CN114099648B - 一种助溶剂、含该助溶剂的血红蛋白氧载体冻干粉、针剂及制备方法 - Google Patents

一种助溶剂、含该助溶剂的血红蛋白氧载体冻干粉、针剂及制备方法 Download PDF

Info

Publication number
CN114099648B
CN114099648B CN202111616834.1A CN202111616834A CN114099648B CN 114099648 B CN114099648 B CN 114099648B CN 202111616834 A CN202111616834 A CN 202111616834A CN 114099648 B CN114099648 B CN 114099648B
Authority
CN
China
Prior art keywords
hemoglobin
oxygen carrier
freeze
dried powder
injection
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Active
Application number
CN202111616834.1A
Other languages
English (en)
Other versions
CN114099648A (zh
Inventor
李建军
严坤平
陈超
谢于斗
杨鹏飞
贺迎娣
柏晓丽
李鹏云
卓丹丹
常娟娟
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Xi'an Blood Oxygen Biotechnology Co ltd
Original Assignee
Xi'an Blood Oxygen Biotechnology Co ltd
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Xi'an Blood Oxygen Biotechnology Co ltd filed Critical Xi'an Blood Oxygen Biotechnology Co ltd
Priority to CN202111616834.1A priority Critical patent/CN114099648B/zh
Publication of CN114099648A publication Critical patent/CN114099648A/zh
Application granted granted Critical
Publication of CN114099648B publication Critical patent/CN114099648B/zh
Active legal-status Critical Current
Anticipated expiration legal-status Critical

Links

Classifications

    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
    • A61K38/16—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • A61K38/41—Porphyrin- or corrin-ring-containing peptides
    • A61K38/42—Haemoglobins; Myoglobins
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/06—Organic compounds, e.g. natural or synthetic hydrocarbons, polyolefins, mineral oil, petrolatum or ozokerite
    • A61K47/16—Organic compounds, e.g. natural or synthetic hydrocarbons, polyolefins, mineral oil, petrolatum or ozokerite containing nitrogen, e.g. nitro-, nitroso-, azo-compounds, nitriles, cyanates
    • A61K47/18—Amines; Amides; Ureas; Quaternary ammonium compounds; Amino acids; Oligopeptides having up to five amino acids
    • A61K47/183—Amino acids, e.g. glycine, EDTA or aspartame
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/30—Macromolecular organic or inorganic compounds, e.g. inorganic polyphosphates
    • A61K47/36—Polysaccharides; Derivatives thereof, e.g. gums, starch, alginate, dextrin, hyaluronic acid, chitosan, inulin, agar or pectin
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K9/00—Medicinal preparations characterised by special physical form
    • A61K9/0012—Galenical forms characterised by the site of application
    • A61K9/0019—Injectable compositions; Intramuscular, intravenous, arterial, subcutaneous administration; Compositions to be administered through the skin in an invasive manner
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K9/00—Medicinal preparations characterised by special physical form
    • A61K9/14—Particulate form, e.g. powders, Processes for size reducing of pure drugs or the resulting products, Pure drug nanoparticles
    • A61K9/19—Particulate form, e.g. powders, Processes for size reducing of pure drugs or the resulting products, Pure drug nanoparticles lyophilised, i.e. freeze-dried, solutions or dispersions
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P7/00—Drugs for disorders of the blood or the extracellular fluid
    • Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y02—TECHNOLOGIES OR APPLICATIONS FOR MITIGATION OR ADAPTATION AGAINST CLIMATE CHANGE
    • Y02W—CLIMATE CHANGE MITIGATION TECHNOLOGIES RELATED TO WASTEWATER TREATMENT OR WASTE MANAGEMENT
    • Y02W10/00—Technologies for wastewater treatment
    • Y02W10/10—Biological treatment of water, waste water, or sewage

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Oil, Petroleum & Natural Gas (AREA)
  • Inorganic Chemistry (AREA)
  • Dermatology (AREA)
  • Gastroenterology & Hepatology (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Diabetes (AREA)
  • Hematology (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Medicinal Preparation (AREA)
  • Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)

Abstract

本发明涉及冻干粉助溶技术领域，具体涉及一种助溶剂、含该助溶剂的血红蛋白氧载体冻干粉、针剂及制备方法。该助溶剂按重量份数计算包括：0.3～5份羟乙基淀粉，0.5～5份氨基酸；其中，氨基酸为甘氨酸、丝氨酸的一种或两种的混合。本发明的助溶剂，可有效提高血红蛋白氧载体冻干粉稳定性及复溶速度，同时调节血红蛋白氧载体的胶体渗透压，从而匹配不同种属的输液者(如、人、宠物等)。

Description

一种助溶剂、含该助溶剂的血红蛋白氧载体冻干粉、针剂及制 备方法
技术领域
本发明涉及冻干粉技术领域，具体涉及一种助溶剂、含该助溶剂的血红蛋白氧载体冻干粉、针剂及制备方法。
背景技术
冻干粉在低温下进行，对于热敏性的生物制品特别适用。生物制品，如蛋白质，通过冷冻干燥制成干粉，比液态蛋白质更稳定，不易发生变性或失活且易于保存运输，因此在医药领域应用广泛。但是对于某些蛋白质冻干粉，存在的潜在问题是蛋白质粉末难以复溶，一方面是复溶时，蛋白质的疏水基团相互作用，阻碍蛋白质分子在水中浸润，导致蛋白质与水作用过程缓慢；另一方面为了加速蛋白质浸润，溶解过程中需要进行搅拌或振荡，由于物理剪切作用和产生气泡的表面张力作用，会导致蛋白质变性。
血红蛋白氧载体是一种以动物或人红细胞为原材料，采用聚合、交联、偶联等方式对分离纯化的血红蛋白进行化学修饰后制备的一种血液代用品，常规的血红蛋白氧载体冻干粉复溶后胶体渗透压与生物体的血清的胶体渗透压不匹配，且分子量显著增大。
发明内容
有鉴于上述技术问题，本发明提供了一种血红蛋白氧载体冻干粉的助溶剂，该助溶剂按重量份数计算包括：
0.3～5份羟乙基淀粉，0.5～5份氨基酸；
其中，氨基酸为甘氨酸、丝氨酸的一种或两种的混合。
进一步的，所述羟乙基淀粉的平均分子量介于100KD～200KD。
基于同一个发明构思，本发明还提供了所述一种含有所述助溶剂的血红蛋白氧载体冻干粉，该冻干粉按重量份数计算包括：
0.3～5份羟乙基淀粉，0.5～5份氨基酸，5～14份血红蛋白氧载体。
基于同一个发明构思，本发明还提供了所述血红蛋白氧载体冻干粉的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：
S1、分别将血红蛋白氧载体、羟乙基淀粉和氨基酸溶解后混合，得混合溶液，该混合溶液中，按质量百分比浓度计算，羟乙基淀粉的终浓度为0.3～5％，氨基酸的终浓度为0.5～5％，血红蛋白氧载体终浓度为5～14％。
S2、将混合溶液真空脱气，待混合溶液冷冻成冰后，冷冻干燥120h以上，得冻干粉成品。
进一步的，S1中，混合溶液的溶剂为注射用水。
更进一步的，S1中，羟乙基淀粉和氨基酸溶解后过0.1μm或0.22μm滤膜。
更进一步的，S1中，调节混合溶液pH至7.6～8.0，调节剂为浓度为0.1mol/L的NaOH溶液。血红蛋白的等电点为7.2左右，氨基酸的等电点一般小于7.0；当体系的pH调节为7.4～8.0时，血红蛋白带负电荷，同时氨基酸也带负电荷，由于同性电荷排斥的原因，利于血红蛋白之间的分散，利于其溶解，并防止其聚集变性。
基于同一个发明构思，本发明还提供了一种注射用血红蛋白氧载体冻干粉针制剂，向所述的血红蛋白氧载体冻干粉中注入注射用水，摇晃振荡使其完全溶解。
本发明具有如下有益效果：
本发明采用羟乙基淀粉和氨基酸作为助溶剂，注射使用时利用羟乙基淀粉的适宜疏水性和氨基酸的离子性，加速蛋白质粉末与水的相互作用，促进蛋白质冻干粉的复溶，并抑制溶解过程中气泡的产生，同时，羟乙基淀粉的加入可以调节血红蛋白氧载体的胶体渗透压，从而匹配不同输液者(如、人、宠物等)。
具体实施方式
下面结合具体实施例对本发明进行详细说明，但不应理解为本发明的限制。如未特殊说明，下述实施例中所用的技术手段为本领域技术人员所熟知的常规手段，下述实施例中所用的材料、试剂等，如无特殊说明，均可从商业途径得到。
实施例中使用的仪器与试剂
仪器：Agilent 1260高效液相色谱仪(Agilent公司，美国)；Agilent 8453分光光度计(Agilent公司，美国)；pH计；十八角度激光散射仪(Wyatt DAWN HELEOS～II，美国)；折光示差检测器(Wyatt Optilab-rex，美国)；胶体渗透压仪OSMOMAT 050(德国)；MS3基本型旋涡混合器(IKA，德国)。BT 125D电子天平(Sartorius，德国)；ZWJ-20微粒检测仪(北京汉柏，中国)。
试剂：磷酸二氢钾；铁氰化钾；氰化钾；氯化钠；注射用水；羟乙基淀粉、甘氨酸、丝氨酸、乙酰色氨酸等。
血红蛋白氧载体：由西安血氧生物技术有限公司提供。
实施例1：羟乙基淀粉比例不同时血红蛋白氧载体冻干粉相关性能比较
(1)称取15g羟乙基淀粉，用注射用水配成100ml溶液，过0.1μm滤膜，得15％羟乙基淀粉母液，备用。
(2)称取10g甘氨酸，用注射用水配成100ml溶液，过0.1μm滤膜，得10％(w/v)甘氨酸母液，备用。
(3)称取120g血红蛋白氧载体，用注射用水配成1000ml溶液，得12％(w/v)血红蛋白氧载体原液。
(4)取4支100ml西林瓶，分别加入50ml的12％(w/v)血红蛋白氧载体原液和10ml的10％(w/v)甘氨酸母液，摇匀后再分别加入0、2ml、5ml、10ml 15％(w/v)的羟乙基淀粉母液振荡摇匀得混合溶液，并用浓度为0.1mol/L的NaOH溶液调节混合溶液pH至7.8，分别标记为原液(冻干)、0.6％HES、1.5％HES、3％HES。
(5)上述混合溶液真空脱气，溶液冷冻成冰后，液氮冷冻干燥120h以上，得冻干粉。
(6)用注射器分别注入50ml注射用水于上述冻干粉中，轻摇溶解。
(7)分别测定上述冻干粉复溶液的血红蛋白浓度、平均分子量、胶体渗透压和不溶性微粒，结果如表1所示。
表1羟乙基淀粉比例不同时血红蛋白氧载体冻干粉相关性能比较
结论：
1)羟乙基淀粉比例不同时其胶体渗透压不同，可根据需要调节血红蛋白氧载体的胶体渗透压以满足不同种属生物体的需求。
2)加入复合助剂可以提高血红蛋白氧载体冻干粉的复溶速度，并且可以有效降低复溶后不溶性微粒个数，提高产品质量。
3)未加复合助剂的血红蛋白氧载体冻干粉复溶后，分子量显著增大(增大23％)，表明在冻干粉蛋白部分变性。
实施例2：不同氨基酸对血红蛋白氧载体冻干粉性能影响
(1)称取15g羟乙基淀粉，用注射用水配成100ml溶液，过0.1μm滤膜，得15％羟乙基淀粉母液，备用。
(2)分别称取10g甘氨酸、丝氨酸、乙酰色氨酸，用注射用水配成100ml溶液，过0.1μm滤膜，得相应10％(w/v)氨基酸母液，备用。
(3)称取120g血红蛋白氧载体，用注射用水配成1000ml溶液，得12％(w/v)血红蛋白氧载体原液。
(4)取4支100ml西林瓶，分别加入50ml的12％(w/v)血红蛋白氧载体原液和10ml15％(w/v)羟乙基淀粉母液摇匀后再分别加入15ml的甘氨酸、丝氨酸及15ml乙酰色氨酸母液，振荡摇匀，分别得到得最终混合溶液，，并用浓度为0.1mol/L的NaOH溶液调节混合溶液pH至7.8，分别标记为原液(冻干)、3％甘氨酸、3％丝氨酸、3％乙酰色氨酸。
(5)上述混合溶液真空脱气，溶液冷冻成冰后，液氮冷冻干燥120h以上，得冻干粉。
(6)用注射器分别注入50ml注射用水于上述冻干粉中，轻摇溶解。
(7)分别测定上述冻干粉复溶液的血红蛋白浓度、平均分子量、胶体渗透压和不溶性微粒，结果见表2。
表2不同氨基酸的血红蛋白氧载体冻干粉相关性能比较
结论：
1)助溶剂中甘氨酸和丝氨酸可以防止血红蛋白氧载体的聚集变性(分子量保持不变)，并提高冻干粉的复溶速度。
2)乙酰色氨酸为疏水性氨基酸，不利于血红蛋白氧载体冻干粉的稳定性和复溶速度。
需要说明的是，本发明权利要求书中涉及数值范围时，应理解为每个数值范围的两个端点以及两个端点之间任何一个数值均可选用，为了防止赘述，本发明描述了优选的实施例。
尽管已描述了本发明的优选实施例，但本领域内的技术人员一旦得知了基本创造性概念，则可对这些实施例作出另外的变更和修改。所以，所附权利要求意欲解释为包括优选实施例以及落入本发明范围的所有变更和修改。
显然，本领域的技术人员可以对本发明进行各种改动和变型而不脱离本发明的精神和范围。这样，倘若本发明的这些修改和变型属于本发明权利要求及其等同技术的范围之内，则本发明也意图包含这些改动和变型在内。

Claims (6)

1.一种血红蛋白氧载体冻干粉，其特征在于，该冻干粉按重量份数计算包括：
0.3~5份羟乙基淀粉，0.5~5份氨基酸，5~14份血红蛋白氧载体，所述羟乙基淀粉的平均分子量介于100KD~200KD；
其中，氨基酸为甘氨酸、丝氨酸的一种或两种的混合。
2.根据权利要求1所述的血红蛋白氧载体冻干粉的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：
S1、分别将血红蛋白氧载体、羟乙基淀粉和氨基酸溶解后混合，得混合溶液，该混合溶液中，按质量百分比浓度计算，羟乙基淀粉的终浓度为0.3~5%，氨基酸的终浓度为0.5~5%，血红蛋白氧载体终浓度为5~14%；
S2、将混合溶液真空脱气，待混合溶液冷冻成冰后，液氮冷冻干燥120h以上，得冻干粉成品。
3.根据权利要求2所述的血红蛋白氧载体冻干粉的制备方法，其特征在于，S1中，混合溶液的溶剂为注射用水。
4.根据权利要求3所述的血红蛋白氧载体冻干粉的制备方法，其特征在于，S1中，羟乙基淀粉和氨基酸溶解后过0.1μm或0.22μm滤膜。
5.根据权利要求4所述的血红蛋白氧载体冻干粉的制备方法，其特征在于，S1中，调节混合溶液pH至7.6~8.0，调节剂为浓度为0.1mol/L 的NaOH溶液。
6.一种注射用血红蛋白氧载体冻干粉针制剂，其特征在于，向权利要求1所述的血红蛋白氧载体冻干粉中注入注射用水，摇晃振荡使其完全溶解。
CN202111616834.1A 2021-12-27 2021-12-27 一种助溶剂、含该助溶剂的血红蛋白氧载体冻干粉、针剂及制备方法 Active CN114099648B (zh)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN202111616834.1A CN114099648B (zh) 2021-12-27 2021-12-27 一种助溶剂、含该助溶剂的血红蛋白氧载体冻干粉、针剂及制备方法

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN202111616834.1A CN114099648B (zh) 2021-12-27 2021-12-27 一种助溶剂、含该助溶剂的血红蛋白氧载体冻干粉、针剂及制备方法

Publications (2)

Publication Number Publication Date
CN114099648A CN114099648A (zh) 2022-03-01
CN114099648B true CN114099648B (zh) 2023-08-08

Family

ID=80363642

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN202111616834.1A Active CN114099648B (zh) 2021-12-27 2021-12-27 一种助溶剂、含该助溶剂的血红蛋白氧载体冻干粉、针剂及制备方法

Country Status (1)

Country Link
CN (1) CN114099648B (zh)

Citations (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO1998001158A2 (de) * 1996-07-08 1998-01-15 Fresenius Ag Hämoglobin-hydroxyethylstärke-konjugate als sauerstoff-transport-mittel
CN1750811A (zh) * 2001-10-19 2006-03-22 巴克斯特国际公司 在冷冻水基质中包括颗粒的稳定组合物
CN1990039A (zh) * 2005-12-28 2007-07-04 天津协和生物科技发展有限公司 一种聚合血红蛋白修饰方法
CN101002735A (zh) * 2007-01-24 2007-07-25 上海华新生物高技术有限公司 一种室温保存重组白介素－2冻干制剂及其制备方法
CN104274412A (zh) * 2013-07-01 2015-01-14 北京恒瑞康达医药科技发展有限公司 一种含有替莫唑胺、其药学上可接受的盐或其他衍生物的药物制剂

Patent Citations (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO1998001158A2 (de) * 1996-07-08 1998-01-15 Fresenius Ag Hämoglobin-hydroxyethylstärke-konjugate als sauerstoff-transport-mittel
CN1750811A (zh) * 2001-10-19 2006-03-22 巴克斯特国际公司 在冷冻水基质中包括颗粒的稳定组合物
CN1990039A (zh) * 2005-12-28 2007-07-04 天津协和生物科技发展有限公司 一种聚合血红蛋白修饰方法
CN101002735A (zh) * 2007-01-24 2007-07-25 上海华新生物高技术有限公司 一种室温保存重组白介素－2冻干制剂及其制备方法
CN104274412A (zh) * 2013-07-01 2015-01-14 北京恒瑞康达医药科技发展有限公司 一种含有替莫唑胺、其药学上可接受的盐或其他衍生物的药物制剂

Non-Patent Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
李嘉欣.血浆代用品的血红蛋白释放研究.包头医学院学报.2016,第32卷(第11期),1-2. *

Also Published As

Publication number Publication date
CN114099648A (zh) 2022-03-01

Similar Documents

Publication Publication Date Title
US2390074A (en) Protein product and process
Tschopp et al. Assembly of subcomponents C1r and C1s of first component of complement: electron microscopic and ultracentrifugal studies.
US4045176A (en) Preparation of optically clear serum
AU650678B2 (en) Stabilization (using gelatin from a cold water fish) of enzymes in diagnostic controls
KR920002934B1 (ko) 내변성 단백질 수용액의 제조방법
CN112999161A (zh) 一种杜仲京尼平苷酸复合纳米颗粒的制备方法
Orekhovitch et al. Procollagens: A citrate-soluble fraction of collagen is assumed to form a special group of connective tissue proteins.
CN109678924A (zh) 负载药物或营养物的玉米多肽纳米粒子及其制备方法
CN114099648B (zh) 一种助溶剂、含该助溶剂的血红蛋白氧载体冻干粉、针剂及制备方法
Wilf et al. Acceleration of fibrin gel formation by unrelated proteins
CN108669287A (zh) 一种制备耐酸高起泡性的大豆蛋白水解物的方法及其产品
CN111100200B (zh) 纤连蛋白稳定剂及添加相应稳定剂的纤连蛋白制剂
CN106928332A (zh) 一种不同溶解性的贻贝蛋白及多肽的制备方法
CN110669730B (zh) 一种人外周血淋巴细胞培养基
Young et al. Utilization of edible protein from meat industry by‐products and waste: III. The isolation and spinning of proteins from lung and stomach
CN102499320A (zh) 一种抑制蛋白在水溶液中聚集并物性修饰的方法及产物和应用
CN114478752B (zh) 一种制备糖化白蛋白校准品和质控品的方法
CN103168243A (zh) 凝胶粒子测定试剂及使用其的测定方法
Pennell et al. Preparation of stabilized solutions of hemoglobin
CN111264838B (zh) 鱼明胶乳液及其制备方法
CN1149722A (zh) 多项液体质量控制猪血清及制备方法
CN106107923A (zh) 一种肉类制品复合乳化剂及其用途
US11834524B2 (en) Method for preparing chitin highly dispersible in aqueous phase and chitin prepared thereby
Ross Reaction of salmine with ovalbumin, hemoglobin, insulin and casein
CN109527437B (zh) 一种低脂蛋黄颗粒的稳定分散方法

Legal Events

Date Code Title Description
PB01 Publication
PB01 Publication
SE01 Entry into force of request for substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination
GR01 Patent grant
GR01 Patent grant