN 114105958B
Authority
CN
China
Prior art keywords
triazol
amino
pyrimidin
isopropyl
hydroxyheptanamide
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Active
Application number
CN202111464576.XA
Other languages
English (en)
Other versions
CN114105958A (zh
Inventor
阚全程
田鑫
王素华
程伟彦
杜玥
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
First Affiliated Hospital of Zhengzhou University
Original Assignee
First Affiliated Hospital of Zhengzhou University
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by First Affiliated Hospital of Zhengzhou University filed Critical First Affiliated Hospital of Zhengzhou University
Priority to CN202111464576.XA priority Critical patent/CN114105958B/zh
Publication of CN114105958A publication Critical patent/CN114105958A/zh
Application granted granted Critical
Publication of CN114105958B publication Critical patent/CN114105958B/zh
Active legal-status Critical Current
Anticipated expiration legal-status Critical

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D403/00—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, having nitrogen atoms as the only ring hetero atoms, not provided for by group C07D401/00
    • C07D403/02—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, having nitrogen atoms as the only ring hetero atoms, not provided for by group C07D401/00 containing two hetero rings
    • C07D403/04—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, having nitrogen atoms as the only ring hetero atoms, not provided for by group C07D401/00 containing two hetero rings directly linked by a ring-member-to-ring-member bond
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents

Landscapes

  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Plural Heterocyclic Compounds (AREA)
  • Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)

Abstract

本发明属于药物化学领域，具体涉及一类含有4‑三氮唑‑2‑苯氨基嘧啶类衍生物，其结构如下所示：
Figure 100004_DEST_PATH_IMAGE002
；其中，R1为甲基、乙基、异丙基、环丙基、环丁基、环戊基、环己基；R2为氢、氟、三氟甲基；X为氧或

Description

一组含羟肟酸的2-苯氨基嘧啶类衍生物及其应用
技术领域
本发明属于药物化学领域，具体涉及一类含有羟肟酸的2-苯氨基嘧啶类衍生物及其在肿瘤治疗领域的用途。
背景技术
肿瘤是严重威胁人类生命健康的重大难治性疾病之一。在我国，恶性肿瘤已成为居民的第一位死因。尽管抗肿瘤药物作为肿瘤治疗的重要手段在肿瘤患者的临床治疗中发挥着十分重要的作用，然而。目前临床应用的抗肿瘤药物多数为细胞毒药物，存在毒副作用大，易产生耐药等问题，而近几年上市的作用于单个靶点的高选择性抗肿瘤药物虽其作用机制明确，但仍难以遏制肿瘤的发展。研究表明，肿瘤起因的多因素性导致其发病机制复杂，在临床上使用单一靶点药物并不能有效控制或治愈。近年来，随着系统生物学的出现和不断发展为新药的发现提供了一种全新的思路--双(多)靶点药物冶疗，双(多)靶点药物可同时作用于疾病网络中的多个靶点而产生协同效应，达到最佳冶疗效果。同理，双(多)靶点抗肿瘤药物可同时作用于肿瘤相关的多个靶点，产生协同效应，提高疗效和(或)改善安全性，减少副作用。
周期蛋白依赖性激酶(cyclin-dependent kinase,CDK)是一类属于Ser/Thr家族的细胞周期调节性激酶，是细胞周期调节的核心，它与cyclins、细胞周期蛋白依赖性激酶抑制因子 (CKIs)组成细胞周期调控网络系统，调节细胞周期的进程。目前已发现CDK家族有20个成员，即CDK1-20。部分CDK家族激酶的表达上调与肿瘤的发生发展有密切的关系。例如， CDK2、CDK4、CDK6、CDK8、CDK11的上调与乳腺癌、直肠癌的发展与恶化正相关。因此，选择性地抑制CDK的活性，阻止肿瘤细胞的异常增殖，是肿瘤治疗的重要思路之一。目前已上市的CDK家族抑制剂包括辉瑞公司开发的CDK4/6双重抑制剂palbociclib，诺华公司开发的CDK4/6抑制剂ribociclib，以及礼来公司的abemaciclib，用于联合来曲唑治疗 ER+/HER2-的晚期乳腺癌。除了已上市的这三个药物，十多个靶向于CDK的活性小分子目前处于临床试验中。
组蛋白去乙酰化酶(HDAC)是一组蛋白中的催化酶，分为四类18个亚型，能催化乙酰基从赖氨酸中脱除。正常细胞中，在HDAC与组蛋白乙酰化转移酶(HAT)的共同调控下，组蛋白的乙酰化与去乙酰化过程处于动态平衡中，细胞功能得以正常发挥。而在诸如肺癌、胃癌、卵巢癌等肿瘤细胞中，HDAC存在着明显的过量表达，而抑制HDAC能诱导肿瘤细胞周期停滞、分化和凋亡，有效控制肿瘤的增殖。目前，HDAC抑制剂的开发主要有两个方向：1)，亚型选择型HDAC抑制剂；2)，基于HDAC的双/多靶点的抑制剂。基于HDAC的双/ 多靶点的抑制剂的设计思路为：将HDAC抑制剂的药效团引入到其它药物的分子结构中，既保留了药物本身的抑制活性，又增加了化合物的HDAC抑制作用。
结合CDK及HDAC抑制剂的作用特点，研究CDK/HDAC双(多靶点)抑制剂，不仅是临床肿瘤治疗和提高我国人民健康水平的迫使需要，而且对于我国医药产业和社会发展具有重要意义。
发明内容
本发明目的在于提供一种对肿瘤细胞具有增殖抑制作用的含羟肟酸的2-苯氨基嘧啶类衍生物。
本发明的另一个目的是提供上述含羟肟酸的2-苯氨基嘧啶类衍生物在医药学中的用途。
为实现上述目的，本发明采用如下技术方案：
本发明提供的含羟肟酸的2-苯氨基嘧啶类衍生物及其药学上可接受的盐，具有如下结构通式：
Figure BDA0003390806050000021
其中，R1为甲基、乙基、异丙基、环丙基、环丁基、环戊基、环己基；
R2为氢、氟、三氟甲基；
X为氧或
Figure BDA0003390806050000022
本发明所述的含羟肟酸的2-苯氨基嘧啶类衍生物及其药学上可接受的盐，可以选自下述化合物之一：
Figure BDA0003390806050000031
N-羟基-7-(4-((4-(1-异丙基-1H-1,2,3-三唑-4-基)嘧啶-2-基)氨基)苯氧基)庚酰胺；
7-(4-((4-(1-环戊基-1H-1,2,3-三唑-4-基)嘧啶-2-基)氨基)苯氧基)-N-羟基庚酰胺；
7-(4-((4-(1-环己基-1H-1,2,3-三唑-4-基)嘧啶-2-基)氨基)苯氧基)-N-羟基庚酰胺；
7-(4-((5-氟-4-(1-异丙基-1H-1,2,3-三唑-4-基)嘧啶-2-基)氨基)苯氧基)-N-羟基庚酰胺；
7-(4-((4-(1-环戊基-1H-1,2,3-三唑-4-基)-5-氟嘧啶-2-基)氨基)苯氧基)-N-羟基庚酰胺；
7-(4-((4-(1-环己基-1H-1,2,3-三唑-4-基)-5-氟嘧啶-2-基)氨基)苯氧基)-N-羟基庚酰胺；
N-羟基-7-(4-(4-((4-(1-异丙基-1H-1,2,3-三唑-4-基)嘧啶-2-基)氨基)苯基)哌嗪-1-基)庚酰胺；
7-(4-(4-((4-(1-环戊基-1H-1,2,3-三唑-4-基)嘧啶-2-基)氨基)苯基)哌嗪-1-基)-N-羟基庚酰胺；
7-(4-(4-((4-(1-环己基-1H-1,2,3-三唑-4-基)嘧啶-2-基)氨基)苯基)哌嗪-1-基)-N-羟基庚酰胺；
7-(4-(4-((5-氟-4-(1-异丙基-1H-1,2,3-三唑-4-基)嘧啶-2-基)氨基)苯基)哌嗪-1-基)-N-羟基庚酰胺；
7-(4-(4-((4-(1-环戊基-1H-1,2,3-三唑-4-基)-5-氟嘧啶-2-基)氨基)苯基)哌嗪-1-基)-N-羟基庚酰胺；
7-(4-(4-((4-(1-环己基-1H-1,2,3-三唑-4-基)-5-氟嘧啶-2-基)氨基)苯基)哌嗪-1-基)-N-羟基庚酰胺。
上述的含羟肟酸的2-苯氨基嘧啶类衍生物或其药学上可接受的盐在制备抗癌药物中的应用。
上述的含羟肟酸的2-苯氨基嘧啶类衍生物或其药学上可接受的盐在制备预防和治疗肺癌、乳腺癌药物中的应用。
和现有技术相比，本发明的有益效果如下：
本发明创新性的提供了一类含羟肟酸的2-苯氨基嘧啶类衍生物。试验结果显示：本发明所涉及含羟肟酸的2-苯氨基嘧啶类衍生物具有较好的HDAC、CDKs抑制活性，从而发挥肿瘤增殖抑制作用，可用于癌症尤其是肺癌、乳腺癌的预防和治疗。
具体实施方式
以下结合实施例对本发明的技术方案作进一步地详细介绍，但本发明的保护范围并不局限于此。
下述实施例中，如无特殊说明，所用原料均为可以直接购买到的普通市售产品，或者可以参考现有文献进行合成。
实施例1：2-氯-4-((三甲基硅基)乙炔基)嘧啶(2a)
Figure BDA0003390806050000041
将三苯基膦二氯化钯(Pd(PPh3)2Cl2，0.047g,0.067mmol)、三苯基膦(PPh3，0.034g,0.13 mmol)、2,4-二氯嘧啶(2.0g，13.4mmol)加入到四氢呋喃(THF，10mL)和三乙胺(Et3N， 15mL)的混合溶剂中，用氮气置换反应体系中的空气，之后再依次加入碘化亚铜(CuI，0.026 g,0.13mmol)和三甲基硅基乙炔(1.579g,16.1mmol)。加热回流反应3h后冷却至室温，过滤除去反应体系中产生的固体(Et3N.HCl)，将滤液浓缩，柱色谱纯化(石油醚：乙酸乙酯＝100:1，体积比)，得到黄色固体，即2-氯-4-((三甲基硅基)乙炔基)嘧啶(2a)，收率：57％。
实施例2：2-氯-5-氟-4-((三甲基硅基)乙炔基)嘧啶(2b)
Figure BDA0003390806050000042
制备方法参照实施例1，其中，将2,4-二氯嘧啶替换为2,4-二氯-5-氟嘧啶，反应时间为 10min。黄色固体(2b)，收率：62％。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ8.50(s,1H),0.31(s,9H).ESI-MS m/z:229.0[M+H]+。
实施例3：2-氯-4-乙炔基嘧啶(3a)
Figure BDA0003390806050000043
将2-氯-4-((三甲基硅基)乙炔基)嘧啶(2a，1.0g)溶于10mL甲醇(MeOH)中。将氢氧化钾(KOH，3mg)溶于5mL甲醇中制备的KOH溶液加入上述反应体系中，室温反应 0.5h，浓缩、柱色谱纯化(纯二氯甲烷洗脱)，得白色固体(3a)，收率：90％。
实施例4：2-氯-4-乙炔基-5-氟嘧啶(3b)
Figure BDA0003390806050000044
制备方法参照实施例3，其中，将2-氯-4-((三甲基硅基)乙炔基)替换为2-氯-5-氟-4-((三甲基硅基)乙炔基)嘧啶，得白色固体(3b)，收率：91％。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ8.55 (s,1H),3.78(s,1H).ESI-MS m/z:157[M+H]+。
实施例5：2-氯-4-(1-环戊基-1H-1,2,3-三氮唑-4-基)嘧啶(4a)
Figure BDA0003390806050000051
将2-氯-4-乙炔基嘧啶(3a，178mg，1.28mmol)、叠氮基环戊烷(Azidocyclopentane， 170mg，1.53mmol)加入四氢呋喃(THF，5mL)和水(5mL)的混合溶剂中在常温下搅拌。将五水硫酸铜(CuSO4.5H2O，65mg,0.26mmol))和抗坏血酸钠(103mg,0.52mmol)溶于水(5mL)中，将此溶液加入上述搅拌体系中反应1h。反应完毕后，反应体系中加入乙酸乙酯(20mL)，用水萃取3次，有机相用无水硫酸钠干燥、过滤、浓缩、柱色谱分离(石油醚：乙酸乙酯＝100:10，体积比)，得到白色固体(4a)。收率：81％。1H NMR(500MHz,CDCl3):δ＝8.67(d,1H,J＝6.0Hz,Ar-H),8.33(s,1H,triazole-H),8.07(d,1H,J＝6.5Hz,Ar-H),5.07-5.00(m,1H,CH),2.36-2.30(m,2H,CH2),2.12-2.07(m,2H,CH2),1.97-1.90(m,2H,CH2), 1.84-1.78(m,2H,CH2)；ESI-MS:m/z＝250[M+H]+。
实施例6：2-氯-4-(1-环己基-1H-1,2,3-三氮唑-4-基)嘧啶(4b)
Figure BDA0003390806050000052
制备方法参照实施例5，其中，将叠氮基环戊烷替换为叠氮基环己烷(Azido-cyclohexane)，得白色固体(4b)，收率：79％。1H NMR(500MHz,CDCl3):δ＝8.66(d,1H,J＝6.5Hz,Ar-H), 8.34(s,1H,triazole-H),8.06(d,1H,J＝6.5Hz,Ar-H),4.58-4.52(m,1H,CH),2.30-2.26(m,2H, CH2),1.99-1.94(m,2H,CH2),1.82-1.72(m,3H,CH2),1.53-1.41(m,2H,CH2),1.32-1.29(m,1H, CH2)；ESI-MS:m/z＝264[M+H]+。
实施例7：2-氯-4-(1-环己基-1H-1,2,3-三氮唑-4-基)-5-氟嘧啶(4c)
Figure BDA0003390806050000053
制备方法参照实施例5，其中，分别将2-氯-4-乙炔基嘧啶和叠氮基环戊烷替换为2-氯-4- 乙炔基-5-氟嘧啶和叠氮基环己烷。得白色固体(4c)，收率：74％。1H NMR(500MHz,CDCl3): δ＝8.56(d,1H,J＝3.0Hz,Ar-H),8.31(s,1H,triazole-H),4.63-4.55(m,1H,CH),2.31-2.27(m, 2H,CH2),1.99-1.95(m,2H,CH2),1.85-1.76(m,3H,CH2),1.55-1.46(m,2H,CH2),1.37-1.32(m, 1H,CH2)；ESI-MS:m/z＝282[M+H]+。
实施例8：2-氯-4-(1-异丙基-1H-1,2,3-三氮唑-4-基)嘧啶(4d)
Figure BDA0003390806050000061
制备方法参照实施例5，其中，将叠氮基环戊烷替换为2-叠氮基丙烷。得白色固体(4d)，收率：55％。1H NMR(500MHz,CDCl3):δ＝8.67(d,1H,J＝6.5Hz,Ar-H),8.35(s,1H,triazole-H), 8.07(d,1H,J＝6.5Hz,Ar-H),4.97-4.89(m,1H,CH),1.65(d,6H,J＝6.5Hz,CH3)；ESI-MS:m/z ＝224[M+H]+。
实施例9：2-氯-5-氟-4-(1-异丙基-1H-1,2,3-三氮唑-4-基)嘧啶(4e)
Figure BDA0003390806050000062
制备方法参照实施例5，其中，分别将2-氯-4-乙炔基嘧啶和叠氮基环戊烷替换为2-氯-4- 乙炔基-5-氟嘧啶和2-叠氮基丙烷。得白色固体，收率：46％。1H NMR(500MHz,CDCl3):δ＝8.57 (d,1H,J＝3.0Hz,Ar-H),8.33(s,1H,triazole-H),5.01-4.94(m,1H,CH),1.67(d,6H,J＝8.5Hz, CH3)；ESI-MS:m/z＝242[M+H]+。
实施例10：2-氯-5-氟-4-(1-环戊基-1H-1,2,3-三氮唑-4-基)嘧啶(4f)
Figure BDA0003390806050000063
制备方法参照实施例5，其中，将2-氯-4-乙炔基嘧啶替换为2-氯-4-乙炔基-5-氟嘧啶。得白色固体(4f)，收率：78％。1H NMR(500MHz,CDCl3):δ＝8.56(d,1H,J＝3.0Hz,Ar-H),8.31 (s,1H,triazole-H),5.08-5.02(m,1H,CH),2.42-2.31(m,2H,CH2),2.17-2.05(m,2H,CH2), 1.99-1.92(m,2H,CH2),1.87-1.79(m,2H,CH2)；ESI-MS:m/z＝268[M+H]+。
实施例11：7-(4-((4-(1-异丙基-1H-1,2,3-三唑-4-基)嘧啶-2-基)氨基)苯氧基)庚酸甲酯(9a)
Figure BDA0003390806050000071
将双二亚苄基丙酮钯(Pd(dba)2，0.03mmol)、4,5-双(二苯基膦)-9,9-二甲基氧杂蒽(0.01 mmol)、碳酸铯(Cs2CO3，0.60mmol)加入含有2-氯-4-(1-异丙基-1H-1,2,3-三氮唑-4-基) 嘧啶(4d,0.30mmol)和7-(4-氨基苯氧基)庚酸甲酯的(0.33mmol)的二氧六环(10mL)混合溶液中，用氮气置换反应体系中的空气，在110℃下反应2h后冷却至室温，减压除去溶剂，剩余物中加入二氯甲烷，用饱和食盐水萃取，有机相用无水硫酸钠干燥、浓缩，得到的粗品用柱色谱分离纯化(二氯甲烷：乙酸乙酯＝3:1，体积比)，得到黄色固体(9a)，收率：65％。1H NMR(500MHz,CDCl3):δ＝8.45(d,1H,J＝6.5Hz,Ar-H),8.13(s,1H,triazole-H),7.51-7.48(m,3H,Ar-H),7.02(s,1H,NH),6.90(d,2H,J＝11.0Hz,Ar-H),4.93-4.89(m,1H,CH), 3.96(t,2H,J＝8.0Hz,CH2),3.67(s,3H,CH3),2.33(t,2H,J＝9.0Hz,CH2),1.81-1.76(m,2H, CH2),1.71-1.64(m,8H,2CH3+CH2),1.52-1.45(m,2H,CH2),1.44-1.40(m,2H,CH2)；ESI-MS: m/z＝439[M+H]+。
7-(4-氨基苯氧基)庚酸甲酯可参考文献(Chu-Farseeva,Yu-yi et al,Designand synthesis of potent dual inhibitors of JAK2 and HDAC based on fusing thepharmacophores of XL019 and vorinostat,European Journal of MedicinalChemistry,158,593-619；2018)方法制备获得。
实施例12：7-(4-((4-(1-环戊基-1H-1,2,3-三唑-4-基)嘧啶-2-基)氨基)苯氧基)庚酸甲酯 (9b)
Figure BDA0003390806050000072
制备方法参照实施例11，其中，将2-氯-4-(1-异丙基-1H-1,2,3-三氮唑-4-基)嘧啶(4d) 替换为2-氯-4-(1-环戊基-1H-1,2,3-三氮唑-4-基)嘧啶(4a)。得黄色固体，收率：58％。1H NMR (500MHz,CDCl3):δ＝8.46(d,1H,J＝6.5Hz,Ar-H),8.12(s,1H,triazole-H),7.51-7.48(m,3H, Ar-H),6.99(s,1H,NH),6.90(d,2H,J＝11.0Hz,Ar-H),5.05-4.98(m,1H,CH),3.96(t,2H,J＝ 8.0Hz,CH2),3.68(s,3H,CH3),2.36-2.27(m,4H,CH2),2.16-2.05(m,2H,CH2),1.97-1.90(m,2H, CH2),1.82-1.76(m,4H,CH2),1.69-1.63(m,2H,CH2),1.52-1.46(m,2H,CH2),1.45-1.36(m,2H, CH2)；ESI-MS:m/z＝465[M+H]+.
实施例13：7-(4-((4-(1-环己基-1H-1,2,3-三唑-4-基)嘧啶-2-基)氨基)苯氧基)庚酸甲酯(9c)
Figure BDA0003390806050000081
制备方法参照实施例11，其中，将2-氯-4-(1-异丙基-1H-1,2,3-三氮唑-4-基)嘧啶(4d) 替换为2-氯-4-(1-环己基-1H-1,2,3-三氮唑-4-基)嘧啶(4b)。得黄色固体，收率：71％；1H NMR (500MHz,CDCl3):δ＝8.47(d,1H,J＝6.5Hz,Ar-H),8.15(s,1H,triazole-H),7.52-7.50(m,3H, Ar-H),7.03(s,1H,NH),6.92(d,2H,J＝11.5Hz,Ar-H),4.58-4.51(m,1H,CH),3.98(t,2H,J＝ 8.0Hz,CH2),3.69(s,3H,CH3),2.37-2.27(m,4H,CH2),2.00-1.96(m,2H,CH2),1.84-1.77(m,4H, CH2),1.71-1.65(m,2H,CH2),1.53-1.44(m,4H,CH2),1.35-1.28(m,4H,CH2)；ESI-MS:m/z ＝479[M+H]+.
实施例14：7-(4-((5-氟-4-(1-异丙基-1H-1,2,3-三唑-4-基)嘧啶-2-基)氨基)苯氧基)庚酸甲酯(9d)
Figure BDA0003390806050000082
制备方法参照实施例11，其中，将2-氯-4-(1-异丙基-1H-1,2,3-三氮唑-4-基)嘧啶(4d) 替换为2-氯-5-氟-4-(1-异丙基-1H-1,2,3-三氮唑-4-基)嘧啶(4e)。得黄色固体，收率：69％。1H NMR(500MHz,CDCl3):δ＝8.35(d,1H,J＝3.0Hz,Ar-H),8.16(d,1H,J＝3.0Hz,triazole-H), 7.48(d,2H,J＝11.5Hz,Ar-H),7.18(s,1H,NH),6.89(d,2H,J＝11.5Hz,Ar-H),5.00-4.94(m, 1H,CH),3.95(t,2H,J＝8.0Hz,CH2),3.67(s,3H,CH3),2.33(t,2H,J＝9.0Hz,CH2),1.81-1.77 (m,2H,CH2),1.68-1.62(m,8H,2CH3+CH2),1.49-1.45(m,2H,CH2),1.44-1.38(m,2H,CH2)； ESI-MS:m/z＝457[M+H]+.
实施例15：7-(4-((4-(1-环戊基-1H-1,2,3-三唑-4-基)-5-氟嘧啶-2-基)氨基)苯氧基)庚酸甲酯(9e)
Figure BDA0003390806050000083
制备方法参照实施例11，其中，将2-氯-4-(1-异丙基-1H-1,2,3-三氮唑-4-基)嘧啶(4d) 替换为2-氯-5-氟-4-(1-环戊基-1H-1,2,3-三氮唑-4-基)嘧啶(4f)。得黄色固体，收率：57％；1H NMR(500MHz,CDCl3):δ＝8.33(d,1H,J＝3.5Hz,Ar-H),8.15(d,1H,J＝3.0Hz,triazole-H), 7.48(d,2H,J＝11.0Hz,Ar-H),7.17(s,1H,NH),6.89(d,2H,J＝11.0Hz,Ar-H),5.09-5.02(m, 1H,CH),3.95(t,2H,J＝8.0Hz,CH2),3.67(s,3H,CH3),2.35-2.29(m,4H,CH2),2.16-2.08(m, 2H,CH2),2.00-1.91(m,2H,CH2),1.85-1.74(m,4H,CH2),1.68-1.63(m,2H,CH2),1.49-1.33(m, 4H,CH2)；ESI-MS:m/z＝483[M+H]+.
实施例16：7-(4-((4-(1-环己基-1H-1,2,3-三唑-4-基)-5-氟嘧啶-2-基)氨基)苯氧基)庚酸甲酯(9f)
Figure BDA0003390806050000091
制备方法参照实施例11，其中，将2-氯-4-(1-异丙基-1H-1,2,3-三氮唑-4-基)嘧啶(4d) 替换为2-氯-4-(1-环己基-1H-1,2,3-三氮唑-4-基)-5-氟嘧啶(4c)。得黄色固体，收率：63％；1H NMR(500MHz,CDCl3):δ＝8.33(d,1H,J＝3.0Hz,Ar-H),8.15(d,1H,J＝3.0Hz,triazole-H), 7.48(d,2H,J＝11.0Hz,Ar-H),7.18(s,1H,NH),6.89(d,2H,J＝11.0Hz,Ar-H),4.63-4.55(m, 1H,CH),3.95(t,2H,J＝8.0Hz,CH2),3.67(s,3H,CH3),2.35-2.28(m,4H,CH2),2.00-1.92(m, 2H,CH2),1.84-1.72(m,5H,CH2),1.68-1.61(m,2H,CH2),1.52-1.45(m,4H,CH2),1.44-1.31(m, 3H,CH2)；ESI-MS:m/z＝497[M+H]+.
实施例17：7-(4-(4-((4-(1-异丙基-1H-1,2,3-三唑-4-基)嘧啶-2-基)氨基)苯基)哌嗪-1- 基)庚酸甲酯(9g)
Figure BDA0003390806050000092
制备方法参照实施例11，其中，将7-(4-氨基苯氧基)庚酸甲酯替换为7-(4-(4-氨基苯基)哌嗪-1-基)庚酸甲酯。得黄色固体，收率：67％；1H NMR(500MHz,CDCl3):δ＝8.47(d,1H,J＝6.5Hz,Ar-H),8.16(s,1H,triazole-H),7.52-7.49(m,3H,Ar-H),7.03(s,1H,NH),6.97(d, 2H,J＝6.0Hz,Ar-H),4.96-4.89(m,1H,CH),3.69(s,3H,CH3),3.23-3.20(m,4H,CH2), 2.69-2.65(m,4H,CH2),2.43(t,2H,J＝9.5Hz,CH2),2.34(t,2H,J＝9.5Hz,CH2),1.76-1.54(m, 10H,2CH3+CH2),1.40-1.32(m,4H,CH2)；ESI-MS:m/z＝507[M+H]+.
7-(4-(4-氨基苯基)哌嗪-1-基)庚酸甲酯可参照文献(Chu-Farseeva,Yu-yi etal,Design and synthesis of potent dual inhibitors of JAK2 and HDAC based onfusing the pharmacophores of XL019 and vorinostat,European Journal ofMedicinal Chemistry,158,593-619；2018)公开的方法制备获得。
实施例18：7-(4-(4-((4-(1-环戊基-1H-1,2,3-三唑-4-基)嘧啶-2-基)氨基)苯基)哌嗪-1- 基)庚酸甲酯(9h)
Figure BDA0003390806050000101
制备方法参照实施例11，其中，分别将2-氯-4-(1-异丙基-1H-1,2,3-三氮唑-4-基)嘧啶 (4d)和7-(4-氨基苯氧基)庚酸甲酯替换为2-氯-4-(1-环戊基-1H-1,2,3-三氮唑-4-基)嘧啶 (4a)和7-(4-(4-氨基苯基)哌嗪-1-基)庚酸甲酯。得黄色固体，收率：70％。1HNMR(500MHz, CDCl3):δ＝8.44(d,1H,J＝6.0Hz,Ar-H),8.12(s,1H,triazole-H),7.50-7.46(m,3H,Ar-H),7.03 (s,1H,NH),6.95(d,2H,J＝6.0Hz,Ar-H),5.04-4.97(m,1H,CH),3.67(s,3H,CH3),3.20-3.17(m, 4H,CH2),2.64-2.60(m,4H,CH2),2.39(t,2H,J＝9.5Hz,CH2),2.30(t,2H,J＝9.5Hz,CH2), 2.15-2.04(m,2H,CH2),1.96-1.90(m,2H,CH2),1.71-1.50(m,8H,CH2),1.38-1.29(m,4H,CH2)； ESI-MS:m/z＝533[M+H]+.
实施例19：7-(4-(4-((4-(1-环己基-1H-1,2,3-三唑-4-基)嘧啶-2-基)氨基)苯基)哌嗪-1- 基)庚酸甲酯(9i)
Figure BDA0003390806050000102
制备方法参照实施例11，其中，分别将2-氯-4-(1-异丙基-1H-1,2,3-三氮唑-4-基)嘧啶 (4d)和7-(4-氨基苯氧基)庚酸甲酯替换为2-氯-4-(1-环己基-1H-1,2,3-三氮唑-4-基)嘧啶 (4b)和7-(4-(4-氨基苯基)哌嗪-1-基)庚酸甲酯。得黄色固体，收率：68％。1HNMR(500MHz, CDCl3):δ＝8.46(d,1H,J＝6.5Hz,Ar-H),8.15(s,1H,triazole-H),7.52-7.48(m,3H,Ar-H),7.00 (s,1H,NH),6.97(d,2H,J＝6.5Hz,Ar-H),4.58-4.50(m,1H,CH),3.69(s,3H,CH3),3.22-3.19(m, 4H,CH2),2.66-2.62(m,4H,CH2),2.43-2.23(m,6H,CH2),2.01-1.95(m,2H,CH2),1.85-1.76(m, 3H,CH2),1.59-1.46(m,6H,CH2),1.41-1.30(m,5H,CH2)；ESI-MS:m/z＝547[M+H]+.
实施例20：7-(4-(4-((5-氟-4-(1-异丙基-1H-1,2,3-三唑-4-基)嘧啶-2-基)氨基)苯基) 哌嗪-1-基)庚酸甲酯(9j)
Figure BDA0003390806050000111
制备方法参照实施例11，其中，分别将2-氯-4-(1-异丙基-1H-1,2,3-三氮唑-4-基)嘧啶 (4d)和7-(4-氨基苯氧基)庚酸甲酯替换为2-氯-5-氟-4-(1-异丙基-1H-1,2,3-三氮唑-4-基) 嘧啶(4e)和7-(4-(4-氨基苯基)哌嗪-1-基)庚酸甲酯。得黄色固体，收率：73％。1H NMR (500MHz,CDCl3):δ＝8.34(d,1H,J＝3.0Hz,Ar-H),8.16(d,1H,J＝2.5Hz,triazole-H),7.48(d, 2H,J＝11.0Hz,Ar-H),7.20(s,1H,NH),6.94(d,2H,J＝11.0Hz,Ar-H),4.99-4.92(m,1H,CH), 3.67(s,3H,CH3),3.19-3.16(m,4H,CH2),2.62-2.59(m,4H,CH2),2.39(t,2H,J＝9.5Hz,CH2), 2.32(t,2H,J＝9.0Hz,CH2),1.68-1.64(m,8H,2CH3+CH2),1.57-1.51(m,2H,CH2),1.39-1.31(m, 4H,CH2)；ESI-MS:m/z＝525[M+H]+.
实施例21：7-(4-(4-((5-氟-4-(1-环戊基-1H-1,2,3-三唑-4-基)嘧啶-2-基)氨基)苯基) 哌嗪-1-基)庚酸甲酯(9k)
Figure BDA0003390806050000112
制备方法参照实施例11，其中，分别将2-氯-4-(1-异丙基-1H-1,2,3-三氮唑-4-基)嘧啶 (4d)和7-(4-氨基苯氧基)庚酸甲酯替换为2-氯-5-氟-4-(1-环戊基-1H-1,2,3-三氮唑-4-基) 嘧啶(4f)和7-(4-(4-氨基苯基)哌嗪-1-基)庚酸甲酯。得黄色固体，收率：69％。1H NMR (500MHz,d6-DMSO):δ＝9.51(s,1H,NH),8.66(d,1H,J＝2.0Hz,triazole-H),8.53(d,1H,J＝ 3.5Hz,Ar-H),7.64(d,2H,J＝11.5Hz,Ar-H),6.87(d,2H,J＝11.5Hz,Ar-H),5.14-5.08(m,1H, CH),3.58(s,3H,CH3),3.06-3.02(m,4H,CH2),2.52-2.46(m,4H,CH2),2.33-2.19(m,6H,CH2), 2.10-2.02(m,2H,CH2),1.89-1.81(m,2H,CH2),1.76-1.68(m,2H,CH2),1.55-1.37(m,4H,CH2), 1.31-1.24(m,4H,CH2)；ESI-MS:m/z＝551[M+H]+.
实施例22：7-(4-((4-(1-异丙基-1H-1,2,3-三唑-4-基)嘧啶-2-基)氨基)苯氧基)-N-羟基庚酰胺(10a)
Figure BDA0003390806050000121
在羟胺盐酸盐(NH2OH·HCl，2.34g，34.3mmol)的甲醇(12mL)溶液中，逐滴加入氢氧化钾(KOH，2.8g,50.9mmol)的甲醇溶液，将生成的沉淀过滤，得到含有羟胺钾盐 (NH2OK)和羟胺(NH2OH)的混合溶液。将7-(4-((4-(1-异丙基-1H-1,2,3-三唑-4-基) 嘧啶-2-基)氨基)苯氧基)庚酸甲酯(9a，0.5mmol)溶于上述溶液(5mL)中，室温搅拌过夜，浓缩、用1N盐酸调pH值到3～4，用二氯甲烷(DCM)萃取，无水硫酸钠干燥、浓缩，柱色谱分离纯化(二氯甲烷：甲醇＝10:1，体积比)，得黄色固体，收率：77％。1H NMR(500MHz, d6-DMSO):δ＝10.35(s,1H,NH),9.44(s,1H,OH),8.71-8.65(m,2H,NH+triazole-H),8.49(d, 1H,J＝6.0Hz,Ar-H),7.69(d,2H,J＝11.0Hz,Ar-H),7.32(d,1H,J＝6.0Hz,Ar-H),6.89(d,2H, J＝11.0Hz,Ar-H),4.97-4.91(m,1H,CH),3.92(t,2H,J＝8.0Hz,CH2),1.96(t,2H,J＝8.0Hz, CH2),1.71-1.69(m,2H,CH2),1.57(d,6H,J＝8.0Hz,CH3),1.54-1.48(m,2H,CH2),1.45-1.36(m, 2H,CH2),1.35-1.26(m,2H,CH2)；ESI-MS:m/z＝440[M+H]+。
实施例23：7-(4-((4-(1-环戊基-1H-1,2,3-三唑-4-基)嘧啶-2-基)氨基)苯氧基)-N-羟基庚酰胺(10b)
Figure BDA0003390806050000122
制备方法参照实施例22，其中，将7-(4-((4-(1-异丙基-1H-1,2,3-三唑-4-基)嘧啶-2- 基)氨基)苯氧基)庚酸甲酯(9a)替换为7-(4-((4-(1-环戊基-1H-1,2,3-三唑-4-基)嘧啶-2- 基)氨基)苯氧基)庚酸甲酯(9b)，得黄色固体，收率：83％。1H NMR(500MHz,d6-DMSO): δ＝10.36(s,1H,NH),9.48(s,1H,OH),8.69(s,1H,NH),8.64(s,1H,triazole-H),8.49(d,1H,J＝ 6.5Hz,Ar-H),7.69(d,2H,J＝11.0Hz,Ar-H),7.31(d,1H,J＝6.5Hz,Ar-H),6.88(d,2H,J＝11.0 Hz,Ar-H),5.11-5.07(m,1H,CH),3.92(t,2H,J＝8.0Hz,CH2),2.25-2.21(m,2H,CH2),2.06-2.03 (m,2H,CH2),1.95(t,2H,J＝8.0Hz,CH2),1.86-1.82(m,2H,CH2),1.71-1.64(m,4H,CH2), 1.55-1.48(m,2H,CH2),1.42-1.37(m,4H,CH2)；ESI-MS:m/z＝466[M+H]+。
实施例24：7-(4-((4-(1-环己基-1H-1,2,3-三唑-4-基)嘧啶-2-基)氨基)苯氧基)-N-羟基庚酰胺(10c)
Figure BDA0003390806050000131
制备方法参照实施例22，其中，将7-(4-((4-(1-异丙基-1H-1,2,3-三唑-4-基)嘧啶-2- 基)氨基)苯氧基)庚酸甲酯(9a)替换为7-(4-((4-(1-环己基-1H-1,2,3-三唑-4-基)嘧啶 -2-基)氨基)苯氧基)庚酸甲酯(9c)，得黄色固体，收率：79％。1H NMR(500MHz,d6-DMSO): δ＝10.37(s,1H,NH),9.48(s,1H,OH),8.75(s,1H,NH),8.64(s,1H,triazole-H),8.48(d,1H,J＝ 6.5Hz,Ar-H),7.69(d,2H,J＝11.0Hz,Ar-H),7.31(d,1H,J＝6.5Hz,Ar-H),6.88(d,2H,J＝11.0 Hz,Ar-H),4.62-4.57(m,1H,CH),3.92(t,2H,J＝8.0Hz,CH2),2.13-2.10(m,2H,CH2),1.95(t, 2H,J＝8.0Hz,CH2),1.91-1.82(m,4H,CH2),1.72-1.67(m,3H,CH2),1.54-1.42(m,6H,CH2), 1.32-1.25(m,3H,CH2)；ESI-MS:m/z＝480[M+H]+。
实施例25：7-(4-((5-氟-4-(1-异丙基-1H-1,2,3-三唑-4-基)嘧啶-2-基)氨基)苯氧基)-N- 羟基庚酰胺(10d)
Figure BDA0003390806050000132
制备方法参照实施例22，其中，将7-(4-((4-(1-异丙基-1H-1,2,3-三唑-4-基)嘧啶-2- 基)氨基)苯氧基)庚酸甲酯(9a)替换为7-(4-((5-氟-4-(1-异丙基-1H-1,2,3-三唑-4-基) 嘧啶-2-基)氨基)苯氧基)庚酸甲酯(9d)，得黄色固体，收率：89％。1H NMR(500MHz,d6-DMSO):δ＝10.34(s,1H,NH),9.59(s,1H,OH),8.71(s,1H,triazole-H),8.66(s,1H,NH),8.56(d,1H,J＝3.0Hz,Ar-H),7.69(d,2H,J＝11.0Hz,Ar-H),6.86(d,2H,J＝11.0Hz,Ar-H),5.00-4.94(m,1H,CH),3.91(t,2H,J＝8.0Hz,CH2),1.96(t,2H,J＝8.0Hz,CH2),1.73-1.68(m, 2H,CH2),1.58(d,6H,J＝8.0Hz,CH3),1.54-1.51(m,2H,CH2),1.43-1.39(m,2H,CH2),1.34-1.27(m,2H,CH2)；ESI-MS:m/z＝458[M+H]+。
实施例26：7-(4-((4-(1-环戊基-1H-1,2,3-三唑-4-基)-5-氟嘧啶-2-基)氨基)苯氧基)-N- 羟基庚酰胺(10e)
Figure BDA0003390806050000133
制备方法参照实施例22，其中，将7-(4-((4-(1-异丙基-1H-1,2,3-三唑-4-基)嘧啶-2- 基)氨基)苯氧基)庚酸甲酯(9a)替换为7-(4-((4-(1-环戊基-1H-1,2,3-三唑-4-基)-5- 氟嘧啶-2-基)氨基)苯氧基)庚酸甲酯(9e)，得黄色固体，收率：75％。1H NMR(500MHz, d6-DMSO):δ＝10.35(s,1H,NH),9.59(s,1H,OH),8.69-8.66(m,2H,NH+triazole-H),8.57(d, 1H,J＝1.5Hz,Ar-H),7.68(d,2H,J＝10.5Hz,Ar-H),6.87(d,2H,J＝10.0Hz,Ar-H),5.14-5.10 (m,1H,CH),3.92(t,2H,J＝8.0Hz,CH2),2.24-2.19(m,2H,CH2),2.09-2.01(m,2H,CH2),1.95 (t,2H,J＝8.0Hz,CH2),1.86-1.80(m,2H,CH2),1.72-1.62(m,4H,CH2),1.54-1.48(m,2H,CH2), 1.43-1.35(m,2H,CH2),1.34-1.25(m,2H,CH2)；ESI-MS:m/z＝484[M+H]+。
实施例27：7-(4-((4-(1-环己基-1H-1,2,3-三唑-4-基)-5-氟嘧啶-2-基)氨基)苯氧基)-N- 羟基庚酰胺(10f)
Figure BDA0003390806050000141
制备方法参照实施例22，其中，将7-(4-((4-(1-异丙基-1H-1,2,3-三唑-4-基)嘧啶-2- 基)氨基)苯氧基)庚酸甲酯(9a)替换为7-(4-((4-(1-环己基-1H-1,2,3-三唑-4-基)-5- 氟嘧啶-2-基)氨基)苯氧基)庚酸甲酯(9f)，得黄色固体，收率：74％。1H NMR(500MHz, d6-DMSO):δ＝10.35(s,1H,NH),9.58(s,1H,OH),8.72-8.66(m,2H,NH+triazole-H),8.58(s, 1H,Ar-H),7.68(d,2H,J＝10.0Hz,Ar-H),6.87(d,2H,J＝10.0Hz,Ar-H),4.63-4.60(m,1H,CH), 3.92(t,2H,J＝8.0Hz,CH2),2.16-2.08(m,2H,CH2),1.95(t,2H,J＝8.0Hz,CH2),1.90-1.82(m, 4H,CH2),1.72-1.64(m,3H,CH2),1.54-1.25(m,9H,CH2)；ESI-MS:m/z＝498[M+H]+。
实施例28：N-羟基-7-(4-(4-((4-(1-异丙基-1H-1,2,3-三唑-4-基)嘧啶-2-基)氨基)苯基) 哌嗪-1-基)庚酰胺(10g)
Figure BDA0003390806050000142
制备方法参照实施例22，其中，将7-(4-((4-(1-异丙基-1H-1,2,3-三唑-4-基)嘧啶-2- 基)氨基)苯氧基)庚酸甲酯(9a)替换为7-(4-(4-((4-(1-异丙基-1H-1,2,3-三唑-4-基) 嘧啶-2-基)氨基)苯基)哌嗪-1-基)庚酸甲酯(9g)，得黄色固体，收率：85％。1H NMR(500MHz, d6-DMSO):δ＝10.33(s,1H,NH),9.38(s,1H,OH),8.66(s,1H,NH),8.64(s,1H,triazole-H), 8.47(d,1H,J＝6.5Hz,Ar-H),7.65(d,2H,J＝11.0Hz,Ar-H),7.30(d,1H,J＝6.0Hz,Ar-H),6.90 (d,2H,J＝11.0Hz,Ar-H),4.97-4.91(m,1H,CH),3.08-3.05(m,4H,CH2),2.54-2.50(m,4H,CH2), 2.30(t,2H,J＝9.0Hz,CH2),1.94(t,2H,J＝9.5Hz,CH2),1.57(d,6H,J＝8.5Hz,CH3), 1.50-1.39(m,4H,CH2),1.29-1.26(m,4H,CH2)；ESI-MS:m/z＝508[M+H]+。
实施例29：7-(4-(4-(1-环戊基-1H-1,2,3-三唑-4-基)嘧啶-2-基)氨基)苯基)哌嗪-1-基) -N-羟基庚酰胺(10h)
Figure BDA0003390806050000151
制备方法参照实施例22，其中，将7-(4-((4-(1-异丙基-1H-1,2,3-三唑-4-基)嘧啶-2- 基)氨基)苯氧基)庚酸甲酯(9a)替换为7-(4-(4-((4-(1-环戊基-1H-1,2,3-三唑-4-基) 嘧啶-2-基)氨基)苯基)哌嗪-1-基)庚酸甲酯(9h)，得黄色固体，收率：89％。1H NMR(500MHz, d6-DMSO):δ＝10.34(s,1H,NH),9.39(s,1H,OH),8.67(s,1H,NH),8.62(s,1H,triazole-H), 8.47(d,1H,J＝6.5Hz,Ar-H),7.64(d,2H,J＝11.0Hz,Ar-H),7.30(d,1H,J＝6.0Hz,Ar-H),6.90 (d,2H,J＝11.0Hz,Ar-H),5.11-5.08(m,1H,CH),3.10-3.02(m,4H,CH2),2.43-2.32(m,4H,CH2), 2.28-2.19(m,2H,CH2),2.07-1.98(m,2H,CH2),1.93(t,2H,J＝8.0Hz,CH2),1.88-1.81(m,2H, CH2),1.76-1.68(m,2H,CH2),1.54-1.41(m,4H,CH2),1.32-1.20(m,6H,CH2)；ESI-MS:m/z ＝534[M+H]+。
实施例30：7-(4-(4-((4-(1-环己基-1H-1,2,3-三唑-4-基)嘧啶-2-基)氨基)苯基)哌嗪-1- 基)-N-羟基庚酰胺(10i)
Figure BDA0003390806050000152
制备方法参照实施例22，其中，将7-(4-((4-(1-异丙基-1H-1,2,3-三唑-4-基)嘧啶-2- 基)氨基)苯氧基)庚酸甲酯(9a)替换为7-(4-(4-((4-(1-环己基-1H-1,2,3-三唑-4-基) 嘧啶-2-基)氨基)苯基)哌嗪-1-基)庚酸甲酯(9i)，得黄色固体，收率：77％；1H NMR(500MHz, d6-DMSO):δ＝10.33(s,1H,NH),9.36(s,1H,OH),8.63(s,1H,NH),8.60(s,1H,triazole-H), 8.45(d,1H,J＝6.5Hz,Ar-H),7.65(d,2H,J＝11.0Hz,Ar-H),7.30(d,1H,J＝6.0Hz,Ar-H),6.89 (d,2H,J＝11.0Hz,Ar-H),4.63-4.56(m,1H,CH),3.08-3.03(m,4H,CH2),2.48-2.42(m,4H,CH2), 2.31-2.24(m,2H,CH2),2.16-2.09(m,2H,CH2),1.95-1.80(m,6H,CH2),1.72-1.65(m,1H,CH2), 1.52-1.39(m,6H,CH2),1.31-1.16(m,5H,CH2)；ESI-MS:m/z＝548[M+H]+。
实施例31：7-(4-(4-((5-氟-4-(1-异丙基-1H-1,2,3-三唑-4-基)嘧啶-2-基)氨基)苯基) 哌嗪-1-基)-N-羟基庚酰胺(10j)
Figure BDA0003390806050000161
制备方法参照实施例22，其中，将7-(4-((4-(1-异丙基-1H-1,2,3-三唑-4-基)嘧啶-2- 基)氨基)苯氧基)庚酸甲酯(9a)替换为7-(4-(4-((5-氟-4-(1-异丙基-1H-1,2,3-三唑-4- 基)嘧啶-2-基)氨基)苯基)哌嗪-1-基)庚酸甲酯(9j)，得黄色固体，收率：87％。1HNMR (500MHz,d6-DMSO):δ＝10.33(s,1H,NH),9.52(s,1H,OH),8.70(d,1H,J＝2.0Hz,triazole-H), 8.65(s,1H,NH),8.54(d,1H,J＝3.5Hz,Ar-H),7.64(d,2H,J＝11.0Hz,Ar-H),6.88(d,2H,J＝ 11.0Hz,Ar-H),5.00-4.93(m,1H,CH),3.09-3.05(m,4H,CH2),2.48-2.42(m,4H,CH2),2.30(t, 2H,J＝8.5Hz,CH2),1.95(t,2H,J＝8.0Hz,CH2),1.58(d,6H,J＝8.0Hz,CH3),1.52-1.44(m, 4H,CH2),1.28-1.21(m,4H,CH2)；ESI-MS:m/z＝526[M+H]+。
实施例32：7-(4-(4-(1-环戊基-1H-1,2,3-三唑-4-基)-5-氟嘧啶-2-基)氨基)苯基)哌嗪-1- 基)-N-羟基庚酰胺(10k)
Figure BDA0003390806050000162
制备方法参照实施例22，其中，将7-(4-((4-(1-异丙基-1H-1,2,3-三唑-4-基)嘧啶-2- 基)氨基)苯氧基)庚酸甲酯(9a)替换为7-(4-(4-((5-氟-4-(1-环戊基-1H-1,2,3-三唑-4- 基)嘧啶-2-基)氨基)苯基)哌嗪-1-基)庚酸甲酯(9k)，得黄色固体，收率：91％。1HNMR (500MHz,d6-DMSO):δ＝10.33(s,1H,NH),9.53(s,1H,OH),8.68-8.66(m,2H,NH+triazole-H), 8.54(d,1H,J＝3.5Hz,Ar-H),7.64(d,2H,J＝11.0Hz,Ar-H),6.87(d,2H,J＝11.0Hz,Ar-H), 5.14-5.09(m,1H,CH),3.05-3.01(m,4H,CH2),2.46-2.41(m,4H,CH2),2.35-2.19(m,4H,CH2), 2.09-2.02(m,2H,CH2),1.93(t,2H,J＝8.0Hz,CH2),1.91-1.83(m,2H,CH2),1.77-1.68(m,2H, CH2),1.52-1.48(m,4H,CH2),1.31-1.20(m,4H,CH2)；ESI-MS:m/z＝552[M+H]+。
实施例33：HDAC1抑制活性测试
1测试过程：化合物对HDAC1的抑制活性委托桑迪亚医药技术(上海)有限公司进行测试。具体测试过程可参考如下：
(1)配制1×Assay buffer：50mM的Tris–HCl缓冲液(pH 7.5)中加入吐温20和氯化钠，吐温20终浓度(0.01％)，氯化钠终浓度(50mM)；
(2)测试化合物浓度1μM起始，3倍稀释，7个浓度。用1×Assay buffer配制100倍终浓度的待测化合物溶液。使用Echo⑧550转移250nL到384孔反应板中。阳性对照孔(Max) 孔和阴性对照孔(Min)中均转移250nL的100％DMSO；
(3)用1×Assay buffer配制1.67倍终浓度的HDAC1(厂家：Active Motif)酶溶液；
(4)在化合物孔和阳性对照孔分别加15μL的1.67倍终浓度的HDAC1酶溶液；在阴性对照孔中加15μL的1×Assay buffer；
(5)1000rpm离心60秒，振荡混匀后室温孵育15min；
(6)用1×Assay buffer配制2.5倍终浓度的Substrate和Trypsin混合溶液；
(7)加入10μL的2.5倍终浓度的Substrate和Trypsin混合溶液，起始反应；
(8)将反应板1000rpm离心1min，使用酶标仪Synergy(厂家：Biotek)连续读取荧光信号。
2数据分析
使用Synergy选取线性反应段得到斜率(slope)。进而计算百分比抑制率，计算公式如下:
抑制率％＝[Mean(Max)-Sample Signal]/[Mean(Max)-Mean(Min)]×100
其中：Sample Signal是化合物孔的斜率；Mean(Max)是各Max孔(无化合物孔)斜率值的均值；Mean(Min)是各Min孔(无酶孔)斜率值的均值。
拟合量效曲线:以化合物浓度的log值作为X轴，对应的百分比抑制率为Y轴，采用分析软件GraphPad Prism 5的log(inhibitor)vs.response-Variable slope拟合量效曲线，从而得出各个化合物抑制酶活性的IC50值。结果如下。
3测试结果
Figure BDA0003390806050000171
Figure BDA0003390806050000181
测试结果表明：实施例22-32化合物均具有较好的HDCA1酶抑制活性，其中实施例22-27 的酶抑制活性较阳性对照药SAHA(HDAC1抑制剂)更高。
实施例34：细胞周期依赖激酶2/4/6(Cyclin-dependent protein kinase 2/4/6,CDK2/4/6)抑制活性测试
1，CDK2抑制活性测试过程
(1)配制1×kinase buffer：Enzymatic buffer kinase 5×(厂家：Cisbio)用去离子水稀释 5倍，同时加入氯化镁(MgCl2)、氯化锰(MnCl2)和二硫苏糖醇(DTT)，MgCl2终浓度10mM， MnCl2终浓度1mM,DTT终浓度1mM；
(2)测试化合物以10μM为起始，4倍稀释，7个浓度，用1×kinase buffer配制4倍终浓度待测化合物工作液，然后2.5μL/孔加入384孔反应板中，溶媒对照孔加入与待测化合物孔等浓度的DMSO对照；
(3)用1×kinase buffer配制4倍终浓度的生物素化ATF2(ATF2 biotin,厂家：Cisbio) 底物，然后2.5μL/孔加入384孔反应板中；
(4)用1×kinase buffer配制4倍终浓度的ATP，2.5μL/孔加入384孔反应板中；
(5)用1×kinase buffer配制4倍终浓度的CDK2酶溶液，2.5μL/孔加入384孔反应板中混匀起始反应，阴性对照孔加入2.5μL的1×kinase buffer，室温孵育60min；
(6)1×Detection buffer(厂家：Cisbio)加入磷酸化ATF2抗体的铕穴状化合物(pAb anti-phospho ATF2-Eu cryplate，厂家：Cisbio)和亲和素化的XL665(Streptavidin-XL665，厂家：Cisbio)，10μL/孔加入384孔反应板中，室温孵育60min；
(7)酶标仪中采用HTRF法检测665nM和625nM处荧光信号。
2，CDK4/6抑制活性测试过程
(1)配制1×kinase buffer：Enzymatic buffer kinase 5×(厂家：Cisbio)用去离子水稀释 5倍，同时加入氯化镁(MgCl2)和二硫苏糖醇(DTT)，MgCl2终浓度50mM，DTT终浓度1 mM；
(2)测试化合物以10μM为起始，4倍稀释，7个浓度，用1×kinase buffer配制4倍终浓度待测化合物工作液，然后25μL/孔加入384孔反应板中，对照孔加入与待测化合物孔等浓度的DMSO对照；
(3)用1×kinase buffer配制4倍终浓度的生物素化的可磷酸化视网膜母细胞瘤基因底物 (Rb biotinylated peptide，厂家：Cisbio)，然后加入2.5μL/孔加入384孔反应板中；
(4)用1×kinase buffer配制4倍终浓度的ATP，2.5μL/孔加入384孔反应板中；
(5)用1×kinase buffer配制4倍终浓度的CDK4、CDK6酶溶液，2.5μL/孔加入384孔反应板中混匀起始反应，阴性对照孔加入2.5μL的1×kinase buffer，室温孵育90min；
(6)1×Detection buffer(厂家：Cisbio)中加入磷酸化Rb抗体的铕穴状化合物(Anti-p-Rb-K, 厂家：Cisbio)和亲和素化的XL665(Streptavidin-XL665，厂家：Cisbio)，10μL/孔加入384 孔反应板中，室温孵育60min；
(7)酶标仪中采用HTRF法检测665nM和625nM处荧光信号。
3数据分析
计算665/625比值，将阴性对照组设为Tz，溶媒对照组记为C，待测化合物组记为Ti，计算待测化合物孔的酶活性抑制率；抑制率％＝(Ti-Tz)/(C-Tz)*100，采用GraphPadPrism 5的log(inhibitor)vs.normalized response-Variable slope拟合量效曲线，从而得出各个化合物抑制酶活性的IC50值。结果见下表。
Figure BDA0003390806050000191
ND*：Not done
表中可以看出：化合物均具有一定的酶抑制活性，其中，实施例28、实施例29、实施例 30、实施例31和实施例32具有较好的CDK2、CDK4和CDK6酶抑制活性，且对CDK4酶抑制活性尤为显著。
实施例35：细胞抑制活性测试
1测试过程
(1)细胞接种
收集对数生长期的细胞(人大细胞肺癌细胞H460、人乳腺癌细胞MDA-MB-468)，计数后调节细胞浓度(H460：7×104/mL，MDA-MB-468：1.1×105/mL)，100μL/孔接种于96孔板，然后在37℃、5％CO2培养箱中孵育过夜。
(2)平行对照板固定，待测板加入待测物
平行对照板：25μL/孔加入预冷三氯乙酸(Trichloroacetic acid,TCA)，4℃固定1h，去离子水洗板5次，自然晾干；
待测板加入待测物：测试化合物浓度为50μM起始，10倍稀释，5个浓度。用含10％FBS 的DMEM完全培养基配制2倍终浓度待测化合物工作液，然后100μL/孔加入96孔中，对照孔加入与待测化合物孔等浓度的DMSO对照，调零孔加入完全培养基，37℃，5％CO2培养箱中培养72h。
(3)待测板测OD值
50μL/孔加入预冷的50％TCA，4℃固定1h，去离子水洗板5次，自然晾干；100μL/孔加入0.4％磺酰罗丹明B，室温染色10min，然后1％醋酸100μL/孔洗板5次，自然晾干；150 μL/孔加入10mM Tris-base，振荡约5min；515nm处检测OD值。
2数据分析
将平行对照组OD值记为Tz，溶媒对照组OD值记为C，待测组OD值记为Ti：
生长率％＝[(Ti-Tz)/(C-Tz)]×100
抑制率％＝100-[(Ti-Tz)/(C-Tz)]×100
以化合物浓度的log值作为X轴，对应的细胞生长抑制率为Y轴，利用GraphPadPrism 5 的log(inhibitor)vs.response-Variable slope拟合量效曲线，从而得出待测化合物抑制细胞生长的IC50值。结果见下表。
Figure BDA0003390806050000201
Figure BDA0003390806050000211
表中可以看出：实施例22-32化合物均具有较好的细胞生长抑制活性，可用于肺癌、乳腺癌的临床预防和治疗。

Claims (4)

1.含羟肟酸的2-苯氨基嘧啶类衍生物或其药学上可接受的盐，其结构如下所示：
Figure DEST_PATH_IMAGE002
，
其中，R1为甲基、乙基、异丙基、环丙基、环丁基、环戊基或环己基；
R2为氢、氟或三氟甲基；
X为氧或
Figure DEST_PATH_IMAGE004
。
2.根据权利要求1所述含羟肟酸的2-苯氨基嘧啶类衍生物或其药学上可接受的盐，其特征在于，所述含羟肟酸的2-苯氨基嘧啶类衍生物为下述任一化合物：
N-羟基-7-(4-((4-(1-异丙基-1H-1,2,3-三唑-4-基)嘧啶-2-基)氨基)苯氧基)庚酰胺；
7-(4-((4-(1-环戊基-1H-1,2,3-三唑-4-基)嘧啶-2-基)氨基)苯氧基)-N-羟基庚酰胺；
7-(4-((4-(1-环己基-1H-1,2,3-三唑-4-基)嘧啶-2-基)氨基)苯氧基)-N-羟基庚酰胺；
7-(4-((5-氟-4-(1-异丙基-1H-1,2,3-三唑-4-基)嘧啶-2-基)氨基)苯氧基)-N-羟基庚酰胺；
7-(4-((4-(1-环戊基-1H-1,2,3-三唑-4-基)-5-氟嘧啶-2-基)氨基)苯氧基)-N-羟基庚酰胺；
7-(4-((4-(1-环己基-1H-1,2,3-三唑-4-基)-5-氟嘧啶-2-基)氨基)苯氧基)-N-羟基庚酰胺；
N-羟基-7-(4-(4-((4-(1-异丙基-1H-1,2,3-三唑-4-基)嘧啶-2-基)氨基)苯基)哌嗪-1-基)庚酰胺；
7-(4-(4-((4-(1-环戊基-1H-1,2,3-三唑-4-基)嘧啶-2-基)氨基)苯基)哌嗪-1-基)-N-羟基庚酰胺；
7-(4-(4-((4-(1-环己基-1H-1,2,3-三唑-4-基)嘧啶-2-基)氨基)苯基)哌嗪-1-基)-N-羟基庚酰胺；
7-(4-(4-((5-氟-4-(1-异丙基-1H-1,2,3-三唑-4-基)嘧啶-2-基)氨基)苯基)哌嗪-1-基)-N-羟基庚酰胺；
7-(4-(4-((4-(1-环戊基-1H-1,2,3-三唑-4-基)-5-氟嘧啶-2-基)氨基)苯基)哌嗪-1-基)-N-羟基庚酰胺；
7-(4-(4-((4-(1-环己基-1H-1,2,3-三唑-4-基)-5-氟嘧啶-2-基)氨基)苯基)哌嗪-1-基)-N-羟基庚酰胺。
3.权利要求1或2所述含羟肟酸的2-苯氨基嘧啶类衍生物或其药学上可接受的盐在制备抗癌药物中的应用。
4.权利要求1或2所述含羟肟酸的2-苯氨基嘧啶类衍生物或其药学上可接受的盐在制备预防和治疗肺癌、乳腺癌药物中的应用。
CN202111464576.XA 2021-12-03 2021-12-03 一组含羟肟酸的2-苯氨基嘧啶类衍生物及其应用 Active CN114105958B (zh)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN202111464576.XA CN114105958B (zh) 2021-12-03 2021-12-03 一组含羟肟酸的2-苯氨基嘧啶类衍生物及其应用

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN202111464576.XA CN114105958B (zh) 2021-12-03 2021-12-03 一组含羟肟酸的2-苯氨基嘧啶类衍生物及其应用

Publications (2)

Publication Number Publication Date
CN114105958A CN114105958A (zh) 2022-03-01
CN114105958B true CN114105958B (zh) 2022-11-22

Family

ID=80365857

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN202111464576.XA Active CN114105958B (zh) 2021-12-03 2021-12-03 一组含羟肟酸的2-苯氨基嘧啶类衍生物及其应用

Country Status (1)

Country Link
CN (1) CN114105958B (zh)

Citations (6)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2006044509A2 (en) * 2004-10-15 2006-04-27 Biogen Idec Ma Inc. Methods of treating vascular injuries
WO2009086012A1 (en) * 2007-12-20 2009-07-09 Curis, Inc. Aurora inhibitors containing a zinc binding moiety
WO2010009139A2 (en) * 2008-07-14 2010-01-21 Gilead Colorado, Inc. Imidazolyl pyrimidine inhibitor compounds
CN102858767A (zh) * 2009-12-17 2013-01-02 默沙东公司 作为syk抑制剂的氨基嘧啶
CN109232541A (zh) * 2018-09-30 2019-01-18 中国医学科学院放射医学研究所 脯氨酰羟化酶与组蛋白去乙酰化酶双重抑制剂及其制备方法和应用
CN113387938A (zh) * 2020-03-11 2021-09-14 上海科技大学 一种取代嘧啶类化合物、其制备方法、中间体及应用

Patent Citations (6)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2006044509A2 (en) * 2004-10-15 2006-04-27 Biogen Idec Ma Inc. Methods of treating vascular injuries
WO2009086012A1 (en) * 2007-12-20 2009-07-09 Curis, Inc. Aurora inhibitors containing a zinc binding moiety
WO2010009139A2 (en) * 2008-07-14 2010-01-21 Gilead Colorado, Inc. Imidazolyl pyrimidine inhibitor compounds
CN102858767A (zh) * 2009-12-17 2013-01-02 默沙东公司 作为syk抑制剂的氨基嘧啶
CN109232541A (zh) * 2018-09-30 2019-01-18 中国医学科学院放射医学研究所 脯氨酰羟化酶与组蛋白去乙酰化酶双重抑制剂及其制备方法和应用
CN113387938A (zh) * 2020-03-11 2021-09-14 上海科技大学 一种取代嘧啶类化合物、其制备方法、中间体及应用

Non-Patent Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
Xuewu Liang等.Discovery of Novel Pyrrolo[2,3‑d]pyrimidine-based Derivatives as Potent JAK/HDAC Dual Inhibitors for the Treatment of Refractory Solid Tumors.《Journal of Medicinal Chemistry》.2021,第65卷1243-1264. *

Also Published As

Publication number Publication date
CN114105958A (zh) 2022-03-01

Similar Documents

Publication Publication Date Title
AU2018306328B2 (en) Macrocyclic compounds and uses thereof
WO2019126122A1 (en) Macrocyclic kinase inhibitors and their use
JP2019526605A (ja) 置換２−ｈ−ピラゾール誘導体の結晶形、塩型及びその製造方法
CN107383012B (zh) 含二环的咪唑醇衍生物
EP4069700A1 (en) Macrocycles for use in treating disease
TWI786303B (zh) 抑制ｃｄｋ4/6活性化合物的晶型及其應用
CN111249283A (zh) 具有抗癌作用的嘧啶衍生物
AU2013289384B2 (en) Combination therapy for the treatment of cancer and immunosuppression
CN114105958B (zh) 一组含羟肟酸的2-苯氨基嘧啶类衍生物及其应用
CN114920710A (zh) 亚氨脲衍生物
CN108689997A (zh) 细胞周期蛋白依赖性激酶抑制剂4-氨基-2-嘧啶甲酸衍生物、其制备及用途
CN116390923A (zh) 杂环类衍生物及其制备方法和用途
CN109438279B (zh) 一种克服egfr耐药突变的小分子化合物及其制备方法和用途
CN107556315B (zh) 含四元环的咪唑衍生物
CN113999210B (zh) 一组2-苯氨基-4-三氮唑基嘧啶类衍生物及其应用
CN116239594B (zh) 6-(咪唑并[1,2-a]吡啶-6-基)喹唑啉衍生物及用途
WO2024000615A1 (zh) 一种酪氨酸蛋白激酶抑制剂及其用途
WO2023206655A1 (zh) 一种PI3Kδ抑制剂及其用途
AU2018278283A1 (en) Pyridoquinazoline derivatives useful as protein kinase inhibitors
CN107312006B (zh) 吡咯并嘧啶类衍生物及其应用
CN109232662B (zh) 抗肿瘤作用的化合物及其制备方法和应用
CN115557949A (zh) 四环类衍生物、其制备方法及其在医药上的应用
CN108239082B (zh) 一种抑制rock的化合物及其应用
TWI582078B (zh) 抑制脯氨酸羥化酶活性的化合物的晶型及其應用
CN116731011A (zh) 一种萘啶衍生物及其应用

Legal Events

Date Code Title Description
PB01 Publication
PB01 Publication
SE01 Entry into force of request for substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination
GR01 Patent grant
GR01 Patent grant